專利名稱：黃酮c糖苷的新型衍生物和含有其的組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及特別顯示出抗過敏性作用的黃酮C糖苷的新型衍生物或其鹽和含有其的組合物。
背景技術(shù)：
近年來，根據(jù)各種流行病學(xué)調(diào)查已表明過敏性疾病在增加。特別是花粉癥和特應(yīng)性皮炎的增加顯著，甚至已成為了社會問題。過敏素的增加以及大氣污染和食品添加物、飲食習(xí)慣的變化這些圍繞我們的環(huán)境的變化被推定是過敏增加的原因(伊藤，總合臨床、413099(1992))。過敏性疾病的治療方法進(jìn)行的是以首先將作為原因的過敏素除去或不攝取為基礎(chǔ)，根據(jù)癥狀的程度和各疾病的發(fā)病機(jī)理的藥物療法。過敏反應(yīng)因作為其原因的免疫球蛋白、涉及的免疫細(xì)胞的不同而被為為I型～I(xiàn)V型四種類型。I型～I(xiàn)II型過敏是涉及體液性抗體的免疫反應(yīng)，由于過敏反應(yīng)迅速出現(xiàn)，因此也被稱為速發(fā)型過敏，IV型過敏與抗體無關(guān)，為與致敏淋巴細(xì)胞有關(guān)的細(xì)胞性免疫反應(yīng)，也被稱為遲發(fā)型過敏(富岡，總合臨床、413103(1992))。
在這些過敏反應(yīng)中，花粉癥和特應(yīng)性皮炎被認(rèn)為與I型和IV型過敏反應(yīng)有關(guān)，其治療使用抗組織胺劑、堿性抗過敏劑或類固醇劑等。
另一方面，也申請了與利用了烏龍茶抽提物或茶中的表兒茶素沒食子酸酯抗過敏劑的專利(特開平10-077231、特開平10-175874、專利3023962等)。此外，報告表明黃酮和其糖苷具有抑制組胺從肥大細(xì)胞中游離的作用和免疫抑制作用，作為過敏治療藥的應(yīng)用受到期待(Kubo M.etal，Chem.Pharm.Bull.325051(1984))。但是，幾乎所有的黃酮顯示其效果的用量高，急切希望以更低用量顯示效果的化合物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供將具有抗過敏作用的物質(zhì)分離、鑒定，提供能以低用量治療過敏性疾病的新型成分和含有它們的組合物。
本發(fā)明者們?yōu)榱私鉀Q上述課題，將注意力集中在烏龍茶的抗過敏作用上，對烏龍茶中的抗過敏成分進(jìn)行了詳細(xì)的研究，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)新型黃酮C糖苷的衍生物或其鹽對2，4-二硝基氟代苯(DNFB)誘發(fā)的耳腫脹形成具有抑制作用以及對組胺從腹腔肥大細(xì)胞中游離具有抑制效果。此外，發(fā)現(xiàn)可以將它們作為醫(yī)藥組合物、食品組合物或化妝品中的有效成分利用，從而完成了本發(fā)明。


圖1表示在實驗例1中進(jìn)行的，以本發(fā)明的化合物(1)的給予量為0.2、1.0和5.0μg/kg三種濃度和作為對照給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸時對于小鼠耳廓接觸性皮炎的抑制效果的差的曲線圖。
圖2表示在實驗例2中進(jìn)行的，以本發(fā)明的化合物(2)的給予量為1.0、10和100μg/kg三種濃度和作為對照給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸時對于小鼠耳廓接觸性皮炎的抑制效果的差的曲線圖。
圖3表示類黃酮的結(jié)構(gòu)。
具體實施例方式
如上所述，本發(fā)明者為了解決上述課題，將注意力集中于烏龍茶的抗過敏作用上，對烏龍茶中抗過敏成分進(jìn)行了詳細(xì)的研究，其結(jié)果發(fā)現(xiàn)新型黃酮C糖苷的衍生物或其鹽對2，4-二硝基氟代苯(DNFB)誘發(fā)的耳腫脹形成具有抑制作用以及對組胺從腹腔肥大細(xì)胞中游離具有抑制效果。此外，發(fā)現(xiàn)可以將它們作為醫(yī)藥組合物、食品組合物或化妝品中的有效成分利用，從而完成了本發(fā)明。
因此，本發(fā)明涉及式(1)所示的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽。

此外，本發(fā)明涉及式(2)所示的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽。
本發(fā)明涉及過敏性疾病的預(yù)防和/或治療用醫(yī)藥組合物，其含有上述黃酮C糖苷的衍生物或其鹽的至少1種。此外，本發(fā)明涉及醫(yī)藥組合物，其中，該過敏性疾病為選自特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、花粉癥的至少一種疾病。
本發(fā)明涉及食品組合物，其含有上述黃酮C糖苷的衍生物(1)或(2)或其鹽的至少1種。更詳細(xì)來說，本發(fā)明涉及食品組合物，其中，該食品組合物為作為特定保健用食品、特殊營養(yǎng)食品、營養(yǎng)輔助食品的飲料或其他的營養(yǎng)飲料、健康飲料、健康茶、其他飲料。此外，本發(fā)明涉及食品組合物，其中，該食品組合物為糕點(diǎn)類、面包、面食類、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、把魚肉攪碎加其它材料制成的熟食、油脂或調(diào)味料。
此外，本發(fā)明涉及化妝料，其含有上述黃酮C糖苷的衍生物(1)或(2)或其鹽的至少1種。此外，本發(fā)明涉及化妝品，其中，該化妝料為護(hù)膚品、化妝品、頭發(fā)化妝料或洗浴料。
本發(fā)明所涉及的式(1)和/或式(2)的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽，可以例如，以茶葉為原料，通過實施加熱和采用溶劑進(jìn)行抽提、濃縮、精制等一般的化學(xué)分離精制手段(例如，分級或色譜法)而得到。
作為制造時使用的茶葉，可以使用茶樹(Camellia sinensis)的葉和/或?qū)⑵浼庸ず蟮牟枞~。特別優(yōu)選使用烏龍茶。所謂烏龍茶，是指以中國福建省、廣東省或臺灣等為主產(chǎn)地的中國原產(chǎn)的半發(fā)酵茶。
用于溶出的溶劑可以為水系溶劑和/或有機(jī)溶劑的任何一種，優(yōu)選使用水系溶劑。水系溶劑優(yōu)選水、乙醇或甲醇等?？梢詾樗畣为?dú)或水與甲醇、乙醇等低級醇的任意的混合溶液。
抽提時烏龍茶和溶劑的比率也無特別限定，相對于烏龍茶1重量份，溶劑為2～1000重量份，考慮到抽提操作、效率方面，特別優(yōu)選5～100重量份。
此外，溶出時的溫度如果比溶劑的熔點(diǎn)高，比沸點(diǎn)低，則并無特別限定，但如果是水，優(yōu)選10℃～100℃，如果是乙醇和甲醇，優(yōu)選10℃～40℃。抽提時間優(yōu)選為10秒～24小時的范圍。
作為化學(xué)分離精制手段，可以使用作為化學(xué)分離精制手段通常使用的方法，可以使用例如液-液分離、薄層色譜法、吸附柱色譜法、分配柱色譜法、凝膠過濾柱色譜法、離子交換柱色譜法、電泳或高效液相色譜法等。此外，也可以根據(jù)需要將這些分離精制手段組合，將本發(fā)明所涉及的式(1)和式(2)的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽精制為高純度。
本發(fā)明所涉及的式(1)和式(2)的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽由于顯示抗過敏作用，因此可以在醫(yī)藥、食品和化妝品等各種用途中使用。作為醫(yī)藥，式(1)和/或(2)的化合物或其鹽對DNFB誘發(fā)的耳腫脹形成顯示抑制作用以及對組胺游離顯示抑制作用，所以作為抗過敏劑，可以特別用于特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和花粉癥的治療目的。作為食品，以特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和花粉癥的癥狀的緩和和預(yù)防為目的，可以作為食品添加物配合于特定保健用食品、特殊營養(yǎng)食品、營養(yǎng)輔助食品、健康食品等中。作為添加對象的食品，可以為各種食品。作為飲料，可以配合于特定保健用食品、特殊營養(yǎng)食品、營養(yǎng)輔助食品的飲料和其他營養(yǎng)飲料、健康飲料、各種健康茶、其他飲料等中。作為其他食品，可以列舉糕點(diǎn)類、面包、面食類、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、把魚肉攪碎加其它材料制成的熟食、油脂、調(diào)味料等。作為化妝品，以特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎和花粉癥的癥狀的緩和和預(yù)防為目的，可以在護(hù)膚品、粉底和化妝品等中添加式(1)和/或式(2)的化合物或其鹽。
關(guān)于醫(yī)藥，可以直接或用水等稀釋，經(jīng)口給予式(1)和/或式(2)的化合物或其鹽。或通過將其與公知的醫(yī)藥用載體一起制劑化而調(diào)制。例如，將式(1)和/或式(2)的化合物或其鹽制成漿劑等經(jīng)口液狀制劑，或加工成浸膏、粉末等，與藥學(xué)上允許的載體配合，作為片劑、膠囊劑、顆粒劑、散劑等經(jīng)口固形制劑給予。作為藥學(xué)上允許的載體，可以使用慣用的各種有機(jī)或無機(jī)載體物質(zhì)作為制劑原材料，作為固形制劑中的賦形劑、潤滑劑、結(jié)合劑、崩解劑，液狀制劑中的溶劑、賦形劑、懸浮劑、結(jié)合劑等配合。此外，也可以根據(jù)需要使用防腐劑、抗氧化劑、著色料、甜味劑等制劑添加物。
作為賦形劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如乳糖、白糖、D-甘露糖醇、淀粉、結(jié)晶纖維素、輕質(zhì)硅酸酐等。作為潤滑劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如硬脂酸鎂、硬脂酸鈣、滑石、膠體二氧化硅等。作為結(jié)合劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如結(jié)合纖維素、白糖、D-甘露糖醇、糊精、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素、聚乙烯基吡咯烷酮等。作為崩解劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如聚乙二醇、丙二醇、D-甘露糖醇、苯甲酸芐酯、乙醇、三氨基甲烷、膽甾醇、三乙醇胺、碳酸鈉、檸檬酸鈉等。作為液劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如精制水、醇、丙二醇等。作為懸浮劑優(yōu)選的例子，可以列舉例如硬脂酸乙醇胺、月桂基硫酸鈉、月桂基氨基丙酸、卵磷脂、氯芐烷銨、苯索氯銨、甘油單硬脂酸酯等表面活性劑；以及例如聚乙烯醇、聚乙烯基吡咯烷酮、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥甲基纖維素、羥乙基纖維素、羥丙基纖維素等親水性高分子。作為防腐劑的優(yōu)選例，可以列舉例如對羥基苯甲酸酯類、氯丁醇、芐醇、苯乙醇、脫氫乙酸、山梨酸等。作為抗氧劑的優(yōu)選例，可以列舉例如亞硫酸鹽、抗壞血酸等。
作為劑型，其依賴于疾病的種類和程度等，例如，作為適于經(jīng)口、非經(jīng)口或經(jīng)鼻給予的劑型，可以列舉片劑或糖衣片、舌下片、明膠膠囊劑、錠劑(troche)、栓劑、膏劑、軟膏劑、皮膚用凝膠劑等。此外，有效的用量因患者的年齡和體重、疾病的種類和嚴(yán)重程度以及給予的途經(jīng)而變化。單位用量一般是每24小時給予1～3次，每次給予0.0001～100mg/kg的范圍。
關(guān)于食品，可以直接或加工成浸膏、粉末等，以飲食物的形式給予式(1)和/或式(2)的化合物或其鹽。此外，可以與一般使用的飲食物原材料和飲食物制造上允許的載體配合，作為飲料、糕點(diǎn)類、面包、面食類、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、把魚肉攪碎加其它材料制成的熟食、油脂或調(diào)味料等提供。
在本發(fā)明中，所謂飲料，是指烏龍茶飲料、與其他茶飲料混合的茶飲料、碳酸飲料、果實飲料、乳酸菌飲料、運(yùn)動飲料、豆奶和葡萄酒、燒酒、威士忌、清酒等酒類等。
在本發(fā)明中，所謂糕點(diǎn)類，是指餅干類、巧克力類、糖果類、口香糖類、快餐糕點(diǎn)類、油炸蛋糕類、西式新鮮蛋糕類、日式蛋糕類、冰激凌類、果子凍等。
大豆加工品中包括豆腐等，乳制品中包含酸乳酪、黃油等。雞蛋加工品中包含炒雞蛋、碗蒸雞蛋羹等，把肉攪碎加其它材料制成的熟食中包含魚糕等。調(diào)味料中包含調(diào)味品(醬油)、調(diào)味品(香料)、蛋黃醬、撒在飯上吃的調(diào)味料(魚粉、紫菜末等)等。它們可以采用通常方法制造。
作為飲食物制造上允許的載體，可以列舉砂糖、葡萄糖、果糖、異構(gòu)化液糖、低聚果糖、天冬甜素、山梨糖醇、甜葉菊等甜味料；甘藍(lán)色素、葡萄果皮色素、接果木色素、焦糖色素、梔子花色素、玉米色素、藏紅花色素、胡蘿卜等著色料；果膠分解物、苯甲酸、山梨酸、對羥基苯甲酸酯類、山梨酸鉀等保存材料；藻酸鈉、藻酸丙二醇酯、纖維素乙醇酸鈣、纖維素乙醇酸鈉等糊料；L-抗壞血酸、生育酚、異抗壞血酸、蕓香苷等抗氧劑；硫酸亞鐵、亞硝酸鈉、硝酸鉀等發(fā)色劑；亞硫酸氫鈉、偏亞硫酸鉀等漂白劑；丙二醇等品質(zhì)保持劑；L-半胱氨酸鹽酸鹽、硬脂基乳酸鈣等品質(zhì)改善劑；氯化銨、d-酒石酸氫鉀、碳酸銨、碳酸鉀、碳酸氫鈉、明礬等膨脹劑；卵磷脂、神經(jīng)鞘脂類、植物性膽甾醇、大豆皂苷、藻酸鈉、藻酸丙二醇酯、酪蛋白鈉、甘油脂肪酸酯、蔗糖脂肪酸酯、失水山梨糖醇脂肪酸酯等乳化劑；軟骨素硫酸鈉等乳化穩(wěn)定劑；檸檬油、桉樹油、薄荷油、香子蘭浸膏、橙油、蒜油、乙酰乙酸乙酯、茴香醛、乙基香蘭素、肉桂酸、香茅醇乙酸酯、檸檬醛、香蘭素、丁酸丁酯、酯類等著香料；L-抗壞血酸、L-天冬酰胺、L-丙氨酸、肌醇、L-谷氨酰胺、胡蘿卜素、生育酚、維生素A、葉酸、檸檬酸鐵、血紅素鐵、未煅燒鈣等強(qiáng)化劑；過氧化苯甲酰、過硫酸銨、二氧化氯等小麥粉改良劑；漂白粉、過氧化氫、次氯酸等殺菌料；乙?；吐橛退峒柞?、酯膠、醋酸乙烯酯樹脂、聚異丁烯、聚丁烯等口香糖基礎(chǔ)劑、D-甘露糖醇等防粘接劑；酸性焦磷酸鈉、焦磷酸鉀、焦磷酸鈉等粘接劑；己二酸、檸檬酸、葡糖酸、琥珀酸、d-酒石酸、乳酸、dl-蘋果酸等酸味料；海產(chǎn)品提取物、酵母提取物、海藻提取物、醬油、番茄醬、肉提取物、料酒、果醬、煮熟和干燥的鰹魚肉、L-天冬氨酸鈉、DL-丙氨酸、L-精氨酸、L-谷氨酸鹽、5’-肌苷酸二鈉、檸檬酸三鈉、L-谷氨酸、L-谷氨酸鈉、琥珀酸、L-酒石酸、乳酸鈉等調(diào)味料等。
本發(fā)明提供的式(1)和/或式(2)的化合物或其鹽可以直接或用水等稀釋，或濃縮，或粉末化或顆?；?，通過與公知的載體配合，作為氣霧劑、液劑、浸膏劑、懸浮劑、乳劑、軟膏劑、泥敷(pap)劑、涂抹劑、洗劑等形態(tài)提供?；蛘吒鶕?jù)需要適當(dāng)選擇用于公知的化妝品、準(zhǔn)醫(yī)藥品、醫(yī)藥品的水性成分、表面活性劑、油性成分、可溶化劑、保濕劑、粉末成分、醇類、pH調(diào)節(jié)劑、防腐劑、抗氧劑、增粘劑、色素、顏料、香料等而調(diào)制。作為皮膚外用劑，也可以成為洗劑狀、凝膠狀、乳劑、軟膏等劑型。
在本發(fā)明中，所謂護(hù)膚品，是指柔軟性化妝水、收斂性化妝水等化妝水類，潤膚膏、增濕膏、按摩膏等膏類，潤膚乳液、營養(yǎng)乳液、清洗乳液等乳液類等。
所謂化妝料，是指洗臉料、皮膚洗滌劑、粉底、眼影、腮紅、口紅等。
所謂毛發(fā)化妝料，是指香波、漂洗液、頭發(fā)護(hù)理劑、發(fā)乳、整發(fā)劑、頭發(fā)強(qiáng)壯劑、養(yǎng)毛劑、育毛劑等。所謂洗浴劑，是指洗浴油、洗浴鹽、洗浴泡沫等。
關(guān)于食品和化妝料，其配合量也無特別限定，一般換算為干燥固體成分，為0.0001～100重量％，特別優(yōu)選為0.001～50重量％。
列舉實驗例和實施例對本發(fā)明進(jìn)行更為詳細(xì)的說明，但本發(fā)明的范圍并不僅僅限于這些實驗例和實施例。
實施例實施例1制造例使用熱水100L對中國福建省產(chǎn)的烏龍茶茶葉5.0kg進(jìn)行抽提，放冷后裝入填充了30L的合成吸附劑(DIAION HP-21、三菱化學(xué)社制)的柱內(nèi)，再將沒有吸附級分裝入填充了30L的合成吸附劑(DIAION HP-20、三菱化學(xué)社制)的柱內(nèi)，順次增加乙醇相對于水的含量，使其流出(分別平均為60L)，得到4個級分[乙醇濃度＝0％(OHF3N)、20％(OHF4N)、40％(OHF5N)、99.5％(OHF6N)]。
將這4個級分中對DNFB誘發(fā)的耳腫脹形成具有最強(qiáng)抑制作用的OHF3N級分進(jìn)行濃縮、冷凍干燥(517g)，再用水-正丁醇進(jìn)行對流分配(n＝7)，將轉(zhuǎn)移次數(shù)7次的級分的減壓濃縮物(2.1g)裝入填充了Sephadex LH-20(Pharmacia Biotech社制)的柱內(nèi)，用甲醇溶出，收集Kd值1.9～2.2的級分。用HPLC將該減壓濃縮物分離。柱使用SENSHU PAK DIOL-1251(SENSHU化學(xué)社制、4.6×250mm)，移動相使用己烷∶甲醇∶四氫呋喃＝50∶35∶15的溶劑，以流速1ml/min(30℃)使其溶出，分取保留時間5.8分鐘時溶出的峰(UV280nm)。減壓濃縮后，通過采用了YMC-Pack ODS-A(YMC社制、4.6×150mm)的HPLC進(jìn)行精制。分取后，通過減壓濃縮，得到980μg的淡黃色粉末。
用NMR、MS等光譜和X射線解析進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析的結(jié)果(表1和表2)本化合物被鑒定為式(1)的異牡荊葡基黃酮(Isovitexin)(參照圖3)的7位的OH和糖鏈的1位的OH分子內(nèi)脫水縮合的化合物[化合物(1)]。
表1化合物(1)由1H-NMR和13C-NMR測定的結(jié)構(gòu)

化合物(1)由1H-NMR和13C-NMR測定的結(jié)構(gòu)(ppm.in CD3OD)表2 化合物(1)由X射線解析測定的結(jié)構(gòu)

對化合物(1)的精制過程中的OHF3N級分(517g)用水-正丁醇進(jìn)行對流分配(n＝7)，將轉(zhuǎn)移次數(shù)7次的級分的減壓濃縮物(2.1g)裝入填充了Sephadex LH-20(Pharmacia Biotech社制)的柱內(nèi)，用甲醇溶出，收集Kd值1.6～1.9的級分。用HPLC將該減壓濃縮物分離。柱使用SENSHUPAK DIOL-1251(SENSHU化學(xué)社制、4.6×250mm)，移動相使用己烷∶甲烷∶四氫呋喃＝50∶35∶15的溶劑，以流速1ml/min(30℃)使其溶出，分取保留時間5.8分鐘時溶出的峰(UV280nm)。減壓濃縮后，通過采用了YMC-Pack ODS-A(YMC社制、4.6×150mm)的HPLC進(jìn)行精制。分取后，通過減壓濃縮，得到147μg的淡黃色粉末。
用NMR、MS等波譜和X射線解析進(jìn)行結(jié)構(gòu)解析的結(jié)果(表3和表4)本化合物被鑒定為式(2)的牡荊葡基黃酮(Vitexin)(參照圖3)的7位的OH和糖鏈的1位的OH分子內(nèi)脫水縮合的化合物[化合物(2)]。
表3 化合物(2)由1H-NMR和13C-NMR測定的結(jié)構(gòu)

化合物(2)由1H-NMR和13C-NMR測定的結(jié)構(gòu)(ppm.in CD3OD)
表4 化合物(2)由X射線解析測定的結(jié)構(gòu)

實驗例1對大鼠耳廓接觸性皮炎的抑制效果使用動物為從日本クレア(株)購入的7周齡的ICR系小鼠，預(yù)飼養(yǎng)1周后，用于實驗。將實施例1中制備的黃色粉末[化合物(1)]懸浮于0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸中，調(diào)制給予量為0.2、1.0和5.0μg/kg的3種濃度樣品，使給予量達(dá)到10ml/kg。小鼠為1組6只，向背部皮下注射1％的2，4-二硝基氟代苯(DNFB)乙醇溶液100μl，用5天時間使其感染。第6天在右耳廓涂布1％DNFB橄欖油溶液，使產(chǎn)生耳廓接觸性皮炎。24小時后，用直徑8mm的穿孔器將兩耳穿孔，測定重量。從初次感染前一天到引起浮腫當(dāng)天的7天間連續(xù)地進(jìn)行化合物(1)的經(jīng)口給予。作為對照組，給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸。實驗結(jié)果用右耳廓相對于左耳廓的浮腫率的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間的有意義差檢驗使用Student的t-檢驗。其結(jié)果示于圖1。從圖1可以看到，與給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸的對照組比較，在化合物(1)的1.0和5.0μg/kg給予組中，DNFB引起的浮腫得到了有意的抑制。
實驗例2對大鼠耳廓接觸性皮炎的抑制效果使用動物為從日本クレア(株)購入的7周齡的ICR系小鼠，預(yù)飼養(yǎng)1周后，用于實驗。將實施例1中制備的黃色粉末[化合物(2)]懸浮于0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸中，調(diào)制給予量為1.0、10和100μg/kg的3種濃度樣品，使給予量達(dá)到10ml/kg。小鼠為1組6只，向背部皮下注射1％的2，4-二硝基氟代苯(DNFB)乙醇溶液100μl，用5天時間使其感染。第6天在右耳廓涂布1％DNFB橄欖油溶液，使產(chǎn)生耳廓接觸性皮炎。24小時后，用直徑8mm的穿孔器將兩耳穿孔，測定重量。從初次傳染前一天到引起浮腫當(dāng)天的7天間連續(xù)地進(jìn)行化合物(2)的經(jīng)口給予。作為對照組，給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸。實驗結(jié)果用右耳廓相對于左耳廓的浮腫率的平均值和標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，組間的有意差檢驗使用Student的t-檢驗。其結(jié)果示于圖2。從圖2可以看到，與給予0.5％羧甲基纖維素鈉/0.01N鹽酸的對照組比較，在化合物(2)100μg/kg給予組中，DNFB引起的浮腫得到了有意的抑制。
實驗例3對于組胺從腹腔肥大細(xì)胞中游離的抑制效果使用動物為從日本クレア(株)購入的7周齡的Wistar系大鼠，預(yù)飼養(yǎng)1周后，用于實驗。在乙醚麻醉下將Wistar系大鼠斷頭處死后，在腹腔內(nèi)注入Tyrode液。采用慣用方法將肥大細(xì)胞分離，懸浮于含有0.1％牛血清白蛋白(BSA)的Tyrode液中使之達(dá)到1～3×108cell/ml，調(diào)制肥大細(xì)胞浮游液。將溶解于50％甲醇的化合物(1)或化合物(2)加入上述肥大細(xì)胞浮游液中，在37℃下進(jìn)行5分鐘保溫。然后，加入Compound48/80，在37℃下保溫10分鐘，冰冷后，對離心分離的上清液按照Onda等的方法[J.Med.Sci.，27，93-97(1978)]，通過使用了鄰苯二甲醛(OPA)的柱后法(post-column method)的高速液相色譜儀測定游離組胺量。實驗結(jié)果通過相對于只用溶劑處理時的組胺游離量，用試料處理時的組胺游離抑制率表示。其結(jié)果示于表5。
表5 組胺游離抑制試驗結(jié)果

實施例2與甾體化合物劑和其他類黃酮的效果比較使用與實施例1和實施例2相同的方法，將副腎皮質(zhì)甾族化合物劑和多種類黃酮(圖3)對DNFB誘發(fā)的耳腫脹形成的抑制作用與化合物(1)和化合物(2)進(jìn)行比較。實驗結(jié)果用對DNFB誘發(fā)的耳腫脹形成抑制50％的給予量表示。其結(jié)果示于表6。
與腎上腺皮質(zhì)甾體化合物劑或其他類黃酮比較，化合物(1)和化合物(2)的給予以極少量就顯示出對耳腫脹形成的抑制作用。
表6 耳腫脹形成抑制作用的評價結(jié)果

實施例3片劑的制造例將實施例1中制備的化合物(1)150g與等量的乳糖和硬脂酸鎂5g混合，用單發(fā)式打片機(jī)對該混合物進(jìn)行打片，制造直徑10mm、重量300mg的片劑。
實施例4顆粒劑的制造例將實施例2中制備的片劑粉碎、制粒、篩分，得到20-50目的顆粒劑。
實施例5糖的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
粉末山梨糖醇 99.7g香料 0.2g
化合物(1)0.05g山梨糖醇種 0.05g總量 100g實施例6口香糖的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
原料膠 20g碳酸鈣 2g蛇菊苷(stevioside) 0.1g化合物(1)0.05g乳糖 76.85g香料 1g總量 100g實施例7桔子汁的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
冷凍濃縮桔子果汁 5g果糖-葡萄糖漿10g檸檬酸 0.2gL-抗壞血酸 0.02g化合物(1)0.05g香料 0.2g色素 0.1g水 殘余量總量 100g實施例8果子凍的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
砂糖 500g糖稀 500g果膠 13g檸檬酸 4g
檸檬酸鈉1.5g香料1g食用色素0.2g化合物(1) 0.5g將砂糖20g混合到果膠13g中，加入水330ml，使其溶解均勻。再加入檸檬酸和檸檬酸鈉，使其沸騰。向其中加入糖稀，加熱到100℃后，加入剩余的砂糖，升溫到109℃。靜置數(shù)分鐘后，加入化合物(1)、香料和色素并進(jìn)行攪拌，填充到淀粉模中，在50℃以下干燥10小時以上，得到果子凍。
實施例9魚糕的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
鱈魚的肉餡 100g食鹽20g調(diào)味料 2g蛋清10g化合物(1) 0.5g在鱈魚的肉餡中加入食鹽、調(diào)味料和化合物(1)攪拌混合，熟化后成型，在預(yù)先加熱到約90～95℃的蒸器中蒸煮，然后放冷，得到魚糕。
實施例10潤膚膏的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
蜂蠟2.0g硬脂醇 5.0g硬脂酸 8.0g角鯊?fù)? 10.0g自乳化型丙二醇單硬脂酸酯3.0g聚氧乙烯十六烷基醚 1.0g香料0.5g防腐劑 適量抗氧劑 適量丙二醇7.8g甘油 4.0g透明質(zhì)酸鈉0.15g化合物(1) 0.05g三乙醇胺 1.0g精制水57.5g實施例11香波的制造例使用以下材料，按照通常方法制造。
烷基醚硫酸鈉 16.0g月桂酸二乙醇酰胺 4.0g丙二醇1.95g防腐劑、色素、香料適量抗氧劑適量化合物(1) 0.05g精制水78.0g如上所述，根據(jù)本發(fā)明發(fā)現(xiàn)烏龍茶中含有的新型黃酮C糖苷的衍生物或其鹽具有顯著的抗過敏作用，可以提供以它們?yōu)橛行С煞值尼t(yī)藥組合物、食品組合物、或化妝料。
權(quán)利要求
1.式(1)所示的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽。
2.式(2)所示的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽。
3.過敏性疾病的預(yù)防和/或治療用醫(yī)藥組合物，其含有權(quán)利要求1或2所述的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽的至少1種。
4.權(quán)利要求3所述的醫(yī)藥組合物，其中，該過敏性疾病為選自特應(yīng)性皮炎、接觸性皮炎、花粉癥的至少一種疾病。
5.食品組合物，其含有權(quán)利要求1或2所述的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽的至少1種作為抗過敏性成分。
6.權(quán)利要求5所述的食品組合物，其中，該食品組合物為作為特定保健用食品、特殊營養(yǎng)食品、營養(yǎng)輔助食品的飲料或其他的營養(yǎng)飲料、健康飲料、健康茶、其他飲料。
7.權(quán)利要求5所述的食品組合物，其中，該食品組合物為糕點(diǎn)類、面包、面食類、大豆加工品、乳制品、蛋加工品、把魚肉攪碎加其它材料制成的熟食、油脂或調(diào)味料。
8.化妝料，其含有權(quán)利要求1或2所述的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽的至少1種作為抗過敏性成分。
9.權(quán)利要求8所述的化妝料，其中，該化妝品為護(hù)膚品、化妝品、毛發(fā)化妝料或洗浴料。
10.權(quán)利要求1或2所述的黃酮C糖苷的衍生物或其鹽的至少1種在具有抗過敏性作用的醫(yī)藥組合物、食品組合物或化妝料的制造中的使用。
全文摘要
本發(fā)明涉及特別是顯示抗過敏作用的黃酮C糖苷的新型衍生物或其鹽以及含有其的組合物。近年來，過敏性疾病在增加，特別是花粉癥和過應(yīng)性皮炎的增加顯著，甚至已成為了社會問題。報告指出黃酮及其糖苷具有抑制組胺從肥大細(xì)胞游離的作用和免疫抑制作用，作為過敏治療藥物的應(yīng)用受到期待。但是，幾乎所有的黃酮顯示其效果的用量高，因此急切希望開發(fā)出以更低用量顯示效果的化合物。本發(fā)明提供能以低用量治療過敏性疾病的新型成分和含有其的組合物。
文檔編號A61K8/00GK1671713SQ0381810
公開日2005年9月21日 申請日期2003年7月3日 優(yōu)先權(quán)日2002年7月3日
發(fā)明者石倉義之, 辻邦郎, 糠谷東雄 申請人:三得利株式會社