專利名稱：：治療壞死性小腸結腸炎的方法
技術領域：
：本發(fā)明涉及胃腸疾病的治療。
背景技術：
：CO被認為是一種重要的信號分子(Verma等，Science259381-384，1993)。據(jù)稱一氧化碳是腦內的神經(jīng)信使分子(Id.)和下丘腦內的神經(jīng)內分泌調節(jié)物(Pozzoli等，Endocrinology7352314-23171994)。和一氧化氮一樣，CO是平滑肌的松弛劑(Utz等，BiochemPharmacol.47195-201，1991；Christodoulides等，Circulation972306-9，1995)并且抑制血小板聚集(Mansouri等，ThrombHaemost.48286-8，1982)。一些模型中吸入低水平的CO后顯示具有抗炎效果。壞死性小腸結腸炎(NEC)是一種以腸屏障失效(gutbarrierfailure)，腸壞死，膿毒癥，和多系統(tǒng)器官衰竭為特征的新生兒疾病(參照，例如，OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))。發(fā)明簡述本發(fā)明部分基于這樣的發(fā)現(xiàn)給藥CO可阻止NEC的發(fā)展。相應地，本發(fā)明提供了治療，預防，或減少患者患壞死性小腸結腸炎的危險性的方法。所述方法包括鑒定患有或易患壞死性小腸結腸炎的患者，以及將包含有效治療患者的壞死性小腸結腸炎的量的一氧化碳得要區(qū)組合物給藥所述患者。本方法還包括監(jiān)測患者的NEC病情和/或確定患者的病情是否改善或NEC的患病危險性是否降低的步驟?？梢酝ㄟ^本領域已知的任何將氣體，液體，和/或固體給藥患者的方法，例如通過吸入，吹入，輸注，注射，和/或攝入將所述藥物組合物給藥患者。在本發(fā)明的一個具體實施方案中，所述藥物組合物通過吸入給藥患者。在另一實施方案中，所述藥物組合物通過口服給藥患者。在另一實施方案中，所述藥物組合物直接給藥患者的腹腔。在另一實施方案中，所述藥物組合物通過體外膜氣體交換裝置(extracorporealmembranegasexchangedevice)或人工肺給藥患者。所述患者可以是嬰兒，例如足月兒，早產(chǎn)兒和/或低出生體重嬰兒。此嬰兒可以是新生兒，或可以是，如一周歲以內(例如，六個月，四個月，三個月，或兩個月大)。所述嬰兒可以小于六周，如小于四周。NEC可以是下列多個因素中任何因素的結果，如低氧，低體溫，低血壓，血液粘滯度過高，和/或酸中毒，和/或患者接受交換輸血(exchangetransfusion)，至少一種重量滲摩爾濃度過高的食物，濃縮細胞輸注(packedcelltransfusion)，和/或鈣拮抗劑過量。此外，NEC可以由于患者患有腸系膜缺血和/或腸壁細菌感染的情形而引起(參照，如OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))?？蛇x地，NEC可由外科手術引起，如當患者已經(jīng)接收過手術，將要接收手術，或正在接收手術的情況。所述藥物組合物可以成為任何形式，如氣體或液體形式。本發(fā)明還涉及治療和預防患者的壞死性小腸結腸炎的方法，所述方法包括鑒定患有或可能患壞死性小腸結腸炎的患者，并提供含有包含CO氣體的加壓氣體的容器，從此容器中釋放加壓氣體形成包含CO氣體的環(huán)境，并使患者暴露于所述環(huán)境，所述環(huán)境中的CO的量足以治療患者的壞死性小腸結腸炎。另一方面，本發(fā)明提供了對患者(如嬰兒)實施腹部外科手術的方法。所述方法包括鑒定需要腹部手術的患者，其中壞死性小腸結腸炎是腹部手術的重要危險因素；對患者實施腹部手術，并在該實施手術步驟以前，期間，或以后，使患者吸入足以降低患者發(fā)生壞死性小腸結腸炎的危險性的量的CO氣體。本發(fā)明還包括治療患者的壞死性小腸結腸炎的方法。所述方法包括(a)鑒定患有壞死性小腸結腸炎的患者；(b)對該患者實施外科手術以切除其腸的病變部分；和(c)在步驟(a)后以及步驟(b)以前，期間，或以后，給藥患者包含有效地治療患者的壞死性小腸結腸炎的量的一氧化碳的藥物組合物。本發(fā)明另一方面提供了一種容器，所述容器包含醫(yī)用級別的壓縮CO氣體。該容器帶有說明該氣體可用于治療患者的NEC(例如嬰兒患者)的標簽。CO氣體可以與氮氣，或與一氧化氮和氮氣，或與含有氧氣的氣體混合。所述混合物中CO氣體的濃度至少約0.025％，例如至少約0.05％，0.10％，0.50％，1.0％，2.0％，10％，50％，或90％。本發(fā)明另一方面提供了治療患者的NEC的方法。所述方法包括鑒定患有或可能患有NEC的患者，以及與CO治療聯(lián)合給藥患者至少一種以下治療方法誘導患者的HO-1(血紅素加氧酶-1)或鐵蛋白；使患者體內的重組HO-1或鐵蛋白的表達；和給藥患者包含HO-1，膽紅素，膽綠素，鐵蛋白，或去鐵鐵蛋白，鐵，去鐵敏(desferonxamine)，或右旋糖酐鐵(irondextran)的藥物組合物。還涉及CO和以上任一成分在制備用于治療或預防NEC的藥物中的用途。本發(fā)明還提供了治療患者的NEC的方法。所述方法包括鑒定患有或可能患有NEC的患者，以及與CO治療聯(lián)合給藥患者至少一種以下治療方法靜脈內營養(yǎng)；靜脈內水合作用(intravenoushydration)；抗微生物劑；對患者實施鼻胃減壓，對患者實施外科手術；和對患者的腹腔(peritonealcavity)進行引流。本發(fā)明還提供了CO在制備用于治療或預防NEC的藥物中的用途。該藥物可用于根據(jù)本文所述的方法治療患有或可能患NEC的患者的NEC。該藥物可為本文所述的任何形式，如包含液體或氣體CO的組合物。除非另有限定，本文所用所有技術和科學用語都和本發(fā)明所屬領域的普通技術人員所理解的一樣。適宜的方法和材料見下文，但與本文的方法和材料類似或相同的方法和材料可用于實踐或檢驗本發(fā)明。所有公開出版物，專利申請，專利和其它本文涉及的對比文件的全文內容都包含在文中作參考。如有抵觸，本說明書，包括定義將作為指導。所述材料，方法和實施例均只做舉例而不是限制。本發(fā)明的的一個或多個實施方案的細節(jié)內容將在下文的說明中闡述。本發(fā)明的其它特征，目的，和優(yōu)點從以下的說明和權利要求顯而易見。圖1A是Western印跡圖，它顯示了和非NEC患者(對照)相比較，患有NEC的人類新生兒的腸樣品中，HO-1的表達增加(n＝3)。圖1B是Western印跡圖，它顯示了和母乳喂養(yǎng)的對照組大鼠相比較(對照)，接受間斷低氧和配方喂養(yǎng)(formulafed)的新生大鼠(NEC)中，回腸HO-1蛋白在第四天增長。圖2A是經(jīng)蘇木精和伊紅染色的回腸整體封裝(ilealwholemount)的顯微照片(40X放大率)，顯示母乳喂養(yǎng)對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得。圖2B是經(jīng)蘇木精和伊紅染色的回腸整體封裝的顯微照片(40X放大率)，顯示母乳喂養(yǎng)和CO暴露對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得。圖2C是經(jīng)蘇木精和伊紅染色的回腸整體封裝的顯微照片(40X放大率)，顯示配方喂養(yǎng)加低氧暴露對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得?？捎^察到結構改變包括絨毛萎縮和細胞空泡形成。圖2D是經(jīng)蘇木精和伊紅染色的回腸整體封裝的顯微照片(40X放大率)，顯示配方喂養(yǎng)加低氧暴露和CO暴露對新生大鼠的影響。與圖2C中顯示的樣品比較，可觀察到較少的結構改變。此樣品在第四天獲得。圖3A是經(jīng)末端脫氧核苷酸轉移酶介導的三磷酸脫氧尿苷(dUTP)斷端(nickend)標記(TUNEL)染色的回腸整體封裝的顯微照片(60X放大率)，顯示母乳喂養(yǎng)對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得。圖3B是經(jīng)TUNEL染色的回腸整體封裝的顯微照片(60X放大率)，顯示母乳喂養(yǎng)和CO暴露對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得。圖3C是經(jīng)TUNEL染色的回腸整體封裝的顯微照片(60X放大率)，顯示配方喂養(yǎng)加低氧暴露對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得。取材于低氧/配方喂養(yǎng)的大鼠的回腸與取材于母乳喂養(yǎng)的動物的回腸相比，顯示出增加的TUNEL染色。圖3D是經(jīng)TUNEL染色的回腸整體封裝的顯微照片(60X放大率)，顯示配方喂養(yǎng)加低氧暴露以及CO暴露對新生大鼠的影響。此樣品在第四天獲得?？捎^察到TUNEL陽性的細胞減少。圖4A是柱圖，它顯示了和對照組相比，CO治療可防止低氧暴露加配方喂養(yǎng)的新生大鼠的血清IL-1β水平的增加(P＜0.05)。此數(shù)據(jù)是應用酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)產(chǎn)生的。黑色柱＝暴露于空氣的大鼠；灰色柱＝暴露于CO的大鼠。圖4B是柱圖，它顯示了和對照組相比，CO治療可防止低氧暴露加配方喂養(yǎng)的新生大鼠的血清TNF-α水平的增加(P＜0.05)。此數(shù)據(jù)是應用ELISA測定產(chǎn)生的。黑色柱＝暴露于空氣的大鼠；灰色柱＝暴露于CO的大鼠。圖5是Western印跡圖，它顯示了和對照組相比，CO治療可降低低氧暴露加配方喂養(yǎng)的新生大鼠的回腸COX-2和IL-1β的表達。每種治療的存在(+)或缺乏(-)分別標注于各Western印跡泳道的下方(母乳喂養(yǎng)(BF)，配方喂養(yǎng)加低氧暴露(FF/低氧)，CO暴露(CO))。印跡顯示每組的3-4只動物，并且是該研究中所有動物的代表。圖6是Western印跡圖，它顯示了CO暴露可消除在新生大鼠中實驗NEC誘導的回腸iNOS表達和蛋白硝化(proteinnitration)。每種治療的存在(+)或缺乏(-)分別標注于各Western印跡泳道的下方(母乳喂養(yǎng)(BF)，配方喂養(yǎng)加低氧暴露(FF/低氧)，CO暴露(CO))。圖7是柱圖，它顯示了CO暴露和HO-1的誘導可減少TNF-α/放線菌素D(TNF-α/ActD)誘導的IEC-6細胞的死亡。經(jīng)TNF-α(TNF；10ng/ml)/放線菌素D(ActD；200ng/ml)處理的IEC-6細胞的生存力在18小時后通過測量細胞的ATP含量而被測定。CO治療(CO；灰色柱；250ppm)在給藥TNF-α/ActD前一小時開始，并在整個實驗過程中維持。交叉斜紋柱＝暴露于TNF-α/ActD前先暴露于鈷卟啉(CoPP)16小時的細胞。黑色柱＝暴露于空氣的細胞。CO和CoPP都可顯著減少TNF-α/ActD)誘導的IEC-6細胞的死亡(P＜0.05)。結果是各重復三次進行的三組獨立實驗的平均值±標準誤差。圖8A是Western印跡圖，它顯示了(在24小時)在經(jīng)脂多糖(LPS)和/或低氧(1％氧氣)處理的IEC-6細胞中iNOS蛋白質的表達受到抑制。CO治療開始于加入LPS/低氧之前1小時，并維持于整個實驗過程。LPS(10或100ng/ml)加低氧的組合增加iNOS蛋白表達，但該作用可被CO抑制。每種治療的存在(+)或缺乏(-)分別標注于每條Western印跡的下方(脂多糖(lps)，低氧暴露(低氧)，CO暴露(CO))。圖8B是Western印跡圖，它顯示了在經(jīng)LPS(100ng/ml)/低氧(1％氧氣；lps/低氧)處理的IEC-6細胞中大鼠iNOS啟動子的活性受到CO暴露的抑制。測定細胞的螢光素酶活性。LPS加低氧的組合可使iNOS啟動子的轉錄激活增加4.9±0.3倍(P＜0.05)。CO可限制此轉錄活化至增加1.7±0.2倍(P＜0.05)。結果是各重復三次進行的三組獨立實驗的平均值±標準誤差。圖8C是Western印跡圖，它顯示了在IEC-6細胞中，細胞因子誘導的iNOS蛋白質的表達可被HO-1的誘導或CO治療抑制。IEC-6細胞經(jīng)含有TNF-α(10ng/ml)，IL-1β(500U/ml)，和IFN-γ(1000U/ml)的細胞因子混合物(CM)處理24小時。CO治療(250ppm)開始于加入CM之前1小時，并在整個實驗過程維持。鈷卟啉(CoPP)在CM治療之前16小時給藥。CM增加了IEC-6細胞的iNOS蛋白。CO和CoPP都可抑制細胞因子誘導的iNOS蛋白的增加。每種治療的存在(+)或缺乏(-)分別標注于各Western印跡的泳道的下方(細胞因子混合物(CM)，CO暴露(CO)，鈷卟啉暴露(CoPP))。圖8D是柱圖，它顯示了暴露于CM加CO或CoPP之一的IEC-6細胞上清液中亞硝酸鹽的水平低于暴露于CM和空氣的IEC-6細胞中的亞硝酸鹽水平(由Griess法測定)。細胞因子刺激將亞硝酸鹽增加至17.2±0.9μM，而未受刺激的對照增加到1.4±0.3μM(P＜0.01)。CO和CoPP均可顯著抑制細胞因子的這種作用，分別得到的亞硝酸鹽水平為9.8±0.7和10.4±1.0(與CM刺激的細胞相比較P＜0.05)。黑色柱＝暴露于空氣的細胞；灰色柱＝暴露于CO的細胞；和交叉斜紋柱＝暴露于CoPP的細胞。
發(fā)明內容本文術語“一氧化碳”(或“CO”)描述了氣態(tài)的，壓縮成液態(tài)的，或者溶解于水溶液中的一氧化碳分子。本文術語“一氧化碳組合物″或“包含一氧化碳的藥物組合物”用于描述可給藥患者和/或器官的含有一氧化碳的氣體或液體組合物，例如，NEC累及的器官。熟練醫(yī)師知道在具體應用中優(yōu)選何種形式的藥物組合物，例如氣體，液體，或既有氣體也有液體的形式。本文術語“有效量”和“有效地治療”指一段時間內(包括急性或慢性給藥以及定期的或連續(xù)的給藥)一定量或濃度的一氧化碳，所述量或濃度在其給藥用來產(chǎn)生目的效果或患者體內生理結果的背景下是有效的。本發(fā)明所用有效量一氧化碳包括例如減輕患者NEC的癥狀，或改善預后的量。在氣體的情況下，有效量的CO通常在約0.0000001％到約0.3％重量之間，例如0.0001％到約0.25％重量，優(yōu)選CO重量至少約0.001％，例如至少約0.005％，0.010％，0.02％，0.025％，0.03％，0.04％，0.05％，0.06％，0.08％，0.10％，0.15％，0.20％，0.22％，或0.24％。在CO溶液的情況下，有效量通常在約0.0001到約0.0044gCO/100g溶液，例如至少約0.0001，0.0002，0.0004，0.0006，0.0008，0.0010，0.0013，0.0014，0.0015，0.0016，0.0018，0.0020.0.0021，0.0022，0.0024，0.0026，0.0028，0.0030，0.0032，0.0035，0.0037，0.0040，或0.0042gCO/100g水溶液。優(yōu)選的范圍包括，例如約0.0010到約0.0030gCO/100g液體，約0.0015到約0.0026gCO/100g液體，或者約0.0018到約0.0024gCO/100g液體。熟練的醫(yī)師應理解根據(jù)應用的情況可使用這些范圍外的量。本文術語“患者”描述根據(jù)本發(fā)明提供的方法對其進行治療的動物，人或非人。本發(fā)明明確涉及獸醫(yī)學應用。該術語包括但不限于哺乳動物，例如人，其它靈長類，豬，嚙齒類例如小鼠和大鼠，兔子，豚鼠，倉鼠，牛，馬，貓，狗，綿羊和山羊。本文術語“治療”指延遲患者的起病，抑制，或減輕患者的疾病(例如NEC)的影響。本文術語“壞死性小腸結腸炎”或“NEC”是該領域公認的術語，描述患者尤其是早產(chǎn)兒和新生足月兒的疾病，所述疾病以腸屏障失效，腸壞死，膿毒癥，和多系統(tǒng)器官功能衰竭為特征(OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))。NEC可累及腸的任何部分，例如，小腸下部(回腸)，結腸，和/或上段小腸。發(fā)生壞死性小腸結腸炎的危險性和許多因素相關，例如，低出生體重，低氧，低體溫，低血壓，血液粘滯度過高，酸中毒，或氧自由基的存在(Id.)。其他危險因素包括臍動脈插管，交換輸血，重量滲摩爾濃度過高的食物，濃縮細胞輸輸注，或鈣拮抗劑(Id.)過量。這些因素可造成腸系膜缺血，引起腸壁細菌感染，從而導致感染組織的壞死和/或腸壁穿孔和膿毒癥(Id.)。NEC也可發(fā)生于因胃腸或其他疾病情況接受外科手術的新生兒(Id.)。熟練的醫(yī)師應理解可通過該領域任何已知的方法，診斷患者患有NEC，例如，通過內科醫(yī)師的診斷(例如，應用影像技術如超聲波檢查，x射線，和/或血液檢查)。被認為可能患NEC的個體可從本發(fā)明中尤為受益，主要因為在出現(xiàn)任何NEC的跡象前就可開始預防性治療?！翱赡芑疾　钡膫€體包括，例如，早產(chǎn)兒和新生嬰兒，或患有上述任何疾病情況或有上述危險因素的個體。熟練的醫(yī)師應理解可通過該領域任何已知的方法，診斷患者可能患NEC，例如，通過內科醫(yī)師的診斷(例如，通過內科醫(yī)師對患者危險因素的評估)。制備氣體組合物CO組合物可以是氣體CO組合物?？捎糜诒景l(fā)明的方法中的壓縮氣體(compressedgas)或加壓氣體(pressurizedgas)，可自任何商業(yè)來源獲得，并可位于任何類型的適合儲存壓縮氣體的容器(vessel)中。例如，壓縮或加壓氣體可以自任何提供醫(yī)用壓縮氣體例如氧氣的來源獲得。本文術語“醫(yī)用級”氣體，指適合給藥本文所定義的患者的氣體。提供用于本發(fā)明的方法的加壓氣體包括CO時，可使得所需終組合物中的所有氣體(例如，CO，He，NO，CO2，O2，N2)在同一容器內，除NO和O2不能儲存在一起的情況?？蛇x的，本發(fā)明的方法可使用多個含有單一氣體的容器進行。例如，可提供含或不含其它氣體的含CO的單個容器，其含有的氣體可選地與室內空氣或其它容器中含有的氣體混合，所述其它容器例如含有氧氣，氮氣，二氧化碳，壓縮空氣，或任何其它適合的氣體或其混合物的容器。根據(jù)本發(fā)明給藥患者的氣體組合物通常含有0％至約79％重量的氮氣，約21％至約100％重量的氧氣和約0.0000001％至約0.3％重量(相當于約1ppb或0.001ppm至約3,000ppm)CO。優(yōu)選氣體組合物中氮氣的量是約79％重量，氧氣量是約21％重量且CO量是約0.0001％至約0.25％重量。優(yōu)選CO的量是至少約0.001％，例如，至少約0.005％，0.010％，0.02％，0.025％，0.03％，0.04％，0.05％，0.06％，0.08％，0.10％，0.15％，0.20％，0.22％，或0.24％重量。CO的優(yōu)選范圍包括0.005％至約0.24％，約0.01％至約0.22％，約0.015％至約0.20％，和約0.025％至約0.1％重量。注意到根據(jù)應用情況，具有大于0.3％(例如1％或更高)CO濃度的氣體CO組合物可短期使用(例如一次或數(shù)次呼吸)?？捎脷怏wCO組合物產(chǎn)生包含CO氣體的環(huán)境(atmosphere)。包含適當水平的CO氣體的環(huán)境可通過如下方式產(chǎn)生提供含有包含CO氣體的加壓空氣的容器，并將所述加壓氣體從容器中釋放到室或空間內，在該室或空間內形成包括CO氣體的環(huán)境?？蛇x地，所述氣體可被釋放到使氣體在呼吸面罩或呼吸管內達到最高濃度的一種儀器中，從而在呼吸面罩或呼吸管中創(chuàng)造出包含CO氣體的環(huán)境，使得患者成為該室內唯一暴露于非常高水平的CO的人。環(huán)境中CO的水平可通過本領域已知的任何方法檢測或監(jiān)測。這種方法包括電化學檢測，氣相色譜，放射性同位素計數(shù)，紅外吸收，比色法，和基于選擇性膜的電化學方法(參見，例如，Sunderman等，Clin.Chem.282026-2032，1982；Ingi等，Neuron16835-842，1996)。亞百萬分數(shù)級(亞-ppm)CO水平可通過例如，氣相色譜和放射性同位素計數(shù)檢測。此外，本領域已知亞-ppm范圍內的CO水平可通過中紅外氣體傳感器(midinfraredgassensor)在生物組織中檢測(參見，例如，Morimoto等，Am.J.Physiol.Heart.Circ.Physiol280H482-H488，2001)。CO傳感器和氣體檢測儀可自多種商業(yè)來源獲得。制備液體組合物包含CO的組合物也可以是液體CO組合物。液體可通過本領域已知的任何使氣體溶于液體的方法制成CO組合物。例如，所述液體可以置于所謂的“CO2溫育箱”中并暴露于持續(xù)的CO氣流，優(yōu)選由二氧化碳平衡，直到液體中CO達到所需的濃度。另一實施例中，CO氣體可直接″吹入(bubbled)″液體中，直到液體中CO達到所需的濃度。溶解于給定水溶液中的CO量隨溫度的降低而增加。在另一實施例中，適宜的液體可流經(jīng)允許氣體進行擴散的管道系統(tǒng)(tubing)，該管道系統(tǒng)在包含CO的環(huán)境(例如利用例如體外膜氧合器(extracorporealmembraneoxygenator)的儀器)中運行。CO擴散進入液體產(chǎn)生液體CO組合物。大多數(shù)情況下，這種意圖被引入活體動物體內的液體組合物，當其被引入動物體內時，溫度是37℃或約為37℃。液體可以是本領域熟練技術人員已知的任何適合給藥患者的液體(參見，例如OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))。通常，液體是水溶液。溶液的實例包括磷酸鹽緩沖的鹽水溶液(PBS)，CelsiorTM，PerfadexTM，柯林斯(Collins)溶液，檸檬酸鹽溶液，和威斯康星大學(UniversityofWisconsin)(UW)溶液(OxfordTextbookofSurgery，MorrisandMalt編，OxfordUniversityPress(1994))。在本發(fā)明的一個實施方案中，液體是林格氏液(Ringer′ssolution)，例如，乳酸鹽林格氏溶液，或任何可輸注入患者體內的其它液體。在另一實施方案中，液體包括血液，例如全血。任何適合的液體可通過氣體擴散器飽和到給定的CO濃度?？蛇x地，可用經(jīng)質量控制含有給定水平的CO的預制溶液?？赏ㄟ^使用帶有與CO分析儀連接的透氣但不透液的膜的儀器對劑量進行精確控制。可將溶液飽和到所需有效濃度并保持在這些濃度。用CO組合物治療患者可以通過本領域已知給藥患者氣體和/或液體的任何方法，用CO組合物來治療患者。CO組合物可被給藥患有或易患NEC的患者，例如，新生兒或早產(chǎn)嬰兒。本發(fā)明涉及將CO組合物的系統(tǒng)性給藥患者(如通過吸入和/或攝入)，和將所述組合物局部給藥至患者的胃腸道(如通過攝入，吹入，和/或導入腹腔)。系統(tǒng)地遞送CO氣體CO組合物可系統(tǒng)地遞送給患者，例如患有或易患NEC的患者。氣體CO組合物通常通過嘴或鼻道吸入肺內給藥，在肺內CO很容易吸收到患者的血流內。治療性氣體組合物中所用活性化合物(CO)的濃度有賴于CO的吸收，分布，滅活和排出(通常通過呼吸)速率以及本領域熟練技術人員已知的其它因素。還應理解，對于任何具體受試者而言，具體的劑量方案應根據(jù)個體需要和管理或監(jiān)督組合物給藥者的職業(yè)經(jīng)驗隨時間進行調整，而且前述的濃度范圍只是示例性的，而不是為限制所要求的組合物的范圍或實踐。本發(fā)明還涉及急性，亞急性和慢性給藥CO，依據(jù)如患者NEC的嚴重程度和病程而定。CO可在足以治療病情并顯示所需藥理學或生物學效應的一段時間內遞送給患者(包括不定地給藥)。以下是一些可用于對患者給藥氣體CO組合物的方法和器械的實例。呼吸機(ventilator)可購買醫(yī)用級CO(可有多種濃度)，所述CO與空氣或其它含有氧氣的氣體混合于壓縮氣體標準罐中(例如，21％O2，79％N2)。所述氣體為非活性(non-reactive)的，而本發(fā)明方法所需濃度遠遠低于可燃范圍(空氣中10％)。在醫(yī)院中，推定要將氣體遞送到床邊，在那里使之與氧氣或室內空氣在混合器(blender)內混合，達到所需的ppm濃度(百萬分之幾)?；颊咄ㄟ^呼吸機吸入氣體混合物，呼吸機的流率根據(jù)患者的舒適程度和需要設定。通過肺圖(即呼吸速率，潮氣量等)可確定該流率?？蓪⒎乐够颊卟槐匾亟邮艹^所需量的CO的自動防故障機制(fail-safemechamism)設計在遞送系統(tǒng)中。患者的CO水平可通過研究以下指標進行監(jiān)測(1)靜脈血中可測的碳氧血紅蛋白(carboxyhemoglobin)(COHb)，和(2)從呼吸機側部收集的呼出CO?？筛鶕?jù)患者的健康狀況和標志物調節(jié)CO暴露。如果有必要，還可通過吸入100％的氧氣洗出CO。CO是不被代謝的，因此除很小一部分被轉化成CO2，無論吸入多少最后都被呼出。CO可以和任何水平的O2混合，以治療性遞送CO而不導致隨后的低氧。面罩和幕(Tent)含有CO的氣體混合物如上述方法制備，從而允許患者通過面罩或幕被動吸入。吸入濃度可改變，并通過簡單地換成吸入100％的O2進行洗滌。在面罩或幕或在其附近監(jiān)測CO水平，并用自動防故障機制防止吸入過高濃度的CO。便攜式吸入器(Portableinhaler)壓縮CO可被包裝入便攜式吸入器并吸入經(jīng)過計量的劑量，例如使得不住院的受體接受間歇性治療?？蓪⒉煌瑵舛鹊腃O包裝到容器中。該儀器可簡單到只是帶有開-關閥和患者可根據(jù)標準方案或需要吸入CO的管子并含有適宜地稀釋的CO的小儲罐(例如低于5kg)。靜脈內人工肺(IntravenousArtificialLung)設計為遞送O2和去除CO2的人工肺(用于血液中氣體交換的導管器械)可用于CO遞送。該導管植入后，定位于一根大靜脈中并可系統(tǒng)性遞送所需濃度的CO或將其遞送到局部位點。所述遞送可以是短時間內遞送高濃度CO到程序位點的局部遞送，如接近小腸(所述高濃度在血流中迅速稀釋)，或者相對較長的時間內暴露于較低濃度的CO(參見，如Hattler等，Artif.Organs18(11)806-812(1994)；和Golob等，ASAIOJ.，47(5)432-437(2001))。正常氣壓小室(Normobaricchamber)在某些情況下，需要將患者整體暴露于CO?；颊唔毼挥诔錆MCO的密閉艙中，該艙內充滿的CO的水平不會導致患者有危險，或者該水平造成可接受的危險性但不會對暴露的旁觀者造成危險。完成暴露后，用空氣(例如，21％O2，79％N2)充滿該艙，并使用CO分析儀分析樣品，以保證在允許患者離開暴露系統(tǒng)前沒有任何CO存留。系統(tǒng)性遞送液體CO組合物本發(fā)明還涉及，可被產(chǎn)生用于系統(tǒng)性遞送給患者的液體CO組合物，例如輸注法給藥患者。例如，液體CO組合物，如CO飽和的林格氏溶液可輸注給患有或易患NEC的患者。可選或此外，被CO部分或完全飽和的全(或部分)血可輸注入患者。本發(fā)明還涉及使用能夠遞送CO氣體或液體劑型的試劑(例如CO釋放性膠(COreleasinggum)，乳膏(cream)，軟膏劑(ointment)或膜片(patch)。CO胃腸道局部治療可選或此外，CO組合物可被直接用于胃腸道，如整個胃腸道的內部和/或外部，或其任何部分。氣體組合物可通過本領域任何已知的吹入氣體的方法直接用于患者的胃腸道，如早產(chǎn)嬰兒或新生兒。例如氣體，如二氧化碳分別在內鏡和腹腔鏡操作中常被吹入患者的胃腸道和腹腔中，以便于檢查(參見，例如OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))。熟練的技術人員應理解類似的方法可用于對患者的胃腸道直接給藥CO組合物。本文還涉及本發(fā)明可用于幫助防止腹腔鏡和內鏡檢查后發(fā)生的NEC，如結腸鏡和食道胃十二指腸鏡檢查后的NEC。CO的含水組合物也被局部地給藥患者的胃腸道。含水形式的組合物可通過本領域任何已知的將液體給藥患者的方法來給藥患者。和氣體組合物一樣，水組合物可直接用于胃腸道的內部和/或外部。例如，水溶液的形式可口服給藥，如使患者攝入膠囊劑形或非膠囊劑形的CO的水溶液組合物。又例如，液體如含有溶解的CO的鹽水溶液，可分別在內鏡和腹腔鏡手術中被注射入患者的胃腸道和腹腔中。此外，原位(insitu)暴露可通過使用液體CO組合物充洗胃腸道或其一部分來進行(參見OxfordTextbookofSurgery，Morris和Malt編，OxfordUniversityPress(1994))。血紅素加氧酶-1和其它化合物和NEC的其他治療的應用本發(fā)明還涉及隨同一氧化碳的給藥而誘導或表達血紅素加氧酶-1(HO-1)。例如，HO-1可在患有或易患NEC的患者體內誘導。本文術語“誘導”指用細胞本身編碼蛋白的內源性(例如非重組的)基因，造成分離的細胞或組織，器官或動物的細胞中上述蛋白例如HO-1的生成增加。HO-1可通過本領域任何已知的方法在患者體內誘導。例如HO-1的產(chǎn)生可通過氯化血紅素(hemin)，鐵卟啉，或鈷卟啉誘導。各種非血紅素(non-heme)制劑包括重金屬，細胞因子，激素，一氧化氮，COCl2，內毒素和熱休克也是HO-1的表達的強誘導物(Choi等，Am.J.Respir.CellMol.Biol.159-19，1996；Maines，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.37517-554，1997；和Tenhunen等，J.Lab.Clin.Med.75410-421，1970)。多種導致氧化應激的制劑可高度誘導HO-1，所述制劑包括過氧化氫，谷胱甘肽耗竭物，UV輻射，內毒素和氧過多(Choi等，Am.J.Respir.CellMol.Biol.159-19，1996；Maines，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.37517-554，1997；和Keyse等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA8699-103，1989)?！鞍琀O-1誘導物的藥物組合物”指包括任何能夠在患者體內誘導HO-1的試劑的藥物組合物，例如任何上述的試劑，例如血紅素，鐵卟啉，和/或鈷卟啉。通過基因轉移可增加細胞中HO-1的表達。本文術語“表達”指通過外源性給藥基因(例如重組基因)造成分離的細胞或組織，器官或動物的細胞中的蛋白生成增多，所述蛋白例如HO-1或鐵蛋白。HO-1或鐵蛋白優(yōu)選是作為受體的同一物種的(例如人，小鼠，大鼠等)，從而最小化任何免疫反應?？赏ㄟ^組成型啟動子(例如巨細胞病毒啟動子)或組織特異的啟動子(例如用于哺乳動物細胞的乳清(milkwhey)啟動子或用于肝細胞的白蛋白啟動子)驅動表達。編碼HO-1或鐵蛋白的適宜基因治療載體(例如逆轉錄病毒，腺病毒，腺伴隨病毒(AVV)，痘病毒(例如痘苗病毒)，人類免疫缺陷病毒(HIV)，小鼠極小病毒(theminutevirusofmice)，乙型肝炎病毒，流感病毒，單純皰疹病毒-1型，和慢病毒)可通過口服，吸入或注入給藥到腸壁，腸腔或腹腔，來給藥患有或易患NEC的患者。類似的，編碼HO-1或去鐵鐵蛋白的質粒載體可作為例如裸露的DNA的形式，位于脂質體中的形式，或位于微顆粒中的形式給藥。此外，外源性HO-1蛋白可通過本領域已知的任何方法直接給藥患者。外源性HO-1可直接給藥，作為上述在患者體內誘導或表達HO-1的方法的補充或可選方法。所述HO-1蛋白可在例如脂質體內，和/或作為融合蛋白例如TAT融合蛋白(參見，例如，Becker-Hapak等，Methods24247-256，2001)的形式給藥患者?？蛇x或此外，HO-1的任何代謝產(chǎn)物例如膽紅素，膽綠素，鐵，和/或鐵蛋白可與一氧化碳聯(lián)合對患者給藥，以防止或治療NEC。此外，本發(fā)明涉及將除了鐵蛋白以外的鐵結合分子，例如去鐵敏(DFO)，鐵右旋糖苷，和/或去鐵鐵蛋白，給藥患者。在本發(fā)明中還涉及，可抑制催化任何這些產(chǎn)物降解的酶(例如膽綠素還原酶)以創(chuàng)造/增強所需的效果。上述任何物質可通過口服，靜脈內，腹腔內，或直接給藥與腸道內部或外部而給藥。本發(fā)明中也可以將在給藥化合物(例如CO釋放性化合物，例如光活化的CO釋放性化合物)后，將CO釋放到機體的化合物用于本發(fā)明的方法中，所述化合物例如二錳十羰基，三羰基二氯釕(II)二聚體，和二氯甲烷(例如，在400-600mg/kg之間的劑量，例如，約500mg/kg)，也可以使用碳氧血紅蛋白以及供給CO的血紅蛋白替代物。上述物質可以任何方式給藥患者，例如通過口服，腹膜內，靜脈內，或動脈內給藥。上述任何化合物可局部和/或系統(tǒng)地給藥患者，并且可以聯(lián)合給藥。本發(fā)明還涉及聯(lián)用給藥患者CO和其它任何已知的治療NEC的方法或化合物來治療NEC，所述其它方法或化合物例如停止或減少經(jīng)口喂養(yǎng)率，例如至少1天，例如2，3，5，或10天，或更多；給予患者靜脈內水化和/或營養(yǎng)，鼻胃減壓，或抗微生物劑；手術干預；和/或引流患者的腹腔。手術干預包括，如切除腸的受累部分。本文還涉及通過聯(lián)合給藥患者CO和其它任何已知的防止NEC的方法，如改變患者的飲食，來預防性治療易患NEC的患者。以下實施例通過舉例部分說明了本發(fā)明，所述實施例不應理解為從任何方面限制本發(fā)明。實施例1CO減少NEC的發(fā)病人類腸標本的采集在手術時采集人類腸標本并迅速冷凍。壞死性小腸結腸炎的動物模型用催產(chǎn)素(Pitocin)(1U)皮下注射，使有孕將產(chǎn)的Sprague-dawley大鼠誘導到產(chǎn)期(term)。出生后(第0天)，立即將新生大鼠稱重并隨機分為兩大組。這些大鼠或被留在母親身邊并母乳喂養(yǎng)，或與母親分離在恒溫箱(OhioMedicalProducts，Madison，WI)中圈養(yǎng)，強飼以專門的嚙齒動物配方喂養(yǎng)一天兩次，并在每次喂養(yǎng)前經(jīng)受10分鐘的低氧(5％O2，95％N2，PraxAir，Pittsburgh，PA)。此配方通過將15克Similac60/40(RossPediatrics，Colobus，OH)加入75毫升Esbilac犬奶替代物中(Pet-AgInc.，Hampshire，IL)組成。每組大鼠進一步被隨機抽出，不接受任何附加治療或接收每天一小時的CO治療(250百萬分之一；ppm，第1-3天)。CO如下所述進行遞送。這些新生大鼠將在第四天被處死。檢查其腸是否有肉眼可見的壞死改變和腸積氣。末段回腸的最后2厘米被采集用來作形態(tài)學研究，并且粘膜碎屑被收集用來檢測蛋白質。CO暴露實驗動物暴露于濃度為250ppm的CO。簡而言之，含1％CO的空氣和空氣(21％氧氣)在不銹鋼混合圓柱體內混合，然后以12升/分的流速導入3.70ft3的玻璃暴露小室內。用CO分析儀(Interscan，Chatsworth，CA)持續(xù)測定該小室內的CO水平。CO的濃度一直維持于250ppm。大鼠按要求被放置于此暴露室內。形態(tài)學分析腸標本如上所述被采集。按照標準方案制作蘇木精和伊紅(H&E)染色的載玻片，并在光學顯微鏡下檢查。病理學家可輕易地觀察到腸上皮形態(tài)學變化的存在，包括絨毛核(villouscore)分離，粘膜下層水腫，和上皮脫落(epithelialsloughing)。血清細胞因子測定收集血清，用于通過依照產(chǎn)品說明使用QuantikineELISA(R&Dsystems，Minneapolis，MN)，測定大鼠TNF-α和IL-1β的水平。細胞培養(yǎng)大鼠小腸上皮細胞系IEC-6是從美國典型培養(yǎng)物保藏中心(AmericanTypeCultureCollection)(Manassas，VA)獲得的。細胞在含有4.5g/L葡萄糖的Dulbecco’s改良Eagle’s培養(yǎng)基(Bio-Whittaker，Walkersville，MD)中，在37℃和10％CO2的條件下生長，所述培養(yǎng)基中補充加入了5％胎兒牛血清，0.02mM谷氨酰胺(Gibco，GrandIsland，NY)，0.1U/mL的胰島素，和100U/mL青霉素/100μg/mL鏈霉素。用第3代至20代的細胞進行實驗。生存力細胞的生存力通過依據(jù)制造商的方案來測量ATP水平(CellTiter-GloTM；Promega)而測定的。Western印跡分析IEC-6細胞或回腸粘膜碎片收集于含有20mmol/LTris和100μmol/L苯基甲基磺酰氟(Sigma)，1μmol/L亮抑酶肽(Sigma)，和1μmol/L正礬酸鈉(Sigma)的裂解緩沖液中。蛋白質通過重辛可寧酸(bicinchoninic)(BCA)蛋白測定法(Pierce，Rockford，IL)定量。對細胞裂解產(chǎn)物(30μg)進行十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳。報告物測定pGL3/2大鼠iNOS啟動子-螢光素酶報告物的構建如Beck等，F(xiàn)EBSLett43535-38(1998)所述。生長于35mm孔中的IEC-6細胞用4μLLipofectamine2000(Invitrogen)，0.15μgpGL3/2DNA和0.5μgpIEP-LacZDNA轉染，作為轉染效率的對照。轉染的二十四小時后，將細胞處理6小時，然后收集細胞裂解產(chǎn)物并使用發(fā)光計(luminometer)(Berthold，Germany)進行螢光素酶測定(Promega)。亞硝酸鹽測定培養(yǎng)基中的亞硝酸鹽(nitrite)(NO2-)用Griess方法測定。統(tǒng)計學分析結果用平均值±SEM表示。組間差異用單側方差分析(one-wayanalysisofvariance)進行分析，并用Student-Newman-Keulspost-hoc檢驗進行所有成對比較(SigmaStat；SPSS，Chicago，IL)。當P小于0.05時，認為存在統(tǒng)計學顯著性。NEC中的腸HO-1蛋白質增加使用患有NEC的患者的人腸標本和來自非炎癥狀態(tài)患者的對照腸標本分析HO-1的表達。與對照相比，NEC標本的全細胞裂解物顯示HO-1的表達增加(圖1A)。為確定實驗NEC模型中腸HO-1蛋白水平是否增加，新生大鼠被隨機分組，隨意地給予母乳喂養(yǎng)或如上所述經(jīng)受間斷低氧和配方喂養(yǎng)(H/F)。全部動物于生命的第4天被處死，收集其末端回腸粘膜并用Western印跡分析。和母乳喂養(yǎng)的對照動物相比，H/F組的HO-1蛋白表達增加(圖1B)。這與之前在腸和其他器官中的發(fā)現(xiàn)，即多種損傷后HO-1會上調一致。CO防止NEC發(fā)病母乳喂養(yǎng)組和H/F組的新生大鼠被隨機分組，分別在第1，2和3天接受每天一小時劑量的CO(250ppm)，或沒有附加治療。全部動物將在生命第4天被處死。和母乳喂養(yǎng)的對照組(圖2A，2B，2C和2D)相比較，在H/F組中鑒定了宏觀(gross)病理特征包括腸道積氣和壞死(見于下面表1)和與實驗性NEC一致的組織學改變。CO治療對母乳喂養(yǎng)動物的宏觀和微觀評估無影響，并明顯防止H/F組中的大鼠的實驗性NEC的發(fā)病。在H/F組中死亡細胞的TUNEL染色增加，其可被CO治療減少(圖3A，3B，3C和3D)。表1.在出生后第4天新生大鼠回腸的病理學改變CO減少炎癥的系統(tǒng)標志物實驗動物被處死時，收集其血清用來測定TNF-α和IL-1β的水平作為組織炎癥的系統(tǒng)標志物。和母乳喂養(yǎng)對照組相比較，H/F組的TNF-α和IL-1β的水平都增加了33.2倍和18.5倍(圖4A和4B；P＜0.05)。CO可顯著降低此種增加，分別導致TNF-α和IL-1β僅3倍和2.5倍的增加(P＜0.05)。這些發(fā)現(xiàn)證明外源性CO可消除此動物模型中一些系統(tǒng)性后果。CO減少炎癥的腸道局部標志物測定環(huán)加氧酶-2(COX-2)和白細胞介素-1β(IL-1β)，二者都是腸道炎癥的標志物，并被證實與NEC相關。用Western印跡法分析回腸粘膜蛋白裂解物中的COX-2和IL-1β。在此研究中，H/F組和在約一半的動物中的回腸COX-2以及IL-1β蛋白水平的增加相關(圖5)。與其對組織學和血清細胞因子的保護作用一致，CO治療降低這兩種蛋白的表達。CO也降低此模型中回腸HO-1的表達(數(shù)據(jù)未顯示)，很可能代表對損傷反應而出現(xiàn)的腸損傷和代償性改變的降低。CO抑制腸可誘導型一氧化氮合酶(iNOS)的生成iNOS在患NEC新生兒的人腸樣品和NEC實驗模型中的大鼠腸中都增加。iNOS的誘導和一氧化氮(NO)的生成被認為通過形成反應性的氮類物(nitrogenspecies)直接造成組織損傷。此研究中對回腸粘膜樣品的Western印跡分析證明H/F導致iNOS和蛋白質硝化的水平增加(圖6)。硝化作用和硝基酪氨酸(nitrotyrosine)的生成被認為是由過氧亞硝酸鹽，即NO和過氧化物相互反應的毒性產(chǎn)物造成的。iNOS蛋白和亞硝基酪氨酸(nitrosotyrosine)在經(jīng)CO治療的動物體內顯著減少，說明CO通過減少/防止NO的生成在腸道起保護作用。HO-1/CO抑制IEC-6細胞死亡為鑒定是HO-1或CO是否在體外抑制細胞死亡，使用大鼠腸上皮細胞系IEC-6。細胞死亡通過用腫瘤壞死因子-α(TNF-α)(10ng/ml)加放線菌素-D(ActD；200ng/ml)處理而誘導。細胞生存力通過對粘附細胞的結晶紫(crystalviolet)染色和細胞ATP含量的評估而分析。TNF-α/ActD降低IEC-6細胞的生存力至未受處理的對照組的24±2.1％(圖7；P＜0.05)。CO顯著抑制TNF-α/ActD誘導的細胞死亡，最終生存力為未受處理的對照組的54±5.6％(P＜0.05)。單用CO在體外對IEC-6細胞的生存力沒有可以檢測到的影響。被CoPP誘導的HO-1有相似的保護作用。CO防止iNOS上調/NO生成研究了CO在體外可否抑制腸上皮細胞iNOS的上調。用Western印跡法分析LPS和/或1％氧氣(低氧)對iNOS蛋白的作用。這些研究證明LPS/低氧增加iNOS蛋白，此作用可被CO抑制(圖8A)。CO對大鼠iNOS啟動子的轉錄激活的效應在受LPS和低氧刺激的IEC-6細胞中測定(圖8B)。使用螢光素酶分析測定，LPS加低氧的組合導致iNOS啟動子的轉錄激活增加4.9±0.3倍(P＜0.05)。CO限制此轉錄激活至僅有1.7±0.2倍的增加(P＜0.05)。此外，CO對IEC-6細胞的NO生成的效應通過測量亞硝酸鹽而測定。用已知可上調iNOS的細胞因子混合物(TNF-α，IL-1β，干擾素-γ)刺激IEC-6細胞。細胞因子刺激使iNOS蛋白增加(圖8C)，并且使亞硝酸鹽增加至17.2±0.9μM，而未受刺激的對照組為1.4±0.3μM(P＜0.01；圖8D)。CO和CoPP可顯著抑制此細胞因子效應，分別得到9.8±0.7和10.4±1.0的亞硝酸鹽水平(P＜0.05)。上述數(shù)據(jù)顯示HO-1在患NEC的人新生兒腸標本和新生大鼠實驗性NEC模型中的回腸粘膜內均上調。每天一小時外源性CO的遞送防止NEC的發(fā)病。這和以血清TNF-α和IL-1β測定的系統(tǒng)性炎癥及以回腸粘膜IL-1β和COX-2的表達測定的局部炎癥的減少相關。NEC的發(fā)病也與回腸粘膜iNOS的表達和蛋白質硝化的增加相關。CO療法減弱iNOS和亞硝基化壓力(stress)的增加。在體外，HO-1的誘導或CO對IEC-6細胞內TNF-α/ActD誘導的細胞死亡起保護作用。另外在體外，CO防止iNOS的誘導和NO的生成。HO-1和其催化的副產(chǎn)品(by-products)，包括CO，很可能在腸損傷后起防御作用。上述數(shù)據(jù)證明患NEC動物的回腸粘膜內，HO-1蛋白的水平增加，這和之前證明在缺血/再灌注和失血性休克模型中，腸HO-1增加的研究相一致。腸移植和缺血/再灌注之后，通過預調節(jié)(pre-conditioning)或通過藥物學(pharmacologically)進行的HO-1誘導是細胞保護性的。防止NEC發(fā)生的CO治療也防止HO-1上調(upregulation)。此HO-1表達的抑制可能因于直接的負反饋環(huán)(negativefeedbackloop)；然而，這很可能是繼發(fā)于對腸損傷后的HO-1上調的保護作用。每天一小時CO吸入療法(250ppm)足夠防止NEC的發(fā)病。CO在此NEC動物模型中的保護作用很可能是多因素的。上述數(shù)據(jù)表明CO給藥導致體內腸細胞凋亡減少(如TUNEL染色測定的)以及在體外對TNF-α/ActD誘導的IEC-6細胞死亡的改善。CO療法還與系統(tǒng)和局部炎癥介質的作用(elaboration)降低有關。iNOS/NO與炎性腸病，實驗性回腸炎，內毒素休克和NEC中的粘膜損傷和腸道屏障失效相關。上述數(shù)據(jù)證明CO在體外和體內降低iNOS的上調，此外也減少體內亞硝基酪氨酸的合成。過氧亞硝酸鹽被認為是負責腸細胞毒性和凋亡的反應性氮類物，其和蛋白質反應導致酪氨酸殘基的硝化。此類物被認為是通過NO和過氧化物間的相互作用形成的。CO介導的腸細胞的保護作用可通過對iNOS蛋白上調的抑制，減少隨后的NO和過氧亞硝酸鹽的生成來介導。用CO防止NEC的發(fā)病涉及維持胃腸動力和防止不適當細菌的建群。改變的腸道建群已知對NEC發(fā)病有貢獻?？傊緦嵗f明每天一小時CO療法防止配方喂養(yǎng)/低氧新生大鼠發(fā)生實驗性NEC。其機制看來涉及iNOS表達和蛋白質硝化的抑制。實施例2.治療NEC的方案以下實例說明了用于治療患有或易患NEC的患者的方案。此實例還顯示了在外科手術前，過程中和/或操作后患者的治療方案，所述手術例如治療NEC的外科手術，如切除部分腸管的外科手術。熟練的醫(yī)師應理解根據(jù)患者的個體需要可采用以下描述的任何方案，并且可以和任何其他NEC的治療聯(lián)合應用?；颊叩腃O治療可從患者被診斷為患有NEC或具有與NEC相關的任何情況，或具有與患者發(fā)生NEC的可能性增加相關的任何危險因素的當天開始?；颊呖晌霃?0ppm到1000ppm濃度的CO，例如，約100ppm到約800ppm，約150ppm到約600ppm，或約200ppm到約500ppm的CO。優(yōu)選的濃度包括例如，約30ppm，50ppm，75ppm，100ppm，125ppm，200ppm，250ppm，500ppm，750ppm，或約1000ppm?？蓪O間斷或連續(xù)地給藥患者?？蓪O給藥患者約1，2，4，6，8，10，12，14，18，或20天，或超過20天，如1，2，3，5，或6個月，或直至患者不再表現(xiàn)NEC的癥狀，或直至患者被診斷為不再易患NEC。在選定的一天，CO可全天連續(xù)地給藥，或間斷地給藥，例如每天單次吸入CO(選用高濃度)，或直至每天23小時，如直至每天20，15，12，10，6，3，或2小時，或至每天1小時。對于給藥CO聯(lián)合外科手術治療NEC，在外科手術以前，其間和/或以后可將CO系統(tǒng)地或局部地給藥患者?；颊呖晌霃?0ppm到1000ppm濃度的CO，例如，約100ppm到約800ppm，約150ppm到約600ppm，或約200ppm到約500ppm。優(yōu)選的濃度包括例如，約30ppm，50ppm，75ppm，100ppm，125ppm，200ppm，250ppm，500ppm，750ppm，或約1000ppm。在術前，可將CO間斷或連續(xù)給藥患者，共約1，2，4，6，8，10，12，14，18，或20天，或超過20天?？蛇x或此外，可將CO在手術期間給藥患者，如通過吸入和/或局部給藥?？蛇x或此外，可將CO在術后給藥患者，例如手術完成后立刻，并在手術完成后持續(xù)約1，2，3，5，7，或10小時，或約1，2，5，8，10，20，30，50，或60天，不定期，或直至術后患者不再患有或易患NEC。本文描述了本發(fā)明的一些實施方案。然而應理解可進行各種修飾而不偏離本發(fā)明的精神和范圍。相應地，其它實施方案也在以下的權利要求的范圍內。權利要求1.治療患者的壞死性小腸結腸炎的方法，所述方法包括判定患有或易患壞死性小腸結腸炎的患者；且給藥該患者一種藥物組合物，所述組合物包含有效治療該患者的壞死性小腸結腸炎的量的一氧化碳。2.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物是通過吸入給藥患者的。3.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物是液體形式的，并經(jīng)口服給藥患者。4.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物直接給藥至患者的腹腔。5.權利要求1的方法，其中所述患者是嬰兒。6.權利要求5的方法，其中所述患者是早產(chǎn)嬰兒。7.權利要求1的方法，其中所述患者顯示低出生體重。8.權利要求1的方法，其中所述患者顯示低氧。9.權利要求1的方法，其中所述患者顯示低體溫。10.權利要求1的方法，其中所述患者顯示低血壓。11.權利要求1的方法，其中所述患者顯示血液高粘滯性。12.權利要求1的方法，其中所述患者顯示酸中毒。13.權利要求1的方法，其中所述患者已接受交換輸血。14.權利要求1的方法，其中所述患者已接受至少一種重量滲摩爾濃度過高的食物。15.權利要求1的方法，其中所述患者已接受濃縮細胞輸注。16.權利要求1的方法，其中所述患者已接受過量的鈣拮抗劑。17.權利要求1的方法，其中所述患者患有腸系膜缺血。18.權利要求1的方法，其中所述患者患有腸壁的細菌感染。19.權利要求1的方法，其中所述患者已接受外科手術。20.權利要求1的方法，其中所述患者將要接受外科手術。21.權利要求1的方法，其中所述患者正在接受外科手術。22.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物是氣體形式。23.權利要求1的方法，還包括給予患者以下治療之一靜脈內營養(yǎng)；靜脈內水合作用；抗微生物劑；對患者實施鼻胃減壓，對患者實施外科手術；和對患者實施腹腔引流。24.治療患者的壞死性小腸結腸炎的方法，所述方法包括(a)鑒定患有壞死性小腸結腸炎的患者；(b)對患者實施外科手術切除患者腸的病變部分；和(c)在(a)之后，并且在(b)之前，期間，或之后，對該患者給藥包含有效治療該患者的壞死性小腸結腸炎的量的一氧化碳的藥物組合物。25.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物是通過人工肺給藥的。26.權利要求1的方法，其中所述藥物組合物是通過體外膜氣體交換裝置給藥給藥的。27.治療患者的壞死性小腸結腸炎的方法，所述方法包括(a)鑒定患有或易患壞死性小腸結腸炎的患者；(b)提供含有加壓氣體的容器，所述加壓氣體包含一氧化碳氣體；(c)從所述容器內釋放加壓氣體，形成含有一氧化碳氣體的環(huán)境；和(d)將患者暴露于所述環(huán)境，該環(huán)境中一氧化碳的量足以治療患者的壞死性小腸結腸炎。28.包含醫(yī)用級別的壓縮一氧化碳氣體的容器，所述容器帶有標簽，其表明該氣體可用于治療患者的壞死性小腸結腸炎。29.權利要求28的容器，其中的一氧化碳氣體與含有氧氣的氣體混合。30.權利要求29的容器，其中的混合物中一氧化碳氣體的濃度至少約0.025％。31.權利要求29的容器，其中的混合物中一氧化碳氣體的濃度至少約0.05％。32.權利要求29的容器，其中的混合物中一氧化碳氣體的濃度至少約0.10％。33.權利要求29的容器，其中的混合物中一氧化碳氣體的濃度至少約1.0％。34.權利要求29的容器，其中的混合物中一氧化碳氣體的濃度至少約2.0％。全文摘要本發(fā)明涉及治療患者的壞死性小腸結腸炎的方法，所述方法包括將含有一氧化碳的藥物組合物給藥患者。文檔編號A61P7/02GK1652802SQ03811310公開日2005年8月10日申請日期2003年4月15日優(yōu)先權日2002年4月15日發(fā)明者利奧·E·奧特拜因,布賴恩·朱克布朗申請人:聯(lián)邦高等教育系統(tǒng)匹茲堡大學