一種涕滅威的核酸適體、衍生物及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種涕滅威的核酸適體、衍生物及其應(yīng)用，所述核酸適體的核苷酸序列為：GCCAAGTGGTATCTTCTGCAGCGATTCTTGATCGACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC。所述涕滅威的核酸適體的衍生物為核酸序列進行巰基化或同位素化修飾得到的。所述的涕滅威的核酸適體或衍生物用于涕滅威濃度定性、定量檢測分析。本發(fā)明優(yōu)點在于涕滅威適體的制備步驟簡單、效率高、品質(zhì)均一、穩(wěn)定性好、開發(fā)周期短、生產(chǎn)成本低、操作簡單、安全性高，在檢測分析領(lǐng)域的應(yīng)用前景廣闊。
【專利說明】一種涕滅威的核酸適體、衍生物及其應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及生物【技術(shù)領(lǐng)域】，尤其涉及一種涕滅威的核酸適體、衍生物及其應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 涕滅威，屬氨基甲酸酯類農(nóng)藥，其是一種高效、廣譜型殺蟲劑，其毒理機制是抑制 害蟲體內(nèi)膽堿酯酶，使乙酰膽堿積累，影響神經(jīng)興奮傳導(dǎo)，從而使害蟲發(fā)生痙攣、麻痹死亡， 常用來處理種子，抑制害蟲生長。因為氨基甲酸酯類農(nóng)藥的濫用，導(dǎo)致人畜中毒現(xiàn)象屢有發(fā) 生，所以其成為蔬菜中農(nóng)藥殘留的重點檢測品種。涕滅威是氨基甲酸酯類農(nóng)藥中的劇毒殺 蟲劑，由于其高毒性和難降解等特性，國內(nèi)外在蔬菜、水果、水稻等農(nóng)作物上的用量都做了 嚴(yán)格的限制。
[0003] 目前報道的檢測涕滅威農(nóng)藥的方法主要有光譜分析法、色譜法，但是儀器操作需 要專業(yè)人員，且樣品前處理復(fù)雜、費時，不適合我國蔬菜分散銷售市場常規(guī)性的現(xiàn)場快速檢 測需要。酶抑制法、速測卡法和免疫分析法等快速檢測方法因其操作較快速、簡便，近年來 得到越來越廣泛的應(yīng)用。但是酶抑制法缺點在于只能對有機磷和氨基甲酸酯類農(nóng)藥的殘留 做粗略的定性鑒定，不能定量分析，且方法重現(xiàn)性差，假陽性和假陰性率高，易受環(huán)境影響， 酶活性保存不易，不同來源的AchE對農(nóng)藥的敏感度也不盡相同。
[0004] 核酸適體是一類體外人工合成并具有確定二級或三級結(jié)構(gòu)的單鏈DNA或RNA寡核 苷酸分子，其能夠?qū)Π蟹肿舆M行特異性識別。通過指數(shù)富集的配基系統(tǒng)進化技術(shù)，經(jīng)過體外 篩選、擴增和富集過程可以從隨機寡核苷酸庫中篩選出針對多種靶分子的適體。傳統(tǒng)SELEX 技術(shù)以小分子為靶標(biāo)物質(zhì)篩選時，通常以在固相基質(zhì)上的固定態(tài)與寡核苷酸分子結(jié)合，利 于后續(xù)的分離過程，但必須在小分子上修飾活性基團才能將其與固相載體結(jié)合，因此在一 定程度上會影響目標(biāo)靶的構(gòu)象；以農(nóng)藥為靶分子，對其改造時，既要保證其殺蟲活性結(jié)構(gòu)不 被破壞又不能掩蓋與核酸的結(jié)合位點。而利用溶液中的自由態(tài)可以簡化篩選步驟。
[0005] 適體的優(yōu)點包括易合成與標(biāo)記、無批間差異和化學(xué)穩(wěn)定性好等，因此對食品和環(huán) 境中涕滅威農(nóng)藥殘留檢測具有耗時短、成本低、靈敏度高的特點，有很好的應(yīng)用前景。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明提供了一種涕滅威的核酸適體、衍生物及其應(yīng)用。
[0007] 本發(fā)明采用如下技術(shù)方案： 本發(fā)明的涕滅威的核酸適體的核苷酸序列為：GCCAAGTGGTATCTTCTGCAGCGATTCTTGATCG ACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC ； 利用DNAMAN軟件模擬其二級結(jié)構(gòu)，具有一種可能的莖環(huán)結(jié)構(gòu)，其結(jié)構(gòu)如下：

【權(quán)利要求】
1. 一種涕滅威的核酸適體，其特征在于：所述核酸適體的核苷酸序列為：GCCAAGTGGTA TCTTCTGCAGCGATTCTTGATCGACCGGTCGTTGTTCGCTGATTAAGCTTGGC〇
2. 如權(quán)利要求1所述的涕滅威的核酸適體，其特征在于：所述涕滅威核酸適體序列上 偶聯(lián)各種熒光素或酶或HIS標(biāo)簽或生物素或地高辛或納米材料或膠體金或熒光基團或發(fā) 光物質(zhì)。
3. 如權(quán)利要求1所述的涕滅威的核酸適體，其特征在于：將所述涕滅威核酸適體序列 置換、缺失和增加堿基后具有相同功能用途的核酸序列。
4. 一種如權(quán)利要求1所述的涕滅威的核酸適體的衍生物，其特征在于：所述涕滅威的 核酸適體的衍生物為核酸序列進行巰基化或同位素化修飾得到的。
5. 如權(quán)利要求1-4任一項所述的涕滅威的核酸適體或衍生物的應(yīng)用，其特征在于：所 述的涕滅威的核酸適體或衍生物用于涕滅威濃度定性、定量檢測分析。
6. 如權(quán)利要求5所述的涕滅威的核酸適體或衍生物的應(yīng)用，其特征在于：所述應(yīng)用的 具體方法如下：在涕滅威的核酸適體或衍生物上標(biāo)記可檢測標(biāo)記物，加入樣品，當(dāng)樣品中有 涕滅威時通過檢測標(biāo)記物的信號而獲得涕滅威的濃度。
7. 如權(quán)利要求5所述的涕滅威的核酸適體或衍生物的應(yīng)用，其特征在于：所述應(yīng)用的 具體方法如下：組裝適體膠體金試紙，樣品中含有涕滅威，試紙上出現(xiàn)一條紅線為陽性，達 到檢測的目的。
【文檔編號】C12N15/115GK104140969SQ201410370618
【公開日】2014年11月12日 申請日期:2014年7月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月31日
【發(fā)明者】王耘, 王淮慶 申請人:金陵科技學(xué)院