專利名稱：用作mtp抑制劑的4-(聯(lián)苯基羰基氨基)哌啶衍生物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用作微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)抑制劑的化合物，含有這些化合物的藥物組合物，以及它們?cè)卺t(yī)藥中的應(yīng)用。
MTP(微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白)是位于肝細(xì)胞和腸細(xì)胞網(wǎng)狀組織中的一種轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白，其催化轉(zhuǎn)運(yùn)甘油三酯地生物分子(脫輔基脂蛋白B)的組裝。
術(shù)語“脫輔基脂蛋白B(apo B)”更具體地指腸內(nèi)的脫輔基蛋白48和肝臟內(nèi)的脫輔基蛋白100。
人體MTP或脫輔基蛋白B的突變表現(xiàn)為脫輔基脂蛋白B水平極低或甚至缺乏。包含apo B(乳糜微粒，極低密度脂蛋白)及其代謝殘?jiān)?乳糜微粒殘留物，低密度脂蛋白)的脂蛋白被視為導(dǎo)致動(dòng)脈粥樣硬化的主要危險(xiǎn)因素，這在工業(yè)化國(guó)家是主要的致死原因。觀察發(fā)現(xiàn)，在這些突變的雜合個(gè)體體內(nèi)，水平平均減半與低的心血管疾病危險(xiǎn)性相關(guān)(C.J.Gluek，P.S.GaRtside，M.J.Mellies，P.M.SteineR，TRans.Assoc.Am.Physicians，1977，90，184)。這表明通過MTP拮抗劑調(diào)節(jié)富含甘油三酯的脂蛋白的分泌，和/或調(diào)節(jié)apo B的分泌對(duì)治療動(dòng)脈粥樣硬化和更廣泛地以脫輔基脂蛋白B升高為特征的病變可能有效。
因此，抑制MTP和/或apo B分泌的分子可能對(duì)治療糖尿病相關(guān)性的高甘油三酯血癥、高膽固醇血癥和異常脂血癥有效，也對(duì)預(yù)防和治療肥胖癥有效。
MTP抑制劑在現(xiàn)有技術(shù)中已有記載，其中，包括加拿大專利No.2091102中的哌啶衍生物和BRISTOL-MYERS SQUIBB的EP 643 057中記載的化合物，其對(duì)應(yīng)于下列結(jié)構(gòu)之一
根據(jù)所述文獻(xiàn)，式B化合物中的R1、R5和R6更具體地定義如下
R1為烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基(烷基至少包含兩個(gè)碳原子)、二芳烷基、芳烯基、二芳烯基、芳炔基、二芳炔基、二芳烷基芳基、雜芳基烷基(烷基至少包含兩個(gè)碳原子)、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基(烷基至少包含兩個(gè)碳原子)，上述基團(tuán)都任選被取代；
或者，R1為以下基團(tuán)
或者，R1為
其中，p為1～8，R17和R18各自獨(dú)立地為氫原子、烷基、鏈烯基、芳基、芳烷基、雜芳基、雜芳基烷基、環(huán)烷基或環(huán)烷基烷基，在R17和R18基團(tuán)中至少有一個(gè)不為氫原子；
或者，R1為
其中，R19為芳基或雜芳基；
R20為芳基或雜芳基；
R21為氫原子、烷基、芳基、烷基芳基、芳烷基、芳氧基、芳基烷氧基、雜芳基、雜芳基烷基、雜芳基烷氧基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基或環(huán)烷基烷氧基；
R5是含有至少兩個(gè)碳原子的烷基、鏈烯基、炔基、芳基、雜芳基、芳烷基、雜芳基烷基、環(huán)烷基、環(huán)烷基烷基、多環(huán)烷基、多環(huán)烷基烷基、環(huán)烯基、環(huán)烯基烷基、多環(huán)烯基、多環(huán)烯基烷基或雜芳基羰基。取代基R5和R6都任選被取代，且應(yīng)該理解為當(dāng)R5為CH3時(shí)，R6不為氫原子；當(dāng)R5為苯基時(shí)，苯核優(yōu)選含有疏水性取代基，例如烷基、鹵代烷基、芳基、芳氧基或芳烷基，R6為氫原子、C1-C4烷基或C1-C4鏈烯基。
EP 643 057中所提出的定義包括了許多活性還未被證明并尚存疑問的化合物。
就事實(shí)而言，對(duì)大多數(shù)例子，R1包含一個(gè)或兩個(gè)碳環(huán)芳核，其表示例如任選被取代的苯基、任選被取代的苯烷基、烷基、3，3-雙(苯基)丙基，5，5-雙(苯基)-2-戊烯基、5，5-雙(苯基)戊基。
僅有少數(shù)例子顯示取代基R1具有雜環(huán)核。但是，沒有一個(gè)例子與本發(fā)明化合物的定義相符。
上述式B不包括R1表示芳甲基或雜芳基甲基的化合物，但在與MTP抑制相關(guān)的研究過程中，發(fā)明人證明了下式化合物不具有活性
式中，
R1表示4-咪唑基甲基、2-吲哚基甲基、3-吲哚基甲基、2-苯并呋喃基甲基、2-苯并噻吩基甲基或下式基團(tuán)
相反，令人驚奇的是，發(fā)明人在研究過程中發(fā)現(xiàn)了一組化合物，它們與這些非活性化合物非常相似，但確實(shí)對(duì)MTP有特別有效的抑制作用，并且對(duì)脫輔基蛋白B(apoB)的分泌也有很好的抑制作用。
與BRISTOL-MYERS SQUIBB開發(fā)的化合物相比，本發(fā)明化合物的特點(diǎn)還在于其作用持續(xù)時(shí)間使這些化合物在機(jī)理毒性(肝臟脂肪變性)方面具有潛在優(yōu)勢(shì)。
本發(fā)明的化合物更具體地為下列式(I)所示的化合物或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或立體異構(gòu)體
式中，
Z表示聯(lián)苯基，其任選在2′、3′、4′、5′和6′位被一個(gè)或多個(gè)選自三鹵甲基和三鹵甲氧基的取代基取代；
Het表示喹啉基、喹喔啉基或吡啶基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C1-C6)烷氧基、羥基、(C1-C6)硫代烷氧基、羧基和(C1-C6)烷氧基羰基的取代基取代。
本發(fā)明涉及這些化合物。
可提及的可藥用鹽為無機(jī)酸鹽或有機(jī)酸鹽，如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、磷酸二氫鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、延胡索酸鹽、2-萘磺酸鹽和對(duì)甲苯磺酸鹽。
允許式(I)所示化合物進(jìn)行適當(dāng)分離和結(jié)晶的鹽，例如與苦味酸、草酸或旋光酸(例如酒石酸、二苯甲酰酒石酸、杏仁酸或樟腦磺酸)的鹽也是新的化合物，作為中間體化合物構(gòu)成本發(fā)明的一個(gè)組成部分。
水合物和溶劑化物意指例如半水合物、一水合物或二水合物，溶劑化物意指與例如甲醇或乙醇等的醇加合化合物。
在本發(fā)明中，術(shù)語“烷基”是指直鏈或支鏈基于烴的基團(tuán)，優(yōu)選含1～6個(gè)碳原子，更優(yōu)選含1～4個(gè)碳原子。其實(shí)例尤其是甲基、乙基、丙基、異丙基、丁基、叔丁基、異丁基、戊基和己基。
術(shù)語“烷氧基“是指與氧原子相連的上述烷基基團(tuán)，例如甲氧基、乙氧基、異丙氧基、丁氧基和己氧基。
術(shù)語“鹵素”是指溴原子、氯原子、碘原子或氟原子，優(yōu)選氟原子。
術(shù)語“芳基”表示基于烴的單環(huán)或多環(huán)芳族基團(tuán)，優(yōu)選含6～18個(gè)碳原子，更優(yōu)選含6～10個(gè)碳原子。
舉例而言，更具體地可提及苯基。
優(yōu)選地，Z表示4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基或4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基。
Het的優(yōu)選含義為2-吡啶基、3-吡啶基、2-喹啉基、2-喹喔啉基和4-喹啉基，其中，吡啶核、喹喔啉核和喹啉核任選被取代。
有益地，當(dāng)Z表示2-聯(lián)苯基時(shí)，Het表示2-喹啉基或6-氟-2-喹啉基，明顯優(yōu)選這后兩種含義。
類似地，當(dāng)Z表示4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基時(shí)，Het優(yōu)選表示任選被取代的3-吡啶基，任選被取代的2-喹啉基，任選被取代的4-喹啉基，或被(C1-C6)烷基、更優(yōu)選地被甲基取代的2-吡啶基。
并且，當(dāng)Het表示吡啶基時(shí)，該吡啶基優(yōu)選任選地被一個(gè)或多個(gè)選自甲基、鹵素和甲氧基的取代基取代。
特別優(yōu)選下列式(I)化合物，或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或立體異構(gòu)體
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-1)，
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶延胡索酸鹽(化合物A-2)，
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶馬來酸鹽(化合物A-3)，
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽(化合物A-4)，
1-[(6-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-5)，
1-(2-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-6)，
1-[(2-甲基-3-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-7)，
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-8)，
1-(4-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-9)，
1-[(6-甲氧基-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-10)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-11)，
1-[3-吡啶基甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-1)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-2)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶延胡索酸鹽(化合物A-12)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶馬來酸鹽(化合物A-13)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽(化合物A-14)，
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽(化合物A-15)，
1-[(4-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽(化合物A-16)，
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-3)，
1-[(6-甲氧基-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-4)，
1-[(4-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-5)，
1-[(2-喹喔啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-17)，
1-[(2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-6)，
1-[(6-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-7)，
1-[(2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-8)，
1-[(2-甲基-3-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-9)，
1-[(6-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-10)。
本發(fā)明的化合物可以容易地通過下列方法之一制備方法A
合成式(I)所示化合物的第一種方法由如下步驟組成使式(II)所示的胺
(式中，Het如式(I)中所定義)與式(III)所示的酸或與該酸的活化衍生物反應(yīng)，
Z-CO-OH III
(式中Z如式(I)中所定義)以使式(II)所示的胺與式(III)所示的羧酸或其衍生物偶聯(lián)。
術(shù)語“偶聯(lián)”指生成相應(yīng)的酰胺鍵。
為實(shí)現(xiàn)此偶聯(lián)，可以從文獻(xiàn)描述的肽合成反應(yīng)條件獲得啟發(fā)。
酸III的活化衍生物是用比羧酸官能團(tuán)-COOH具有更強(qiáng)反應(yīng)性的官能團(tuán)例如-CO-T代替此羧酸官能團(tuán)的化合物，其中，T表示鹵素原子(特別是氯原子)、疊氮基、咪唑基(imidazolide)、對(duì)硝基苯氧基、1-苯并三唑、N-O-琥珀酰亞胺、酰氧基(如戊酰氧基)、(C1-C4烷氧基)羰基氧基、二烷基-或二環(huán)烷基-O-酰脲基團(tuán)。
當(dāng)式(III)所示的化合物以其游離羧酸形式使用時(shí)，反應(yīng)在偶聯(lián)劑例如碳二亞胺存在的條件下，并任選地在活化劑，如羥基苯并三唑或羥基琥珀酰亞胺存在下進(jìn)行。
典型的偶聯(lián)劑為溶于水性介質(zhì)的碳二亞胺類，二環(huán)烷基-和二烷基碳二亞胺類，特別是二環(huán)己基碳二亞胺、二異丙基碳二亞胺和(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺。
優(yōu)選的反應(yīng)條件涉及使用等克分子量的在惰性溶劑中反應(yīng)的物質(zhì)。
優(yōu)選的惰性溶劑的例子特別是任選被鹵代的脂族烴和芳族烴，例如己烷、庚烷、甲苯、苯、二甲苯、二氯甲烷、氯仿、四氯化碳、二氯乙烷、氯苯或二氯苯。
反應(yīng)溫度保持在室溫(15～35℃)和溶劑的回流溫度之間是有利的，優(yōu)選反應(yīng)溫度為15～60℃，更優(yōu)選20～40℃。
當(dāng)此方法在碳二亞胺存在下進(jìn)行時(shí)，則此試劑可以以鹽的形式加入到反應(yīng)介質(zhì)中，如以鹽酸鹽的形式。在這種情況下，建議向反應(yīng)介質(zhì)中同時(shí)加入堿?？捎玫倪m宜的堿有吡啶、4-二甲氨基吡啶(4-DMAP)、2，6-二-叔丁基-吡啶、1，8-二氮雜雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、1，5-二氮雜雙環(huán)[4.3.0]-壬-5-烯(DBN)和1，4-二氮雜雙環(huán)[2.2.2]辛烷(DABCO或三亞乙基二胺)。
根據(jù)本發(fā)明一個(gè)特別優(yōu)選的實(shí)施方案，室溫下(15～35℃)，在(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺存在的條件下，胺II與酸III在二氯甲烷中反應(yīng)。
本領(lǐng)域技術(shù)人員通過常規(guī)方法就能容易制備式(II)所示的胺。
作為一個(gè)方案變體，式(II)所示的胺可以通過下述方案1所示的反應(yīng)制得。
方案1
在第一步中，2，2，2-三氟-N-[4-哌啶基]乙酰胺與式(IV)所示的醛反應(yīng)
Het-COH (IV)其中，Het含義與式(I)中相同，反應(yīng)條件如下
在惰性溶劑，優(yōu)選如上所述的鹵代脂族烴或芳烴(鹵代脂族烴較為有利，如二氯乙烷)中，使用還原劑以實(shí)現(xiàn)還原性胺化。合適的還原劑是在有醛和酰胺官能團(tuán)存在下能選擇性地還原亞胺官能團(tuán)的還原劑。
所述還原劑優(yōu)選為三酰氧基硼氫化堿金屬，特別優(yōu)選三乙酰氧基硼氫化堿金屬，如三乙酰氧基硼氫化鈉。
其它可用的還原劑為氰基硼氫化鈉或氫。
反應(yīng)優(yōu)選在0～60℃之間進(jìn)行，更優(yōu)選10～40℃，例如室溫(15～35℃)。
式(VI)所示的化合物也可通過式(V)所示的化合物
與式(VIII)所示的化合物
Het-CH2-hal VIII在無機(jī)堿或有機(jī)堿存在的條件下反應(yīng)而制得，其中，式VIII中Het的含義與上同，而hal表示鹵素，如氯原子、溴原子或碘原子。
所述堿的性質(zhì)和操作條件可以容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員決定，總體上與下述方法C中就化合物VIII和化合物VII反應(yīng)所提出的一致。
當(dāng)化合物VIII中的鹵素不為碘原子時(shí)，有利地，為加速反應(yīng)，反應(yīng)介質(zhì)中可以加入碘化堿金屬(如碘化鉀)。
第二步中，化合物VI的酰胺官能團(tuán)轉(zhuǎn)變成相應(yīng)的胺官能團(tuán)。為此，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以在其處理時(shí)采用所述的任意一種方法來實(shí)現(xiàn)此轉(zhuǎn)變，特別是可以利用還原反應(yīng)或水解反應(yīng)。
在強(qiáng)吸電基團(tuán)CF3的作用下，化合物VI的酰胺官能團(tuán)的電子減少。因此可以被硼氫化堿金屬(如NaBH4)等相對(duì)較弱的還原劑或被氫化鋁鋰(LiAlH4)或BH3/BF3.Et2O還原。
反應(yīng)一般在醚類惰性溶劑存在的條件下進(jìn)行，如烷基醚(特別是乙醚或二異丙醚)、環(huán)醚(即，四氫呋喃或二噁烷)、二甲氧基乙烷或二甘醇二甲醚。
當(dāng)采用硼氫化堿金屬時(shí)，反應(yīng)介質(zhì)還可以含有質(zhì)子溶劑，如烷醇，特別是C1-C6烷醇(如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇或叔丁醇)、乙二醇、環(huán)醇(如環(huán)己醇)或甲基溶纖劑。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，可取的是在反應(yīng)介質(zhì)中加入醇，如甲醇、乙醇、丙醇、異丙醇、丁醇、異丁醇、叔丁醇、二甘醇或環(huán)己醇。
反應(yīng)溫度一般為15℃至溶劑回流溫度，優(yōu)選15～120℃，如20～115℃。
作為方案變體，本領(lǐng)域技術(shù)人員還可以通過堿的作用實(shí)現(xiàn)酰胺官能團(tuán)在堿性介質(zhì)中的水解。
特別合適的堿為NaOH和KOH，優(yōu)選NaOH。
在這種情況下，水解優(yōu)選在極性質(zhì)子介質(zhì)中進(jìn)行，如醇介質(zhì)。優(yōu)選溶劑為(C1-C4)烷醇，例如甲醇，更優(yōu)選乙醇。
作為方案變體，所述溶劑也可由醚組成，例如上述一種醚，更優(yōu)選二甲氧基乙烷。
水解溫度優(yōu)選10～100℃，其取決于所用堿的強(qiáng)度。
當(dāng)堿為NaOH或KOH時(shí)，一般15～60℃的溫度就足夠了，優(yōu)選30～45℃。方法B
制備式(I)所示化合物的第二個(gè)方法由如下步驟組成使式IV的醛
Het-COH IV
(Het的含義與式(I)中相同)與式VII所示的在4位被取代的哌啶
(式中，Z的含義與式(I)中相同)。在適合還原亞胺官能團(tuán)的還原劑存在的條件下反應(yīng)。
本反應(yīng)的條件與上述用于醛IV和哌啶V反應(yīng)的條件相同。
三酰氧基硼氫化堿金屬可以作為優(yōu)選的還原劑，特別是三乙酰氧基硼氫化堿金屬，如NaBH(OAc)3。
為此，極性非質(zhì)子溶劑特別適合于本反應(yīng)。有利地，所述溶劑選自鹵代芳烴和脂族烴。例如反應(yīng)可以在鹵代苯、鹵代甲苯、鹵代二甲苯、二氯甲烷、四氯化碳、二氯乙烷或二氯甲烷中進(jìn)行。鹵代脂族烴尤為合適，特別是二氯乙烷。
反應(yīng)溫度保持在0～40℃較為有利，更優(yōu)選保持在15～35℃。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以用常規(guī)方法從商品化合物開始容易地制得式VII的化合物。
更具體地說，對(duì)于式VII所示化合物(式中Z表示2-聯(lián)苯基或被三氟甲基取代的2-聯(lián)苯基)的制備，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參照WO96/26205中公開的操作條件。
至于式VII所示的化合物(式中Z表示被三氟甲氧基取代的2-聯(lián)苯基)，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參照下述反應(yīng)方案制備
式中，Bn為芐基，hal表示鹵素。
步驟i)中，在合適催化劑例如鈀(0)催化劑(例如Pd(PPh3)4)和堿例如碳酸堿金屬鹽(例如Na2CO3)等無機(jī)堿存在的條件下，通過式XI所示的硼衍生物
對(duì)化合物IX的作用，使聯(lián)苯核被-OCF3取代。
可以采用的合適溶劑為例如醚和質(zhì)子溶劑的混合物。
可提及的合適的醚為前述的醚，更特別是環(huán)醚(優(yōu)選二噁烷)和二甲氧基乙烷，及其混合物。
可提及的優(yōu)選的醇是上面所列出的(C1-C6)烷醇，例如乙醇。
優(yōu)選采用的溶劑的例子是二甲氧基乙烷、二噁烷和乙醇的混合物。
反應(yīng)溫度保持在40～150℃較為有利，優(yōu)選70～100℃，例如80～90℃。
步驟ii)實(shí)現(xiàn)哌啶的內(nèi)環(huán)氮原子的脫芐基化，可以用本質(zhì)上常規(guī)的方法(例如催化氫化)，特別是采用WO96/26205公開的條件來實(shí)施此步驟。
式IV的化合物可以為市售品，或由本領(lǐng)域技術(shù)人員從市售化合物開始容易地制得。
一個(gè)方案變體具體為，從下式XII所示的相應(yīng)酯制備式IV所示的醛，
Het-CO-O-Y XII式中，Y為任選被取代的基于烴的基團(tuán)，優(yōu)選(C1-C6)烷基，且Het的含義同上。
第一步，用合適的還原劑還原酯XII得到式XIII的相應(yīng)醇
Het-CH2-OH XIII式中，Het的含義同上。接著，第二步，所得的式XIII的醇被相對(duì)較弱的氧化劑如MnO2氧化。
另一解決方案是將式XIV所示的相應(yīng)化合物
Het-CH3 XIV
(式中，Het的含義同上)直接氧化成醛IV，例如用二氧化硒(SeO2)氧化。方法C
式(I)所示的化合物可以通過式VIII的鹵化物
Het-CH2-HalVIII式中，Het的含義與式(I)中相同，Hal表示鹵素；和式VII的哌啶
式中，Z的含義與式(I)中相同；在堿存在的條件下反應(yīng)來制備。
有利地，本反應(yīng)在強(qiáng)極性非質(zhì)子溶劑中進(jìn)行，例如腈(如乙腈或異丁腈)或酰胺(如甲酰胺、二甲基甲酰胺、二甲基乙酰胺、N-甲基-2-吡咯烷酮或六甲基磷酰胺)，優(yōu)選二甲基甲酰胺。
本反應(yīng)中，可以考慮應(yīng)用有機(jī)堿，如吡啶、4-二甲基氨基吡啶、2，6-二-叔丁基吡啶、1，8-二氮雜-雙環(huán)[5.4.0]十一碳-7-烯(DBU)、1，5-二氮雜-雙環(huán)[4.3.0]壬-5-烯(DBN)或1，4-二氮雜-雙環(huán)[2.2.2]辛烷(DABCO或三亞乙基二胺)。
根據(jù)本發(fā)明的一個(gè)優(yōu)選實(shí)施方案，可以使用無機(jī)堿，例如NaOH、KOH、NaHCO3、Na2CO3、KHCO3或K2CO3，特別優(yōu)選后者。
當(dāng)Hal不表示碘原子時(shí)，可取的做法是在反應(yīng)介質(zhì)中加入碘化堿金屬，如碘化鉀，以催化哌啶VII與鹵化物VIII的反應(yīng)。
反應(yīng)溫度優(yōu)選調(diào)整至50～120℃，更優(yōu)選60～100℃。
式VIII所示化合物可以市售得到或容易地由本領(lǐng)域技術(shù)人員制備。
化合物VIII中，Hal優(yōu)選為溴原子或氯原子，更優(yōu)選溴原子。
當(dāng)VIII表示溴衍生物時(shí)，該衍生物可以通過溴化劑在自由基條件下的自由基溴化作用而制備。
這些反應(yīng)條件特別包括在反應(yīng)介質(zhì)中加入自由基引發(fā)劑，該引發(fā)劑可以被熱活化或通過紫外照射被光化學(xué)活化。
所述引發(fā)劑的例子特別是偶氮化合物、過氧化物和過酸酯。偶氮化合物可以提及的有1，1′-偶氮二(異丁腈)或AIBN、1，1′-偶氮二(仲戊腈)和1，1′-偶氮二(環(huán)己烷腈)。
可用的過氧化物為過氧化苯甲酰、過氧化乙酰、月桂基過氧化物、枯基過氧化物和叔丁基過氧化物。
過酸酯的例子特別是過乙酸叔丁酯和過苯甲酸叔丁酯。
可用的自由基溴化劑為溴和N-溴代琥珀酰亞胺(NBS)。
當(dāng)溴化劑為NBS時(shí)，溶劑優(yōu)選為極性非質(zhì)子溶劑，更優(yōu)選四氯化碳。方法D
作為方案變體，式(I)所示的化合物可以通過式XV所示的鹵化物
式中，hal表示鹵素(優(yōu)選溴原子)且Het的含義與式(I)中相同；和式XI所示的硼衍生物
在合適的催化劑例如鈀(0)催化劑(如Pd(PPh3)4)和無機(jī)堿(如堿金屬碳酸鹽)存在的條件下反應(yīng)制備，操作條件優(yōu)選應(yīng)用方法B中所述的化合物IX與式XI所示的硼衍生物進(jìn)行反應(yīng)的條件。
式XV的化合物可以簡(jiǎn)單地通過式II的胺
式中，Het的含義同上；和式XVI的酸或其活化衍生物偶聯(lián)制備得到，
式中，hal表示鹵素。
本領(lǐng)域技術(shù)人員可以參照上述用于式II的胺與式III的酸偶聯(lián)(方法A)的操作條件實(shí)施此步驟。
式XVI的酸的活化衍生物是用更具反應(yīng)性的基團(tuán)如-CO-T(T的含義同方法A中所述)代替羧酸官能團(tuán)-COOH的化合物。
本發(fā)明還涉及式II和式VI的中間體化合物
式中，Het的含義同式(I)中所述。
可以用酸將式(I)的堿轉(zhuǎn)變?yōu)橛嘘P(guān)的酸加成鹽，例如使所述堿和酸以等當(dāng)量在惰性溶劑(如乙醇)中反應(yīng)，然后蒸發(fā)。對(duì)于本反應(yīng)適合的酸特別為能產(chǎn)生生理可接受鹽的酸。因此，可以應(yīng)用無機(jī)酸，例如硫酸、硝酸、氫鹵酸(如鹽酸或氫溴酸)、磷酸(如正磷酸)、氨基磺酸；另外還可以用有機(jī)酸，特別是脂肪族、脂環(huán)族、芳脂族、芳香族或雜環(huán)的一元或多元羧酸、磺酸或硫酸，例如甲酸、乙酸、丙酸、新戊酸、二乙基乙酸、丙二酸、琥珀酸、庚二酸、富馬酸、馬來酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、檸檬酸、葡糖酸、抗壞血酸、煙酸、異煙酸、甲磺酸、乙磺酸、乙二磺酸、2-羥基乙磺酸、苯磺酸、對(duì)甲苯磺酸、萘一磺酸、萘二磺酸和月桂基磺酸?？梢詰?yīng)用與生理上不可接受的酸(如苦味酸)形成的鹽來分離和/或純化該式化合物。
另一方面，可以用堿(例如鈉或鉀的氫化物或碳酸鹽)將該化合物轉(zhuǎn)變?yōu)橄鄳?yīng)的金屬鹽，特別是堿金屬鹽或堿土金屬鹽，或者轉(zhuǎn)變?yōu)閷?duì)應(yīng)的銨鹽。
也可應(yīng)用生理上可接受的有機(jī)堿例如乙醇胺。
另一方面，本發(fā)明涉及含有一種或多種本發(fā)明式(I)所示化合物和一種或多種賦形劑的藥物組合物。
所述組合物可以以速釋或緩釋片、凝膠膠囊或顆粒的形式口服，以注射溶液的形式靜脈給藥，以粘膠型經(jīng)皮系統(tǒng)的形式經(jīng)皮給藥，或者，以溶液、霜?jiǎng)┗蚰z的形式局部給藥。
口服固體組合物可按如下制備往活性成分中加入填充劑，適當(dāng)時(shí)還加入粘合劑、崩解劑、潤(rùn)滑劑、著色劑或增味劑，然后將該混合物制成片劑、包衣片、顆粒、粉末或膠囊。
填充劑的例子包括乳糖、玉米淀粉、蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、結(jié)晶纖維素和二氧化硅，粘合劑的例子包括聚(乙烯醇)、聚(乙烯醚)、乙基纖維素、甲基纖維素、阿拉伯膠、黃芪膠、明膠、紫膠、羥丙基纖維素、羥丙甲基纖維素、枸櫞酸鈣、糊精和果膠。潤(rùn)滑劑的例子包括硬脂酸鎂、滑石粉、聚乙二醇、硅石和硬化植物油。著色劑可以是醫(yī)藥產(chǎn)品中允許的任何著色劑。增味劑的例子包括可可粉、薄荷草、芳香粉、薄荷油、冰片和桂皮粉。當(dāng)然，片劑和膠囊可以適當(dāng)?shù)赜锰腔蛎髂z等物質(zhì)包衣。
含有本發(fā)明化合物作為活性成分的注射劑適當(dāng)時(shí)可按如下制備將所述化合物與pH調(diào)節(jié)劑、緩沖劑、懸浮劑、增溶劑、穩(wěn)定劑、張力劑(tonicityagent)和/或防腐劑混合，然后用常規(guī)方法將此混合物制成可用于靜脈內(nèi)、皮下或肌內(nèi)注射的形式。適當(dāng)時(shí)，獲得的此注射劑可以通過常規(guī)方法冷凍干燥。
懸浮劑的例子包括甲基纖維素、聚山梨醇酯80、羥乙基纖維素、阿拉伯膠、粉末黃芪膠、羧甲基纖維素鈉和聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯。
增溶劑的例子包括用聚氧乙烯固化的蓖麻油、吐溫80、煙酰胺、聚氧乙烯脫水山梨糖醇單月桂酸酯和蓖麻油脂肪酸乙酯。
另外，穩(wěn)定劑包括亞硫酸鈉、焦亞硫酸鈉和醚，防腐劑包括對(duì)羥基苯甲酸甲酯、對(duì)羥基苯甲酸乙酯、山梨酸、苯酚、甲酚和氯甲酚。
本發(fā)明的式(I)化合物和藥物組合物可用作微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)抑制劑。因此，其可用于治療與糖尿病相關(guān)的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高脂血癥、胰腺炎、高血糖癥、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化和異常脂血癥。
因此，本發(fā)明另一方面涉及本發(fā)明化合物或藥物組合物在制備抑制微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的醫(yī)藥產(chǎn)品中的應(yīng)用。
本發(fā)明的化合物也可以抑制脫輔基蛋白B(apo B)的分泌。
本發(fā)明的化合物也顯示出抑制極低密度脂蛋白(VLDLs)分泌的活性。通過證明其對(duì)VLDLs分泌的抑制作用，可以闡明本發(fā)明化合物的體內(nèi)活性。
可以通過下述過程簡(jiǎn)單地在Wistar大鼠中證明其體內(nèi)活性。禁食2小時(shí)后，靜脈注射Triton(四丁酚醛)400mg/kg阻斷VLDLs分解，測(cè)量肝臟VLDL的分泌。測(cè)定5小時(shí)內(nèi)血液循環(huán)中甘油三酯的累積量和膽固醇的累積量，以此評(píng)價(jià)VLDLs的分泌。本發(fā)明的化合物可以減少肝臟的VLDL分泌。
為證明對(duì)MTP的抑制作用和對(duì)脫輔基蛋白B分泌的抑制作用，實(shí)施例中進(jìn)一步提出了兩個(gè)方案。
以下實(shí)施例更詳細(xì)地舉例說明了本發(fā)明。
核磁共振譜為室溫下，300MHz處測(cè)定的氫譜?；瘜W(xué)位移以ppm表示，各種情況下均參照氘代溶劑的信號(hào)(氯仿7.25ppm，或，二甲亞砜2.5ppm)。
信號(hào)用下列縮寫表示s＝單峰，d＝雙峰，t＝三重峰，dd＝雙峰的雙峰，dt＝三重峰的雙峰，td＝雙峰的三重峰，m＝多峰，broad＝寬(峰)。
以20V的錐型張力(cone tension)，用正電子噴霧模式，通過Waters/Micromass的LC/MS Platform-LC儀測(cè)定質(zhì)譜。
M.p.表示熔點(diǎn)；
MS表示質(zhì)譜數(shù)據(jù)；
NMR表示核磁共振數(shù)據(jù)。
制備1
1-芐基-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶
將7.86g(38.2mmol)4-三氟甲氧基苯基硼酸在15ml二甲氧基乙烷和40ml二噁烷的混合物中的溶液加入到具有下列組成的混合物中13.0g(34.9mmol)N-(1-芐基-4-哌啶基)-2-溴代苯甲酰胺、15ml二甲氧基乙烷、120ml二噁烷、5ml無水乙醇、30ml的2M碳酸氫鈉水溶液和1.04gPd(PPh3)4。在85℃和氮?dú)夥障录訜崴没旌衔?.5小時(shí)，室溫靜置(15小時(shí))后再加熱5小時(shí)。冷卻并加入100ml乙酸乙酯，然后加入50ml飽和NaHCO3溶液，再加入100ml水和100ml乙酸乙酯。放置分離各相后，用100ml乙酸乙酯再次萃取水相。合并有機(jī)相，用100ml飽和NaCl溶液洗滌。第一次獲得的水相再用100ml二氯甲烷萃取。合并所得的有機(jī)相，用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮得淺米色固體物，將其分散于二異丙基醚中，得黃白色固體物13.8g(87％)。
NMR
(DMSO-d6)δ(ppm)1.23(2H，m)；1.51(2H，m)；1.91(2H，m)；2.62(2H，
m)；3.38(2H，s)；3.56(1H，m)；7.10-7.65(13H，m)；7.98(1H，m).
制備2
4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶
在氮?dú)夥障?，?.2g(13.4mmol)制備1所得的化合物在30ml甲醇、30ml無水乙醇、16ml環(huán)己烯和2.1g 20％的Pd(OH)2中的混合物加熱回流。由于4小時(shí)后的反應(yīng)不完全，另外再加入16ml環(huán)己烯和2.1g 20％的Pd(OH)2，再將混合物加熱6小時(shí)。用硅藻土過濾及濃縮后，得固體物。在異丙醚中溶解，得灰白色固體標(biāo)題化合物3.6g(72％)。
NMR
(DMSO-d6)δ(ppm)1.08(2H，m)；1.48(2H，m)；2.41(2H，m)；2.82(2H，m)；3.30(1H，broad s，與三氟乙酸交換)；3.60(1H，m)；7.33-7.60(8H，m)；8.01(1H，m).
實(shí)施例1
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-1)的制備
步驟a
2，2，2-三氟-N-[1-(3-吡啶基甲基)-4-哌啶基]乙酰胺
在氮?dú)饬飨?，?1.4g(0.144mol)三乙酰氧基硼氫化鈉加入到19.6g(0.1mol)2，2，2-三氟-N-[4-哌啶基]乙酰胺和10.9g(0.1mol)3-甲?；拎さ?70ml二氯甲烷溶液中，所得混合物在室溫下攪拌3天。然后用飽和NaHCO3溶液處理所得混合物，放置以分離各相。有機(jī)相用飽和NaHCO3溶液洗滌兩次，然后用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得固體物，將其分散于二異丙基醚中，得白色固體標(biāo)題化合物19.1g(67％)。
M.p.＝128℃
NMR
(CDCl3)δ(ppm)1.55(2H，m)；1.96(2H，m)；2.15(2H，m)；2.82(2H，
m)；3.50(2H，s)；3.85(1H，m)；6.39(1H，broad s)；7.24(1H，m)；7.62(1H，m)；
8.38-8.63(2H，m).
步驟b
1-(3-吡啶基甲基)-4-氨基哌啶
將20.8g(0.53mol)硼氫化鈉加入到19g(0.066mol)2，2，2-三氟-N-[1-(3-吡啶基甲基)-4-哌啶基]乙酰胺在640ml二噁烷和64ml無水乙醇中的溶液中，所得混合物在氮?dú)夥障禄亓?0.5小時(shí)。濃縮后殘余物溶于水中，所得混合物用二氯甲烷萃取。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥，濃縮，得油狀物11.2g(88％)。以后的步驟中使用該油狀物不需再純化。
NMR
(CDCl3)δ(ppm)1.29(2H，m)；1.70(2H，m)；1.96(2H，m)；2.00-2.45
(2H，broad s)；2.58(1H，m)；2.71(2H，m)；3.40(2H，s)；7.19(1H，m)；7.57(1H
m)；8.30-8.60(2H，m).
步驟c
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶
將2.7g(0.01mol)2-羧基-4′-三氟甲基聯(lián)苯酸在30ml二氯甲烷中的溶液加入到2g(0.00108mol)步驟b所得化合物、1.23g(0.01mol)4-DMAP和1.99g(0.00102mol)(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽在50ml二氯甲烷中的溶液中。所得混合物在氮?dú)夥障率覝財(cái)嚢?20小時(shí)。用二氯甲烷稀釋，用水、飽和碳酸氫鹽溶液和水洗滌后，用硫酸鈉干燥有機(jī)相，濃縮得油狀物，用硅膠層析(用EtOAc∶CH2Cl2∶MeOH＝4.5∶4.5∶1的混合物洗脫)純化，得白色固體物2.85g(65％)。
實(shí)施例2
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-8)的制備
在氮?dú)饬飨?，?.78g(0.0036mol)三乙酰氧基硼氫化鈉加入到0.87g(0.0025mol)4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶和0.405g(0.0025mol)2-甲?；?5ml 1，2-二氯甲烷中的溶液中，所得混合物在室溫下攪拌18小時(shí)，用二氯甲烷稀釋所獲混合物，然后加入40ml飽和NaHCO3溶液。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥，蒸干，殘留物溶于異丙醚中，分離沉淀物，得標(biāo)題化合物(白色固體)1g(產(chǎn)率83％)。
M.p.＝210℃
實(shí)施例3
1-(6-氟-2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物A-11)的制備
把0.5g(0.00143mol)4-[(4′-三氟-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶、0.39g(0.00286mol)K2CO3和0.1g碘化鉀在25ml DMF中的混合物在80℃下加熱30分鐘。
冷卻至室溫后，加入0.00214mol 2-溴甲基-6-氟喹啉，所得混合物在80℃加熱8小時(shí)。濃縮后，用水洗滌，然后用二氯甲烷萃取，將有機(jī)相用硫酸鈉干燥。過濾、濃縮后，得粗品標(biāo)題化合物，將其溶于二異丙醚中以純化，得0.16g標(biāo)題化合物。
按照上述實(shí)施例所述的方法之任一個(gè)，由適當(dāng)?shù)脑噭┢鹗?，制得?和表2的化合物。表1
表2
實(shí)施例4
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-8)的制備
在氮?dú)饬飨拢瑢?.31g(1.4mmol)三乙酰氧基硼氫化鈉加入到0.36g(1.0mmol)4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(制備2所得的化合物)和0.16g(1.0mmol)2-喹啉甲醛在10ml 1，2-二氯甲烷中的溶液中，所得混合物在室溫下攪拌6天。用二氯甲烷稀釋所得混合物，然后用飽和NaHCO3溶液洗滌。將有機(jī)相用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得固體物，用硅膠層析(用EtOAc∶CH2Cl2∶MeOH＝9.5∶9.5∶1的混合物洗脫)純化。將主成分分散于二異丙醚中，得白色固體標(biāo)題化合物0.2g(40％)。
實(shí)施例5
1-[(6-甲氧基-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-4)的制備
將0.41g(1.1mmol)制備2所得的化合物、0.24g(1.7mmol)K2CO3和0.1g KI在20ml DMF中的混合物在室溫下攪拌1小時(shí)，然后加入0.29g(1.1mol)2-溴甲基-6-甲氧基喹啉。所得混合物在80℃加熱7小時(shí)，放置一個(gè)周末。濃縮后用水洗滌，再用乙醚萃取，將有機(jī)相用硫酸鈉干燥。過濾、濃縮，得0.5g粗品，用硅膠層析(用CH2Cl2∶MeOH＝98∶2的混合物洗脫)純化。將主成分分散于二異丙醚中，得白色固體標(biāo)題化合物0.31g(53％)。
實(shí)施例6
1-[3-吡啶基甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-1)的制備
在氮?dú)夥障?，將?.30g(0.79mmol)1-[3-吡啶基甲基]-4-[(2-溴苯基)羰基氨基]-哌啶、0.75ml二甲氧基乙烷、3.7ml二噁烷、0.12ml乙醇、0.75ml2M碳酸氫鈉水溶液、0.026g Pd(PPh3)4和0.18g(0.87mmol)4-三氟甲氧基苯基硼酸組成的混合物在80℃下加熱13.5小時(shí)。冷卻并加入乙酸乙酯，再加入飽和NaCl溶液，所得混合物放置過夜。過濾，靜置分離各相。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾，濃縮得到油狀物，用硅膠層析(用EtOAc∶CH2Cl2∶MeOH＝4.5∶4.5∶1的混合物洗脫)純化，得固體標(biāo)題化合物0.15g(41％)。
實(shí)施例7
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-2)的制備
步驟a
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[三氟甲基羰基氨基]-哌啶的制備
將12.1g(61mmol)4-三氟乙酰氨基哌啶、17g(122mmol)K2CO3和1.2gKI在300ml DMF中的混合物在80℃下加熱0.5小時(shí)。冷卻至室溫，加入18.1g(75mmol)2-溴甲基-6-氟喹啉在75ml二甲基甲酰胺中的溶液。所得混合物在80℃下加熱2小時(shí)，室溫?cái)嚢柽^夜，再加熱6小時(shí)，室溫?cái)嚢枰粋€(gè)周末。將反應(yīng)混合物倒入500ml冰冷水和500ml二氯甲烷中。靜置分離各相后，用二氯甲烷萃取，有機(jī)相用水洗滌，再用硫酸鈉干燥。過濾、濃縮后，得粗品，用硅膠過濾(用CHCl3∶MeOH＝10∶1的混合物洗脫)純化，從主成分得米色固體標(biāo)題化合物15.3g(71％)。
NMR
(CDCl3)δ(ppm)1.49-1.72(2H，m)；1.97(2H，m)；2.31(2H，m)；2.88
(2H，m)；3.81(2H，s)；3.88(1H，m)；6.12(1H，m，可交換)；7.31-7.53
(2H，m)；7.58(1H，d，J＝8.44Hz)；7.96-8.15(2H，m).
步驟b
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-氨基哌啶的制備
將100ml 1N NaOH滴加到24.8g(69mmol)步驟a所得化合物在140ml單甘醇二甲醚中的溶液中，滴加時(shí)間為0.5小時(shí)。稍微放熱后，將所得混合物室溫?cái)嚢?h，濃縮并溶于100ml水和100ml乙醚中，水相用3×100ml乙醚萃取。醚有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾、濃縮，得深棕色液體L1。水相用3×100ml二氯甲烷重新萃取。合并有機(jī)相用硫酸鈉干燥，過濾、濃縮，得深棕色液體L2。此堿性液體用100ml 30％的NaOH溶液處理，用二氯甲烷萃取后，有機(jī)相用硫酸鹽干燥，過濾、濃縮，得深棕色液體L3。通過重新溶于CH2Cl2中將上述三部分液體L1、L2和L3合并，用硫酸鈉干燥，過濾、濃縮，得產(chǎn)品，然后用硅膠過濾(用CHCl3∶MeOH＝2∶1的混合溶物洗脫)純化，從主成分得橙紅色油狀標(biāo)題化合物15.5g(86％)。
NM R
(CDCl3)δ(ppm)1.30-1.60(4H，m)；1.79(2H，m)；2.17(2H，m)；2.68
(1H，m)；2.85(2H，m，可交換)；3.74(2H，s)；7.32-7.53(2H，m)；7.61
(1H，d，J＝9.71Hz)；7.97-8.14(2H，m).
步驟c
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-2)的制備
以步驟b所得的化合物和2-羧基聯(lián)苯開始，按實(shí)施例1步驟c中的相同方案制備得到標(biāo)題化合物。
實(shí)施例8
1-[(2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶(化合物B-6)的制備
在氮?dú)饬飨?，?.39g(1.7mmol)三乙酰氧基硼氫化鈉加入到0.36g(1.3mmol)4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶和0.22g(1.4mmol)2-甲?；?5ml 1，2-二氯乙烷中的溶液中，所得混合物在室溫下攪拌4天。用飽和NaHCO3溶液洗滌該混合物，然后用二氯甲烷萃取。有機(jī)相用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)，得固體物，用硅膠層析(用EtOAc∶CH2Cl2∶MeOH＝4.5∶4.5∶1的混合物洗脫)純化。將主成分分散于二異丙醚中，得標(biāo)題化合物0.2g(27％)。
實(shí)施例8a
下列化合物和1-[6-羧基-3-吡啶基甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)-羰基氨基]-哌啶的制備
實(shí)施例9
對(duì)MTP活性的抑制作用的分析
用下述方法研究對(duì)微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)活性的抑制作用。
可以通過觀察標(biāo)記的甘油三酯在MTP存在下從供體微粒到受體微粒的轉(zhuǎn)運(yùn)所受到的抑制作用來定量化合物對(duì)MTP活性的抑制作用。制備MTP的方法是基于Wetterau和Zilversmit(Biochem.Biophys.Acta，(1986)，875610)提出的方法。取金倉鼠肝臟數(shù)克，在0℃于250mM蔗糖溶液中清洗數(shù)遍。以下步驟均在+4℃進(jìn)行。用聚四氟乙烯搗碎機(jī)制備在250mM蔗糖中的50％組織勻漿物，然后在+4℃以10 000×g的速度離心10分鐘。上清液在+4℃以105 000×g的速度離心75分鐘。棄去上清液，微粒體沉淀物溶于3ml(每克起始肝臟)150mM Tris/HCl(pH8.0)。將1ml等分部分在-80℃下儲(chǔ)存至使用前。
將一份微粒體(1ml)解凍后，加入12ml冷藏的含有50mM Tris/HCl、50mM KCl、5mM MgCl2的pH7.4緩沖液以及1.2ml脫氧膽酸鹽(水中濃度為0.54％)。+4℃輕微振蕩溫育30分鐘后，懸浮液以105 000×g的速度離心75分鐘。含有可溶性MTP的上清液用含有150mM Tris/HCl、40mMNaCl、1mM EDTA、0.02％疊氮化鈉的pH7.4緩沖液透析(5次，一升，2～3天)。所得MTP在+4℃下保存，在至少30天內(nèi)穩(wěn)定，使用形式與本試驗(yàn)中一樣。
從208μl 10mg/ml在氯仿中的L-磷脂酰膽堿和480μl 0.5mCi/ml在甲苯中的[3H]三油精甘油酯制備供體微粒(脂質(zhì)體)。攪拌后，在氮?dú)庀抡舭l(fā)該溶液，然后溶于6ml含有50mM Tris/HCl、50mM KCl、5mM MgCl2的pH7.4緩沖液中，在室溫超聲浴中孵育30分鐘。所得脂質(zhì)體在+4℃保存，每次使用前再次超聲10分鐘。
受體微粒是生物素化的低密度脂蛋白(biot-LDL)。這些微粒由Amersham公司提供。
在未處理的半孔白色平板(Corning Costar)上，按下列順序添加物質(zhì)以制備反應(yīng)混合物5μl 50mM HEPES、150mM NaCl、0.1％(w/v)BSA、0.05％(w/v)疊氮化鈉、pH7.4的緩沖液；5μl脂質(zhì)體；5μl biot-LDL；5μl在DMSO中的試驗(yàn)產(chǎn)品；5μl MTP。37℃孵育18～24小時(shí)后，通過加入100μl偶聯(lián)鏈霉親和素的Amersham SPA(閃爍親近測(cè)定法)球，淬滅反應(yīng)，在至少1小時(shí)后應(yīng)用Top Count(Packard)計(jì)數(shù)放射活性。通過轉(zhuǎn)移的放射性的降低可反映化合物對(duì)甘油三酯轉(zhuǎn)移的抑制作用。相對(duì)于反應(yīng)混合物中不含化合物的對(duì)照組計(jì)算給定化合物的抑制百分比。
結(jié)果以IC50表示，即對(duì)MTP產(chǎn)生50％抑制作用的濃度。下表3總結(jié)了一些本發(fā)明代表性化合物的結(jié)果。
表3
實(shí)施例10
在Hep G2人細(xì)胞系中分析脫輔基蛋白B的分泌
通過在Hep G2細(xì)胞中測(cè)定本發(fā)明化合物對(duì)脫輔基蛋白B分泌的抑制，可以評(píng)價(jià)本發(fā)明化合物的活性
在肝臟的脂蛋白分泌的體外研究中應(yīng)用Hep G2細(xì)胞(ECACC-編號(hào)85011430)作為模型(Dixon J.和Ginsberg H.-J.Lipid.Res.-1993，34167-179)。
在5％二氧化碳?xì)夥障?6-孔板中，將Hep G2細(xì)胞置于含10％胎牛血清的Dulbecco改性的Eagle培養(yǎng)基(DMEM和FCS-Gibco)中培養(yǎng)24小時(shí)(約70％匯合)。
把測(cè)試化合物以2或10mM的濃度溶解于二甲亞砜(DMSO)中，在DMSO中制備系列稀釋液(1∶3.16)，將其加入(1∶200-Robot MultimekBeckman)到生長(zhǎng)培養(yǎng)基(200微升)中，最后在含有Hep G2細(xì)胞的各個(gè)孔中孵育24小時(shí)。
把上述24小時(shí)培養(yǎng)物的上清液按1∶5稀釋(磷酸緩沖鹽水含有1％胎牛血清的PBS)，按照對(duì)人脫輔基蛋白B具有特異性的夾心-ELISA方法測(cè)試。
結(jié)果以IC50表示，IC50表示在Hep G2細(xì)胞中對(duì)脫輔基蛋白B分泌產(chǎn)生50％的抑制時(shí)的濃度。
下列表4整理了一些本發(fā)明代表性化合物的結(jié)果。
表權(quán)利要求
1、式(I)化合物或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或立體異構(gòu)體
式中，
Z表示聯(lián)苯基，其任選在2′、3′、4′、5′和6′位被一個(gè)或多個(gè)選自三鹵甲基和三鹵甲氧基的取代基取代；
Het表示喹啉基、喹喔啉基或吡啶基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、(C1-C6)烷基、(C6-C12)芳基、(C1-C6)烷氧基、羥基、(C1-C6)硫代烷氧基、羧基和(C1-C6)烷氧基羰基的取代基取代。
2、權(quán)利要求1的化合物，其特征在于Z代表任選被取代的2-聯(lián)苯基。
3、上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其特征在于Z代表4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基；或4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基。
4、上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其特征在于Het代表3-吡啶基、2-吡啶基、2-喹啉基、2-喹喔啉基或4-喹啉基，其中吡啶核、喹啉核和喹喔啉核任選被取代。
5、權(quán)利要求4的化合物，其特征在于吡啶基任選被一個(gè)或多個(gè)選自甲基、鹵素和甲氧基的取代基取代。
6、上述任意一項(xiàng)權(quán)利要求的化合物，其特征在于其選自
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶延胡索酸鹽；
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶馬來酸鹽；
1-(3-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽；
1-(6-甲基-2-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(2-吡啶基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(2-甲基-3-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(4-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(6-甲氧基-2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-(6-氟-2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[3-吡啶基甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶延胡索酸鹽；
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶馬來酸鹽；
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽；
1-(2-喹啉基甲基)-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽；
1-[(4-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶鹽酸鹽；
1-[(6-氟-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(6-甲氧基-2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(4-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(2-喹喔啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(2-喹啉基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(6-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(2-喹啉基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(2-甲基-3-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
1-[(6-甲基-2-吡啶基)甲基]-4-[(4′-三氟甲氧基-2-聯(lián)苯基)羰基氨基]-哌啶；
或其可藥用鹽、水合物、溶劑化物或立體異構(gòu)體。
7、制備權(quán)利要求1中所定義的式(I)化合物的方法，
包括使式(II)所示的胺
其中Het如權(quán)利要求1中的定義，與式(III)所示的羧酸或與該羧酸的活化衍生物進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，
Z-CO-OH III其中，式中Z如權(quán)利要求1中的定義。
8、制備權(quán)利要求1中所定義的式(I)化合物的方法，
包括在還原劑存在下，讓式(IV)的醛
Het-COH(IV)與式(VII)的胺
反應(yīng)，其中式IV中的Het和式VII中的Z如式(I)中的定義。
9、權(quán)利要求8的方法，其特征在于還原劑為三乙酰氧基硼氫化堿金屬。
10、制備權(quán)利要求1中所定義的式(I)化合物的方法，
包括讓式(VIII)的鹵化物
Het-CH2-Hal(VIII)其中Het如式(I)中的定義，與式(VII)的胺反應(yīng)
其中Z如式(I)中的定義。
11、式II化合物
其中Het如權(quán)利要求1的式(I)中的定義。
12、式VI化合物
其中Het如權(quán)利要求1的式(I)中的定義。
13、藥物組合物，其含有至少一種權(quán)利要求1-6之任意一項(xiàng)所述的化合物，以及任選地一種或多種賦形劑。
14、權(quán)利要求13的組合物，其為微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白(MTP)的抑制劑。
15、權(quán)利要求13的組合物，其為脫輔基蛋白B的分泌的抑制劑。
16、權(quán)利要求13-15之任意一項(xiàng)的組合物，其旨在用于治療與糖尿病相關(guān)的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高脂血癥、胰腺炎、高血糖癥、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化和異常脂血癥。
17、權(quán)利要求1-6之任一項(xiàng)的化合物或者權(quán)利要求13-16之任一項(xiàng)的藥物組合物的應(yīng)用，用于制備抑制微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的醫(yī)藥產(chǎn)品。
18、權(quán)利要求1-6之任一項(xiàng)的化合物或者權(quán)利要求13-16之任一項(xiàng)的藥物組合物的應(yīng)用，用于制備抑制脫輔基蛋白B分泌的醫(yī)藥產(chǎn)品。
19、權(quán)利要求1-6之任一項(xiàng)的化合物或者權(quán)利要求13-16之任一項(xiàng)的藥物組合物的應(yīng)用，用于制備治療與糖尿病相關(guān)的高膽固醇血癥、高甘油三酯血癥、高脂血癥、胰腺炎、高血糖癥、肥胖癥、動(dòng)脈粥樣硬化和異常脂血癥的醫(yī)藥產(chǎn)品。
全文摘要
本發(fā)明涉及式(I)化合物或其可藥用鹽，其中Z表示聯(lián)苯基，其任選在2′、3′、4′、5′和6′位被一個(gè)或多個(gè)選自三鹵甲基和三鹵甲氧基的取代基取代；Het表示喹啉基、喹喔啉基或吡啶基，其任選被一個(gè)或多個(gè)選自鹵素、氰基、硝基、(C1－C6)烷基、(C6－C12)芳基、(C1－C6)烷氧基、羥基、(C1－C6)硫代烷氧基、羧基和(C1－C6)烷氧基羰基的取代基取代。這些化合物可以用作微粒體甘油三酯轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白的抑制劑和脫輔基蛋白質(zhì)B分泌的抑制劑。
文檔編號(hào)A61K31/4709GK1476445SQ0181928
公開日2004年2月18日 申請(qǐng)日期2001年10月25日 優(yōu)先權(quán)日2000年11月23日
發(fā)明者A－C·蓋韋爾, D·費(fèi)斯塔爾, F·克隆熱, D·蓋里耶, O·謝弗勒伊, ∪, A-C 蓋韋爾, ダ找, 鏌, 顧 申請(qǐng)人:默克專利有限公司