牛膽鹽及制備方法和制備的牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種可用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料的牛膽鹽及制備方法和制備的牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用，生產(chǎn)的牛膽鹽膽酸含量＞55﹪，干燥失重＜5﹪，灰分＜19﹪，酸價(jià)＜145，對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落＜2㎜，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑制作用，菌落＞1.5㎜；其制備方法包括皂化、氧化、酸化、脫脂、洗滌、鋇化、去鋇離子、活性炭脫色步驟，工藝成熟可行，在脫脂處理過(guò)程中，增加鋇化步驟，進(jìn)一步去掉了產(chǎn)品中的脂類物質(zhì)，同時(shí)，產(chǎn)品中加入10﹪～15﹪的陰離子表面活性劑，使得在用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料時(shí)，溶液不混濁；121℃高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
【專利說(shuō)明】牛膽鹽及制備方法和制備的牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn) 中的應(yīng)用

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種牛膽鹽的制備方法，具體地說(shuō)是一種從牛膽膏（汁）中制備牛膽鹽 及制備方法，特別是涉及一種可用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料的牛膽鹽及制備方法和制備的牛 膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用。

【背景技術(shù)】
[0002] 干粉細(xì)菌培養(yǎng)基在藥品、食品、水質(zhì)、化妝品、進(jìn)出口商品和醫(yī)學(xué)臨床中用于檢測(cè) 細(xì)菌。牛膽鹽是干粉細(xì)菌培養(yǎng)基中一種必需和十分重要的原料。隨著干粉細(xì)菌培養(yǎng)基應(yīng)用 量的不斷增加，對(duì)牛膽鹽的需求也在不斷增加。但是，我國(guó)牛膽鹽產(chǎn)品質(zhì)量一直沒有過(guò)關(guān)， 目前，只能從英、美等國(guó)進(jìn)口。
[0003] 中國(guó)農(nóng)業(yè)出版社1995出版，陳天壽主編的《微生物培養(yǎng)基的制造與應(yīng)用》(P120? 124頁(yè)）介紹了多種膽鹽的生產(chǎn)方法。
[0004] 如方法一：牛膽汁干燥成塊一乙醇溶解膽塊一過(guò)濾去雜質(zhì)一上清液分餾回收乙醇 -剩下的膏狀物用乙醚去脂一回收乙醚后干燥產(chǎn)品一粉碎一成品。
[0005] 如方法二：牛膽膏(汁）一加堿水解一脫脂一酸化一洗滌烘干一溶解一脫色一過(guò)濾 -成鹽一蒸餾去乙醇一烘干一粉碎一成品。等等。
[0006] 以上方法存在工藝時(shí)間長(zhǎng)，且脫脂處理不徹底，生產(chǎn)的牛膽鹽在用于生產(chǎn)干粉細(xì) 菌培養(yǎng)基時(shí)，出現(xiàn)加入2 %的蛋白胨煮沸時(shí)溶液不澄明清亮，特別是在121°C高壓15分鐘后 溶液混濁，甚至有上浮物出現(xiàn)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0007] 本發(fā)明的目的是提供一種可用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料的牛膽鹽及制備方法和制 備的牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用。
[0008] 本發(fā)明是采用如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)其發(fā)明目的的， 一種牛膽鹽，外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑 制作用，菌落> 1.5醒。
[0009] 一種上述牛膽鹽的制備方法，它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； 為避免加入的氫氧化鈉的量太多，濃度太高時(shí)，破壞牛膽膏中的膽酸，本發(fā)明在步驟⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氫氧化鈉，氫氧化鈉先溶于水中成為氫氧化鈉溶液；其余的氫 氧化鈉另外溶于水中，皂化時(shí)分批加入，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保持溶液的總體積， 直至使牛膽膏徹底皂化。
[0010] ⑵氧化：待皂化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)釜中加入濃度為8 %? 10 %的雙氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入濃度為18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘，放出， 再離心甩干； 為盡量去除顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，本發(fā)明所述步驟⑷重復(fù)1?3次。
[0011] 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為6號(hào)溶劑油或乙醚或120號(hào)溶劑油。
[0012] (5)洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取 出尚心甩干； (6)鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和濃 度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液，調(diào) pH值為7.8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； ⑴去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH值 13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； ⑶活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的酒精， 加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰噬?小 時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)荃中分饋，回收酒精，剩余固體 物干燥、粉碎得牛膽鹽； 為盡量析出粘稠狀物中已溶于濃度為95 %的酒精中的無(wú)機(jī)鹽(硫酸鈉)，本發(fā)明在步驟 ⑶中，所述冷卻為將溶液置于0°C?4°C下冷藏5小時(shí)?6小時(shí)。
[0013] 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏 菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
[0014] 一種如上所述牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用，在牛膽鹽用于干粉細(xì)菌培 養(yǎng)基原料時(shí)，以重量計(jì)，加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性劑。
[0015] 本發(fā)明所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
[0016] 一種牛膽鹽，牛膽鹽中加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性劑，所述陰離 子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉；外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥 失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏 菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全 部溶解于水中，澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋 白胨煮沸時(shí)，溶液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮 物出現(xiàn)。
[0017] 一種上述牛膽鹽的制備方法，它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； 為避免加入的氫氧化鈉的量太多，濃度太高時(shí)，破壞牛膽膏中的膽酸，本發(fā)明在步驟⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氫氧化鈉，氫氧化鈉先溶于水中成為氫氧化鈉溶液；其余的氫 氧化鈉另外溶于水中，皂化時(shí)分批加入，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保持溶液的總體積， 直至使牛膽膏徹底皂化。
[0018] ⑵氧化：待阜化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)荃中加入濃度為8 %? 10 %的雙氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入濃度為18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘，放出， 再離心甩干； 為盡量去除顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，本發(fā)明所述步驟⑷重復(fù)1?3次。
[0019] 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為6號(hào)溶劑油或乙醚或120號(hào)溶劑油。
[0020] (5)洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取 出尚心甩干； (6)鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和濃 度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液，調(diào) pH值為7. 8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； ⑴去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH值 13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； ⑶活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的酒精， 加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰噬?小 時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)荃中分饋，回收酒精，剩余固體 物干燥、粉碎得牛膽鹽； 為盡量析出粘稠狀物中已溶于濃度為95 %的酒精中的無(wú)機(jī)鹽(硫酸鈉)，本發(fā)明在步驟 ⑶中，所述冷卻為將溶液置于0°C?4°C下冷藏5小時(shí)?6小時(shí)。
[0021] ⑶加入添加劑：按步驟⑶所得牛膽鹽加入10 %?15 %的陰離子表面活性劑。
[0022] 本發(fā)明所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
[0023] 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏 菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全部溶解于水中， 澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋白胨煮沸時(shí)，溶 液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
[0024] 由于采用上述技術(shù)方案，本發(fā)明較好的實(shí)現(xiàn)了發(fā)明目的，工藝成熟可行，在脫脂處 理過(guò)程中，增加鋇化步驟，進(jìn)一步去掉了產(chǎn)品中的脂類物質(zhì)，同時(shí)，產(chǎn)品中加入10 %?15 % 的陰離子表面活性劑，使得在用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料時(shí)，溶液不會(huì)混濁；生產(chǎn)的牛膽鹽膽 酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步說(shuō)明。
[0026] 實(shí)施例1 : 一種牛膽鹽，外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑 制作用，菌落> 1.5醒。
[0027] -種上述牛膽鹽的制備方法，它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； 為避免加入的氫氧化鈉的量太多，濃度太高時(shí)，破壞牛膽膏中的膽酸，本發(fā)明在步驟⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氫氧化鈉，氫氧化鈉先溶于水中成為氫氧化鈉溶液；其余的氫 氧化鈉另外溶于水中，皂化時(shí)分批加入，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保持溶液的總體積， 直至使牛膽膏徹底皂化。
[0028] 本實(shí)施例取80 kg牛膽膏，其膽酸平均含量為41 %，自來(lái)水320 kg，氫氧化鈉(片堿） 44 kg ;在500立升的反應(yīng)釜中，氫氧化鈉先加入30 kg，加入時(shí)，氫氧化鈉先溶于水中成為氫 氧化鈉溶液，加溫至l〇5°C，攪拌至全部溶解，保持此沸騰狀態(tài)24小時(shí)；剩余14 kg氫氧化鈉 另外溶于水中，在沸騰過(guò)程中不斷補(bǔ)充氫氧化鈉水溶液，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保 持溶液的總體積，直至使牛膽膏徹底皂化。
[0029] ⑵氧化：待阜化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)荃中加入濃度為8 %? 10 %的雙氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； 本實(shí)施例用稀硫酸或稀鹽酸調(diào)皂化液的pH值8. 2,將雙氧水間斷慢慢加入皂化液中 (加入時(shí)防止液體鼓泡溢出反應(yīng)釜)，氧化24小時(shí)，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃 色為止。
[0030] ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入濃度為18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； 本實(shí)施例先向氧化液中緩慢加入濃度為20 %的稀硫酸，邊加邊攪直至pH值2. 5,停止 加酸，再煮沸2?3分鐘，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸。
[0031] ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆 粒狀粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘， 放出，再離心甩干； 為盡量去除顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，本發(fā)明所述步驟⑷重復(fù)1?3次。
[0032] 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為6號(hào)溶劑油或乙醚或120號(hào)溶劑油。
[0033] 本實(shí)施例待冷至室溫后，取出顆粒狀粗酸在離心甩干機(jī)中甩出剩余酸水，然后再 移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀粗酸重1. 5倍的6號(hào)溶劑油，加熱到35°C，攪拌20分鐘，放出，迅 速離心甩干，顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)極大部分溶于6號(hào)溶劑油內(nèi)被去除，為盡量去除顆 粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，重復(fù)上述步驟2次。
[0034] 所述6號(hào)溶劑油即6號(hào)大豆抽提溶劑油，由無(wú)錫萬(wàn)隆化工有限公司生產(chǎn)。為基本 的有機(jī)化工原料之一，可作清洗劑，清洗電子零件，也可用作金屬脫油去污清洗劑，廣泛用 于印刷、五金、電子、膠水、橡膠、國(guó)防工業(yè)、油漆、化工、油脂等行業(yè)。
[0035] (5)洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取 出尚心甩干； 本實(shí)施例將脫脂后的顆粒狀粗酸在夾層鍋中用濃度為95 %的酒精40°C攪拌洗滌，再 將顆粒狀粗酸取出離心甩干，可提高顆粒狀粗酸中的膽酸含量7 %?10 %。
[0036] (6)鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和 濃度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液， 調(diào)pH值為7. 8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； 本實(shí)施例按所得顆粒狀粗酸36公斤，加7. 0公斤氯化鋇(先溶于14公斤水中)、濃度為 75 %的酒精180公斤于反應(yīng)釜中，加氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為7.8,加溫90°C回流4小時(shí)， 放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)荃中分饋回收酒精，剩余固體物35公斤。
[0037] (7)去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH 值13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； 本實(shí)施例按剩余固體物35公斤重加170公斤水，加碳酸鈉調(diào)pH值13,煮沸2小時(shí)，分 離去沉淀，沉淀物為碳酸鋇，然后，取上清液(牛膽酸鈉，即牛膽鹽)加入硫酸調(diào)pH值7. 3,并 可進(jìn)一步去除上清液中的鋇離子，再蒸發(fā)水份至粘稠狀。
[0038] (8)活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的 酒精，加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05? 0. 06 :5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰?色1小時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)釜中分餾，回收酒精，剩余 固體物干燥、粉碎得牛膽鹽； 為盡量析出粘稠狀物中已溶于濃度為95 %的酒精中的無(wú)機(jī)鹽(硫酸鈉和氯化鈉)，本發(fā) 明在步驟⑶中，所述冷卻為將溶液置于0°C?4°C下冷藏5小時(shí)?6小時(shí)。
[0039] 本實(shí)施例按上步驟所得粘稠物40公斤重加200公斤濃度為95 %的酒精，加溫至 全部溶解，將溶液置于2°C下冷藏5小時(shí)，析出1. 5公斤無(wú)機(jī)鹽類(硫酸鈉)，過(guò)濾，取液體在 反應(yīng)釜中分餾回收酒精，按留在反應(yīng)釜中分餾后的固體物重加2. 0公斤藥用級(jí)活性炭、200 公斤濃度為80 %的酒精，不加溫?cái)嚢杳撋?小時(shí)，放出沉淀3小時(shí)?4小時(shí)，取上清液用中 速濾紙過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)釜中分餾，回收酒精，剩余固體物干燥、粉碎得牛 膽鹽34公斤成品，牛膽鹽中膽酸含量為70 %。
[0040] 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏 菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
[0041] 實(shí)施例2: 一種牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中的應(yīng)用，在牛膽鹽用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料時(shí)， 以重量計(jì)，加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性劑。
[0042] 本發(fā)明所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
[0043] 本實(shí)施例取由實(shí)施例1制備的牛膽鹽，加入牛膽鹽重12 %的陰離子表面活性劑， 所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉，用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料。在100毫升水 中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全部溶解于水中，澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. Ο ;在100毫升水 中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋白胨煮沸時(shí)，溶液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜 放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
[0044] 實(shí)施例3 : 一種牛膽鹽，牛膽鹽中加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性劑，所述陰離子表 面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉；外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重 < 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和 痢疾志賀氏菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全部溶 解于水中，澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋白胨 煮沸時(shí)，溶液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出 現(xiàn)。
[0045] 一種上述牛膽鹽的制備方法，它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； 為避免加入的氫氧化鈉的量太多，濃度太高時(shí)，破壞牛膽膏中的膽酸，本發(fā)明在步驟⑴ 中，首先加入65 %?75 %的氫氧化鈉，氫氧化鈉先溶于水中成為氫氧化鈉溶液；其余的氫 氧化鈉另外溶于水中，皂化時(shí)分批加入，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保持溶液的總體積， 直至使牛膽膏徹底皂化。
[0046] 本實(shí)施例取80 kg牛膽膏，其膽酸平均含量為41 %，自來(lái)水320 kg，氫氧化鈉(片堿） 44 kg ;在500立升的反應(yīng)釜中，氫氧化鈉先加入30 kg，加入時(shí)，氫氧化鈉先溶于水中成為氫 氧化鈉溶液，加溫至l〇5°C，攪拌至全部溶解，保持此沸騰狀態(tài)24小時(shí)；剩余14 kg氫氧化鈉 另外溶于水中，在沸騰過(guò)程中不斷補(bǔ)充氫氧化鈉水溶液，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保 持溶液的總體積，直至使牛膽膏徹底皂化。
[0047] ⑵氧化：待阜化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)荃中加入濃度為8 %? 10 %的雙氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； 本實(shí)施例用稀硫酸或稀鹽酸調(diào)皂化液的pH值8. 2,將雙氧水間斷慢慢加入皂化液中 (加入時(shí)防止液體鼓泡溢出反應(yīng)釜)，氧化24小時(shí)，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃 色為止。
[0048] ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入濃度為18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； 本實(shí)施例先向氧化液中緩慢加入濃度為20 %的稀硫酸，邊加邊攪直至pH值2. 5,停止 加酸，再煮沸2?3分鐘，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸。
[0049] ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆 粒狀粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘， 放出，再離心甩干； 為盡量去除顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，本發(fā)明所述步驟⑷重復(fù)1?3次。
[0050] 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為6號(hào)溶劑油或乙醚或120號(hào)溶劑油。
[0051] 本實(shí)施例待冷至室溫后，取出顆粒狀粗酸在離心甩干機(jī)中甩出剩余酸水，然后再 移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀粗酸重1. 5倍的6號(hào)溶劑油，加熱到35°C，攪拌20分鐘，放出，迅 速離心甩干，顆粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)極大部分溶于6號(hào)溶劑油內(nèi)被去除，為盡量去除顆 粒狀粗酸中的脂類物質(zhì)，重復(fù)上述步驟2次。
[0052] 所述6號(hào)溶劑油即6號(hào)大豆抽提溶劑油，由無(wú)錫萬(wàn)隆化工有限公司生產(chǎn)。為基本 的有機(jī)化工原料之一，可作清洗劑，清洗電子零件，也可用作金屬脫油去污清洗劑，廣泛用 于印刷、五金、電子、膠水、橡膠、國(guó)防工業(yè)、油漆、化工、油脂等行業(yè)。
[0053] (5)洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取 出尚心甩干； 本實(shí)施例將脫脂后的顆粒狀粗酸在夾層鍋中用濃度為95 %的酒精40°C攪拌洗滌，再 將顆粒狀粗酸取出離心甩干，可提高粗膽酸含量7 %?10 %。
[0054] (6)鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和 濃度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液， 調(diào)pH值為7. 8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； 本實(shí)施例按所得顆粒狀粗酸36公斤，加7. 0公斤氯化鋇(先溶于14公斤水中)、濃度為 75 %的酒精180公斤于反應(yīng)釜中，加氫氧化鈉溶液，調(diào)pH值為7.8,加溫90°C回流4小時(shí)， 放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)荃中分饋回收酒精，剩余固體物35公斤。
[0055] (7)去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH 值13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； 本實(shí)施例按剩余固體物35公斤重加170公斤水，加碳酸鈉調(diào)pH值13,煮沸2小時(shí)，分 離去沉淀，沉淀物為碳酸鋇，然后，取上清液(牛膽酸鈉，即牛膽鹽)加入硫酸調(diào)pH值7. 3,并 可進(jìn)一步去除上清液中的鋇離子，再蒸發(fā)水份至粘稠狀。
[0056] (8)活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的 酒精，加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05? 0. 06 :5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰?色1小時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)釜中分餾，回收酒精，剩余 固體物干燥、粉碎得牛膽鹽； 為盡量析出粘稠狀物中已溶于濃度為95 %的酒精中的無(wú)機(jī)鹽(硫酸鈉和氯化鈉)，本發(fā) 明在步驟⑶中，所述冷卻為將溶液置于0°C?4°C下冷藏5小時(shí)?6小時(shí)。
[0057] 本實(shí)施例按上步驟所得粘稠物40公斤重加200公斤濃度為95 %的酒精，加溫至 全部溶解，將溶液置于2°C下冷藏5小時(shí)，析出1. 5公斤無(wú)機(jī)鹽類(硫酸鈉)，過(guò)濾，取液體在 反應(yīng)釜中分餾回收酒精，按留在反應(yīng)釜中分餾后的固體物重加2. 0公斤藥用級(jí)活性炭、200 公斤濃度為80 %的酒精，不加溫?cái)嚢杳撋?小時(shí)，放出沉淀3小時(shí)?4小時(shí)，取上清液用中 速濾紙過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)釜中分餾，回收酒精，剩余固體物干燥、粉碎得牛 膽鹽34公斤成品，牛膽鹽中膽酸含量為70 %。
[0058] ⑶加入添加劑：按步驟(8)所得牛膽鹽加入10 %?15 %的陰離子表面活性劑。
[0059] 本發(fā)明所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
[0060] 本實(shí)施例按步驟⑶所得34公斤牛膽鹽加入12 %陰離子表面活性劑，所述陰離子 表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
[0061] 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分 < 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏 菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全部溶解于水中， 澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋白胨煮沸時(shí)，溶 液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
[0062] 實(shí)施例4 : 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為120號(hào)溶劑油即120#橡膠工業(yè)溶劑油，又叫工 業(yè)庚烷，為無(wú)色透明液體，易燃，易揮發(fā)，不含四乙基鉛，硫含量低，是一種用途廣泛的 有機(jī)溶劑。由上海嘉榮貿(mào)易有限公司銷售。
[0063] 余同實(shí)施例1。
[0064] 實(shí)施例5 : 本發(fā)明在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑為120號(hào)溶劑油即120#橡膠工業(yè)溶劑油，又叫工 業(yè)庚烷，為無(wú)色透明液體，易燃，易揮發(fā)，不含四乙基鉛，硫含量低，是一種用途廣泛的 有機(jī)溶劑。由上海嘉榮貿(mào)易有限公司銷售。
[0065] 余同實(shí)施例3。
【權(quán)利要求】
1. 一種牛膽鹽，其特征是外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾 志賀氏菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm。
2. -種牛膽鹽，其特征是牛膽鹽中加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性劑， 所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉；外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm， 對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽， 牛膽鹽全部溶解于水中，澄清，無(wú)沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽 鹽，2克蛋白胨煮沸時(shí)，溶液不混濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明 亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
3. -種如權(quán)利要求1所述牛膽鹽的制備方法，其特征是它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； ⑵氧化：待皂化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)釜中加入8 %?10 %的雙 氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值2. 5?3. 0 ; 煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘，放出， 再離心甩干； (5) 洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取出 尚心甩干； (6) 鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和濃 度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液，調(diào) pH值為7.8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； ⑴去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH值 13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； ⑶活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的酒精， 加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰噬?小 時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)荃中分饋，回收酒精，剩余固體 物干燥、粉碎得牛膽鹽； 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑 制作用，菌落> 1.5醒。
4. 一種如權(quán)利要求2所述牛膽鹽的制備方法，其特征是它包括下列步驟： ⑴皂化：以重量計(jì)，按1 :4. 0?5.0 :0. 5?0.6比例取牛膽膏、水和含量> 96 %的氫 氧化鈉加入反應(yīng)釜中皂化，反應(yīng)溫度l〇5°C?110°C，反應(yīng)時(shí)間20小時(shí)?24小時(shí)； ⑵氧化：待皂化液冷卻至室溫，調(diào)pH值8. 0?8. 5,往反應(yīng)釜中加入濃度為8 %?10 % 的雙氧水，直至使皂化液的顏色由棕黑色變成棕黃色； ⑶酸化：往反應(yīng)釜中加入濃度為18 %?22 %的硫酸或鹽酸，邊加邊攪，直至pH值 2. 5?3. 0 ;煮沸，使溶液表面浮出顆粒狀粗酸； ⑷脫脂：待溶液冷卻至室溫，取出顆粒狀粗酸離心甩干后，移入反應(yīng)釜中，加入顆粒狀 粗酸重量1. 2倍?1. 5倍的溶劑脫脂劑，加熱到20°C?35°C，攪拌15分鐘?20分鐘，放出， 再離心甩干； (5) 洗滌：對(duì)步驟⑷脫脂后的顆粒狀粗酸用濃度為95 %的酒精在40°C攪拌洗滌，取出 尚心甩干； (6) 鋇化：以重量計(jì)，按1 :0. 18?0. 2 :5?6比例取洗滌后的顆粒狀粗酸、氯化鋇和濃 度為75 %的酒精加入反應(yīng)釜中，所述氯化鋇先溶于2倍?3倍的水中；加氫氧化鈉溶液，調(diào) pH值為7. 8,加溫80°C?90°C，回流4小時(shí)，放出冷卻沉淀，取上清液在反應(yīng)釜中分餾； ⑴去鋇離子：首先，按步驟(6)分餾后的固體物重加4倍?5倍水，加碳酸鈉調(diào)pH值 13?14,煮沸2小時(shí)?4小時(shí)，分離去沉淀，取上清液；然后，對(duì)上清液加入硫酸調(diào)pH值 7. 2?7. 4,蒸發(fā)水分至粘稠狀； ⑶活性炭脫色：首先，按步驟(7)所得粘稠狀物重加5倍?6倍量濃度為95 %的酒精， 加溫至全部溶解，冷卻，過(guò)濾，取液體在反應(yīng)釜中分餾；然后，以重量計(jì)，按1 :〇. 05?0. 06 : 5?6比例取分餾后的固體物、活性炭和濃度為75 %?80 %的酒精，不加溫?cái)嚢柰噬?小 時(shí)?2小時(shí)，放出沉淀，過(guò)濾去活性炭；最后，取液體在反應(yīng)荃中分饋，回收酒精，剩余固體 物干燥、粉碎得牛膽鹽； ⑶加入添加劑：在步驟⑶所得牛膽鹽中加入牛膽鹽重10 %?15 %的陰離子表面活性 劑； 制備的牛膽鹽外觀為白色或淡黃色粉末，膽酸含量> 55 %，干燥失重< 5 %，灰分< 19 %，酸價(jià)< 145 ;對(duì)大腸菌有較強(qiáng)的抑制作用，菌落< 2 mm，對(duì)沙門氏菌和痢疾志賀氏菌無(wú)抑 制作用，菌落> 1. 5 mm ;在1〇〇毫升水中，加入1克牛膽鹽，牛膽鹽全部溶解于水中，澄清，無(wú) 沉淀，pH值7. 5?9. 0 ;在100毫升水中，加入0. 5克牛膽鹽，2克蛋白胨煮沸時(shí)，溶液不混 濁；121°C高壓15分鐘后不混濁，隔夜放置后，溶液澄清明亮，無(wú)上浮物出現(xiàn)。
5. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述牛膽鹽的制備方法，其特征是在步驟⑴中，首先加入65 %?75 %的氫氧化鈉，氫氧化鈉先溶于水中成為氫氧化鈉溶液；其余的氫氧化鈉另外溶于 水中，皂化時(shí)分批加入，以補(bǔ)充皂化反應(yīng)時(shí)消耗的堿和保持溶液的總體積，直至使牛膽膏徹 底皂化。
6. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述牛膽鹽的制備方法，其特征是在所述步驟⑷重復(fù)1?3次。
7. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述牛膽鹽的制備方法，其特征是在步驟⑷中，所述溶劑脫脂劑 為6號(hào)溶劑油或乙醚或120號(hào)溶劑油。
8. 根據(jù)權(quán)利要求3或4所述牛膽鹽的制備方法，其特征是在步驟(8)中，所述冷卻為將溶 液置于〇°C?4°C下冷藏5小時(shí)?6小時(shí)。
9. 根據(jù)權(quán)利要求4所述牛膽鹽的制備方法，其特征是在步驟(9)中，所述陰離子表面活 性劑優(yōu)選為十-燒基硫酸納。
10. -種如權(quán)利要求3所述牛膽鹽的制備方法制備的牛膽鹽在干粉細(xì)菌培養(yǎng)基生產(chǎn)中 的應(yīng)用，其特征是在牛膽鹽用于干粉細(xì)菌培養(yǎng)基原料時(shí)，以重量計(jì)，加入牛膽鹽重10 %? 15 %的陰離子表面活性劑；所述陰離子表面活性劑優(yōu)選為十二烷基硫酸鈉。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104152387SQ201410413922
【公開日】2014年11月19日 申請(qǐng)日期:2014年8月21日 優(yōu)先權(quán)日:2014年8月21日
【發(fā)明者】曹國(guó)華, 曹夢(mèng)蘭, 曹夢(mèng)愷 申請(qǐng)人:曹國(guó)華