專利名稱：喹唑啉二甲苯磺酸鹽化合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及喹唑啉化合物，及其無(wú)水的或水合的二甲苯磺酸鹽，和涉及其用途和制備。特別是，本發(fā)明涉及4-喹唑啉胺(quinazolineamines)的二甲苯磺酸鹽。這些化合物是erbB家族的各種蛋白酪氨酸激酶(PTKs)的抑制劑，因而在治療由此類激酶的異?；钚越閷?dǎo)的病癥方面是有益的。
本發(fā)明在先技術(shù)背景PTKs催化參與調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)和分化的各種蛋白中特異性酪氨酸殘基的磷酸化。(A.F.Wilks，Progress in Growth Factor Research，1990，2，97-111；S.A.Courtneidge，Dev.Supp.l，1993，57-64；J.A.Cooper，Semin.Cell Biol.，1994，5(6)，377-387；R.F.Paulson，Semin.Immunol.，1995，7(4)，267-277；A.C.Chan，Curr.Opin.Immunol.，1996，8(3)，394-401)。許多PTKs的不適當(dāng)?shù)幕虿皇芸刂频募せ?，即異常PTK活性，例如過(guò)度表達(dá)或突變已經(jīng)顯示導(dǎo)致不受控制的細(xì)胞生長(zhǎng)。
異常蛋白酪氨酸激酶(PTK)活性已經(jīng)涉及許多病癥包括銀屑病、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、支氣管炎，以及癌癥。開發(fā)此類疾病的有效治療是醫(yī)藥領(lǐng)域永恒的和不斷發(fā)展的事業(yè)。包括c-erbB-2、EGFr和erbB-4的PTKs的erbB家族，是已經(jīng)引起人們興趣的作為治療靶的一組PTKs。目前具有特殊興趣的是erbB家族PTKs在過(guò)度增生性疾病，特別是在人類惡性病變中的作用。升高的EGFr的活性已經(jīng)，例如涉及到非-小細(xì)胞肺癌、膀胱癌，及頭頸部癌。此外，增強(qiáng)的c-erbB-2的活性已經(jīng)涉及到乳房癌、卵巢癌、胃癌及胰腺癌。因而，抑制erbB家族PTKs可以提供其特征為異常erbB家族PTK活性的疾病的治療。erbB家族PTKs的生物學(xué)作用及其與各種病癥的關(guān)系在例如美國(guó)專利5,773,476；國(guó)際專利申請(qǐng)WO99/35146；M.C.Hung等，Seminars inOncology，264，Suppl.12(八月)1999，51-59；Ullrich等，Cell，61203-212，四月20，1990；Modjtahedi等，Int’l.J.of Oncology，13335-342，1998；以及J.R.Wooburn，Pharmacol.Ther.，822-3，241-250，1999中已有討論。
1999年1月8日提交的國(guó)際專利申請(qǐng)PCT/EP99/00048，并在1999年7月15日公開的WO 99/35146討論了包括erbB家族PTKs的PTKs。該公開的申請(qǐng)公開了二環(huán)雜芳香化合物，包括N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺；(4-(3-氟-芐氧基)-3-氯苯基)-(6-(2-((2-甲磺?；?乙氨基)-甲基)-噻唑-4-基)喹唑啉-4-基)-胺；以及(4-(3-氟-芐氧基)-3-溴苯基)-(6-(5-((2-甲磺?；?乙氨基)-甲基)-呋喃-2基)喹唑啉-4-基)-胺及其鹽酸鹽。這些化合物顯示抑制erbB家族PTKs的活性。然而，二-HCl鹽存在的問(wèn)題是當(dāng)其如果以藥物形式應(yīng)用時(shí)，它可能暴露在濕度(例如，20-75％相對(duì)濕度(RH))下，它將吸收大量的水。結(jié)果，該化合物作為藥物的適合性受到損害，除非研究出特殊的處理及儲(chǔ)藏方法。
本發(fā)明者已經(jīng)確定了新的4-喹唑啉胺的二甲苯磺酸鹽，它適于用作erbB家族PTKs的抑制劑。這些二甲苯磺酸鹽具有優(yōu)于本領(lǐng)域公開的4-喹唑啉胺的二-HCl鹽的吸濕特性。而且，該化合物可以結(jié)晶形式制備，因而增強(qiáng)了物理穩(wěn)定性。即當(dāng)暴露于濕度較寬的范圍下，本發(fā)明的二甲苯磺酸鹽吸收較少量的水，并且可以制成物理學(xué)上穩(wěn)定的結(jié)晶形式，因而增強(qiáng)了其作為藥物的適合性。
發(fā)明公開在本發(fā)明的第一個(gè)方面，提供式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式， 其中，R1是Cl或Br；X是CH、N或CF；及Het是噻唑或呋喃。
在本發(fā)明的第二個(gè)方面，提供式(II)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式， 在本發(fā)明的第三個(gè)方面，提供包括治療有效量的式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式的藥用組合物。
在本發(fā)明的第四個(gè)方面，提供包括治療有效量的式(II)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式的藥用組合物。
在本發(fā)明的第五個(gè)方面，提供治療哺乳動(dòng)物疾病的方法，所述疾病的特征為至少一種erbB家族PTKs的異?；钚裕摲椒ò▽?duì)所述哺乳動(dòng)物給予治療有效量的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式。
在本發(fā)明的第六個(gè)方面，提供治療哺乳動(dòng)物因蛋白酪氨酸激酶活性異常介導(dǎo)的疾病的方法，包括給予所述哺乳動(dòng)物有效抑制至少一種erbB家族蛋白的量的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式。
在本發(fā)明的第七個(gè)方面，提供用于治療的式(I)化合物，或其無(wú)水合物或水合物形式。
在本發(fā)明的第八個(gè)方面，提供式(I)化合物，及其無(wú)水合物或水合物形式，在制備用于治療特征為erbB家族PTK活性異常的疾病的藥物中的用途。
圖的簡(jiǎn)要說(shuō)明

圖1描繪了N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽無(wú)水物的粉末X-射線衍射圖形。
圖2描繪了N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-{[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽一水合物的粉末X-射線衍射圖形。
圖3(a)和(b)描繪了(a)N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺一水合物二甲苯磺酸鹽和(b)N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺的二-HCl鹽的水吸收曲線。
圖4描述N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺的一水合物二甲苯磺酸鹽和二-HCl鹽的水吸收曲線的比較。
圖5描繪了N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺的無(wú)水物和一水合物的晶形在穩(wěn)定性試驗(yàn)前與試驗(yàn)后的粉末X-射線衍射圖形。上圖顯示純結(jié)晶形式的圖型。中圖顯示在相當(dāng)于7％RH的水活性(water activity)時(shí)，對(duì)結(jié)晶漿液(slurry)在試驗(yàn)開始和試驗(yàn)第1天內(nèi)得到的結(jié)果。底圖顯示在相當(dāng)于15％RH的水活性時(shí)，對(duì)結(jié)晶漿液在試驗(yàn)開始和試驗(yàn)第1天內(nèi)得到的結(jié)果。
本發(fā)明的詳述此處所用術(shù)語(yǔ)“有效量”表示可以引起由，例如研究人員或臨床醫(yī)生所探尋的組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人的生物學(xué)的或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的藥物或藥劑的量。進(jìn)一步，術(shù)語(yǔ)“治療有效量”表示與相應(yīng)的沒有接受此種量的患者比較，產(chǎn)生改善的治療、治愈、預(yù)防，或緩解疾病、紊亂或副作用，或者減少疾病或紊亂惡化的比率的任何量。
此處所用術(shù)語(yǔ)“烷基”是指具有從一至十二個(gè)碳原子的直鏈或支鏈烴。此處所用“烷基”的實(shí)例包括，但不限于，甲基、乙基、異丙基、正丙基、正丁基、正戊基、異丁基等。
可以理解，除各式的定義特別限定或者另有特別限定外，下述實(shí)施方案涉及如此處定義的式(I)和式(II)、(III)，或(IV)的范圍內(nèi)的化合物。也可以理解本發(fā)明的實(shí)施方案包括在此描述的用途、組合物及制備方法，當(dāng)涉及式(I)化合物的描述時(shí)，該描述適用于式(II)、(III)及(IV)的化合物。
如上所述，本發(fā)明化合物包括式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式的化合物，其中，R1是Cl或Br；X是CH、N或CF；及Het是噻唑或呋喃。
式(I)化合物的側(cè)鏈CH3SO2CH2CH2NHCH2可以連接于基團(tuán)Het的任何合適的位置上。類似地，喹唑啉核的苯基可以連接于基團(tuán)Het的任何合適的位置上。
在一個(gè)實(shí)施方案中，R1是Cl；X是CH；及Het是呋喃；優(yōu)選式(II)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式。
式(II)化合物的化學(xué)名為N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽。
在一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是式(II)化合物一水合物形式。在又一個(gè)實(shí)施方案中，該一水合物形式的含水量為1.5至3.0，優(yōu)選1.7至2.5，更優(yōu)選1.8至2.2百分比重量。
在另一實(shí)施方案中，所述化合物是式(II)化合物無(wú)水合物形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，該無(wú)水合物形式的含水量少于1.5，優(yōu)選少于1.0，更優(yōu)選少于0.5百分比重量。
在再一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是式(II)化合物，其特征為粉末X-射線衍射圖形，包括表1的峰。表1
*基于Cu的Ka衍射。Ka2先于峰位置移動(dòng)在另一個(gè)實(shí)施方案中，所述化合物是式(II)化合物，其特征為粉末X-射線衍射圖形，包括表2的峰。表2
*基于Cu的Ka衍射。Ka2先于峰位置移動(dòng)在一個(gè)替代實(shí)施方案中，R1是Cl；X是CH；及Het是噻唑；優(yōu)選式(III)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式
式(III)化合物為(4-(3-氟芐氧基)-3-氯苯基)-(6-(2-((2-甲磺?；?乙基氨基)-甲基)-噻唑-4-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽。
在另一替代實(shí)施方案中，R1是Br；X是CH；及Het是呋喃；優(yōu)選式(IV)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式。所述式(IV)如下 式(IV)化合物為(4-(3-氟芐氧基)-3-溴苯基)-(6-(5-((2-甲磺酰基-乙基氨基)-甲基)-呋喃-2-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽。
式(I)化合物，包括式(II)、(III)及(IV)的化合物，均包括在它們基本純的無(wú)水合物或水合物形式，以及水合的和無(wú)水合物形式的混合物的范圍內(nèi)。也可以理解，此類化合物包括結(jié)晶或無(wú)定形的形式及結(jié)晶和無(wú)定形形式的混合物。
用于治療時(shí)，治療有效量的式(I)化合物，以及其無(wú)水合物或水合物形式，可以作為原料化學(xué)品給藥，也可以作為藥用組合物的活性成分存在。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供藥用組合物，該組合物包括治療有效量的式(I)化合物和其無(wú)水合物或水合物形式，以及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑，或賦形劑。式(I)化合物和其無(wú)水合物或水合物形式如上所述。所述載體、稀釋劑或賦形劑從與其它制劑成分適配的意義上說(shuō)是可接受的，以及對(duì)其接受者是無(wú)害的。根據(jù)本發(fā)明的另一個(gè)方面，也提供了一種包括將式(I)化合物和其無(wú)水合物或水合物形式與一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或賦形劑混合來(lái)制備藥用組合物的方法。
式(I)化合物和其無(wú)水合物或水合物形式可以配制成通過(guò)任一途徑給藥的劑型，而合適的給藥途徑將取決于所治療的疾病以及接受治療的患者。合適的藥物制劑包括用于口服、直腸、鼻腔的；局部的(包括口腔的、舌下的及經(jīng)皮的制劑)，陰道或胃腸外(包括肌內(nèi)、皮下、靜脈內(nèi)，以及直接進(jìn)入感染組織)的給藥的制劑，或者適合于經(jīng)吸入或吹入的給藥形式。如合適時(shí)，所述制劑可以方便地以不連續(xù)的劑量單位出現(xiàn)及可以通過(guò)藥學(xué)領(lǐng)域公知的任何方法制備。
口服給藥采用的藥物制劑可以不連續(xù)的劑量單位出現(xiàn)，例如膠囊或片劑；粉末劑或顆粒劑；溶液劑或在含水或非水的液體中的懸浮液；可食用的泡沫劑(foams)或起泡劑(whips)；水包油液體乳劑或油包水液體乳劑。
例如，對(duì)于片劑或膠囊劑的口服給藥，活性藥物成分可以與口服的、非毒性的藥學(xué)上可接受的惰性載體諸如乙醇、甘油，水等混合。通過(guò)將所述化合物粉碎成合適的細(xì)度(fine size)并與類似粉碎的藥學(xué)上可接受的載體諸如淀粉或甘露醇一樣的可食用的碳水化合物混合來(lái)制備粉末劑。調(diào)味劑、防腐劑、分散劑及著色劑也可存在。
通過(guò)制備上述粉末混合物并將之填滿生成的明膠殼中制備膠囊劑。在充填之前可以將助流劑(Glidant)和潤(rùn)滑劑，例如硅膠、滑石粉、硬脂酸鎂、硬脂酸鈣或固體聚乙二醇加至該粉末混合物中。也可以加入崩解劑或助溶劑諸如瓊脂、碳酸鈣或碳酸鈉，以便在攝入膠囊時(shí)改善藥物的可利用性。
此外，當(dāng)需要及必需時(shí)，也可以將合適的粘合劑、潤(rùn)滑劑、崩解劑以及著色劑摻入所述混合物中。合適的粘合劑包括淀粉、明膠、天然糖如葡萄糖或β-乳糖、玉米甜素；天然的或合成的樹膠如阿拉伯膠、黃蓍膠或藻酸鈉；羧甲基纖維素鈉、聚乙二醇、蠟等等。用于這些劑量形式中的潤(rùn)滑劑包括油酸鈉、硬脂酸鈉、硬脂酸鎂、苯甲酸鈉、乙酸鈉、氯化鈉等。崩解劑包括但不限定于，淀粉、甲基纖維素、瓊脂、膨潤(rùn)土、黃原膠等。通過(guò)例如制備粉末混合物，制?；虺蓤F(tuán)(slugging)，加入潤(rùn)滑劑和崩解劑，并壓制成片來(lái)制備片劑。通過(guò)將適當(dāng)粉碎的所述化合物與上述的稀釋劑或基質(zhì)(base)，并任選與粘合劑諸如羧甲基纖維素、藻酸鹽(aliginate)、明膠，或聚乙烯吡咯烷酮；溶液延遲劑諸如石蠟；重吸收促進(jìn)劑諸如季鹽和/或吸收劑諸如膨潤(rùn)土、高嶺土或磷酸二鈣混合來(lái)制備粉末混合物。該粉末混合物可以通過(guò)使用粘合劑諸如糖漿、淀粉糊、阿拉伯膠(acadia mucilage)或纖維素或聚合物材料的溶液制粒并壓制過(guò)篩。作為制粒的替換方法，所述粉末混合物也可以通過(guò)制片機(jī)產(chǎn)生并使不完整形成的碎塊破裂成顆粒?？梢酝ㄟ^(guò)加入硬脂酸、硬脂酸鹽、滑石粉或礦物油潤(rùn)滑所得顆粒以防粘在成片模具上。然后將潤(rùn)滑的混合物壓制成片。本發(fā)明的化合物也可以不經(jīng)過(guò)制粒及成團(tuán)的步驟，而與自由流動(dòng)的惰性載體結(jié)合并直接壓成片劑。透明的或不透明的保護(hù)性包衣包括囊殼的密封包衣、糖衣或聚合物材料并可以使用蠟拋光包衣?？梢詫⑷玖霞又吝@些包衣中以區(qū)別不同的單位劑量。
口服液體諸如溶液、糖漿及酏劑可以按劑量單位的形式制備，以給出含有預(yù)定量的所述化合物的給定的量。糖漿劑可以通過(guò)將所述化合物溶于合適味道的水溶液中來(lái)制備，而酏劑則通過(guò)使用無(wú)毒性的酒精溶媒來(lái)制備。懸浮液可以通過(guò)將所述化合物分散在無(wú)毒性的介質(zhì)中制備。也可以加入助溶劑及乳化劑如乙氧基化的異硬脂醇和聚氧乙烯山梨醇醚、防腐劑、矯味填加劑如薄荷油或天然甜味素或者糖精或其他人造甜味素等。
適當(dāng)時(shí)，用于口服給藥的劑量單位的制劑可以微囊化。為了延長(zhǎng)或延緩釋放也可以例如通過(guò)以聚合物，蠟或類似物包衣或包埋微粒物質(zhì)來(lái)制備所述制劑。
式(I)化合物，和其無(wú)水合物或水合物形式也可以以脂質(zhì)體釋放系統(tǒng)，例如小的單層囊(unilamellar vesicles)、大的單層囊及多層囊的形式給藥。脂質(zhì)體可以由不同磷脂，例如膽固醇、硬脂胺(stearylamine)或卵磷脂形成。
式(I)化合物和其無(wú)水合物或水合物形式也可以通過(guò)使用單克隆抗體作為與所述化合物分子偶合的單一載體來(lái)釋放。所述化合物也可以與作為靶向藥物載體的可溶性聚合物偶合。此類聚合物可以包括聚乙烯吡咯烷酮、吡喃共聚物、聚羥丙基甲基丙烯酰胺-苯酚、聚羥丙基乙基天冬氨酰胺(aspartamide)苯酚，或由棕櫚酰殘基取代的聚乙烯氧化物聚賴氨酸。而且，所述化合物可以偶合至一類有益于得到的藥物控制釋放的可生物降解的聚合物上，所述聚合物為，例如，聚乳酸(polylactic acid)、polepsilon己內(nèi)酯、聚羥基丁酸、聚原酸酯、聚縮醛、聚二氫吡喃、聚氰基丙烯酸酯及交聯(lián)的或兩性分子水凝膠的嵌段共聚物。
適合于經(jīng)皮給藥的藥物制劑可作為不連續(xù)的貼劑形式存在以保持與接受者表皮延長(zhǎng)時(shí)間的密切接觸。例如，所述活性成分可以通過(guò)如在Pharmaceutical Research，3(6)，318(1986)中一般描述的離子電滲療法，從所述貼劑中釋放。
適合于局部給藥的藥物制劑可以配制為油膏劑、乳膏劑、懸浮劑、洗劑、粉末劑、溶液劑、糊劑、凝膠劑、噴霧劑、氣霧劑或油劑。
為治療眼部或其它表面組織，例如口腔和皮膚，所述制劑優(yōu)選用作局部油膏劑或乳膏劑。當(dāng)配制成油膏劑時(shí)，所述活性成分可通過(guò)含蠟的油膏基質(zhì)或水可混溶的油膏基質(zhì)使用?；蛘?，所述活性成分可用水包油的乳膏基質(zhì)或油包水基質(zhì)配制成乳膏劑。
適合于對(duì)眼的局部給藥的藥物制劑包括眼滴劑，其中所述活性成分溶解于或懸浮于合適的載體中，特別是含水溶劑中。
適合于口腔內(nèi)局部給藥的藥物制劑包括糖錠劑、潤(rùn)喉片及漱口液。
適合于直腸給藥的藥物制劑可作為栓劑或灌腸劑存在。
適合于鼻腔給藥的載體為固體的藥物制劑包括具有粒徑在，例如20至500微米范圍內(nèi)的未加工的粉末，它通過(guò)吸入的形式給藥，即由盛有粉末的容器向上抵近鼻部，通過(guò)鼻腔通道快速吸入的形式給藥。對(duì)于作為鼻腔噴霧劑或滴鼻劑給予的合適制劑的載體是液體，包括所述活性成分的水溶液或油溶液。
合適于通過(guò)吸入給藥的藥物制劑包括細(xì)顆粒的粉塵或噴霧，它們可以通過(guò)計(jì)量的、劑量加壓氣霧劑、噴霧器或吹入器的多種類型的方法釋放。
適合于陰道給藥的藥物制劑可以作為陰道栓劑、止血塞、乳膏劑、凝膠劑、糊劑、泡沫劑或噴霧制劑存在。
適合于非腸道給藥的藥物制劑包括水液或非水液的滅菌注射液，它們可以含有抗氧化劑、緩沖劑、抑菌劑及可使制劑與預(yù)期接受者的血液等滲的溶質(zhì)；以及可以包括懸浮劑及增稠劑的水液或非水液的滅菌懸浮液。所述制劑可以存在于單位劑量或多劑量的容器中，例如密封的安瓶或小瓶(vials)內(nèi)，以及可以在冷凍干燥(凍干)條件下儲(chǔ)存，僅需要在使用前，即刻加入滅菌液體載體，例如注射用水。臨時(shí)用的注射溶液或懸浮液可以從滅菌粉末、膠囊及片劑制備。
應(yīng)該理解，除上述特別提及的成分外，考慮到所提及的制劑類型，所述制劑可以包括本領(lǐng)域常規(guī)的其它試劑，例如適合于口服給藥的制劑可以包括矯味劑。
本發(fā)明也提供治療特征為至少一種erbB家族PTKs異常活性的哺乳動(dòng)物疾病的方法，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物治療有效量的式(I)化合物，及其無(wú)水合物或水合物形式。式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式如上所述。
此處異常的PTK活性是指任一erbB家族PTK活性偏離所預(yù)期的特定哺乳動(dòng)物對(duì)象的正常erbB家族的蛋白激酶的活性。異常erbB家族PTK活性形式可表現(xiàn)為，例如為異常增高的活性，或者周期的異常，及/或者PTK活性的控制。因此，此種異?；钚钥梢援a(chǎn)生，例如由蛋白激酶的過(guò)度表達(dá)或突變導(dǎo)致不適當(dāng)?shù)幕虿豢煽刂频幕钚?。此外，?yīng)該理解，不需要的PTK活性可能存在不正常的來(lái)源，例如惡性腫瘤。因此，PTK活性水平并不是被認(rèn)作異常的不正常，而是其活性源自不正常的來(lái)源。
式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式，是一種或多種erbB家族PTKs的抑制劑，并因此具有治療特征為異常的erbB家族PTK活性的哺乳動(dòng)物，特別是人的疾病的效用。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所治療的疾病的特征為至少一種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTK顯示異?；钚?。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所治療的疾病的特征為至少兩種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTKs顯示異常活性。在所述治療方法的一個(gè)實(shí)施方案中，式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式抑制至少一種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTK。在所述治療方法的另一個(gè)實(shí)施方案中，式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式抑制至少兩種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTKs。
因此，也提供治療由哺乳動(dòng)物的異常蛋白酷氨酸激酶活性介導(dǎo)的疾病的方法，包括給予所述哺乳動(dòng)物有效量的抑制至少一種erbB家族蛋白的式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式。在一個(gè)實(shí)施方案中，所述方法包括給予有效量的抑制至少兩種erbB家族蛋白的式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式。
所指疾病可以是特征為異常PTK活性的任一疾病。如上所述的此類疾病，包括，但不限于癌癥和銀屑病。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述疾病是癌癥。在更優(yōu)選的實(shí)施方案中，所述癌癥是非-小細(xì)胞肺癌、膀胱癌、前列腺癌、腦瘤、頭頸癌、乳房癌、卵巢癌、胃癌、直腸結(jié)腸癌，或胰腺癌。
式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式的治療有效量取決于多種因素，但不限于哺乳動(dòng)物的年齡、體重，所需治療的確切疾病及其嚴(yán)重程度，制劑的特性，以及給藥的途徑，以及最終在于主治醫(yī)生或獸醫(yī)的判斷力。典型地，用于治療的式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式以每天0.1至100mg/kg接受者(哺乳動(dòng)物)體重的范圍內(nèi)給藥，更通常地在每天1至10mg/kg體重的范圍內(nèi)給藥?？山邮艿拿咳談┝靠梢詮?.1至約1000mg/天，及優(yōu)選從0.1至約100mg/天。
上述的式(I)化合物及其無(wú)水合物或水合物形式，在治療以及在生產(chǎn)治療特征為至少一種erbB家族PTK的異常活性的哺乳動(dòng)物的疾病的藥物方面是有用的。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，所制備的藥物在治療特征為至少一種選自顯示異常活性的EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTK的疾病方面是有用的。在另一個(gè)實(shí)施方案中，所制備的藥物在治療特征為至少兩種選自顯示異常活性的EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTKs的疾病的方面是有用的。在所述應(yīng)用的一個(gè)實(shí)施方案中，用于生成藥物的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式，抑制至少一種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTK。在所述應(yīng)用的另一個(gè)實(shí)施方案中，用于生成藥物的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式，抑制至少兩種選自EGFr、c-erb-B2和c-erb-B4的erbB家族PTKs。
所治療的疾病如上所述。
按照如上涉及的1999年1月8日提交的國(guó)際專利申請(qǐng)?zhí)朠CT/EP99/00048及1999年7月15日公開的WO 99/35146中的方法可以制備式(I)、(II)、(III)，或(IV)的化合物的游離堿和HCl鹽。此方法的示意圖在下述流程A中呈現(xiàn)。WO的參考的具體頁(yè)碼在99/35146以下流程中給出。所述式(II)化合物的游離堿用作通用流程的實(shí)例。
流程A步驟A-用含有4-氯嘧啶環(huán)的雙環(huán)系與胺反應(yīng)(p.55，21-33行，p69，30-34行，p74，35行至p75，4行) (p60，15-16行)(p64-65)
步驟B-用步驟A的產(chǎn)物與雜芳基錫試劑反應(yīng)(p.55，33行-p56，9行) 5-(1，3-二氧戊環(huán)-2-基)-2-(三丁基甲錫烷基)-呋喃(p66，16-18行)步驟C-除去1，3-二氧戊環(huán)-2-基保護(hù)基釋放醛(p.56，11行) 步驟D-醛與胺經(jīng)還原胺化的反應(yīng)(p.56，20-32行；實(shí)施例29-p.100，18-29行) 式(II)化合物，即N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽已制得兩種截然不同的形式，無(wú)水合物形式(流程B中的式II’)和一水合物形式(流程B中的式II”)。這些形式的關(guān)系通過(guò)下述流程B說(shuō)明?？赏ㄟ^(guò)下述制備N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽的無(wú)水形式(a)在二異丙基-乙胺存在下，使5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛(carbaldehyde)(流程B中的式B)與2-(甲磺?；?乙胺在四氫呋喃中反應(yīng)，接著(b)于室溫下，將此溶液引入在四氫呋喃中的三乙酸基硼氫化鈉漿狀物中，(c)加入5N氫氧化鈉以調(diào)節(jié)pH在10-11的范圍內(nèi)，(d)分離所得的四氫呋喃有機(jī)相，然后(e)將對(duì)甲苯磺酸水合物加至該有機(jī)相中，得到二甲苯磺酸鹽無(wú)水合物。在流程B中描述了本發(fā)明化合物的無(wú)水二甲苯磺酸鹽轉(zhuǎn)成一水合物及轉(zhuǎn)回至無(wú)水合物的相互轉(zhuǎn)化。由所述甲醛的HCl鹽(流程B的式A)制備所述5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛的甲苯磺酸鹽。N-{3-氯代-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽及其無(wú)水的和一水合物形式的制備被用作實(shí)例。如本領(lǐng)域技術(shù)人員所公認(rèn)，也可以通過(guò)類似的方法制備其他的式(I)化合物及其無(wú)水的和一水合物形式。
流程B 除上述的流程A所述的策略外，可以通過(guò)不同的合成策略，應(yīng)用鈀(O)介導(dǎo)的喹唑啉與取代的呋喃中間體的偶合，來(lái)制備流程B的化合物A。
流程C描述五種鈀(O)介導(dǎo)的偶合策略，以合成流程B的化合物A。合成(1)，在先技術(shù)的方法，包括在Suzuki反應(yīng)中使用商業(yè)可得到的5-甲?；?2-呋喃基硼酸。合成(2)至(5)表示本發(fā)明的各種實(shí)施方案，這些方案包括(2)產(chǎn)生5-(二乙氧基甲基)-2-呋喃基硼酸及其在Suzyki偶合中的原位(in situ)使用，(3)經(jīng)用N，O-二甲基羥胺對(duì)甲?；糠值谋Ｗo(hù)，由2-呋喃甲醛原位生成5-甲?；?2-呋喃基硼酸，并在Suzuki偶合中原位使用，(4)經(jīng)用N，O-二甲基羥胺保護(hù)甲?；糠?，由5-溴代-2-呋喃甲醛原位生成5-甲?；?2-呋喃基硼酸，并在Suzuki偶合中原位使用，及最后(5)用5-溴代-2-呋喃甲醛經(jīng)原位逆向Suzuki偶合產(chǎn)生4-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯胺基}-6-喹唑啉基硼酸(由N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-碘代-4-喹唑啉基胺制備)。
流程C 流程C的反應(yīng)，參考式(C)、(A)和(B)描述如下 在流程C的(1)中，商業(yè)上可得到的5-甲?；?2-呋喃基硼酸，即式(A)化合物，其中R是-C(O)H和Z是-B(OH)2，(Frontier Scientific，Inc；Logan UT)，經(jīng)催化的鈀(O)-介導(dǎo)的偶合(Pure Appl.Chem.1994，66，213；Synth.Commun.1981，11，513)高得率地生成所需的式(C)化合物。特別地，通過(guò)將式(B)化合物，其中L是碘或溴，優(yōu)選碘且U是此文中所述的有機(jī)基團(tuán)，與1.0-1.5摩爾當(dāng)量的5-甲?；?2-呋喃基硼酸，在醚性溶劑中混合來(lái)制備式(C)化合物，所述醚性溶劑有例如，但不限于，乙醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)、乙二醇二乙醚(也稱為1，2-二乙氧基乙烷)和乙二醇二甲醚(也稱為1，2-二甲氧基乙烷或DME)。然后加入下述列出的鈀催化劑，包括乙酸鈀(II)、氯化鈀(II)、披鈀碳、二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)、四(三苯基膦)鈀(O)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)、反式-二氯代雙(三苯基膦)鈀(II)。優(yōu)選的催化劑是披鈀碳。然后將該反應(yīng)物加熱至25℃和120℃之間1-24小時(shí)，然后冷至室溫并過(guò)濾。然后該溶液用無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸，例如對(duì)-甲苯磺酸一水合物處理，高得率地分離式(C)化合物的無(wú)機(jī)酸鹽或?qū)?甲苯磺酸鹽。
另一個(gè)獲取式(C)化合物的方法應(yīng)用預(yù)備的(advancing)式(A)化合物粗溶液，其中Z是-B(OH)2和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，而烷基如文中所定義并優(yōu)選乙基，及W是氫，與式(B)化合物，其中L是碘或溴及U是有機(jī)基團(tuán)，使用“配位體較少(ligand-less)”的與披鈀碳不同的催化劑，以鈀(O)介導(dǎo)的聯(lián)芳基偶合(在J.Org.Chem.1996，61，9556及在此引用的參考文獻(xiàn)中描述的與原位生成的硼酸進(jìn)行Suzuki交叉偶合)。在Org.Lett.1999，1，965；Org.Process Res.Dev.1999，3，248；及Tetrahedron Lett.1994，35，3277中報(bào)道了“配位體較少”的鈀的這樣的應(yīng)用。在流程C的(2)中部分描述的本方法的優(yōu)選實(shí)施方案，為(i)提供原位產(chǎn)生的呋喃基鋰化物(lithiate)，一種式(A)的化合物，其中Z是Li及R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，優(yōu)選乙氧基，及W是氫，為(ii)提供隨后生成的相應(yīng)的硼酸，其中Z是B(OH)2和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，優(yōu)選乙氧基，及W為氫，及為(iii)提供鈀(O)介導(dǎo)的聯(lián)芳基偶合，以構(gòu)成所需的式(C)化合物。所述方法應(yīng)用醚性溶劑。這些醚性溶劑可以包括但不限于，乙醚、四氫呋喃、二氧六環(huán)、1，2-二乙氧基乙烷和DME。優(yōu)選的溶劑是DME。觀察到優(yōu)選的溶劑提供超過(guò)公開的由2-呋喃甲醛縮二乙醇生成合成的5-甲?；?2-呋喃基硼酸的方法的明顯改進(jìn)(Synth.Commun.1998，28，1013)。另一個(gè)合適的原位生成5-甲酰基-2-呋喃基硼酸的前體包括2-(2-呋喃基)-1，3-二氧戊環(huán)。本方法的優(yōu)點(diǎn)包括用烷基鋰，優(yōu)選正-丁基鋰，在較高的溫度(-20℃在DME中與-40℃在四氫呋喃中比較)使式(A)的化合物脫離子化，其中Z是氫和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，優(yōu)選乙氧基，及W是氫。隨后用硼酸三烷基酯，優(yōu)選用在DME中的硼酸三異丙基酯處理式(A)的化合物，其中Z是鋰和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，優(yōu)選乙氧基，及W是氫，也提供較高轉(zhuǎn)化成式(A)化合物的硼酸酯，其中Z是B(O-異丙基)3Li和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，優(yōu)選乙氧基，及W是氫。在用于接著的Suzyki偶合的制備中，將原位產(chǎn)生的硼酸酯于室溫以其特定的順序首先用乙酸處理，接著加入水水解成式(A)化合物的硼酸，其中Z是B(OH)2和R是-C(Q)(T)W，其中Q和T是O-烷基，其中烷基如此文中所定義并優(yōu)選乙基，及W是氫。也觀察到在先技術(shù)的改進(jìn)，對(duì)比四氫呋喃，由使用DME延伸至使用硼酸中間體的鈀(O)介導(dǎo)的聯(lián)芳基偶合得到式(C)化合物。此種方法的改進(jìn)包括更固定的得率，更短的反應(yīng)時(shí)間，及提高的純度分布。
在另一個(gè)實(shí)施方案中。式(C)化合物可以由鈀(O)介導(dǎo)的5-甲酰基-2-呋喃基硼酸，式(A)化合物(其中Z是-B(OH)2)的聯(lián)芳基聯(lián)合，原位產(chǎn)生式(B)化合物，其中L是碘或溴及U是有機(jī)基團(tuán)來(lái)生成(見流程(C)的(3))。本方法使用作為縮醛胺(aminal)鋰化物的醛官能團(tuán)，在例如2-呋喃甲醛與選自嗎啉、N，O-二甲基羥胺、1-甲基哌嗪或N1，N1，N2-三甲基-1，2-乙二胺的仲胺的鋰陰離子的反應(yīng)中原位保護(hù)。在本法中的優(yōu)選的胺是N，O-二甲基羥胺。胺鋰化物的生成是通過(guò)于低溫下在醚性溶劑如四氫呋喃或DME中，用烷基鋰試劑，優(yōu)選正-丁基鋰，處理所述胺完成的。然后將該胺鋰陰離子溶液與2-呋喃甲醛混合原位生成縮醛胺鋰化物，一種式(A)化合物，其中Z是氫，R是-C(Q)(T)W，其中Q是NR’R”，其中R’是O-烷基，優(yōu)選甲氧基及R”是如本文所定義的烷基，優(yōu)選甲基或者R’和R”各自獨(dú)立為如本文所定義的烷基；T是O-Li及W是氫。然后于低溫用另外的摩爾當(dāng)量的烷基鋰，優(yōu)選正-丁基鋰處理該溶液，生成呋喃基鋰化物，一種式(A)化合物，其中Z是Li和R是-C(Q)(T)W，其中Q是NR’R”，其中R’是O-烷基，優(yōu)選甲氧基及R”是烷基，優(yōu)選甲基或者R’和R”各自獨(dú)立為如本文所定義的烷基，T是O-Li及W是氫。然后于低溫下用硼酸三烷基酯，優(yōu)選硼酸三異丙基酯處理該溶液，生成一種式(A)化合物，其中Z是B(O-異丙基)3Li和R是-C(Q)(T)W，其中Q是NR’R”，其中R’可以是O-烷基，優(yōu)選甲氧基及R”是如文中所定義的烷基，優(yōu)選甲基或者R’和R”各自獨(dú)立為如文中所定義的烷基；T是O-Li及W是氫，在經(jīng)加入或者無(wú)機(jī)酸或者有機(jī)酸，如乙酸的溶液中水解成5-甲酰基-2-呋喃基硼酸。該原位生成的5-甲?；?2-呋喃基硼酸容易地經(jīng)過(guò)鈀(O)介導(dǎo)的聯(lián)芳基偶合生成式(C)化合物。
當(dāng)使用鹵素(Z是溴或碘)取代的2-呋喃甲醛衍生物，優(yōu)選5-溴代-2-甲?；秽珪r(shí)，也可以使用在前文中描述的方法得到式(C)化合物。即，式(A)化合物，其中Z是溴和R是-C(O)H(見流程C的(4))。
可選擇地，式(C)化合物的另一合成策略可由N-雜芳基硼酸，如式(B)化合物，其中L是-B(OH)2和U是有機(jī)基團(tuán)與5-鹵-2-甲酰基呋喃衍生物，即式(A)化合物，其中Z是溴或碘和R是-C(O)H經(jīng)鈀(O)介導(dǎo)的聯(lián)芳基偶合構(gòu)成(見流程C的(5))。制備式(B)的N-雜芳基硼酸中間體的方法包括用鹵化烷基鎂試劑，優(yōu)選使用溴化乙基鎂處理式(B)化合物，其中L是碘和U是有機(jī)基團(tuán)。該反應(yīng)于低溫在醚性溶劑如四氫呋喃或DME中進(jìn)行。然后該混合物用硼酸三烷基酯，優(yōu)選用硼酸三異丙基酯處理，接著保持反應(yīng)在低溫下緩慢加入烷基鋰，優(yōu)選正-丁基鋰。然后接著加入無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸，優(yōu)選乙酸。這樣得到式(B)N-雜芳基硼酸中間體，其中L是-B(OH)2和U是有機(jī)基團(tuán)的溶液。然后向其中加入5-鹵-2-呋喃甲醛-(鹵素為溴或碘)，優(yōu)選5-溴代-2-呋喃甲醛、共溶劑如N，N-二甲基乙酰胺、堿的水溶液如碳酸鈉水溶液及鈀催化劑，如二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物。然后將該溶液加熱至足夠溫度完成向所需的式(C)化合物的轉(zhuǎn)化。
構(gòu)成式(C)化合物的一種不同的合成策略是使用Heck-type反應(yīng)(Bull.Chem.Soc.Jpn.1973，46，1220；Heterocycles 1990，31，1951；Synthesis 1984，488；J.Org.Chem.1985，50，5272)使2-呋喃甲醛，一種式(A)化合物，其中Z是氫和R是-C(O)H，以區(qū)域選擇性方式與式(B)中間體，其中L是碘或溴和U是有機(jī)基團(tuán)偶合。所述區(qū)域選擇性鈀在5-位催化2-呋喃甲醛的芳基化在化學(xué)文獻(xiàn)中未曾出現(xiàn)。在本方法中其他合適的2-呋喃甲醛的取代包括2-呋喃甲醛縮二乙醇，2-(2-呋喃基)-1，3-二氧戊環(huán)，2-呋喃酸(furanoic acid)和2-呋喃酸的酯，如2-呋喃酸甲酯或2-呋喃酸乙酯。使用此策略合成式(C)化合物的方法需要混合適當(dāng)?shù)娜軇├鏝，N-二甲基甲酰胺、N-甲基吡咯烷酮、甲苯、二甲基乙酰胺、水、乙腈或其混合物，優(yōu)選N，N-二甲基甲酰胺，與有機(jī)胺堿如三乙胺和二異丙基乙胺或者堿金屬羧酸鹽。如碳酸鈉、碳酸鉀、碳酸銫、碳酸鈣、乙酸鈉和乙酸鉀，優(yōu)選乙酸鉀，以及2-呋喃甲醛。然后加入三烷基-或三芳基膦如三-O-甲苯基膦、三苯基膦、三-叔-丁基膦、三-2-呋喃基膦、三環(huán)己基膦，優(yōu)選三環(huán)己基膦。加入下列的鈀催化劑，包括但不限于，乙酸鈀(II)、氯化鈀(II)、披鈀碳、二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)、四(三苯基膦)鈀(O)、三(二亞芐基丙酮)二鈀(O)、反式-二氯代雙(三苯基膦)鈀(II)，優(yōu)選氯化鈀(II)。然后加熱該混合物并緩慢加入式(B)化合物的溶液，其中L是碘和溴，優(yōu)選碘。然后將該反應(yīng)混合物加熱10-20小時(shí)，此后將該反應(yīng)混合物冷卻至室溫并過(guò)濾。加入無(wú)機(jī)酸或有機(jī)酸，如p-甲苯磺酸，提供并分離式(C)化合物的鹽。
在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供用于制備式(C)化合物的方法， 該方法包括步驟使式(A)化合物式 與式(B)化合物反應(yīng) 生成式(C)化合物，其中U是有機(jī)基團(tuán)；及原位生成式(A)的化合物，和L是碘或溴；R是-C(Q)(T)W，其中Q和T獨(dú)立選自-OCH3，或-OCH2CH3，及W是氫；和Z是B(OH)2；或原位生成式(A)的化合物，和L是碘或溴；R是-C(O)H，和Z是B(OH)2；或原位生成式(B)的化合物，和L是B(OH)2；R是-C(O)H；及Z是溴；或使式(B)化合物與式(A)化合物區(qū)域選擇性地反應(yīng)，其中式(A)或式(B)的化合物都不能原位生成，和L是碘或溴；R-C(O)H；及Z是氫。
如上所述U可以是任一合適的有機(jī)基團(tuán)。在一個(gè)實(shí)施方案中，U代表由R2基團(tuán)取代的和任選由至少一個(gè)獨(dú)立選擇的R4基團(tuán)取代的苯基、吡啶基、3H-咪唑基、吲哚基、異吲哚基、二氫吲哚基、異二氫吲哚基、1H-吲唑基、2，3-二氫-1H-吲唑基、1H-苯并咪唑基、2，3-二氫-1H-苯并咪唑基或1H-苯并三唑基基團(tuán)。
R2選自芐基、鹵代-、二鹵代-、和三鹵代芐基、苯甲?；?、吡啶甲基、吡啶甲氧基、苯氧基、芐氧基、鹵代-、二鹵代-和三鹵代芐氧基和苯磺?；?；
或R2代表三鹵代甲基芐基或三鹵代甲基芐氧基；或R2代表下式的基團(tuán) 其中每個(gè)R3獨(dú)立選自鹵素、C1-4烷基和C1-4烷氧基；及n為0至3。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，U代表由R2基團(tuán)取代的和任選由至少一個(gè)獨(dú)立選擇的R4基團(tuán)取代的苯基、吲哚基，或1H-吲唑基基團(tuán)。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，U代表由R2基團(tuán)取代的和任選由至少一個(gè)獨(dú)立選擇的R4基團(tuán)取代的苯基或1H-吲唑基基團(tuán)。
R4選自基團(tuán)羥基、鹵代基、C1-4烷基、C2-4鏈烯基、C2-4炔基、C1-4烷氧基、氨基、C1-4烷基氨基、二[C1-4烷基]氨基、C1-4烷硫基、C1-4烷基亞磺?；?、C1-4烷基磺?；?、C1-4烷基羰基、羧基、氨基甲酰基、C1-4烷氧基羰基、C1-4鏈烷?；被?、N-(C1-4烷基)氨基甲酰基、N，N-二(C1-4烷基)氨基甲?；?、氰基、硝基和三氟甲基。
在又一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，其中U代表苯基，基團(tuán)R2是在相對(duì)于從U到連接NH基團(tuán)鍵的對(duì)位。
在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，其中U代表1H-吲唑基，基團(tuán)R2是在吲唑基的1-位。
在一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2代表芐基、吡啶甲基、苯氧基、芐氧基、鹵代、二鹵代和三鹵代芐氧基及苯磺酰基。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2代表三鹵代甲基芐氧基。
在一個(gè)進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2代表下式基團(tuán) 其中Hal是Br或Cl，特別是Cl，更優(yōu)選其中Hal取代基是在如環(huán)上所示的用星號(hào)標(biāo)記的位置。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2代表芐氧基、氟代芐氧基(特別是3-氟芐氧基)、芐基、苯氧基和苯磺?；?。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，R2代表溴代芐氧基(特別是3-溴芐氧基)和三氟甲基芐氧基。
在進(jìn)一步優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)U不由R4基團(tuán)取代；在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，U是不由R4基團(tuán)取代的苯基或吲唑基。
在另一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)U由選自鹵代基或C1-4烷氧基；特別是由選自氯代基、氟代基或甲氧基的R4基團(tuán)取代。
在一個(gè)更優(yōu)選的實(shí)施方案中，環(huán)U由R4基團(tuán)取代，其中R4代表鹵代基，特別是3-氟代基。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，U與R4一起代表甲氧基苯基、氟代苯基、三氟甲基苯基或氯代苯基。
在一個(gè)更特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，U與R4一起代表甲氧基苯基或氟代苯基。
在一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)U與取代基R2和R4一起代表芐氧基苯基、(氟代芐氧基)苯基、(苯磺?；?苯基、芐基吲哚基或苯氧基苯基。
在又一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)U與取代基R2和R4一起代表芐氧基苯基、(3-氟代芐氧基)苯基、(苯磺?；?苯基或芐基吲唑基。
在另一個(gè)更特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)U與取代基R2和R4一起代表(3-溴代芐氧基)苯基、(3-三氟甲基芐氧基)苯基或(3-氟代芐氧基)-3-甲氧基苯基。
在另一個(gè)更特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)U與取代基R2和R4一起代表3-氟代芐氧基-3-氯代苯基、芐氧基-3-氯代苯基、芐氧基-3-三氟甲基苯基、(芐氧基)-3-氟代苯基、(3-氟代芐氧基)-3-氟代苯基或(3-氟代芐基)吲唑基。
在最特別優(yōu)選的實(shí)施方案中，基團(tuán)U與取代基R2和R4一起代表芐氧基苯基或(3-氟代芐氧基)苯基。
鹵代基是，例如，氟代基、氯代基、溴代基或碘代基；優(yōu)選其為氟代基、氯代基或溴代基，更優(yōu)選為氟代基或氯代基。
C1-4烷基是，例如，甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、異丁基、仲-丁基或叔-丁基；優(yōu)選其為甲基、乙基、丙基、異丙基或丁基，更優(yōu)選甲基。
C2-4鏈烯基是，例如，乙烯基、丙-1-烯基或丙-2-烯基；優(yōu)選其為乙烯基。
C2-4炔基是，例如，乙炔基、丙-1-炔基或丙-2-炔基；優(yōu)選其為乙炔基。
C1-4烷氨基是，例如，甲氧基、乙氧基、正丙氧基、異丙基、正丁氧基、異丁氧基、仲丁氧基或叔丁氧基，優(yōu)選其為甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基或丁氧基；更優(yōu)選其為甲氧基。
C1-4烷氨基是，例如，甲基氨基、乙基氨基或丙基氨基；優(yōu)選其為甲基氨基。
二[C1-4烷基]氨基是，例如，二甲基氨基、二乙基氨基、N-甲基-N-乙基氨基或二丙基氨基；優(yōu)選其為二甲基氨基。
C1-4烷硫基是，例如，甲硫基、乙硫基、丙硫基或異丙硫基，優(yōu)選甲硫基。
C1-4烷基亞磺?；牵?，甲基亞磺?；⒁一鶃喕酋；?、丙基亞磺?；虍惐鶃喕酋；瑑?yōu)選甲基亞磺?；?。
C1-4烷基磺酰基是，例如，甲磺酰基、乙磺酰基、丙磺酰基或異丙基磺?；瑑?yōu)選甲磺?；?br> C1-4烷基羰基是，例如，甲基羰基、乙基羰基或丙基羰基。
C1-4烷氧基羰基是，例如，甲氧羰基、乙氧羰基、丙氧羰基、丁氧羰基或叔丁氧羰基。
C1-4鏈烷?；被?其中碳原子數(shù)包括CO官能度)是，例如，甲酰胺基、乙酰氨基、丙酰胺基或丁酰胺基。
N-(C1-4烷基)氨基甲?；牵?，N-甲基氨基甲?；騈-乙基氨基甲酰基。
N，N-二(C1-4烷基)氨基甲酰基是，例如，N，N-二甲基氨基甲酰基、N-甲基-N-乙基氨基甲?；騈，N-二乙基氨基甲?；率鰧?shí)例僅試圖說(shuō)明而沒有試圖以任一形式限制本發(fā)明的范圍。實(shí)例中化合物的已給數(shù)據(jù)與指定結(jié)構(gòu)的化合物相一致。實(shí)施例本文所用的符號(hào)和在這些方法、流程及實(shí)施例中使用的約定與現(xiàn)代科學(xué)文獻(xiàn)例如，Journal of the American Chemical Society或者theJournal of Biological Chemistry中使用的相一致。標(biāo)準(zhǔn)的單-字母或三-字母縮寫一般用于指定氨基酸殘基，除非另外注明，所述氨基酸殘基假定為L(zhǎng)-構(gòu)型。除非另外注明，全部起始原料得自商業(yè)供應(yīng)商并可不經(jīng)進(jìn)一步純化使用。特別是，下述縮略語(yǔ)可以用于實(shí)施例及整個(gè)說(shuō)明書g(克)mg(毫克)L(升)mL(毫升)μL(微升)psi(每平方英寸磅)M(摩爾) mM(毫摩爾)N(正常) Kg(公斤)i.v.(靜注) Hz(赫茲)
MHz(百萬(wàn)赫茲)mol(摩爾)mmol(毫摩爾) RT(室溫)min(分) h(小時(shí))mp(熔點(diǎn)) TLC(薄層層析)Tr(保留時(shí)間) RP(反向)THF(四氫呋喃)DMSO(二甲基亞砜)EtOAc(乙酸乙酯) DME(1，2-二甲氧基乙烷)DCM(二氯甲烷)DCE(二氯乙烷)DNF(N，N-二甲基甲酰胺) OAc(乙酸)TMSE(2-(三甲基甲硅烷基)乙基] TMS(三甲基甲硅烷基)TIPS(三異丙基甲硅烷基) TBS(t-丁基二甲基甲硅烷基)HPLC(高壓液相層析)除非另外指明，全部溫度以℃表示(攝氏度)。除非另外注明，全部反應(yīng)于室溫、惰性氣氛下進(jìn)行。
1HMP譜在Varian VXR-300，Varian Unity-300，Varian Unity-400儀器或General Electric QE-300上記錄?；瘜W(xué)位移以百萬(wàn)份之幾表示(ppm，δ單位)。偶合常數(shù)以赫茲(Hz)為單位。峰裂圖形描述表觀峰裂數(shù)及指定為s(單峰)，d(雙重峰)，t(三重峰)，q(四重峰)，m(多重峰)，br(寬峰)。
低分辨質(zhì)譜(MS)在JOEL JMS-AX505HA，JOEL SX-102，或SCIEX-Aplili譜儀上記錄；高分辨MS使用JOEL SX-102A譜儀獲得。全部質(zhì)譜在電噴霧電離(ESI)、化學(xué)電離(CI)、電子撞擊(EI)、快速原子轟擊(FAB)方法獲取。紅外(IR)譜在Nicolet 510 FT-IR儀上，用1-mm NaCl晶體獲得。全部反應(yīng)使用0.25mm E.Merck硅膠板(60F-254)，用UV光，5％乙醇的磷鉬酸或p-茴香醛溶液顯示的薄層析監(jiān)控?？焖僦鶎游鲈诠枘z(230-400目篩，Merck)上進(jìn)行。旋光度使用Perkin Elmer Model 241旋光計(jì)獲得。熔點(diǎn)使用Mel-Temp II儀器確定并未經(jīng)校對(duì)。實(shí)施例15-(4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛的制備向反應(yīng)容器中加入N-{3-氯-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺(100mg；0.198mmol)，2-甲酰基呋喃-5-硼酸(Frontier Scientific，42mg；0.297mmol)、10％載于活性炭上的鈀(5mg；0.05Wt)，DME(2.0mL)，MeOH(1.0mL)和三乙胺(83μL)。在50℃加熱14小時(shí)后，HPLC顯示98.5％完全轉(zhuǎn)化。1HNMR(d6-DMSO)δ11.44(s，1H)，9.38(s，2H)，9.11(s，1H)，8.90(s，1H)，8.39(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.89(d，1H，J＝12Hz)，7.84(d，1H，J＝4Hz)，7.60(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.47-7.42(m，2H)，7.44(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz)，7.35-7.25(m，3H)，7.24(d，1H，J＝4Hz)，7.16(dt，1H，J＝8 and 4Hz)，7.06(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz，6.84(d，1H，J＝4Hz)，5.27(s，2H)，4.43(s，2H)，3.61-3.50(m，2H)，3.47-3.36(m，2H)，3.09(s，3H)，2.23(s，6H).實(shí)施例25-(4-[3-氟芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛的制備(i)原位制備2-二乙基縮醛-呋喃-5-硼酸在反應(yīng)/內(nèi)容物控制下，將6.7體積的DME和0.67wt.(740克，410mL，4.35mol)2-糠醛縮二乙醇加至20L的反應(yīng)容器中并冷至-40℃。使用含有瓷頭的ChemTech CP120計(jì)量泵，用約40分鐘加入正丁基鋰，1.32wt.(在己烷中，2.5M，1.45kg，5.22mol)。內(nèi)溫升至-31℃。反應(yīng)混合物變得很暗的深色，但卻是均勻的。在滴加完成后，用約0.17體積的己烷沖洗管路并直接加入到反應(yīng)容器中。當(dāng)內(nèi)溫降至-40℃時(shí)，將反應(yīng)混合物再攪拌2.5小時(shí)。2.5小時(shí)后，用20分鐘時(shí)間通過(guò)計(jì)量泵加入1.1體積(0.89wt，982g，5.22mol)的硼酸三異丙基酯。在第一次加入到一半時(shí)可觀察到少量的放熱，其放熱達(dá)到最高點(diǎn)約-31℃。用另外0.15體積的己烷沖洗泵的管路并洗至反應(yīng)罐中。2小時(shí)后，(在-40℃用30分鐘)，在60分鐘內(nèi)反應(yīng)，溫度緩慢升至25℃。當(dāng)內(nèi)溫達(dá)到25℃時(shí)，取1mL等份反應(yīng)液用于反應(yīng)過(guò)程的檢查。[樣品制備用1mL CH3CN和100μl的1N HCl稀釋兩滴反應(yīng)混合物，并于280nM經(jīng)歷LC]。硼酸/2-呋喃甲醛比率為119∶1。此時(shí)，加入0.29體積的乙酸，將反應(yīng)混合物攪拌30分鐘。30分鐘后加入0.36體積的水。此反應(yīng)混合物直接用于下一步驟。
(ii)使用原位制備的2-二乙基縮醛-5-硼酸制備5-(4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲基苯基磺酸鹽在5分鐘內(nèi)通過(guò)真空向得自上述的反應(yīng)混合物中加入3.4體積(3.7L)的乙醇。加入0.69體積(760mL，5.45mol)的三乙胺，接著加入1wt(1100g，2.18mol)的N-{3-氯-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺和3wt％的10％Pd/C[10wt％(干基準(zhǔn))載于活性炭上的鈀，50％水濕，Degussa Type E 101 NE/W]。在反應(yīng)器控制模式中，將反應(yīng)器置于62℃。在約2小時(shí)內(nèi)觀察到內(nèi)溫升至58℃。在約14小時(shí)后，取等份反應(yīng)液用于反應(yīng)過(guò)程的檢查。[樣品制備用1mL的MeOH和250μL的1N HCl稀釋15uL反應(yīng)液，并于220 nM經(jīng)受快速LC]。此時(shí)，反應(yīng)冷至25℃。將黑色反應(yīng)物通過(guò)適合配有5.0μm的桶式過(guò)濾器(Pall part no.1f050，lot no.Fj0807)和0.45μm過(guò)濾器(CLMF 0.4-662，批號(hào)4087-R-#F)的特氟隆-襯里的(lined)不銹鋼套管轉(zhuǎn)移軟管轉(zhuǎn)移至第二個(gè)反應(yīng)器中。用0.5體積的DME沖洗第一個(gè)反應(yīng)器并經(jīng)過(guò)轉(zhuǎn)移軟管洗滌通過(guò)過(guò)濾桶的固體。將1.55wt(1700g，8.72mol)對(duì)-甲苯磺酸一水合物溶于2.27體積的去離子水中，并用5分鐘時(shí)間將該溶液加至該反應(yīng)混合物中。于25℃反應(yīng)1小時(shí)，使用帶有介質(zhì)濾紙的瓷過(guò)濾器收集產(chǎn)物。0.9體積1∶1 DME/水溶液洗滌反應(yīng)器和濾餅。抽吸干燥4小時(shí)后，將所得黃色濾餅轉(zhuǎn)移至兩個(gè)玻璃盤內(nèi)并在環(huán)境真空(在18Hg)氮?dú)饬飨拢糜诟稍锵鋬?nèi)(50-55℃)。將這兩個(gè)玻璃盤從干燥箱中移出并冷卻至室溫，并相應(yīng)地留樣。作為黃色固體存在的標(biāo)題化合物的分離得率是1230克(1.12wt，87％th；1410g Th)。1H NMR(d6-DMS0)δ11.44(s，1H)，9.38(s，2H)，9.11(s，1H)，8.90(s，1H)，8.39(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.89(d，1H，J＝12Hz)，7.84(d，1H，J＝4Hz)，7.60(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.47-7.42(m，2H)，7.44(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz)，7.35-7.25(m，3H)，7.24(d，1H，J＝4Hz)，7.16(dt，1H，J＝8 and 4Hz)，7.06(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz，6.84(d，1H，J＝4Hz)，5.27(s，2H)，4.43(s，2H)，3.61-3.50(m，2H)，3.47-3.36(m，2H)，3.09(s，3H)，2.23(s，6H)，實(shí)施例3使用原位保護(hù)的2-呋喃甲醛制備5-(4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛將N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(629mg；6.32mmol)懸浮在THF(19mL；40Vol)中，并將燒瓶冷至-40℃(Cryocool-控制的異丙醇浴)。以維持內(nèi)溫升至-12℃的速率逐滴加入正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液；5.3mL；13.2mmol)。然后，將該混合物快速冷卻回到-40℃。于-40℃，30分鐘后，將2-呋喃甲醛(481μL；5.74mmol)快速加入到該混合物中，使內(nèi)溫升至-28℃。溫度再次快速降回至-40℃。在-40℃15分鐘后，將正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液；2.8mL；6.89mmol)逐滴加入，同時(shí)維持內(nèi)溫低于-35℃。在滴加期間，混合物變?yōu)辄S色。滴加完成后，在-40℃將混合物攪拌1小時(shí)。將硼酸三異丙基酯(2.0mL；8.62mmol)逐滴加入，同時(shí)維持內(nèi)溫低于-35℃。在滴加完成后，除去冷浴。HPLC顯示83.7％為所需的硼酸鹽，6.2％為原料。當(dāng)內(nèi)溫達(dá)到-20℃時(shí)，通過(guò)滴加乙酸(462μL；8.04mmol)猝滅混合物，并允許升高至室溫。所得物質(zhì)不需預(yù)先純化或分離而可直接用于Suzuki偶合反應(yīng)。
向含有粗品硼酸的反應(yīng)容器中，加入N，N-二甲基乙酰胺(13mL)、1.16M的碳酸鈉水溶液(7.3mL；7.38mmol)、N-{3-氯-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺(1.87g；3.69mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦?；?二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(15mg；0.0185mmol)。加入堿，內(nèi)溫升至約28℃。用油浴將反應(yīng)混合物加熱到50℃(內(nèi)溫)。反應(yīng)混合物通過(guò)壓緊的硅藻土墊過(guò)濾并用THF洗滌所得固體。然后用乙酸乙酯稀釋分離的溶液并加入鹽酸水溶液。分離各層及中和水層，用乙酸乙酯稀釋。分離各層并用硫酸鈉干燥有機(jī)層，過(guò)濾，并真空濃縮得到標(biāo)題化合物。標(biāo)題化合物的LC保留時(shí)間4.9分鐘。實(shí)施例4使用原位保護(hù)的5-溴代-2-呋喃甲醛制備5-(4-[3-氯-4-(3-氟芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛鹽酸鹽將N，O-二甲基羥基胺鹽酸鹽(3.04g；30.49mmol)懸浮在THF(40mL)中，并將燒瓶冷至-78℃(干冰-丙酮浴)。將正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液；24.4mL；60.98mmol)逐滴加至該冷的懸浮液中，所述懸浮液變?yōu)榫?。用?冰浴(0℃)替換丙酮/CO2浴，該混合物轉(zhuǎn)成淡黃色。于0℃攪拌15分鐘后，將該溶液冷卻回到-78℃，并滴加入5-溴代-2-呋喃甲醛(5.00g溶于10mL THF中；27.72mmol。15分鐘后，加入結(jié)束，允許將反應(yīng)混合物用水/冰浴熱至0℃，15分鐘后，又冷回至-78℃。10分鐘后，將硼酸三異丙基酯(18.8mL；83.16mmol)一次性加至該冷卻的混合物中，接著滴加正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液；27.7mL；69.30mmol)。于-78℃，30分鐘后，將乙酸(6.5mL；102.6mmol)加至該冷卻的反應(yīng)液中，然后將其熱至室溫。所得物質(zhì)不經(jīng)預(yù)先純化或分離而直接用于Suzuki偶合反應(yīng)。
向含有粗品硼酸的反應(yīng)容器中，加入N，N-二甲基乙酰胺(54mL)、水(11mL)、N-{3-氯-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺(10.78g；21.32mmol)、固體Na2CO3(6.85g；63.97mmol)和二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(174mg；0.21mmol)得到橙色反應(yīng)混合物。將該反應(yīng)混合物加熱至80℃，沒有觀察到顏色的變化。在28.5小時(shí)的全部反應(yīng)時(shí)間后，允許反應(yīng)混合物冷至室溫。用THF(54mL)稀釋該混合物。用100目DarcoG-60活性碳(696mg)，Hyflo Super Cel(348mg)處理，并于室溫下攪拌＞2小時(shí)。通過(guò)裝有Hyflo Super Cel的玻璃漏斗抽濾除去沉淀，并用THF(5X 22mL)洗滌，直至THF溶劑不再顯示顏色。用濃HCl水溶液(7.1mL；85.3mmol)和水(80mL)處理濾液并允許在室溫下攪拌2h。所得沉淀通過(guò)玻璃漏斗過(guò)濾并用33％異丙醇/水(54mL)，水(54mL)和33％異丙醇/水(54mL)沖洗，然后允許在空氣中干燥2h。將所得淺黃棕色固體轉(zhuǎn)移至真空干燥器中并允許將其真空干燥過(guò)夜。該反應(yīng)給出9.01g標(biāo)題化合物(得率83％)為淺褐-棕色粉末。標(biāo)題化合物的LC保留時(shí)間4.9分鐘。實(shí)施例5使用原位生成的4-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯胺基}-6-喹唑啉基硼酸制備5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛將N-{3-氯-4-[(3-氟芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺(200mg；0.395mmol)溶于THF(2.0mL)中，得到淺黃色的溶液。將該混合物冷至0℃(水/冰浴)，然后用溴化乙基鎂(在THF中的1.0M溶液；475μl；0.475mmol)處理，得到均勻的亮黃色溶液，將之冷至-78℃?？焖偌尤肱鹚崛惐?373μl；1.582mmol)，接著緩慢加入正丁基鋰(在己烷中的2.5M溶液；395μl；0.989mmol)。當(dāng)反應(yīng)完成時(shí)，通過(guò)HPLC確證，加入乙酸(84μl；1.463mmol)猝滅反應(yīng)。向在THF中的粗品黃色漿狀硼酸中加入5-溴代-2-呋喃甲醛(107mg；0.503mmol)，接著加入N，N-二甲基乙酰胺(2.0ml)，使該混合物成為均相的，加入1.016NNa2CO3水溶液(1.2mL；1.185mmol)并最后加入二氯[1，1’-雙(二苯基膦基)二茂鐵]鈀(II)二氯甲烷加合物(16mg；0.020mmol)。將該混合物于80℃加熱。15小時(shí)后HPLC檢查指示完全轉(zhuǎn)化成標(biāo)題化合物。LC保留時(shí)間t＝4.9分鐘。實(shí)施例65-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲苯磺酸鹽的區(qū)域選擇性制備在攪拌下，通過(guò)猛烈鼓泡將N2通入2-呋喃甲醛(5.7mL，69mL DMF中的混合物中脫氣10分鐘。接著將催化劑混合物加熱至110℃。對(duì)在55mLDMF中的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-碘-4-喹唑啉胺(3.5g，6.9mmol)的溶液以類似的方法脫氣，然后用10小時(shí)經(jīng)注射管泵將其加至所述催化劑混合物中。在完成加入后，再維持反應(yīng)溫度在110℃攪拌2小時(shí)。冷至室溫后，將所得混合物倒入125mL水中。在粗濾紙上收集沉淀并用水洗滌(約7mL)。將所得固體重新溶解在溫?zé)?50℃)的DME中。將p-甲苯磺酸一水合物(2.0g；10.4mmol)加至該溶液中。將溫度降至35℃，并于此溫度攪拌該混合物過(guò)夜，將水(60mL)加入以產(chǎn)生進(jìn)一步沉淀。在粗濾紙上收集沉淀并接著用30-40mL的DME/水(1∶1)洗滌。于50℃，環(huán)境真空下干燥濾瓶，得到2.5g(55％)的標(biāo)題化合物。1H NMR(d6-DMSO)δ11.44(s，1H)，9.38(s，2H)，9.11(s，1H)，8.90(s，1H)，8.39(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.89(d，1H，J＝12Hz)，7.84(d，1H，J＝4Hz)，7.60(dd，1H，J＝8 and 4Hz)，7.47-7.42(m，2H)，7.44(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz)，7.35-7.25(m，3H)，7.24(d，1H，J＝4Hz)，7.16(dt, 1H，J＝8 and 4Hz)，7.06(AA′BB′，2H，JAB＝8Hz，6.84(d，1H，J＝4Hz)，5.27(s，2H)，4.43(s，2H)，3.61-3.50(m，2H)，3.47-3.36(m，2H)，3.09(s，3H)，2.23(s，6H).實(shí)施例75-(4-[-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲苯磺酸鹽的制備在裝配有機(jī)械攪拌器的2升3口圓底燒瓶中裝入74.95克的5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛鹽酸鹽(根據(jù)WO 99/35146的56頁(yè)，方法C見流程A，上述方法C)和749.5mL的THF。向該漿狀物中加入84.45mL 2M氫氧化鈉并攪拌該反應(yīng)物30分鐘。分層并用160mL水洗滌有機(jī)層。該有機(jī)層用3.75克的Darco G60制成漿狀物，并經(jīng)硅藻土過(guò)濾。收集濾液，并在快速攪拌下將其緩慢加至33.54克的甲苯磺酸一水合物中。在室溫下緩慢沉淀出固體。將該混合物冷至0℃并攪拌10分鐘。過(guò)濾該混合物，并用橡膠隔板壓干，于50℃真空過(guò)夜。5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲苯磺酸鹽的得率是84.25克(88.8％)。實(shí)施例8N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-{[[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽無(wú)水合物(式II化合物的無(wú)水合物形式)的制備將13.3體積的THF加入一個(gè)20L反應(yīng)器中，接著加入0.62wt(2.93mol)NaBH(OAc)3。將該20L反應(yīng)器保持內(nèi)容物在20℃。第二個(gè)20L反應(yīng)器裝有由實(shí)施例7的方法制備的1000克(1.55mol)的5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲苯磺酸鹽和6.7體積的THF。向該5-(4-[3-氯代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛4-甲苯磺酸鹽的THF溶液中加入0.325體積的二異丙基乙基胺(1.86mol)，接著加入0.32wt的2-(甲磺?；?乙胺(321g，2.6mol)和0.15體積的IPA。1小時(shí)后，將生成的亞胺/THF溶液用10分鐘通過(guò)真空轉(zhuǎn)移至第一個(gè)20L反應(yīng)器中攪拌的NaBH(OAc)3懸浮液中。在90分鐘后，通過(guò)泵用40分鐘加入4體積的5N氫氧化鈉。允許將該溶液攪拌15分鐘后關(guān)掉攪拌機(jī)，并使分層。將水相由反應(yīng)器底部抽出，并將有機(jī)層通過(guò)裝配有0.45μm過(guò)濾器的特氟隆襯里-管道的不銹鋼套管轉(zhuǎn)移軟管轉(zhuǎn)移至空的20L反應(yīng)器中。用5分鐘時(shí)間向此溶液中加入2體積THF溶液4wt(1180g，6.2mol)對(duì)-甲苯磺酸一水合物?？捎^察到由溶液中析出淺黃色沉淀，并于室溫?cái)嚢?2小時(shí)。將該反應(yīng)物從反應(yīng)器的底部抽出，并通過(guò)墊有濾紙的瓷玻璃漏斗過(guò)濾。用1體積的95∶5 THF/水溶液洗滌所得的黃色濾餅，并允許空氣干燥過(guò)夜。抽真空干燥12小時(shí)后，將該黃色濾餅轉(zhuǎn)移至兩個(gè)玻璃盤中并置于在環(huán)境真空(在18Hg下)通入氮?dú)饬鞯母稍锵?42℃)中。將兩個(gè)玻璃盤移出該干燥箱，允許冷至室溫并相應(yīng)地留樣。N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺基酰)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽(無(wú)水合物)的分離得率是1264克(1.3wt，88％；1443gTh)。
將大約50mg的產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至Karl Fisher體積濕度儀(VolumetricMoisture Apparatus)(DL35型，Mettler，Hightstown，NJ)中，按照生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行操作。測(cè)定的該無(wú)水合物的水含量是0.31％。實(shí)施例9無(wú)水合物二甲苯磺酸鹽的X-射線衍射將按照實(shí)施例8制備的無(wú)水合物二甲苯磺酸鹽的樣品在ScintagXDS2000衍射儀的無(wú)硅(silicon zero)的背景板上染塵(dusted)。樣品的粉末X-射線衍射圖形由下述條件獲得。
幾何結(jié)構(gòu)(Geometry) θ/θAsset0038018Seifert高電壓(High Voltage)ID3000發(fā)生器(generator)，S/N 90 671422X-線管能源(tube tower)Seifert type V4，60kV max，40mA max，X-射線衍射管(diffraction tube)AEG FK-60-10銅陽(yáng)極管(copperanode tube)，60KV max，2KW max，常規(guī)焦距(normal focus)(1×10mm)，Scintag Peltier冷卻的Si(Li)固體狀態(tài)檢測(cè)模型(Solid StateDetector Model)B3A型，測(cè)角儀半徑250mm操作條件X-射線管電壓 45kVX-射線管電流 40mA掃描條件換流器(Chopper) 0.02deg連續(xù)掃描模式掃描速率 0.1deg2θ/min樣品旋轉(zhuǎn)儀(Sample spinner)ON(1旋轉(zhuǎn)/秒)DS＝1mm；SS(i)＝2.mmSS(d)＝0.5mm；RS＝0.3mmDS＝發(fā)散狹縫(divergent slit)(入射光)SS(i)＝散射狹縫(scatter slit)(入射的(incident))SS(d)＝散射狹縫(衍射的(diffracted))RS＝接收狹縫(receiving slit)得到數(shù)據(jù)并使用可由Scintag，Inc.獲取的DMSNT v.1.37軟件進(jìn)行分析。獲得的X-線衍射圖式見圖1。實(shí)施例10N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]-苯基}-6-[5-{[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽一水合物(式II化合物的一水合物形式)的制備一個(gè)20L反應(yīng)器裝配有根據(jù)實(shí)施例8的方法制備的1wt(930g，1.0mol)的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽無(wú)水合物。向其中加入10體積的預(yù)先混合的8∶2 THF去離子水的溶液，并將該反應(yīng)器加熱至65℃。于50℃觀察到完全溶解。將所得澄清的反應(yīng)混合物通過(guò)裝配有5.0μm筒式過(guò)濾器的不銹鋼套管轉(zhuǎn)移軟管轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)20L反應(yīng)器中。該空的20L反應(yīng)器和過(guò)濾器管線用0.2體積的預(yù)先混合的8∶2 THF去離子水的溶液洗滌。另外1體積的預(yù)先混合的8∶2THF去離子水的溶液用于將物質(zhì)洗滌進(jìn)入反應(yīng)混合物。將該20L反應(yīng)器加熱至約80℃。然后用2小時(shí)將反應(yīng)溫度緩慢降至55℃，接著用10小時(shí)降至45℃。10小時(shí)后，將溫度調(diào)節(jié)至25℃，并允許在室溫?cái)嚢柙摲磻?yīng)混合物45分鐘。從該20L反應(yīng)器的底部抽出黃色沉淀進(jìn)入墊有濾紙的玻璃漏斗。過(guò)濾的流速快而平穩(wěn)，過(guò)濾速率是很好的。將黃色濾餅用0.6體積的預(yù)先混合的8∶2THF去離子水的溶液洗滌，然后在空氣下干燥所得黃色固體4小時(shí)并置于玻璃盤中。將該玻璃盤置于環(huán)境真空(約18Hg下)，60℃，氮?dú)饬飨?天。從干燥箱中移出后，對(duì)應(yīng)地將物質(zhì)留樣。得到743克(0.8wt，80％；930g th)亮黃色結(jié)晶固體。
將大約50mg的產(chǎn)物轉(zhuǎn)移至Karl Fisher體積濕度儀(VolumetricMoisture Apparatus)(DL35型，Mettler，Hightstown，NJ)中，按照生產(chǎn)商的說(shuō)明進(jìn)行操作。測(cè)定的該一水合物的水含量是1.99％，與1.92％的理論值一致。實(shí)施例11單水合物二甲苯磺酸鹽的X-射線衍射將按照實(shí)施例10制備的單水合物二甲苯磺酸鹽的樣品在ScintagXDS2000衍射儀的無(wú)硅的背景板上染塵(dusted)。樣品的粉末X-射線衍射圖形由下述條件獲得。
幾何結(jié)構(gòu) θ/θAsset 0038018Seifert高電壓ID3000發(fā)生器，S/N90671422X-射線管能源Seifert type V4，60kV max，40mA max，X-射線衍射管AEG FK-60-10銅陽(yáng)極管，60KV max，2KW max，常規(guī)焦距(1×10mm)Scintag Peltier冷卻的Si(Li)固體狀態(tài)檢測(cè)器B3A型，測(cè)角儀半徑250mm操作條件X-射線管電壓45kVX-射線管電流40mA掃描條件換流器 0.02deg
連續(xù)掃描模式掃描速率0.1deg 2q/min樣品旋轉(zhuǎn)ON(1旋轉(zhuǎn)/秒)DS＝1mm；SS(i)＝2.mmSS(d)＝0.5mm；RS＝0.3mmDS＝發(fā)散狹縫(入射光)SS(i)＝散射狹縫(入射的)SS(d)＝散射狹縫(衍射的)RS＝接收狹縫得到數(shù)據(jù)并使用可由Scintag，Inc.獲取的DMSNT V.1.37軟件進(jìn)行分析。獲得的X-射線衍射圖形見圖1。實(shí)施例124-(3-氟代-芐氧基)-3-溴代苯基)-(6-(5-((2-甲磺?；?乙氨基)-甲基)-呋喃-2-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽(式IV化合物)的制備按照實(shí)施例7的方法，將5-(4-[3-溴代-4-(3-氟代芐氧基)-苯胺基]-6-喹唑啉基)-呋喃-2-甲醛的HCl鹽(按照WO 99/35146的56頁(yè)，方法C制備)轉(zhuǎn)化成甲苯磺酸鹽。按照實(shí)施例8的方法，生成的呋喃2-甲醛甲苯磺酸鹽產(chǎn)物用于制備4-(3-氟代-芐氧基)-3-溴代苯基)-(6-(5-((2-甲磺酰基-乙氨基)-甲基)-呋喃-2-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽。實(shí)施例134-(3-氟代-芐氧基)-3-氯代苯基)-(6-(2-((2-甲磺?；?乙氨基)-甲基)-噻唑-4-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽(式III化合物)的制備按照WO 99/35146的57-59頁(yè)的方法F制備(4-(3-氟代-芐氧基)-3-氯代苯基)-(6-(2-((2-甲磺酰基-乙氨基)-甲基)-噻唑-4-基)喹唑啉-4-基)-胺的HCl鹽，然后按照實(shí)施例7的方法將其轉(zhuǎn)化成(4-(3-氟代-芐氧基)-3-氯代苯基)-(6-(2-((2-甲磺?；?乙氨基)-甲基)-噻唑-4-基)喹唑啉-4-基)-胺二甲苯磺酸鹽。實(shí)施例14N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-{[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽一水合物轉(zhuǎn)化為無(wú)水合物稱取大約50mg的按照實(shí)施例10的程序制備的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽一水合物，并加至1-dram管型瓶中，向其中加入1-mL MeOH或2-甲氧基乙醇。將所得的漿狀物于25℃水浴中攪拌4天，然后通過(guò)過(guò)濾分離固體，并于40℃在環(huán)境真空下干燥1天。得自MeOH和2-甲氧基乙醇的干燥固體的X-射線衍射圖形與N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽無(wú)水合物的X-射線衍射圖形一樣。實(shí)施例15N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲磺酰鹽無(wú)水合物轉(zhuǎn)化為一水合物將77.0g(0.08mol)的按照實(shí)施例12的程序制備的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽無(wú)水合物置于一個(gè)裝配有頂部攪拌器的1L 3-頸圓底燒瓶中。向該黃色的固體中加入去離子水(10體積)并將該漿狀物置于室溫下攪拌。在一小時(shí)時(shí)，移出小量等分試樣，通過(guò)在布氏(Buchner)漏斗上紙過(guò)濾，并于60℃真空箱中干燥12小時(shí)。各樣品經(jīng)XRD分析[t＝45分鐘，無(wú)水合物，t=2.5分鐘，無(wú)水合物；t＝3.5小時(shí)，無(wú)水合物/一水合物的混合物；t＝＞12小時(shí)，一水合物]。將所得反應(yīng)物的漿狀物置于室溫下36小時(shí)。然后通過(guò)在布氏漏斗上紙過(guò)濾亮黃色的物質(zhì)并空氣干燥過(guò)夜。該物質(zhì)置于55℃真空干燥箱中96小時(shí)，并加入氮?dú)?。分離到74克(96％th)。樣品經(jīng)XRD顯示，為N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽一水合物。實(shí)施例16N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽一水合物鹽的濕度吸收試驗(yàn)稱取大約12mg的按照實(shí)施例10制備的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酰鹽一水合物鹽加至濕度吸收裝置(型號(hào)SGA-100，VTI制造)的樣品鍋中。將樣品在氮?dú)饬飨赂稍镏敝猎?分鐘內(nèi)失重小于0.015％。然后在每一步，增加相對(duì)濕度(RH)(吸收)至5，15，25，35，45，55，65，75，85及90％，平衡定義為重量變化在5分鐘內(nèi)小于0.015％。然后在相同平衡條件下，相對(duì)濕度減至(解吸)90，80，70，60，50，40，30，及20％。吸收曲線(y-軸重量-％變化對(duì)x-軸％RH)在圖3(b)中示出。實(shí)施例17N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二-HCl鹽的濕度吸收試驗(yàn)稱取大約15mg的N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二-HCl鹽加至濕度吸收裝置(型號(hào)SGA-100，VTI制造)的樣品鍋中。將樣品在氮?dú)饬飨赂稍镏敝猎?分鐘內(nèi)失重小于0.015％。然后在每一步，增加相對(duì)濕度(吸收)至5，15，25，35，45，55，65，75，85及90％，平衡定義為重量變化在5分鐘內(nèi)小于0.015％。然后在相同平衡條件下，相對(duì)濕度減至(解吸)90，80，70，60，50，40，30，及20％。吸收曲線(y-軸重量-％變化對(duì)x-軸％RH)在圖3(b)中描述。實(shí)施例18N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺?；?乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲苯磺酸鹽無(wú)水合物及一水合物晶形的相對(duì)物理穩(wěn)定性一種結(jié)晶漿液平衡法用于測(cè)定N-{3-氯代-4-[(3-氟代芐基)氧基]苯基}-6-[5-({[2-(甲磺酰基)乙基]氨基}甲基)-2-呋喃基]-4-喹唑啉胺二甲甲苯磺酸鹽無(wú)水合物及一水合物晶形的相對(duì)物理穩(wěn)定性。該方法包括含有無(wú)水合物及一水合物形式的混合物的已知水活性的有機(jī)的或含水結(jié)晶漿液的制備。該結(jié)晶漿液向最低的自由能形式平衡，由此測(cè)定相對(duì)物理穩(wěn)定性為相對(duì)濕度的函數(shù)。
通過(guò)使用分子量和室溫下的密度(對(duì)于甲醇0.787g/ml和對(duì)于H2O1.00g/ml)將體積與組分轉(zhuǎn)換成摩爾分?jǐn)?shù)(Xw)制備甲醇(MeOH)/H2O混合物。水活性(aw)由下式計(jì)算aw＝0.0056+1.398Xw-0.647Xw2+0.153Xw3+0.0845Xw4(Zhu，H.，Yuen，C.，Grant，D.J.W.，1996.在有機(jī)溶劑+水混合物中水活性對(duì)結(jié)晶藥物相1的影響(Influence of water activity in organic solvent+water mixtures on the nature of the crystallizing drug phase.1.Theophyline.)Int.J.Pharm.135，151-160.)將1∶1比率的兩種晶形加至管型瓶中并用MeOH/H2O混合物重新構(gòu)成。在最初混合后，移出一份等分試樣并分散用于粉末X-射線衍射(model PADV，Scintag，Cupertino，CA)分析，以確保兩種晶形的峰可以檢測(cè)。攪拌樣品并于25℃，在水浴中平衡。
在表III中的結(jié)果顯示晶形的轉(zhuǎn)化形式作為計(jì)算的水活性/RH的函數(shù)。轉(zhuǎn)化速率是非?？斓模缤ㄟ^(guò)粉末X-射線衍射(pXRD)觀察到的，在一天內(nèi)隨著時(shí)間的推移沒有變化。PXRD圖形在圖5中提供。上圖顯示對(duì)于無(wú)水合物和一水合物純晶形的結(jié)果。中圖說(shuō)明在相當(dāng)于7％RH的水活性時(shí)，所述1∶1的混合物在液相中轉(zhuǎn)變成無(wú)水合物。類似地，下圖證明在水活性相當(dāng)于15％時(shí)，一水合物是穩(wěn)定的形式。在表III中的總結(jié)指明，一般來(lái)說(shuō)，在7-15％RH之間范圍內(nèi)，一水合物成為熱動(dòng)力學(xué)穩(wěn)定的形式并在升至100％RH的范圍內(nèi)保持穩(wěn)定。表III
生物學(xué)數(shù)據(jù)在底物磷酸化分析和細(xì)胞增生分析中，測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)erbB家族蛋白酪氨酸激酶的抑制活性。底物磷酸化分析底物磷酸化分析使用桿狀病毒(baculovirus)表達(dá)的，有組成型活性的c-erbB-2和c-erbB-4的胞內(nèi)結(jié)構(gòu)域的重組構(gòu)建體，及由溶解的A431細(xì)胞膜分離的EGFr。該方法測(cè)量所述分離的酶催化g-磷酸從ATP轉(zhuǎn)移至在生物素化的合成肽(Biotin-GluGluGluGluTyrPheGluLeuVal)中的酪氨酸殘基上的能力。通過(guò)下述兩種方法之一檢測(cè)底物磷酸化a)于室溫下，將c-erbB-2、c-erbB-4或EGFr與10mM MnCl2，10mM ATP，5mM肽及試驗(yàn)化合物(由5mM在DMSO中的貯備液稀釋，DMSO的終濃度為2％)在40mM pH7.4的HEPES緩沖液中培養(yǎng)30分鐘。通過(guò)加入EDTA(終濃度為0.15mM)中止反應(yīng)并將樣品轉(zhuǎn)移至鏈霉抗生物素-包被的96-孔板上。洗滌該板并使用銪(Europium)-標(biāo)記的抗磷酸酪氨酸抗體測(cè)定在所述肽上的磷酸酪氨酸的水平，并用時(shí)間-解析(resolved)熒光技術(shù)定量。
b)于室溫下，將ErbB2與15mM MnCl2，2mM ATP，0.25mCi[g-33P]ATP/孔，5mM肽底物，及試驗(yàn)化合物(由10mM在DMSO中的貯備液稀釋，DMSO的終濃度為2％)在50mM pH7.2的MOPS中培養(yǎng)50分鐘。通過(guò)加入200ml含有2.5mg/ml鏈霉抗生物素-包被的SPA珠(Amersham Inc.)的PBS，50mM ATP，10mM EDTA和0.1％TX-100中止反應(yīng)。將微量滴定板密封并使SPA珠沉降(settle)至少六小時(shí)。SPA信號(hào)用Packard Topcount 96-孔板閃爍計(jì)數(shù)器(PackardInstrument Co.，Meriden，CT)測(cè)定。
試驗(yàn)的化合物是在如上述的緩沖液中的實(shí)施例8，12，及13的產(chǎn)物。代表性的結(jié)果示于關(guān)于EGFR、erbB2，和erbB4酪氨酸激酶抑制的表IV中。實(shí)施例8，12，及13的鹽的游離堿的結(jié)構(gòu)也已給出。表IV
細(xì)胞分析亞甲藍(lán)生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)人的乳房瘤(BT474)、頭頸癌(HN5)和胃腫瘤(N87)細(xì)胞系和人的包皮成纖維細(xì)胞(HFF)于37℃，在潮濕的10％CO2，90％空氣下，在含有10％胎牛血清(FBS)的低葡萄糖DMEM(Life Technologies 12320-032)的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。SV40轉(zhuǎn)化的人乳房上皮細(xì)胞系HB4a用人H-rascDNA(HB4a r4.2)或人c-erbB2 cDNA(HB4a c5.2)轉(zhuǎn)染。該HB4a克隆在含有10％FBS，胰島素(5μg/ml)，氫化可的松(5μg/ml)，并補(bǔ)充有選擇性藥物勻霉素B(hygromycin B)(50ug/ml)的RPMI中培養(yǎng)。用胰蛋白酶/EDTA收獲細(xì)胞，用血球計(jì)計(jì)數(shù)，并以下述密度平鋪在96-孔組織培養(yǎng)板(Falcon 3075)中的100ml合適的介質(zhì)中BT474 10,000個(gè)細(xì)胞/孔，HN 53,000個(gè)細(xì)胞/孔，N87 10,000個(gè)細(xì)胞/孔，HB4ac5.23,000個(gè)細(xì)胞/孔，HB4ar4.2 3,000個(gè)細(xì)胞/孔，HFF 2,500個(gè)細(xì)胞/孔。第二天，以含有100mg/ml慶大霉素的DMEM，以兩倍于所需的最終濃度稀釋化合物，所述化合物取自10mM在DMSO中的儲(chǔ)備液。將100ml/孔的這些稀釋液加至100ml在細(xì)胞板上的現(xiàn)有培養(yǎng)基中。將含有0.6％DMSO的培養(yǎng)基加至對(duì)照孔中。將以DMEM稀釋的化合物加入全部細(xì)胞系中，包括HB 4ar4.2和HB 4ac5.2細(xì)胞系。在全部孔中的DMSO的終濃度是0.3％。細(xì)胞于37℃，10％CO2下培養(yǎng)3天。通過(guò)抽吸除去培養(yǎng)基。細(xì)胞生物量通過(guò)用每孔100μl亞甲藍(lán)(SigmaM9140，0.5％在50∶50乙醇∶水中)染色細(xì)胞來(lái)評(píng)估，并于室溫培養(yǎng)至少30分鐘。除去染色劑，培養(yǎng)板用小水流浸洗，并空氣干燥。向自細(xì)胞釋放的染色劑中加入100μl加溶溶液(1％N-月桂酰肌氨酸，鈉鹽，Sigma L5125，在PBS中)，并輕輕震搖該培養(yǎng)板約30分鐘。在微量培養(yǎng)板讀出儀上測(cè)定在620nM處的光學(xué)密度。計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)相對(duì)于溶媒處理的對(duì)照孔的抑制百分?jǐn)?shù)。抑制50％的細(xì)胞生長(zhǎng)的化合物濃度(IC50)使用非線性回歸(Levenberg-Marquardt)和方程式內(nèi)推，該方程式為y＝Vmax*(1-(x/(K+x)))+Y2，其中“K”等于IC50。
表V說(shuō)明本發(fā)明化合物對(duì)各種腫瘤細(xì)胞系的抑制活性的范圍，表示IC50值(μM)。使用HFF作為人的正常細(xì)胞系的代表，提供的細(xì)胞毒性的值為毫摩爾的IC50值。也提供了在正常細(xì)胞系和腫瘤系之間的選擇性的測(cè)量。表V
權(quán)利要求
1.一種式(I)化合物 和其無(wú)水合物或水合物形式，其中R1為Cl或Br，X為CH、N或CF；及Het為噻唑或呋喃。
2.一種式(II)化合物 和其無(wú)水合物或水合物形式。
3.權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物是無(wú)水合物形式。
4.權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物的特征是粉末X-射線衍射圖形包括峰
5.權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物是一水合物形式。
6.權(quán)利要求2的化合物，其中所述化合物的特征是粉末X-射線衍射圖形包括峰
7.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式(III)化合物
及其無(wú)水合物或水合物形式。
8.權(quán)利要求1的化合物，其中所述化合物是式(IV)化合物 及其無(wú)水合物或水合物形式。
9.一種藥用組合物，它包括治療有效量的如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物，或其無(wú)水合物或水合物形式及一種或多種藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑及賦形劑。
10.一種治療哺乳動(dòng)物的疾病的方法，所述疾病的特征為至少一種erbB家族PTK的活性異常，該方法包括給予所述哺乳動(dòng)物治療有效量的如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物，或其無(wú)水合物或水合物形式。
11.權(quán)利要求10的方法，其中所述erbB家族PTK選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4。
12.權(quán)利要求10的方法，其中至少兩種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTKs顯示異常的活性。
13.權(quán)利要求10的方法，其中至少一種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTK被所述化合物抑制。
14.權(quán)利要求10的方法，其中至少兩種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTKs被所述化合物抑制。
15.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病是癌癥或銀屑病。
16.權(quán)利要求10的方法，其中所述疾病是癌癥。
17.一種如權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物，或其無(wú)水合物或水合物形式，它用于治療。
18.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的化合物，或其無(wú)水合物或水合物形式在制備用于治療以異常erbB家族PTK活性為特征的疾病的藥物中的用途。
19.權(quán)利要求18的用途，其中所述erbB家族PTK選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4。
20.權(quán)利要求18的用途，其中至少兩種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTKs顯示異?；钚?。
21.權(quán)利要求18的用途，其中至少一種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTK被所述化合物抑制。
22.權(quán)利要求18的用途，其中至少兩種選自EGFr，c-erb-B2，及c-erb-B4的erbB家族PTKs被所述化合物抑制。
23.權(quán)利要求18的用途，其中所述疾病是癌癥或銀屑病。
24.權(quán)利要求18的用途，其中所述疾病是癌癥。
25.一種治療哺乳動(dòng)物由異常蛋白酪氨酸激酶活性介導(dǎo)的疾病的方法，它包括給予所述哺乳動(dòng)物有效抑制至少一種erbB家族蛋白的量的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式。
26.權(quán)利要求25的方法，其中有效抑制至少兩種erbB家族蛋白的量的式(I)化合物或其無(wú)水合物或水合物形式被給予。
27.在本分明的一個(gè)實(shí)施方案中，提供一種制備式(C)化合物的方法 它包括下述步驟使式(A)化合物 與式(B)化合物反應(yīng) 生成式(C)化合物，其中U是有機(jī)基團(tuán)；及式(A)化合物是原位生成的，和L是碘或溴；R是-C(Q)(T)W，其中Q和T獨(dú)立選自-OCH3，或-OCH2CH3和W是氫；和Z是B(OH)2；或式(A)化合物是原位生成的，和L是碘或溴；R是-C(O)H，和Z是B(OH)2；或式(B)化合物是原位生成的，和L是B(OH)2；R是-C(O)H；及Z是溴；或使式(B)化合物與式(A)化合物進(jìn)行區(qū)域選擇性的反應(yīng)，其中式(A)或式(B)的化合物都不能原位生成，和L是碘或溴；R-C(O)H；及Z是氫。
全文摘要
描述4－喹唑林胺的二甲苯磺酸鹽以及使用其在治療特征為異常erbB家族PTK活性的疾病的方法。
文檔編號(hào)A61P17/06GK1440403SQ01812051
公開日2003年9月3日 申請(qǐng)日期2001年6月28日 優(yōu)先權(quán)日2000年6月30日
發(fā)明者M·S·麥克盧雷, M·H·奧斯特霍特, F·羅山加, M·J·薩謝蒂 申請(qǐng)人:葛蘭素集團(tuán)有限公司