專利名稱：制備含dna物品的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備含DNA物品的方法。
背景技術(shù)：
DNA是存在于細(xì)胞器的染色體中的基本遺傳物質(zhì)。因?yàn)镈NA中存儲有遺傳信息，所以它己成為生物和醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中廣泛研究的對象。然而，因從活體組織中僅能獲取少量的DNA，則在研究該DNA之前，必須將DNA的目標(biāo)序列擴(kuò)增?，F(xiàn)已知有許多擴(kuò)增DNA目標(biāo)序列的方法和儀器[Mullis,K.等，體外DNA特定的酶擴(kuò)增聚合酶鏈反應(yīng)(Specific enzymaticamplification of DNA in vitro:the polymerase chain reaction.),Cold Spring Harbor Symp.Quant.Biol.51,263-273,1986；美國專利4,683,195、4,683,202和4,889,818,韓國專利126,231]。
本發(fā)明人觀察到DNA能代表供體的獨(dú)有特征。利用該觀察結(jié)果，發(fā)明人制備了含DNA的物品，特別是其能長時(shí)間保存并具有吸引人的外觀。若該物品為固體，可將擴(kuò)增的DNA植入其中；若該物品為無定形，可將擴(kuò)增的DNA與其混合。這樣就制備了所述物品，其通過包含供體獨(dú)有特征來代表DNA的供體。
附圖簡要說明

圖1所示為一個(gè)鑰匙鏈，其含有根據(jù)本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例制備的一個(gè)DNA混合物、以及HLA DNA帶；圖2所示為一個(gè)項(xiàng)鏈，其是根據(jù)本發(fā)明另一實(shí)施例制備的；圖3所示為一個(gè)項(xiàng)鏈，其是根據(jù)本發(fā)明再一實(shí)施例制備的。
在圖中每個(gè)數(shù)字標(biāo)號具有下列含義1．鑰匙鏈2．HLA DNA帶3．DNA供體的照片4．絲印簽名5．含有DNA的溶液6．水10、20.項(xiàng)鏈實(shí)施本發(fā)明的最件方式本發(fā)明的目的是提供一種制備固體物品的方法，如裝飾品、唱片和文具等，通過將供體的DNA注入物品而使其含有DNA，本發(fā)明還提供了一種制備無定形物品的方法，如香水和墨水，通過將供體的DNA與物品混合而使其含有DNA。這兩種方法采用了DNA提取和擴(kuò)增技術(shù)。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；將擴(kuò)增的DNA的溶液通過空腔的開口注入物品內(nèi)的空腔；最后封好空腔的開口。
另一種辦法是，將擴(kuò)增的DNA的溶液干燥成膠態(tài)或固態(tài)并且將干燥的DNA放入所述固體物品的空腔內(nèi)。
根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)實(shí)施例，其提出了一種制備含DNA的無定形物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；將擴(kuò)增的DNA的溶液與物品混合。
另一種辦法是，將擴(kuò)增的DNA的溶液干燥成膠態(tài)或固態(tài)并且將干燥的DNA與無定形物品混合。
根據(jù)本發(fā)明的再一個(gè)實(shí)施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；將擴(kuò)增的DNA置于聚丙烯酰胺膠體中形成電泳；將形成電泳的DNA染色；將含有染色了的DNA的膠體干燥以得到膠體膜；并將膠體膜應(yīng)用于物品表面。
根據(jù)本發(fā)明的還一個(gè)實(shí)施例，其提出了一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲取含有DNA的樣品；從樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；用擴(kuò)增的DNA制取HLA DNA帶；并且將該HLA DNA帶應(yīng)用于物品表面。
本發(fā)明也提供了采用上述任何一種方法制備的、含有DNA的物品。
DNA供體可以是任何具有DNA的有機(jī)活體，包括人類在內(nèi)。由于對該物品的需求，與名人有關(guān)的被紀(jì)念的人物，如政治領(lǐng)袖、宗教領(lǐng)袖、作家、電影明星、體育明星和歌手，是優(yōu)選的DNA供體。然而，家庭成員、團(tuán)體成員或?qū)櫸镆部墒枪w，因?yàn)榕c這些供體相關(guān)的物品分別地對于其他家庭成員、團(tuán)體成員或?qū)櫸镏魅耸怯幸饬x的。
所述DNA樣品可以是能從供體獲取并包含供體的DNA的任何部分或樣品。對于人DNA供體來說，血液、毛發(fā)、皮膚組織、指甲、趾甲等等可方便地用做DNA樣品。
DNA可用各種已知方法提取和復(fù)原，但這些方法可根據(jù)被使用的DNA樣品調(diào)整[Buffone等，不用苯酚提取而從生物學(xué)樣品中分離DNA(Isolation of DNA from biological specimens without extractionwith phenol.)Clin.Chem.31:164-165,1985]。如果，例如，樣品是血液，將EDTA血液和紅細(xì)胞(RBC)溶胞緩沖液與該樣品混合并且將該混合液離心分離。由此獲得的分離物與Chelex樹脂混合并煮沸以提取DNA。
根據(jù)本發(fā)明，天然基因組的DNA可被用來制備含DNA的物品。然而，因僅有少量天然DNA可被從樣品中提取出來，所以優(yōu)選將提取出的天然DNA擴(kuò)增。
DNA擴(kuò)增可通過聚合酶鏈反應(yīng)，或通過兩步擴(kuò)增來實(shí)現(xiàn)，其中兩步擴(kuò)增即第一步擴(kuò)增包括一個(gè)聚合酶鏈反應(yīng)，第二步擴(kuò)增包括將在第一步中擴(kuò)增了的DNA插入載體以獲得重組質(zhì)粒，將該重組質(zhì)粒植入宿主細(xì)胞，培養(yǎng)被重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細(xì)胞，并分離如此大量產(chǎn)生的重組質(zhì)粒。
所述聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)可根據(jù)Mullis等人的方法，利用傳統(tǒng)聚合酶鏈反應(yīng)工具來實(shí)現(xiàn)?；蛟噭┖?HLA基因型試劑盒，Inno-lipa有限公司)可方便地用于擴(kuò)增過程。
在采用質(zhì)粒的第二步擴(kuò)增過程中，通過聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增的DNA可被克隆，例如，通過利用TA克隆試劑盒(Invitrogen)。另外，擴(kuò)增的DNA可無需dNTP而在含有T4 DNA聚合酶的媒介物中反應(yīng)15分鐘，然后再與dNTP反應(yīng)15分鐘以獲得鈍端DNA，其中從該DNA每端突出的T和A堿基已被移除。另外，用于克隆過程的適當(dāng)?shù)妮d體被諸如SmaⅠ的鈍端限制酶分裂。對于如此獲得的載體，鈍端DNA被T4 DNA連接酶連接。
如此構(gòu)造的質(zhì)?？杀灰脒m當(dāng)?shù)乃拗骷?xì)胞用以大量分離重組質(zhì)粒。該宿主細(xì)胞可以是E.coli HB101、E.coli CSH 41，等等。根據(jù)本發(fā)明被所述質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細(xì)胞采用Luria Broth(LB)媒介物培養(yǎng)，然后，可用Birnboin & Doly的方法(1979)來提取和分離該大量產(chǎn)生的質(zhì)粒。
得到的DNA溶液可通過空腔的開口注入固體物品內(nèi)的空腔，然后封住空腔的開口以得到含有DNA的物品。另外可行的是，該DNA溶液可干燥成膠態(tài)或固態(tài)，并且將該干燥的DNA注入固體物品的空腔中。在注入物品前，該DNA溶液或干燥的DNA可被染色以使其看起來更清晰。在注入物品前，該DNA溶液可用染色試劑染色，如溴酚藍(lán)或苯酚紅以及可選擇地與甘油混合。
在說明書和權(quán)利要求書中，“固體”物品是指任何具有一定形狀的物體，其可非限制性包括首飾如戒指、項(xiàng)鏈、耳環(huán)，書寫用具如筆、鋼筆、鉛筆、鉛筆盒，以及鑰匙鏈，洋娃娃，玩具，鞋，書包，手包，錢包，唱片，CD片。
所述物品的空腔，即DNA注入處，可由傳統(tǒng)加工方法制成。為了增強(qiáng)由染色DNA帶來的裝飾效果，該固體物品的空腔優(yōu)選為一異形。透明部分可以是各種形狀。根據(jù)本發(fā)明的含有DNA的物品可進(jìn)一步被下列的方法修飾，如雙鏈DNA螺旋線圖、簽字和/或DNA供體的照片以表明該物品含有供體的DNA。
所述擴(kuò)增的DNA的溶液在與無定形物品混合前可選擇地被干燥?！盁o定形”物品是指任何不具有一定形狀的物品，其可非限制性包括如下物品，如香水、墨水、墨汁和染料等。
根據(jù)本發(fā)明實(shí)施例，所述擴(kuò)增的DNA可在聚丙烯酰胺膠體中形成電泳，染色并干燥以獲得含有DNA的膠體膜。得到的膠體膜可用于固體物品表面。
當(dāng)從血液樣品中提取DNA時(shí)，HLA DNA帶可用于物品表面以起到裝飾效果。所述DNA供體的特殊特性可由此通過該HLA DNA帶展示出來。
所述HLA DNA帶可按如下方法制備。從血液樣品中提取DNA并將其擴(kuò)增。擴(kuò)增的DNA可與諸如從Inno-lipa有限公司獲得的試劑盒帶反應(yīng)。因用來識別白細(xì)胞的各種DNA序列的探針存在于該帶上，所以這些探針通過形成堿基對而與DNA結(jié)合。若將可與DNA反應(yīng)的染色試劑加到該帶上，則染色試劑將和與所述探針結(jié)合的DNA反應(yīng)以成色。所述帶根據(jù)DNA的供體的不同而變化，因?yàn)槊總€(gè)供體都有他或她自己特殊的DNA堿基序列。
因根據(jù)本發(fā)明的方法制備的物品含有DNA，其代表了該DNA供體的特殊特性，人們通過佩帶這些物品而紀(jì)念該供體，如名人、家庭成員、愛人、寵物等等。
而且，根據(jù)本發(fā)明的方法制備的物品與不含有DNA的物品相比截然不同。本發(fā)明的方法可用于鑒別某物品的真?zhèn)巍?br> 存在于根據(jù)本發(fā)明方法制備的物品中的DNA可長期保存而不變質(zhì)。因此，該DNA可用來鑒別一個(gè)人的身份也就是，存在于根據(jù)本發(fā)明方法制備的物品中的DNA可與從一個(gè)人身上獲得的用來鑒別身份的DNA相比較，由此可確定(若需要的話)其是不是該供體，或者是否與該供體有遺傳關(guān)系。
下述實(shí)施例用以說明根據(jù)本發(fā)明制備含有DNA物品的方法。
實(shí)施例1DNA的提取將從供體采集來的全血3ml置于EDTA涂覆的試管中并放置在2-8℃的冰箱里。
將50μl的EDTA血液和RBC溶胞緩沖溶液置于已消毒的1.5ml的微型離心試管中，在13000rpm轉(zhuǎn)速下離心旋轉(zhuǎn)一分鐘以獲得沉淀物。所得沉淀物用500μl消毒水洗滌。重復(fù)離心和洗滌步驟直到除去所有殘留的RBC。然后在洗滌過的沉淀物中加入200μl的Chelex樹脂，煮沸10分鐘后進(jìn)行離心分離。將如此所獲得的10μl上清液用于進(jìn)一步的擴(kuò)增過程?？芍貜?fù)10分鐘的煮沸和隨后的冷藏步驟。
DNA的擴(kuò)增將在下表1中所示的材料混合，用一種聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)工具(Inno-lipa有限公司的HLA基因型試劑盒)將該混合物在下表2中所述的條件下進(jìn)行DNA擴(kuò)增。
表1 擴(kuò)增混合物(總量50μl)

表2 聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)條件

預(yù)處理1、HLA DNA帶的制備HLA DNA帶可采用HLA試劑盒(Inno-lipa有限公司)由擴(kuò)增的DNA制備。
2、用于注入的DNA溶液的制備由擴(kuò)增過程獲得的DNA通過TA克隆試劑盒(Invitrogen有限公司)克隆入載體中?？寺〉馁|(zhì)粒被大量分離。使用E.coli HB101，并且將該轉(zhuǎn)換的E.coli HB101置于37℃條件下?lián)u動(dòng)溫育18小時(shí)。起初的HB101在傳統(tǒng)的LB(Luria Broth)媒介物中培育過夜。經(jīng)培育的細(xì)菌用500ml的LB稀釋至1/100，然后在該媒介物中接種并培養(yǎng)。采用Birnboin &Doly(1979)的方法分離質(zhì)粒。將含有目標(biāo)質(zhì)粒DNA的E.coli HB101在37℃條件下培養(yǎng)18小時(shí)。將用于分離該質(zhì)粒的試劑SolⅠ[50mM葡萄糖，25mM Tris·Cl(pH 8.0),10mM EDTA(pH 8)]、SolⅡ(0.2N NaOH,1％ SDS)和SolⅢ(5M醋酸鉀60ml，冰醋酸11.5ml，水28.5ml)按順序加入，溫和攪拌由此獲得的混合物，然后在14000rpm的轉(zhuǎn)速下離心分離10分鐘。將由此獲得的上清液加入等量的苯酚∶氯仿(1∶1)中，劇烈混合然后離心分離。將該步驟重復(fù)2次或3次。在獲得的清亮的上清液中加入100％乙醇(2倍)，將該混合物冷藏10分鐘然后離心分離。棄置上清液并干燥剩余物，用1ml 70％的乙醇洗滌1次，干燥，與TE緩沖液混合以溶解DNA，然后冷藏。
將甘油和溴酚藍(lán)加入由此獲得的DNA溶液中。
后處理將2個(gè)圓形丙烯酸板(每個(gè)直徑為5cm，厚0.5cm)疊放在一起以便在板的相鄰表面間形成空腔。其中一個(gè)板上有一個(gè)與空腔相連的孔并且由此將DNA溶液注入空腔。板上還有一構(gòu)件以使一環(huán)狀物可與其相連。如圖1所示，HLA帶附著在板的側(cè)邊，并且將該DNA供體的照片和絲印簽名印制在板的外表面。丙烯酸板在其側(cè)邊處相互接觸連接。在預(yù)處理過程中制備的DNA溶液通過位于一個(gè)板上的孔注入空腔，然后將孔封住。如此生產(chǎn)的丙烯酸物品(厚1cm)是平面對稱的。通過在丙烯酸物品的環(huán)連接構(gòu)件上插入一個(gè)環(huán)來制成一個(gè)鑰匙鏈。
實(shí)施例2DNA的提取將由供體獲得的毛發(fā)從根部剪斷成5cm以內(nèi)的小段。在5ml的試管中將毛發(fā)與200μl的Chelex樹脂混合，將混合物煮沸10分鐘以除去DNA以外的細(xì)胞碎片。然后在12000rpm的轉(zhuǎn)速下將混合物離心分離。將由此獲得的上清液用于進(jìn)一步的擴(kuò)增過程。
DNA的擴(kuò)增按下表3所示制備所述擴(kuò)增混合物，然后按下表4所示聚合酶鏈反應(yīng)條件實(shí)施DNA擴(kuò)增過程。
表3 擴(kuò)增混合物(總量50μl)

表4 聚合酶鏈反應(yīng)條件

預(yù)處理1、含有DNA的聚丙烯酰胺膠體膜的制備制備10％聚丙烯酰胺膠體并加入擴(kuò)增了的DNA。通過對電泳柱施以200V的電壓以使DNA形成電泳。電泳完成后，將膠體在0.4％的硝酸銀溶液中沉淀30分鐘以使膠體中的DNA染色。將膠體放置在兩層玻璃紙間并干燥以得到含DNA的堅(jiān)硬的膠體膜(1mm長，3cm厚)。
2、被注入的DNA溶液的制備向通過擴(kuò)增過程獲取的DNA中加入苯酚紅和甘油，以獲取被注入的DNA溶液。
后處理根據(jù)實(shí)施例1的方法制備鑰匙鏈，只是用含有DNA的聚丙烯酰胺膠體代替HLA DNA帶。
根據(jù)本發(fā)明，可制備各種含有DNA的物品。這些物品可代表該DNA供體的獨(dú)特特性并且可長久保持。
權(quán)利要求
1.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個(gè)樣品；從該樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；通過空腔的開口向物品中的空腔注入該擴(kuò)增的DNA的溶液；并且封住空腔的開口。
2.根據(jù)權(quán)利要求1的制備含有DNA物品的方法，其中所述DNA擴(kuò)增步驟是通過聚合酶鏈反應(yīng)來實(shí)現(xiàn)的。
3.根據(jù)權(quán)利要求1的制備含有DNA物品的方法，其中所述DNA擴(kuò)增步驟是通過兩步擴(kuò)增來實(shí)現(xiàn)的，第一步擴(kuò)增包括一個(gè)聚合酶鏈反應(yīng)，并且接下來的第二步擴(kuò)增包括以下步驟將在第一步擴(kuò)增過程中擴(kuò)增了的DNA插入載體以得到重組質(zhì)粒，將該重組質(zhì)粒引入宿主細(xì)胞，培養(yǎng)通過重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)換的宿主細(xì)胞，并且分離由此大量產(chǎn)生的質(zhì)粒。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴(kuò)增的DNA的溶液在注入物品中的空腔之前被干燥成膠體態(tài)或固態(tài)。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴(kuò)增的DNA的溶液在注入物品中的空腔之前被染色。
6.一種制備含有DNA的無定形物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個(gè)樣品；從該樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；并且將該擴(kuò)增的DNA的溶液與物品混合。
7.根據(jù)權(quán)利要求6的制備含有DNA物品的方法，其中所述無定形物品選自香水、墨水、墨汁和染料。
8.根據(jù)權(quán)利要求6或7的制備含有DNA物品的方法，其中所述擴(kuò)增了的DNA的溶液在與物品混合之前被干燥成膠體態(tài)或固態(tài)。
9.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個(gè)樣品；從該樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；將該擴(kuò)增的DNA置于聚丙烯酰胺膠體中形成電泳；將該形成電泳的DNA染色；干燥含有染色DNA的膠體以獲得膠體膜；并且將該膠體膜應(yīng)用于物品的表面。
10.一種制備含有DNA的固體物品的方法，該方法包括的步驟有從供體獲得包含DNA的一個(gè)樣品；從該樣品中提取出DNA；擴(kuò)增提取出的DNA；用該擴(kuò)增的DNA制備HLA DNA帶；并且將該HLA DNA帶應(yīng)用于物品的表面。
11.根據(jù)權(quán)利要求1-10任何一項(xiàng)的方法制備的含有DNA的物品。
全文摘要
一種制備含DNA物品的方法,該方法包括以下步驟:從供體獲取含DNA的樣品;從該樣品中提取出DNA;擴(kuò)增提取出的DNA;通過空腔的開口向物品里的空腔中注入該擴(kuò)增的DNA的溶液;并且封住該空腔的開口,其中所述物品具有一定的形狀,或若物品為無定形時(shí),將擴(kuò)增的DNA的溶液與該物品混合。
文檔編號A44C3/00GK1306402SQ99807627
公開日2001年8月1日 申請日期1999年6月24日 優(yōu)先權(quán)日1998年6月24日
發(fā)明者任勇彬 申請人:恒星基因有限公司