專利名稱：一種尿酸測定酶試劑盒的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明是涉及一種尿酸測定酶試劑盒的制備方法，該試劑盒可用于血清，尿液的尿酸測定，為痛風(fēng)、腎臟疾病、慢性白血病等疾病的診斷提供準(zhǔn)確實驗資料，還可用于其它臨床或非臨床樣品的尿酸定量分析。
目前，國內(nèi)外通常應(yīng)用的尿酸測定試劑盒是用3，5-二氯-2-羥苯磺酸作色原。此色原較2，4-二氯酚敏感，且溶解性好，但其穩(wěn)定性較差，敏感性亦尚嫌不足，合成比較困難。為此，近年來國外有人研究應(yīng)用一種新的色原-2.4.6-三溴-3-羥苯甲酸，測定尿酸其敏感度高，穩(wěn)定性強，合成容易，方法準(zhǔn)確、精密。如Sanderson在“臨床化學(xué)”(1983;291285)和Dubois在“臨床化學(xué)臨床生化”雜志(1989;27151)分別報道了應(yīng)用該色原測定尿酸，具有上述優(yōu)點，但他們未涉及利用該色原制作尿酸酶試劑盒的情況。
本發(fā)明的目的，是提供一種用2.4.6-三溴-3-羥苯甲酸新色原制造尿酸測定酶試制盒的工藝。包括微生物酶的制備和凍干粉試劑盒的制造方法。
該試劑盒的制備工藝包括微生物的制備和凍干粉試劑盒制造1、將產(chǎn)朊假絲酵母菌微生物酶搖床或在發(fā)酵罐中培養(yǎng)，將收獲的菌體用PH8.311的緩沖液滲透攻擊提取，2-4天后收獲菌提取液;
2、用硫酸銨鹽析后，收取酶蛋白，過葡聚糖凝膠5-25柱后備用;
3、以間硝基酚、氰溴酸和溴酸鹽合成2.4.6-三溴-3-羥基苯甲酸，干燥后備用。
凍干粉試劑盒的制造4、按下列比例制備凍干準(zhǔn)備液尿酸酶150-10000U/L，辣根過氧化物酶5000-30000U/L，4-氨基安替比林5-60mmol/L，亞鐵氰化鉀100-1000μmol/L，其它非反應(yīng)成份適量;
5、按用途和使用方法不同，將準(zhǔn)備液分裝成0.5-2.0ml瓶;
6、經(jīng)低溫冷凍，真空干燥后封蓋，貯存?zhèn)溆谩?br> 用本發(fā)明的方法制備的2.4.6-三溴-3-羥苯甲酸色原酶的試劑盒與現(xiàn)有色原2.4-三氯酚和3.5-二氯-2-羥苯磺酸試劑盒比較，其優(yōu)點是敏感度分別增加15%和100%，色原溶液穩(wěn)定期延長200%，合成容易并相應(yīng)提高了酶盒的抗干擾性能。
實施例將產(chǎn)朊假絲酵母菌種接種于3L液體培養(yǎng)基中培養(yǎng)誘導(dǎo)后，得濕菌160-200克，用PH9緩沖液滲透攻擊提取，用硫酸銨鹽析，離子交換纖維素色譜，可得酶130-160U;
取辣根過氧化物酶5000-7000U，4-氨基安替比林1-4mmol，2.4.6-三溴-3-羥苯甲酸9mmol，亞鐵氰化鉀120μmol，其它非反應(yīng)成份適量，混合均勻，分裝入瓶內(nèi)，進行低溫冷凍，干燥后得尿酸測定酶試劑盒300-400支。
權(quán)利要求
1.本發(fā)明涉及一種尿酸測定酶試劑盒的制備方法，其特征在于所述的方法包括甲微生物酶的制備流程是a、將產(chǎn)朊假絲酵母菌微生物搖床或在培養(yǎng)罐中培養(yǎng)；收取的菌體用PH8.5-11緩沖液滲透攻擊提取，2-4天后，收獲菌提取液；b、用硫酸銨鹽析后，收取酶蛋白，過葡聚糖凝膠G-25柱后備用；c、以間硝基酚，氰溴酸和溴酸鹽合成2.4.6-三溴-3-羥基苯甲酸，干燥后備用；乙凍干試劑盒的制造d、按下列比例制備凍干準(zhǔn)備液尿酸5000-30000UL，辣根過氧化物酶5000-30000UL，4-氨基安替比體5－60mmoL/L，亞鐵氰化鉀100-100μmoUL，其它非反應(yīng)成份適量；e、按盒的用途和方法不同，將準(zhǔn)備液分裝成0.5-2.0ml瓶；f、經(jīng)低溫冷凍，真空干燥后封蓋，貯存?zhèn)溆谩?br> 全文摘要
一種尿酸測定酶試劑盒的制備方法，包括產(chǎn)朊假絲酵母菌微生物酶的培養(yǎng)、提取，2，4，6-三溴-3-羥基苯甲酸色原的合成和凍干準(zhǔn)備液的配制，分裝，低溫冷凍干燥密封等，制成的酶盒敏感度高，穩(wěn)定性好，抗干擾性能好等優(yōu)點，可廣泛用于血清、尿液的尿酸測定，可為痛風(fēng)、腎臟疾病、慢性白血病等的診斷提供準(zhǔn)確的實驗資料。
文檔編號C12Q1/62GK1057484SQ9010515
公開日1992年1月1日 申請日期1990年6月20日 優(yōu)先權(quán)日1990年6月20日
發(fā)明者劉學(xué)成, 蘇躍新, 湯瑾瑜, 張淑賢, 王竹, 董洪杰 申請人:中國人民解放軍沈陽軍區(qū)總醫(yī)院