一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在于，所述的添加劑中包括如下數(shù)量比復(fù)合菌群：兩歧雙歧桿菌：釀酒酵母：凝結(jié)芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌：糞腸球菌=（56-58）:（24-27）：7:7:1，復(fù)合菌群的活菌數(shù)量為2.0×108-1.0×109cfu/g。本發(fā)明的微生物菌群之間通過(guò)協(xié)同作用調(diào)節(jié)腸道內(nèi)微生態(tài)平衡，避免了抗生素等藥物的使用，產(chǎn)品更加環(huán)保且成本低廉，有著很好的應(yīng)用前景。
【專利說(shuō)明】一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑及其制備方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及微生物【技術(shù)領(lǐng)域】，更具體的涉及一種用于養(yǎng)羊的微生物菌群及其制備 方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 近年來(lái)，我國(guó)非常重視草食家畜的發(fā)展，尤其是牛羊的發(fā)展?fàn)顩r，然而牛羊的生長(zhǎng) 離不開(kāi)飼料，飼料中更不可缺少飼料添加劑。飼料添加劑用量雖小，但作用巨大，具有補(bǔ)充 或平衡飼料營(yíng)養(yǎng)，預(yù)防疾病，促進(jìn)羊的生長(zhǎng)，保障飼料質(zhì)量和提高羊的產(chǎn)品產(chǎn)量等多功能。 科學(xué)使用飼料添加劑，既能有效地增加羊產(chǎn)品產(chǎn)量，還可以提高飼料利用率，節(jié)省飼料，降 低成本，達(dá)到增產(chǎn)增收的目的。羊的飼料添加劑種類眾多，包括抗生素、激素類添加劑，以及 中草藥類的添加劑，但這些添加劑多為普用飼料添加劑，這些普用飼料添加劑在羊的養(yǎng)育 過(guò)程中均會(huì)有不同程度的藥物殘留和不良的副作用，部分飼料添加劑價(jià)格昂貴，進(jìn)而造成 養(yǎng)羊的成本增加。
[0003] 此外，羊?qū)俜雌c動(dòng)物，瘤胃內(nèi)有原蟲，也有乳酸菌、芽孢菌和酵母菌等微生物。原蟲 雖對(duì)纖維素有較強(qiáng)分解作用，但也會(huì)吞噬大量細(xì)菌，且原蟲的增加會(huì)使瘤胃內(nèi)的丙酸含量 減少，而丙酸是反芻動(dòng)物葡萄糖的主要來(lái)源，因此，若原蟲所占比例過(guò)高，則無(wú)法保障動(dòng)物 對(duì)能量的需求，且還會(huì)造成羊瘤胃內(nèi)菌群失調(diào)而產(chǎn)生的腹瀉問(wèn)題?，F(xiàn)有的羊飼料添加劑均 未能解決此問(wèn)題。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 為了克服通用飼料添加劑藥物殘留問(wèn)題、原蟲增加問(wèn)題以及保障羊瘤胃內(nèi)有益微 生物數(shù)量，維持微生態(tài)平衡，本發(fā)明研發(fā)專門針對(duì)羊的復(fù)合微生物菌群替代普適的飼料添 加劑。本發(fā)明選用由兩歧雙歧桿菌、釀酒酵母、凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和糞腸球菌形 成的復(fù)合微生物菌群作為羊的飼料添加劑。
[0005] 本發(fā)明所采取的技術(shù)方案為：一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在 于，所述的添加劑中包括如下數(shù)量比的復(fù)合菌群：兩歧雙歧桿菌：釀酒酵母：凝結(jié)芽孢 桿菌：枯草芽孢桿菌：糞腸球菌=(56-58): (24-27) :7:7:1，復(fù)合菌群的活菌數(shù)量為 2. 0X 108-1. 0X 109 cfu/g〇
[0006] 所述微生物菌群添加劑還包括輔料，所述輔料包含：麩皮、淀粉、寡糖和玉米粉等 所述微生物菌群添加劑的投加量?jī)H為飼料總重量的0.2% - 0.6%，以拌喂、喂飲等方式 使用。
[0007] 所述微生物菌群添加劑的制備方法為：首先生產(chǎn)兩歧雙歧桿菌、釀酒酵母、凝結(jié)芽 孢桿菌、枯草芽孢桿菌和糞腸球菌發(fā)酵液，然后根據(jù)菌種密度按數(shù)量比換算成發(fā)酵液的比 例，并按換算后的比例將發(fā)酵液混合，并與輔料經(jīng)低溫干燥、粉碎過(guò)篩后制成固體。
[0008] 所述兩歧雙歧桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方法為：將目的菌株以2%的接種量加入到MRS液 體培養(yǎng)基中，37°C下厭氧培養(yǎng)48h，然后進(jìn)入發(fā)酵罐中進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基為：酵母 浸出粉1%、葡萄糖0. 8%、玉米糖漿1. 5%、磷酸二氫鉀0. 2% ;采用補(bǔ)料分批發(fā)酵，檢測(cè)菌液濃 度，使其數(shù)量級(jí)維持在億個(gè)/mL。其中，MRS液體培養(yǎng)基即常規(guī)的通用培養(yǎng)基。
[0009] 所述啤酒酵母發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將菌株以2%的接種量加入到Y(jié)H)培養(yǎng)基中， 32°C好氧培養(yǎng)48h，再以2%的接種量接種到麥芽汁培養(yǎng)基中，并輔以湯米酵母粉；所述湯米 酵母粉為酵母粉加入米湯中，使酵母粉的濃度為〇. 2%。其中，YH)培養(yǎng)基即常規(guī)的通用培養(yǎng) 基。
[0010] 所述凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種量加入到種子培 養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為：酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化鈉 10g/L，好氧培養(yǎng)24h，再以 2%接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5 g/L，玉米漿 10g/L，MgS04 · 7H20 1 g/L，Κ2ΗΡ04 · 3H20 0· 5 g/L，MnS04 0· 05 g/L，采用補(bǔ)料分批發(fā)酵方 式發(fā)酵3-7天。
[0011] 所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種量加入到種子 培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖5g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉lg/L，牛肉膏3g/L，MgS0 4 0. 5g/L，MnS04 0 . 05g/L，好氧過(guò)夜培養(yǎng)，再以2%接種量接入到發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方 為：玉米粉 1. 0%,葡萄糖 0. 5%，豆餅粉 15%，魚粉 0. 5%，CaC03 0. 5%，（NH4) 2S04 0 . 1%，K2HP04 0· 03%，MgS04 · 7H20 0· 02%，MnS04 0· 02%，好氧發(fā)酵 2 - 5 天。
[0012] 所述糞腸球菌發(fā)酵液生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種量接種至牛肉膏蛋白胨 培養(yǎng)基中，然后以10%的接種量添加到TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧發(fā)酵，TSB培養(yǎng)基配方為：胰 蛋白胨1. 5%，大豆蛋白胨0. 5%，氯化鈉 0. 5%，調(diào)節(jié)pH為7. 2,于25°C - 30°C下培養(yǎng)3天。
[0013] 本發(fā)明所述的兩歧雙歧桿菌能夠增加羊的腸道有益菌數(shù)量，使腸道中各類微生物 保持動(dòng)態(tài)平衡，在腸粘膜表面形成微生物屏障，抑制有害菌生長(zhǎng)；而且能夠分解食物中的蛋 白質(zhì)、糖類，使部分脂肪少量降解，加強(qiáng)胃腸道對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收；菌體或代謝產(chǎn)物能 夠增加腸道粘膜的免疫作用，增強(qiáng)免疫力。所述釀酒酵母的甘露聚糖能夠干擾或阻斷病原 微生物的定植，加強(qiáng)腸道免疫力；酵母菌能夠直接提供多種營(yíng)養(yǎng)成分，促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)；提高 腸道消化酶活性，促進(jìn)微生物繁殖和增強(qiáng)活性。所述的凝結(jié)芽孢桿菌無(wú)毒副作用，能夠有 效的抑制有害菌的生長(zhǎng)，改良腸道微生態(tài)環(huán)境，促進(jìn)腸道發(fā)育；可以有效改善菌群失調(diào)性腹 瀉；還可以提高飼料品質(zhì)，促進(jìn)飼料的消化吸收，降低料重比。所述枯草芽孢桿菌能夠快速 消耗游離氧，造成低氧環(huán)境，促進(jìn)有益厭氧菌的增殖，調(diào)節(jié)微生態(tài)平衡；可以分泌多種酶類， 提高消化酶活性，改善飼料利用率；產(chǎn)生微生物、促生長(zhǎng)因子等多種營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，提高鈣磷利 用率；刺激動(dòng)物生長(zhǎng)的免疫器官，激活淋巴細(xì)胞，提高動(dòng)物免疫力。所述糞腸球菌耐熱耐酸、 具有兩歧雙歧桿菌的作用，繁殖速度快，抑制大腸桿菌生長(zhǎng)；提高礦物元素的生物學(xué)活性， 促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)吸收，改善微生態(tài)環(huán)境。
[0014] 本發(fā)明的相對(duì)于現(xiàn)有的羊飼料添加劑，具有如下有益效果： 1、本復(fù)合微生物菌群針對(duì)性強(qiáng)，是專門針對(duì)羊的微生物菌群，增加有益菌群比例，防止 羊瘤胃內(nèi)的原蟲比例過(guò)高。
[0015] 2、本復(fù)合微生物菌群優(yōu)化了羊的腸道微生態(tài)平衡，羊瘤胃內(nèi)乳酸菌、芽孢菌和酵 母菌可達(dá)10 7-108個(gè)/克，增加了有益菌的數(shù)量，抑制了有害微生物的繁殖，使腸內(nèi)菌群保持 正常，減緩羊由菌群失調(diào)而產(chǎn)生的腹瀉問(wèn)題，有效避免了抗生素的使用。
[0016] 3、本復(fù)合微生物產(chǎn)生的消化酶促進(jìn)了不易分解物質(zhì)的水解，有利于維生素和微量 元素等物質(zhì)的吸收，使?fàn)I養(yǎng)物質(zhì)的利用更加充分，促進(jìn)羊的快速生長(zhǎng)，同時(shí)避免了抗生素等 物質(zhì)的使用，使得羊肉等食品更加安全。
[0017] 4、本復(fù)合微生物通過(guò)刺激腸道內(nèi)的免疫細(xì)胞，同時(shí)產(chǎn)生抗菌物質(zhì)殺滅病害微生 物，增強(qiáng)機(jī)體免疫作用，羊的防病、抗病能力增強(qiáng)。

【具體實(shí)施方式】
[0018] 實(shí)施例1 一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在于，所述的添加劑中包括如下數(shù)量比 復(fù)合菌群：兩歧雙歧桿菌：釀酒酵母：凝結(jié)芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌：糞腸球菌=58 :26 :7 : 7 :1。所述微生物菌群添加劑還包括輔料，所述輔料包含：麩皮、淀粉、寡糖和淀粉。
[0019] 上述的微生物菌群添加劑的制備方法為：首先生產(chǎn)兩歧雙歧桿菌、釀酒酵母、凝結(jié) 芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和糞腸球菌發(fā)酵液，然后根據(jù)菌種密度按數(shù)量比換算成發(fā)酵液的 比例，并按換算后的比例將發(fā)酵液混合，并與輔料經(jīng)低溫干燥、粉碎過(guò)篩后制成固體。其中： 所述兩歧雙歧桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方法為：將目的菌株以2%的接種量加入到MRS液體培養(yǎng) 基中，37°C下厭氧培養(yǎng)48h，然后進(jìn)入發(fā)酵罐中進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵液的成分為：酵母浸出 粉1%、葡萄糖0. 8%、玉米糖漿1. 5%、磷酸二氫鉀0. 2% ;采用補(bǔ)料分批發(fā)酵，檢測(cè)菌液濃度，使 其數(shù)量級(jí)維持在億個(gè)/mL。所述啤酒酵母發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將菌株以2%的接種量加入到 YH)培養(yǎng)基中，32°C好氧培養(yǎng)48h，再以2%的接種量接種到麥芽汁培養(yǎng)基中，并輔以湯米酵 母粉；所述湯米酵母粉為酵母粉加入米湯中，使酵母粉的濃度為〇. 2%。所述凝結(jié)芽孢桿菌 發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種量加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為： 酵母膏5g/L，蛋白胨10g/L，氯化鈉10g/L，好氧培養(yǎng)24h，再以2%接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基 中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：葡萄糖10 g/L，蛋白胨5 g/L，玉米漿10g/L，MgS04*7H20 1 g/L， Κ2ΗΡ04·3Η20 0. 5 g/L，MnS04 0 . 05 g/L，采用補(bǔ)料分批發(fā)酵方式發(fā)酵3-7天。所述枯草芽孢 桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種量加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方 為葡萄糖5g/L，蛋白胨5g/L，酵母粉lg/L，牛肉膏3g/L，MgS0 4 0· 5g/L，MnS04 0· 05g/L，好氧 過(guò)夜培養(yǎng)，再以2%接種量接入到發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：玉米粉1. 0%，葡萄糖0. 5%， 豆餅粉 15%，魚粉 0· 5%，CaC03 0· 5%，（NH4)2S04 0 · 1%，K2HP04 0· 03%，MgS04 · 7H20 0· 02%， MnS04 0 . 02%，好氧發(fā)酵2 - 5天。所述糞腸球菌發(fā)酵液生產(chǎn)方式：將目的菌株以2%的接種 量接種至牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，然后以10%的接種量添加到TSB培養(yǎng)基中進(jìn)行厭氧發(fā)酵， TSB培養(yǎng)基配方為：胰蛋白胨1. 5%，大豆蛋白胨0. 5%，氯化鈉0. 5%，調(diào)節(jié)pH為7. 2,于25°C -30°C下培養(yǎng)3天。
[0020] 實(shí)施例2 實(shí)施例1所述的微生物菌群添加劑，其中復(fù)合菌群的活菌數(shù)量為2. 0X108 cfu/g。按 實(shí)施例1所述的方法制備成成品，并將成品以0. 2%的添加量投加到用于養(yǎng)羊的飼料中，飲 喂，對(duì)三個(gè)養(yǎng)羊場(chǎng)經(jīng)過(guò)1個(gè)月的考察，比較50只羊投加復(fù)合菌群后其瘤胃pH的變化，處理 前后其pH平均值由6. 13降到5. 78,對(duì)有害微生物起到了進(jìn)一步的抑制作用，取得了本發(fā)明 所述的有益效果。
[0021] 實(shí)施例3 實(shí)施例1所述的微生物菌群添加劑，其中復(fù)合菌群的活菌數(shù)量為1. 0 X 1〇9 Cfu/g。按 實(shí)施例1所述的方法制備成成品，并將成品以0. 3%的添加量投加到用于養(yǎng)羊的飼料中，拌 喂，在一個(gè)有約600頭羊的養(yǎng)羊場(chǎng)隨機(jī)各選取30頭羊，分別作為本實(shí)施例的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照 組，比較其半個(gè)月后的羊瘤胃內(nèi)的乳酸菌、酵母菌和芽孢菌、纖毛蟲(原蟲的主要類群）的數(shù) 量變化(表1)。由表1可知經(jīng)過(guò)半個(gè)月的考察，對(duì)照組羊瘤胃內(nèi)的乳酸菌、酵母菌和芽孢菌 幾乎無(wú)變化，原蟲數(shù)量有小幅增加；實(shí)驗(yàn)組羊瘤胃內(nèi)的乳酸菌、酵母菌和芽孢菌在半個(gè)月后 分別約為原來(lái)的5. 5倍和6. 5倍，纖毛蟲數(shù)量減少了 7%，體內(nèi)維持了較好的微生態(tài)環(huán)境，取 得了本發(fā)明所述的有益效果。
[0022] 表1 15天后羊瘤胃內(nèi)微生物數(shù)量變化(個(gè)/克）

【權(quán)利要求】
1. 一種用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在于，所述的添加劑中包括如下數(shù) 量比的復(fù)合菌群：兩歧雙歧桿菌：釀酒酵母：凝結(jié)芽孢桿菌：枯草芽孢桿菌：糞腸球菌= (56-58) : (24-27) :7:7:1，復(fù)合菌群的活菌數(shù)量為 2· 0Χ108-1· 0X109 cfu/g。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在于，所述微生物 菌群添加劑還包括輔料。
3. 根據(jù)權(quán)利要求2所述的用于羊飼料的微生物菌群添加劑，其特征在于，所述輔料包 含：麩皮、淀粉、寡糖和玉米粉。
4. 權(quán)利要求1-3任一項(xiàng)所述的用于羊飼料的微生物菌群添加劑的使用方法，其特征在 于，所述微生物菌群添加劑的投加量?jī)H為飼料總重量的0.2% - 0.6%，以拌喂、喂飲等方式 使用。
5. 權(quán)利要求2或3所述的微生物菌群添加劑的制備方法，其特征在于，首先生產(chǎn)兩歧雙 歧桿菌、釀酒酵母、凝結(jié)芽孢桿菌、枯草芽孢桿菌和糞腸球菌發(fā)酵液，然后根據(jù)菌種密度按 數(shù)量比換算成發(fā)酵液的比例，并按換算后的比例將發(fā)酵液混合，并與輔料經(jīng)低溫干燥、粉碎 過(guò)篩后制成固體。
6. 權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述兩歧雙歧桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方法為： 將目的菌株以2%的接種量加入到MRS液體培養(yǎng)基中，37°C下厭氧培養(yǎng)48h，然后進(jìn)入發(fā)酵罐 中進(jìn)行厭氧發(fā)酵，發(fā)酵培養(yǎng)基為：酵母浸出粉1%、葡萄糖〇. 8%、玉米糖漿1. 5%、磷酸二氫鉀 〇. 2% ;采用補(bǔ)料分批發(fā)酵，檢測(cè)菌液濃度，使其數(shù)量級(jí)維持在億個(gè)/mL。
7. 權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述啤酒酵母發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將菌株 以2%的接種量加入到Y(jié)H)培養(yǎng)基中，32°C好氧培養(yǎng)48h，再以2%的接種量接種到麥芽汁培 養(yǎng)基中，并輔以1%的湯米酵母粉；所述湯米酵母粉為酵母粉加入米湯中，使酵母粉的濃度 為 0· 2%。
8. 權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述凝結(jié)芽孢桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方式： 將目的菌株以2%的接種量加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為：酵母膏5g/L，蛋白胨 l〇g/L，氯化鈉10g/L，好氧培養(yǎng)24h，再以2%接種量接入到發(fā)酵培養(yǎng)基中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方 為：葡萄糖 10 g/L，蛋白胨 5 g/L，玉米漿 10g/L，MgS04 · 7H20 1 g/L，Κ2ΗΡ04 · 3H20 0· 5 g/ L，MnS04 0 . 05 g/L，采用補(bǔ)料分批發(fā)酵方式發(fā)酵3-7天。
9. 權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述枯草芽孢桿菌發(fā)酵液的生產(chǎn)方式：將 目的菌株以2%的接種量加入到種子培養(yǎng)基中，種子培養(yǎng)基配方為葡萄糖5g/L，蛋白胨5g/ L，酵母粉lg/L，牛肉膏3g/L，MgS04 0· 5g/L，MnS04 0· 05g/L，好氧過(guò)夜培養(yǎng)，再以2%接種 量接入到發(fā)酵罐中，發(fā)酵培養(yǎng)基配方為：玉米粉1. 〇%，葡萄糖0. 5%，豆餅粉15%，魚粉0. 5%， CaC03 0· 5%，（NH4) 2S04 0 · 1%，K2HP04 0· 03%，MgS04 · 7H20 0· 02%，MnS04 0· 02%，好氧發(fā)酵 2 -5天。
10. 權(quán)利要求5所述的制備方法，其特征在于，所述糞腸球菌發(fā)酵液生產(chǎn)方式：將目的 菌株以2%的接種量接種至牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基中，然后以10%的接種量添加到TSB培養(yǎng)基 中進(jìn)行厭氧發(fā)酵，TSB培養(yǎng)基配方為：胰蛋白胨1. 5%，大豆蛋白胨0. 5%，氯化鈉0. 5%，調(diào)節(jié) pH為7. 2,于25°C - 30°C下培養(yǎng)3天。
【文檔編號(hào)】C12N1/20GK104232547SQ201410491189
【公開(kāi)日】2014年12月24日 申請(qǐng)日期:2014年9月24日 優(yōu)先權(quán)日:2014年9月24日
【發(fā)明者】曾偉, 張文薈, 吳慶儒, 鄧文穎, 趙燕 申請(qǐng)人:南京國(guó)龍生物科技有限公司