一種活性藥食同源食品提取物凍干粉及其制備方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種活性藥食同源食品提取物凍干粉，以藥食同源食品為原料，全程采用低溫提取工藝，得到的提取物最大限度地保留了藥食同源食品的天然色澤、風(fēng)味和口感；提取物在真空冷凍干燥過程采用天然植物原料制備的具有顯著抗凍效果的抗凍劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的、現(xiàn)有的冷凍保護(hù)劑，進(jìn)一步大大降低了凍干工藝造成的冷凍損失，有效提高了提取物凍干粉的生物活性和營養(yǎng)價值，并與功能性膳食纖維粉、益生因子和植物乳桿菌粉科學(xué)復(fù)配，顯著增強了提取物凍干粉的藥食營養(yǎng)均衡性以及功能性、溶解性和益生性，延長了產(chǎn)品的保質(zhì)期，最終制得一種營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)含量高、功能強、抗凍效果及溶解性好、成本低的活性藥食同源食品提取物凍干粉。CGMCC NO.1176320151130
【專利說明】
一種活性藥食同源食品提取物凍干粉及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域
[0001] 本發(fā)明涉及凍干粉的制備，具體涉及一種活性藥食同源食品提取物凍干粉及其制 備方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 凍干粉是在無菌環(huán)境下將藥液冷凍成固態(tài)，抽真空將水分升華干燥而成的無菌 粉。對于干燥熱敏性制品和需要保持生物活性的物質(zhì)，凍干是一種有效的方法。此法是將需 要干燥的制品在低溫下使其所含的水分凍結(jié)，然后放在真空的環(huán)境下干燥，讓水分由固體 狀態(tài)直接升華為水蒸氣并從制品中排除而使制品活動干燥。該方法有效地防止了制品理化 及生物特性的改變，對生物組織和細(xì)胞結(jié)構(gòu)和特征的損傷較小，使其快速進(jìn)入休眠狀態(tài)，有 效保護(hù)了許多熱敏性藥物生物制品有效成份的穩(wěn)定性，如蛋白質(zhì)、微生物類不會發(fā)生變性 和丟失其生物活性;其次，凍干制品在干燥后形態(tài)疏松、顏色基本不發(fā)生改變，加水后能夠 快速溶解并恢復(fù)原有水溶液的理化特性和生物活性；由于干燥在真空條件下進(jìn)行，對于一 些易氧化的物質(zhì)具有很好的保護(hù)作用；制品經(jīng)過凍干后水份含量非常低，使制品的穩(wěn)定性 提高，受污染的機會減小，這不僅方便了運輸還延長了制品保存期限。
[0003] 藥食同源"是我國勞動人民在食物和藥物發(fā)現(xiàn)中總結(jié)的智慧結(jié)晶，體現(xiàn)了食物在 保健和治療方面的功能。在我國古代，勞動者認(rèn)識到藥食同功、同理而亦有界限，并產(chǎn)生了" 藥食兩用"物品這一類群。古代本草，尤其是食物類本草著作，記載了大量的"藥食兩用"中 藥材，并對相關(guān)原理、功效、禁忌及用法等進(jìn)行詳述，為今天的"藥食兩用"品種研究提供了 寶貴的依據(jù)。
[0004] 無論從國際市場看還是國內(nèi)市場，帶有功能的健康食品需求越來越旺盛，國際國 內(nèi)出現(xiàn)的糧食問題也將抬高健康食品的整體需求，從消費者不斷發(fā)出對健康食品的追求與 食品本身衍生出來的話題來看，已經(jīng)開始影響到消費行為的整體變化，包括營養(yǎng)食品、功能 食品、有機食品、保健食品等。健康產(chǎn)業(yè)無論從政府行為到企業(yè)行為，正經(jīng)歷一場前所未有 的大變革當(dāng)中，健康食品將是這個變革當(dāng)中的首膳之區(qū)，隨著生活水平的提高，人們對于食 品的要求也越來越高，人們除了要求吃得健康的同時，也希望通過吃來實現(xiàn)強身健體的愿 望。所以消費者在選擇食品的時候會有意識的去選擇藥食同源的食品與之搭配。而且藥食 同源的食品價格比較大眾化，一般的人都能消費得起，相對保健品而言更多的人會選擇前 者，因此藥食同源食品的前景是可觀的?？傊幰灾尾閯?wù)，食以養(yǎng)生為主，你中有我，我 中有你，難分彼此，難辨高下。"藥食同源，同病異治，異病同治"。
[0005] 目前，以中藥材制備凍干粉針劑的較多：中國專利CN 103462911 B公開了一種凍 干粉針劑的制備技術(shù)。包括如下步驟:40%~90%處方量的注射用水冷卻至20~60°C，調(diào)節(jié) 或不調(diào)節(jié)pH，順序加入各處方物質(zhì)，攪拌、測pH或調(diào)節(jié)pH，補水，控溫條件下加處方量的活性 炭、攪拌脫色、壓濾，過濾除菌得無菌藥液，將其分裝至西林瓶中，冷凍干燥，乳蓋，即得凍干 粉針劑。該方法操作簡單、生產(chǎn)周期短，適于工業(yè)化生產(chǎn)，可以避免產(chǎn)品因高熱而分解，且避 免藥物間緩慢的配伍變化，產(chǎn)品計量準(zhǔn)確、外觀優(yōu)良，有利于增加藥物的穩(wěn)定性，便于藥品 的長期儲存。本發(fā)明生產(chǎn)技術(shù)廣泛適用于磷酸川芎嗪、奧扎格雷鈉、左卡尼汀、奧美拉唑等 藥物的凍干粉針劑的制備。中國專利CN 103211772 B公開了一種依托泊苷凍干粉針劑，能 夠克服上述依托泊苷的缺陷，提高依托泊苷生物利用度，使用方便，吸收快，發(fā)揮作用迅速。 本發(fā)明通過對依托泊苷凍干粉針處方的篩選，發(fā)現(xiàn)使用特定的賦形劑，并且同時使用抗氧 化劑和螯合劑，得到的注射用依托泊苷凍干粉針制劑成品的穩(wěn)定性高，雜質(zhì)少，副作用小， 安全性更高，具有方便儲存和使用，生產(chǎn)成本低等優(yōu)點。中國專利CN 105232478 A公開了一 種氨酪酸凍干粉針及其制備方法，該氨酪酸凍干粉針由氨酪酸、亞硫酸氫鈉、甘露醇、pH調(diào) 節(jié)劑制成，通過穩(wěn)定劑的加入，制得的氨酪酸凍干粉針成品質(zhì)量穩(wěn)定、主藥含量高，有關(guān)物 質(zhì)含量低，并且有效地抑制了噴瓶或者嚴(yán)重萎縮等現(xiàn)象。
[0006] 以藥食同源物品為原料制備凍干粉的較少：中國專利CN 103610141 B公開了一種 白果凍干粉的制備方法，屬于農(nóng)產(chǎn)品、食品加工技術(shù)領(lǐng)域。其包括以下工藝步驟:將破碎后 的白果放入清水中浸泡，然后取出瀝干;瀝干后的白果進(jìn)行微波熟化;熟化的白果去殼、去 囊，然后進(jìn)行粉碎、擠壓成片和脫油脂;脫脂后的白果進(jìn)行預(yù)凍，預(yù)凍后進(jìn)行升溫凍干;凍干 后的白果磨成粉，即得到白果凍干粉。本發(fā)明得到的白果凍干粉有害成分少，重量輕，易于 攜帶和運輸，白果更濃縮，營養(yǎng)成分更高。中國專利CN 103229920 A公開了一種蜂蜜凍干 粉，它包括蜂蜜，所述的蜂蜜是一種被封裝在密閉包裝容器內(nèi)的粉末狀凍干粉。所述的粉末 狀凍干粉可以是每100克所述的粉末狀凍干粉中葡萄糖含量為5克至38克，果糖含量為90克 至40克，蔗糖含量小于3克，酶值大于9。采用本發(fā)明提供的蜂蜜凍干粉的制造方法得到的蜂 蜜凍干粉，利用加入適量的冷蒸餾水提高原蜂蜜水的含量的方法，使得蜂蜜能夠在低溫下 形成冰架結(jié)構(gòu)，從而實現(xiàn)冷凍干燥，使得最終得到固體狀態(tài)的蜂蜜凍干粉，并封裝在密閉的 包裝容器內(nèi)，從而實現(xiàn)既保存新鮮蜂蜜原有的營養(yǎng)成分，又能實現(xiàn)長期保存。中國專利 CN101199344 B公開了一種制取蘆筍全營養(yǎng)活性物濃縮汁的凍干粉的"分部一一集成"制備 方法:將破碎的蘆筍組織榨汁，再將汁液中的蛋白質(zhì)酶類大分子活性物質(zhì)，以生物絮凝一一 沉淀劑處理，再以固態(tài)"綠泥"（A)形式離析，使之與蘆筍酶類水溶性底物脫離，并避免了濃 縮工藝中的變性因素(溫度、空氣、微生物）的影響。相對穩(wěn)定的上清液中的中小分子，經(jīng)10 倍左右的低溫濃縮被富集至澄明微黃的濃縮汁(B)』分部因生物絮凝一一沉降劑及檸檬酸 的加入而避免褐變反應(yīng)。A、B二分部可以單獨也可以混合后凍干，即集成為終產(chǎn)物凍干粉。 中國專利CN 105249129 A公開了一種藍(lán)莓凍干粉固體飲料，涉及保健飲料加工技術(shù)領(lǐng)域， 飲料組成為:藍(lán)莓全果凍干粉15-30%、調(diào)味劑（白糖等）白糖5%-15 %，飲料以藍(lán)莓全果凍 干粉為原料直接沖泡而成，加工工藝主要包括凍干、包裝和殺菌三道工序，加工工藝簡單， 設(shè)備投資少，生產(chǎn)成本低。相關(guān)加工技術(shù)成熟，易于工業(yè)化生產(chǎn)。全果入料、低溫凍干加工處 理，產(chǎn)品營養(yǎng)價值高，保健功能好，適應(yīng)市場發(fā)展趨勢。
[0007] 雖然凍干粉相對于其它粉劑有很多優(yōu)勢，但是，在真空冷凍干燥過程中會產(chǎn)生大 量的冰晶體，對動植物細(xì)胞、產(chǎn)品的組織結(jié)構(gòu)、質(zhì)地及基本構(gòu)架、營養(yǎng)物質(zhì)細(xì)胞等"冷敏性" 物質(zhì)都會造成刺傷，進(jìn)而降低營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)效價，尤其在活性微生物粉劑制備 方面會大大提高微生物的致死率，顯著降低活菌數(shù)量，上述公開的專利不論是醫(yī)藥領(lǐng)域的 凍干粉針，還是藥食同源領(lǐng)域的凍干粉食品，均沒有在現(xiàn)有真空冷凍干燥的基礎(chǔ)上進(jìn)行改 進(jìn)以解決冷凍過程防凍害問題，并且，雖然有些醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域應(yīng)用了冷凍保護(hù)劑，但多為有 毒、有害和化學(xué)物質(zhì)，不能適用于食品技術(shù)領(lǐng)域，同時，凍干粉藥食同源食品原料單一，溶解 性差、功能性低且不全面。
[0008] 中國專利CN 103109930 B-種添加絲膠抗凍肽的果味益生菌酸奶片，其原料由以 下按重量份數(shù)的組分組成:脫脂奶粉10~14份、蔗糖2~5份、絲膠肽1~3份、果料1~4份、凍 干的活性益生菌0.1~0.6份和硬脂酸鎂0.1~0.4份，該發(fā)明還提供了產(chǎn)品的制備方法，主 要工藝流程包括:脫脂乳食品級培養(yǎng)基的制備、益生菌的發(fā)酵、絲膠抗凍肽的添加、發(fā)酵乳 的真空冷凍干燥、粉末壓片等工藝，益生菌酸奶片中添加了絲膠抗凍肽和富含B族維生素的 水果凍干粉，不僅使酸奶片中益生菌活菌數(shù)高，菌活性保存時間較長，而且提高了其口感風(fēng) 味。戚永明對近年來凍干片技術(shù)發(fā)展和臨床優(yōu)勢進(jìn)行簡要總結(jié)，并對Zydis技術(shù)存在的問題 進(jìn)行分析，同時對凍干片最新研究進(jìn)展進(jìn)行介紹，主要論述了凍干技術(shù)在國際及國內(nèi)醫(yī)藥 領(lǐng)域的歷史、現(xiàn)狀和發(fā)展趨勢，凍干技術(shù)存在的缺陷和需要解決的技術(shù)問題(戚永明.凍干 片制劑研究新進(jìn)展.Journal of China Prescription Drug 2012.10(4).57_59)。但是，以 桑蠶繭制備絲膠抗凍肽原料成本高，抗凍效果單一且仍不很理想。
[0009] 采用藥食同源食品制備一種營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)含量高、功能強、抗凍效果 好、溶解性好、成本低的活性藥食同源食品凍干粉是本領(lǐng)域技術(shù)人員的期望和責(zé)任。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0010] 本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有藥食同源食品凍干粉的缺陷，以藥食同源食品為原料， 全程采用低溫提取工藝，得到的提取物最大限度地保留了藥食同源食品的天然色澤、風(fēng)味 和口感，同時使得提取物含有的生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)保健物質(zhì)含量最大化，原料提取率和 利用率最高，降低了提取成本;提取物在真空冷凍干燥過程采用天然植物原料制備的具有 顯著抗凍效果的抗凍劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的、現(xiàn)有的冷凍保護(hù)劑，進(jìn)一步大大降低了凍干工藝造成 的冷凍損失，有效提高了提取物凍干粉的生物活性和營養(yǎng)價值，并與功能性膳食纖維粉、益 生因子和植物乳桿菌粉科學(xué)復(fù)配，顯著增強了提取物凍干粉的藥食營養(yǎng)均衡性以及功能 性、溶解性和益生性，延長了產(chǎn)品的保質(zhì)期，最終制得一種營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)含量 高、功能強、抗凍效果及溶解性好、成本低的活性藥食同源食品凍干粉。
[0011] 為了達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案：
[0012] -種活性藥食同源食品提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0013] 藥食同源食品70-90份，膳食纖維粉30-40份，抗凍劑20-30份，益生因子2-10份，植 物乳桿菌粉1-5份；
[0014] 優(yōu)選地，所述活性藥食同源食品提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備： [0015]藥食同源食品75-85份，膳食纖維粉33-37份，抗凍劑23-27份，益生因子4-8份，植 物乳桿菌粉2-4份；
[0016]更優(yōu)選地，所述活性藥食同源食品提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制 備：
[0017] 藥食同源食品80份，膳食纖維粉35份，抗凍劑25份，益生因子6份，植物乳桿菌粉3 份；
[0018] 進(jìn)一步地，所述藥食同源食品為山楂、枸杞、紅棗、沙棘、羅漢果、金銀花、茯苓、百 合、蓮子、葛根中的任意一種或幾種以任意比例混合。
[0019] 進(jìn)一步地，所述膳食纖維粉是將膳食纖維經(jīng)物理、化學(xué)或生物的方法處理而得到 的可溶性纖維素含量高、生物活性強、對人體益生菌群有重要的、積極作用的纖維素，與普 通膳食纖維相比，其功能性、生物活性更強大；
[0020] 優(yōu)選地，所述膳食纖維粉是由菊粉、蘋果纖維、小麥纖維、燕麥纖維中的一種或多 種經(jīng)超微粉碎、擠壓膨化和生物酶酶解而得到的；
[0021] 更優(yōu)選地，所述膳食纖維粉的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖 維按質(zhì)量比4-6: 2-4:1-3均勻混合，超微粉碎至粒徑3-6M1，調(diào)整粉碎物水分含量為19-21%，于螺桿轉(zhuǎn)速160-18(^/1^11、溫度185-200°(：條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量2-4倍的 水，室溫200-400W、35-40KHz條件超聲提取10-15min，然后在電場強度20-40kV/cm，脈沖時 間400_600iis，脈沖頻率200-400Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理l〇-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH 值為4.5-6.5，加入混合物質(zhì)量0.1-0.3 %的生物酶，于45-55 °C酶解20-48min;酶解液減壓 濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維粉；
[0022] 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-2: 0.5-1.5:0.2-1 均勻混合。
[0023] 進(jìn)一步地，所述抗凍劑是以含有豐富抗凍基質(zhì)的天然植物種子為原料制備的植物 提取物與海藻糖、絲膠肽學(xué)復(fù)配、充分溶解而成，既可防止藥食同源食品原料的香味等揮發(fā) 性有效成分被水蒸氣帶出，又可降低凍干粉營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性物質(zhì)的冰晶體刺傷損失， 提高了凍干粉的收得率，同時又增加了凍干粉的溶解性和穩(wěn)定性，產(chǎn)生了意想不到的有益 效果，特別適合作為藥食同源食品原料提取物凍干粉制備過程的凍干保護(hù)劑；
[0024] 優(yōu)選地，所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=37-53: 2-8:1-4；
[0025] 優(yōu)選地，所述植物提取物是以冬黑麥、洋蔥、沙地柏、沙冬青的種子中的一種或幾 種為原料，經(jīng)高壓靜電、高壓脈沖電場輔助水楊酸浸泡、冷藏冷凍處理后再經(jīng)復(fù)合酶分段酶 解而制得；
[0026] 更優(yōu)選地，所述植物提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、洋蔥、沙地柏、 沙冬青的種子按質(zhì)量比13-17:5-11:3-5:1-3均勻混合，裝盤，首先于電場強度5-7kV/cm高 壓靜電處理2-4min;接著在濃度為40-60mg/L的水楊酸溶液中室溫浸泡2-4h，同時在電場強 度10-20kV/cm，脈沖時間150-250ys，脈沖頻率150-250HZ條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理;漂 洗、浙干，于3_5°C靜置18_24h，然后依次在1_3°C冷藏2_4d，-3-5°0冷凍1 -3(1、-15-18°C冷 凍20-30h，立即放在室外于光照強度0.5-5萬Lx自然光照2-4h，使混合料半解凍后立即進(jìn)行 粉碎，粉碎物粒徑0.5-1.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5; 最后加入混合料液質(zhì)量1-2%的復(fù)合酶，首先于35-50 °C酶解10_30min，然后于50-60 °C酶解 20-40min;酶解液過濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為15-25 %即得植物提取物；
[0027] 所述復(fù)合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比5-7:2-4:1-3: 1-2:1-2均勻混合。
[0028] 進(jìn)一步地，所述益生因子重量組成為：低聚異麥芽糖15-25份，低聚半乳糖15-25 份，低聚果糖10-20份，低聚木糖10-20份，水蘇糖5-11份，大豆低聚糖5-11份，棉子糖4-10 份，低聚麥芽糖3-7份。
[0029]進(jìn)一步地，所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī) 方法制備的，其活菌含量為:7 X 1012-9 X 1012cfu/g;
[0030] 優(yōu)選地，所述植物乳桿菌粉制備時冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備 的抗凍劑，可顯著提高植物乳桿菌粉在冷凍干燥過程活菌存活率至94%以上。
[0031] 更優(yōu)選地，植物乳桿菌CGMCC NO. 11763濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:0.6-1.4〇
[0032] 本發(fā)明另一目的是提供上述活性藥食同源食品提取物凍干粉的制備方法，包括如 下步驟：
[0033] 1)提取液的制備:按照配方，稱取各組份原料，首先將藥食同源食品放入裝有0.8-1.2 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min，瀝干，預(yù)處理，置 微波干燥中于功率3-5kW、料層厚度2-4cm、50-70 °C、干燥4-6min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為 8-12%的絲膠肽溶液中10-15min，取出，于-18-22°C冷凍30-50min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍 料層厚度3-5cm，粉碎物粒徑0.3-0.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為3.5-5.5，于室溫下在電場強度25-35kV/cm，脈沖時間300-500ys，脈沖頻率200-300HZ條 件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理20_30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提 取15-20min，同時在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;最后真空脫 氣得果蔬汁，加入其質(zhì)量〇. 2-0.6 %的混合酶，于40-50°C酶解30-50min，取酶解液質(zhì)量0.5-1 %的蛋清，放入攪拌機中于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min,直至蛋清全部成為泡沫得 到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸l(wèi)_3min，迅速降至室溫，80-100目篩網(wǎng)過 濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至30-50 %得藥食同源食品提取液；
[0034] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-2:1-2均勻 混合；
[0035] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的4-6 %依次加入提取液中，均勻混合，在功 率300-500W，頻率35-45KHZ條件下進(jìn)行超聲溶解10-15min，得混合液；
[0036] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40~-50 °C，并在-40~-50 °C下預(yù)凍2~3h;然 后將凍干倉內(nèi)抽真空至15~20Pa后，在8-10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15~-18°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5-7h內(nèi)逐步升溫至 室溫，到凍干粉水分小于4%時出料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生 因子均勻混合得活性藥食同源食品提取物凍干粉。
[0037] 本發(fā)明植物乳桿菌(1^(：1：(^&(3；[11118口1&1^&1'11111)乂11于2015年11月30日保藏于中國 微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC N0.11763,保藏 地址為：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。 [0038] 植物乳桿菌益生特性如下：
[0039]本發(fā)明所提供的植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件 下存活，在1%膽鹽培養(yǎng)4小時后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸 鹽速度快，分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃 度在4.8mg/kg以下；CGMCC N0.11763在發(fā)酵60h小時后，對膽固醇降解率可達(dá)到64.76%。 CGMCC N0 ? 11763黏附能力測定的自凝集率為95 ? 71 %。
[0040] 植物乳桿菌CGMCC N0.11763對膽固醇降解能力研究和測定：
[0041 ] 取lml CGMCC N0.11763母液接種于10mL的MRS膽固醇液體培養(yǎng)基（膽固醇含量 0.1mg/ml，pH 6.2)中，37°C的恒溫靜置分別培養(yǎng)20h、40h、60h備用，以接入lmL無菌水的MRS 膽固醇培養(yǎng)基為對照，取以上培養(yǎng)不同時間的菌液樣品及對照液各lml，9000r/min，4°C下 離心10min，得到發(fā)酵上清液，鄰苯二甲醛法測定上清液中膽固醇含量(具體為:取各上清液 0 . lml于相應(yīng)的試管中，加冰醋酸0.3ml，lmg/ml的鄰苯二甲醛0.15ml，緩緩加入濃硫酸 1.0ml，混合均勻。室溫靜置lOmin，于550nm下測吸光值）。每一處理3個重復(fù)，以同樣方法制 作膽固醇標(biāo)準(zhǔn)曲線，計算上清液中膽固醇含量及降解率，結(jié)果見表1。可知，CGMCCN0.11763 對膽固醇有很好的降解作用，在發(fā)酵60h小時后，降解率可達(dá)到64.76%。
[0042]表1對膽固醇的降解情況。
[0044] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐膽鹽試驗：
[0045] 取CGMCCN0.11763菌液lmL接種菌種于含有不同膽鹽(含量梯度為0.0%、0.2%、 0.4%、0.6%、0.8%、1%)的1011^]\?5液體培養(yǎng)基(？11=6.4)，置于37°(：下分別培養(yǎng)0、2、411， 每個處理3個重復(fù)。各取lml樣品菌液于9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋度溶液，取0.1ml稀釋 液于MRS中涂布，于37°C生化培養(yǎng)箱中倒置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄計算平 板上的菌數(shù)個數(shù)。結(jié)果見表2?？芍摼谀扄}濃度為1%處理4h后菌的生長量依然
[0046] 達(dá)到0 ? 59 ±0 ? 92 X 107(cfu/ml)，有很好的耐膽鹽能力。
[0047] 表2耐膽鹽能力檢測[(土s) X 107cfu/ml]
[0049] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763菌株的耐酸試驗
[0050] 取HLX37母液按lml接種菌種于不同pH值(pH梯度為1.5、2.0、2.5、3.0、3.5、4.0)的 lOmLMRS液體培養(yǎng)基，置于37°C下分別培養(yǎng)0、2、4h，每一處理3個重復(fù)。各取lml樣品菌液于 9ml生理鹽水中混勻，制備稀釋溶液，取0 . lml稀釋液于MRS中涂布，于37 °C生化培養(yǎng)箱中倒 置培養(yǎng)48小時(每個稀釋度做3個平行)記錄平板上的菌落個數(shù)。結(jié)果見表3。說明該菌具有 很強的耐酸能力。
[0051] 表3 耐酸能力檢測[(土s) X 107cfu/ml]
[0053] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的黏附能力測定 1 培養(yǎng)CGMCC NO. 11763(MRS液體培養(yǎng)基）、大腸桿菌DH5a(LB液體培養(yǎng)基)24h得發(fā)酵 液，分別置于3000r/min、4°C下離心10min，收集菌泥，分別用pH = 7.0的無菌磷酸鹽緩沖液 (PBS)洗滌菌泥2次（即在菌落中加入PBS，震蕩混合均勻后，置于3000r/min、4°C下離心 lOmin，收集菌體）。自凝集率（％ :用無菌的roS將菌泥CGMCC NO. 11763制成在波長600nm處 的吸光值為0.4 ±0.1 (A 0)的懸浮菌液及菌懸液，靜置24h后測定吸光值A(chǔ) 24,自凝集率 (%)公式為(A 0-A 24)/A 0。；他凝集率（％):將CGMCC如.11763和大腸桿菌0耶€[的懸菌 液調(diào)節(jié)成在波長600nm處的吸光值為0.6±0.1 (A 0)的混合懸浮菌液。靜置24H后測定吸光 值八24，他凝集率（％)公式為以0-4 24)/^0。測定結(jié)果見表5，可知06110：勵.11763的自 凝集率為95.71 %，有很強的黏附能力。
[0055]表4黏附能力表
[0057] 植物乳桿菌CGMCC NO. 11763的菌株生理特性
[0058] 所述植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)XH于2015年11月30日保藏于中國微 生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱CGMCC)，保藏號為CGMCC N0.11763,保藏地 址為：中國北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所，郵編：100101。 [0059]該菌株特點如下:在顯微鏡下觀察，該菌株為短桿狀，革蘭氏染色呈陽性，無鞭毛， 不產(chǎn)芽孢;在固體培養(yǎng)基上，該菌菌落為白色，表面光滑，致密，形態(tài)為圓形，邊緣較整齊。
[0060]理化特征為:過氧化氫酶(-)，明膠液化(-)，吲哚實驗( + )，運動性(-)，發(fā)酵產(chǎn)氣 (_)，亞硝酸鹽還原(_)，發(fā)酵產(chǎn)氣(_)，產(chǎn)硫化氫氣體(_)，pH4.0MRS培養(yǎng)基中生長(+ )。經(jīng)過 生理生化鑒定為為植物乳桿菌（Lactobacillus plantarum)，命名為植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)XH〇
[00611菌株能夠在57°C下生長良好，葡萄糖耐受能力為275g/L。
[0062]本發(fā)明植物乳桿菌由采集人李建樹，從新疆維吾爾族老鄉(xiāng)家中酸奶中分離得到， 采集時間2015年6月2日。
[0063]本發(fā)明植物乳桿菌CGMCC N0.11763經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件下存活，在 1 %膽鹽培養(yǎng)4小時后仍處于存活狀態(tài);植物乳桿菌CGMCC N0.11763降解亞硝酸鹽速度快， 分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種在生產(chǎn)泡菜時，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在4.8mg/ kg以下；CGMCCN0.11763在發(fā)酵60h小時后，對膽固醇降解率可達(dá)到64.76 %。CGMCC NO. 11763黏附能力測定的自凝集率為95.71 %，菌株能夠在57°C下生長良好，葡萄糖耐受能 力為 275g/L。
[0064] 有益效果：
[0065]本發(fā)明以藥食同源食品為原料，首先采用超聲清洗對藥食同源食品藥食同源食品 進(jìn)行殺蟲滅卵、殺滅微生物、去除農(nóng)藥殘留和重金屬離子等，大大提高了凍干粉的食品安全 性;采用微波干燥在使得藥食同源食品短時、低溫膨化干燥的同時主要是滅酶、固色，最大 限度地保留了藥食同源食品的天然色澤，經(jīng)微波固色后的藥食同源食品天然色澤在后續(xù)的 加工過程中非常穩(wěn)定，不會變色、褪色，色澤非常鮮艷，可保持藥食同源食品的天然色澤;在 含有絲膠肽的水溶液中浸泡復(fù)水，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成的藥食同源食品活性物 質(zhì)及冷敏性成分的損失，提高了藥食同源食品有效成分的提取率，全程采用低溫提取工藝， 將超聲清洗、微波滅酶固色和膨化、高壓脈沖電場提取、超聲輔助微波提取、生物酶解和真 空脫氣有機結(jié)合，得到的提取物最大限度地保留了藥食同源食品的天然色澤、風(fēng)味和口感， 同時使得提取物含有的生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)保健物質(zhì)含量最大化，原料提取率和利用率最 高，降低了提取成本;采用蛋清制備的蛋清泡沫對酶解液短時凝絮，進(jìn)一步提高了凍干粉的 溶解性和穩(wěn)定性;將部分膳食纖維粉加入提取液中和抗凍劑均勻混合，可提高混料的固形 物含量，降低水分含量，減輕了凍結(jié)過程的負(fù)擔(dān)，縮短了凍干時間，提高了凍干效率，經(jīng)超聲 溶解，進(jìn)一步增強了混料的均一性、穩(wěn)定性和溶解性，進(jìn)而提高了凍干粉的均一性、穩(wěn)定性 和溶解性;提取物在真空冷凍干燥過程采用天然植物原料制備的具有顯著抗凍效果的抗凍 劑代替?zhèn)鹘y(tǒng)的、現(xiàn)有的冷凍保護(hù)劑，進(jìn)一步大大降低了凍干工藝造成的冷凍損失，有效提高 了提取物凍干粉的生物活性和營養(yǎng)價值，并與功能性膳食纖維粉和植物乳桿菌粉科學(xué)復(fù) 配，顯著增強了提取物凍干粉的藥食營養(yǎng)均衡性以及功能性、溶解性和益生性，延長了產(chǎn)品 的保質(zhì)期，最終制得一種營養(yǎng)物質(zhì)及生物活性物質(zhì)含量高、功能強、抗凍效果及溶解性好、 成本低的活性藥食同源食品凍干粉。具體試驗效果見實施例7-13,具體技術(shù)原理如下：
[0066] 1.本發(fā)明的植物乳桿菌粉活菌存活率高、功能全、益生性強，植物乳桿菌CGMCC NO. 11763經(jīng)實驗發(fā)現(xiàn)能夠在pH為1.50的條件下存活，在1 %膽鹽培養(yǎng)4小時后仍處于存活狀 態(tài);植物乳桿菌CGMCC NO. 11763降解亞硝酸鹽速度快，分解能力達(dá)到10.9mg/h/kg，該菌種 在生產(chǎn)泡菜時，整個發(fā)酵過程中亞硝酸鹽濃度在4.8mg/kg以下;CGMCC NO. 11763在發(fā)酵60h 小時后，對膽固醇降解率可達(dá)到64.76 %。CGMCC NO. 11763黏附能力測定的自凝集率為 95.71%〇
[0067] 2.本發(fā)明制備的抗凍劑是以含有豐富抗凍基質(zhì)的天然植物種子為原料制備的植 物提取物與海藻糖、絲膠肽學(xué)復(fù)配而成，不含任何化學(xué)物質(zhì)和食品添加劑，天然抗凍基質(zhì)全 面、豐富，抗凍蛋白及抗凍多肽含量高，大大提高了凍干粉的食品安全性，既可防止藥食同 源食品原料的香味等揮發(fā)性有效成分被水蒸氣帶出，又可降低凍干粉營養(yǎng)物質(zhì)和生物活性 物質(zhì)的冰晶體刺傷損失，提高了凍干粉的收得率，同時又增加了凍干粉的溶解性和穩(wěn)定性， 產(chǎn)生了意想不到的有益效果，特別適合作為藥食同源食品原料提取物凍干粉制備過程的凍 干保護(hù)劑，可完全替代現(xiàn)有的冷凍保護(hù)劑，并且產(chǎn)生更好的效果；同時，將其應(yīng)用于植物乳 桿菌粉的凍干過程，可顯著提高活菌存活率至94%以上。其中的植物提取物將含有豐富抗 凍基質(zhì)的天然植物種子原料科學(xué)復(fù)配，將高壓靜電處理、高壓脈沖電場輔助水楊酸誘導(dǎo)、低 溫分段脅迫處理和自然光照有機結(jié)合，使得本身含有抗凍基質(zhì)的活性種子在外界環(huán)境的脅 迫和誘導(dǎo)下，抗凍基質(zhì)成分得到了最全面、最豐富的合成和積累，經(jīng)生物酶解后可最大化溶 出，同時可使抗凍肽含量增加，提高了植物提取物的溶解性和穩(wěn)定性，進(jìn)而消除了因抗凍劑 造成的凍干粉溶解性差的問題，與膳食纖維粉、植物乳桿菌粉、益生因子科學(xué)復(fù)配，效果更 佳。
[0068] 3.本發(fā)明制備的膳食纖維粉將超微粉碎、擠壓膨化、超聲提取、高壓脈沖電場提取 和生物酶解科學(xué)結(jié)合，所得膳食纖維粉持水性、膨脹性、增稠性更強，比單一方法制備的改 性膳食纖維提高20-40%，且不受酸、堿、鹽的影響，可溶性纖維素含量高，比單一方法制備 的改性膳食纖維提高10-30%，更容易被乳酸菌利用，提高乳酸菌在人體腸道的生長及繁殖 能力，增加益生菌菌群的種類和數(shù)量，降低人體腸道pH值，改善人體腸道微生態(tài)環(huán)境;吸附 能力強，經(jīng)改性后，纖維素的比表面積增大，網(wǎng)格結(jié)構(gòu)豐富，吸附力增強，螯合、吸附膽固醇 和膽汁酸類的有機分子能力更強、抑制人體對他們的吸收；離子交換能力增強，對金屬元 素，特別是重金屬元素吸附效果更強，有效防止了人體重金屬中毒;調(diào)節(jié)和維持腸道菌群的 定植時間，增強腸道的消化和吸收能力，提高機體免疫力；有效促進(jìn)胃腸蠕動，減緩并消除 胃脹、腹脹等不良反應(yīng);強大的包埋作用可防止環(huán)境(氧氣、溫度、光照、水分活度等）因素對 凍干粉品質(zhì)的影響，進(jìn)一步穩(wěn)定了凍干粉的生物活性，延長了凍干粉的保質(zhì)期。
[0069] 4.本發(fā)明凍干粉的制備方法采用非熱加工技術(shù)，工作效率高，能源消耗少，對環(huán)境 友好，無污染，減少了食品添加劑和化學(xué)助劑的引入，有效提高了食品安全性，提高了產(chǎn)品 質(zhì)量和降低了生產(chǎn)成本，實現(xiàn)了低碳生產(chǎn)目標(biāo)，可規(guī)?；a(chǎn)業(yè)化發(fā)展。特別是：1)采用微波 干燥在使得藥食同源食品短時、低溫膨化干燥的同時主要是滅酶、固色，最大限度地保留了 藥食同源食品的天然色澤，經(jīng)微波固色后的藥食同源食品天然色澤在后續(xù)的加工過程中非 常穩(wěn)定，不會變色、褪色，色澤非常鮮艷，可保持藥食同源食品的天然色澤;2)在含有絲膠肽 的水溶液中浸泡復(fù)水，可最大限度地減少經(jīng)冷凍而造成的藥食同源食品活性物質(zhì)及冷敏性 成分的損失，提高了藥食同源食品有效成分的提取率，全程采用低溫提取工藝，將超聲清 洗、微波滅酶固色和膨化、高壓脈沖電場提取、超聲輔助微波提取、生物酶解和真空脫氣有 機結(jié)合，得到的提取物最大限度地保留了藥食同源食品的天然色澤、風(fēng)味和口感，同時使得 提取物含有的生物活性物質(zhì)和營養(yǎng)保健物質(zhì)含量最大化，原料提取率和利用率最高，降低 了提取成本;3)采用蛋清制備的蛋清泡沫對酶解液短時凝絮，進(jìn)一步提高了凍干粉的溶解 性和穩(wěn)定性;4)將提取液適度減壓濃縮，然后加入部分膳食纖維粉和抗凍劑均勻混合，可提 高混料的固形物含量，降低水分含量，減輕了凍結(jié)過程的負(fù)擔(dān)，縮短了凍干時間，提高了凍 干效率，經(jīng)超聲溶解，進(jìn)一步增強了混料的均一性、穩(wěn)定性和溶解性，進(jìn)而提高了凍干粉的 均一性、穩(wěn)定性和溶解性，提高了凍干過程的凍干率。
[0070] 需要說明的是該凍干粉的食用效果是各組分相互協(xié)同、相互作用的結(jié)果，并非簡 單的原料功能的疊加，各原料組分的科學(xué)復(fù)配和提取，產(chǎn)生的效果遠(yuǎn)遠(yuǎn)超過各單一組份功 能和效果的疊加，具有較好的先進(jìn)性和實用性。
【具體實施方式】
[0071] 下面通過具體的實施方案敘述本發(fā)明。除非特別說明，本發(fā)明中所用的技術(shù)手段 均為本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的方法。另外，實施方案應(yīng)理解為說明性的，而非限制本發(fā)明的 范圍，本發(fā)明的實質(zhì)和范圍僅由權(quán)利要求書所限定。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，在不背離本 發(fā)明實質(zhì)和范圍的前提下，對這些實施方案中的物料成分和用量進(jìn)行的各種改變或改動也 屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0072] 實施例1原料制備
[0073] 1.膳食纖維粉的制備
[0074]所述膳食纖維粉的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖維按質(zhì)量 比5: 3: 2均勻混合，超微粉碎至粒徑5mi，調(diào)整粉碎物水分含量為20%，于螺桿轉(zhuǎn)速170r/ min、溫度192°C條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量3倍的水，室溫300W、40KHz條件超聲提取 12min,然后在電場強度30kV/cm，脈沖時間500ys，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場 處理12min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5，加入混合物質(zhì)量0.2 %的生物酶，于50°C酶解35min;酶 解液減壓濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維粉；
[0075] 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比3:2:1.5:1:0.6 均勻混合。
[0076] 2.植物提取物的制備
[0077] 所述植物提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、洋蔥、沙地柏、沙冬青的種 子按質(zhì)量比15:8:4:2均勾混合，裝盤，首先于電場強度6kV/cm高壓靜電處理3min;接著在濃 度為50mg/L的水楊酸溶液中室溫浸泡3h，同時在電場強度15kV/cm，脈沖時間200ys，脈沖頻 率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理；漂洗、瀝干，于4°C靜置21h，然后依次在2°C冷藏 3d，-4°C冷凍2d、-16°C冷凍25h，立即放在室外于光照強度3萬Lx自然光照3h，使混合料半解 凍后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑1.0mm，接著加入粉碎物質(zhì)量5倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為 4.5 ;最后加入混合料液質(zhì)量1.5 %的復(fù)合酶，首先于42°C酶解20min，然后于55 °C酶解 30min;酶解液過濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為20 %即得植物提取物；
[0078] 所述復(fù)合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比6:3:2:1.5:1.5 均勻混合。
[0079] 以下實施例2-6所使用的膳食纖維粉、植物提取物均為實施例1制備。
[0080] 實施例2
[0081 ] -種枸杞提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0082]枸杞80份，膳食纖維粉35份，抗凍劑25份，益生因子6份，植物乳桿菌粉3份；
[0083]所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=45:5:2;
[0084]所述益生因子重量組成為：低聚異麥芽糖20份，低聚半乳糖20份，低聚果糖15份， 低聚木糖15份，水蘇糖8份，大豆低聚糖8份，棉子糖7份，低聚麥芽糖5份；
[0085]所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備 的，其活菌含量為:9X1012cfU/g;其中，冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備的上 述抗凍劑，濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:1。
[0086]制備方法，包括如下步驟：
[0087] 1)提取液的制備：按照配方，稱取各組份原料，首先將枸杞放入裝有1 %碳酸氫鈉 溶液的超聲波清洗機中于300W、30KHz清洗4min，瀝干，置微波干燥中于功率4kW、料層厚度 3cm、60°C、干燥5min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為10 %的絲膠肽溶液中12min，取出，于-20°C 冷凍40min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度4cm，粉碎物粒徑0.4mm,接著加入粉碎物質(zhì)量5倍 的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5，于室溫下在電場強度30kV/cm，脈沖時間400ys ,脈沖頻率 250Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理25min;然后于室溫在功率200W條件下進(jìn)行微波輻照提 取18min，同時在功率250W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取；最后真空脫氣得果蔬 汁，加入其質(zhì)量0.4 %的混合酶，于45 °C酶解40min，取酶解液質(zhì)量0.8 %的蛋清，放入攪拌機 中于轉(zhuǎn)速900r/min攪拌1 lmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解 液中，常壓煮沸2min，迅速降至室溫，90目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至40%得 枸杞提取液；
[0088] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比3:2:1.5:1.5均勻混合；
[0089] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的5%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 400W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲溶解12min，得混合液；
[0090] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-45°C，并在-45°C下預(yù)凍2.5h;然后將凍干倉內(nèi) 抽真空至18Pa后，在9h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-17°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在6h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時出 料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子均勻混合得枸杞提取物凍干 粉。
[0091] 實施例3
[0092] -種紅棗提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0093]紅棗75份，膳食纖維粉33份，抗凍劑23份，益生因子4份，植物乳桿菌粉2份；
[0094] 所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=37:2:1;
[0095] 所述益生因子重量組成為:低聚異麥芽糖15份，低聚半乳糖15份，低聚果糖10份， 低聚木糖10份，水蘇糖5份，大豆低聚糖5份，棉子糖4份，低聚麥芽糖3份；
[0096]所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備 的，其活菌含量為:8X1012cfU/g;其中，冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備的上 述抗凍劑，濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1: 〇. 6。
[0097]制備方法，包括如下步驟：
[0098] 1)提取液的制備:按照配方，稱取各組份原料，首先將紅棗放入裝有0.8%碳酸氫 鈉溶液的超聲波清洗機中于200W、20KHz清洗3min，瀝干，去核、切片，置微波干燥中于功率 3kW、料層厚度2〇11、50°(：、干燥41^11，然后浸泡在質(zhì)量百分比為8%的絲膠肽溶液中1〇1^11，取 出，于-18°C冷凍30min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3cm，粉碎物粒徑0.3mm,接著加入粉 碎物質(zhì)量4倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，于室溫下在電場強度25kV/cm，脈沖時間300ys, 脈沖頻率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理20min;然后于室溫在功率150W條件下進(jìn)行微 波輻照提取15min，同時在功率200W，頻率30KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;最后真空脫氣 得果蔬汁，加入其質(zhì)量〇. 2 %的混合酶，于40 °C酶解30min，取酶解液質(zhì)量0.5 %的蛋清，放入 攪拌機中于轉(zhuǎn)速800r/min攪拌lOmin，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加 入酶解液中，常壓煮沸l(wèi)min，迅速降至室溫，80目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至 30 %得紅棗提取液；
[0099] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比2:1:1:1均勻混合；
[0100] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的4%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 300W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲溶解lOmin，得混合液；
[0101 ] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40°C，并在-40°C下預(yù)凍2h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至15Pa后，在8h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度不 變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時出 料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子均勻混合得紅棗提取物凍干 粉。
[0102] 實施例4
[0103] -種山楂提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0104] 山楂85份，膳食纖維粉37份，抗凍劑27份，益生因子8份，植物乳桿菌粉4份；
[0105] 所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=53:8:4;
[0106] 所述益生因子重量組成為：低聚異麥芽糖25份，低聚半乳糖25份，低聚果糖20份， 低聚木糖20份，水蘇糖11份，大豆低聚糖11份，棉子糖10份，低聚麥芽糖7份；
[0107] 所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備 的，其活菌含量為:7X1012cf U/g;其中，冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備的上 述抗凍劑，濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:1.4。
[0108] 制備方法，包括如下步驟：
[0109] 1)提取液的制備:按照配方，稱取各組份原料，首先將山楂放入裝有1.2%碳酸氫 鈉溶液的超聲波清洗機中于400W、40KHz清洗5min，瀝干，預(yù)處理，置微波干燥中于功率5kW、 料層厚度4cm、70 °C、干燥6min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為12 %的絲膠肽溶液中15min，取出， 于-22°C冷凍50min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度5cm，粉碎物粒徑0.5mm，接著加入粉碎物 質(zhì)量6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5,于室溫下在電場強度35kV/cm，脈沖時間500ys，脈沖 頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理30min;然后于室溫在功率300W條件下進(jìn)行微波輻 照提取20min，同時在功率300W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;最后真空脫氣得果 蔬汁，加入其質(zhì)量0.6 %的混合酶，于50 °C酶解50min，取酶解液質(zhì)量1 %的蛋清，放入攪拌機 中于轉(zhuǎn)速l〇〇〇r/min攪拌12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶 解液中，常壓煮沸3min，迅速降至室溫，100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至50% 得山楂提取液；
[0110] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比4:3:2:2均勻混合；
[0111] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的6%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 500W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超聲溶解15min，得混合液；
[0112] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-50°C，并在-50°C下預(yù)凍3h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至20Pa后，在10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-18°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在7h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時出 料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子均勻混合得山楂提取物凍干 粉。
[0113] 實施例5
[0114] -種金銀花提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0115] 金銀花70份，膳食纖維粉30份，抗凍劑20份，益生因子2份，植物乳桿菌粉1份；
[0116] 所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=37:8:1;
[0117] 所述益生因子重量組成為:低聚異麥芽糖15份，低聚半乳糖25份，低聚果糖10份， 低聚木糖20份，水蘇糖5份，大豆低聚糖11份，棉子糖4份，低聚麥芽糖7份；
[0118] 所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC N0.11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備 的，其活菌含量為:9 X 1012cfu/g;其中，冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備的抗 凍劑，濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:0.8。
[0119] 制備方法，包括如下步驟：
[0120] 1)提取液的制備:按照配方，稱取各組份原料，首先將金銀花放入裝有0.8%碳酸 氫鈉溶液的超聲波清洗機中于400W、20KHz清洗5min，瀝干，切片，置微波干燥中于功率3kW、 料層厚度4cm、50°C、干燥6min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為8%的絲膠肽溶液中15min，取出， 于-18°C冷凍50min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度3cm，粉碎物粒徑0.5mm,接著加入粉碎物 質(zhì)量4倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為5.5,于室溫下在電場強度25kV/cm，脈沖時間500ys，脈沖 頻率200Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理30min;然后于室溫在功率150W條件下進(jìn)行微波輻 照提取20min，同時在功率200W，頻率40KHz條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;最后真空脫氣得果 蔬汁，加入其質(zhì)量0.2 %的混合酶，于50 °C酶解30min，取酶解液質(zhì)量1 %的蛋清，放入攪拌機 中于轉(zhuǎn)速800r/min攪拌12min，直至蛋清全部成為泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解 液中，常壓煮沸l(wèi)min，迅速降至室溫，100目篩網(wǎng)過濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至30%得 金銀花提取液；
[0121]所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比2:3:1:2均勻混合；
[0122] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的4%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 300-500W，頻率45KHz條件下進(jìn)行超聲溶解lOmin，得混合液；
[0123] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40°C，并在-50°C下預(yù)凍2h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至20Pa后，在8h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-18°C ;接著在凍干倉內(nèi)真空度不 變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時出 料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子均勻混合得金銀花提取物凍 干粉。
[0124] 實施例6
[0125] -種山楂、紅棗提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：
[0126] 山楂50份，紅棗40份，膳食纖維粉40份，抗凍劑30份，益生因子10份，植物乳桿菌粉 5份；
[0127] 所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=53:2:4;
[0128] 所述益生因子重量組成為：低聚異麥芽糖25份，低聚半乳糖15份，低聚果糖20份， 低聚木糖10份，水蘇糖11份，大豆低聚糖5份，棉子糖10份，低聚麥芽糖3份。
[0129] 所述植物乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC NO. 11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備 的，其活菌含量為:9 X 1012cfu/g;其中，冷凍干燥工藝采用的冷凍保護(hù)劑為本發(fā)明制備的抗 凍劑，濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:1.2。
[0130] 制備方法，包括如下步驟：
[0131] 1)提取液的制備：按照配方，稱取各組份原料，首先將山楂、紅棗分別放入裝有 0.8-1.2 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于400W、20KHz清洗5min，瀝干，去核、切片，均勻 混合，置微波干燥中于功率5kW、料層厚度2cm、70 °C、干燥4min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為 12%的絲膠肽溶液中l(wèi)Omin，取出，于-22°C冷凍30min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍料層厚度5cm， 粉碎物粒徑0.3mm，接著加入粉碎物質(zhì)量6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5，于室溫下在電場 強度35kV/cm，脈沖時間300ys，脈沖頻率300Hz條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理20min;然后于 室溫在功率300W條件下進(jìn)行微波輻照提取15min，同時在功率300W，頻率30KHz條件下進(jìn)行 超聲波輔助提取;最后真空脫氣得果蔬汁，加入其質(zhì)量0.6%的混合酶，于40°C酶解50min， 取酶解液質(zhì)量0.5 %的蛋清，放入攪拌機中于轉(zhuǎn)速1000r/min攪拌lOmin,直至蛋清全部成為 泡沫得到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸3min，迅速降至室溫，80目篩網(wǎng)過 濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至50 %得山楂、紅棗提取液；
[0132] 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比4:1:2:1均勻混合；
[0133] 2)混料:將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的5%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 500W，頻率35KHz條件下進(jìn)行超聲溶解15min，得混合液；
[0134] 3)凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-50°C，并在-40°C下預(yù)凍3h;然后將凍干倉內(nèi)抽 真空至15Pa后，在10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15°C;接著在凍干倉內(nèi)真空度 不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在7h內(nèi)逐步升溫至室溫，到凍干粉水分小于4%時出 料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子均勻混合得山楂、紅棗提取 物凍干粉。
[0135] 實施例7本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉溶解性試驗
[0136] 凍干粉作為一種主要由藥食同源食品制備的粉劑，參照固體飲料的穩(wěn)定性標(biāo)準(zhǔn)， 將溶解時間、溶解后澄明度確定為凍干粉的質(zhì)量穩(wěn)定性指標(biāo)，它不僅直接反映了產(chǎn)品的溶 解程度，亦反映了產(chǎn)品內(nèi)在質(zhì)量及穩(wěn)定性，是凍干粉最重要質(zhì)控指標(biāo)。
[0137] 溶解時間：按質(zhì)量比1:5加入55_65°C溫水，充分?jǐn)嚢?，完全溶解的時間；
[0138] 澄明度表征方法:澄清透明90-100分;微濁80-89分;渾濁70-79分；較混濁60-69 分;嚴(yán)重渾濁50-59分;沉淀49分以下(沉淀顆粒越大、數(shù)量越多，分?jǐn)?shù)越低）。
[0139] 將本發(fā)明實施例2制備的枸杞提取物凍干粉和市售同類型、同規(guī)格、同生產(chǎn)日期的 枸杞提取物凍干粉于玻璃杯中溶解后，靜置，觀察澄明度，每5min觀察記錄結(jié)果一次，結(jié)果 見表1:
[0140]表1:溶解后凍干粉澄明度檢測結(jié)果
[0142] 以上結(jié)果表明：本發(fā)明凍干粉和市售凍干粉相比，溶解性較好，溶解時間短，溶解 后的溶液穩(wěn)定性強，澄清度高，外觀質(zhì)量較好，隨著靜置時間的延長，市售凍干粉溶液液相 相對不穩(wěn)定，產(chǎn)生沉淀，大大影響了飲料的外觀質(zhì)量和內(nèi)在質(zhì)量，同時也說明本發(fā)明凍干粉 內(nèi)在質(zhì)量較好，食用效果安全、穩(wěn)定。
[0143] 需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣具 有上述實驗效果，各實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0144] 實施例8食用活性藥食同源食品提取物凍干粉后總膽固醇的變化
[0145] 選總膽固醇180mg/dl-250mg/dl的成年人48名，男女各半，隨機分成三組；第一組 每天晚餐飲用200毫升礦泉水;第二組每天晚餐沖飲普通市售枸杞提取物凍干粉40g，按質(zhì) 量比1:5加入55-65 °C溫水，充分?jǐn)嚢?，完全溶?第三組每天晚餐沖飲本發(fā)明實施例2的枸 杞提取物凍干粉80g，按質(zhì)量比1:5加入55-65 °C溫水，充分?jǐn)嚢?，完全溶?期間每天食用同 樣的食物，食物包括肉、蛋、蔬菜和水果。分別在實驗開始的前一天和第20、40、60天采集試 驗者的血液，測定血液中的總膽固醇含量，結(jié)果如表2:
[0146] 表2:血液中總膽固醇含量檢測結(jié)果
[0148] 由上表可知沖飲本發(fā)明實施例2的枸杞提取物凍干粉后，成年人血液中的總膽固 醇的含量發(fā)生明顯變化。與普通市售枸杞提取物凍干粉相比，本發(fā)明枸杞提取物凍干粉對 成年人血液中的總膽固醇的含量明顯的降低，而礦泉水組成年人血液中的總膽固醇的含量 明顯的增加，市售枸杞提取物凍干粉雖然有所降低，但與本發(fā)明產(chǎn)品相比，效果不顯著，由 此可知，本發(fā)明采用具有降低膽固醇特性的特定菌株制備的凍干粉具有很好的降低膽固醇 的保健效果。
[0149] 需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6所制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣 具有上述技術(shù)效果，各實施例之間差異性不顯著。
[0150] 實施例9本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉保質(zhì)期內(nèi)植物乳桿菌活菌含量 穩(wěn)定性試驗
[0151] 取本發(fā)明實施例2制備的枸杞提取物凍干粉于室溫22-25°C、通風(fēng)條件下分別儲藏 3個月、6個月、12個月、24個月、36個月并測定植物乳桿菌活菌含量，結(jié)果如表3:
[0152] 表3:保質(zhì)期內(nèi)植物乳桿菌活菌含量檢測結(jié)果
[0155] 以上結(jié)果表明：本發(fā)明凍干粉的儲存穩(wěn)定性極好，抗環(huán)境(冷熱溫度、濕度、氧氣、 光照、水分等）影響因素能力大，保質(zhì)期內(nèi)植物乳桿菌活菌含量損失率最大（36個月）為 10%，比現(xiàn)有的同類產(chǎn)品活菌含量高、損失率低、保質(zhì)期長，同時反映出凍干粉的其它生物 活性成分具有同樣的儲存穩(wěn)定性。
[0156] 需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣具 有上述實驗效果，各實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0157] 實施例10本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉的感官品評試驗
[0158] 邀請24名人員對本發(fā)明實施例2制備的枸杞提取物凍干粉與市售兩種同類相同生 產(chǎn)日期的凍干粉進(jìn)行品評，感官打分，其中專業(yè)和非專業(yè)人員各12名，專業(yè)人員青年、中年、 老年各4名，男女各半，非專業(yè)人員少年、青年、中年、老年各3名，男女各半；打分包括外觀 (20分）、質(zhì)地(25分）、風(fēng)味（30分）、口感(25分）四個方面，打分人員獨立進(jìn)行，互不影響，以 保證品評結(jié)果準(zhǔn)確。對品評結(jié)果進(jìn)行了統(tǒng)計，均分值取近似值，保留整數(shù)，具體見表4:
[0159] 表4:感官品評統(tǒng)計結(jié)果
[0160]
[0161] 注：同一行內(nèi)標(biāo)不同小寫字母表示差異顯著(P<0.05)，標(biāo)不同大寫字母表示差異 極顯著(P<〇.01)，標(biāo)有相同字母表示差異不顯著(P>〇.05)。
[0162] 以上結(jié)果表明，本發(fā)明制備的凍干粉從外觀、質(zhì)地、風(fēng)味和口感任何一方面都要明 顯優(yōu)于市售凍干粉，特別是外觀、風(fēng)味和口感極好，最大限度地保留了藥食同源食品原料的 天然色澤、口感和風(fēng)味，同時也適合不同年齡段、不同消費層次的消費者食用。
[0163] 需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣具 有上述實驗效果，各實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0164] 實施例11本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉益生性試驗
[0165] 將本發(fā)明實施例2制備的枸杞提取物凍干粉，用無菌水制備成活菌數(shù)為2 X 101()CFU/mL的植物乳桿菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0166] 1、取保存好的10mL植物乳桿菌溶液注入到試管1中，采用十倍逐級稀釋至1(T8,取 lmL稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板(滅菌)上，迅速搖 勻。再將裝有10mL植物乳桿菌溶液的試管2置于80-90°C水浴鍋中加熱15-25min，取加熱后 的植物乳桿菌溶液進(jìn)行十倍逐級稀釋至1(T 8,取lmL稀釋液在平板上，將滅菌后冷卻至45°C 的MRS瓊脂培養(yǎng)基傾注在平板(滅菌）上并迅速搖勻。最后將加熱前和加熱后的平板均在35 °C條件下培養(yǎng)24h，計算加熱前后的數(shù)量。
[0167] 結(jié)果表明，活菌存活率達(dá)到了88%以上。
[0168] 2、模擬胃液及腸液的耐受試驗：取100g/L的鹽酸16.4mL加蒸餾水稀釋，使pH值分 別為1.5、2.5和3.5，取10〇!^稀鹽酸溶液，分別加入4胃蛋白酶，使其充分溶解，得模擬胃 液，微孔濾膜除菌(0 ? 22wn)備用。取磷酸二氫鉀6 ? 8g，加水500mL使溶解，用0 ? ImoL/L氫氧化 鈉溶液調(diào)節(jié)pH值至6.8;另取胰蛋白酶10g，加水100mL使溶解，將兩液混合后，加水稀釋至 1000ml，得模擬腸液，微孔濾膜除菌(0.22m)備用。取lmL保存好的植物乳桿菌溶液加入到 9mL的模擬胃液中（即十倍逐級稀釋），并迅速在振蕩器上充分混勻，然后置于30-45°C靜置 培養(yǎng)2-4h。分別在11 1、211、311、411的時候取出培養(yǎng)液并立即計數(shù)殘存活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行 比較，結(jié)果表明，活菌存活率為98 %。然后取在人工胃液中消化不同時間的培養(yǎng)液各lmL，分 別接種于9mL pH值為6.8的人工腸液中，置于30-45°(：靜置培養(yǎng)2-411，并分別在0、3、6、2411取 樣，測定其活菌數(shù)，與原活菌數(shù)進(jìn)行比較，結(jié)果表明活菌存活率為99%。
[0169] 3、模擬膽鹽的耐受試驗:用胰液素制成lg/L的溶液，并在溶液中加入0.8%的豬膽 鹽，用10 %的NaOH調(diào)整pH為8.0，然后用0.45mi微濾膜過濾并除菌。將0.5mL保存好的植物乳 桿菌溶液接種到4.5mL模擬膽鹽中，培養(yǎng)24h后得到培養(yǎng)液，計數(shù)殘存的活菌數(shù)。將培養(yǎng)液在 滅菌生理鹽水中十倍逐級稀釋至1(T8,并用MRS傾注，然后置于35°C靜置培養(yǎng)24h。結(jié)果表明 活菌存活率為99 %。
[0170]以上試驗結(jié)果表明，本發(fā)明凍干粉中的植物乳桿菌益生性(耐熱性、耐pH性、耐膽 鹽)較強，非常適合人體胃腸環(huán)境，在模擬胃腸環(huán)境中存活率大，可有效改善胃腸功能。 [0171]需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣具 有上述實驗效果，各實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0172] 實施例12本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉小鼠腸道性能試驗
[0173] 將本發(fā)明實施例2制備的枸杞提取物凍干粉，用無菌水制備成活菌數(shù)為2 X 101()CFU/mL的植物乳桿菌溶液，于4°C保存?zhèn)溆茫?br>[0174] 選取普通昆明小白鼠60只，雌雄各半，18_20g，常規(guī)詞養(yǎng)。從中隨機挑選40只，每天 早晨9:00灌胃鹽酸林可霉素0.2mL(20mg)/只，其它作為對照組，每天同一時間灌胃等量滅 菌生理鹽水，連續(xù)一周，制備腸道菌群失調(diào)的小鼠模型。模型組小鼠飲食下降，未出現(xiàn)死亡 和明顯的腹瀉現(xiàn)象，排軟糞，外形正常含水分較多，墊料潮濕。將40只腸道菌群失調(diào)小鼠，隨 機分為2組，一組20只作為治療組，每天灌胃保存好的植物乳桿菌溶液0.5ml (2 X 101()cfU/ ml)/只，另20只作為自然恢復(fù)組，每天同一時間灌胃等量滅菌生理鹽水，連續(xù)兩周。整個試 驗期21天，每天觀察小白鼠的生長和排便情況，于第8、21天對凍干粉治療組和自然恢復(fù)組 的小鼠進(jìn)行稱重，計算各組體重平均增長率，結(jié)果如表5;每5天測各組小鼠糞便大腸桿菌數(shù) 量，計算平均數(shù)，結(jié)果如表6。取小鼠糞便約0. lg，于無菌操作臺內(nèi)加入3粒玻璃珠（以0. lg糞 樣加0.5mL稀釋液），稀釋并接種麥康凱瓊脂培養(yǎng)基，計算每克濕便中的大腸桿菌數(shù)。
[0175] 表5:小鼠增重情況
[0177]表6:小鼠糞便中大腸桿菌數(shù)的情況
[0179] 凍干粉治療組小鼠體重平均增長率(67.96%)顯著高于自然恢復(fù)組(32.14%);飼 喂溶液后腸道大腸桿菌數(shù)量顯著下降，降低97.07%，顯著低于自然恢復(fù)組(24.78%)，表明 本發(fā)明凍干粉中的植物乳桿菌在小白鼠腸道內(nèi)迅速定植，形成優(yōu)勢菌群，并有效抑制大腸 桿菌等病原菌的生長繁殖，并且定植時間長，持續(xù)、有效改善了腸道性能。
[0180] 需要說明的是:本發(fā)明實施例3-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉同樣具 有上述實驗效果，各實施例之間及與上述實驗效果差異性不大。
[0181] 實施例13本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對機體免疫力的影響
[0182] 1實驗?zāi)康?br>[0183] 通過運動耐力測試(小鼠游泳試驗），驗證本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉 的提高免疫力、抗疲勞作用。
[0184] 2實驗材料與試劑
[0185] 2.1供試藥物：
[0186] 市售活性藥食同源食品提取物凍干粉(G1);市售活性藥食同源食品提取物凍干粉 (G2);本發(fā)明實施例2-6制備的活性藥食同源食品提取物凍干粉(G3-G7)。
[0187] 2.2試劑：
[0188] 肝/肌糖原測試盒，購自南京建成生物制品研究所;濃硫酸(AR)，南京化學(xué)試劑有 限公司；生理鹽水，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
[0189] 3 ?實驗動物
[0190] ICR小鼠，d，清潔級，體重18-22g，由寧夏醫(yī)科大學(xué)比較醫(yī)學(xué)中心提供，實驗期間小 鼠自由飲食。
[0191] 4.主要儀器
[0192] 錯制游泳箱（50cmX 50cmX 40cm)，鉛絲，低溫高速離心機：5804R型，Eppendrof公 司；水浴鍋:DK-S26型，上海精宏實驗設(shè)備有限公司；電子稱:BS224S型，Sartorius公司；秒 表，溫度計
[0193] 5.實驗分組
[0194] 5.1劑量分組及受試樣品給予時間隨機將小鼠分為8組，每組10只，第1組至第7組 分別給G1~G7的藥物，第8組為空白對照組，給予等體積的雙蒸水，每組每日均灌胃1次，灌 胃體積為0.2ml/10g，連續(xù)給予受試樣品30天。
[0195] 5.2樣品配制第1組至第7組:稱取2.25g藥物樣品，用蒸餾水配至150ml;空白對照 組:雙蒸水150ml。
[0196] 6.實驗方法
[0197] 6.1負(fù)重游泳實驗?zāi)┐谓o藥30min后，置小鼠于游泳箱中，水深不少于30cm，水溫25 ±rc，鼠尾根部負(fù)荷5%體重的鉛皮，記錄小鼠游泳開始至死亡的時間，作為小鼠游泳時 間。
[0198] 6.2小鼠血清尿素測定末次給藥3〇1^11后，在溫度為30°(：的水中不負(fù)重游泳9〇111111， 休息60min后摘眼球采血0.5mL (不加抗凝劑），置4°C冰箱3h，血凝固后2000r/min離心 15min，取血清送寧夏醫(yī)科大學(xué)附屬醫(yī)院檢驗科檢測。
[0199] 6.3肝糖原的測定末次給藥3〇1^11后，在溫度為25±1°(：的水中不負(fù)重游泳9〇111111， 頸椎脫臼處死小鼠，用生理鹽水洗凈，并用濾紙吸干水分后，準(zhǔn)確稱取肝臟l〇〇mg，肝糖原檢 測試劑盒檢測小鼠肝糖原含量。
[0200] 6.4血乳酸的測定末次給藥30min后采血，然后不負(fù)重在溫度為30 °C的水中游泳 lOmin后停止。乳酸儀測定方法:分別在游泳前、游泳后、游泳后休息20min后各采血20yL加 入40此破膜液中，立即充分振蕩破碎細(xì)胞用乳酸儀測定。（血乳酸曲線下面積= 5X(游泳前 血乳酸值+3 X游泳后Omin的血乳酸值+2 X游泳后20min的血乳酸值）
[0201] 7.觀察指標(biāo)負(fù)重游泳時間，血乳酸、尿素、肝糖原值
[0202] 8.統(tǒng)計方法實驗數(shù)據(jù)用g ± 表示，采用t檢驗進(jìn)行組間比較
[0203] 9 ?實驗結(jié)果
[0204] 9.1本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠體重的影響
[0205] 各組小鼠在給予G1~G9藥物后，前、中，后期體重分別見下表所示，各組小鼠的初 始體重和增重體重與對照組比較均無統(tǒng)計學(xué)差異(P>〇.05)，表明G1~G9藥物均無明顯的 毒性。實驗結(jié)果詳見表7。
[0206] 表7負(fù)重游泳實驗小鼠的初始體重、中期體重和結(jié)束體重(^士.s-；)
[0208] 9.2本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠負(fù)重游泳時間的影響
[0209] 經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對照組比較，可以明顯延長小鼠 負(fù)重游泳時間，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉G3~G7 藥物與空白對照組比較，可以顯著延長小鼠負(fù)重游泳時間，具有極顯著性差異(P<〇.01)， 且明顯優(yōu)于G1~G2藥物。結(jié)果詳見表8。
[0210]表8活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠負(fù)重游泳時間的影響土幻
[0213] "*"p〈0.05vs 空白對照；
[0214] "**"口〈〇.〇1￥8空白對照；
[0215] 9.3本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠運動前后血乳酸的影響
[0216] 經(jīng)口給予小鼠本發(fā)明的活性藥食同源食品提取物凍干粉后，本發(fā)明活性藥食同源 食品提取物凍干粉G3~G7藥物對小鼠運動后血乳酸曲線下面積與對照組比較有統(tǒng)計學(xué)差 異(P<0.05)，G1~G2藥物組小鼠血乳酸曲線下面積與對照組比較雖有所降低，但并無統(tǒng)計 學(xué)差異(P> 0.05)。結(jié)果見表9。
[0217] 表9本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠運動前后血乳酸水平的影響 (.'V士 .s')
[0219] "*"p〈0.05vs 空白對照；
[0220] 9.4本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠肝糖原的影響 [0221 ]經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物與空白對照組比較，小鼠肝糖原含量均 有明顯的升高，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉G3~G7 藥物與與空白對照組比較，小鼠肝糖原含量均有明顯的升高，具有極顯著性差異（P< 0.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2藥物。結(jié)果詳見表10。
[0222]表10本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠肝糖原含量的影響
[0224] "*"p〈0.05vs 空白對照；
[0225] "**"口〈0.01￥8空白對照；
[0226] 9.5本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠血清尿素的影響
[0227] 經(jīng)口給予小鼠G1~G7藥物后，G1~G2藥物組與空白對照組比較，小鼠運動后血清 尿素含量均有明顯的降低，具有顯著性差異(P<〇.05)，本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍 干粉G3~G7藥物與與空白對照組比較，小鼠運動后血清尿素含量均有明顯的降低，具有極 顯著性差異(P<〇.01)，且明顯優(yōu)于G1~G2藥物。結(jié)果詳見表11。
[0228] 表11本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉對小鼠血清尿素含量的影響（：^±.〇
[0230] "*"p〈0.05vs 空白對照；
[0231] "**"p〈0.01VS 空白對照；
[0232] 10.實驗結(jié)論
[0233] 本實驗主要通過小鼠負(fù)重游泳實驗，同時檢測小鼠肝糖原的儲備來觀察本發(fā)明活 性藥食同源食品提取物凍干粉提高免疫力、抗疲勞的效果。初步研究結(jié)果顯示如下：
[0234] 1、本發(fā)明G3~G7活性藥食同源食品提取物凍干粉均能延長小鼠負(fù)重游泳時間（P <〇.〇1)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2的活性藥食同源食品提取物凍干粉。
[0235] 2、生化檢測方面顯示，本發(fā)明G3~G7活性藥食同源食品提取物凍干粉各劑量組均 能減少運動后小鼠血清中葡萄糖無氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，與對照組比較有顯著性差異 (P<0.05)，而其它G1~G2的活性藥食同源食品提取物凍干粉雖然也能減少運動后小鼠血 清中葡萄糖無氧酵解所產(chǎn)生的乳酸含量，但與對照組比較，無統(tǒng)計學(xué)差異(P>〇.05);
[0236] 3、本發(fā)明G3~G7活性藥食同源食品提取物凍干粉各劑量組均能顯著提高小鼠肝 臟中糖原的儲備(P<〇.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2的活性藥食同源食品提取物凍干 粉；
[0237] 4、高尿酸模型發(fā)現(xiàn)，本發(fā)明G3~G7活性藥食同源食品提取物凍干粉能顯著降低小 鼠游泳后血清中尿素的含量(P<〇.01)，且效果明顯優(yōu)于其它G1~G2活性藥食同源食品提 取物凍干粉；
[0238] 11.結(jié)論
[0239]上述實驗證明本發(fā)明活性藥食同源食品提取物凍干粉能顯著提高機體免疫力，提 高小鼠的體力和耐力，降低小鼠運動后血清中尿素及乳酸的含量，且能顯著提高小鼠肝臟
【主權(quán)項】
1. 一種活性藥食同源食品提取物凍干粉，主要由以下重量份數(shù)的原料制備：藥食同源 食品70-90份，膳食纖維粉30-40份，抗凍劑20-30份，益生因子2-10份，植物乳桿菌粉1-5份； 所述抗凍劑是以含有抗凍基質(zhì)的天然植物種子為原料制備的植物提取物與海藻糖、絲 膠肽學(xué)復(fù)配、充分溶解而成； 所述抗凍劑的質(zhì)量組成為:植物提取物:海藻糖:絲膠肽=37-53:2-8:1-4。2. 如權(quán)利要求1所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，主要由以下重量 份數(shù)的原料制備:藥食同源食品75-85份，膳食纖維粉33-37份，抗凍劑23-27份，益生因子4-8份，植物乳桿菌粉2-4份。3. 如權(quán)利要求1所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，主要由以下重量 份數(shù)的原料制備:藥食同源食品80份，膳食纖維粉35份，抗凍劑25份，益生因子6份，植物乳 桿菌粉3份。4. 如權(quán)利要求1-3任一所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，所述膳食 纖維粉的制備方法，包括以下步驟:將菊粉、蘋果纖維、小麥纖維按質(zhì)量比4-6:2-4:1-3均勻 混合，超微粉碎至粒徑3_6μπι，調(diào)整粉碎物水分含量為19-21%，于螺桿轉(zhuǎn)速160-18(^/1^11、 溫度185-200°C條件擠壓膨化，加入膨化物質(zhì)量2-4倍的水，室溫200-400W、35-40KHz條件超 聲提取l〇_15min，然后在電場強度20-40kV/cm，脈沖時間400-600ys,脈沖頻率200-400HZ條 件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理10-15min;用乳酸調(diào)節(jié)pH值為4.5-6.5,加入混合物質(zhì)量0. Ιο. 3% 的生物酶 ，于 45-55 °C 酶解 2〇-48min; 酶解液減壓濃縮、冷凍干燥即得膳食纖維粉； 所述生物酶為纖維素酶、木聚糖酶、漆酶、果膠酶、單寧酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-2:0.5_ 1.5:0.2-1均勻混合。5. 如權(quán)利要求1-3任一所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，所述植物 提取物的制備方法，包括如下步驟:將冬黑麥、洋蔥、沙地柏、沙冬青的種子按質(zhì)量比13-17: 5-11:3-5:1-3均勻混合，裝盤，首先于電場強度5-7kV/cm高壓靜電處理2-4min;接著在濃度 為40-60mg/L的水楊酸溶液中室溫浸泡2-4h，同時在電場強度10-20kV/cm，脈沖時間150-25(^ 8，脈沖頻率150-250他條件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理；漂洗、瀝干，于3-5°(：靜置18-24h，然后依次在1-3°C冷藏2-4d，-3-5°C冷凍l-3d、-15-18°C冷凍20-30h，立即放在室外 于光照強度0.5-5萬Lx自然光照2-4h，使混合料半解凍后立即進(jìn)行粉碎，粉碎物粒徑0.5-1.5mm,接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值為3.5-5.5;最后加入混合料液質(zhì) 量1-2 %的復(fù)合酶，首先于35-50°C酶解10_30min，然后于50-60°C酶解20-40min;酶解液過 濾、濾液減壓濃縮至固形物含量為15-25 %即得植物提取物； 所述復(fù)合酶為纖維素酶、蛋白酶、淀粉酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比5-7:2-4:1-3:1-2: 1-2均勻混合。6. 如權(quán)利要求1-3任一所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，所述植物 乳桿菌粉是以植物乳桿菌CGMCC NO. 11763為出發(fā)菌株按常規(guī)方法制備的，其活菌含量為:7 X1012-9X1012cfu/g〇7. 如權(quán)利要求6所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉，其特征在于，所述植物乳桿菌 粉制備時濕菌體與抗凍劑混合的質(zhì)量比為1:0.6-1.4。8. 如權(quán)利要求1-7任一所述活性藥食同源食品提取物凍干粉的制備方法，其特征在于， 包括如下步驟： 1) 提取液的制備：按照配方，稱取各組份原料，首先將藥食同源食品放入裝有0.8-1.2 %碳酸氫鈉溶液的超聲波清洗機中于200-400W、20-40KHZ清洗3-5min，瀝干，預(yù)處理，置 微波干燥中于功率3-5kW、料層厚度2-4cm、50-70 °C、干燥4-6min，然后浸泡在質(zhì)量百分比為 8-12%的絲膠肽溶液中10-15min，取出，于-18-22°C冷凍30-50min后立即進(jìn)行粉碎，冷凍 料層厚度3-5cm，粉碎物粒徑0.3-0.5mm，接著加入粉碎物質(zhì)量4-6倍的水，用乳酸調(diào)節(jié)pH值 為3.5-5.5，于室溫下在電場強度25-35kV/cm，脈沖時間300-500ys，脈沖頻率200-300HZ條 件下進(jìn)行高壓脈沖電場處理20_30min;然后于室溫在功率150-300W條件下進(jìn)行微波輻照提 取15-20min，同時在功率200-300W，頻率30-40KHZ條件下進(jìn)行超聲波輔助提取;最后真空脫 氣得果蔬汁，加入其質(zhì)量〇. 2-0.6 %的混合酶，于40-50°C酶解30-50min，取酶解液質(zhì)量0.5-1 %的蛋清，放入攪拌機中于轉(zhuǎn)速800-1000r/min攪拌10-12min,直至蛋清全部成為泡沫得 到蛋清泡沫，將蛋清泡沫加入酶解液中，常壓煮沸l(wèi)_3min，迅速降至室溫，80-100目篩網(wǎng)過 濾，濾液減壓濃縮至固形物含量至30-50 %得藥食同源食品提取液； 所述混合酶為纖維素酶、蛋白酶、果膠酶、脂肪酶按質(zhì)量比2-4:1-3:1-2:1-2均勻混合； 2) 混料：將抗凍劑和膳食纖維粉質(zhì)量的4-6%依次加入提取液中，均勻混合，在功率 300-500W，頻率35-45KHZ條件下進(jìn)行超聲溶解10-15min，得混合液； 3) 凍干:混合液置凍干倉內(nèi)速凍至-40~-50 °C，并在-40~-50 °C下預(yù)凍2~3h;然后將 凍干倉內(nèi)抽真空至15~20Pa后，在8-10h內(nèi)逐步升溫并控制混合液最終溫度在-15~-18°C; 接著在凍干倉內(nèi)真空度不變的情況下，調(diào)節(jié)凍干倉內(nèi)溫度使其在5_7h內(nèi)逐步升溫至室溫， 到凍干粉水分小于4%時出料，無菌條件下與植物乳桿菌粉、剩余的膳食纖維粉、益生因子 均勻混合得活性藥食同源食品提取物凍干粉。9. 如權(quán)利要求8所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉的制備方法，其特征在于，所述 益生因子重量組成為:低聚異麥芽糖15-25份，低聚半乳糖15-25份，低聚果糖10-20份，低聚 木糖10-20份，水蘇糖5-11份，大豆低聚糖5-11份，棉子糖4-10份，低聚麥芽糖3-7份。10. 如權(quán)利要求8所述的活性藥食同源食品提取物凍干粉的制備方法，其特征在于，所 述藥食同源食品為山楂、枸杞、紅棗、沙棘、羅漢果、金銀花、茯苓、百合、蓮子、葛根中的任意 一種或幾種以任意比例混合。
【文檔編號】A23L33/135GK105852142SQ201610204696
【公開日】2016年8月17日
【申請日】2016年4月5日
【發(fā)明人】邵素英
【申請人】邵素英