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      一種溶藻銅綠假單胞菌及其用途

      文檔序號(hào):475219閱讀:142來源:國(guó)知局
      一種溶藻銅綠假單胞菌及其用途
      【專利摘要】本發(fā)明提供一種溶藻銅綠假單胞菌及其用途,菌株的保藏號(hào)為CGMCC?No9070,為一株新的具有溶藻活性銅綠假單胞菌,本發(fā)明發(fā)酵液以1:20的比例接入到初始OD680為0.3的銅綠微囊藻培養(yǎng)液中在25℃、2000lux和光暗比為14:10的條件下培養(yǎng)3天后葉綠素a的濃度下降了85%以上。該菌的無菌發(fā)酵液經(jīng)熱處理和光處理后,溶藻效果無明顯變化,表明具有較強(qiáng)的光和熱穩(wěn)定性。以上表明,本發(fā)明發(fā)酵液在富營(yíng)養(yǎng)化水體的水華控制和水體應(yīng)急除藻方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
      【專利說明】一種溶藻銅綠假單胞菌及其用途
      【技術(shù)領(lǐng)域】
      [0001]本發(fā)明提供一種溶藻銅綠假單胞菌及其用途,為一株新的具有溶藻活性銅綠假單胞菌,同時(shí)還公開了及其培養(yǎng)條件和其在水華藻控制中的用途,屬于應(yīng)用環(huán)境微生物【技術(shù)領(lǐng)域】。
      【背景技術(shù)】
      [0002]近年來,隨著工農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的發(fā)展和人們消費(fèi)水平的提高,含有大量植物營(yíng)養(yǎng)元素,如氮、磷和鉀等的生活污水、工業(yè)廢水和種養(yǎng)殖排水的產(chǎn)生量逐漸增加。在未經(jīng)處理或處理不當(dāng)?shù)那闆r下,植物營(yíng)養(yǎng)元素隨著污水進(jìn)入封閉和半封閉水體后,在光照和溫度等條件適宜的情況下,會(huì)激發(fā)水體中的某些藻類,使其迅速增殖。這些藻類的過量生長(zhǎng),不僅會(huì)直接改變水生生態(tài)系統(tǒng)的組成和結(jié)構(gòu),而且細(xì)菌對(duì)其死亡殘?bào)w進(jìn)行分解時(shí)還會(huì)消耗水體中的溶解氧,從而間接改變水體的物理、化學(xué)和生物組成,甚至在某些情況下一些藻類還會(huì)分泌藻毒素,如銅鋁微囊藻等,這些毒素進(jìn)入水體后會(huì)對(duì)水體中的其它生物產(chǎn)生影響,甚至?xí)ㄟ^食物鏈的放大作用對(duì)其它生物,甚至是人類產(chǎn)生影響。因此科學(xué)有效地控制水體中水華藻的生長(zhǎng),維持水生生態(tài)系統(tǒng)的平衡具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
      [0003]目前,治理水華的方法主要有傳統(tǒng)的物理方法、發(fā)展迅速的化學(xué)方法和綠色環(huán)保的生物方法。生物抑藻方法主要有水生植物抑藻,水生動(dòng)物抑藻,其它藻類抑藻和微生物抑藻四個(gè)方面。其中,利用高等水生植物通過競(jìng)爭(zhēng)生存空間和營(yíng)養(yǎng)元素來抑制水華藻的生長(zhǎng)在水華控制中使用的 比較普遍,但死亡的植物殘?bào)w如果不能及時(shí)從水體中去除,釋放出的營(yíng)養(yǎng)元素會(huì)增加水相中營(yíng)養(yǎng)元素的含量。在我國(guó)北方,尤其是東北地區(qū),由于氣溫低,適宜植物生長(zhǎng)的時(shí)間短,因此在一些水體中大量栽植水生植物的現(xiàn)象不如南方普遍,導(dǎo)致利用水生植物控制水華的辦法在應(yīng)用上受到一定程度的限制。
      [0004]溶藻微生物是一類可通過直接接觸和間接分泌化感物質(zhì)來影響藻類的生長(zhǎng),控制水體中各種微藻的平衡關(guān)系的一類生物,包括細(xì)菌,真菌,放線菌和病毒等。研究發(fā)現(xiàn)剛毛藻上幾聲一種粘細(xì)菌,在一定條件下粘細(xì)菌可使剛毛藻細(xì)胞裂解死亡,而具有溶藻效果的細(xì)菌、真菌放線菌等則主要是通過產(chǎn)生具有溶藻活性的物質(zhì)來抑制藻類的生長(zhǎng)繁殖。目前已知的微生物胞外溶藻活性物質(zhì)主要有蛋白質(zhì)、多肽類物質(zhì)、含氮化合物、氨基酸、抗生素、生物堿及色素。這些溶藻活性物質(zhì)能破碎微藻的細(xì)胞膜并使其無法復(fù)原,導(dǎo)致藻細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)流出,引發(fā)藻細(xì)胞死亡。能夠分泌蛋白質(zhì)、多肽類物質(zhì)、含氮化合物的微生物主要有的有弧菌、假交替單胞菌、黃桿菌等。真菌和放線菌是典型的釋放抗生素的微生物,如真菌中的青霉菌能釋放青霉素;支頂孢真菌能產(chǎn)生頭孢菌素。假單胞菌能夠分泌生物堿抑制多種藍(lán)藻的生長(zhǎng)。這些微生物往往是從富營(yíng)養(yǎng)化水體中直接分離的土著生物,環(huán)境適應(yīng)性強(qiáng),且分泌產(chǎn)生的代謝產(chǎn)物在水體環(huán)境中可自然降解的次生代謝產(chǎn)物,因此在水華藻控制中具有重要的應(yīng)用價(jià)值。目前在利用溶藻微生物的特殊作用來控制水華藻方面主要還存在一下問題:第一,往往使用價(jià)格高昂的原材料來獲取具有溶藻效果的發(fā)酵液,例如牛肉膏和蛋白胨等;第二,為了讓微生物更好地生長(zhǎng),在發(fā)酵體系中往往增加了大量的營(yíng)養(yǎng)鹽,如氮磷等,這些營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)往往會(huì)剩余在發(fā)酵液中,因此向水體中施用發(fā)酵液時(shí)會(huì)增加水體中營(yíng)養(yǎng)鹽的水平;第三,往往專注于單一溶藻物質(zhì)的產(chǎn)生,缺乏能使一種微生物產(chǎn)生多種可協(xié)同溶藻物質(zhì)的微生物或發(fā)酵條件的研究。因此努力挖掘具有不同地域特征的可產(chǎn)生多種且毒性低的次生代謝產(chǎn)物的溶藻微生物,以及研制可降低溶藻產(chǎn)品中氮磷含量的培養(yǎng)基,具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。

      【發(fā)明內(nèi)容】

      [0005]本發(fā)明提供一種溶藻銅綠假單胞菌,為一種新的菌株,具有較強(qiáng)環(huán)境適應(yīng)性和生態(tài)安全性。
      [0006]本發(fā)明還公開了一種溶藻銅綠假單胞菌的制備方法,適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
      [0007]本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種溶藻銅綠假單胞菌的用途,用于富營(yíng)養(yǎng)化水體的水華控制和水體應(yīng)急除藻。
      [0008]本發(fā)明公開了一種適用于溶藻銅綠假單胞菌的培養(yǎng)基,專用于溶藻銅綠假單胞菌的培養(yǎng)。
      [0009]本發(fā)明提供的一種溶藻銅綠假單胞菌,命名為:銅綠假單胞菌JMl (.Pseudomonasaar收該菌株已于2014年4月17日保藏于北京的“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”,地址北京市朝陽區(qū)北辰西路I號(hào)院3號(hào),其保藏號(hào)為CGMCC No 9070。
      [0010]本發(fā)明提供的一種溶藻銅綠假單胞菌的制備方法,包括以下步驟:
      (1)分別采集吉林省和內(nèi)蒙古共9處水華爆水體的水樣各500mL,然后各取IOOmL制備成混合水樣;取IOOmL混合水樣加入等量的稀釋50倍后的BGll培養(yǎng)基,在溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度20001UX,每日震蕩3-5次的條件下培養(yǎng)20日;
      (2)取黃化現(xiàn)象最明顯的培養(yǎng)液lmL,梯度稀釋后加入到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中,在25°C下培養(yǎng)36小時(shí),將菌落特征明顯不同且具有數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)的細(xì)菌分別進(jìn)行3次劃線分離純化;
      (3)在IOOmLNB液體培養(yǎng)基中接種上述步驟2所述的單一菌落,生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后,8000rpm離心5min,收集菌體,再懸于生理鹽水中,最終制備成0D_為0.3的菌懸液;將獲得的菌懸液按5%的比例接種于IOOmL NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h得培養(yǎng)液;取50mL培養(yǎng)液在8000rpm下離心5min,過0.22 μ m濾膜,取上清液作為無菌發(fā)酵液;剩余的50mL培養(yǎng)液作為含菌發(fā)酵液;分別取含菌發(fā)酵液和無菌發(fā)酵液4mL,加入到16mL處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、0D680為
      0.3的銅綠微囊藻FACHB-928藻液(中國(guó)科學(xué)院淡水藻種庫)中培養(yǎng),溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度20001uX,每日震蕩3-5次的條件下培養(yǎng)7日,葉綠素a含量最低的培養(yǎng)體系對(duì)應(yīng)的菌株即為銅綠假單胞菌。
      [0011]本發(fā)明所述菌株生產(chǎn)具有溶藻活性物質(zhì)的方法,其特征在于:
      1)黃豆粉浸汁和無機(jī)營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基的制備
      在500mL蒸懼水中加入15g黃豆粉,沸水中煮30min,冷卻至45°C后,無菌過濾得黃豆粉浸汁;
      在IL水中加入0.4g七水硫酸鎂、3.2g硫酸鉀、0.04g六水氯化鐵、硝酸銨Ig攪拌均勻,高壓蒸汽滅菌得無機(jī)鹽培養(yǎng)基;
      2)將黃豆粉浸汁和無機(jī)鹽培養(yǎng)基等比例混合,按照5%的比例接種上述銅綠假單胞菌的菌懸液,30°C培養(yǎng)48h,然后8000rpm離心5min,取上清液,即得溶藻活性物質(zhì)。
      [0012]經(jīng)試驗(yàn)證明本發(fā)明發(fā)酵液中含有膿青素和鼠李糖脂,該發(fā)酵液以1:20的比例接入到初始OD68tl為0.3的銅綠微囊藻培養(yǎng)液中在25°C、20001ux和光暗比為14:10的條件下培養(yǎng)3天后葉綠素a的濃度下降了 85%以上。該菌的無菌發(fā)酵液經(jīng)熱處理和光處理后,溶藻效果無明顯變化,表明具有較強(qiáng)的光和熱穩(wěn)定性。以上表明,該菌的發(fā)酵液在富營(yíng)養(yǎng)化水體的水華控制和水體應(yīng)急除藻方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
      [0013]本發(fā)明的積極效果在于:提供一株新的銅綠假單胞菌,其發(fā)酵液中含有膿青素和鼠李糖脂兩種主要物質(zhì),通過它們的協(xié)同作用來增強(qiáng)溶藻效果,用于富營(yíng)養(yǎng)化水體的水華控制和水體應(yīng)急除藻治理。
      【專利附圖】

      【附圖說明】
      [0014]圖1.6株細(xì)菌的含菌發(fā)酵液的溶藻效果;
      圖2.6株細(xì)菌的無菌發(fā)酵液的溶藻效果;
      圖3.銅綠假單胞菌JMl的菌落特征;
      圖4.銅綠假單胞菌JMl的細(xì)胞特征;
      圖5.銅綠假單胞菌JMl的系統(tǒng)發(fā)育分析;
      圖6.銅綠假單胞菌JMl無菌發(fā)酵液的溶藻特征;
      圖7.銅綠假單胞菌JMl無菌發(fā)酵液的光熱穩(wěn)定性。
      【具體實(shí)施方式】
      [0015]為了便于理解本發(fā)明,特列舉以下實(shí)施例。其作用被理解為是對(duì)本發(fā)明的闡釋而非對(duì)本發(fā)明的任何形式的限制。
      [0016]實(shí)施例1
      1.溶藻菌的篩選和溶藻方式分析
      2013年8月份,分別在吉林省的新立城水庫、南湖、北湖、凈月潭、石頭口門水庫、聚龍?zhí)?、楊木水庫、南河和?nèi)蒙古的特默河水華爆發(fā)段采集水體呈現(xiàn)明顯的藍(lán)綠色的水樣500mL,實(shí)驗(yàn)室分析表明其葉綠素含量在20-80 10 μ g/mL。將上述水樣各取IOOmL混在一起制備成混合水樣;取IOOmL混合水樣加入到等量的稀釋50倍后的BGll培養(yǎng)基,在溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度200011?,每日震蕩3_5次的條件下培養(yǎng)20日;取黃化現(xiàn)象最明顯的培養(yǎng)液lmL,梯度稀釋后加入到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中在25°C下培養(yǎng)24小時(shí),將6種菌落特征明顯不同且具有數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)的細(xì)菌分別進(jìn)行3次劃線分離純化,分別命名為 JM1、JM2、JM3、JM4、JM5 和 JM6。
      [0017]分別在IOOmL NB液體培養(yǎng)基中接種上述6株細(xì)菌,生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后,8000rpm離心5min,收集菌體,再懸于無菌水中,最終制備成0D_為0.3的菌懸液;將獲得的菌懸液按5%的比例重新接種于IOOmL NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h得培養(yǎng)液;取50mL培養(yǎng)液在8000rpm下離心5min,過0.22 μ m濾膜,取上清液作為無菌發(fā)酵液;剩余的50mL培養(yǎng)液作為含菌發(fā)酵液;分別取含菌發(fā)酵液和無菌發(fā)酵液4mL,加入到16mL處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、OD680為0.3的銅綠微囊藻FACHB-928藻液(中國(guó)科學(xué)院淡水藻種庫)中培養(yǎng),溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度20001uX,每日震蕩3-5次的條件下培養(yǎng)7日后,測(cè)定葉綠素a的含量。葉綠素a的測(cè)定方法:將20mL藻液在8000rpm下離心10min,倒去上清液,用5mL90%丙酮將底部沉淀溶出至50mL錐形瓶中,用透氣封口膜加蓋兩層報(bào)紙封口,置于4°C冰箱中保存,24h后取出離心獲得上清液,以丙酮為參比溶液,用分光光度計(jì)測(cè)定上清液在630nm、645nm、665nm波長(zhǎng)處的吸光度(A),根據(jù)公式C=Il.6 X A665 — 1.31 XA645 _ 0.14X A63c!計(jì)算藻液中葉綠素a(Chla)含量,單位:μ g/mL。每種處理重復(fù)三次,結(jié)果取平均值。圖1表明其中菌株JMl的含菌發(fā)酵液的溶藻效果最好,溶藻效果最好;圖2表明菌株JMl的無菌發(fā)酵液也具有較強(qiáng)的溶藻效果,并且在有菌存在的條件下,菌株JMl的溶藻效果最好。因此菌株JMl可產(chǎn)生活性溶藻物質(zhì),且可通過直接和間接兩種方式溶藻。
      [0018]2.菌株JM的鑒定和保藏
      從菌落特征、細(xì)胞形態(tài)、革蘭氏染色征和16S rRNA基因序列分析等多個(gè)角度對(duì)菌株JMl進(jìn)行了鑒定。圖3表明在牛肉膏蛋白胨固體平板上生長(zhǎng)24小時(shí)后,可見扁平、濕潤(rùn)的菌落,菌落隨著培養(yǎng)時(shí)間的增長(zhǎng),顏色逐漸變化為深青色,并能分泌一種特殊氣味。圖4表明菌體細(xì)胞呈短桿狀,不產(chǎn)芽孢,革蘭氏陰性。圖5表明,菌株JMl的16S rRNA基因序列分析與銅綠假單胞菌有99%的同源性,故該菌被鑒定為銅綠假單胞菌,命名為銅綠假單胞菌JMl。
      [0019]銅綠假單胞菌JMl于2014年4月17日保藏于北京的“中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心”,其保藏號(hào)為CGMCC No 9070。
      [0020]3.銅綠假單胞菌JMl培養(yǎng)基的配制和發(fā)酵產(chǎn)物的獲得
      在500mL蒸懼水中加 入15g黃豆粉,沸水中煮30min,冷卻至45°C后,無菌過濾得黃豆粉浸汁;
      在IL蒸餾水中加入0.4g七水硫酸鎂、3.2g硫酸鉀、0.04g六水氯化鐵、硝酸銨Ig攪拌均勻,高壓蒸汽滅菌得無機(jī)鹽培養(yǎng)基;
      將黃豆粉浸汁和無機(jī)鹽培養(yǎng)基等比例混合,按照5%的比例接種銅綠假單胞菌JMl的菌懸液,30°C培養(yǎng)48h,然后8000rpm離心5min,取上清液,即得溶藻活性物質(zhì)。
      [0021]4.菌株溶藻效果分析
      取具體步驟3獲得的無菌發(fā)酵液lmL,加入到盛有19mL處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期,OD680為0.3的銅綠微囊藻928培養(yǎng)液的50mL三角瓶中,利用無菌濾膜封口后,在25±0.5°C,光暗比=14:10,光照強(qiáng)度20001UX下培養(yǎng)3天,按照具體步驟I中的方法測(cè)定葉綠素a的含量,通過和培養(yǎng)基對(duì)照比較,分析溶藻效果。每種處理重復(fù)三次,結(jié)果表示為平均值,如圖6所示。結(jié)果表明,菌株JMl的無菌發(fā)酵液能夠明顯抑制銅綠微囊藻928的生長(zhǎng),培養(yǎng)至第三天時(shí)葉綠素a的含量下降了 85%,而培養(yǎng)基對(duì)照中的微藻則一直在生長(zhǎng),因此表明銅綠假單胞菌JMl的無菌發(fā)酵液在控制水華藻爆發(fā)方面具有重要的應(yīng)用價(jià)值。
      [0022]5.菌株JMl產(chǎn)膿青素和鼠李糖脂含量的分析
      將具體步驟3獲得的IOmL無菌發(fā)酵液加入到帶有刻度的試管中,利用IN鹽酸將pH值調(diào)節(jié)為2,然后在8000rpm下離心5min,去掉上清液,將沉淀再溶于IOmL蒸懼水中,稀釋60倍后采用蒽酮-濃硫酸法測(cè)定鼠李糖脂的含量。取5mL無菌發(fā)酵液加入到比色管中,然后加入3mL氯仿,充分震蕩后靜置5min ;將比色管中液體在8000rpm下尚IOmin,用移液槍吸去上層液體,在下層氯仿中加入3mL 0.2N的HC1,充分震蕩,混合均勻后靜置5min ;將混合液體在8000rpm下離心5min,用移液槍吸取上層無機(jī)相,并測(cè)定該無機(jī)相的在520nm處的吸光度值,用該值乘以17.072即為膿青素的含量。結(jié)果表明,發(fā)酵液中的鼠李糖脂含量為68.45mg/L,膿青素的含量為4.32 mg/mL,而黃豆粉無機(jī)鹽培養(yǎng)基對(duì)照組中鼠李糖脂含量為
      10.45mg/L,膿青素的含量為0.32 mg/mL,結(jié)果表明利用黃豆粉無機(jī)鹽培養(yǎng)基培養(yǎng)銅綠假單胞菌JMl后可獲得兩種含量較高的次級(jí)代謝產(chǎn)物。
      [0023]6.菌株JMl發(fā)酵液的光熱穩(wěn)定性分析
      具體步驟3獲得的無菌發(fā)酵液240mL,平均加入到12個(gè)50mL的三角瓶中,加入無菌濾膜封口后,其中3個(gè)瓶用黑色塑料袋蓋住后放置15天,3個(gè)瓶在121°C下熱處理20min,3個(gè)于20001uX光照條件下放置15天,剩下的3個(gè)瓶子不做任何處理。各處理完成后,分別按照具體步驟4的方法做溶藻實(shí)驗(yàn),同時(shí)做無菌水的對(duì)照實(shí)驗(yàn),結(jié)果如圖7所示。表明,經(jīng)過高溫高壓和光照處理后,發(fā)酵液的溶藻能力沒有受到明顯的影響,說明溶藻物質(zhì)的熱和光穩(wěn)定性強(qiáng),在溶藻產(chǎn)品的制備和使用過程中不易受到影響。
      【權(quán)利要求】
      1.一株溶藻銅綠假單胞菌,命名為銅綠假單胞菌JMl (.Pseudomonas aeruginosa),1^、菌株已于2014年4月17日保藏于中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心,其保藏號(hào)為 CGMCC No 9070。
      2.獲得權(quán)利要求1所述溶藻銅綠假單胞菌的方法,包括以下步驟完成: (1)分別采集吉林省和內(nèi)蒙古共9處水華爆水體的水樣各500mL,然后各取IOOmL制備成混合水樣;取IOOmL混合水樣加入等量的稀釋50倍后的BGll培養(yǎng)基,在溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度20001UX,每日震蕩3-5次的條件下培養(yǎng)20日; (2)取黃化現(xiàn)象最明顯的培養(yǎng)液lmL,梯度稀釋后加入到牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基中,在25°C下培養(yǎng)24小時(shí),將菌落特征明顯不同且具有數(shù)量?jī)?yōu)勢(shì)的細(xì)菌分別進(jìn)行3次劃線分離純化; (3)在IOOmLNB液體培養(yǎng)基中接種步驟2獲得的單一菌落,生長(zhǎng)至對(duì)數(shù)期后,8000rpm離心5min,收集菌體,再懸于無菌水中,最終制備成OD_為0.3的菌懸液;將獲得的菌懸液按5%的比例接種于IOOmL NB培養(yǎng)基中培養(yǎng)24h得培養(yǎng)液;取50mL培養(yǎng)液在8000rpm下離心5min,過0.22 μ m濾膜,取上清液作為無菌發(fā)酵液;剩余的50mL培養(yǎng)液作為含菌發(fā)酵液;分別取含菌發(fā)酵液和無菌發(fā)酵液4mL,加入到16mL處于對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期、OD680為0.3的銅綠微囊藻FACHB-928藻液(中國(guó)科學(xué)院淡水藻種庫)中培養(yǎng),溫度25±0.5°C,光暗比為14:10,光照強(qiáng)度20001uX,每日震蕩3-5次的條件下培養(yǎng)7日,葉綠素a含量最低的培養(yǎng)體系對(duì)應(yīng)的菌株為權(quán)利要求1所述的銅綠假單胞菌。
      3.利用權(quán)利要求1所述菌株生產(chǎn)具有溶藻活性物質(zhì)的方法,其特征在于: 1)黃豆粉浸汁和無機(jī)營(yíng)養(yǎng)鹽培養(yǎng)基的制備 在500mL蒸懼水中加入15g黃豆粉,沸水中煮30min,冷卻至45°C后,無菌過濾得黃豆粉浸汁; 在IL水中加入0.4g七水硫酸鎂、3.2g硫酸鉀、0.04g六水氯化鐵、硝酸銨Ig攪拌均勻,121 °C高壓蒸汽滅菌30min,得無機(jī)鹽培養(yǎng)基; 2)將黃豆粉浸汁和無機(jī)鹽培養(yǎng)基等比例混合,按照5%的比例接種權(quán)利要求1所述銅綠假單胞菌的菌懸液,30°C培養(yǎng)48h,然后8000rpm離心5min,取上清液,即得溶藻活性物質(zhì)。
      4.權(quán)利要求1所述的溶藻銅綠假單胞菌在富營(yíng)養(yǎng)化水體的水華控制和水體應(yīng)急除藻中的用途。
      【文檔編號(hào)】C12R1/385GK103937726SQ201410173791
      【公開日】2014年7月23日 申請(qǐng)日期:2014年4月29日 優(yōu)先權(quán)日:2014年4月29日
      【發(fā)明者】李明堂, 陳慶麗, 景澄茗, 付韻馨, 欒曉晨, 郝琳琳, 秦玉瑩 申請(qǐng)人:吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
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