一種海參糖肽螯合鈣的加工方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及水產(chǎn)加工技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種海參糖肽螯合鈣的加工方法。
【背景技術(shù)】
[0002]鈣是人體必需礦質(zhì)元素之一，也是含量最多的元素，具有多種重要的生理功能。鈣離子是神經(jīng)傳導(dǎo)遞質(zhì)，具有調(diào)節(jié)肌肉緊張度的作用，同時對骨骼健康意義重大。當(dāng)前，由于生活方式的轉(zhuǎn)變，鈣缺乏逐漸成為全球性的健康問題，尤其是老人、兒童、孕婦等特殊人群鈣缺乏現(xiàn)象普遍存在。有效進(jìn)行補鈣，對提高人們的身體素質(zhì)和生活質(zhì)量具有非常重要的意義。
[0003]海參是傳統(tǒng)的名貴滋補佳品，具有“海中人參”的美譽。相關(guān)研究證明，海參是一種高蛋白、低脂肪、無膽固醇的營養(yǎng)品，其含有的海參膠原蛋白可以促進(jìn)機體細(xì)胞的再生和受損后的修復(fù)，還可提高人體的免疫功能，具有消除疲勞的作用。
[0004]現(xiàn)代生物研究表明，人體攝入的蛋白質(zhì)食物在經(jīng)消化道酶作用后，主要以低聚肽的形式吸收。將海參膠原蛋白水解成海參肽的形式，有利于提高消化吸收，更好的發(fā)揮其保健功效。
[0005]多肽螯合鈣是一種新型鈣肽雙補產(chǎn)品，一方面有利于提高鈣的吸收率，另一方面又能夠發(fā)揮多肽的保健功能，近年來逐漸成為研究的熱點。
[0006]中國發(fā)明專利CN 102871121 B公布了一種海洋骨膠原肽鈣螯合物的制備方法，包括先采用堿性蛋白酶后加入木瓜蛋白酶進(jìn)行總共3.5-5h酶解及高溫滅酶后制成骨膠原肽，再加入外源性氯化鈣或氫氧化鈣，經(jīng)用無水乙醇進(jìn)行沉淀，得海洋骨膠原肽鈣螯合物。
[0007]中國發(fā)明專利CN 102309008 B提供了一種膠原多肽螯合鈣的制備方法，采用動物皮明膠為原料，先加入復(fù)合蛋白酶酶解l_6h后滅活，再加入風(fēng)味蛋白酶酶解l_4h的方法法，制備得到膠原多肽，然后直接將其同氯化鈣、氫氧化鈣等離子鈣，在10-50°C，pH值為5-8條件下進(jìn)行螯合反應(yīng)制備膠原多肽螯合鈣。以上2個專利未對膠原肽進(jìn)行分離純化，螯合效果因此受到一定影響。
[0008]中國發(fā)明專利CN 103045706 B公布了一種連續(xù)生產(chǎn)魚鱗膠原肽螯合鈣鹽和魚鱗膠原肽的方法，包括加入氫氧化鈉預(yù)處理魚鱗，采用酸性蛋白酶解3-6h后高溫滅酶得到魚鱗膠原多肽和鈣溶液混合液，經(jīng)截留后再次酶解截留液3-6h及高溫滅酶，常溫下自然螯合4-24h制備魚鱗膠原肽螯合鈣鹽溶液，經(jīng)乙醇分離得螯合鈣鹽和膠原肽溶液。其工藝在處理過程中加入了氫氧化鈉，存在一定食用安全隱患。
[0009]中國發(fā)明專利CN 104000191 A公布了一種新型螯合鈣，通過將L-天門冬氨酸、海藻糖、維生素C37、三氯蔗糖及無水氯化鈣攪拌混合制取溶液，經(jīng)過200目和800目篩后在溫度80度、pH值為8的條件下經(jīng)過70min螯合，再經(jīng)干燥攪合、篩取、滅菌制成。其公布的是一種氨基酸螯合鈣的加工工藝，未涉及多肽螯合鈣的加工。
[0010]海參口器，俗稱“海參牙”，是海參在食用前發(fā)制加工環(huán)節(jié)產(chǎn)生的下腳料，通常作為廢物丟棄。而實際上，海參口器中含有大量的生物鈣，而且相比于自然環(huán)境中的其他鈣源，其結(jié)構(gòu)更為松散，利于加工釋放鈣離子，是良好的生物鈣源。同時，口器包含一定數(shù)量的觸腕，在加工去除時也會隨之牽扯下一定量的海參體壁，積少成多后也成為制備海參肽的重要蛋白源。本發(fā)明以海參口器作為加工原材料，重復(fù)利用各種先進(jìn)的加工方法，同時得到海參小肽、海參糖肽螯合鈣、海參肽螯合鈣、海參糖肽、海參中肽共5種高品質(zhì)產(chǎn)品，對于海參單品的綜合利用及高值化具有重要作用。由于海參體壁含有大量類I型海洋膠原蛋白，結(jié)構(gòu)與陸生動物膠原存在差異，故需要采用特定的酶解工藝制備膠原多肽。另外，螯合鈣的制備得率與分子量大小、純度、濃度等都有直接關(guān)系，故需要對其進(jìn)行參數(shù)設(shè)定。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0011]本發(fā)明的目的是綜合現(xiàn)有技術(shù)的以上各種因素，公開一種海參糖肽螯合鈣的加工方法，包含如下步驟:
A.原料處理:海參口器經(jīng)清洗后，蒸煮，浸泡，然后進(jìn)行打漿，均質(zhì)；
B.生物酶解:選擇多種蛋白酶進(jìn)行復(fù)合分段酶解；
C.離心分離:酶解液經(jīng)連續(xù)離心分離后，得到海參糖肽溶液和海參鈣沉淀；
D.過濾濃縮分級:酶解液經(jīng)超濾膜截留分級濃縮后，小肽濾過液采用納濾脫鹽；
E.有機酸解制備海參鈣；
G.螯合反應(yīng):利用微波輔助促進(jìn)海參鈣與海參多糖多肽的螯合；
H.反應(yīng)完成后，經(jīng)離心分離后對沉淀和上清液分別干燥。經(jīng)過以上工藝，可以同時得到海參小肽、海參糖肽螯合鈣、海參肽螯合鈣、海參糖肽、海參中肽共5種具有不同特定生物功能的產(chǎn)品，使得材料得到充分利用。
[0012]進(jìn)一步地，步驟A的具體條件是:原料蒸煮10-30min，需置于4°C純凈水中浸泡24-36h，以物料與水比例為1:2-4的比例加入純凈水進(jìn)行打漿，均質(zhì)。
[0013]進(jìn)一步地，步驟B的具體條件是:生物酶解時先從包括木瓜蛋白酶、復(fù)合蛋白酶在內(nèi)的中性蛋白酶中選擇1-2種，以0.5-2%的比例，先后或同時加入，在50-70°C下酶解2_3小時，然后再以0.5-1%的風(fēng)味蛋白酶或堿性蛋白酶，在40-60°C繼續(xù)酶解0.5-lh。
[0014]進(jìn)一步地，步驟D的具體條件是:采用不同截留分子量超濾膜包對酶解液進(jìn)行分級濃縮，經(jīng)10-30KDa膜包截留濃縮后得到海參多糖多肽混合液，使多糖濃度達(dá)到2-20mg/mL，純度大于60% ;經(jīng)650-1000Da膜包截留濃縮后得到濃度為30-100mg/mL的海參中肽濃縮液，備用；經(jīng)超濾后的小肽濾過液采用納濾脫鹽后，濃縮，凍干，得到小肽凍干粉產(chǎn)品。
[0015]進(jìn)一步地，步驟E的具體條件是:利用包括檸檬酸、蘋果酸、乙酸、酒石酸在內(nèi)的可食用型有機酸與海參鈣沉淀按照10-20:1的比例進(jìn)行微波輔助酸解。微波功率100-200W，酸解溫度50-70°C，時間l_4h ;酸解結(jié)束后，經(jīng)減壓濃縮使Ca2+濃度為5-20mg/mL。
[0016]進(jìn)一步地，步驟G的具體條件是:螯合反應(yīng)需將濃縮液與海參鈣酸解液按照1:1(V/V)的比例混合，利用微波輔助螯合，其中，海參中肽濃縮液中加入NaHC03S NaCO 3調(diào)節(jié)pH至7-8后再進(jìn)行反應(yīng)；微波功率50-150W，反應(yīng)溫度40_60°C，反應(yīng)時間10_20min。
[0017]進(jìn)一步地，步驟Η的螯合反應(yīng)完成后，反應(yīng)液需經(jīng)減壓濃縮至原體積的1/3-1/5，再加入乙醇至溶液中乙醇度達(dá)到50-70%，4°C靜置過夜；再經(jīng)離心分離后，得到海參糖肽螯合鈣沉淀、海參肽螯合鈣沉淀、海參糖肽溶液及海參肽溶液。螯合鈣沉淀經(jīng)冷凍干燥后得到成品，同時，上清液去除乙醇后采用冷凍干燥或噴霧干燥得到海參糖肽和海參肽成品。
[0018]經(jīng)以上工藝加工后，可以同時得到海參小肽、海參糖肽螯合鈣、海參肽螯合鈣、海參糖肽、海參中肽共5種具有不同特定生物功能的產(chǎn)品，使得材料得到充分利用，加工過程綠色安全。其中，海參糖肽螯合鈣螯合率大于60%，比較適合中老年人補鈣增強免疫力的需求；海參肽螯合鈣的螯合率大于40%，同時其中的中分子量海參易于吸收，適合輕度補鈣的同時調(diào)節(jié)自身免疫力的需求。小分子海參肽具有較高的抗氧化功能，大分子海參糖肽具有抗腫瘤增強免疫力等功效，中分子海參肽易于吸收具有免疫調(diào)節(jié)功效，經(jīng)過螯合反應(yīng)添加鈣后，同時具有了補充鈣元素的功效。
【具體實施方式】
[0019]現(xiàn)舉例對本發(fā)明做一個具體的說明。
[0020]實施例1:
海參口器經(jīng)清洗后，蒸煮15min，置于4°C純凈水中浸泡24h，以物料與水比例為1: 4的比例加入純凈水進(jìn)行打漿，均質(zhì)。采用木