專利名稱：用于制備治療或預(yù)防非胰島素依賴型糖尿病或肥胖的藥物之化合物的用途的制作方法
相關(guān)申請本申請是1995年11月13日遞交的中國專利申請95196384.8的分案申請。
本發(fā)明提供了一種化合物在制備用于治療或預(yù)防非胰島素依賴型糖尿病或肥胖的藥物中的用途，其中該化合物具有結(jié)構(gòu)式IIIHN＝C(NH2)-HN-N＝CR3-COOH式中R3為H，甲基，乙基，芐基或正己基。
背景技術(shù)：
非胰島素依賴型糖尿病，或NIDDM，和II型糖尿病是同義詞。NIDDM病人在禁食時具有異常高的血糖濃度，而在進(jìn)餐或診斷性試驗(yàn)(例如葡萄糖耐量試驗(yàn))后，細(xì)胞對葡萄糖的攝取延遲。NIDDM的診斷基于公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)〔美國糖尿病協(xié)會，胰島素依賴型(I型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988；美國糖尿病協(xié)會，非胰島素依賴型(II型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988〕。
胰島素依賴型糖尿病，IDDM，和I型糖尿病是同義詞。IDDM病人在禁食時具有異常高的血糖濃度，而在進(jìn)餐或診斷性試驗(yàn)(例如葡萄糖耐量試驗(yàn))后，細(xì)胞對葡萄糖的攝取延遲。IDDM的診斷基于公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)〔美國糖尿病協(xié)會，胰島素依賴型(I型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988〕。
當(dāng)經(jīng)口服或胃腸外給予標(biāo)準(zhǔn)劑量的萄萄糖后，血液中的葡萄糖代謝清除率低于普通人群的一般水平時，出現(xiàn)受損的葡萄糖耐量〔美國糖尿病協(xié)會，非胰島素依賴型(II型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988〕。受損的葡萄糖耐量可發(fā)生于NIDDM、IDDM、妊娠糖尿病和肥胖。受損的萄萄糖耐量還可發(fā)生于不滿足這些疾病的診斷標(biāo)準(zhǔn)的個體。在非糖尿病個體中，受損的葡萄糖耐量是NIDDM發(fā)展的促成因素。
肥胖是一種因體內(nèi)脂肪含量增加而導(dǎo)致體重超出關(guān)于年齡、性別、身高和體格的公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)的情況〔Bray，肥胖，內(nèi)分泌展望，2303頁，多激素系統(tǒng)和疾病(1989)〕。公認(rèn)的標(biāo)準(zhǔn)由人壽保險死亡率的經(jīng)驗(yàn)和與身體組成有關(guān)的疾病發(fā)生率決定。發(fā)生于肥胖個體的高死亡率是由于該情況引起的疾病所造成。所述疾病包括癌癥、心血管疾病、消化疾病、呼吸疾病和糖尿病。
在患有慢性高血糖(例如非胰島素依賴型糖尿病和胰島素依賴型糖尿病)的患者中，葡萄糖依賴型蛋白質(zhì)交聯(lián)的速率高于標(biāo)準(zhǔn)值(Bunn，美國醫(yī)學(xué)期刊(American Journal of Medicine)，Vol.70，325頁，1981)，導(dǎo)致蛋白質(zhì)三級結(jié)構(gòu)的改變(Brownlee，第18章，糖尿病，279頁，1990)。蛋白質(zhì)的過度非酶催糖基化可導(dǎo)致糖尿病并發(fā)癥和沒有糖尿病的人的老年并發(fā)癥，例如神經(jīng)病、腎病、視網(wǎng)膜病、高血壓和動脈粥樣硬化(Brownlee，1990，同上)。
高血糖的定義是血糖濃度超過普通人群的公認(rèn)標(biāo)準(zhǔn)〔美國糖尿病協(xié)會，非胰島素依賴型(II型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988〕。
理解了這些情況之間的關(guān)系后，將有利于開發(fā)出一種治療或預(yù)防所有這些情況的藥物。
公開信息在JP 54128523(CA 9275899h)中報(bào)道了可用作殺真菌劑和殺蟲劑的3-(1-(氨甲基)肼基))丙酸。在Gante，化學(xué)研究期刊(J.Chem.Ber.)1968，101，1195中報(bào)道了N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸的合成。在發(fā)明名稱為“用2-亞烷基氨基胍衍生物抑制機(jī)體蛋白質(zhì)的過度糖基化，用于治療糖尿病的并發(fā)癥或尤其預(yù)防牙齒染色”的美國專利5272165中記載了一些烷基化的氨基胍衍生物。在DE 4244539-A1和WO 9104-023-A中公開了精氨酸的氨基胍類似物。美國專利5132453公開了N6-(肼基亞氨基甲基)-賴氨酸可以用作氧化氮形成的抑制劑并可用于治療高血壓。EP-230-037-A公開了一些具有抗局部缺血和心臟保護(hù)活性的新的2-取代-胍衍生物。美國專利3412105公開了用作MAO抑制劑和長效降壓藥的β-芳基-N-胍基-(β-丙氨酸或α-羧基-β-丙氨酸)。
發(fā)明概述本發(fā)明特別提供(1)結(jié)構(gòu)式I或II的化合物AG-(CH2)n-CO2R1I 或 或其可藥用鹽，其中AG是a)N-氨基胍，b)N，N′-二氨基胍，或c)N，N′，N″-三氨胍；其中n是從1-5的整數(shù)；其中R1是a)氫，b)苯基，c)C1-5烷基，或d)C1-3烷基-苯基；并且其中R2是a)氫，b)苯基，c)C1-10烷基，或d)C1-5烷基-苯基；條件是a)在結(jié)構(gòu)式I中，當(dāng)n是2時，R1不為氫；b)在結(jié)構(gòu)式I中，當(dāng)n是1時，R1不為甲基；c)在結(jié)構(gòu)式II中，當(dāng)R2是乙基時，R1不為氫；d)在結(jié)構(gòu)式II中，當(dāng)R2是苯基時，R1不為氫；和e)在結(jié)構(gòu)式I中，當(dāng)n是3時，R1不為氫。(2)對易患或患有非胰島素依賴型糖尿病的患者治療或預(yù)防所述NIDDM的方法，包括全身給予治療或預(yù)防NIDDM有效量的結(jié)構(gòu)式III的化合物 其中R3是氫、甲基、乙基、CH2苯基或正己基。
對于通式I和II，AG片段的連接是不確定的，即，與鄰近碳原子的結(jié)合可以發(fā)生在AG片段的任何一個氮上。AG片段上剩余的氮為未取代的。
含碳基團(tuán)的碳原子含量用前綴“Ci-Cj”表示，其中i是最低碳原子數(shù)而j是最高碳原子數(shù)。
含有1至10個碳原子的烷基的例子包括，例如甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、正戊基、異戊基、正己基、正庚基、正辛基、正壬基、正癸基，以及它們的其它異構(gòu)體形式。
可藥用的酸加成鹽的例子包括，乙酸鹽、己二酸鹽、藻酸鹽、天冬氨酸鹽、苯甲酸鹽、苯磺酸鹽、亞硫酸氫鹽、丁酸鹽、檸檬酸鹽、樟腦酸鹽、樟腦磺酸鹽、環(huán)戊烷丙酸鹽、二葡糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽、乙磺酸鹽、富馬酸鹽、葡庚糖酸鹽、甘油磷酸鹽、半硫酸鹽、庚酸鹽、己酸鹽、鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氫碘酸鹽、2-羥基乙磺酸鹽、乳酸鹽、馬來酸鹽、甲磺酸鹽、2-萘磺酸鹽、煙酸鹽、草酸鹽、棕櫚酸鹽、果膠酸鹽、過硫酸鹽、3-苯基丙酸鹽、苦味酸鹽、新戊酸鹽、丙酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、硫氰酸鹽、甲苯磺酸鹽和十一烷酸鹽。
結(jié)構(gòu)式I-III的化合物的使用劑量在0.1和100mg/kg體重/天之間。優(yōu)選的劑量為1-50mg/kg/天。可以通過口服、胃腸外、鼻內(nèi)、頰、舌下、直腸內(nèi)或經(jīng)皮的途徑給藥。優(yōu)選口服途徑。
本發(fā)明的新化合物由通式I和II給出。要求保護(hù)治療NIDDM用途的已知化合物由結(jié)構(gòu)式III表示。
由通式I和II所表示的本發(fā)明的化合物中，列于表1的化合物是特別優(yōu)選的，它們的優(yōu)選用途是治療NIDDM及其并發(fā)癥。
表2列出了一組沒有被要求保護(hù)的相關(guān)化合物。列出它們是為了證明要求保護(hù)的化合物的出人意料的效果，這些化合物與要求保護(hù)的化合物非常相近，但在試驗(yàn)的最高劑量下仍無活性。
表3列出了一組在通式I和II范圍內(nèi)的化合物，這些化合物在試驗(yàn)的最高劑量下仍無活性，從而構(gòu)成了例外，如權(quán)利要求1的條件所示。
表4列出了一組具體要求保護(hù)的本發(fā)明范圍內(nèi)的新化合物。它們的制備方法由第4節(jié)給出。
表5列出了一組要求保護(hù)治療NIDDM用途的已知化合物。
因此，本發(fā)明提供了具有意外抗糖尿病特性的新的以及已知化合物。
以約100-500mg/kg/天的劑量將本發(fā)明化合物給予KKAy小鼠，導(dǎo)致非胰島素依賴型糖尿病嚙齒動物模型中高血糖的部分或完全消除(特定化合物列于表4和表5中；參見Chang，Wyse，Copeland，Peterson，和Ledbetter，糖尿病(Diabetes)1985，第466頁，1986)。KKAy小鼠對胰島素是耐受的(Chang等，同上)，這些動物中非空腹血糖水平降低表明在用要求保護(hù)的化合物處理后胰島素的耐受性最可能降低。KKAy小鼠與正常異系交配小鼠相比肥大(Chang等，同上)并給予本發(fā)明化合物后可使體重減輕。
對患糖尿病的KKAy小鼠給予此系列優(yōu)選的化合物-N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸4天后可降低動物非空腹血糖水平(見表6)。60mg/kg/天的劑量可降低35％的血糖水平，與對照相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。更高的劑量使血糖濃度降低更多。給予500mg/kg/天的3-胍基丙酸可產(chǎn)生與60mg/kg/天N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸類似的血糖濃度降低。
給予患糖尿病的KKAy小鼠N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸4天可減輕動物體重(見表6)。100mg/kg/天的劑量可減輕4％的體重，與對照相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著差異。更高的劑量對超體重的KKAy小鼠體重減輕更多。給予500mg/kg/天的3-胍基丙酸可產(chǎn)生與100mg/kg/天N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸類似的體重減輕。
給予正常C57BL小鼠100mg/kg N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸可降低這些動物空腹血糖濃度(表7)。
給予患糖尿病的KKAy小鼠或正常C57BL小鼠100mg/kg N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸可改善葡萄糖耐受性，如注射標(biāo)準(zhǔn)試驗(yàn)劑量葡萄糖后較低的血糖水平所示(表7)。
蛋白質(zhì)的非酶催糖基化是蛋白質(zhì)的葡萄糖依賴性交聯(lián)的初始步驟(Brownlee，同上)。體外人血清白蛋白的非酶催糖基化可通過N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸、N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸和[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]-乙酸一鹽酸鹽降低(表8)。氨基胍(已表明可體外(Khatami，Suldan，David，Li和Rockey，生命科學(xué)(Life Sciences)，第43卷，1725-1731頁，1988)和體內(nèi)(Brownlee，同上)抑制蛋白質(zhì)非酶催糖基化)在該試驗(yàn)中也是有效的(表8)。3-胍基丙酸在該試驗(yàn)中對白蛋白非酶催糖基化沒有作用。
在糖尿病患者中，需要治療一些代謝疾病飯后及空腹?fàn)顟B(tài)時異常升高的血糖水平，葡萄糖從血流中的延遲清除(美國糖尿病協(xié)會，胰島素依賴型(I型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988；美國糖尿病協(xié)會，非胰島素依賴型(II型)糖尿病的醫(yī)生指南，1988)以及促使糖尿病并發(fā)癥發(fā)展的蛋白質(zhì)的過度糖基化(Brownlee，同上)。另外，肥胖越來越與非胰島素依賴型糖尿病相關(guān)并可加重這些患者中已紊亂的葡萄糖代謝(Horton和Jeanrenaud，Chapter 27，肥胖和糖尿病(Obesity and DiabetesMellitus)，1990)。對非胰島素依賴型糖尿病的最佳治療可糾正所有這些紊亂。蛋白質(zhì)的過度糖基化(例如發(fā)生在非胰島素依賴型糖尿病和胰島素依賴型糖尿病患者中)可通過阻斷葡萄糖和蛋白質(zhì)分子的化學(xué)反應(yīng)(Brownlee，同上)及降低糖尿病狀態(tài)中異常血糖濃度的升高(Holman和Turner，糖尿病藥物(Diabetic Medicine)，5582-588，1988；Benjamin和Sacks，臨床化學(xué)(Clin Chem.)，4015683-687，1994)而防止。最需要的治療是發(fā)揮這兩種方法以更徹底地降低非酶催蛋白質(zhì)糖基化的速率。
本發(fā)明化合物可正向影響多種代謝缺陷(包括糖尿病)并可通過不止一種機(jī)制防止代謝缺陷，這使它們的藥理作用明顯不同于先前所述的其它治療糖尿病的胍化合物。本發(fā)明化合物在治療NIDDM方面意外地比氨基胍、二氨基胍、3-胍基丙酸和甲福明優(yōu)越，因?yàn)樗鼈兲峁└鼮橥耆乃杌钚宰V且在低劑量下有效。
本發(fā)明化合物在治療糖尿病方面與二氨基胍和氨基胍相比意外地優(yōu)越，因?yàn)楸景l(fā)明化合物可代謝作用降低過量的血糖濃度并直接阻斷蛋白質(zhì)非酶催糖基化。本發(fā)明化合物在治療受損的葡萄糖耐量或肥胖方面與二氨基胍和氨基胍相比意外地優(yōu)越，因?yàn)榘被液投被以诖朔矫鏌o效。氨基胍和二氨基胍可抑制體外蛋白質(zhì)非酶催糖基化并且可抑制體內(nèi)高級糖基化終產(chǎn)物的形成(Kumari，Umar，Bansal，和Sahib，糖尿病(Diabetes)，401079-1084，1991)?；谄鋵Ψ敲复叩鞍踪|(zhì)糖基化的抑制，已建議用氨基胍治療糖尿病(Brownlee，同上)。氨基胍對正常嚙齒動物或通過注射四氧嘧啶或鏈脲霉素而得糖尿病的大鼠的血糖水平?jīng)]有作用(Kumari，Umar，Bansal，Sahib，同上；Yagihashi，Kamijo，Baba，Yagihashi和Nagai，糖尿病，4147-52，1992；Edelstein和Brownlee，Diabetologia，3596-97，1992；Oxlund和Andreassen，Diabeterologia，3519-25，1992)。二氨基胍對正常或四氧嘧啶致糖尿病大鼠的血糖水平?jīng)]有作用(Kumari，Umar，Bansal，Sahib，同上)。氨基胍對正常或糖尿病大鼠的體重沒有影響(Kumari，Umar，Bansal，Sahib，同上；Yagihashi，Kamijo，Baba，Yagihashi和Nagai，同上；Oxlund和Andreassen，Diabetologia，3519-25，1992)或者導(dǎo)致人及大鼠體重的增加(Baylin，Horakova，和Beaven，Experientia，31562，1975)。二氨基胍對正?；蛩难踵奏ぶ绿悄虿〈笫蟮捏w重沒有作用(Kumari，Umar，Bansal，Sahib，同上)。氨基胍或二氨基胍對葡萄糖耐量的作用尚未闡明。
本發(fā)明化合物在治療糖尿病方面比3-胍基丙酸意外優(yōu)越，因?yàn)楹笳卟荒苡行Э刂聘哐遣⑷狈σ种频鞍踪|(zhì)非酶催糖基化的能力。本發(fā)明化合物在治療受損的葡萄糖耐量或肥胖方面比3-胍基丙酸意外優(yōu)越，因?yàn)檫@些化合物更有效。已表明3-胍基丙酸可降低高血糖和額外體重并可改善糖尿病嚙齒動物的葡萄糖耐量(Meglasson，Wilson，Yu，Robinson，Wyse，和deSouza，藥理和試驗(yàn)治療學(xué)期刊(J.Pharm.And Exp.Therapeutics)，2661454-1462，1993)。本發(fā)明優(yōu)選的化合物-N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸在降低KKAy小鼠異常升高的血糖水平和體重方面比3-胍基丙酸更有效。降低KKAy小鼠20％血糖水平需要130mg/kg/天的后一化合物。達(dá)到類似的血糖水平降低需要30mg/kg/天的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸。給予KKAy小鼠60mg/kg/天的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸的效果與500mg/kg/天的3-胍基丙酸類似。當(dāng)在飼料中以1％混合物給予3-胍基丙酸(約以1000mg/kg/天的劑量釋放)可改善患糖尿病KKAy小鼠葡萄糖耐量(美國專利5132324)。比較而言，當(dāng)給予正常C57BL和患糖尿病KKAy小鼠100mg/kg/天的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸時即可改善葡萄糖耐量。對體重減輕而言，100mg/kg/天的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸的效果與500mg/kg/天的3-胍基丙酸類似。與本發(fā)明化合物相比，3-胍基丙酸不能抑制體外白蛋白非酶催糖基化。
本發(fā)明化合物在治療糖尿病、葡萄糖不耐性和肥胖方面比甲福明意外優(yōu)越，因?yàn)楹笳咴谙嗤瑒游锬Ｐ椭袡z測時不如本發(fā)明化合物有效。此外，在其減輕體重及防止非酶催蛋白質(zhì)糖基化方面的有效性而言，所公開的甲福明的數(shù)據(jù)是矛盾的，不能揭示一致的結(jié)果。先前已表明，以1000-3000mg/kg/天給予甲福明可降低非胰島素依賴型糖尿病患者的高血糖并且當(dāng)以1500-2500mg/kg/天給予時可增加這些患者中葡萄糖清除率(Bailey，糖尿病護(hù)理(Diabetes Care)，15755-772，1992)。嚙齒動物對甲福明不如人敏感，因此需要較高劑量(以體重為基礎(chǔ))才能達(dá)到降低血糖的效果(Bailey，F(xiàn)latt，Wilcock，和Day，糖尿病研究的新領(lǐng)域(Frontiersin Diabetes Research)，pp.277-282，1990；Penicaud，Hitier，F(xiàn)erre，和Girard，生物化學(xué)期刊(Biochem.J.)262881-885，1989)。當(dāng)使新生的鏈脲霉素致糖尿病大鼠以100mg/kg/天(Rossetti，DeFronzo，Gherzi，Stein等，代謝(Metabolism)，39425-435，1990)、使DBM小鼠以400mg/kg/天(Bailey，F(xiàn)latt，Wilcock，和Day，同上)、使Zuckerfa/fa小鼠以350mg/kg/天(Penicaud，Hitier，F(xiàn)erre，和Girard，同上)以及使KKAy小鼠以300mg/kg/天或更多(Meglasson，Wilson，Yu，Robinson，de Souza，同上)長期口服甲福明時可降低高血糖。正常鼠以250mg/kg/天的劑量、鏈脲霉素致糖尿病大鼠以250mg/kg/天劑量(Bailey，F(xiàn)latt，Wilcock，和Day，同上)或者患糖尿病的ob/ob小鼠以250mg/kg/天劑量(Bailey，F(xiàn)latt，和Ewan，國際藥代學(xué)期刊(Arch.Int.Pharmacodyn.)，282233-239，1986)長期口服甲福明對血糖濃度沒有影響。短期給予264mg/kg甲福明或其類似物132mg/kg丁福明對大鼠血糖水平?jīng)]有影響(Tutwiler和Bridi，糖尿病，27868-876，1978)。當(dāng)在KKAy小鼠中檢測本發(fā)明優(yōu)選的化合物-N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸時，其在降低該模型異常升高的血糖水平方面比甲福明更有效。降低KKAy小鼠25％血糖水平需要300mg/kg/天的甲福明(Meglasson，Wilson，Yu，Robinson，Wyse，和de Souza，同上)。用30-60mg/kg/天劑量的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸可獲得類似降低的血糖濃度。至于增加葡萄糖耐量，已報(bào)道當(dāng)使正常大鼠以750mg/kg的劑量(Tutwiler和Bridi，同上)或者使正常小鼠以50mg/kg的劑量(Bailey，F(xiàn)latt，Wilcock和Day，同上)給予甲福明時不影響葡萄糖耐量。當(dāng)以250mg/kg的劑量給予正常小鼠或鏈脲霉素致糖尿病大鼠時，口服葡萄糖耐量增加(Bailey，F(xiàn)latt，Wilcock和Day，同上)。比較而言，當(dāng)以低劑量(100mg/kg)給予正常C57BL或患糖尿病KKAy小鼠時，N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸可增加葡萄糖耐量。至于減輕體重，已報(bào)道用甲福明治療1年時可減輕非胰島素依賴型糖尿病患者的體重(Bailey，同上)，或者在治療類似長的時間中對肥胖的非胰島素依賴型糖尿病患者的體重沒有明顯影響(多中心研究(Multi-centre Study)，Diabetologia，24404-411，1983)。當(dāng)以240mg/kg/天的劑量給予患糖尿病的ob/ob小鼠或者以60mg/kg/天的劑量給予鏈脲霉素致糖尿病小鼠時甲福明不能減輕體重(Lord，Atkins，和Bailey，Diabetologia25108-113，1983)。當(dāng)用1700mg/kg/天的甲福明治療KKAy小鼠時會引起統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的體重減輕，但是較低劑量時沒有(Meglasson，Wilson，Yu，Robinson，Wyse，和de Souza，同上)。比較而言，當(dāng)以100mg/kg的劑量給予KKAy小鼠時，N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸對肥胖小鼠體重的減輕與1700mg/kg/天的甲福明效果類似(Meglasson，Wilson，Yu，Robinson，Wyse，和de Souza，同上)。已報(bào)道甲福明在0.5和5微摩爾/升的濃度可抑制紅細(xì)胞漿膜的非酶催糖基化，這基于其防止體外與葡萄糖培養(yǎng)的漿膜的電子順磁共振光譜序參數(shù)降低的能力(Freisleben，Ruckert，Wiernsperger，和Zimmer，生化藥理學(xué)(Biochemical Pharmacology)，431185-1194，1992)。在較高的濃度，如50和100微摩爾/升甲福明具有不良作用并可導(dǎo)致極低的序參數(shù)。因此，甲福明是否可用來降低或加重糖尿病患者中蛋白質(zhì)非酶催糖基化取決于甲福明在受治療患者血清中的濃度。在口服1克甲福明的糖尿病患者中，平均Cmax血漿濃度為3.24微克/毫升(或25微摩爾/升)(Tucker，Casey，Phillips，Connor等，英國臨床藥理學(xué)期刊(Br.J.Clin.Pharmacol.)，2235-246，1981)，因此，其處于可降低紅細(xì)胞非酶催糖基化的最高濃度和促進(jìn)此過程的最低濃度之間?；诠_的糖尿病患者中甲福明的血漿濃度，得不到當(dāng)作為治療劑給予患者時甲福明是否可抑制蛋白質(zhì)非酶催糖基化或者以某種方式加重此過程的結(jié)論。
制備本發(fā)明化合物的一般方法列于方案1-4中。這些技術(shù)的特殊實(shí)施例可以在“優(yōu)選實(shí)施方案的說明”中所給的實(shí)驗(yàn)方法中找到。使用其它起始物和反應(yīng)物可制備不同的本發(fā)明化合物。以下參考文獻(xiàn)討論了本發(fā)明化合物的一般合成方法。
方案1Gante，化學(xué)研究期刊(J.Chem.Ber.)1968，101，1195。Armarego，W.L.F.；Kobayashi T.化學(xué)會志(C)1971，238。Evans，D.A.；Britton，T.C.；Dorow，R.L.；Dellaria，J.F. 美國化學(xué)會志1986，108，6395。Evans，D.A.；Britton，T.C.；Dorow，R.L.；Dellaria，J.F.四面體1988，44，5525。
方案3Gut，J.；Hesoun，D.；Novacek，A.捷克化學(xué)公報(bào)(Coll.Czech.Chem.Comm.)1966，31，2014。Miura，K.；Ikeda，M.；Kondo，T.；Setogawa，K.C.A.1962，564767b。Pankaskie，M.；Abdel-Monem，M.M.藥物科學(xué)期刊(J.Pharm Sci.)1980，69，1000。
方案4Lee，K.；Kim，S.；Um，H.；Park，H.；合成1989，638。Reddy，T.I.；Bhawal，B.M.；Rajappa，S.四面體1993，49，2101。體內(nèi)和體外篩選方法。
優(yōu)選實(shí)施方案的說明以下實(shí)驗(yàn)方法是說明本發(fā)明的大量化合物的制備的具體例子實(shí)施例1[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]-乙酸將肼基乙酸乙酯鹽酸鹽(7.73g，50mmol)在100mL 1N NaOH中回流2小時進(jìn)行皂化。然后向該熱溶液中加入2-甲基-2-硫代異脲硫酸鹽(6.95g，50mmol)并將溶液繼續(xù)回流2小時。將該混合物濃縮至約1/2體積，此時析出白色固體沉淀。將溶液冷卻并過濾得到3.34g白色固體。用水重結(jié)晶得到2.41g(36％)白色固體結(jié)晶狀[2-(氨基亞氨基甲基)肼基基]-乙酸。MP247-248℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.40(s，2H)。實(shí)施例2[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]-乙酸一鹽酸鹽向攪拌下的[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-乙酸一鹽酸鹽一水合物(10g，60mmol)的甲醇(300mL)溶液中加入10％Pd-C(0.25g)并將混合物在30psi下氫化過夜。將混合物過濾并將溶劑蒸發(fā)至干。殘余物用EtOH重結(jié)晶得到4.2g(42％)白色固體狀標(biāo)題化合物(m.p.163-165℃)。1H NMR(D2O)δ3.68(s，2H)。實(shí)施例3[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]乙酸苯甲酯一鹽酸鹽向[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]乙酸(2.00g，15.2mmol)的芐醇(30mL)懸浮液中通入HCl(g)氣泡。將反應(yīng)液攪拌約一小時至所有物質(zhì)均溶解。加入Et2O使產(chǎn)物粗品沉淀。將該物質(zhì)用MeOH/EtOAc重結(jié)晶得到白色結(jié)晶固體狀[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]乙酸苯甲酯一鹽酸鹽(3.20g，82％)。MP162-164℃1H NMR(CD3OD)δ3.69(s，2H)，5.24(s，2H)，7.34-7.42(m，5H)。實(shí)施例4α-肼基苯丙酸將LDA(50mL 1.5M的THF溶液)在250mL干燥THF中的溶液冷卻至-78℃。向其中滴加氫化肉桂酸乙酯(12.0mL，68.2mmol)在250mL干燥THF中的溶液。將該溶液在-78℃攪拌30分鐘。然后滴加偶氮二甲酸二叔丁酯(18.84g，81.8mmol)在100mL干燥THF中的溶液。10分鐘后，加入14mL HOAc終止反應(yīng)并將溫度升至室溫。將混合物在Et2O和水之間進(jìn)行分配。水層用Et2O(3×100mL)萃取。將合并的有機(jī)層用飽和NaHCO3水溶液(2×100mL)和鹽水(1×100mL)洗滌，硫酸鈉干燥并濃縮。產(chǎn)物粗品用硅膠進(jìn)行色譜分離(90/10己烷/EtOAc)得到15.33g(55％)二-BOC保護(hù)的肼基酯。
將該酯溶于200mL CH2Cl2。向其中加入120mL三氟乙酸。將混合物在室溫下攪拌2小時。蒸除溶劑后，將產(chǎn)物粗品溶于75mL 1N NaOH并回流2小時。將溶液冷卻，用Et2O萃取、中和、濃縮至體積的一半、冷卻并過濾。得到的棕色固體在沸騰的i-PrOH中攪拌5分鐘以除去有色雜質(zhì)。過濾并干燥得到3.35g(27％)白色固體狀α-肼基苯丙酸。MP198-201℃(分解)。1H NMR(D2O)δ7.41-7.29(m，5H)，3.89(dd J＝7 6Hz1H)，3.23-3.08(m，2H)。實(shí)施例5α-[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]苯丙酸一水合物將α-肼基苯丙酸(3.00g，16.7mmol)和2-甲基-2-硫代異脲硫酸鹽(2.55g，18.3mmol)在17mL 1N NaOH中的溶液加熱回流2小時。將該混合物用3N HCl中和并濃縮至有沉淀生成(約1/2體積)。濾出產(chǎn)物粗品并用水重結(jié)晶得到1.81g(41％)α-[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]苯丙酸一水合物。MP127-130℃(分解)。1H NMR(D2O)δ7.40-7.27(m，5H)，3.60(dd，J＝8，6Hz，1H)，3.04(dd，J＝14，6Hz，1H)，2.86(dd，J＝14，8Hz，1H)。2-[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]丙酸將10.0g(55.4mmol)2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]丙酸鹽酸鹽(藥物科學(xué)期刊(J.Pharmaceut.Sci.)1980，69，1000-1004)、1.5g 10％碳載鈀和300mL蒸餾水的混合物在50psi氫氣壓力下于25℃振搖16小時。將混合物過濾。向?yàn)V液中加入75g Dowex IR118H氫型強(qiáng)酸性陽離子交換樹脂。將混合物攪拌1小時，然后將混合物過濾。樹脂用3份150mL的蒸餾水洗滌。棄除合并的濾液和洗滌液并將樹脂用5份200mL 20％(v/v)的吡啶蒸餾水溶液洗滌。合并洗滌液并減壓(25℃，1torr)蒸除溶劑。將得到的白色粉末溶于30mL回流的蒸餾水中并將得到的溶液用90mL熱的無水乙醇稀釋。將混合物冷卻至25℃，24小時后過濾收集形成的沉淀。將固體干燥(20torr/50℃/24小時)后得到3.8g白色固體狀標(biāo)題化合物，mp239-241℃。實(shí)施例6[1-(氨基亞氨基甲基)肼基]乙酸一氫溴酸鹽向攪拌下的氨基胍碳酸氫鹽(100g，734mmol)的水(200mL)懸浮液中加入溴代乙酸(100g，720mmol)。開始起泡后將該均相溶液回流過夜，冷卻至室溫，蒸除溶劑至干。將殘余物懸浮于EtOH(200mL)中并聲處理。濾出固體得到13.6g(9％)白色固體狀標(biāo)題化合物(mp163-165℃)。1H NMR(D2O)δ4.25(s，2H)。實(shí)施例73-[[亞氨基[(1-甲基亞乙基)肼基]甲基]氨基]丙酸將β-丙氨酸(6.00g，67.5mmol)溶于67.5mL 1N NaOH中。向其中加入N-氨基-S-甲基異硫脲氫碘酸鹽(15.69g，67.5mmol)。將該混合物加熱回流1.5小時。蒸除溶劑。將產(chǎn)物粗品溶于大約50mL水中，加入50mL丙酮。蒸除溶劑得到橙色固體，將其用硅膠進(jìn)行色譜分離(80/20 CHCl3/MeOH，然后是60/40 CHCl3/MeOH)得到5.88g(47％)淺橙色固體狀3-[[亞氨基[(1-甲基亞乙基)肼基]甲基]氨基]丙酸。MP～125℃(分解)。1H NMR(D2O)δ3.36(t，J＝6Hz，2H)，2.35(t，J＝6Hz，2H)，1.87(s，3H)，1.80(s，3H)。實(shí)施例8N-(肼基亞氨基甲基)-β-丙氨酸將3-[[亞氨基[(1-甲基亞乙基)肼基]甲基]氨基]丙酸(5.88g，31.61mmol)溶于125mL水并加熱至60℃保持72小時。蒸除溶劑并將產(chǎn)物在4∶1的EtOH和MeOH混合物中攪拌。將得到的淺橙色沉淀過濾，用乙醇洗滌并干燥，得3.16g(68％)淺橙色固體狀N-(肼基亞氨基甲基)-β-丙氨酸。MP177-179℃。1H NMR(D2O)δ3.39(t，J＝6Hz，2H)，2.42(t，J＝6Hz，2H)。實(shí)施例9N-(二肼基亞甲基)-1-丙氨酸在L-丙氨酸(10.0克，0.11摩爾)和三乙胺(33.5毫升，0.24摩爾)的乙醇(90毫升)和水(6毫升)懸浮液中加入二硫化碳(7.2毫升，0.12摩爾)。攪拌過夜后，將甲基碘(7.5毫升，0.12摩爾)加到黃色溶液中。攪拌混合物1小時并濃縮成漿液。將殘余物溶于水(25毫升)，加入濃鹽酸成酸性。用乙醚(3×100毫升)萃取混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并濃縮而得18.4克(93％)純凈淡黃色固體狀的相應(yīng)二硫代氨基甲酸酯。從乙醚/己烷中重結(jié)晶而得分析純樣品熔點(diǎn)90-92；1H NMR(D2O)δ4.89(q，J＝7Hz，1H)， 2.59(s，3H)，1.52(d，J＝7Hz，3H)。
在二硫代氨基甲酸酯(5.0克，28毫摩爾)的二氯甲烷(50毫升)溶液中于0℃加入三氟甲磺酸甲酯(3.5毫升，31毫摩爾)。將混合物升溫至室溫并攪拌20小時。減壓濃縮混合物而得無色油。將所得油溶于水(5毫升)，加入1.0M氫氧化鈉(28毫摩爾)。用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相。過濾后，真空除去溶劑而得粘稠油。將此油溶于無水乙醇(25毫升)，加入無水肼(4.4毫升，0.14摩爾)。攪拌混合物1.5小時，過濾收集所形成的固體(2.5克)。將白色粉末從水/IPA中結(jié)晶而進(jìn)一步純化得2.2克(49％)的白色粉末狀二氨基胍熔點(diǎn)174-176(分解)；1H NMR(D2O)δ3.69(q，J＝7Hz，1H)，1.20(d，J＝7Hz，3H)。實(shí)施例10N-(二肼基亞甲基)-β-丙氨酸按照類似N-(二肼基亞甲基)-1-丙氨酸所使用的方法，將β-丙氨酸轉(zhuǎn)化為N-(二肼基亞甲基)-β-丙氨酸(熔點(diǎn)192℃，分解)。1H NMR(D2O)δ3.40(t，2H，J＝7Hz)，2.48(t，2H，J＝7Hz)。實(shí)施例11N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸將甲基化硫代對稱二氨基脲(25.0克，101毫摩爾)和甘氨酸(6.314克，83.98毫摩爾)的水(50毫升)溶液及12.5N NaOH(8.89毫升，111毫摩爾)溶液于75-80℃氮?dú)庀聰嚢?小時。將該溶液于冰上冷卻，在逐步加入無水乙醇(550毫升，每次50毫升)前一直在氮?dú)庀拢看渭尤胫g都要攪拌直至加完。過濾前于0℃將混合物攪拌15分鐘。收集的固體用無水乙醇徹底洗滌。干燥而得淡粉色粉末(8.04克)。將粗品固體溶于水(30毫升)，過濾除去一些細(xì)不溶物，然后用無水乙醇稀釋至250毫升。幾乎立即出現(xiàn)沉淀，通過聲處理數(shù)秒加速。室溫放置10分鐘后，過濾混合物而得淡玫瑰色粉末(5.25克，42％，熔點(diǎn)200℃，分解)。1H NMR(D2O)3.78(s)。實(shí)施例12[2-(肼基亞氨基甲基)肼基]乙酸將肼基乙酸乙酯鹽酸鹽(9.28克，60毫摩爾)在120毫升1N氫氧化鈉中回流2小時而皂化。在熱溶液中加入N-氨基-S-甲基異硫脲氫碘酸鹽(13.98克，60毫摩爾)，然后再回流溶液2小時。除去溶劑。粗產(chǎn)物溶于甲醇，過濾除去氯化鈉。濃縮濾液，通過高真空干燥。然后將殘余物與150毫升甲醇攪拌過夜。過濾所得白色固體。然后將該固體在100毫升甲醇中回流2小時以除去任何不純物。然后冷卻混合物并過濾。真空干燥所得固體而得2.14克(24％)[2-(肼基亞氨基甲基)肼基]乙酸的灰白色固體。熔點(diǎn)201-203℃(分解)。1H NMR(D2O)δ3.78(s，2H)。實(shí)施例13N-(二肼基亞甲基)-d-丙氨酸在D-丙氨酸(1.8克，20毫摩爾)和三乙胺(6.1毫升，44毫摩爾)的乙醇(15毫升)和水(1毫升)懸浮液中加入二硫化碳(1.3毫升，22毫摩爾)。攪拌過夜后，將甲基碘(1.4毫升，22毫摩爾)加到黃色溶液中。攪拌混合物1小時并濃縮成漿液。將殘余物溶于水并加入濃鹽酸成酸性。用甲基叔丁醚(3×50毫升)萃取混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并濃縮得黃色油，聲處理并加入少量己烷而固化。進(jìn)一步干燥得2.9克黃色固體。然后通過重結(jié)晶(乙醚/己烷)進(jìn)一步純化而得1.67克(47％)表9化合物A的膏狀固體熔點(diǎn)89-91℃；1H NMR(D2O)δ4.67(m，1H)，2.39(s，3H)，1.32(d，J＝7Hz，3H)。
在表9化合物A的二硫代氨基甲酸酯(15.1克，84.3毫摩爾)的二氯甲烷(170毫升)溶液中于0℃加入三氟甲磺酸甲酯(10.5毫升，92.7毫摩爾)。將混合物升溫至室溫并攪拌20小時。減壓濃縮混合物而得無色油。將所得油溶于水(40毫升)，加入1.0M氫氧化鈉(84.3毫摩爾)。用乙酸乙酯萃取(3×200毫升)混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相。過濾后，真空除去溶劑而得粘稠油。將此油溶于無水乙醇(85毫升)，加入無水肼(13.2毫升，0.42摩爾)。攪拌混合物1.5小時，過濾收集所形成的固體(7.5克)。將白色粉末從水/IPA中結(jié)晶而進(jìn)一步純化得6.48克(48％)的白色粉末狀標(biāo)題化合物熔點(diǎn)175-177℃(分解)；1H NMR(D2O)δ3.69(q，J＝7Hz，1H)，1.20(d，J＝7Hz，3H)。實(shí)施例14N-(二肼基亞甲基)-纈氨酸在L-纈氨酸(5.0克，42.7毫摩爾)和三乙胺(13.1毫升，93.9毫摩爾)的乙醇(30毫升)和水(2毫升)懸浮液中加入二硫化碳(2.8毫升，47.0毫摩爾)。攪拌過夜后，將甲基碘(2.9毫升，47.0毫摩爾)加到黃色溶液中。攪拌混合物2小時并濃縮成漿液。將殘余物溶于水(10毫升)并加入濃鹽酸成酸性。用乙醚(3×100毫升)萃取混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相并濃縮得黃色油，引晶后得黃色固體。將該固體懸浮于己烷中并過濾而得7.7克灰白色表9化合物B固體。冷卻濾液至0℃而得第二批0.27克表9化合物B的白色固體(總共7.97克，90％)熔點(diǎn)76-78℃；1H NMR(CDCl3)δ5.30(m，1H)，2.40(m，1H)，1.08(d，J＝7Hz，3H)，1.04(d，J＝7Hz，3H)。
在表9化合物B(8.0克，38.6毫摩爾)的二氯甲烷(60毫升)溶液中于0℃加入三氟甲磺酸甲酯(4.8毫升，42.5毫摩爾)。將混合物升溫至室溫并攪拌20小時。減壓濃縮混合物而得無色油。將所得油溶于水(10毫升)，加入1.0M氫氧化鈉(38.6毫升)。用乙酸乙酯萃取(3×100毫升)混合物，干燥(硫酸鎂)有機(jī)相。過濾后，真空除去溶劑而得粘稠油。將此油溶于異丙醇(150毫升)，加入一水合肼(9.4毫升，0.19摩爾)。攪拌混合物2小時，加入THF得到更易過濾的固體。過濾而得2.4克(33％)微吸濕的白色固體狀標(biāo)題化合物熔點(diǎn)112-116℃；1H NMR(D2O)δ3.70(d，J＝5.0Hz，1H)，2.20(m，1H)，0.97(d，J＝7.0Hz，3H)，0.94(d，J＝7.0Hz，3H)。實(shí)施例15[1-(氨基亞肼基甲基)肼基]乙酸(參考方案5)9的制備在攪拌下的肼基乙酸乙酯鹽酸鹽(5.0克，32.34毫摩爾)和N-甲基嗎啉(3.26克，32.34毫摩爾)懸浮液中于0℃加入固體N-(芐氧羰基氧基)琥珀酰亞胺(8.06克，32.34毫摩爾)。使混合物升溫至室溫過夜，真空除去溶劑。將殘余物懸浮在乙酸乙酯/水中，振搖各層，分離有機(jī)層并用硫酸鈉干燥。除去溶劑，將殘余物在SiO2閃式色譜上進(jìn)行色譜分離(洗脫液4∶1己烷/乙酸乙酯)而得5.7克(70％)白色固體狀標(biāo)題化合物。熔點(diǎn)95-97℃。將隨后反應(yīng)中的殘余物從乙酸乙酯/己烷中重結(jié)晶純化而得略低產(chǎn)率的標(biāo)題化合物。1H NMR(CDCl3)δ1.27(t，J＝7Hz，3H)，3.66(s，2H)，4.19(q，J＝7Hz，2H)，5.13(s，2H)，6.77(br s，1H)，7.33(m，5H)。10的制備在攪拌下的9(3.0克，11.89毫摩爾)的乙醇(30毫升)懸浮液中于室溫加入NaOH水溶液(1N，11.89毫升)。在此混合物中再加入水(10毫升)，攪拌1小時(混合物成均勻溶液，然后沉淀出固體)。然后加入鹽酸水溶液(1N，11.89毫升)，真空除去乙醇，用乙酸乙酯(2×100毫升)萃取水層。合并有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，除去溶劑而得2.31克(87％)白色固體狀標(biāo)題化合物，熔點(diǎn)131-133℃。1H NMR(CD3OD)δ3.59(s，2H)，5.15(s，2H)，7.37(m，5H)。11的制備在攪拌下的10(25.44克，112.7毫摩爾)的乙酸乙酯(500毫升)懸浮液中加入異硫代氰酸三甲基甲硅烷基酯(14.79克，112.7毫摩爾)，加熱混合物至溫和回流(80℃)過夜。將所得溶液冷卻至室溫，用水(2×100毫升)洗滌。分離有機(jī)層，用硫酸鈉干燥，蒸發(fā)溶劑至干。將油狀殘余物溶于二氯甲烷，室溫放置3分鐘而形成固體。過濾固體，用二氯甲烷(100毫升)洗滌，真空干燥。將固體在熱乙酸乙酯(300毫升)中漿化以溶解任何含硫副產(chǎn)物并用己烷(200毫升)研制而得17.1克標(biāo)題化合物(53％)的白色固體。熔點(diǎn)148-149℃。1H NMR(CD3OD)δ5.20(s，2H)，7.30(m，5H)，未觀察到剩余的CH2。12的制備室溫下，向攪拌下的11(5.0g，17.64mmol)的EtOH(150ml)溶液中加入碘甲烷(2.73g，19.41mmol)并將得到的溶液攪拌過夜。真空蒸除溶劑得到7.50g(定量)黃色泡沫狀標(biāo)題化合物。1H NMR(CD3OD)δ2.69(brs，0.6H)，2.84(brs，0.4H)，4.40-4.70(m，2H)，5.31(brs，2H)，7.46(m，5H)。13的制備室溫下，向劇烈攪拌下的12(25.5g，60mmol)的H2O(150ml)溶液中緩慢加入水合肼(6.06g，120mmol)直至已加入1/2的量。向形成的固體團(tuán)中加入H2O(10ml)并用鋼鏟將固體機(jī)械搗碎。加入剩余的肼并將溶液劇烈攪拌1小時。將該非均相混合物聲處理并持續(xù)攪拌直至形成粘稠的團(tuán)。加入EtOH(50ml)，濾出固體，用EtOH洗滌并真空干燥，得9.24g(55％)白色固體狀標(biāo)題化合物。m.p.168-170℃。1H NMR(D2O)δ3.86(brs，1H)，4.21(brs，1H)，5.17(s，2H)，7.39(s，5H)。[1-(肼基亞氨基甲基)肼基]乙酸向13(9.20g，32.71mmol)的MeOH/H2O(400ml，～2∶1 v/v)溶液中加入10％Pd-C(1.0g)并將該混合物在30psi氫化4小時。用硅藻土濾除催化劑并再次加入10％Pd-C(1.0g)。將該混合物在30psi氫化2.5小時并通過TLC(洗脫劑85∶14∶1 CH2Cl2/MeOH/HCO2H)確定反應(yīng)完全。將混合物用硅藻土過濾并蒸除溶劑至約50ml，此時有固體沉淀析出。濾出固體，用極少量的H2O洗滌并真空干燥，得到3.60g(75％)米色固體狀標(biāo)題化合物。m.p.196-198℃。將濾液濃縮至有固體產(chǎn)生，得第二批產(chǎn)品。過濾得到0.9g(19％，總產(chǎn)率94％)熔點(diǎn)完全相同的物質(zhì)。1H NMR(D2O)δ4.06(s，2H)。
生物學(xué)試驗(yàn)按照如下方法測定本發(fā)明的化合物降低血糖及體重的能力KKAy小鼠是NIDDM和肥胖的嚙齒類動物模型(Chang，Wyse，Copeland，Peterson和Ledbetter，1986)。治療前的血液樣品從眶后竇獲得，并將小鼠分成6組以使所有組的平均治療前血糖水平的均值相同。將試驗(yàn)化合物以0.5％的濃度摻入食物中并讓小鼠隨意食用。對照小鼠接受未添加藥物的食物。在第0天，將小鼠稱重并喂以對照食物或添加有試驗(yàn)化合物的食物。食用對照食物或添加有試驗(yàn)化合物的食物3天后，抽取血樣以測定葡萄糖濃度并將動物稱重以測定重量損失。通過稱重試驗(yàn)開始時提供的食物重量和試驗(yàn)結(jié)束時殘余的食物重量來確定食用的食物量。從提供的食物重量中減去殘余的食物重量計(jì)算出食用的食物量。將食用的食物量乘以0.5％計(jì)算出藥物攝取量。用該方法計(jì)算出藥物的攝取量大約為500mg/kg/天。血糖數(shù)據(jù)用試驗(yàn)組的平均血糖濃度除以對照組的平均血糖濃度(治療/對照或T/C)來表達(dá)。引起T/C值等于或低于0.9的化合物被認(rèn)為是有活性的抗高血糖藥物。體重?fù)p失數(shù)據(jù)用體重改變的百分?jǐn)?shù)來表示。與對照相比，在三天內(nèi)引起體重減少1％或更多的化合物被認(rèn)為是有活性的治療肥胖的藥物。
表1本發(fā)明的優(yōu)選化合物 [2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸[2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸一鹽酸鹽N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸 N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸鹽酸鹽(2∶1)N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 [2-(肼基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸 [1-(肼基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸表2未要求保護(hù)的相關(guān)非活性化合物 [(氨基亞氨基甲基)-甲基亞肼基]-乙酸硫酸鹽(2∶1) [[亞氨基(硝基氨基)-甲基]亞肼基]-乙酸 [[亞氨基(甲基氨基)-甲基]亞肼基]-乙酸 表3一般范圍的非活性例外3-[1-(氨基亞氨基甲基)肼基]-丙酸 2-[2-(氨基亞氨基甲基)肼基]-丁酸 4-[(肼基亞氨基甲基)氨基]-丁酸表4具體要求保護(hù)的本發(fā)明化合物 [2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸 [2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸，一鹽酸鹽 [2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸苯甲酯，一鹽酸鹽 α-[2-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-苯丙酸，一水合物 外消旋體 [1-(氨基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸，一氫溴酸鹽 N-(肼基亞氨基甲基)-β-丙氨酸 N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 [2-(肼基亞氨基甲基)-肼基]-乙酸 N-(二肼基亞甲基)-β-丙氨酸 N-(二肼基亞甲基)-L-丙氨酸 N-(二肼基亞甲基)-d-丙氨酸 N-(二肼基亞甲基)-纈氨酸 [1-(氨基亞肼基甲基)-肼基]-乙酸表5要求保護(hù)治療NIDDM用途的已知化合物 [(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-乙酸，一鹽酸鹽，一水合物 2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-丙酸，一鹽酸鹽 2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-丁酸，一鹽酸鹽 N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸 N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸，鹽酸鹽(2∶1) α-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-苯丙酸 2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-辛酸，一鹽酸鹽表6口服給予KKAy小鼠N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸對降低高血糖和肥胖的劑量-響應(yīng)將KKAy小鼠用N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸進(jìn)行上述治療，不同之處在于將化合物以0.03、0.06、0.10、0.20、0.30和0.40％摻入食物中，以便給予大約30、60、100、200、300和400mg/kg的每日劑量。對照小鼠接受未添加藥物的食物。為了與N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸進(jìn)行比較，以0.5％含量的食物混合物給予3-胍基丙酸(3-GPA)(大約劑量，500mg/kg/天)。數(shù)據(jù)以與試驗(yàn)第1天相比，第3天的血糖濃度和體重改變的百分?jǐn)?shù)來表示。平均值±S.E.M.，N＝6只小鼠/組。用JMP3.0.2軟件(SAS研究所)進(jìn)行方差分析以確定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。*，P＜0.05 vs Nil； ，明顯低于3-GPA(P＜0.05)。添加劑血糖改變％ 體重改變％Nil -5.8±7.1 -0.71±0.65N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 -13.5±10.5 -0.92±0.350.03％N-(二肼基亞甲募)-甘氨酸 -34.9±17.1*-1.51±2.110.06％N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 -45.2±6.4*-4.04±0.76*0.10％N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 -69.9±3.2*，-8.22±1.05*0.2％N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 -70.4+1.5*， -9.94+1.62*， 0.3％N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 -70.3±3.9*，-10.3±0.97*， 0.4％0.5％3-GPA -38.4+4.4*-5.4±0.81**，P＜0.05 vs.Nil ，明顯低于3-GPA(P＜0.05)表7腹膜內(nèi)葡萄糖耐量的提高葡萄糖耐量在無糖尿病的C57BL小鼠和患糖尿病的KKAy小鼠中測定。通過管飼法經(jīng)口向動物給予蒸餾水(對照)或100mg/kg的N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸，然后禁食16-17小時。從眶后竇抽取用于葡萄糖測定的血樣。血樣在即將對腹膜內(nèi)給予2g/kg葡萄糖之前(時間＝0)以及注射后的30、60和90分鐘抽取。血糖用葡萄糖自動分析儀測定。數(shù)據(jù)用平均值±S.E.M.表示，每組5-6只小鼠。用JMP3.0.2軟件(SAS研究所)進(jìn)行方差分析以確定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。*，P＜0.05vs.對照。
小鼠 組 時間(分鐘)血糖(mg/dl)C57BL 對照 0143±830 233±1460 240±890 226±9N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸 0114±9*30 174±17*60 153±7*90 161±19*KKAy 對照0188±4330 487±1060 469±2090 486±26N-(二肼基亞甲 115±16(P＝0.12vs.對基)-甘氨酸0 照)30 383±38*60 396±6390 392±67表8
對蛋白質(zhì)非酶催糖基化的抑制對蛋白質(zhì)非酶催糖基化的測定用公認(rèn)的方法進(jìn)行(Dolhofer和Wieland，1979；Khatami，Suldan，DAvis，Li和Rickey，1988)。將人血清白蛋白(Sigma化學(xué)公司)、[14C]-葡萄糖、和葡萄糖溶于生理鹽水溶液并在37℃孵育8天，以測定100mM[14C]-D-葡萄糖在人血清白蛋白中的摻入量。將試驗(yàn)化合物以19.1mM加入溶液中。為了測定白蛋白的糖基化，加入1體積12％的三氯乙酸使蛋白質(zhì)沉淀，離心，將沉積的小團(tuán)用6％的三氯乙酸洗滌兩次，并且每次洗滌后均進(jìn)行離心。將洗滌過的小團(tuán)溶解、加入閃爍體并通過液體閃爍計(jì)數(shù)測定放射性標(biāo)記的葡萄糖的摻入量。數(shù)據(jù)用摻入到白蛋白中的[14C]-葡萄糖的百分?jǐn)?shù)表示(兩次測量的平均值)。用JMP3.0.2軟件(SAS研究所)進(jìn)行方差分析以確定統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。添加的物質(zhì) 摻入的[14C]-葡萄糖％對照(Nil) 1.50氨基胍 0.96(P＜0.05vs.對照)3-胍基丙酸1.52N-(二肼基亞甲基)-甘氨酸0.81(P＜0.05vs.對照)N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸 1.21(P＜0.05vs.對照)乙酸一鹽酸鹽 1.29(P＜0.05vs.對照)
表9中間體化合物 化合物A 化合物B方案1 方案2 方案3 方案4 方案5
權(quán)利要求
1.一種化合物在制備用于治療或預(yù)防非胰島素依賴型糖尿病或肥胖的藥物中的用途，其中該化合物具有結(jié)構(gòu)式IIIHN＝C(NH2)-HN-N＝CR3-COOH式中R3為H，甲基，乙基，芐基或正己基。
2.權(quán)利要求1的用途，其中的化合物選自[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-乙酸，一鹽酸鹽，2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-丙酸，一鹽酸鹽，2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-丁酸，一鹽酸鹽，N-(肼基亞氨基甲基)-甘氨酸及其鹽酸鹽(2∶1)，α-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-苯丙酸，和2-[(氨基亞氨基甲基)亞肼基]-辛酸。
全文摘要
一種化合物在制備用于治療或預(yù)防非胰島素依賴型糖尿病或肥胖的藥物中的用途,其中該化合物具有結(jié)構(gòu)式III,式中R
文檔編號A61K31/195GK1377642SQ0210629
公開日2002年11月6日 申請日期2002年4月10日 優(yōu)先權(quán)日1994年11月23日
發(fā)明者S·D·拉爾森, V·A·維蘭科特, P·D·梅, S·P·坦斯, J·A·圖克爾, M·D·密拉遜, H·J·施霍斯塔里茨 申請人:比奧維特羅姆股份公司