專利名稱：組織再生用基材、移植用材料及其制法的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及在整形外科、口腔外科、成形外科等醫(yī)療領(lǐng)域中可以廣泛使用的組織再生用基材、移植用材料及其制法。
背景技術(shù)：
近年來，通過再形成、再構(gòu)筑人體組織進(jìn)行治療的組織工程學(xué)(Tissue Engineering)的領(lǐng)域一直快速發(fā)展。這種組織工程學(xué)從二十世紀(jì)80年代初期開始，在整形外科領(lǐng)域等中，嘗試在分解·非分解性材料中培養(yǎng)皮膚、軟骨或者神經(jīng)細(xì)胞。
在組織工程學(xué)中，已知以下方法，即在生物體內(nèi)移植成為組織再生基礎(chǔ)的基質(zhì)，在生物體內(nèi)(invivo)使細(xì)胞繁殖從而進(jìn)行治療的方法，或者在生物體外(in vitro)進(jìn)行以基質(zhì)為基礎(chǔ)的細(xì)胞培養(yǎng)、繁殖后，將培養(yǎng)的細(xì)胞(組織)和基質(zhì)一起，或者單獨(dú)將再生組織移植到生物體內(nèi)的方法等。
另外，關(guān)于成為組織再生基礎(chǔ)的基質(zhì)，也已知各種來源于生物體的材料和合成材料等，例如，可以在膠原或者聚乙醇酸的基質(zhì)中進(jìn)行細(xì)胞的三維培養(yǎng)，具有在生物體內(nèi)分解·吸收的特征。
但是，這些基質(zhì)的分解產(chǎn)物存在誘發(fā)炎癥反應(yīng)的可能性，而且，基質(zhì)在組織再建前分解，或者在組織再生后長(zhǎng)時(shí)間也不分解等，難于控制分解·消失時(shí)間。
本發(fā)明是鑒于上述課題而提出的，其目的在于提供可以進(jìn)行組織再生，具備組織再建時(shí)所需的力學(xué)特性并具有在組織再建后的生物體內(nèi)分解消失特性的組織再生用基材。另一目的在于提供可以良好地再建組織且具有在組織再建后的生物體內(nèi)分解消失特性的移植用材料，再一目的在于提供這種移植用材料的制法。
發(fā)明公開為了解決上述課題，本發(fā)明涉及組織再生用基材，其特征在于，含有聚輪烷或者聚輪烷水凝膠，其中，該聚輪烷是在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的物質(zhì)，該聚輪烷水凝膠是與該聚輪烷鄰接的聚輪烷1分子中含有的環(huán)狀分子之間、生物體親和性基團(tuán)之間或者環(huán)狀分子和生物體親和性基團(tuán)之間通過交聯(lián)鍵進(jìn)行交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)。
使用本發(fā)明的由聚輪烷或者聚輪烷水凝膠構(gòu)成的組織再生用基材，例如培養(yǎng)軟骨細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞一邊維持類似軟骨細(xì)胞的形態(tài)，一邊繁殖。另外，即使在生物體內(nèi)以單體移植該組織再生用基材，也不會(huì)損害細(xì)胞形態(tài)和繁殖。即可以進(jìn)行組織再生。
另外，用于本發(fā)明的聚輪烷或者聚輪烷水凝膠具備組織再建時(shí)所需的力學(xué)特性。認(rèn)為這是因?yàn)榫圯喭楹途圯喭樗z通過進(jìn)行超分子結(jié)構(gòu)即線形分子和環(huán)狀分子這樣的不同分子間的物理絡(luò)合(非共價(jià)鍵)，從而具有高結(jié)晶性。
而且，用于本發(fā)明的聚輪烷或者聚輪烷水凝膠具有在組織再建后的生物體內(nèi)分解消失的特性。認(rèn)為其原因在于，由于具有水解性鍵，在生物體內(nèi)該水解性鍵加水分解，并且體積龐大的生物親和性基團(tuán)(即帽子)從線形分子的兩末端脫落，環(huán)狀分子從該線形分子脫離，從而分解消失。
這樣，根據(jù)本發(fā)明的組織再生用基材，可以進(jìn)行組織再生，在具備組織再建時(shí)所需的力學(xué)特性的同時(shí)，具有在組織再建后的生物體內(nèi)分解消失特性，因而適合于從細(xì)胞再構(gòu)筑組織。
在本發(fā)明的組織再生用基材中，只要是線形分子或者環(huán)狀分子具有生物親和性(幾乎不損害生物體的性質(zhì))的物質(zhì)即可，沒有特別的限定，作為線形分子，優(yōu)選選自聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物以及聚甲基乙烯基醚的一種或兩種以上。作為這樣構(gòu)成的環(huán)狀分子或者線形分子，通過選擇生物親和性優(yōu)良的分子，則合成的聚輪烷或者聚輪烷水凝膠生物親和性優(yōu)良，適合作為組織再生用移植材料。另外，平均分子量?jī)?yōu)選200-50000，特別優(yōu)選400-5000。作為環(huán)狀分子，優(yōu)選α、β或者γ-環(huán)糊精，也可以是具有與其類似的環(huán)狀結(jié)構(gòu)的物質(zhì)，作為這種環(huán)狀結(jié)構(gòu)，可以舉出環(huán)狀聚醚、環(huán)狀聚酯、環(huán)狀聚醚胺、環(huán)狀聚胺等。作為線形分子和環(huán)狀分子的組合，優(yōu)選α-環(huán)糊精和聚乙二醇的組合。
在本發(fā)明的組織再生用基材中，作為水解性鍵，只要是在生物體內(nèi)進(jìn)行水解的鍵即可，可以是任意的鍵。其中，如果考慮在生物體內(nèi)快速非酶地進(jìn)行水解，優(yōu)選酯鍵。
組織再生用基材是聚輪烷水凝膠時(shí)，交聯(lián)鍵優(yōu)選氨酯鍵(urethanebond)、酰胺鍵、脲鍵、醚鍵、硫鍵(sulfide bond)或者席夫堿型鍵。另外，環(huán)狀分子彼此交聯(lián)時(shí)，交聯(lián)鍵優(yōu)選與水解性鍵相比，對(duì)水穩(wěn)定的。這是因?yàn)?，水解性鍵首先分解，具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)從線形分子的兩個(gè)末端脫落，交聯(lián)結(jié)合的環(huán)狀分子立刻脫落，從而可以得到良好的分解模式。
在本發(fā)明的組織再生用基材中，作為線形分子的兩個(gè)末端的生物體親和性基團(tuán)，只要是對(duì)生物體的親和性高的基團(tuán)(相對(duì)于生物體安全性高的基團(tuán))即可，可以是任意基團(tuán)，例如優(yōu)選氨基酸、寡肽、寡糖類或者糖衍生物。作為氨基酸，例如可以舉出丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、苯基丙氨酸、色氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、酪氨酸、半胱氨酸、賴氨酸、精氨酸、組氨酸等。另外，作為寡肽，可以舉出上述多個(gè)氨基酸通過肽鍵形成的寡肽等。另外，作為寡糖類，可以舉出重復(fù)單元為1-5且作為構(gòu)成多糖為葡聚糖、透明質(zhì)酸、甲殼質(zhì)、脫乙酰殼多糖、海藻酸、硫酸軟骨素、淀粉組成的物質(zhì)。而且，作為糖衍生物，可以舉出將寡糖類、多糖或者單糖進(jìn)行乙酰化或者異丙基化等化學(xué)修飾得到的化合物等。其中，優(yōu)選具有苯環(huán)的氨基酸，例如L-苯基丙氨酸、L-酪氨酸、L-色氨酸等。
在本發(fā)明的組織再生用基材中，作為生物體親和性基團(tuán)具有的體積龐大的取代基，只要可以防止環(huán)狀分子從線形分子脫落即可，可以是任意基團(tuán)，例如優(yōu)選具有1個(gè)以上苯環(huán)的基團(tuán)或者具有1個(gè)以上叔丁基的基團(tuán)。作為具有1個(gè)以上苯環(huán)的基團(tuán)，例如可以舉出芐氧基羰基(Z)基團(tuán)、9-芴基甲氧基羰基(Fmoc)基團(tuán)、芐基酯(OBz)基團(tuán)等，另外，作為具有1個(gè)以上叔丁基的基團(tuán)，可以舉出叔丁基羰基(Boc)基團(tuán)、氨基酸叔丁基酯(Obu)基團(tuán)等，其中，優(yōu)選芐氧基羰基。
作為本發(fā)明的組織再生用基材，特別優(yōu)選上述線形分子是聚乙二醇，上述環(huán)狀分子是α-環(huán)糊精，上述水解性鍵是酯鍵，上述具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)是芐氧基羰基-L-苯基丙氨酸。另外，在聚乙二醇貫穿α-環(huán)糊精時(shí)，α-環(huán)糊精和聚乙二醇的重復(fù)單元(環(huán)氧乙烷單元)的化學(xué)計(jì)量比為1∶2。
本發(fā)明的組織再生用基材是聚輪烷水凝膠時(shí)，通過改變聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例(聚輪烷在聚輪烷水凝膠骨架中所占的重量比例)，可以控制聚輪烷水凝膠的分解速度。這是這次新得到的發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選利用該發(fā)現(xiàn)，如下確定聚輪烷在聚輪烷水凝膠中的重量比例。即，預(yù)先求得適合于組織再生用基材使用狀況的分解速度，確定聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的比例，使之達(dá)到該分解速度。結(jié)果可以得到適合于使用狀況的組織再生用基材。
本發(fā)明的組織再生用基材是聚輪烷水凝膠，即通過交聯(lián)用線形分子，以交聯(lián)鍵將1分子相鄰的聚輪烷中所含的環(huán)狀分子之間(或者生物體親和性基團(tuán)之間，或者環(huán)狀分子和生物體親和性基團(tuán)之間)交聯(lián)得到的結(jié)構(gòu)時(shí)，通過改變?cè)摻宦?lián)用線形分子的平均分子量，可以控制聚輪烷水凝膠的分解速度或者分解模式。這也是這次新得到的發(fā)現(xiàn)，優(yōu)選利用該發(fā)現(xiàn)，如下確定交聯(lián)用線形分子的平均分子量。即，預(yù)先求得適合于組織再生用基材使用狀況的分解速度或者分解模式，確定交聯(lián)用線形分子的平均分子量，使之達(dá)到該分解速度或分解模式。結(jié)果可以得到適合于使用狀況的組織再生用基材。
在此，作為分解模式，有以下模式，即在生物體內(nèi)徐徐分解的模式，或者在生物體內(nèi)經(jīng)過某一時(shí)間為止幾乎沒有分解，之后急速分解的模式等。另外，作為交聯(lián)用線形分子，例如優(yōu)選聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物等生物體親和性聚合物，其平均分子量?jī)?yōu)選在0-50000的范圍。另外，交聯(lián)部分的分子量是0時(shí)，意味著交聯(lián)用線形分子不在其中，直接成鍵。另外，通過交聯(lián)用線形分子交聯(lián)時(shí)，優(yōu)選在交聯(lián)用線形分子的兩端交聯(lián)。
本發(fā)明的組織再生用基材優(yōu)選由聚輪烷水凝膠構(gòu)成，該聚輪烷水凝膠是對(duì)于在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩個(gè)末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的聚輪烷，通過交聯(lián)用線形分子，以交聯(lián)鍵將1分子相鄰的聚輪烷中含有的環(huán)狀分子之間交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)，所述基材具有下述(a)和/或(b)的性質(zhì)。
(a)聚輪烷水凝膠直至完全水解的時(shí)間不依賴于聚輪烷水凝膠中的含水率，伴隨著聚輪烷水凝膠中的聚輪烷含量減少，或者伴隨著交聯(lián)用線形分子對(duì)環(huán)狀分子的摩爾比增加，或者伴隨著交聯(lián)用線形分子的平均分子量減少而延長(zhǎng)。
(b)以聚輪烷水凝膠直至完全水解的時(shí)間為t∞，經(jīng)過的時(shí)間為t，初期水膨潤(rùn)狀態(tài)下的聚輪烷水凝膠重量為M0，在時(shí)間t的聚輪烷水凝膠重量為Mt，以t/t∞為橫軸，Mt/M0為縱軸描繪圖時(shí)的分解模式不依賴于聚輪烷水凝膠中的聚輪烷含量，而是取決于交聯(lián)用線形分子的分子量。
具有上述(a)性質(zhì)時(shí)，預(yù)先求得適合于組織再生用基材的使用狀況的分解速度，通過確定聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的比例(含量)或者確定交聯(lián)用線形分子對(duì)環(huán)狀分子的摩爾比，或者確定交聯(lián)用線形分子的平均分子量，使之達(dá)到該分解速度，從而可以得到適合于使用狀況的組織再生用基材。
另一方面，具有上述(b)性質(zhì)時(shí)，預(yù)先求得適合于組織再生用基材的使用狀況的分解模式，通過確定交聯(lián)用線形分子的平均分子量，使之達(dá)到該分解模式，從而可以得到適合于使用狀況的組織再生用基材。另外，實(shí)際在生物體內(nèi)使用時(shí)，如果要得到直至經(jīng)過某一時(shí)間幾乎沒有分解，其后急速分解的模式，例如優(yōu)選將交聯(lián)用線形分子的平均分子量控制為4000-10000。
作為具有上述(a)和/或(b)性質(zhì)的組織再生用基材，例如可以舉出由聚輪烷水凝膠構(gòu)成的基材，對(duì)于該聚輪烷水凝膠，環(huán)狀分子是α-環(huán)糊精，線形分子是聚乙二醇，水解性鍵是酯鍵，交聯(lián)用線形分子是聚乙二醇二胺，在聚乙二醇二胺的兩個(gè)末端的NH2基上通過氨酯鍵將1分子相鄰的聚輪烷中含有的α-環(huán)糊精的OH基團(tuán)之間交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而得到。
本發(fā)明的組織再生用基材只要是可以培養(yǎng)或者引入細(xì)胞的形態(tài)即可，沒有特別限定為什么樣的形態(tài)。例如可以制成膜狀，在其上接種細(xì)胞，或者制成凝膠狀，在其上接種細(xì)胞，或者溶解于溶劑中，在該溶液中接種細(xì)胞，或者在溶劑中懸濁，在該懸濁液中接種細(xì)胞。特別是，如果從易于保持·培養(yǎng)細(xì)胞方面考慮，優(yōu)選使用聚輪烷或者聚輪烷水凝膠的多孔體。對(duì)于此時(shí)的孔，只要是可以保持細(xì)胞的大小·密度即可，沒有特別的限定。另外，不和細(xì)胞組合，以單體在生物體內(nèi)移植組織再生用基材時(shí)，組織再生用基材的形態(tài)也沒有限定。優(yōu)選成為多孔體，因?yàn)閬碜砸浦仓車M織的細(xì)胞給予了適合于繁殖的環(huán)境。此時(shí)，孔的大小、密度可以是適合于細(xì)胞從移植周圍組織侵入并可以進(jìn)行血管新生的大小、密度，沒有特別的限定。另外，作為多孔體的制法，可以應(yīng)用公知的方法，例如，可以應(yīng)用在氯化鈉存在下使之凝膠化的方法或者真空冷凍干燥含水水凝膠的方法等。
對(duì)于本發(fā)明的組織再生用基材，其表面也可以被細(xì)胞粘結(jié)促進(jìn)物質(zhì)覆蓋。所謂細(xì)胞粘結(jié)促進(jìn)物質(zhì)只要是具有促進(jìn)細(xì)胞粘結(jié)的性質(zhì)的物質(zhì)即可，沒有特別的限定，例如可以舉出膠原、明膠等。覆蓋方法沒有特別的限定，可以根據(jù)常規(guī)方法進(jìn)行，簡(jiǎn)單地可以列舉出調(diào)制多孔體后，浸漬在細(xì)胞粘結(jié)促進(jìn)物質(zhì)中，之后再次冷凍干燥的方法。
組織再生用基材特別是可以用于任何細(xì)胞的培養(yǎng)或者引入，例如，優(yōu)選用于間質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞、神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)，在此，間質(zhì)細(xì)胞包含軟骨細(xì)胞、成纖維細(xì)胞、成骨細(xì)胞、成肌細(xì)胞、脂肪細(xì)胞、內(nèi)皮細(xì)胞、上皮細(xì)胞以及這些全部的前驅(qū)細(xì)胞，特別優(yōu)選本發(fā)明的組織再生用基材用于軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)。
作為使用本發(fā)明的組織再生用基材使組織再生的方法，可以考慮以單體使用聚輪烷和聚輪烷凝膠的方法，在該再生用基材中只引入細(xì)胞進(jìn)行使用的方法，還有在該再生用基材上培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行使用的方法。
另外，作為使細(xì)胞固定化的方法，例如可以舉出通過在聚輪烷水凝膠中添加高濃度的細(xì)胞培養(yǎng)液，在凝膠膨潤(rùn)的同時(shí)，將細(xì)胞引入凝膠孔內(nèi)進(jìn)行固定的方法；旋轉(zhuǎn)培養(yǎng)的方法；接種細(xì)胞后，通過減壓至不對(duì)細(xì)胞造成影響的程度進(jìn)行固定的方法等。
如果使用在本發(fā)明的組織再生用基材中培養(yǎng)細(xì)胞或者引入細(xì)胞得到的移植用材料，可以進(jìn)行組織再生。作為制造該移植用材料的方法，可以是任何制造方法，但是優(yōu)選根據(jù)使用目的，將上述組織再生用基材調(diào)制成適當(dāng)?shù)拇笮』蛐螤詈?，在該組織再生用基材中培養(yǎng)或引入細(xì)胞，得到移植用材料。例如，在用于耳軟骨的再造時(shí)，為了適合于耳朵的應(yīng)用部位，也可以在整形·加工的組織再生用基材中注入細(xì)胞分散液，培養(yǎng)一定時(shí)間，形成移植用材料。此時(shí)，將該移植用材料埋入耳的應(yīng)用部位。相反，在組織再生用基材中培養(yǎng)或者引入細(xì)胞后，利用該移植用材料時(shí)，或者裝運(yùn)時(shí)，也可以調(diào)整成與應(yīng)用部位相對(duì)應(yīng)的適當(dāng)?shù)拇笮』蛘咝螤睢?br> 對(duì)于由聚輪烷或者聚輪烷水凝膠構(gòu)成的組織再生用基材，例如培養(yǎng)軟骨細(xì)胞的移植用材料，培養(yǎng)細(xì)胞在維持軟骨細(xì)胞那樣的形態(tài)的同時(shí)進(jìn)行繁殖，豐富地產(chǎn)生軟骨基質(zhì)。軟骨組織主要由軟骨細(xì)胞和該細(xì)胞產(chǎn)生的基質(zhì)修復(fù)，因此預(yù)先大量含有這些意味著該移植用材料具有高組織再生能力。這樣，進(jìn)行培養(yǎng)操作時(shí)，在繁殖組織修復(fù)所需的細(xì)胞或者在移植用材料中可以擔(dān)載細(xì)胞的產(chǎn)生物質(zhì)(基質(zhì)或者生長(zhǎng)因子等)方面優(yōu)選，即使因某些理由細(xì)胞死亡的情況下，細(xì)胞產(chǎn)生的基質(zhì)或者生長(zhǎng)因子因殘留在移植用材料中，因而對(duì)組織再生也有效。而且，在上述組織再生用基材中例如只接種軟骨細(xì)胞，即，不進(jìn)行培養(yǎng)只引入，為了維持細(xì)胞的形態(tài)，移植后這些細(xì)胞立刻對(duì)組織再生起作用，作為移植用材料也有效。


圖1是表示生物降解性聚輪烷的合成順序的說明圖，圖2是表示聚輪烷水凝膠的合成順序的說明圖，圖3是聚輪烷水凝膠PRHG-5，6的非酶水解行為的圖，圖4是用于考察聚輪烷水凝膠PRHG-5，6的分解模式的圖，圖5是聚輪烷水凝膠PRHG-7～9的非酶水解行為的圖，圖6是用于考察聚輪烷水凝膠PRHG-7～9的分解模式的圖，圖7是表示使PEG二胺的分子量一定并改變聚輪烷含量的聚輪烷水凝膠的分解行為的圖，圖8是表示聚輪烷含量和完全分解時(shí)間的關(guān)系的圖，圖9是表示聚輪烷含量和含水率的關(guān)系的圖，圖10是表示PEG/α-CD比和完全分解時(shí)間的關(guān)系的圖，圖11是表示以t/t∞為橫軸，Mt/M0為縱軸時(shí)的分解模式的圖，圖12是表示聚輪烷水凝膠PRHG-1，3上的兔軟骨細(xì)胞培養(yǎng)的經(jīng)時(shí)變化的圖。
發(fā)明的最佳實(shí)施方式下面對(duì)于本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施例進(jìn)行說明，但本發(fā)明不受這些實(shí)施例的任何限定。
(1)生物降解性聚輪烷的合成(參照?qǐng)D1)(1-1)在兩個(gè)末端具有氨基的PEG的合成在甲苯(220ml)中溶解分子量3300的聚乙二醇(PEG)(33g，10mmol)和琥珀酸酐(20g，200mmol)，在150℃下回流該溶液5小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，注入過量的乙醚，過濾·減壓干燥后，得到粗產(chǎn)物。將其溶解在二氯甲烷中，離心分離除去不溶物，注入過量的乙醚中，過濾·減壓干燥后，得到在兩個(gè)末端具有羧基的PEG(化合物A)，為白色粉末。
在1，4-二氧六環(huán)和二氯甲烷的混合溶液(350ml，體積比1∶1)中溶解該化合物A(20g，5.7mmol)和N-羥基琥珀酰亞胺(HOSu)(17.1g，148.2mmol)，用冰冷卻后，添加二環(huán)己基碳二亞胺(DCC)(23.5g，114mmol)。在用冰冷卻的狀態(tài)下攪拌1小時(shí)，之后在室溫下攪拌過夜。過濾作為副產(chǎn)物的二環(huán)氨基甲酸乙酯，將濾液濃縮后注入過量的乙醚中。過濾·減壓干燥后，得到羧基被活化的PEG(化合物B)，為白色粉末。
在溶解了乙二胺(0.4ml，6mmol)的二氯甲烷(75ml)中，滴加溶解了化合物B(10g，2.7mmol)的二氯甲烷(75ml)，滴加結(jié)束后，在室溫下攪拌1小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，將溶液注入到過量的乙醚中，過濾·減壓干燥后，得到在兩個(gè)末端具有氨基的PEG(化合物C)，為白色粉末。
(1-2)假聚輪烷的制備在室溫下，在α-環(huán)糊精(α-CD)(48g，49.2mmol)的飽和水溶液(311ml)中滴加化合物C(4g，1.12mmol)的水溶液(20ml)。在照射超聲波的同時(shí)攪拌1小時(shí)，之后，在室溫下攪拌24小時(shí)。通過離心分離回收白色的沉淀物。在50℃下進(jìn)行減壓干燥，得到白色粉末狀的假聚輪烷。
另外，所謂聚輪烷是指在多個(gè)環(huán)狀分子(例如環(huán)糊精)上貫穿線狀分子(例如PEG)，且用體積龐大的取代基封閉該線形分子的兩個(gè)末端的物質(zhì)，假聚輪烷是指未用體積龐大的取代基封閉聚輪烷的兩個(gè)末端的物質(zhì)。
(1-3)末端封閉劑的制備為了導(dǎo)入苯甲氧基羰基-L-苯丙氨酸(Z-L-Phe，Z表示苯甲氧基羰基)作為防止α-CD脫離的體積龐大的取代基，將Z-L-Phe的羧基活化。
即，在1，4-二氧六環(huán)(800ml)中溶解Z-L-Phe(100g，334mmol)，一邊用冰冷卻一邊添加HOSu(38.42g，334mmol)。1小時(shí)后，緩慢添加溶解了DCC(75.7g，367mmol)的1，4-二氧六環(huán)溶液(200ml)，在用冰冷卻的狀態(tài)下攪拌1小時(shí)，之后，在室溫下攪拌過夜。過濾作為副產(chǎn)物的二環(huán)氨基甲酸乙酯，濃縮濾液后，注入到過量的乙醚中，過濾·減壓干燥后得到粗產(chǎn)物。在室溫下，在二氯甲烷中溶解粗產(chǎn)物，盡可能達(dá)到飽和濃度后，適量添加石油醚并冷藏，進(jìn)行重結(jié)晶。過濾·減壓干燥晶體，得到白色針狀晶體的Z-L-Phe的琥珀酰亞胺酯(Z-L-Phe-Osu)。
(1-4)生物降解性聚輪烷的制備在二甲基亞砜(DMSO)(60ml)中溶解Z-L-Phe-Osu(80g，200mmol)，添加假聚輪烷(45g，2mmol)。在室溫下攪拌該不均勻溶液的同時(shí)，少量多次添加DMSO并攪拌96小時(shí)以達(dá)到均勻。反應(yīng)結(jié)束后，在過量的乙醚中注入反應(yīng)溶液，得到粗產(chǎn)物。以丙酮、二甲基甲酰胺(DMF)的順序洗滌粗產(chǎn)物，除去雜質(zhì)(未反應(yīng)的Z-L-Phe-Osu、α-CD、化合物C等)并過濾·減壓干燥，得到生物降解性聚輪烷，為白色粉末。合成的確認(rèn)通過1H-NMR進(jìn)行。
(2)聚輪烷水凝膠的制備(參照?qǐng)D2)在氮?dú)猸h(huán)境下，在DMSO(10ml)中溶解生物降解性聚輪烷(1g，2.91×10-5mol，[OH]＝16.2mmol)后，添加N，N’-羰基二咪唑(CDI)(8.13mmol)，在室溫下攪拌3小時(shí)。反應(yīng)結(jié)束后，注入到過量的乙醚中，過濾·減壓干燥，得到白色粉末狀的CDI活化聚輪烷(CDI-PR)。
根據(jù)下述表1所示的配合量，添加CDI-PR的DMSO溶液、PEG的二胺(PEG-BA，分子量600)和氯化鈉，攪拌·脫氣后，用聚四氟乙烯間隔物(直徑13mm，深度2mm)，在35℃下凝膠化24小時(shí)。得到的凝膠用DMSO洗滌，接著用水洗滌直至重量沒有變化，得到聚輪烷水凝膠(PRHG-1～4)。
這些聚輪烷水凝膠PRHG-1～4是通過PEG用交聯(lián)鍵(氨酯鍵)將1分子相鄰的聚輪烷中所含的環(huán)狀分子(α-環(huán)糊精)彼此交聯(lián)而形成三維網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)。另外，在氯化鈉存在下進(jìn)行凝膠化得到的PRHG-1～3是多孔體(用電子顯微鏡就可以確認(rèn))，在沒有氯化鈉的條件下進(jìn)行凝膠化得到的PRHG-4是非多孔體。
表1


※)是非多孔體的測(cè)定值。
(3)聚輪烷水凝膠的物性測(cè)定聚輪烷水凝膠的含水率、作為力學(xué)強(qiáng)度指數(shù)的壓縮彈性率以及膨脹時(shí)的交聯(lián)密度(參照表1)。另外，這些雖然是非多孔體的測(cè)定值，但是對(duì)于壓縮彈性率，即使是多孔體也同等或者約小1個(gè)數(shù)量級(jí)。對(duì)于交聯(lián)密度，即使是多孔體也同等。
對(duì)于含水率，在室溫下測(cè)定平衡膨潤(rùn)狀態(tài)的聚輪烷水凝膠重量(Wset)，以及在50℃下減壓干燥該凝膠后的干燥聚輪烷水凝膠重量(Wdry)，由下述數(shù)學(xué)式1算出。
數(shù)學(xué)式1


在室溫下用熱應(yīng)力變形測(cè)定裝置測(cè)定壓縮彈性率，用壓縮彈性率由下述數(shù)學(xué)式2計(jì)算出交聯(lián)密度。另外，測(cè)定時(shí)，采用使用軟木塞穿孔器旋孔達(dá)到與探針大致相同的截面積得到的平衡膨脹狀態(tài)的聚輪烷水凝膠。
數(shù)學(xué)式2Ec＝3RT×ve/VEc壓縮彈性率
ve/V交聯(lián)密度R氣體常數(shù)T絕對(duì)溫度V膨脹時(shí)的凝膠體積(4)聚輪烷水凝膠的非酶水解行為的解析(4-1)有關(guān)聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的比例的考察在上述(2)中，添加CDI-PR的DMSO溶液、PEG-BA的DMSO溶液和氯化鈉進(jìn)行凝膠化時(shí)，調(diào)制聚輪烷重量(從CDI-PR的DMSO溶液換算)和PEG-BA重量的比為70∶30的聚輪烷水凝膠(PRHG-5)以及60∶40的聚輪烷水凝膠(PRHG-6)。
將平衡膨潤(rùn)狀態(tài)的聚輪烷水凝膠PRHG-5、PRHG-6浸漬在0.1M磷酸緩沖溶液(PBS)(pH＝8.0)中，在37℃下振蕩，在每次規(guī)定的時(shí)間擦去水，測(cè)定凝膠的重量變化。以該重量變化作為非酶水解行為的評(píng)價(jià)。結(jié)果如圖3所示。
聚輪烷水凝膠的分解模式是在初期重量一直增加，之后減少，最終為零的模式。其中，認(rèn)為在重量增加時(shí)，聚輪烷水凝膠的交聯(lián)點(diǎn)減少，三維結(jié)構(gòu)的網(wǎng)眼質(zhì)量擴(kuò)大，從而容易保持水分，含水率增加，維持聚輪烷水凝膠的三維結(jié)構(gòu)。另一方面認(rèn)為不能維持聚輪烷水凝膠的三維結(jié)構(gòu)而交聯(lián)點(diǎn)減少時(shí)，溶解并重量一直減少，直至為零。因而，開始重量變化的測(cè)定之后，直至重量為零的時(shí)間表示分解速度。
根據(jù)圖3，由于PRHG-5比PRHG-6分解速度快，可以說聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例越多，聚輪烷水凝膠的分解速度越快。
另外，為了考察聚輪烷水凝膠的分解模式，用試驗(yàn)開始前的水膨潤(rùn)狀態(tài)時(shí)的水凝膠的重量M0、直至聚輪烷水凝膠完全分解的時(shí)間(稱為完全分解時(shí)間)t∞進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化，將水浸聚輪烷水凝膠后經(jīng)過的時(shí)間t除以t∞得到的值t/t∞、時(shí)間t時(shí)的凝膠重量Mt除以M0得到的值Mt/M0作為標(biāo)準(zhǔn)化的數(shù)值，制作圖4的圖?？疾旆纸饽Ｊ綍r(shí)的視點(diǎn)之一在于，在t/t∞的數(shù)值為幾時(shí)，聚輪烷水凝膠的分解是否開始(Mt/M0是否達(dá)到峰值)。所謂分解開始時(shí)的t/t∞的數(shù)值小是指分解開始后直至完全分解所需要的時(shí)間長(zhǎng)，相反，分解開始時(shí)的t/t∞的數(shù)值大是指分解開始后直至完全分解所需的時(shí)間短。
根據(jù)圖4，由于無論是PRHG-5還是PRHG-6，分解開始時(shí)的t/t∞數(shù)值大致相同(約0.5)，所以可以說聚輪烷水凝膠的分解模式不依賴于聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的比例。
(4-2)有關(guān)聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量的考察在上述(2)中，在CDI-PR的DMSO溶液中添加PEG-BA和氯化鈉進(jìn)行凝膠化時(shí)，使PEG-BA相對(duì)于CDI-PR中含有的每1α-CD分子的投料比為1.0，調(diào)制使用分子量為600的PEG-BA得到的聚輪烷水凝膠(PRHG-7)、使用分子量為2000的PEG-BA得到的聚輪烷水凝膠(PRHG-8)以及使用分子量為4000的PEG-BA得到的聚輪烷水凝膠(PRHG-9)。
在0.1M磷酸緩沖溶液(PBS)(pH＝7.4)中浸漬平衡膨潤(rùn)狀態(tài)的聚輪烷水凝膠PRHG-7、PRHG-8、PRHG-9，在37℃下振蕩，在每次規(guī)定的時(shí)間擦去水測(cè)定凝膠的重量變化。以該重量變化作為非酶水解行為的評(píng)價(jià)。結(jié)果如圖5所示。
根據(jù)圖5，提示了聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量越小，聚輪烷水凝膠的分解速度越快。即，該結(jié)果提示如果改變聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量，則可以控制分解速度。
另外，為了考察聚輪烷水凝膠的分解模式，和圖4-樣，制作圖6的圖。根據(jù)圖6，PRHG-7分解開始時(shí)的t/t∞在0.50附近，PRHG-8分解開始時(shí)的t/t∞在0.85附近，PRHG-9分解開始時(shí)的t/t∞在0.90附近。由此，可以說聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量越大，聚輪烷水凝膠的分解模式中的分解開始時(shí)的t/t∞越大。
(4-3)小結(jié)從以上結(jié)果可以看出，為了控制聚輪烷水凝膠的分解速度，可以改變聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例，或者改變聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量。即，作為組織再生用基材，使用聚輪烷水凝膠時(shí)，可以求得適合于該組織再生用基材使用狀況的分解速度，確定聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例，或者確定聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量，使之得到該分解速度。
另外可知為了控制聚輪烷水凝膠的分解模式(分解開始時(shí)的t/t∞)，可以改變聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量。即，作為組織再生用基材，使用聚輪烷水凝膠時(shí)，可以求得適合于該組織再生用基材使用狀況的分解模式，確定可以得到該分解模式這樣的聚輪烷水凝膠中的交聯(lián)部分的分子量。
(5)聚輪烷水凝膠的非酶水解行為的解析-之二在DMSO(5ml)中溶解上述CDI-PR(4.2×10-5mol，N-?；妓狨セ?0.7mmol)，接著添加熔融的各種PEG二胺。該合成條件集中在表2中。對(duì)反應(yīng)混合物除去氣體，注入到聚四氟乙烯(Teflon)間隔物中，在35℃下維持24小時(shí)。之后，用DMSO洗滌得到的生成物，在室溫下浸在水中，經(jīng)過2天使之完全水合。由此得到聚輪烷水凝膠。
表2


※1)[E]后面接續(xù)的數(shù)字表示PEG二胺的平均分子量的1/1000，[RX]后面接續(xù)的數(shù)字表示聚輪烷的含量(wt％)。
※2)PEG/α-CD表示聚輪烷水凝膠中的PEG二胺和α-CD的計(jì)算摩爾比。
如下研究水解行為。即，將如上所述得到的聚輪烷水凝膠的膨潤(rùn)物切成1cm×1cm的片(厚度＜1mm)，在37℃下，在含有0.02％疊氮化鈉的0.1M磷酸緩沖液(pH7.4)中浸漬這些片，用振蕩機(jī)在130rpm下振蕩。通過測(cè)定殘存的聚輪烷水凝膠的重量來評(píng)價(jià)聚輪烷水凝膠的分解。試驗(yàn)進(jìn)行3次。試驗(yàn)結(jié)果圖示在圖7-圖9中。
圖7是表示使PEG二胺的分子量一定并改變聚輪烷的含量的聚輪烷水凝膠的分解行為的圖，(a)～(c)是PEG二胺的分子量分別為4000、2000、600。另外，圖8是表示聚輪烷含量和完全分解時(shí)間的關(guān)系的圖。從圖7和圖8可知，在PEG二胺的分子量相同的情況下，完全分解時(shí)間隨著聚輪烷含量減少而延長(zhǎng)。即，聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例越多，聚輪烷水凝膠的分解速度越快。
圖9是表示聚輪烷含量和含水率的關(guān)系的圖。從圖9可知，在PEG二胺的分子量相同的情況下，聚輪烷水凝膠中的含水率和聚輪烷含量沒有關(guān)系，大致一定。該結(jié)果提示含水率不是改變完全分解時(shí)間的要素。
圖10是表示PEG/α-CD比和完全分解時(shí)間的關(guān)系的圖。在此，PEG/α-CD比是聚輪烷水凝膠中的PEG二胺和α-CD的摩爾比。從圖10可知，在PEG二胺的分子量相同的情況下，完全分解時(shí)間隨著PEG/α-CD比增加而延長(zhǎng)。即，PEG/α-CD比越小，聚輪烷水凝膠的分解速度越快。如表2所示，常常將PEG/α-CD比調(diào)整到2以下。另外，PEG/α-CD比如果超過2，則由于聚輪烷水凝膠在生理學(xué)條件或者0.1M氫氧化鈉水溶液下不分解，因而在此提出PEG/α-CD比為2以下。
圖11和圖4一樣，是表示以t/t∞為橫軸，Mt/M0為縱軸時(shí)的分解模式的圖。從圖11可知，該分解模式不依賴于聚輪烷水凝膠中的聚輪烷含量，如果PEG二胺的分子量相同，則成為同樣的曲線。另外，直至聚輪烷水凝膠的分解開始點(diǎn)的延時(shí)隨著PEG二胺的分子量增加而延長(zhǎng)。該結(jié)果提示和絕對(duì)的分解時(shí)間沒有關(guān)系，PEG二胺的分子量越大，直至分解開始點(diǎn)的延時(shí)進(jìn)一步變長(zhǎng)，分解開始后成為早期分解的模式。
(6)軟骨細(xì)胞的培養(yǎng)在高壓釜中放入表1所示的聚輪烷水凝膠PRHG-1、PRHG-3，在121℃下處理20分鐘，進(jìn)行滅菌。將滅菌后的聚輪烷水凝膠放入96孔培養(yǎng)板中，在每個(gè)孔接種2×105細(xì)胞/100μl的冷凍保存的兔軟骨細(xì)胞，在37℃、5％ CO2恒溫箱內(nèi)靜置，在各聚輪烷水凝膠上固定細(xì)胞(固定時(shí)間2小時(shí)或者24小時(shí))。
將如此固定了軟骨細(xì)胞的各聚輪烷水凝膠移到24孔培養(yǎng)板中，添加含有10v/v％牛胎兒血清(FBS)和50μg/ml抗壞血酸的Dulbecco改良Eagle’s最小必需培養(yǎng)基(DMEM)(以下僅稱為培養(yǎng)基)，每7天更換培養(yǎng)基，共計(jì)培養(yǎng)6周。培養(yǎng)后，用10％福爾馬林固定，用AlcianBlue(pH1.0)染色，脫色、脫水、使之清澈后密封。另外，Alcian Blue染色是酸性粘多糖染色法之一且是軟骨組織染色法的一種。
固定時(shí)間為2小時(shí)的情況下，從培養(yǎng)開始后，圓形細(xì)胞形成菌落的同時(shí)開始繁殖，同時(shí)在培養(yǎng)期間大型化。具體地說，在培養(yǎng)第14天、第28天、第42天進(jìn)行觀察，確認(rèn)了一直進(jìn)行大型化的情況(參照?qǐng)D12)。這些菌落在菌落大型化的同時(shí)產(chǎn)生不透明的基質(zhì)，在顯微鏡下觀察到渾濁的影像。另外，培養(yǎng)4周后，在全體細(xì)胞菌落中觀察到非常堅(jiān)固的Alcian Blue陽性影像。即，使用該聚輪烷水凝膠，以三維形狀培養(yǎng)軟骨細(xì)胞時(shí)，可以確認(rèn)軟骨細(xì)胞在維持原本形狀的同時(shí)進(jìn)行繁殖，同時(shí)，也產(chǎn)生基質(zhì)(酸性粘多糖類)。因此，可以將在聚輪烷水凝膠(PRHG-1，3)構(gòu)成的組織再生用基材中以三維形狀培養(yǎng)軟骨細(xì)胞得到的物質(zhì)用作移植用材料。另外，在固定時(shí)間為24小時(shí)的情況下，也觀察到大致同樣的情況。
另外，隨著細(xì)胞的伸展或者聚輪烷水凝膠的分解，在培養(yǎng)板中軟骨細(xì)胞的菌落溢出并粘附在底面。之后，具有成纖維細(xì)胞樣形態(tài)的細(xì)胞離開粘附的菌落。這些細(xì)胞沒有維持軟骨細(xì)胞的圓形形態(tài)，AlcianBlue染色也顯示陰性。該結(jié)果推測(cè)由于取出在聚輪烷水凝膠內(nèi)維持的軟骨樣細(xì)胞菌落并進(jìn)行單層培養(yǎng)后，喪失了軟骨細(xì)胞樣的特征，從而引起退行發(fā)育。
工業(yè)實(shí)用性根據(jù)本發(fā)明，可以提供可以在整形外科、口腔外科、成形外科等醫(yī)療領(lǐng)域中廣泛使用的組織再生用基材、移植用材料。
權(quán)利要求
1.一種組織再生用基材，含有聚輪烷或者聚輪烷水凝膠，其中，該聚輪烷是在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的物質(zhì)，該聚輪烷水凝膠是與該聚輪烷鄰接的聚輪烷1分子中含有的環(huán)狀分子之間、生物體親和性基團(tuán)之間或者環(huán)狀分子和生物體親和性基團(tuán)之間通過交聯(lián)鍵進(jìn)行交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)。
2.權(quán)利要求1所述的組織再生用基材，上述線形分子是聚乙二醇、聚丙二醇、聚乙二醇和聚丙二醇的共聚物或者聚甲基乙烯基醚，上述環(huán)狀分子是α、β或者γ-環(huán)糊精。
3.權(quán)利要求1或2所述的組織再生用基材，上述水解性鍵是酯鍵。
4.權(quán)利要求3所述的組織再生用基材，上述交聯(lián)鍵是氨酯鍵、酰胺鍵、脲鍵、醚鍵、硫鍵或者席夫堿型鍵。
5.權(quán)利要求1-4中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，上述體積龐大的取代基是具有1個(gè)以上苯環(huán)的基團(tuán)或者具有1個(gè)以上叔丁基的基團(tuán)。
6.權(quán)利要求1-5中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，上述生物體親和性基團(tuán)是氨基酸、寡肽、寡糖類或者糖衍生物。
7.權(quán)利要求1-6中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，上述線形分子是聚乙二醇，上述環(huán)狀分子是α-環(huán)糊精，上述水解性鍵是酯鍵，具有上述體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)是芐氧基羰基-L-苯基丙氨酸。
8.權(quán)利要求1-7中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，上述聚輪烷或者上述聚輪烷水凝膠是多孔體。
9.權(quán)利要求1-8中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，其特征在于，對(duì)于上述聚輪烷水凝膠，確定上述聚輪烷水凝膠中的聚輪烷的重量比例，使之達(dá)到適合于使用狀況的分解速度。
10.權(quán)利要求1-9中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，其特征在于，上述聚輪烷水凝膠通過為達(dá)到適合于使用狀況的分解速度或者分解模式所確定的給定平均分子量的交聯(lián)用線形分子，將環(huán)狀分子之間、生物體親和性基團(tuán)之間或者環(huán)狀分子和生物體親和性基團(tuán)之間用交聯(lián)鍵交聯(lián)而成。
11.具有下述(a)性質(zhì)的組織再生用基材，由聚輪烷水凝膠構(gòu)成，該聚輪烷水凝膠是對(duì)于在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩個(gè)末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的聚輪烷，通過交聯(lián)用線形分子，以交聯(lián)鍵將1分子相鄰的聚輪烷中含有的環(huán)狀分子之間交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)，(a)聚輪烷水凝膠直至完全水解的時(shí)間不依賴于聚輪烷水凝膠中的含水率，伴隨著聚輪烷水凝膠中的聚輪烷含量減少，或者伴隨著交聯(lián)用線形分子對(duì)環(huán)狀分子的摩爾比增加，或者伴隨著交聯(lián)用線形分子的平均分子量減少而延長(zhǎng)。
12.具有下述(b)性質(zhì)的組織再生用基材，由聚輪烷水凝膠構(gòu)成，該聚輪烷水凝膠是對(duì)于在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩個(gè)末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的聚輪烷，通過交聯(lián)用線形分子，以交聯(lián)鍵將1分子相鄰的聚輪烷中含有的環(huán)狀分子之間交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)，(b)以聚輪烷水凝膠直至完全水解的時(shí)間為t∞，將聚輪烷水凝膠浸水后經(jīng)過的時(shí)間為t，初期水膨潤(rùn)狀態(tài)下的聚輪烷水凝膠重量為M0，在時(shí)間t的聚輪烷水凝膠重量為Mt，以t/t∞為橫軸，Mt/M0為縱軸描繪圖時(shí)的分解模式不依賴于聚輪烷水凝膠中的聚輪烷含量，而取決于交聯(lián)用線形分子的分子量。
13.權(quán)利要求11或12所述的組織再生用基材，由聚輪烷水凝膠構(gòu)成，對(duì)于該聚輪烷水凝膠，環(huán)狀分子是α-環(huán)糊精，線形分子是聚乙二醇，水解性鍵是酯鍵，交聯(lián)用線形分子是聚乙二醇二胺，在聚乙二醇二胺的兩個(gè)末端的NH2基上通過氨酯鍵將1分子相鄰的聚輪烷中含有的α-環(huán)糊精的OH基團(tuán)之間交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)而得到。
14.權(quán)利要求1-13中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材，用于間質(zhì)細(xì)胞、肝細(xì)胞或者神經(jīng)細(xì)胞的培養(yǎng)。
15.一種移植用材料，其特征在于，在權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材中培養(yǎng)或引入細(xì)胞。
16.一種移植用材料的制備方法，其特征在于，通過在權(quán)利要求1-14中任意一項(xiàng)所述的組織再生用基材中培養(yǎng)或引入細(xì)胞，得到移植用材料。
全文摘要
本發(fā)明提供可以進(jìn)行組織再生，具備組織再建時(shí)所需的力學(xué)特性并具有組織再建后在生物體內(nèi)的分解消失特性的組織再生用基材以及使用該基材的移植用材料。本發(fā)明的組織再生用基材含有聚輪烷或者聚輪烷水凝膠，其中，該聚輪烷是在貫穿了多個(gè)環(huán)狀分子的線形分子的兩末端通過水解性鍵導(dǎo)入具有體積龐大的取代基的生物體親和性基團(tuán)得到的物質(zhì)，該聚輪烷水凝膠是與該聚輪烷鄰接的聚輪烷1分子中含有的環(huán)狀分子之間、生物體親和性基團(tuán)之間或者環(huán)狀分子和生物體親和性基團(tuán)之間通過交聯(lián)鍵進(jìn)行交聯(lián)形成網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)得到的物質(zhì)。
文檔編號(hào)A61L27/18GK1454100SQ00819864
公開日2003年11月5日 申請(qǐng)日期2000年11月27日 優(yōu)先權(quán)日2000年7月3日
發(fā)明者由井伸彥, 大谷亨, 加藤雅一, 山本剛之 申請(qǐng)人:株式會(huì)社日本組織工程, 由井伸彥