結(jié)合流感病毒的核酸分子及其用途
【專利摘要】本發(fā)明提供可應(yīng)用于流感病毒檢測的核酸分子。根據(jù)本發(fā)明的核酸分子是結(jié)合流感病毒的核酸分子，包括選自以下多核苷酸(a)-(d)組成的組的至少一個多核苷酸：(a)具有SEQ ID NO:1-30的任一堿基序列的多核苷酸；(b)具有通過多核苷酸(a)的任一堿基序列中一個或多個堿基的刪除、置換、插入和/或添加獲得的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸；(c)具有與多核苷酸(a)的任一堿基序列具有至少80％的同一性的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸；和(d)具有與在嚴(yán)格條件下與多核苷酸(a)的任一堿基序列雜交的多核苷酸互補(bǔ)的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸。
【專利說明】結(jié)合流感病毒的核酸分子及其用途

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及結(jié)合流感病毒的核酸分子及其用途。

【背景技術(shù)】
[0002] 季節(jié)性流感病毒和新型流感病毒感染的擴(kuò)散已在近年中觀察到，因而流感病毒檢 測變得越來越重要。
[0003] 在流感病毒檢測中，已經(jīng)采用了例如利用基因擴(kuò)增的方法或使用抗體的方法。前 者是其中樣品中的核酸進(jìn)行PCR等以擴(kuò)增流感病毒獨(dú)有的堿基序列的方法且流感病毒感 染的存在或不存在根據(jù)擴(kuò)增是否發(fā)生而確定。但是，為了完成基因擴(kuò)增，有必要例如預(yù)處理 從人體收集的樣品，這是費(fèi)時和費(fèi)力的。而且，還存在由于類似序列的擴(kuò)增等導(dǎo)致的假陽性 誤差的問題。
[0004] 另一方面，抗體具有例如其制備本身是非常復(fù)雜的操作和需要高成本的問題?？?體也具有涉及檢測精度的問題，因為存在與靶抗原之外的抗原非特異性結(jié)合的可能性?？?慮到這些問題，在近年中，特異性結(jié)合抗原的核酸分子作為抗體的替代物受到關(guān)注（非專 利文獻(xiàn)1和2)。但是，先前報告的與流感病毒結(jié)合的核酸分子具有不足的結(jié)合能力。因此， 新型核酸分子是需要的。
[0005] 引文列表
[0006] 非專利文獻(xiàn)
[0007] [非專利文獻(xiàn) 1] Jeon 等，J. Biol Chem. 2004279 (46)，48410-48419
[0008] [非專利文獻(xiàn) 2] Cheng 等，Biochem Biophys Res Commun. 2008366 (3)，670-674 [0009] 發(fā)明簡述
[0010] 本發(fā)明解決的問題
[0011] 考慮到前述問題，本發(fā)明的目的是提供一種可用于流感病毒的檢測等的核酸分 子。
[0012] 解決問題的方式
[0013] 本發(fā)明提供一種結(jié)合流感病毒的核酸分子，包括選自以下多核苷酸（a)-(d)組成 的組的至少一個多核苷酸：
[0014] (a)具有SEQ ID NO: 1-30的任一堿基序列的多核苷酸；
[0015] (b)具有通過多核苷酸（a)的任一堿基序列中一個或多個堿基的刪除、置換、插入 和/或添加獲得的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸；
[0016] (C)與多核苷酸（a)的任一堿基序列具有至少80%的同一性的堿基序列并結(jié)合流 感病毒的多核苷酸；和
[0017] (d)具有與在嚴(yán)格條件下與多核苷酸（a)的任一堿基序列雜交的多核苷酸互補(bǔ)的 堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸。
[0018] 本發(fā)明還提供結(jié)合流感病毒的結(jié)合劑，其包含根據(jù)本發(fā)明的核酸分子。
[0019] 本發(fā)明的效果
[0020] 根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以結(jié)合流感病毒，且因此可以例如檢測流感病毒。因此， 根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以是例如用于在臨床實踐、畜牧學(xué)等領(lǐng)域中檢測流感病毒的非常 有用的工具。
[0021] 附圖簡要說明
[0022] [圖1]圖1是顯示本發(fā)明多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0023] [圖2]圖2是顯示本發(fā)明中的其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0024] [圖3]圖3是顯示本發(fā)明中的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0025] [圖4]圖4是顯示本發(fā)明的實施例Al中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖表。
[0026] [圖5]圖5是顯示本發(fā)明的實施例Al中核酸分子與抗體的結(jié)合能力的圖表。
[0027] [圖6]圖6是顯示本發(fā)明的實施例A4中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖表。
[0028] [圖7]圖7是顯示本發(fā)明的實施例A4中核酸分子與抗體的結(jié)合能力的圖表。
[0029] [圖8]圖8是顯示本發(fā)明的實施例A6中各核酸分子、各HA和各抗體的結(jié)合能力 的圖表。
[0030] [圖9]圖9是顯示本發(fā)明的實施例Bl中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖表。
[0031] [圖10]圖10是顯示本發(fā)明的實施例B2中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖 表。
[0032] [圖11]圖11是顯示本發(fā)明的實施例B3中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖 表。
[0033] [圖12]圖12是顯示本發(fā)明的實施例M中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的曲 線圖。
[0034] [圖13]圖13是顯示本發(fā)明的實施例B5中核酸分子與一種靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力 的圖表。
[0035] [圖14]圖14是顯示本發(fā)明的實施例B5中核酸分子與多種靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力 的圖表。
[0036] [圖15]圖15是顯示本發(fā)明的實施例B6中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的曲 線圖。
[0037] [圖16]圖16是顯示本發(fā)明的實施例B7中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖 表。
[0038] [圖17]圖17是顯示本發(fā)明的實施例Cl中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖 表。
[0039] [圖18]圖18是顯示本發(fā)明的實施例C2中核酸分子與靶蛋白質(zhì)的結(jié)合能力的圖 表。
[0040] [圖19]圖19是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0041] [圖20]圖20是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0042] [圖21]圖21是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0043] [圖22]圖22是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0044] [圖23]圖23是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0045] [圖24]圖24是顯示本發(fā)明的再其它多核苷酸的預(yù)測的二級結(jié)構(gòu)的示意圖。
[0046] [圖25]圖25是顯示本發(fā)明的實施例Dl中核酸分子與流感病毒的結(jié)合能力的曲 線圖。
[0047][圖26]圖26是顯示本發(fā)明的實施例Dl中核酸分子與流感病毒的結(jié)合能力的圖 表。
[0048][圖27]圖27是顯示本發(fā)明的實施例D2中核酸分子與流感病毒的結(jié)合能力的圖 表。
[0049] 實施本發(fā)明的方式
[0050] 如上所述，本發(fā)明的核酸分子是結(jié)合流感病毒的核酸分子，包括選自以下多核苷 酸（a)-(d)組成的組的至少一個多核苷酸：
[0051] (a)具有SEQ ID NO: 1-30的任一堿基序列的多核苷酸；
[0052] (b)具有通過多核苷酸（a)的任一堿基序列中一個或多個堿基的刪除、置換、插入 和/或添加獲得的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸；
[0053] (c)與多核苷酸（a)的任一堿基序列具有至少80%的同一'丨生的堿基序列并結(jié)合流 感病毒的多核苷酸；和
[0054] (d)具有與在嚴(yán)格條件下與多核苷酸（a)的任一堿基序列雜交的多核苷酸互補(bǔ)的 堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸。
[0055] 在本發(fā)明中，"結(jié)合流感病毒（及其語法變型）"也稱作，例如，"具有與流感病毒的 結(jié)合能力"或"具有與流感病毒的結(jié)合活性"。本發(fā)明的核酸分子與流感病毒之間的結(jié)合可 以通過例如表面等離子體共振（SPR)分析等測定。該分析可以使用例如ProteON(商標(biāo)名， BioRad)完成。
[0056] 本發(fā)明適用的流感病毒的類型沒有任何限制。流感病毒的實例包括甲型流感病 毒、乙型流感病毒和丙型流感病毒。甲型流感病毒具有由16個類型的血細(xì)胞凝集素（HA) (Hl至H16)和9個類型的神經(jīng)氨酸酶（NA) (NI至N9)的組合產(chǎn)生的144種亞型，且對于本 發(fā)明適用的亞型沒有特別的限制。特別地，它可以是例如H5N1、HlNl或H3N2。更具體地， H5N1 的實例包括 A/Anhui/1/2005 和 A/goose_Guiyang/337/2006、A/Japanese white eye/ Hong Kong/1038/2006 ;H1N1 的實例包括 A/California/04/2009、A/Brisbane/59/2007 和 A/Georgia/20/2006 ;且 H3N2 的實例包括 A/Aichi/2/1968、A/Wisconsin/67/2005、A/ Brisbane/59/2007和A/Moscow/10/1999。在乙型流感病毒中，僅存在I個HA類型和I個 NA類型的組合。乙型流感病毒的實例包括B/Florida/4/2006和B/Malaysia/2506/2004。
[0057] 本發(fā)明的核酸分子可以結(jié)合例如流感病毒來源的血細(xì)胞凝集素（HA)。更具體地， 本發(fā)明的核酸分子可以結(jié)合例如HA、作為HA的亞基的HAl及HAl和H2的復(fù)合物。在本發(fā) 明中，"結(jié)合流感病毒來源的HA (及其語法變型）"也稱作例如"具有與HA的結(jié)合能力"或 "具有與HA的結(jié)合活性"。本發(fā)明的核酸分子和HA之間的結(jié)合可以通過與如上所述相同的 分析測定。HA所來源的流感病毒沒有特別限制，且其實例包括上述的流感病毒。在本發(fā)明 中，"結(jié)合流感病毒（及其語法變型）"在下文中應(yīng)解釋為可與例如"結(jié)合流感病毒來源的 HA"互換。
[0058] 在本發(fā)明的核酸分子中，多核苷酸（a)-(b)的結(jié)構(gòu)單元是例如核苷酸殘基，其實 例包括脫氧核糖核苷酸殘基和核糖核苷酸殘基。例如，多核苷酸是由脫氧核糖核苷酸殘基 組成的DNA或包括核糖核苷酸殘基的DNA，這兩者可以進(jìn)一步包括例如如以下所述的非核 苷酸殘基。根據(jù)本發(fā)明的核酸以下也稱作例如"DNA適體"。
[0059] 根據(jù)本發(fā)明的核酸分子可以例如由多核苷酸（a)-(d)中任一個組成或可以包括 多核苷酸（a)-(d)中的任一個。在后一 ,清況中，本發(fā)明的核酸分子可以包括例如選自多核 苷酸（a)-(d)的兩個或更多個多核苷酸，如下所述。所述的兩個或更多個多核苷酸可以具 有相同的序列或不同的序列。而且，在后一情況中，本發(fā)明的核酸分子可以進(jìn)一步包括例如 接頭和/或另外的序列。
[0060] 多核苷酸（a)具有SEQ ID NO: 1-30的任一堿基序列。

【權(quán)利要求】
1. 一種結(jié)合流感病毒的核酸分子，所述核酸分子包含選自以下多核苷酸（a)-(d)組成 的組的至少一個多核苷酸： (a) 具有SEQ ID NO: 1-30的任一堿基序列的多核苷酸； (b) 具有通過多核苷酸（a)的任一堿基序列中一個或多個堿基的刪除、置換、插入和/ 或添加獲得的堿基序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸； (c) 具有與多核苷酸（a)的任一堿基序列具有至少80%的同一性的堿基序列并結(jié)合流 感病毒的多核苷酸；和 (d) 具有與在嚴(yán)格條件下與多核苷酸（a)的任一堿基序列雜交的多核苷酸互補(bǔ)的堿基 序列并結(jié)合流感病毒的多核苷酸。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1的核酸分子，包含選自所述多核苷酸（a)-(d)的兩個或更多個多核 苷酸。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2的核酸分子，其中所述兩個或更多個多核苷酸經(jīng)由接頭彼此連接。
4. 根據(jù)權(quán)利要求2或3的核酸分子，包含各具有SEQ ID NO: 19的堿基序列的兩個多核 苷酸（RHA0006_sl9)或各具有SEQ ID N0:17的堿基序列的兩個多核苷酸（RHA0002_s33)， 該兩個多核苷酸經(jīng)由接頭彼此連接。
5. 根據(jù)權(quán)利要求4的核酸分子，其中所述經(jīng)由接頭彼此連接的兩個多核苷酸整體具有 SEQ ID NO:31或45的堿基序列。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1-5任一項的核酸分子，其中所述多核苷酸是DNA。
7. -種結(jié)合流感病毒的結(jié)合劑，所述結(jié)合劑包含根據(jù)權(quán)利要求1-6任一項的核酸分 子。
【文檔編號】C12N15/115GK104364375SQ201380029160
【公開日】2015年2月18日 申請日期:2013年4月25日 優(yōu)先權(quán)日:2012年6月4日
【發(fā)明者】白鳥行大, 秋富穰, 堀井克紀(jì), 古市真木雄, 和賀巖 申請人:日本電氣方案創(chuàng)新株式會社