一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，通過(guò)比較鯽魚(yú)線粒體NADH4基因中110-866位點(diǎn)序列信息與鯉魚(yú)線粒體基因序列的相似度，或是通過(guò)流式細(xì)胞術(shù)鑒定染色體倍性，或是二者結(jié)合，可快速、精確區(qū)分長(zhǎng)豐鯽與其他所有鯽魚(yú)種群。可以對(duì)于長(zhǎng)豐鯽魚(yú)品種種質(zhì)鑒定以及商業(yè)養(yǎng)殖中產(chǎn)生的糾紛提供準(zhǔn)確的鑒定依據(jù)。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明屬于鑒定魚(yú)類(lèi)物種的生物【技術(shù)領(lǐng)域】，具體涉及一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方 法。

【背景技術(shù)】
[0002] 銀鯽是我國(guó)水產(chǎn)養(yǎng)殖種的重要種類(lèi)，生產(chǎn)上應(yīng)用的有異育銀鯽、方正銀鯽、長(zhǎng)豐鯽 以及眾多的銀鯽地方種。銀鯽在生產(chǎn)中種類(lèi)較為混雜，各種養(yǎng)殖銀鯽形態(tài)學(xué)均符合國(guó)家銀 鯽標(biāo)準(zhǔn)（GB 16874-2006)，僅僅依靠形態(tài)學(xué)鑒別長(zhǎng)豐鯽同其他鯽魚(yú)是無(wú)效的。因此發(fā)明精確 鑒別長(zhǎng)豐鯽和各養(yǎng)殖種群的鑒別方法是必要的，可以較好的保護(hù)長(zhǎng)豐鯽種質(zhì)資源以及解決 農(nóng)業(yè)生產(chǎn)上的各種商業(yè)糾紛。
[0003] 長(zhǎng)豐鯽是中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所自1991年從普通銀鯽中開(kāi) 始進(jìn)行系統(tǒng)選育。長(zhǎng)豐鯽形態(tài)與銀鯽相同，主要形態(tài)構(gòu)造特征符合銀鯽國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)（GB 16874-2006)。長(zhǎng)豐鯽為通過(guò)人工選育的的新品種，具有明顯的生長(zhǎng)優(yōu)勢(shì)和抗病性，在生產(chǎn) 上應(yīng)用較為廣泛，目前已在市場(chǎng)上廣泛流通。
[0004] 本發(fā)明專(zhuān)利提供了精確聯(lián)合兩種方案對(duì)長(zhǎng)豐鯽進(jìn)行鑒別的技術(shù)方案。本方法利用 長(zhǎng)豐鯽獨(dú)特基因信息可以精確區(qū)分長(zhǎng)豐鯽和其他鯽魚(yú)。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供了一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，該方法簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確，可靠， 穩(wěn)定性強(qiáng)，解決了長(zhǎng)豐鯽和其他鯽魚(yú)無(wú)法精確區(qū)分的問(wèn)題。
[0006] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)措施：
[0007] -種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，為以下兩種方法之一或其結(jié)合：
[0008] 1)比較鯽魚(yú)線粒體NADH4基因中110-866位點(diǎn)序列信息與鯉魚(yú)線粒體基因序列的 相似度，相似度為99%或以上為長(zhǎng)豐鯽，否則不是。
[0009] 2)利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鯽魚(yú)倍性鑒別，4倍體為長(zhǎng)豐鯽，否則不是。
[0010] 以上所述的方法中，優(yōu)選的，方法1)具體為：利用引物F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ; R :CCCATGTGACTTACGGATGA對(duì)鯽魚(yú)的線粒體NADH4基因進(jìn)行擴(kuò)增，與SEQ ID NO. 1所示序列 進(jìn)行比對(duì)，序列相似度99%或以上則為長(zhǎng)豐鯽。
[0011] 以上所述的方法，一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，包括以下步驟：
[0012] 1)利用引物 F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ;R :CCCATGTGACTTACGGATGA 對(duì)鯽魚(yú)的線粒 體NADH4基因進(jìn)行擴(kuò)增，與SEQ ID NO. 1所示序列進(jìn)行比，序列相似度99%或以上則為長(zhǎng)豐 鯽，用于進(jìn)一步的步驟2)的確認(rèn)；
[0013] 2)進(jìn)一步利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鯽魚(yú)倍性鑒別，4倍體為長(zhǎng)豐鯽，否則不是。
[0014] 本發(fā)明提供的鑒別方法，方法可靠，利用基因信息鑒定穩(wěn)定性強(qiáng)，可做為法律依 據(jù)。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有以下優(yōu)點(diǎn)：
[0016] 本發(fā)明首次針對(duì)長(zhǎng)豐鯽養(yǎng)殖品種，發(fā)明了一種準(zhǔn)確對(duì)長(zhǎng)豐鯽和其他鯽魚(yú)的鑒定技 術(shù)，彌補(bǔ)了形態(tài)學(xué)鑒別的不足，為長(zhǎng)豐鯽品種保護(hù)與解決養(yǎng)殖種的商業(yè)糾紛提供了參考。
[0017] 目前生產(chǎn)上所有的養(yǎng)殖銀鯽均為2倍體或者3倍體。經(jīng)研究發(fā)現(xiàn)長(zhǎng)豐鯽為4倍體， 不同于目前生產(chǎn)上所有的養(yǎng)殖種，利用流式細(xì)胞術(shù)可以進(jìn)行初步鑒別。同時(shí)在我們對(duì)長(zhǎng)豐 鯽線粒體基因組測(cè)序后發(fā)現(xiàn)，長(zhǎng)豐鯽線粒體NADH4基因中110-866位點(diǎn)連續(xù)757個(gè)堿基序 列為鯉魚(yú)線粒體基因信息，而其他鯽魚(yú)在此位點(diǎn)均為鯽魚(yú)基因信息序列差異達(dá)到12%。該 位點(diǎn)的鯉魚(yú)基因組信息為長(zhǎng)豐鯽獨(dú)特的基因信息，利用該基因信息，可以精確區(qū)分長(zhǎng)豐鯽 與其他所有鯽魚(yú)種群?？梢詫?duì)于長(zhǎng)豐鯽魚(yú)品種種質(zhì)鑒定以及商業(yè)養(yǎng)殖中產(chǎn)生的糾紛提供準(zhǔn) 確的鑒定依據(jù)。
[0018] 本發(fā)明的方法，可準(zhǔn)確將長(zhǎng)豐鯽與市面上已有的異育銀鯽、方正銀鯽、滁州鯽以及 眾多的銀鯽地方種。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0019] 圖1為實(shí)施例2中雞血DNA血紅細(xì)胞相對(duì)含量示意圖。
[0020] 圖中所示峰值為200。
[0021] 圖2為實(shí)施例2中異育銀鯽血紅細(xì)胞DNA相對(duì)含量示意圖。
[0022] 圖中所示峰值為300。
[0023] 圖3為實(shí)施例2中長(zhǎng)豐鯽血紅細(xì)胞DNA相對(duì)含量示意圖。
[0024] 圖中所示峰值為400。

【具體實(shí)施方式】
[0025] 本發(fā)明所述技術(shù)方案，如未特別說(shuō)明，均為本領(lǐng)域的常規(guī)技術(shù)。本發(fā)明實(shí)施例1-3 利用了 50條長(zhǎng)豐鯽和50條異育銀鯽中科3號(hào)的混合群體，以測(cè)定本發(fā)明所述技術(shù)方案的 準(zhǔn)確性。實(shí)施例1 :
[0026] -種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，包括以下步驟：
[0027] 長(zhǎng)豐鯽線粒體NADH4基因鑒定：
[0028] (1)使用TIANGEN基因組DNA提取試劑盒提取長(zhǎng)豐鯽DNA，進(jìn)行PCR反應(yīng)：
[0029] 引物為：F:CCTCCTAATTGCCTCCATCA;R:CCCATGTGACTTACGGATGA。
[0030] PCR反應(yīng)體系
[0031]

【權(quán)利要求】
1. 一種精確鑒定長(zhǎng)豐鯽的方法，為以下兩種方法之一： 1) 比較鯽魚(yú)線粒體NADH4基因中110-866位點(diǎn)序列信息與鯉魚(yú)線粒體基因序列的相似 度，相似度為99%或以上為長(zhǎng)豐鯽，否則不是； 2) 利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鯽魚(yú)倍性鑒別，4倍體為長(zhǎng)豐鯽，否則不是。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，包括以下步驟： 1) 利用引物 F :CCTCCTAATTGCCTCCATCA ;R :CCCATGTGACTTACGGATGA 對(duì)鯽魚(yú)的線粒體 NADH4基因進(jìn)行擴(kuò)增，與SEQ ID NO. 1所示序列進(jìn)行比，序列相似度99%或以上則為長(zhǎng)豐鯽， 用于進(jìn)一步的步驟2)的確認(rèn)； 2) 進(jìn)一步利用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行鯽魚(yú)倍性鑒別，4倍體為長(zhǎng)豐鯽，否則不是。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK104450921SQ201410770622
【公開(kāi)日】2015年3月25日 申請(qǐng)日期:2014年12月12日 優(yōu)先權(quán)日:2014年12月12日
【發(fā)明者】李忠, 梁宏偉, 鄒桂偉, 羅相忠 申請(qǐng)人:中國(guó)水產(chǎn)科學(xué)研究院長(zhǎng)江水產(chǎn)研究所