專利名稱：人參及人參莖葉提取物防治骨質(zhì)疏松癥的新用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及中藥人參及人參莖葉提取物防治骨質(zhì)疏松癥的新用途。
骨質(zhì)疏松癥是老年醫(yī)學的熱門課題，隨著世界人口的老化，患骨質(zhì)疏松癥的人群在逐年增多，據(jù)統(tǒng)計我國目前65歲以上的老年人已占1.2億，而患有骨質(zhì)疏松癥的患者在這些人群中約占90％，因此，防治骨質(zhì)疏松是抗衰老，延長壽命，保證人民的生活質(zhì)量的一個十分迫切的研究課題。目前國內(nèi)外對防治骨質(zhì)疏松癥尚未找到理想的新藥，傳統(tǒng)應用的雌激素、補鈣和維生素D聯(lián)合應用雖有一定的療效，但仍存在較多的治療學上的難題，為了解決這一難題，本課題組的成員一直在從天然藥物中尋找抗骨質(zhì)疏松的理想藥物，希望能找到一種理想的抗骨質(zhì)疏松的新藥。
通過大量的動物實驗研究和篩選，我們發(fā)現(xiàn)了中藥五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根以及其干燥根的提取物人參二醇組皂甙；人參莖葉的提取物人參莖葉總皂甙具有明顯的防治骨質(zhì)疏松的作用，為人類解決骨質(zhì)疏松提供了一個新的途徑。
本發(fā)明的任務是用科學的工藝把人參及其有效成份的提取物做成制劑，使該制劑用于人類防治骨質(zhì)疏松癥，該制劑既能阻止骨質(zhì)的丟失，又能促進新骨的形成，為解決骨質(zhì)疏松的難題提供新的用途。
解決這一任務的途徑是這樣實現(xiàn)的，選取五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey)的干燥根，即中藥稱為人參的藥用部份，取兩個品種，一為生曬參，一為紅參，另選人參的細支根及須根，即中藥稱為“參須”的藥用部份；人參的地上部份人參莖葉按傳統(tǒng)的工藝加10倍水，分別水提三次，過濾，濃縮至含藥量50％，然后用本研究室建立的小白鼠骨質(zhì)疏松模型和大白鼠骨質(zhì)疏松模型進行給藥研究，比較觀察這四個受試品抗骨質(zhì)疏松的藥效學功能。
結(jié)果如下生曬參、紅參、參須和人參莖葉四個品種均有顯著的預防實驗動物骨質(zhì)疏松的作用，效果最好的是生曬參和參須，該兩藥可使骨量顯著增加，同時，又可使實驗動物的胸腺萎縮受到抑制，提示了其抗骨質(zhì)疏松具有顯著的有利作用，紅參和人參莖葉水提部份亦有顯著的抗骨質(zhì)疏松作用，但對胸腺萎縮的影響作用不顯著，臨床也可用于抗骨質(zhì)疏松用途，在抗衰老方面可能不及前兩個品種。
深入的研究是對人參有效成份的分離，提純及抗骨質(zhì)疏松作用的研究，具體如下1、從人參中提取人參皂甙取人參根粗粉，用甲醇為溶劑提取可溶性成份，減壓濃縮甲醇提取液，于殘渣中加水，水溶液加乙醚提取，去掉脂類成份，水溶液再用正丁醇萃取，萃取后通過減壓蒸干，得人參總皂甙(粗品)，供實驗用。
人參總皂甙按文獻(李伯適，等，植物藥有效成份的提取與分離，1993；26)的方法，用硅膠柱層析，分別得人參皂甙Ro；人參皂甙Rb1；人參皂甙Rb2；人參皂甙Rc；人參皂甙Rd；人參皂甙Re；人參皂甙Rg1；人參皂甙Rg2等8個成份，供實驗應用。
2、從人參莖葉中提取人參莖葉總皂甙取人參莖葉水煮，提取3次，水提液濃縮后，加醇至70％過濾，去沉淀，水醇液減壓回收乙醇，水層再用正丁醇萃取。攪拌分取正丁醇層，使其通過酸性氧化鋁柱，流速約10ml/min，流出液減壓去正丁醇，即得人參莖葉總皂甙，供實驗應用。把人參根總皂甙和人參莖葉總皂甙兩種成份，以及人參皂甙Rb1和人參皂甙Rb2、人參皂甙Rg1、人參皂甙Rc四種成份分別采用小白鼠和大白鼠骨質(zhì)疏松模型進行研究比較，結(jié)果如下人參根總皂甙(人參皂甙)和人參莖葉總皂甙(人參莖葉皂甙)均有明顯的抗骨質(zhì)疏松作用，人參莖葉皂甙在50mg/kg即有明顯的療效，且隨劑量的增加療效不斷提高，在300mg/kg時效果較佳，毒性極小，人參皂甙的作用與人參莖葉皂甙效果相似。
人參皂甙Rb1、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rg1和人參皂甙Rc四種成份對骨質(zhì)疏松也有一定的防治作用，但其結(jié)果尚不及總皂甙，這可能與實驗所用的劑量有一定的關系，對此四種成份的抗骨質(zhì)疏松作用正在作深入的探討，但初步的研究已肯定其抗骨質(zhì)疏松的藥理活性，這可能與這些成份均有增加大鼠骨髓細胞DNA和蛋白質(zhì)的合成有關。
實施例為觀察人參莖葉皂甙對骨質(zhì)疏松的防治作用，進行了下述實驗實驗方法(一)動物分組動物根據(jù)隨機原則，先編號，然后隨機分為5組，每組8只，各組的處理及用藥如下1、假手術對照組該組與其他各組一樣，先麻醉并行假卵巢切除手術，即手術中找到雙側(cè)卵巢，輕輕取出觀察，然后又放回腹腔，不切除，縫合好傷口即可。
2、去卵巢模型組大鼠用戊巴比妥鈉麻醉后，取側(cè)臥位，剪去雙側(cè)腹部手術部位的毛，用碘酒，酒精局部消毒皮膚。分別自離肋下1.5cm與離腰椎1.0cm相交處做縱行切口約1cm，切開皮膚，分離皮下組織，切開肌層，即可見位于兩側(cè)腎臟外下方呈菜花樣淡粉紅色的卵巢，然后輕輕鑷起卵巢，結(jié)扎后切除之，縫合皮膚，即可。另側(cè)以同樣方法做卵巢去除術。
3、去卵巢并服用雌激素組與三組同法行去卵巢術后，每天灌胃給予雌激素-17-a炔雌醇(100μg/kg)，共10周。因為雌激素可以防止骨組織因去卵巢而出現(xiàn)的迅速丟失，本研究以本藥作為標準陽性藥物，用以檢驗本研究的可靠性并與后面的人參莖葉皂甙防治組進行比較。
5、去卵巢加人參莖葉皂甙防治組本組為本研究的主要目標，著重觀察人參莖葉皂甙能否防治去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松癥。并與雌激素進行比較，觀察兩藥效果是否一致，或何種更強？以探討用人參莖葉皂甙來代替激素防治去卵巢所致的骨質(zhì)疏松作用。人參莖葉皂甙按300mg/kg每天灌胃給藥一次，共10周。
6、去卵巢加人參莖葉皂甙低劑量防治組觀察低劑量的人參莖葉皂甙能否防治去卵巢大鼠的骨質(zhì)疏松癥。并與實驗組進行比較，觀察藥物的量效關系。人參莖葉皂甙按100mg/kg每天灌胃給藥一次，共10周。
(二)給藥方法及骨標本制備各組動物均在同等條件下飼養(yǎng)和給藥，假手術組和去卵巢模型組每天灌胃給予生理鹽水5ml/kg，雌激素陽性藥物治療組用17-a炔雌醇，按100μg/kg灌胃給藥，每天灌胃給藥一次，人參莖葉皂甙治療組按300mg/kg每天灌胃給藥一次，人參莖葉皂甙低劑量組按100mg/kg每天灌胃給藥一次，共10周。所有動物均在室溫26±2℃，通風良好，濕度60％-70％的條件下飼養(yǎng)，自由攝食和攝水。每周稱體重一次，根據(jù)體重每周調(diào)整給藥量，全部大鼠在處死前10天皮下注射鹽酸四環(huán)素25mg/kg，在處死前2天于其背部皮下注射鈣黃綠素5mg/kg。
實驗結(jié)束時，用2％戊巴比妥鈉(50mg/kg)麻醉，打開胸腔，暴露心臟，用注射器穿刺右心室取血，盡量吸盡血液(目的使骨髓腔與骨松質(zhì)形態(tài)清晰)，其吸出的血液可作生化檢驗，分離脛骨(或股骨，椎骨等，根據(jù)實驗取材而定)，去除肌肉，用低速鋸在脛骨上段髁間隆起前方行額狀面鋸開，暴露骨髓腔，然后將其分為三段上段為脛骨近端(proximal tibea metapha)，主要觀察骨松質(zhì)；中段為脛骨中部，(tibial shaft)主要觀察骨皮質(zhì)，下段為脛骨遠端(distaltibea)，用于觀察成年骨部位以及黃骨髓部位(adult bone site andyellow bone)，將三段骨樣本迅速取上置于10％磷酸鹽緩沖液配制的福爾馬林中固定48小時，再徑70％乙醇脫水后，用特殊骨染料染色5天。以后從50％乙醇開始逐級脫水及丙酮脫脂，最后用甲基丙烯酸甲酯包埋不脫鈣骨，包埋塊干后用低速鋸鋸成300mm骨片，經(jīng)磨成20mm的薄片再次梯度脫水，透明封片。(骨片也可采用硬組織切片機切成5μm薄片進行測量)。
結(jié)果用骨組織計量學方法測量各組動物脛骨上段骨骨組織形態(tài)學參數(shù)比較見表1。表1人參莖葉皂甙對大鼠脛骨上段骨組織形態(tài)學靜態(tài)參數(shù)的影響(X±SD)骨小梁面積骨小粱厚度骨小梁密度 骨小梁間隙組別 ％Tb.Ar Tb.Th(μm)Tb.N(#/mm) Tb.Sp(μm)A．假手術組對照 22.71±6.51 55.10±4.32 4.18±1.41 215±115B．去卵巢對照組 5.47±1.4952.5±5.211.04±0.26 959±238變化率A(％)-76***-5 -75*** 346***C．雌激素組 14.35±5.23 51.93±5.272.75±0.98 342±118變化率A(％)-37* -6 -34* 156****變化率B(％)162***-1 164*** -64***D．人參莖葉皂甙實驗組 8.52±1.5354.68±5.931.57±0.28 604±135變化率B(％)56*** 4 51*** -37***變化率C(％)-41* 5 -43*** 76***E．人參莖葉皂甙低量組 6.75±3.1458.13±8.361.19±0.53 1082±915變化率B(％)2311 14 13注變化率A是與對照組比較；變化率A=待比較組/A組-1×100％；變化率B是與去卵巢對照組B組比較，變化率B=待比較組/B組-1％×100％，余同。
從表1可見去卵巢對照組與假手術對照組相比，去卵巢對照組對大鼠脛骨近端骨組織形態(tài)結(jié)構(gòu)影響具有下述特點骨量顯著減少，表現(xiàn)為骨小梁面積百分率(Percent Trabecular Area,Tb.Ar)減少76％，骨小梁數(shù)目(Trabecular Number,Tb.N)減少75％，骨小梁間隙(Trabecular Separation,Tb.Sp)增加346％。說明了去卵巢后大鼠出現(xiàn)了明顯的骨質(zhì)疏松癥。人參莖葉皂甙實驗組與去卵巢對照組相比，骨量明顯增加骨小梁面積百分率增加56％，骨小梁數(shù)目增加51％，骨小梁間隙減小37％；說明了人參莖葉皂甙有防治大鼠骨質(zhì)疏松的形成。
根據(jù)以上實驗結(jié)果，我們采用人參皂甙、人參莖葉皂甙按傳統(tǒng)的制劑工藝，制成用于抗骨質(zhì)疏松癥的新制劑，如片劑、沖劑、膠囊劑、注射劑或口服液，用于臨床骨質(zhì)疏松的防治，取得較好的臨床效果，人參皂甙和人參莖葉皂甙也可與其他成份組成復方，用于防治骨質(zhì)疏松癥。
權(quán)利要求
1.人參皂甙和人參莖葉皂甙在制備用于防治骨質(zhì)疏松癥的制劑中的應用。
2.如權(quán)利要求書1所述的人參皂甙，其特征是該成份是從五加科植物人參的干燥根提取的總皂甙成份。
3.如權(quán)利要求書1所述的人參莖葉皂甙，其特征是該成份是從五加科植物人參的莖葉提取的總皂甙成份。
4.如權(quán)利要求書1、2所述的人參皂甙，其特征是該成份含有人參皂甙Rb1、人參皂甙Rb2、人參皂甙Rc、人參皂甙Rg1。
全文摘要
本發(fā)明公開了人參和人參莖葉對防治骨質(zhì)疏松的新用途,五加科植物人參(Panax ginseng C.A.Mey)干燥根,包括生曬參和紅參的水提液,參須水提液,人參莖葉水提液對實驗動物骨質(zhì)疏松模型有顯著的防治作用,人參根總皂甙、人參莖葉總皂甙對實驗動物骨質(zhì)疏松模型也有明顯的防治作用,人參皂甙Rb
文檔編號A61K31/70GK1323588SQ0010428
公開日2001年11月28日 申請日期2000年5月16日 優(yōu)先權(quán)日2000年5月16日
發(fā)明者崔燎, 吳鐵, 劉曉青, 劉鈺瑜, 李青南, 張志平, 謝華 申請人:廣東醫(yī)學院醫(yī)藥科技開發(fā)中心