專利名稱:一種刺五加提取物及其藥物組合物的制作方法
技術領域:
本發(fā)明涉及一種中藥原料提取物,具體地說是一種刺五加提取物,本發(fā)明還涉及 含有該提取物藥物組合物。
背景技術:
刺五加注射液是由五加科植物刺五加中提出的有效成分制成的中藥注射液,其中 含有多種刺五加苷、異秦皮苷、丁香苷、金絲桃苷、刺五加多糖等有效成分。刺五加能調(diào)節(jié)機 體新陳代謝的功能,提高機體對有害刺激因子的非特異性抵抗力,能增強垂體-腎上腺皮 質(zhì)系統(tǒng)的功能,提高機體的適應性和耐受性,減低體內(nèi)外多種致病因子對機體的損害,對中 樞神經(jīng)系統(tǒng)即有興奮作用又有抑制作用。刺五加注射液可擴張血管、增加冠狀動脈血流量、 減少耗氧量、降低血液粘度、改善血液循環(huán),并有鎮(zhèn)靜、改善睡眠、增加食欲等作用。主要用 于肝腎不足所致的短暫性腦缺血發(fā)作、腦動脈硬化、腦血栓形成、腦栓塞等。
近年來由于其在臨床上廣泛的應用所引起的不良反應時有報道。其不良反應類型 主要有過敏反應、過敏性休克、全身性過敏反應等,臨床主要表現(xiàn)為頭暈、頭痛、胸悶、呼吸 困難、血壓下降、煩躁,部分患者伴有皮疹、全身瘙癢、發(fā)熱、寒戰(zhàn)、鼻塞、流涕等。造成上述不良反應的原因主要有目前刺五加制品主要采用溶劑提取法進行粗 提,溶劑多采用含有乙醇的水溶液,然后再根據(jù)不同的需要進行精制,該方法導致刺五加制 品中含有的雜質(zhì)多、有效成分少,并且含有致敏物質(zhì)。到目前為止,還沒有解決上述問題的 報道。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的第一個目的在于針對上述不足提供一種刺五加提取物,其具有較好的安 全性。本發(fā)明第二個目的在于提供制備上述刺五加提取物的方法。本發(fā)明第三個目的在于提供上述刺五加提取物在醫(yī)藥領域中的應用。本發(fā)明刺五加提取物是將刺五加經(jīng)水提醇沉、石灰乳調(diào)pH至10. 0-12. 0,靜置4小 時以上、硫酸調(diào)PH至5. 0-6. 0、再次醇沉后獲得。該刺五加提取物中不含綠原酸,并且很好 的保留了有效成分而雜質(zhì)成分則被有效減少。具體地,本發(fā)明刺五加提取物可通過如下方法制備獲得將刺五加切成碎片,加水 煎煮,合并煎液,減壓濃縮,加入乙醇至醇含量為70 75 %,靜置濾過,回收乙醇后加水稀 釋至生藥重量的3-6倍,用石灰乳調(diào)pH值至10. 0 12. 0,靜置4小時以上,再用硫酸將pH 值調(diào)至5. 0-6. 0,靜置過濾,濃縮,加入乙醇至醇含量為80 85 %,靜置過濾,離心分離雜 質(zhì),藥液回收乙醇后濃縮干燥,即得。上述步驟中,水提時通常加水煎煮2 3次,每次加4 10倍量(重量)的水煎 煮30 60分鐘;減壓濃縮通常濃縮至80°C時檢測相對密度為1. 11 11. 4 ;靜置過濾過程 通常靜置12 24小時,使雜質(zhì)能夠有效沉淀;離心通常以1500-3000rpm,離心20-40min,去除沉淀。該方法中采用水提醇沉、新鮮石灰乳調(diào)PH至10. 0-12. 0、硫酸調(diào)PH至5. 0-6. 0、再 次醇沉等步驟,很好的保留了有效成分,同時去除綠原酸等非藥效成分,減少了雜質(zhì)的引入 量,降低了毒性,保證了藥品的安全。經(jīng)上述方法提取得到的刺五加提取物中刺五加總苷占2% -20%,總黃酮占 3.5% -35%,總氨基酸和總糖占30% -40%,其余為有機酸、常量元素和微量元素等,且不 含綠原酸。通常刺五加總苷占5% -10%,刺五加總黃酮占8. 5% -10. 5%,總氨基酸和總糖 占35%-40%,余量為有機酸、常量元素和微量元素等,且不含綠原酸。其中,提取物中紫丁 香苷占刺五加總苷的10% -20%。
實驗表明,本發(fā)明刺五加提取物過敏反應小,具有治療老年癡呆的作用。本發(fā)明刺五加提取物可以與藥學上可接受的載體制備成各種藥物組合物,包括但 不限于注射液、凍干粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、分散片、滴丸、泡騰片、軟膠囊、口服液。 其中優(yōu)選為注射劑。此外,本發(fā)明刺五加提取物還可以與其它藥物聯(lián)合使用,例如直接替換現(xiàn)有藥物 組合物中的刺五加提取物,用于治療各種疾病。本發(fā)明具有以下優(yōu)點1)提取物中不含綠原酸,雜質(zhì)含量少,減少了不良反應的發(fā)生,應用更安全。2)制備方法在用石硫法處理藥液的過程中,用石灰乳調(diào)pH至10. 0-12. 0并靜置 4小時以上,溶液為強堿性,在此條件下,綠原酸被完全水解掉;在石硫法后又增加了一步 醇沉反應,顯著減少了硫酸、石灰乳等帶來的外援性雜質(zhì);同時,石灰乳與硫酸的用量也降 低至目前常用量的四分之一至五分之一,減少了雜質(zhì)的帶入,尤其是鈣離子的引入。
具體實施例方式以下實施例進一步說明本發(fā)明的內(nèi)容,但不應理解為對本發(fā)明的限制。在不背離 本發(fā)明精神和實質(zhì)的情況下,對本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換,均屬于本發(fā)明 的范圍。若未特別指明,實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1現(xiàn)有工藝制備的提取物將刺五加桿切成碎片,加10倍量60%乙醇提取2次,每次1小時,合并濾液,減壓 濃縮,上D201型樹脂,用70%乙醇洗脫,收集洗脫液,濃縮干燥,即得。經(jīng)檢測,提取物中含綠原酸1. 24%,雜質(zhì)占4. 2%。實施例2本發(fā)明方法制備的提取物將刺五加桿切成碎片,加水煎煮3次,第一次加5倍量水,煎煮30分鐘;第二次加 6倍量水,煎煮40分鐘;第三次加4倍量水,煎煮30分鐘。合并煎液,減壓濃縮至80°C時檢 測相對密度為1. 11,加入乙醇使含醇量達75%,靜置濾過,回收乙醇后加水稀釋至生藥重 量的4倍。用重量百分比為20%的石灰乳調(diào)pH值至11.0,再用重量百分比為20%的硫酸 將PH值調(diào)至5. 1,靜置過濾,濃縮至80°C時檢測相對密度為1. 13,再次加入乙醇使含醇量達 84%,靜置過濾,離心分離雜質(zhì),藥液回收乙醇后濃縮干燥,即得。經(jīng)檢測,提取物中未檢出綠原酸,雜質(zhì)占1. 5%。
實施例3本發(fā)明方法制備的提取物
將刺五加桿切成碎片,加水煎煮2次,第一次加8倍量水,煎煮60分鐘;第二次加 6倍量水,煎煮40分鐘;第三次加6倍量水,煎煮30分鐘。合并煎液,減壓濃縮至80°C時檢 測相對密度為1. 14,加入乙醇使含醇量達70%,靜置濾過,回收乙醇后加水稀釋至生藥重 量的5倍。用重量百分比為20%的石灰乳調(diào)pH值至11. 5,再用重量百分比為20%的硫酸 將PH值調(diào)至5. 4,靜置過濾,濃縮至80°C時檢測相對密度為1. 12,再次加入乙醇使含醇量達 80%,靜置過濾,離心分離雜質(zhì),藥液回收乙醇后濃縮干燥,即得。經(jīng)檢測,提取物中未檢出綠原酸,雜質(zhì)占1. 7%。實施例4本發(fā)明方法制備的提取物將刺五加桿切成碎片,加水煎煮3次,第一次加8倍量水,煎煮60分鐘;第二次加 4倍量水,煎煮40分鐘;。合并煎液,減壓濃縮至80°C時檢測相對密度為1. 13,加入乙醇使 含醇量達73%,靜置濾過,回收乙醇后加水稀釋至生藥重量的3倍。用重量百分比為20% 的石灰乳調(diào)PH值至12. 0,再用重量百分比為20%的硫酸將pH值調(diào)至6. 0,靜置過濾,濃縮 至80°C時檢測相對密度為1. 11,再次加入乙醇使含醇量達83%,靜置過濾,離心分離雜質(zhì), 藥液回收乙醇后濃縮干燥,即得。經(jīng)檢測,提取物中未檢出綠原酸,雜質(zhì)占2. 1%。實施例5注射液取實施例2所得提取物100g,加入注射用水稀釋,100-120°C熱處理,過濾,0_4°C 冷藏處理,過濾,調(diào)PH值至5. 5,活性炭處理,過濾,滅菌,冷藏處理,超濾,灌裝,每支20ml, 滅菌,即得。經(jīng)檢測,總苷含量為2. 8mg/ml,其中紫丁香苷為0. 41mg/ml,總黃酮含量為5. 3mg/ ml,總糖和總氨基酸為19. 7mg/ml,未檢出綠原酸。實施例6注射液取實施例3所得提取物300g,加入注射用水稀釋,100-120°C熱處理,過濾,0_4°C 冷藏處理,過濾,調(diào)PH值至5. 5,活性炭處理,過濾,滅菌,冷藏處理,超濾,灌裝,每支IOOml, 滅菌,即得。經(jīng)檢測,總苷含量為1. 68mg/ml,其中紫丁香苷為0. 26mg/ml,總黃酮含量為 2. 97mg/ml,總糖和總氨基酸含量為18. 16mg/ml,未檢出綠原酸。實施例7注射液取實施例3所得提取物400g,加入注射用水稀釋,100-120°C熱處理,過濾,0_4°C 冷藏處理,過濾,調(diào)PH值至5. 5,活性炭處理,過濾,滅菌,冷藏處理,超濾,灌裝,每支250ml, 滅菌,即得。經(jīng)檢測,總苷含量為1. 16mg/ml,其中紫丁香苷為1. 14mg/ml,總黃酮含量為 1. 89mg/ml,總糖和總氨基酸含量為20. 05mg/ml,未檢出綠原酸。實施例8取實施例4所得提取物,加入蔗糖粉混合均勻,制粒、干燥、整?;旌?、裝袋、包裝, 得顆粒劑。實施例9取實施例5所得提取物,加入糊精混合均勻,制粒、低溫干燥、整?;旌稀浩?、包衣,得片劑。實施例10取實施例2所得提取物,加入淀粉混合均勻,低溫干燥,粉碎成細粉,裝入膠囊,得 膠囊劑。實施例11取實施例2所得提取物,加水溶解,加入矯味劑,攪勻過濾,補加水至規(guī)定量,得口 服液。實施例12取實施例2所得提取物,加入注射用水稀釋,過濾,調(diào)pH值至5. 5,活性炭處理,過 濾,滅菌,冷藏處理,過濾,超濾,灌裝,冷凍干燥,得凍干粉針劑。試驗例1過敏試驗對比研究樣品實施例5樣品、市售刺五加注射液方法取體重250_300g豚鼠24只,隨機分為四組,每組6只。陰性對照組腹腔 注射0. 9%氯化鈉注射液;陽性對照組腹腔注射5%新鮮蛋清溶液。試驗1組腹腔注射 實施例5樣品;試驗2組腹腔注射市售刺五加注射液。給藥劑量均為0. 5ml/只。隔日一 次,共三次。首次給藥后14天,21天,每組隨機取2只,試驗1組和2組分別由耳緣靜脈注 射實施例5樣品和市售刺五加注射液;陰性對照組注射0. 9%氯化鈉注射液,陽性對照組注 射5%新鮮蛋清溶液。給藥劑量均為1.0ml/只。給藥后立即觀察動物有無噴嚏、搔鼻、干 咳或咳嗽、顫抖、豎毛、抽搐、呼吸困難、大小便失禁、休克和死亡的過敏反應,觀察時間為15 分鐘。過敏反應分級見表1。表1過敏反應分級及結(jié)果判定方法
i應分級ι反映癥狀I結(jié)果判斷
0 無明顯反應_如兩次豚鼠均無明顯反
ι ^有輕微抓鼻、顫抖或豎毛應’認為受試藥過敏試驗
2^幾次咳嗽,有抓鼻顫抖或豎毛合格,反映級數(shù)達2級以
3多次或連續(xù)咳嗽,伴有呼吸困難或痙攣、上(包括2級)時’認為 __ _受試藥物過敏反應不合
4痙攣、抽搐、大小便失禁、休克、死亡I格。_結(jié)果注射0. 9%氯化鈉注射液的陰性對照組的豚鼠過敏反應級數(shù)均為0,無過敏 反應;注射5%蛋清的陽性對照組豚鼠出現(xiàn)噴嚏、搔鼻、干嘔或咳嗽、抽搐、顫抖、呼吸困難、 大小便失禁、休克等過敏反應,且皆于15min內(nèi)死亡,過敏反應級數(shù)為4級,試驗條件成立。 注射實施例5樣品的試驗1組的6只豚鼠均無過敏反應,過敏反應級數(shù)均為0。注射市售刺 五加注射液的試驗2組的6只豚鼠中有1只豚鼠出現(xiàn)輕微抓鼻、豎毛現(xiàn)象,過敏反應級數(shù)為 1。表明實施例5樣品的安全性高于市售刺五加注射液。用實施例6和7的注射液進行實 驗亦取得了類似的結(jié)果。試驗例2對老年癡呆大鼠學習記憶功能影響試驗樣品實施例2樣品、腦復康藥液
造模動物適應性喂養(yǎng)1周后,經(jīng)水迷宮檢測去掉反應過快或過慢者,其余大鼠隨 機分為空白對照組(10只)與造模組(50只)。造模組大鼠每天背頸部注射D-半乳糖,空 白對照組背頸部皮下注射0. 9%氯化鈉溶液,劑量均為0. lml/100g,連續(xù)30天。造模后進 行水迷宮訓練,以造模后空白對照組大鼠逃避潛伏期的平均值為參考值,計算造模后30天 每只大鼠平均逃避潛伏期值,如大鼠平均逃避潛伏期值與參考值之差占該大鼠平均逃避潛 伏期值的20%以上,為造模成功。分組給藥選造模成功大鼠40只,隨機分為癡呆模型組、低劑量組、高劑量組和 陽性對照組,每組10只??瞻讓φ战M和癡呆模型組灌胃給予0.9%氯化鈉溶液,劑量為 lml/100g ;低劑量組灌胃給予實施例2樣品,劑量為0. 42g/100g ;高劑量組灌胃給予實施例 2樣品,劑量為0. 84g/100g ;陽性對照組灌胃給予腦復康藥液0. lg/100g。每天次,連續(xù)30天。大鼠學習記憶功能檢測采用水迷宮系統(tǒng),并用圖像自動采集系統(tǒng)進行自動跟蹤 分析,記錄各種參數(shù)。水溫控制在24°C左右,試驗人員及周圍環(huán)境保持恒定。試驗于造模 前、造模后、給藥后各進行一次。結(jié)果從大鼠入水開始至找到隱藏在水面下平臺的時間為逃避潛伏期,以逃避潛 伏期時間的長短代表大鼠學習能力。造模前,各組大鼠的逃避潛伏期相近;造模后,造模組 大鼠逃避潛伏期明顯比空白對照組長;給藥后,低劑量和高劑量給藥組及陽性對照組大鼠 逃避潛伏期明顯縮短,而低劑量和高劑量給藥組與陽性對照組大鼠逃避潛伏期相近。結(jié)果 表明,實施例2樣品具有改善老年癡呆大鼠學習記憶功能的作用。結(jié)果詳見表2。表2對老年癡呆大鼠學習記憶功能的影響
—組別 造模前逃避潛伏期 造模后逃避潛伏期 治療后逃避潛伏期
空白對照組 21.04 ±5.26_13.45 ±4.68_5.91 ±2.49
癡呆模型組 20.86 土 6.15_23.08 ±4.38_14.62 ±2.67
陽性對照組 20.32 ±6.34_21.79 ±5.16_8.75 ± 4.24
高劑量組_20.62 土 5.08_22.38 ±4.27_8.46 ±3.86
低劑量組_21.12 ±6.01_22.84 ± 5.04_8.93+4.21用實施例3和4的提取物進行上述實驗,亦取得了類似的結(jié)果。
權利要求
一種刺五加提取物,其通過如下方法制備獲得刺五加經(jīng)水提醇沉、石灰乳調(diào)pH至10.0-12.0,靜置4小時以上、硫酸調(diào)pH至5.0-6.0、再次醇沉。
2.如權利要求1所述的刺五加提取物,其特征在于,其通過如下方法制備獲得將刺五 加切成碎片,加水煎煮,合并煎液,減壓濃縮,加入乙醇至醇含量為70 75%,靜置濾過,回 收乙醇后加水稀釋至生藥重量的3-6倍,用石灰乳調(diào)pH值至10. 0 12. 0,靜置4小時以 上,再用硫酸將PH值調(diào)至5. 0-6. 0,靜置過濾,濃縮,加入乙醇至醇含量為80 85%,靜置 過濾,離心,濃縮干燥,即得。
3.如權利要求1或2所述的刺五加提取物,其特征在于,該提取物不含綠原酸。
4.如權利要求3所述的刺五加提取物,其特征在于,該提取物中刺五加總苷占 2% _20%,總黃酮占3. 5% -35%,總氨基酸和總糖占30% -40%。
5.如權利要求4所述的刺五加提取物,其特征在于,提取物中紫丁香苷占刺五加總苷 的 10% -20%。
6.一種制備權利要求1所述刺五加提取物的方法,其包括如下步驟刺五加經(jīng)水提醇 沉、新鮮石灰乳調(diào)pH至10. 0-12. 0,靜置4小時以上、硫酸調(diào)pH至5. 0-6. 0、再次醇沉。
7.如權利要求1所述的方法,其特征在于,該方法包括如下步驟將刺五加切成碎片, 加水煎煮,合并煎液,減壓濃縮,加入乙醇至醇含量為70 75 %,靜置濾過,回收乙醇后加 水稀釋至生藥重量的3-6倍,用石灰乳調(diào)pH值至10. 0 12. 0,靜置4小時以上,再用硫酸 將PH值調(diào)至5. 0-6. 0,靜置過濾,濃縮,加入乙醇至醇含量為80 85%,靜置過濾,離心分 離雜質(zhì),藥液回收乙醇后濃縮干燥,即得。
8.權利要求1 5任一項所述刺五加提取物在制備老年癡呆藥物中的應用。
9.一種治療老年癡呆癥的藥物組合物,其以權利要求1 5任一項所述刺五加提取物 作為有效成分。
10.如權利要求9所述的藥物組合物,其為有效成分與藥學上可接受的載體制備成的 注射液、凍干粉針劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、分散片、滴丸、泡騰片、軟膠囊或口服液。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種刺五加提取物及其藥物組合物,該刺五加提取物是將刺五加經(jīng)水提醇沉、石灰乳調(diào)pH至10.0-12.0、靜置4小時以上、硫酸調(diào)pH至5.0-6.0、再次醇沉后獲得。該刺五加提取物中不含綠原酸,并且很好的保留了有效成分而雜質(zhì)成分則被有效減少。實驗表明,本發(fā)明刺五加提取物過敏反應小,并具有治療老年癡呆的作用。
文檔編號A61K125/00GK101810656SQ20101016555
公開日2010年8月25日 申請日期2010年4月27日 優(yōu)先權日2010年4月27日
發(fā)明者方同華 申請人:哈爾濱珍寶制藥有限公司