專利名稱：核苷5’－硫代磷酰氨基酸酯化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一類新型的核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，該類化合物具有良好的生物活性和抗病毒、抗腫瘤、抗HIV等藥物活性，可在臨床應(yīng)用中發(fā)展成為一種核苷類抗病毒、抗腫瘤、抗HIV前藥(prodrugs)。
硫代磷酸在磷原子上含有一個(gè)硫取代氧的結(jié)構(gòu)，雖然這個(gè)結(jié)構(gòu)仍然保留著原來的電荷，保留著高水溶性的性質(zhì)，但硫代磷酸的寡聚脫氧核糖核酸(S-oligos)的其他理化特性和生物學(xué)屬性均與天然的磷酸二酯原型有很大的差別。最顯著的差別之一是硫代磷酸對(duì)核酸酶具有抵抗性。由于細(xì)胞內(nèi)外核酸酶的存在，很快消化掉了加入的磷酸二酯類反義寡聚核苷酸，使其喪失作用功能。
本發(fā)明的目的是研制一類核苷-硫代磷酰氨基酸酯化合物，通過合成具有抵抗核酸酶的硫代磷酸類化合物，合成寡聚脫氧核糖核酸，以用于開發(fā)抗病毒、抗腫瘤、抗HIV活性藥物。
本發(fā)明制備的核苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物共有以下四種，其中第一種為腺苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。
上述化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑(如三乙胺，N-甲基咪唑)。3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑。4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到產(chǎn)物。
其中的第二種化合物為鳥苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)式為
上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH3。
上述化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到產(chǎn)物。
其中的第三種化合物為胞苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。
上述化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑(如三乙胺，N-甲基咪唑)。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到產(chǎn)物。
其中的第四種化合物為尿苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。
上述化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑(如三乙安，N-甲基咪唑)。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥THF中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到產(chǎn)物。
上述合成的系列化合物經(jīng)CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)均有不同程度的活性，可以用于開發(fā)抗病毒、抗腫瘤、抗HIV活性藥物。
以下是
具體實(shí)施例方式實(shí)施例1腺苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制備，其中R為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物腺苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為68．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ59．38，58．62；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．26，9．22(bs，1H，NH)，8．43(1H，s，H-2)，8．23(1H，s，H-8)，7．40(2H，s，NH2)，6．44(1H，m，H-1′)，4，50(2H，m，H-2′，3′)，3．97(1H，m，H-4′)，3．88(3H，s，OCH3)，3．64(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ173．24(COOMe)，163．70(C-2)，150．43(C-4)，140．76(C-6)，101．76(C-1′)，87．74(C-5)，84．83(C-2′)，73．54(C-3′)，69．80(C-4′)，60．87(C-5′)，54．78(OCH3)，45．86(C-α)；ESI-MS(pos．)m／z 435(M+H)+；ESI-MS(neg．)m/z 433(M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)HIV=Human immunodeficiency virusMT-4=Human leukenia T cellCEM=Human lymphoblastoid T cellED50=抗病毒活性指標(biāo)CD50=細(xì)胞毒性指標(biāo)ED50CEM-TK- 5×10-4M (CD507×10-6M)CEM-SS4×10-3M (CD509×10-5M)
MT 4 2×10-1M(CD508×10-6M)實(shí)施例2腺苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物腺苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為66．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ59．86，58．53；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．89(1H，s，H-2)，8．67(1H，s，H-8)，7．67(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(2H，m，H-α)，1．31，1．30(3H，d，3J=6，β-CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ180．24(COOMe)，170．70(C-2)，156．43(C-4)，l49．76(C-6)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)m/z 449(M+H)+；ESI-MS(neg．)m/z 447(M-H)-。該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-8×10-3M(CD503×10-6M)CEM-SS 6×10-3M(CD509×10-5M)MT 48×10-4M(CD506×10-6M)實(shí)施例3腺苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為C6H5CH2?；衔锏慕Y(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟
1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物腺苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為69．7％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ60．64，60．33；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．21，9．15(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．88(2H，s，NH2)，7．15-7．35(5H，m，Ph)，6．59(1H，m，H-1′)，4，55(2H，m，H-2′，3′)，4．37(1H，m，H-4′)，3．79(3H，s，OCH3)，3．66(2H，m，H-5′)，3．48(2H，m，H-α)，2．32(2H，m，H-β)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ174．24(COOMe)，170．60(C-2)，159．43(C-4)，148．36(Ph-Jpso)，136．11(C-6)，135．12(Ph-para)，130．42(Ph-ortho)，119．91(Ph-meta)，108．23(C-1′)，89．65(C-5)，87．87(C-2′)，76．23(C-3′)，72．66(C-4′)，61．23(C-5′)，56．82(C-β)，56．78(OCH3)，52．73(C-α)；ESI-MS(pos．)m/z 527(M+H)+；ESI-MS(neg．)m/z 525(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-8×10-2M(CD504×10-5M)CEM-SS 9×10-3M(CD504×10-6M)MT 46×10-5M(CD505×10-6M)實(shí)施例4腺苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物腺苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為59．2％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ56．32，56．14；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．44，9．40(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172．24 (COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，108．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5’)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，26．40(CH3)，26．86(CH3)；ESI-MS(pos．)m/z 518(M+H)+；ESI-MS(neg．)m/z 516(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-7×10-3M(CD508×l0-6M)CEM-SS 6×10-3M(CD505×10-6M)MT 48×10-4M(CD506×10-5M)實(shí)施例5腺苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．267g)已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物腺苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為65．2％。波譜數(shù)據(jù)如下31p NMR(DMSO-d6，δppm，JHz)δ58．32，57．68；1H NMR(500MHz，DMSO-d6)δ9．31，9．27(bs，1H，NH)，8．67(1H，s，H-2)，8．58(1H，s，H-8)，7．54(2H，s，NH2)，6．59(1H，m，H-1′)，4，78(2H，m，H-2′，3′)，4．22(1H，m，H-4′)，3．98(3H，s，OCH3)，3．85(2H，m，H-5′)，3．67(1H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(1H，m，H-γ)，1．61(3H，s，CH3)，1．42(3H，s，CH3)；13C NMR(500MHz，DMSO-d6)δ172．24(COOMe)，165．70(C-2)，159．43(C-4)，145．76(C-6)，109．23(C-1′)，89．66(C-5)，85．87(C-2′)，76．23(C-3′)，69．66(C-4′)，61．23(C-5′)，54．78(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，46．35(C-γ)；ESI-MS(pos．)m／z 492(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 490(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-4M(CD502×10-6M)CEM-SS2×10-4M(CD505×10-5M)MT 4 5×10-3M(CD508×10-6M)實(shí)施例6鳥苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制備，其中R為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物鳥苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為63．4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．68，57．39；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．18(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，4，89(1H，m，H-2′)，4．23(1H，m，H-3′)，3．23(1H，m，H-4′)，3．54(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，3．54(2H，m，H-α)，1．66，1．65(3H，d，3J=6．0，β-CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ172．31(COOMe)，165．81(C-2)，158．67(C-6)，152．34(C-4)，139．66(C-8)，118．71(C-5)，89．42(C-4′)，86．25(C-1′)，73．55(C-3′)，70．82(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．62(C-β)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)m／z 451(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 449(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 8×10-4M (CD506×10-5M)CEM-SS3×10-4M (CD504×10-6M)MT 4 6×10-4M (CD503×10-5M)實(shí)施例7鳥苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．140g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
6)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物鳥苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為65．3％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．88，58．37；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．07(1H，s，H-8)，5．82，5．81(1H，d，1J=6．0，H-1′)，4，51(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)m／z 466(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 464(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-6×10-4M(CD507×10-5M)CEM-SS 9×10-3M(CD506×10-5M)MT 42×10-4M(CD508×10-5M)實(shí)施例8鳥苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為C6H5CH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式化合物的合成步驟 1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物鳥苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為70．3％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm．JHz)δ57．18，56．89；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．07(1H，s，H-8)，7．25-7．41(5H，m，Ph)，5．79，5．78(1H，d，3J=6．0，H-1′)，4，41(1H，m，H-2′)，4．18(1H，m，H-3′)，3．94(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，2．27(2H，m，H-β)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180．31(COOMe)，166．81(C-2)，161．67(C-6)，158．34(C-4)，151．26(Ph-jpso)，135．66(C-8)，130．07(Ph-para)，128．23(Ph-ortho)，118．45(Ph-meta)，96．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，57．22(C-β)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)；ESI-MS(pos．)m／z 541(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 539(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-8×10-3M(CD506×10-5M)CEM-SS 6×10-4M(CD505×10-5M)MT 42×10-4M(CD508×10-5M)實(shí)施例9鳥苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CH。
化合物的結(jié)構(gòu)式化合物的合成步驟 1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．170g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物鳥苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為66．2％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ59．86，59．27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．16，1．15(3H，d，3J=6．0，CH3)，1．06，1．05(3H，d，3J=6．0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，156．81(C-2)，153．67(C-6)，151．34(C-4)，135．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，23．66(CH3)，23．15(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 493(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 491(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-3M (CD503×10-5M)CEM-SS 5×10-3M (CD508×10-5M)MT 4 4×10-3M (CD506×10-5M)實(shí)施例10鳥苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．180g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．283g)已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物鳥苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為62．2％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．86，58．27；1H NMR(500MHz，D2O)δ9．07(1H，s，H-8)，6．82，6．81(1H，d，3J=6．0，H-1′)，5，48(1H，m，H-2′)，4．95(1H，m，H-3′)，4．36(1H，m，H-4′)，3．86(3H，s，OCH3)，3．68(2H，m，H-5′)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．22(1H，m，H-γ)，1．16，1．15(3H，d，3J=6．0，CH3)，1．06，1．05(3H，d，3J=6．0，CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．31(COOMe)，166．81(C-2)，159．67(C-6)，156．34(C-4)，134．66(C-8)，116．71(C-5)，86．42(C-4′)，85．25(C-1′)，73．74(C-3′)，70．42(C-2′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，44．24(C-β)，41．24(C-γ)；ESI-MS(pos．)m／z 508(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 506(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 6×10-4M (CD506×10-5M)CEM-SS6×10-4M (CD505×10-5M)MT 4 8×10-4M (CD507×10-5M)
實(shí)施例11胞苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制備，其中R為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物胞苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為61．4％。
波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．88，56．16；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．24(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．28(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．69(2H，m，H-α)，2．15(1H，H-2′)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，140．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)m／z 411(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 409(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 8×10-4M (CD506×10-5M)CEM-SS6×10-3M (CD504×10-5M)MT 4 6×10-4M (CD503×10-6M)實(shí)施例12胞苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3。
化合物的結(jié)構(gòu)式
化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
4)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
5)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
6)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物胞苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為68．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．66，57．31；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．88(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．68(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．71(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，1．45(3H，d，3J=6，H-β)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)m／z 424(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 422(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-3M(CD505×10-5M)CEM-SS 5×10-3M(CD508×10-6M)MT 47×10-4M(CD503×10-6M)實(shí)施例13胞苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制奮，其中R為C6H5CH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．22g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物胞苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為66．7％。
波譜數(shù)據(jù)如下31p NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．71，58．13；1H NMR(500MHz，D2O)δ8．22，8．21(1H，d，3J=5．5，H-6)，7．29-7．41(5H，m，Ph)，7．03(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．66(1H，m，H-3′)，3．82(1H，m，H-4′)，3．58(3H，s，OCH3)，3．44(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．27(1H，m，H-β)；13C NMR(500MHz，D2O)δ180．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，146．36(Ph-jpso)，117．02，136．11(C-6)，137．12(Ph-para)，136．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．86(C-β)，45．89(C-α)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)m／z 500(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 498(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-5×10-4M (CD508×10-5M)CEM-SS 6×10-4M (CD508×10-5M)MT 4 8×10-4M (CD507×10-5M)實(shí)施例14胞苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CH。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．17g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物胞苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為63．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ59．98，59．21；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．90，7．89(1H，d，3J=5．5，H-6)，6．63(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．61(1H，m，H-3′)，3．69(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，2．89(2H，m，H-α)，2．66(1H，H-2′)，2．14(1H，m，H-β)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，87．25(C-1′)，84．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．62(OCH3)，50．86(C-β)，49．89(C-α)，46．21(C-β)，39．82(C-2)，ESI-MS(pos．)m／z 466(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 464(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-4M(CD505×10-5M)CEM-SS 5×10-4M(CD509×10-5M)MT 48×10-3M(CD503×10-5M)實(shí)施例15胞苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．242g)已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物胞苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為65．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ56．36，56．56；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．96，7．95(1H，d，3J=6，H-6)，6．36(1H，m，H-1′)，5．84，5．83(1H，d，3J=6，H-5)，4．78(1H，m，H-3′)，3．88(1H，m，H-4′)，3．76(3H，s，OCH3)，3．65(2H，m，H-5′)，3．22(2H，m，H-α)，2．96(1H，H-2′)，2．77(1H，m，H-β)，2．39(1H，m，H-γ)；13C NMR(500MHz，D2O)δ185．63(COOMe)，165．82(C-4)，158．13(C-2)，145．34(C-6)，93．71(C-5)，88．25(C-1′)，85．42(C-4′)，70．42(C-3′)，61．45(C-5′)，54．88(OCH3)，50．86(C-β)，48．89(C-α)，46．21(C-γ)，39．82(C-2′)；ESI-MS(pos．)m／z 468(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 466(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-3M (CD506×10-6M)CEM-SS 8×10-3M (CD509×10-6M)MT 4 7×10-3M (CD508×10-6M)實(shí)施例16尿苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯化合物的制備，其中R為H。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．125g)的甘氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物尿苷5’-硫代磷酰甘氨酸甲酯，產(chǎn)率為68．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ57．68，56．89；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．79，7．78(1H，dd，3J=4．5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．93(2H，m，H-2′，3′)，4．52(1H，m，H-4′)，4．00(2H，m，H-5′)，3．63(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)；13C NMR(500MHz，D2O)δ177．08(COOMe)，169．02(C-4)，153．99(C-2)，145．39，145．36(C-6)，104．33，104．22(C-5)，95．83，95．16(C-1′)，87．97(C-4′)，87．20，87．13(C-2′)，83．64，83．51(C-3′)，67．24(C-5′)，55．09(OCH3)，45．80，45．73(C-α)；ESI-MS(pos．)m／z 413(M+H)+；ESI-MS (neg．)m／z 411(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-8×10-3M (CD509×10-5M)CEM-SS 9×10-3M (CD508×10-5M)MT 4 8×10-4M (CD505×10-6M)實(shí)施例17尿苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為CH3。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物尿苷5’-硫代磷酰丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為71．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．32，57．68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．88，7．87(1H，dd，3J=5，H-6)，5．89(2H，m，H-1′，5)，4．98(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，1．31，1．30(3H，d，3J=6，β-CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ175．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)m／z 426(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 424(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 8×10-4M(CD506×10-5M)CEM-SS 7×10-4M(CD506×10-5M)MT 48×10-4M(CD505×10-5M)實(shí)施例18尿苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯化合物的制備，其中R為C6H5CH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．21g)的苯丙氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(1NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物尿苷5’-硫代磷酰苯丙氨酸甲酯，產(chǎn)率為72．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ60．32，59．68；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．88，7．87(1H，dd，3J=5，H-6)，7．22-7．46(5H，m，Ph)，6．08(2H，m，H-1′，5)，5．15(2H，m，H-2′，3′)，4．71(1H，m，H-4′)，4．34(2H，m，H-5′)，3．93(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，2．37(2H，m，H-β)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，166．73(C-4)，149．28(C-2)，148．39(Ph-jpso)，148．36，148．32(C-6)，139．12(Ph-para)，129．42(Ph-ortho)，122．91(Ph-meta)，110．62，110．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，83．27，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)；ESI-MS(pos．)m／z 522(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 520(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-8×10-4M (CD507×10-5M)CEM-SS 7×10-4M (CD506×10-5M)MT 4 6×10-4M (CD506×10-5M)實(shí)施例19尿苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CH。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．14g)的纈氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物尿苷5’-硫代磷酰纈氨酸甲酯，產(chǎn)率為65．4％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ58．32，57．55；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．89，7．88(1H，dd，3J=5，H-6)，5．99(2H，m，H-1′，5)，4．96(2H，m，H-2′，3′)，4．61(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，1．31，1．30(2H，d，2CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，146．28(C-2)，144．36，144．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，86．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，65．44(C-5′)，56．87(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，22．45(CH3)，22．55(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 454(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 452(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK-9×10-3M (CD508×10-5M)CEM-SS 6×10-3M (CD508×10-5M)MT 4 8×10-4M (CD502×10-5M)
實(shí)施例20尿苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯化合物的制備，其中R為(CH3)2CHCH2。
化合物的結(jié)構(gòu)式 化合物的合成步驟1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫(25℃)將1mmol(0．17g)的三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃(THF)中，配制成1mol／L的溶液。
2)向上述溶液中加入1mmol(0．18g)的亮氨酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加2mmol(0．2g)三乙胺。
3)用核磁共振儀(NMR)跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將1mmol(0．244g)已溶于干燥吡啶中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加1mmol(0．1g)三乙胺。
4)用NMR監(jiān)測(cè)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解。
5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，洗脫劑為異丙醇∶氨水∶水=16．5∶1∶1即可得到產(chǎn)物尿苷5’-硫代磷酰亮氨酸甲酯，產(chǎn)率為67．5％。波譜數(shù)據(jù)如下31P NMR(D2O，δppm，JHz)δ59．66，59．10；1H NMR(500MHz，D2O)δ7．89，7．88(1H，dd，3J=5，H-6)，5．82(2H，m，H-1′，5)，4．86(2H，m，H-2′，3′)，4．41(1H，m，H-4′)，4．04(2H，m，H-5′)，3．73(3H，s，OCH3)，3．57(2H，m，H-α)，3．45(1H，m，H-β)，3．21(2H，m，H-γ)，1．31，1．30(2H，d，2CH3)；13C NMR(500MHz，D2O)δ178．04(COOMe)，167．55(C-4)，152．28(C-2)，146．36，146．32(C-6)，107．62，107．43(C-5)，98．76，98．41(C-1′)，88．23(C-4′)，85．71，85．63(C-2′)，82．70，82．58(C-3′)，67．44(C-5′)，58．54(OCH3)，50．73(C-α)，48．66(C-β)，35．68(C-γ)，22．45(CH3)，22．55(CH3)；ESI-MS(pos．)m／z 468(M+H)+；ESI-MS(neg．)m／z 466(M-H)-。
該化合物在CEM細(xì)胞和MT-4細(xì)胞中的抗HIV-1活性實(shí)驗(yàn)ED50CEM-TK- 5×10-5M (CD506×10-4M)CEM-SS 6×10-5M (CD504×10-5M)MT 4 7×10-5M (CD507×10-5M)核苷5’-硫代磷酰氨基酸甲酯是一類全新的具有抗HIV藥物活性的化合物，通過合成不同種類的核苷-氨基酸綴合物，并進(jìn)行活性實(shí)驗(yàn)，初步得到了滿意的結(jié)果，為進(jìn)一步研制和開發(fā)新型抗HIV藥物提供了基礎(chǔ)研究成果。
權(quán)利要求
1.一種腺苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。上述化合物的合成步驟如下(1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中，配制成1mol／L的溶液；(2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑；(3)用核磁共振儀跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的腺苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑；(4)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解；(5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到本發(fā)明的產(chǎn)物。
2.一種鳥苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。上述化合物的合成步驟為(1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中，配制成1mol／L的溶液；(2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑；(3)用核磁共振儀；跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的鳥苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑；(4)；反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解；(5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到本發(fā)明的產(chǎn)物。
3.一種胞苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。上述化合物的合成步驟為(1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中，配制成1mol／L的溶液；(2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑；(3)用核磁共振儀跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥吡啶中的胞苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑；(4)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解；(5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到本發(fā)明的產(chǎn)物。
4.一種尿苷5’-硫代磷酰氨基酸酯化合物，其特征在于，該化合物的結(jié)構(gòu)式為 上述結(jié)構(gòu)式中R為H，CH3，C6H5CH2，(CH3)2CH2，(CH3)2CHCH2。上述化合物的合成步驟為(1)在氮?dú)獗Ｗo(hù)下，室溫將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中，配制成1mol／L的溶液；(2)向上述溶液中加入相同物質(zhì)的量的氨基酸甲酯鹽酸鹽，攪拌均勻后慢慢滴加縛酸劑；(3)用核磁共振儀跟蹤反應(yīng)進(jìn)程，待三氯硫磷全部反應(yīng)完畢以后，將已溶于干燥THF中的尿苷慢慢滴入上述體系中，攪拌均勻后繼續(xù)滴加縛酸劑；(4)反應(yīng)完成后，過濾，旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì)，最后用氨水進(jìn)行水解；(5)水解完全以后，用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離，即可得到產(chǎn)物；
全文摘要
本發(fā)明涉及一種核苷5’－硫代磷酰氨基酸酯化合物,其結(jié)構(gòu)式為右式,制備方法為:首先將三氯硫磷溶于已干燥過的四氫呋喃中,加入氨基酸甲酯鹽酸鹽,攪拌后滴加縛酸劑,反應(yīng)完成后,過濾,旋轉(zhuǎn)蒸餾除去溶劑及其他低沸點(diǎn)物質(zhì),最后用氨水進(jìn)行水解,用硅膠柱進(jìn)行柱層析分離,即可得到本發(fā)明的產(chǎn)物。本發(fā)明的化合物,可用于開發(fā)抗病毒、抗腫瘤、抗HIV活性藥物。
文檔編號(hào)A61P31/00GK1290707SQ0012955
公開日2001年4月11日 申請(qǐng)日期2000年10月9日 優(yōu)先權(quán)日2000年10月9日
發(fā)明者趙玉芬, 苗志偉, 韓波, 付華 申請(qǐng)人:清華大學(xué)