一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的制作方法
【專利摘要】一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和位于盒體上方的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有NOSLAP-R引物試劑管、NOSLAP-C引物試劑管、NOSLAP-F1引物試劑管、NOSLAP-F2引物試劑管、NOSLAP-Taqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；所述容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部，所述連接部朝向盒體的側(cè)壁設(shè)有金屬部件，相應(yīng)的，所述盒體的側(cè)壁對(duì)應(yīng)金屬部件處設(shè)有磁性部件。本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、密封性強(qiáng)。
【專利說(shuō)明】-種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及一種檢測(cè)試劑盒，尤其涉及一種N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢 測(cè)試劑盒。

【背景技術(shù)】
[0002] 巧死是指自然發(fā)生、出乎意料的突然死亡，也叫急死，即看來(lái)貌似健康的人或病情 經(jīng)治療后已穩(wěn)定或正在好轉(zhuǎn)的患者，在很短時(shí)間發(fā)生意想不到的非創(chuàng)傷性死亡。中國(guó)也臟 性巧死年齡分布為18-80歲（均值43. 8歲），其中18-39歲的青年和40-59歲的中年巧死 比較常見（43%和39%)，而60-80歲老年巧死較少見（17. 9%)。男女比例為4.3 : 1。有 數(shù)據(jù)顯示，我國(guó)每年死于也臟性巧死的人數(shù)多達(dá)55萬(wàn)。也就是說(shuō)，每天至少有1000多人巧 死。而根據(jù)媒體報(bào)道，1998年北京室120轉(zhuǎn)運(yùn)救治的中青年巧死者80多名，但到了 2011年 該一數(shù)字上升為270多名（鞏江等，2013)。
[0003] 巧死的原因很多，臨床上W也血管疾病所引起的巧死最為常見而重要，稱為也臟 性巧死。其中冠也病、急性也肌梗死患者最為多見。急性也肌梗死可W迅速出現(xiàn)休克、昏迷， W致巧死（潘俊宏，2013)。
[0004] 基因的缺陷是也臟性巧死最重要的原因。通過(guò)對(duì)15842名研究對(duì)象采取也電圖檢 查W及基因組關(guān)聯(lián)分析后發(fā)現(xiàn)，Noslap基因的突變可W改變也臟肌肉的收縮時(shí)間即QT間 期，進(jìn)而導(dǎo)致巧死危險(xiǎn)上升（Arking et al.2006)。
[0005] Noslap位于第一號(hào)染色體的q23. 3,編碼一個(gè)一氧化氮合成酶連接蛋白，連接一 氧化氮合成酶及其底物化ao et al. 2009)。近年來(lái)，有研究陸續(xù)報(bào)道此基因的變異體會(huì)影 響 QT 間期（Post et al.2007，Lehtinen et al.2008，Eijgelsheim et al.2009),會(huì)造成巧 死率提高（Raitakari et al.2009)。對(duì)于我們中國(guó)人來(lái)說(shuō)，基因型為Noslap rsl0918859G/ A+AA型的人罹患巧死的風(fēng)險(xiǎn)遠(yuǎn)大于rsl0918859GG型的人（Huang et al. 2013)，因 此，Noslap rsl0918859位置不同的基因型是預(yù)測(cè)巧死風(fēng)險(xiǎn)的極好標(biāo)志物，檢測(cè)Noslap rsl0918859基因型對(duì)于提前預(yù)防巧死，提高疾病防護(hù)風(fēng)險(xiǎn)具有重要的意義。
[0006] 可用于Noslap rsl0918859分型的技術(shù)很多，包括如DNA直接測(cè)序法、雜交芯片 法、焦磯酸測(cè)序法W及變性高效液相色譜法等。其中，DNA測(cè)序法為基因分型的金標(biāo)準(zhǔn)，該方 法存在如下缺點(diǎn)；檢測(cè)的靈敏度不高，只有大于15%的突變才能檢測(cè)到；費(fèi)時(shí)，操作復(fù)雜， 對(duì)操作人員要求高；非閉管操作，涉及PCR擴(kuò)增后的操作，因此易被污染，造成結(jié)果的不理 想；通量太小，一次最多只能做24個(gè)，很難大規(guī)模開展。 實(shí)用新型內(nèi)容
[0007] 本實(shí)用新型所要解決的技術(shù)問(wèn)題是針對(duì)技術(shù)現(xiàn)狀提供一種密封性良好的N0SLAP 基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒。
[0008] 本實(shí)用新型解決上述技術(shù)問(wèn)題所采用的技術(shù)方案為；一種N0SLAP基因分型的 ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體和位于盒體上方的盒蓋，所述盒體具有容置腔，還包括 固定座和海綿墊，所述固定座容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置 槽，6個(gè)所述容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有NOSLAP-R引物試劑管、NOSLAP-C引物試劑管、 N0SLAP-F1引物試劑管、NOSLAP-巧引物試劑管、NOSLAP-I'aqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管；所述 容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶；6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽的槽 腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊；
[0009] 所述盒蓋的一側(cè)與盒體的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部，所述連 接部朝向盒體的側(cè)壁設(shè)有金屬部件，相應(yīng)的，所述盒體的側(cè)壁對(duì)應(yīng)金屬部件處設(shè)有磁性部 件。
[0010] 作為改進(jìn)，N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒還包括備用容置槽，所述備 用容置槽的槽腔內(nèi)容置有裝有PCR緩沖液備用試劑瓶，所述備用容置槽的槽腔底部鋪設(shè)有 海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座上。
[0011] 優(yōu)選的，6個(gè)所述容置孔在固定座上分兩排平行排列。
[0012] 優(yōu)選的，6個(gè)所述容置孔分別為能容納1. 5m化P管的孔洞，相應(yīng)的，所述N0SLAP-R 引物試劑管、N0SLAP-C引物試劑管、N0SLAP-F1引物試劑管、N0SLAP-F2引物試劑管、 NOSLAP-I'aqman管和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管分別采用1. 5m化P管。
[0013] 優(yōu)選的，所述金屬部件為鐵片，所述磁性部件為磁鐵塊。
[0014] 作為改進(jìn)，所述磁性部件外凸地設(shè)置在盒蓋的側(cè)壁，所述連接部設(shè)置金屬部件處 開設(shè)有凹槽，所述金屬部件設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件與磁性部件吸附在一起 的狀態(tài)下，所述磁性部件完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
[0015] 與現(xiàn)有技術(shù)相比，本實(shí)用新型的優(yōu)點(diǎn)在于；本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒在盒蓋和盒 體的連接處設(shè)置了磁性鎖合機(jī)構(gòu)（即金屬部件和磁性部件），可W保證在盒蓋與盒體閉合 時(shí)，保持密封狀態(tài)，方便移動(dòng)和運(yùn)輸；另外，本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒在N0SLAP rsl0918859 位基因分型時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)；此外，容置孔的孔槽與容置槽的槽 腔底部都鋪設(shè)有海綿墊，可W避免試劑管與試劑瓶的底部磕碰破損，保證了各個(gè)容器的安 全。
[0016] 本ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒適用于N0SLAP基因分型，其結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方 便、容易制造，且檢測(cè)過(guò)程不易受污染其即保證了試劑盒密封性、安全性，又方便運(yùn)輸，可W 在給N0SLAP基因分型時(shí)方便實(shí)驗(yàn)人員操作，提高了工作效率。

【專利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0017] 圖1為本實(shí)用新型實(shí)施例ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒的結(jié)構(gòu)示意圖。

【具體實(shí)施方式】
[0018] W下結(jié)合附圖實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型作進(jìn)一步詳細(xì)描述。
[0019] 本實(shí)施例的N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，如圖1所示，包括盒體1 和位于盒體1上方的盒蓋2,盒體1為上端開口的中空的立方體盒體1，其具有容置腔。盒 蓋2的一側(cè)邊與盒體1的開口端的一側(cè)壁的頂端轉(zhuǎn)動(dòng)連接，例如較接或者通過(guò)一層膜連接， 而盒蓋2的相對(duì)的一側(cè)通過(guò)磁性鎖合機(jī)構(gòu)與盒體1連接。盒體1與盒蓋2的具體連接方式 為；盒蓋2的一側(cè)與盒體1的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部11，連接部11朝 向盒體1的側(cè)壁設(shè)有金屬部件12--鐵片，相應(yīng)的，盒體1的側(cè)壁對(duì)應(yīng)金屬部件12處設(shè)有 磁性部件13-磁鐵塊。磁鐵塊的位置應(yīng)使盒蓋2蓋合在盒體1上，且盒蓋2的連接部11 貼合在盒體1的側(cè)壁上，該磁鐵塊正好與連接部11上的鐵片相對(duì)應(yīng)并吸合。
[0020] 本實(shí)施例的盒蓋2與盒體1的連接方式可W保證在盒蓋2與盒體1閉合時(shí)，保持 密封狀態(tài)，W方便移動(dòng)和運(yùn)輸。
[0021] 為了進(jìn)一步增強(qiáng)本試劑盒的密封性，磁性部件13外凸地設(shè)置在盒蓋2的側(cè)壁，同 時(shí)，連接部11上設(shè)置金屬部件12的內(nèi)壁處開設(shè)有凹槽，而金屬部件12固定在該凹槽的槽 底，當(dāng)金屬部件12與磁性部件13吸附在一起時(shí)，磁性部件13完全容置在該凹槽的容置空 間內(nèi)。此時(shí)，因磁性部件13完成容置在了凹槽內(nèi)，使得盒蓋2和盒體1蓋合時(shí)，盒蓋2與盒 體1間無(wú)縫隙，增強(qiáng)了密封性。
[0022] 本實(shí)施例的N0SLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒還包括固定座14和海綿 墊，固定座14容置在盒體1容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔、1個(gè)容置槽和1個(gè)備用容 置槽，6個(gè)容置孔的孔腔內(nèi)分別容置有N0SLAP-R引物試劑管4、N0SLAP-C引物試劑管3、 N0SLAP-F1引物試劑管5、N0SLAP-巧引物試劑管e.NOSLAP-I'aqman管8和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管 7 ;容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶10,備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備 用試劑瓶9。
[0023] 為了防止在運(yùn)輸過(guò)程中，試劑管、試劑瓶與盒體1或固定座14碰撞而破損，6個(gè) 容置孔的孔腔的底部、容置槽的槽腔的底部W及備用容置槽的槽腔的底部分別鋪設(shè)有海綿 墊。在本實(shí)施例中，容置孔、容置槽和備用容置槽都是具有底部的空腔式結(jié)構(gòu)，每個(gè)孔腔、槽 腔底部分別鋪設(shè)有海綿墊，該樣可W防止發(fā)生碰撞，對(duì)試劑管、試劑瓶能起到更好的保護(hù)和 緩沖作用，W保證各個(gè)容器的安全。
[0024] 當(dāng)然，容置孔、容置槽和備用容置槽可W設(shè)計(jì)成沒(méi)底的穿孔式結(jié)構(gòu)，此時(shí)海綿墊可 W為一整塊，其具體鋪設(shè)在盒體1內(nèi)固定座14下方的容置腔內(nèi)。
[00巧]為了使得本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒結(jié)構(gòu)更加整齊，6個(gè)容置孔在固定座 14上分兩排平行排列，而備用容置槽與容置槽并列排布在固定座14上并位于容置孔的右 側(cè)，其中容置槽位于上方。位于上排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分別放置N0SLAP-C引物試劑 管3、N0SLAP-F2引物試劑管6和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7,位于下排的3個(gè)容置孔內(nèi)從左至右分 別放置N0SLAP-R引物試劑管4、N0SLAP-F1引物試劑管5和N0SLAP-化qman管8。該種排 布格局是根據(jù)使用本檢測(cè)試劑盒來(lái)進(jìn)行N0SLAP基因分型時(shí)的操作步驟來(lái)設(shè)計(jì)的，可W使 得檢測(cè)時(shí)，操作人員能有條理、有規(guī)律地選擇相應(yīng)的試劑。
[002引 6個(gè)容置孔分別為能容納1. 5m化P管（即離也管）的孔洞，相應(yīng)的，N0SLAP-R引 物試劑管4、N0SLAP-C引物試劑管3、N0SLAP-F1引物試劑管5、N0SLAP-巧引物試劑管6、 N0SLAP-化qman管8和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7分別采用1. 5m化P管。
[0027] 6個(gè)容置孔中放置的EP管中分別裝有濃度為10 ymol/L的如下引物：
[0028] N0SLAP-R ;5, -AAACAGGAAGTGTGGCCAGA-3,
[0029] N0SLAP-C ;5' -CCTATGGAGACAACAGCCGG-3'
[0030] N0SLAP-F1 ;5' -GTGGTGTCACAGGAAGAGGCT-3'
[0031] N0SLAP-F2 ;5, -GTGGTGTCACAGGAAGAGGCC-3'
[0032] 另外，PCR緩沖液試劑瓶10、PCR緩沖液備用試劑瓶9中盛裝的PCR反應(yīng)緩沖 酶液混合物包括濃度為 0. 4mmol/L 的 dNTPs，5mmol/L 的 Mg", 2xPCR Buffer, lU/25 y L Goldstar Best "TagaNOSLAP-Taqinan管8 中裝有通用"Tagman探針，序列為；NOSLAP-Taqman: 5' -FAM-CTCTCTTCAAATAAACAGCC-3'，陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管7中裝有陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒。
[0033] 使用本實(shí)施例的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒進(jìn)行N0SLAP基因分型的操作方法如下：
[0034] 1)取模板 DNA
[00巧]取病人全血1血，常規(guī)提取DNA，取1 y LDNA作為模板。
[0036] 2)反應(yīng)體系
[0037] 將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下反應(yīng)體系進(jìn)行配比；
[003引反應(yīng)體系為20y 1，包括qPCR混合液lOy 1，參照引物或者ARMS引物各0. 5y 1(終 濃度0. 5 y M/L)，模板1 y 1 (lOOng)，其余用d地20補(bǔ)齊。
[0039]

【權(quán)利要求】
1. 一種NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，包括盒體（1)和位于盒體（1)上方 的盒蓋（2)，所述盒體（1)具有容置腔，其特征在于：還包括固定座（14)和海綿墊，所述固 定座（14)容置在上述容置腔內(nèi)并縱向開設(shè)有6個(gè)容置孔和1個(gè)容置槽，6個(gè)所述容置孔的 孔腔內(nèi)分別容置有N0SLAP-R引物試劑管（4)、N0SLAP-C引物試劑管（3)、N0SLAP-F1引物試 劑管（5)、N0SLAP-F2引物試劑管（6)、N0SLAP-Taqman管⑶和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管（7);所述 容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液試劑瓶（10) ;6個(gè)所述容置孔的孔腔的底部、所述容置槽 的槽腔的底部分別鋪設(shè)有所述的海綿墊； 所述盒蓋（2)的一側(cè)與盒體（1)的開口處轉(zhuǎn)動(dòng)連接，另一側(cè)向下彎折形成連接部（11)， 所述連接部（11)朝向盒體（1)的側(cè)壁設(shè)有金屬部件（12)，相應(yīng)的，所述盒體（1)的側(cè)壁對(duì) 應(yīng)金屬部件（12)處設(shè)有磁性部件（13)。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：還 包括備用容置槽，所述備用容置槽的槽腔內(nèi)容置有PCR緩沖液備用試劑瓶（9)，所述備用容 置槽的槽腔底部鋪設(shè)有海綿墊，所述備用容置槽與容置槽并列排布在固定座（14)上。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：6 個(gè)所述容置孔在固定座（14)上分兩排平行排列。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在 于：6個(gè)所述容置孔分別為能容納1. 5mlEP管的孔洞，相應(yīng)的，所述N0SLAP-R引物試劑管 (4)、N0SLAP-C引物試劑管（3)、N0SLAP-F1引物試劑管（5)、N0SLAP-F2引物試劑管（6)、 NOSLAP-Taqman管（8)和陽(yáng)性對(duì)照質(zhì)粒管（7)分別采用1.5mlEP管。
5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述金屬部件（12)為鐵片，所述磁性部件（13)為磁鐵塊。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的NOSLAP基因分型的ARMS-qPCR檢測(cè)試劑盒，其特征在于：所 述磁性部件（13)外凸地設(shè)置在盒蓋（2)的側(cè)壁，所述連接部（11)設(shè)置金屬部件（12)處開 設(shè)有凹槽，所述金屬部件（12)設(shè)置在該凹槽的槽底，在所述金屬部件（12)與磁性部件（13) 吸附在一起的狀態(tài)下，所述磁性部件（13)完全容置在該凹槽的容置空間內(nèi)。
【文檔編號(hào)】C12Q1/68GK204185476SQ201420642771
【公開日】2015年3月4日 申請(qǐng)日期:2014年10月31日 優(yōu)先權(quán)日:2014年10月31日
【發(fā)明者】張道允, 鞏子英, 張恒, 羅堅(jiān)誠(chéng), 賈寧 申請(qǐng)人:江蘇所羅門兄弟醫(yī)學(xué)科技有限公司