病毒性腦炎相關(guān)rna病毒多重rt-pcr檢測試劑盒的制作方法
【專利摘要】本實(shí)用新型公開了一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒。上述檢測試劑盒包括盒蓋、盒體、襯墊、裝有RT-PCR緩沖液的容器、裝有引物的容器、裝有酶的容器、裝有電泳溶液的試劑瓶。其中,裝有引物的容器分別裝有擴(kuò)增腸道病毒5’-UTR基因的引物、擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因的引物、擴(kuò)增麻疹病毒M基因的引物、擴(kuò)增風(fēng)疹病毒E基因的引物、擴(kuò)增腮腺炎病毒M基因的引物。本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計(jì)合理,方便攜帶、保存,不易受污染,檢測靈敏度高,檢測步驟簡單、快捷。
【專利說明】病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型屬于生物【技術(shù)領(lǐng)域】,涉及病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒的檢測試劑盒,主 要針對5種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒:腸道病毒、乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺 炎病毒的同時(shí)檢測。
【背景技術(shù)】
[0002] 病毒性腦炎(viral encephalitis)是由多種病毒引起的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾 病,因一年四季均可發(fā)生,故又稱為散發(fā)性腦炎,其發(fā)病率約為(3. 5-7. 4)/10萬,近年來呈 逐年上升趨勢。病毒性腦炎多好發(fā)于兒童,該病往往缺乏特異性臨床表現(xiàn),病情嚴(yán)重者腦實(shí) 質(zhì)嚴(yán)重受損,可導(dǎo)致神經(jīng)系統(tǒng)后遺癥,甚至死亡。目前,尚無治療病毒性腦炎的特異性抗病 毒藥物。只能通過加強(qiáng)預(yù)防、改善護(hù)理、對癥治療及服用廣譜抗病毒和提高機(jī)體免疫力的藥 物。病毒性腦炎的早期診斷能有效減輕免疫引起的腦組織損傷,降低后遺癥發(fā)生率及死亡 率。
[0003] 傳統(tǒng)病毒性腦炎病原體檢測技術(shù)包括腦脊液病毒分離、ELISA、腦電圖和影像學(xué)檢 查等,上述檢測方法在臨床應(yīng)用中均存在一定局限性,如病毒分離較難、特異性抗體相對較 少、無法定性定位等缺陷。PCR因具有較高的敏感性和特異性,操作簡便、快速,已逐漸應(yīng)用 于多種病毒性疾病的臨床診斷。由于常規(guī)PCR技術(shù)一次只能擴(kuò)增一個(gè)模板,如果反應(yīng)體系 中含有兩種以上的病原物,則需進(jìn)行多次PCR,不但操作復(fù)雜,而且費(fèi)用高,耽誤時(shí)間。多重 PCR法使用多對引物,可在一個(gè)反應(yīng)中擴(kuò)增多種靶序列,其優(yōu)點(diǎn)是可以在一種樣品中同時(shí)鑒 別多種病毒,并將PCR的敏感性和快速性結(jié)合起來,避免了逐一擴(kuò)增待測樣品中每種病原 的麻煩,可提高診斷的敏感性,同時(shí)降低檢測費(fèi)用。
[0004] 本實(shí)用新型旨在建立檢測腸道病毒、乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺炎 病毒的多重RT-PCR檢測方法,據(jù)此開發(fā)同時(shí)檢測上述5種病毒的檢測試劑盒,為病毒性腦 炎的早期診斷及流行病學(xué)調(diào)查奠定基礎(chǔ)。
【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] 本實(shí)用新型的目的在于提供一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑 盒,該試劑盒可同時(shí)檢測腸道病毒、乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺炎病毒存在 與否,該檢測試劑盒能夠克服現(xiàn)有技術(shù)中存在的缺陷,具有較高的敏感性和特異性,操作簡 便、快速,為病毒性腦炎的早期診斷及流行病學(xué)調(diào)查奠定基礎(chǔ)。
[0006] 為實(shí)現(xiàn)上述目的,本實(shí)用新型采用如下技術(shù)方案:一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒 多重RT-PCR檢測試劑盒包括盒蓋1、盒體2、襯墊3、擋板4、裝有5XRT-PCR緩沖液的容器 5、裝有AMV反轉(zhuǎn)錄酶的容器6、裝有DNA聚合酶的容器7、裝有擴(kuò)增腸道病毒5'-UTR基因的 上游引物的容器8和下游引物的容器9、裝有擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因的上游引物的容器 10和下游引物的容器11、裝有擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的上游引物的容器12和下游引物的容 器13、裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的上游引物的容器14和下游引物的容器15、裝有擴(kuò)增腮腺 炎病毒Μ基因的上游引物的容器16和下游引物的容器17、裝有RNasin的容器18、裝有去 離子水的容器19、裝有dNTP的容器20、裝有氯化鎂的容器21、裝有電泳分離溶液母液的試 劑瓶22、裝有SYBR染料的容器23 ;所述襯墊3放置于盒體2內(nèi),且在襯墊3上設(shè)有容器孔 31和凹槽32,容器孔31的大小與各容器的大小相匹配、凹槽32的大小與試劑瓶22的大小 相匹配;擋板4位于兩個(gè)襯墊3的中間并固定于盒體2上,擋板4 一側(cè)只設(shè)有容器孔31,擋 板4的另一側(cè)設(shè)有凹槽32和一個(gè)容器孔31 ;裝有電泳分離溶液50 X母液的試劑瓶22和 裝有SYBR染料的容器23放置于擋板4的一側(cè),其他容器放置于擋板4的另一側(cè)。
[0007] 優(yōu)選地,裝有5父1^〇?緩沖液的容器5中含有溶液100-25(^1;裝有41^反轉(zhuǎn)錄 酶的容器6中含有濃度為5U/ μ 1的酶液10-25 μ 1 ;裝有DNA聚合酶的容器7中含有濃度為 5U/μ 1的酶液10-25 μ 1 ;裝有擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的上游引物的容器8和下游引物 的容器9、裝有擴(kuò)增乙型腦炎病毒Ε基因的上游引物的容器10和下游引物的容器11、裝有 擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的上游引物的容器12和下游引物的容器13、裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因 的上游引物的容器14和下游引物的容器15、裝有擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因的上游引物的容器 16和下游引物的容器17中各含有濃度為10 μ mol/L的引物10-25 μ 1 ;裝有RNasin的容器 18中含有液體10-25 μ 1 ;裝有去離子水的容器19中含有去離子水lml、裝有dNTP的容器 20中含有dNTP30-75 μ 1 ;裝有氯化鎂的容器21中含有濃度為2mmol/L的氯化鎂20-50 μ 1 ; 裝有電泳分離溶液50 X母液的試劑瓶22中的溶液體積為50ml ;裝有SYBR染料的容器23 中染料的體積為100-250 μ 1。
[0008] 優(yōu)選地,所述容器是1. 5ml的ΕΡ管。
[0009] 優(yōu)選地,所述容器孔31是貫穿襯墊3的。更優(yōu)選地,所述容器孔31是上端開口、 下端封閉的。
[0010] 優(yōu)選地,所述容器孔31在襯墊上平行排列。
[0011] 優(yōu)選地,擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的引物序列為:
[0012] 上游引物:GGTGCGAAGAGTCTATTGAGC ;
[0013] 下游引物:GGAAACACGGACACCCAAAGT ;
[0014] 擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因引物序列為:
[0015] 上游引物:CAAGCACGGCATGGAGAAACA ;
[0016] 下游引物:CCAGCACCTTTGAGTTGGAGC ;
[0017] 擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的引物序列為:
[0018] 上游引物:ACAGGGAGTGTCTTCAACGCA ;
[0019] 下游引物:ATCCGAAAGACGGGTGATGCT ;
[0020] 擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的引物序列為:
[0021] 上游引物:GCGTCCTATTTCAATCCCGGC ;
[0022] 下游引物:ACTGTTGGTTGCCGGTGTAGT ;
[0023] 擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因引物序列為:
[0024] 上游引物:CAAGAAGGCAAAGGGCGACTC ;
[0025] 下游引物:TTGCTGTCTTCCGAACCCTGA。
[0026] DNA聚合酶可以選用Taq DNA聚合酶,所述Taq DNA聚合酶的生產(chǎn)廠商較佳地為: TAKARA, New England biolabs, Invitrogen 或 Promega。
[0027] 所述5 X RT-PCR緩沖液為本領(lǐng)域常規(guī)的5 X RT-PCR緩沖液。所述5 X RT-PCR緩沖 液的生產(chǎn)廠商較佳地為:Invitrogen或Promega。
[0028] 本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)和有益效果:
[0029] (1)本實(shí)用新型可以在一種樣品中冋時(shí)鑒別五種病毒,并將PCR的敏感性和快速 性結(jié)合起來,避免了逐一擴(kuò)增待測樣品中每種病原的麻煩,可提高診斷的敏感性,同時(shí)降低 檢測費(fèi)用。
[0030] (2)本實(shí)用新型結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計(jì)合理、方便攜帶、保存、不易受污染、檢測靈敏度高、 檢測步驟簡單、快捷。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0031] 圖1為本實(shí)用新型的構(gòu)造圖;
[0032] 其中:1.盒蓋;2.盒體;3.襯墊;31.容器孔;32.凹槽;4.擋板;5.裝有 5 X RT-PCR緩沖液的容器;6.裝有AMV反轉(zhuǎn)錄酶的容器;7.裝有DNA聚合酶的容器;8.裝 有擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的上游引物的容器;9.裝有擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的下 游引物的容器;10.裝有擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因的上游引物的容器;11.裝有擴(kuò)增乙型腦 炎病毒E基因的下游引物的容器;12.裝有擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的上游引物的容器;13.裝 有擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的下游引物的容器;14.裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的上游引物的容 器;15.裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的下游引物的容器;16.裝有擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因的上 游引物的容器;17.裝有擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因的下游引物的容器;18.裝有RNasin的容 器;19.裝有去離子水的容器;20.裝有dNTP的容器;21.裝有氯化鎂的容器;22.裝有電泳 分離溶液母液的試劑瓶;23.裝有SYBR染料的容器。
[0033] 具體的實(shí)施方式
[0034] 下面結(jié)合實(shí)施例對本實(shí)用新型的【具體實(shí)施方式】作進(jìn)一步描述,本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn) 和特點(diǎn)將會隨著描述而更為清楚。但這些實(shí)施例僅是范例性的,并不對本實(shí)用新型的范圍 構(gòu)成任何限制。
[0035] 實(shí)施例1病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒
[0036] 一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒,包括裝有5 X RT-PCR緩沖 液的容器5,其中含有溶液100 μ 1 ;裝有AMV反轉(zhuǎn)錄酶的容器6,其中含有濃度為5U/ μ 1的 酶液10 μ 1 ;裝有DNA聚合酶的容器7,其中含有濃度為5U/ μ 1的酶液10 μ 1 ;裝有擴(kuò)增腸 道病毒5'-UTR基因的上游引物的容器8和下游引物的容器9、裝有擴(kuò)增乙型腦炎病毒Ε基 因的上游引物的容器10和下游引物的容器11、裝有擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的上游引物的容 器12和下游引物的容器13、裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的上游引物的容器14和下游引物的 容器15、裝有擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因的上游引物的容器16和下游引物的容器17,其中引物 濃度均為10 μ mol/L、每個(gè)容器中引物溶液體積為10 μ 1 ;裝有RNasin的容器18,其中含有 液體10 μ 1 ;裝有去離子水的容器19,其中含有去離子水lml ;裝有dNTP的容器20,其中含 有(1ΝΤΡ30μ 1、裝有氯化鎂的容器21,其中含有氯化鎂20μ 1、濃度為2mmol/L ;裝有電泳分 離溶液50 X母液的試劑瓶22,其中溶液體積為50ml ;裝有SYBR染料的容器23,其中染料 的體積為100 μ 1 ;所述襯墊3放置于盒體內(nèi),且在襯墊3上設(shè)有容器孔31和凹槽32,容器 孔31的大小與各容器的大小相匹配、凹槽32的大小與試劑瓶22的大小相匹配;擋板4位 于兩個(gè)襯墊3的中間并固定于盒體2上,擋板4 一側(cè)只設(shè)有容器孔31,擋板4的另一側(cè)設(shè)有 凹槽32和一個(gè)容器孔31 ;裝有電泳分離溶液母液的試劑瓶22和裝有SYBR染料的容器23 放置于擋板4的一側(cè),其他容器放置于擋板4的另一側(cè)。
[0037] 實(shí)施例2病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒
[0038] 一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒,包括裝有5 X RT-PCR緩沖 液的容器5,其中含有溶液250 μ 1 ;裝有AMV反轉(zhuǎn)錄酶的容器6,其中含有濃度為5U/ μ 1的 酶液25 μ 1 ;裝有擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的上游引物的容器8和下游引物的容器9、裝 有擴(kuò)增乙型腦炎病毒Ε基因的上游引物的容器10和下游引物的容器11、裝有擴(kuò)增麻疹病 毒Μ基因的上游引物的容器12和下游引物的容器13、裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的上游引 物的容器14和下游引物的容器15、裝有擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因的上游引物的容器16和下 游引物的容器17,其中引物濃度均為10 μ mol/L、每個(gè)容器中引物溶液體積為25 μ 1 ;裝有 RNasin的容器18,其中含有液體25 μ 1 ;裝有去離子水的容器19,其中含有去離子水lml ; 裝有dNTP的容器20,其中含有dNTP75 μ 1、裝有氯化鎂的容器21,其中含有氯化鎂50 μ 1、 濃度為2mmol/L ;裝有電泳分離溶液50Χ母液的試劑瓶22,其中溶液體積為50ml ;裝有 SYBR染料的容器23,其中染料的體積為250 μ 1 ;所述襯墊3放置于盒體內(nèi),且在襯墊3上 設(shè)有容器孔31和凹槽32,容器孔31的大小與各容器的大小相匹配、凹槽32的大小與試劑 瓶22的大小相匹配;擋板4位于兩個(gè)襯墊3的中間并固定于盒體2上,擋板4 一側(cè)只設(shè)有 容器孔31,擋板4的另一側(cè)設(shè)有凹槽32和一個(gè)容器孔31 ;裝有電泳分離溶液母液的試劑瓶 22和裝有SYBR染料的容器23放置于擋板4的一側(cè),其他容器放置于擋板4的另一側(cè)。
[0039] 實(shí)施例3病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重PCR檢測
[0040] 一、檢測方法:
[0041] 使用實(shí)施例1或?qū)嵤├?中的病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒 檢測病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒的方法如下所示 :
[0042] 1.使用RNeasy mini kit提取腸道病毒、乙型腦炎病毒、麻疫病毒、風(fēng)疫病毒和腿 腺炎病毒的RNA,操作按照說明書進(jìn)行。
[0043] 2. RT-PCR :
[0044] 2. 1反應(yīng)體系:
[0045] 試劑 體積 5XRT-PCR 緩沖液 10 μ? dNTP 3 μ? 五種病毒的上下游引物 各Ιμ? 氯化鎂 2μ1 AMV反轉(zhuǎn)錄酶 Ιμ? DNA聚合酶 Ιμ? RNasin 1 μ? RNA 模板 10 μ? 補(bǔ)充去離子水至50 μ?
[0046] 其中,擴(kuò)增腸道病毒5' -UTR基因的引物序列為:
[0047] 上游引物:GGTGCGAAGAGTCTATTGAGC ;
[0048] 下游引物:GGAAACACGGACACCCAAAGT ;
[0049] 擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因引物序列為:
[0050] 上游引物:CAAGCACGGCATGGAGAAACA ;
[0051] 下游引物:CCAGCACCTTTGAGTTGGAGC ;
[0052] 擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的引物序列為:
[0053] 上游引物:ACAGGGAGTGTCTTCAACGCA ;
[0054] 下游引物:ATCCGAAAGACGGGTGATGCT ;
[0055] 擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的引物序列為:
[0056] 上游引物:GCGTCCTATTTCAATCCCGGC ;
[0057] 下游引物:ACTGTTGGTTGCCGGTGTAGT ;
[0058] 擴(kuò)增腮腺炎病毒Μ基因引物序列為:
[0059] 上游引物:CAAGAAGGCAAAGGGCGACTC ;
[0060] 下游引物:TTGCTGTCTTCCGAACCCTGA。
[0061] 2.2反應(yīng)條件:
[0062] 42°C反轉(zhuǎn)錄 40min ;94°C預(yù)變性 4min ;94°C變性 30s、57°C退火 30s、72°C延伸 45s, 共30個(gè)循環(huán);72°C再延伸7min。
[0063] 3.瓊脂糖凝膠電泳
[0064] 用TAE電泳緩沖液制備1 %瓊脂糖凝膠,在室溫下進(jìn)行水平電泳。加10 μ 1PCR擴(kuò) 增產(chǎn)物,以不加 RNA模板的反應(yīng)液為陰性對照,以DLlOOOMarker為標(biāo)準(zhǔn)分子量;100V/80mA 下電泳30min,用SYBR染色,用凝膠成像系統(tǒng)觀察并拍照。腸道病毒擴(kuò)增產(chǎn)物為一條152bp 的條帶、乙型腦炎病毒產(chǎn)物為一條429bp的條帶、麻疹病毒產(chǎn)物為一條lllbp的條帶、風(fēng)疹 病毒產(chǎn)物為一條352bp的條帶、腿腺炎病毒產(chǎn)物方一條274bp的條帶。
[0065] 二、檢測方法的敏感性驗(yàn)證
[0066] 分別提取腸道病毒、乙型腦炎病毒、麻疫病毒、風(fēng)疫病毒和腿腺炎病毒的RNA,并 進(jìn)行2倍倍比稀釋,其中腸道病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺炎病毒的稀釋度均分別為 1000、500、250、125、62· 5、31· 2、15· 6、7. 8CCID5(l/ml ;乙型腦炎病毒的稀釋度為 1000、500、 250、125、62. 5、31. 2、15. 6、7. 8PFU/ml。每個(gè)稀釋度分別取4μ 1作為模板,按上述檢測方法 進(jìn)行RT-PCR反應(yīng)。同時(shí),同一分析人員重復(fù)操作3次,驗(yàn)證該方法的敏感性。
[0067] 結(jié)果:3次重復(fù)PCR擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)1%瓊脂糖凝膠電泳分析,腸道病毒、乙型腦炎病 毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒和腮腺炎病毒在病毒稀釋度分別為62. 5CCID5(l/ml、250 PFU/ml、125 CCID5Q/ml、125 CCID5Q/ml、125 CCID5Q/ml仍可分別擴(kuò)增出特異性基因條帶。
[0068] 綜上所述,本實(shí)用新型的實(shí)施方式僅提供最佳的實(shí)施方式,本實(shí)用新型的技術(shù)內(nèi) 容及技術(shù)特點(diǎn)已揭示如上,然而熟悉本項(xiàng)技術(shù)的人士仍可能基于本實(shí)用新型所揭示的內(nèi)容 而作各種不背離本發(fā)明創(chuàng)作精神的替換及修飾;因此,本實(shí)用新型的保護(hù)范圍不限于實(shí)施 例所揭示的技術(shù)內(nèi)容,故凡依本實(shí)用新型的形狀、構(gòu)造及原理所做的等效變化,均涵蓋在本 實(shí)用新型的保護(hù)范圍內(nèi)。
【權(quán)利要求】
1. 一種病毒性腦炎相關(guān)RNA病毒多重RT-PCR檢測試劑盒,其特征在于,所述檢測試劑 盒包括盒蓋(1)、盒體(2)、襯墊(3)、擋板(4)、裝有5XRT-PCR緩沖液的容器(5)、裝有AMV 反轉(zhuǎn)錄酶的容器(6)、裝有DNA聚合酶的容器(7)、裝有擴(kuò)增腸道病毒5'-UTR基因的上游引 物的容器(8)和下游引物的容器(9)、裝有擴(kuò)增乙型腦炎病毒E基因的上游引物的容器(10) 和下游引物的容器(11)、裝有擴(kuò)增麻疹病毒Μ基因的上游引物的容器(12)和下游引物的容 器(13 )、裝有擴(kuò)增風(fēng)疹病毒Ε基因的上游引物的容器(14 )和下游引物的容器(15 )、裝有擴(kuò) 增腮腺炎病毒Μ基因的上游引物的容器(16 )和下游引物的容器(17 )、裝有RNasin的容器 (18)、裝有去離子水的容器(19)、裝有dNTP的容器(20)、裝有氯化鎂的容器(21)、裝有電泳 分離溶液母液的試劑瓶(22)、裝有SYBR染料的容器(23);所述襯墊(3)放置于所述盒體(2) 內(nèi),所述襯墊(3)上設(shè)有容器孔(31)和凹槽(32);所述擋板(4)位于兩個(gè)所述襯墊(3)的 中間并固定于所述盒體(2)上,所述擋板(4) 一側(cè)只設(shè)有所述容器孔(31),所述擋板(4)的 另一側(cè)設(shè)有所述凹槽(32)和一個(gè)所述容器孔(31);所述容器孔(31)的大小與各容器的大 小相匹配;所述凹槽(32)的大小與所述試劑瓶(22)的大小相匹配;所述裝有電泳分離溶液 50X母液的試劑瓶(22)和所述裝有SYBR染料的容器(23)放置于所述擋板(4)的一側(cè),其 他容器放置于所述擋板(4)的另一側(cè)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒,其特征在于,所述容器孔(31)貫穿所述襯墊 (3)。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒,其特征在于,所述容器孔(31)上端開口,下端封 閉。
4. 根據(jù)權(quán)利要求根據(jù)權(quán)利要求1所述的檢測試劑盒,其特征在于,所述容器孔(31)平 行排列于所述襯墊(3)上。
【文檔編號】C12Q1/70GK204058465SQ201420374867
【公開日】2014年12月31日 申請日期:2014年7月4日 優(yōu)先權(quán)日:2014年7月4日
【發(fā)明者】孔祥軍 申請人:滄州市中心醫(yī)院