專利名稱：含有1,3－氧硫雜戊烷類核苷的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷(以下簡稱FTC)的(-)，(+)對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物和其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明還涉及以FTC的(-)，(+)對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成份的藥物組合物以及該藥物組合物的制備方法。
背景技術(shù)：
1，3-氧硫戊環(huán)類核苷是近年來新發(fā)現(xiàn)的具有優(yōu)異的抗艾滋病毒(HIV)活性和抗乙型肝炎病毒(HBV)活性的核苷類似物，用于艾滋病和乙型肝炎抗病毒治療的主流藥物拉米夫定就屬于該類化合物。該類化合物中最新的一個被批準(zhǔn)用于抗艾滋病病毒治療的藥物是商品名為Emtriva的順-2R-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷(以下簡稱(-)FTC)，另外商品名為Racivir的順-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷外消旋體(以下簡稱(±)FTC)正處于臨床研究階段。
(±)FTC是如下式所示的(-)FTC和(+)FTC的1∶1混合物。
美國專利5,210,085披露了具有抗HIV活性順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷((±)FTC)的制備方法，該專利同時披露了(±)FTC的抗HIV活性以及該化合物在艾滋病的治療和預(yù)防中的應(yīng)用。美國專利5,210,085披露的方法只能制備順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的外消旋混合物，無法得到單一的對映體，而該專利披露的抗HIV活性也只是外消旋混合物(±)FTC的數(shù)據(jù)。
中國專利95118741.4披露了用酶拆分來制備順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的單一對映體(+)FTC和(-)FTC的方法，并且發(fā)現(xiàn)(-)FTC比(+)FTC具有更強的抗病毒活性雖然兩者都具有相似的低細(xì)胞毒性。該專利給出了純(-)FTC和純(+)FTC的抗HIV活性數(shù)據(jù)，并強調(diào)了用于制備藥物組合物的活性成份應(yīng)該是純的(-)FTC或者是(+)FTC含量小于5％的(-)FTC和(+)FTC混合物。
美國專利6703396和美國專利6642245也披露了通過拆分(±)FTC來得到(-)FTC和(+)FTC的方法，同時指出(+)FTC含量小于5％的(-)FTC和(+)FTC混合物可以用于制備抗病毒藥物。
美國專利6114343和美國專利6069252披露了(+)FTC的制備方法，并且發(fā)現(xiàn)(+)FTC也有較好的抗病毒活性，并指出(+)FTC以及(-)FTC含量小于5％的(+)FTC和(-)FTC混合物可以用于制備藥物組合物。
在所有已經(jīng)公開的報道中，雖然純的(-)FTC和(+)FTC的抗病毒活性數(shù)據(jù)是已知的，但是除了比例為1∶1的(-)FTC和(+)FTC的混合物(±)FTC之外，該兩種化合物以任意比例共同使用時的抗病毒活性是未知的。由于藥物間的相互作用，當(dāng)兩種抗病毒化合物在共同使用時，它們的抗病毒活性可以是累加的，協(xié)同的或拮抗的。AAC《抗微生物藥劑和化學(xué)治療》1992，2423報道了(±)FTC，(-)FTC和(+)FTC在各種不同的細(xì)胞系中針對不同病毒株的抗艾滋病病毒活性。在PBM細(xì)胞中，(±)FTC，(-)FTC和(+)FTC針對HIV-1的半有效濃度(EC50)分別為0.03，0.008和0.84μM，在CEM細(xì)胞中，(±)FTC，(-)FTC和(+)FTC針對HIV-1的半有效濃度(EC50)分別為0.08，0.009和1.4μM，AAC《抗微生物藥劑和化學(xué)治療》1992，2689報道了(±)FTC，(-)FTC和(+)FTC在HepG2 2.2.15細(xì)胞系中的抗乙肝病毒的半有效濃度(EC50)分別為0.083±0.05，0.01±0.005和0.96±0.5μM。分析所有這些活性數(shù)據(jù)可以發(fā)現(xiàn)，(±)FTC的EC50都遠(yuǎn)高于將1∶1的(-)FTC和(+)FTC活性疊加所得到的數(shù)據(jù)，也遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于(-)FTC EC50的兩倍，說明在1∶1的濃度條件下，(-)FTC和(+)C的抗病毒作用具有拮抗作用，(+)FTC的存在抑制了(-)FTC的抗病毒活性。
迄今為止任意比例的(-)FTC和(+)FTC的混合物的抗病毒活性未見報道過，任意比例的(-)FTC和(+)FTC在體內(nèi)的相互作用也沒有被研究過，同時，(-)，(+)FTC對映體混合物的抗病毒活性隨著混合物中對映體的比例的改變而改變的趨勢以及相互作用模式的改變也是未知的。
綜上所述，現(xiàn)有技術(shù)明確強調(diào)只有純的(-)FTC，純的(+)FTC，外消旋混合物(±)FTC以及(+)FTC含量小于5％的(-)FTC和(+)FTC混合物和(-)FTC含量小于5％的(-)FTC和(+)FTC混合物能夠用于制備藥物組合物。迄今為止，只有純的(-)FTC和(+)FTC的抗病毒活性和比例為1∶1的(-)FTC和(+)FTC的混合物(±)FTC的抗病毒活性是已知的，而(-)FTC和(+)FTC以其他任意比例混合使用時的抗病毒活性未見報道?，F(xiàn)有的數(shù)據(jù)顯示，在1∶1的濃度條件下，(-)FTC和(+)FTC的抗病毒活性是相互拮抗的，但是其他任意比例的(-)FTC和(+)FTC共同使用時的相互作用也還未見過，其抗病毒作用受該兩個化合物相互作用的影響也是未知的。
雖然目前臨床上使用純的(-)FTC作為抗病毒藥物，但由于(-)FTC需要通過酶拆分或手性柱層析的方法來制備，工藝復(fù)雜，生產(chǎn)成本很高。而(±)FTC雖然其生產(chǎn)成本較低，但由于它的抗病毒活性也較低，臨床使用的劑量很大，臨床試驗中使用的最高劑量達(dá)每天600毫克，大大增加了患者身體代謝藥物的負(fù)擔(dān)。由于艾滋病病人需要終生服藥，肝炎病人的治療周期也很長，所以抗病毒藥物需要具有成本低，藥效高的和毒性低的特點。在低成本條件下提供高效的1，3-氧硫戊環(huán)核苷類抗病毒藥物仍舊是一個巨大的挑戰(zhàn)。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明提供了一種制備(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物的低成本的簡便方法，并且意外地發(fā)現(xiàn)相對于FTC的外消旋混合物(±)FTC，這種混合物具有更優(yōu)異的抗病毒活性，其抗病毒活性沒有因為(-)FTC和(+)FTC的相互作用而降低。本發(fā)明還提供了一種以(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物作為有效成份的用于抗病毒治療的藥物組合物以及制備所說的藥物組合物的方法。
本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員都應(yīng)知道，F(xiàn)TC上的堿基可以和有機酸或無機酸形成鹽，F(xiàn)TC的5’-OH可以形成羧酸酯或磷酸酯等衍生物。上述鹽或者衍生物在體內(nèi)能夠直接或間接地轉(zhuǎn)化成母體化合物FTC或者是FTC的有抗病毒活性的代謝產(chǎn)物。因此(-)FTC含量大于50％的(-)，(+)FTC混合物的藥用鹽及藥用衍生物也包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。
利用本發(fā)明提供的抗病毒活性物質(zhì)進行治療時，雖然活性物質(zhì)可以直接給藥，但通常是以含有有效成分的藥物制劑形式給藥的。本發(fā)明還提供了以為(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物或其藥用鹽或藥用衍生物為有效成分的藥物制劑，同時本發(fā)明還提供了制備這些制劑的方法。
發(fā)明詳述有效成份的制備本發(fā)明首先提供了一種制備(-)FTC富集的(-)FTC和(+)FTC的混合物的方法。
FTC的模擬糖環(huán)部分的結(jié)構(gòu)可以用下式來代表，其編號方式如圖所示 在該結(jié)構(gòu)中，2-位和5-位是兩個手性中心，整個合成工藝的關(guān)鍵和難點就是選擇性的構(gòu)建這兩個手性中心。關(guān)于5-位的手性中心構(gòu)建已有很多的文獻(xiàn)報道，而2-位的手性中心構(gòu)建一直是FTC立體異構(gòu)體合成中的關(guān)鍵問題。
我們采用了如下一條反應(yīng)路線來合成(-)FTC或富集了(-)FTC的FTC對映體混合物；各步反應(yīng)描述如下步驟A在芳香烴溶劑(例如甲苯)中將特戊酰氯與L-型扁桃酸反應(yīng)生成L-型扁桃酸的2-羥基特戊酯，然后再加入二甲亞砜或草酰氯將其轉(zhuǎn)化成酰氯，得到的酰氯同1，4-丁烯二醇反應(yīng)生成如結(jié)構(gòu)式所示的二酯(I)。
步驟B將步驟A中生成的二酯(I)溶于醇類溶劑中，在-78℃到室溫這個溫度范圍內(nèi)通入臭氧，在二酯完全消耗完后，停止通入臭氧，用適當(dāng)?shù)倪€原劑(例如硫脲，二甲基硫醚)還原臭氧加成物得到如結(jié)構(gòu)式(II)所示的醛。
臭氧化反應(yīng)通常需要在極低的溫度(低于-70℃)下進行，但我們所選用的溶劑和反應(yīng)物系統(tǒng)使得反應(yīng)可以在0℃到室溫這個溫度范圍內(nèi)進行，大大降低了對反應(yīng)裝置的要求，能夠適用于工業(yè)化生產(chǎn)。
反應(yīng)流程步驟C將步驟B中得到的乙醇醛衍生物(II)在質(zhì)子酸或路易斯酸的催化下與巰基乙酸反應(yīng)，反應(yīng)選擇在芳香烴溶劑中進行，并通過加熱共沸除去水分。在此條件下，反應(yīng)高產(chǎn)率地生成如結(jié)構(gòu)式(III)所示的2-位構(gòu)型不同的1，3-氧硫雜戊烷-5-酮的非對映異構(gòu)體的混合物。
步驟D將步驟3C中得到的1，3-氧硫雜戊烷-5-酮的非對映異構(gòu)體的混合物在由甲苯和石油醚組成的混合溶劑中分級結(jié)晶得到2-L構(gòu)型的單一異構(gòu)體(IIIA)或者是IIIA富集的III的兩個非對映體的混合物。一般第一次重結(jié)晶后，IIIA的含量可以達(dá)到75％左右，兩次重結(jié)晶后IIIA的含量可以達(dá)到90％左右，然后IIIA的含量達(dá)到一個平臺，每增加一次重結(jié)晶可以提高IIIA的含量1-2％。
步驟E將步驟3D中得到的2-L構(gòu)型的單一異構(gòu)體(IIIA)或者是IIIA富集的III的兩個非對映體的混合物用還原劑(優(yōu)選三叔丁氧基氫化鋁鋰)還原，再加入乙酸酐?；玫较鄳?yīng)的2-L構(gòu)型的5-乙酰氧基-1，3-氧硫雜戊烷(IV)或者是2-L構(gòu)型的5-乙酰氧基-1，3氧硫雜戊烷(IV)富集的兩個IV在2位的非對映體的混合物。
步驟F將步驟E中得到的5-乙酰氧基-1，3-氧硫雜戊烷(IV)或IV富集的兩個IV在2位的非對映體的混合物與用六甲基二硅胺烷保護的5-氟胞嘧啶在三甲基碘硅烷或三甲基碘硅烷基三氟甲磺酸酯的催化下縮合得到2-位是L構(gòu)型的一對順反異構(gòu)體V或者是2-L構(gòu)型化合物富集的四個立體異構(gòu)體的混合物。
步驟G將步驟E中得到的一對順反異構(gòu)體或者是2-L構(gòu)型化合物富集的四個立體異構(gòu)體的混合物在甲醇中進行分級結(jié)晶。反式異構(gòu)體在室溫下結(jié)晶析出，過濾除去后得到2-L順式異構(gòu)體(VI)或者是VI富集的兩個順式異構(gòu)體的混合物。
步驟H將步驟3G中得到化合物(VI)溶于甲醇中后用正丁胺水解除去扁桃酸殘基即得到(+)FTC，VI富集的兩個順式異構(gòu)體的混合物在正丁胺除去扁桃酸殘基即得到(-)FTC富集的(-)FTC和(+)FTC的混合物。
需要指出的是，從步驟E到步驟H的過程中，2位的構(gòu)型不會發(fā)生變化，最終得到的(-)FTC和(+)FTC的混合物中(-)FTC的含量是由步驟D得到的IIIA的含量決定的。
運用上述的方法雖然可以得到純的(-)FTC單一對映體，但這需要用多次重結(jié)晶的方法分離得到純的化合物IIIA。同制備純的IIIA相比，制備IIIA含量在90％左右的IIIA與其2-D構(gòu)型的非對映體混合物則要簡便的多，由于重結(jié)晶次數(shù)的減少，大大降低了溶劑的使用量，減少了廢溶劑的排放所帶來的污染，同時產(chǎn)率成倍地提高。因此，如果(-)FTC富集的(-)FTC和(+)FTC的混合物所具有的抗病毒活性并與純的(-)FTC接近，則利用(-)FTC富集的(-)FTC和(+)FTC的混合物作為抗病毒劑在經(jīng)濟上是能節(jié)省的而且在環(huán)境保護上也是有利的。
利用產(chǎn)生HBV的HepG2 2.2.15細(xì)胞，測定了(-)FTC含量分別為100％，95％，90％和85％，和50％的(-)FTC和(+)FTC對映體混合物的抗乙型肝炎病毒活性，我們發(fā)現(xiàn)上述(-)FTC含量大于50％FTC混合物的抗HBV活性遠(yuǎn)高于外消旋的FTC，而接近于純的(-)FTC。這個結(jié)果說明了(-)FTC含量大于50％FTC混合物可以用做抗病毒治療劑，其療效應(yīng)該接近于純的(-)FTC而遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于消旋的(±)FTC。
雖然本發(fā)明的一個方面提供了制備(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物的一個方法，但是用別的方法得到的(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物也應(yīng)該有相同的抗病毒活性，所以用別的方法得到的(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物在制備抗病毒藥物上的應(yīng)用也在本專利的范圍之內(nèi)。
本發(fā)明的第二個方面提供了一種藥物組合物，該藥物組合物含有(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物或其藥用鹽或藥用衍生物以及一種或多種藥物上可接受的載體。
所說的藥物組合物可以通過任何已知的方式給藥，包括口服；肌肉，皮下和靜脈注射；通過口腔，舌下，鼻，直腸和陰道的局部給藥等方式。
適合于口服的藥物組合物可以是固體制劑如片劑，膠囊劑，粉劑，顆粒劑，也可以是液體制劑如乳液，懸浮液，溶液等?？诜钠瑒?，膠囊劑可含有常規(guī)的賦型劑如粘合劑，潤滑劑，崩解劑，填充劑或潤濕劑?？诜墓腆w制劑還可以制成緩釋劑型。
優(yōu)選的劑型是口服制劑，優(yōu)選的口服制劑包括片劑和膠囊。
以下實施例可以幫助更好地說明本發(fā)明，但這些實施例并不限制本發(fā)明的范圍。
實施例11，4-二(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧基)-2-丁烯(I) L-扁桃酸100克與特戊酰氯100毫升在200毫升甲苯中在通入氮氣的情況下在50℃反應(yīng)8個小時。將得到的反應(yīng)液冷卻到室溫后加入DMF 10毫升，然后緩慢滴加氯化亞砜。反應(yīng)在35℃持續(xù)三小時后真空濃縮得到油狀液體。將該油狀液體用二氯甲烷500毫升稀釋后緩慢加入到裝有1，4-丁烯二醇28ml，三乙胺110ml，DMAP0.4g和二氯甲烷1600ml的三口瓶中，滴加的過程中持續(xù)攪拌，并保持反應(yīng)溫度在10℃以下。滴加完畢后攪拌半小時后向反應(yīng)液中加入飽和碳酸氫鉀水溶液40ml，繼續(xù)攪拌半小時后，用5％的鹽酸(1000ml)洗3次，0.1M碳酸鈉(1000ml)洗1次，水(1000ml)洗1次后，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)抽干溶劑得黃色油狀液體180ml。
1H-NMR(CDCl3)1.28(S，9H)，4.62(t，J＝1.6Hz，2H)，5.61(t，J＝4Hz，1H)，5.86(s，1H)，7.27-7.47(m，5H)。
實施例22-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧基)乙醛(II) 在帶有尾氣吸收裝置的三口圓底燒瓶中加入1，4-二(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧基)-2-丁烯(I)180毫升和甲醇2000毫升。用冰鹽浴冷卻反應(yīng)液到-5℃后通入臭氧并保持反應(yīng)溫度在10℃以下。通入臭氧8個小時后薄層層析(硅膠板，用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2展開，1％的硫酸甲醇溶液顯色)顯示反應(yīng)原料已經(jīng)消失。通入氮氣10分鐘清除臭氧后，啟動攪拌，用冰水浴將反應(yīng)液到冷卻到5℃后以每分鐘1克的速度加入硫脲12.6g，加完硫脲后，反應(yīng)攪拌過夜，過濾除去固體后，濾液在真空下濃縮除去甲醇后再加入二氯甲烷500ml，用水500ml洗滌2次除去殘留硫脲后，抽干得黃色油狀液體150克。1H-NMR(CDCl3)1.29(s，9H)，4.62(s，2H)，6.01(s，1H)，7.27-7.55(m，5H)，9.52(s，1H)。
實施例32-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-1，3-氧硫雜戊烷-5-酮(III) 將2-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧基)乙醛(II)150克，巰基乙酸35.8ml，對甲苯磺酸1克和甲苯800ml加入到一個2000毫升的圓底燒瓶中。裝上帶有冷凝管的分水器后反應(yīng)用油浴加熱到120℃回流兩個小時，其間共有18毫升水被分出。薄層層析(硅膠板，用乙酸乙酯∶正己烷＝1∶2展開，1％的硫酸甲醇溶液顯色)顯示反應(yīng)已經(jīng)完全。將反應(yīng)液冷卻到室溫后用1M碳酸鈉1000ml洗3次，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去溶劑后得到黃色油狀液體200毫升，將其加熱溶于1000毫升異丙醇∶水的6∶1的混合溶劑中，然后放置于5℃12小時白色晶體析出，過濾得到固體180克，核磁氫潛顯示該固體是兩個非對映體的1∶1混合物。
實施例42-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-1，3-氧硫雜戊烷-5-酮(IIIA) 將2-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-1，3-氧硫雜戊烷-5-酮(III)180克在60℃溶于600毫升甲苯∶石油醚＝2∶1的混合溶劑中，溶液放置于室溫8小時后過濾收集析出的晶體得到120克白色固體，1H-NMR顯示IIIA的含量約為75％。在同樣條件下重復(fù)重結(jié)晶一次后得到白色晶體78克，1H-NMR顯示IIIA的含量約為90％。重復(fù)上述重結(jié)晶過程直到1H-NMR顯示IIIA的含量大于97％后得到26克白色固體。
1H-NMR(CDCl3)1.29(s，9H)，3.54(s，2H)，4.28-4.43(m，2H)，5.52-5.55(m，1H)，5.90(s，1H)，7.38-7.49(m，5H)。
實施例52-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-5-乙酰氧基-1，3-氧硫雜戊烷(IV) 向一個2L的三口燒瓶中加入氫化鋰鋁6.0g，無水四氫呋喃228毫升，在0℃和氮氣保護下滴加叔丁醇37ml和四氫呋喃82ml的混合物。滴加速度為每分鐘2ml。滴加完畢后移走冰浴，待反應(yīng)體系的溫度上升到室溫后再將反應(yīng)裝置置于30度的水浴中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)，直至反應(yīng)體系中停止釋放氣泡。換上冰水浴，在加液漏斗中加入2-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-1，3-氧硫雜戊烷-5-酮(IIIA)26克和THF75ml的混合物，以每秒鐘1滴的速度加入此混合物，加完后繼續(xù)攪拌反應(yīng)2小時，薄層層析(硅膠板，乙酸乙酯∶正己烷＝1∶4展開，1％的硫酸的甲醇溶液顯色)顯示原料已經(jīng)消耗完全。向加液漏斗中加入乙酸酐120ml，在冰水浴中以每秒鐘2-3滴的速度加入到反應(yīng)物中，繼續(xù)攪拌反應(yīng)過夜，薄層層析顯示反應(yīng)完畢。加入硅藻土100克，攪拌反應(yīng)半小時，混合物過濾，濾液用飽和碳酸氫鉀(500ml)洗滌3次，無水硫酸鈉干燥后，真空除去溶劑后得淡綠色油狀液體30毫升。
實施例6順-2-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)1，3-氧硫雜戊烷(V) 將5-氟胞嘧啶10g，六甲基二硅烷50ml，硫酸銨固體少許和無水1，2-二氯乙烷260ml在氮氣保護下加熱回流約四個小時后白色固體消失形成澄清溶液。將此溶液冷卻到0℃后加入2-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-5-乙酰氧基-1，3-氧硫雜戊烷(3-IIA)30毫升。在氮氣保護下加入三甲基碘硅烷10.8毫升。將反應(yīng)液攪拌過夜并讓反應(yīng)液的溫度逐漸升到室溫。用亞硫酸氫鈉水溶液200毫升洗滌反應(yīng)液后在真空下除去溶劑得到50克糖漿狀棕色殘余物。將該殘余物加熱溶于100毫升甲醇后冷卻至室溫，放置12小時后有固體析出。過濾除去固體后將母液濃縮三分之一，放置于室溫12小時又后有固體析出。過濾除去固體，母液在真空下除去甲醇，殘余物溶于100毫升乙酸乙酯后放置于-20℃冷凍結(jié)晶，過濾得到白色固體14克，收率為43％，熔點56-58℃，[α]D20+97.8°(c0.45，二氯甲烷)。
1H-NMR (CDCl3)1.29(s，9H)，3.19(d，J＝12Hz，1H)，3.43(dd，J＝5.2，12.8Hz，1H)，4.25(ddd，J＝4，12.4，16.4Hz，2H)，5.46(br s，NH，1H)，5.90(S，1H)，6.27(d，J＝4.8Hz，1H)，7.18(br s，NH，1H)，7.27-7.51(m，5H)。
實施例7順-2-L-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷(-)FTC。
將順-2-L-(2’-特戊酰氧基-L-扁桃酰氧甲基)-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)1，3-氧硫雜戊烷(V)14克溶于100甲醇中，然后加入正丁胺10毫升，室溫攪拌反應(yīng)2小時。真空除去溶劑，將所得殘余物用石油醚洗滌后，所得灰色固體。用甲醇重結(jié)晶，得到順-2-L-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)1，3-氧硫雜戊烷(FTC)5.8克，收率為89％。熔點184-186℃，旋光度「α]D20-119.8°(c 0.98，甲醇)。手性HPLC分析測定其對映體純度為98.5％。HPLC分析柱為Chiral Pak AS(Dajcel chemical industries Ltd)，流動相為異丙醇，流速0.5ml/min，(-)FTC的保留時間為9.2min，(+)FTC的保留時間為16.5min。
實施例8(-)FTC含量為91.3％的(-)FTC和(+)FTC的混合物實施例4中得到的IIIA含量約為90％的混合物26克用實施例5-7中所描述的相同的制備方法得到固體5.3克，旋光度[α]D20-96.8°(c0.83，甲醇)，手性HPLC分析測定其對映體純度為91.3％。HPLC分析柱為Chiral Pak AS(Daicel chemical industries Ltd)，流動相為異丙醇，流速0.5ml/min，(-)FTC的保留時間為9.2min，(+)FTC的保留時間為16.5min。
實施例9(-)FTC含量超過50％的(-)FTC和(+)FTC混合物的抗HBV活性(-)FTC含量為95％，90％和85的％(-)FTC和(+)FTC混合物用實施例8所描述的方法制得。
產(chǎn)生HBV的HepG2 2.2.15細(xì)胞系被維持在最小量的必需的介質(zhì)中，在37℃潮濕的含有5％的CO2和95％的空氣的條件下進行培養(yǎng)，將2.2.15細(xì)胞接種到25cm2的培養(yǎng)皿中。(-)FTC含量為95％，90％和85的％(-)FTC和(+)FTC混合物以及純的(-)FTC和(±)FTC在接種后3大加到介質(zhì)中，每種有效成分重復(fù)三組，細(xì)胞在藥物存在的條件下生長12天，介質(zhì)每3天換一次，培養(yǎng)結(jié)束后，介質(zhì)離心2000g10分鐘，并向上清液加入PEG(Mr，8000)最終濃度為10％。病毒通過離心沉淀，沉淀物重新懸浮在原體積1％的TNE中，懸浮物加入1％的SDS和蛋白酶K0.5mg/ml，然后在0.8％的瓊脂糖凝膠上電泳分離，之后轉(zhuǎn)移到雜交膜上，用32P標(biāo)記的HBV DNA探針雜交30分鐘，再自動放射顯影，自放射顯影調(diào)帶的強度用掃描密度儀定量測定。在獨立的重復(fù)實驗中，HBV特異的DNA的量是相似的，EC50被定義為抑制HBV DNA在介質(zhì)中產(chǎn)生50％的濃度，這個值是通過抑制百分?jǐn)?shù)同藥物濃度作圖得到的。所試樣品的EC50列于表一中表一有效成分 EC50(μM)(-)FTC 21.5±5.695％(-)FTC 18.3±6.590％(-)FTC 28.6±4.185％(-)FTC 23.8±11.3(±)FTC115.7±12.1實施例10膠囊劑制劑配方活性成分200mg
微晶纖維素 25mg聚乙烯吡咯烷酮 75mg硬脂酸鎂 5mg將上述配方中的各成分混合填充到硬明膠膠囊中制得膠囊劑，其中活性成分為(-)FTC含量大于50％的(-)FTC和(+)FTC的混合物。
實施例15片劑制劑配方活性成分200mg微晶纖維素 75mg甘醇酸淀粉鈉25mg硬脂酸鎂5mg膠態(tài)二氧化硅2mg制備方法將活性成分2.0kg，微晶纖維素0.75kg，甘醇酸淀粉鈉0.25kg和膠態(tài)二氧化硅20g分別過篩后混合，用適當(dāng)?shù)幕旌掀骰旌?0分鐘后再加入硬脂酸鎂50g，繼續(xù)混合5分鐘后用旋轉(zhuǎn)壓片機干壓制粒。
其中所說的活性成分為(-)FTC含量大于50％的(-)FTC和(+)FTC的混合物。
權(quán)利要求
1.順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用，所說的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的對映體混合物是(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷和(+)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的混合物，其特征在于(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于50％并且不多于95％的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1，所說的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于75％。
3.根據(jù)權(quán)利要求1，所說的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于90％。
4.根據(jù)權(quán)利要求1，所說的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于93％。
5.一種以順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成份的藥物組合物，所說的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷是(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷和(+)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的混合物，其特征在于(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于50％并且不多于95％的。
6.如權(quán)利要求5中所述的藥物組合物，其中所述的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于75％。
7.如權(quán)利要求5中所述的藥物組合物，其中所述的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于90％。
8.如權(quán)利要求5中所述的藥物組合物，其中所述的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷中(-)順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷的含量不少于93％。
9.如權(quán)利要求5中所述的藥物組合物，所述的藥物組合物含有順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷在藥學(xué)上可接受的鹽。
10.-種制備權(quán)利要求5-9任-項中所述的藥物組合物的方法，該方法包括將作為有效成份的順-2-羥甲基-5-(5’-氟胞嘧啶-1’-)-1，3-氧硫雜戊烷，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體混合。
全文摘要
本發(fā)明提供了(－)順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的含量大于50％的順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽。本發(fā)明還提供了上述對映體混合物的抗HIV和HBV的活性并意外地發(fā)現(xiàn)(+)順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的存在不會影響(－)順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的抗病毒活性。本發(fā)明還涉及(－)順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的含量大于50％的順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗病毒藥物中的應(yīng)用，及以制備(－)順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的含量大于50％的順－2－羥甲基－5－(5’－氟胞嘧啶－1’－)－1，3－氧硫雜戊烷的對映體混合物，其藥學(xué)上可接受的衍生物或其藥學(xué)上可接受的鹽作為有效成份的藥物組合物的方法。
文檔編號A61P31/12GK1795861SQ20041006588
公開日2006年7月5日 申請日期2004年12月24日 優(yōu)先權(quán)日2004年12月24日
發(fā)明者袁建棟 申請人:博瑞生物醫(yī)藥技術(shù)(蘇州)有限公司