一種黃酮衍生物的制備及其對神經(jīng)氨酸酶抑制的應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】 [0001] ：本發(fā)明涉及攜帶芳雜環(huán)酯的新型黃酮衍生物，所述黃酮衍生物在對神 經(jīng)氨酸酶抑制的應(yīng)用及其制備方法；屬于藥物領(lǐng)域。
【背景技術(shù)】 [0002] ：流行性感冒簡稱流感，是由流感病毒引起的一種急性病毒性上呼吸道 傳染病，具有傳染性強、傳播快、潛伏期短、發(fā)病率高的特點，對人類健康危害極大，已經(jīng)成 為致死率最高的病毒性傳染疾病。由于流感病毒變異迅速，新型的流感病毒層出不窮，如近 年來在全球范圍內(nèi)爆發(fā)的禽流感，就曾讓全世界醫(yī)療工作者束手無策，嚴(yán)重威脅人類的健 康和生命安全，造成巨大經(jīng)濟損失。因此，不斷尋找針對不同靶點的新型抗流感病毒藥物， 是有效控制新型病毒株將迅速傳播的唯一途徑。
[0003] 目前，國際上預(yù)防與治療流感的主要措施有：接種疫苗、金剛烷胺類藥物、流感病 毒受體阻滯劑和反義核苷酸類抗流感藥物、神經(jīng)氨酸酶抑制劑。相對而言神經(jīng)氨酸酶抑制 劑（NA)是目前探索抗流感化學(xué)治療藥物研究中取得的突破性進展，它可以有效地阻斷流感 病毒的復(fù)制過程。與其它類型的抗流感病毒藥物相比，NA抑制劑具有更高的療效及更好的 安全性和耐受性，并對所有的流感病毒亞型均有效，也很少出現(xiàn)病毒的抗藥性，已成為世界 各大醫(yī)藥公司競相研究的熱點。目前上市的NA抑制劑有兩種：葛蘭素公司的Zanamivir (GG167,商品名Relenza)和羅氏公司的Oseltamivir (054104，商品名Tamiflu)。前者為 吸入給藥，國內(nèi)尚無生產(chǎn)和進口；后者是目前國內(nèi)普遍認(rèn)為對甲型H1N1流感有效的藥物， 但自2007年以來已出現(xiàn)耐藥。
[0004] 近年來很多天然產(chǎn)物也報道具有一定抗流感病毒NA活性，其中大部分是黃酮類 化合物，包括黃烷酮、黃酮、查爾酮和二芳基類化合物。其構(gòu)效關(guān)系研究發(fā)現(xiàn)電性因素和空 間因素是影響黃酮類NA抑制劑活性的關(guān)鍵，4-OH、7-OH、C4=0和C 2=C3是保持NA抑制活性 必須的藥效團，并且此類NA抑制劑為非競爭性NA抑制劑，可能通過與NA活性中心外的區(qū) 域結(jié)合來抑制酶活性，有望解決NA耐藥性的問題。但黃酮類化合物多水溶性差，難于吸收， 極大降低其生物利用度，至今并無高效黃酮類神經(jīng)氨酸酶抑制劑的成功開發(fā)。因此如何增 強黃酮類成分對神經(jīng)氨酸酶的抑制活性，并提高其生物利用度，是開發(fā)此類抑制劑的研究 重點。目前黃酮類成分對神經(jīng)氨酸酶抑制活性的研究主要集中在天然來源黃酮的篩選，而 衍生物方面僅有糖苷取代、脂雜環(huán)取代和甲氧基、羥基等簡單基團的取代產(chǎn)物的活性研究， 并未從中發(fā)現(xiàn)高效抑制劑，故在此方面仍有較大研究空間。我們對黃酮類化合物木犀草素 進行化學(xué)衍生，在分子中引入芳雜環(huán)，對其衍生物的活性研究發(fā)現(xiàn)：所得衍生物對神經(jīng)氨酸 酶具有更好的抑制作用。

【發(fā)明內(nèi)容】
[0005] ：本發(fā)明的目的之一是，尋找一類能抑制神經(jīng)氨酸酶活性的新型黃酮類 衍生物。
[0006] 本發(fā)明的目的之二是，提供一種制備黃酮衍生物的方法。
[0007] 本發(fā)明的目的之三是，提供黃酮衍生物在醫(yī)藥或治療上的用途。
[0008] 本發(fā)明所提供技術(shù)方案是： 具有如下通式的新型黃酮衍生物：
其中&和R4分別選自H、Cl-6烷基CO如優(yōu)選Ac、任選取代的雜芳基C0,其中任選取代 的雜芳基C0為：
可以單取代或多取代；R為任選取代的C1-6烷基，鹵素、羥基、巰基、氨基等，其中取代 基為鹵素、羥基、巰基、氨基或羧基等；X是NH、S、0或CH2 ;X1是N或CH ; R2 和 R3 分別選自 OH、OAc、SH、NH2 或 Η ; R5為H、OH、C1-6烷基?；?優(yōu)選乙?；?、鹵素(優(yōu)選氯、溴或氟)。
[0009] 本發(fā)明還提供了上述新型黃酮衍生物的制備方法，路線如下（sheme 1-3):
Scheme 1 7-雜環(huán)酯木犀草素衍生物制備
Scheme 2 4'-雜環(huán)酯木犀草素衍生物制備
Scheme 3 7, 4' -雙雜環(huán)酯木犀草素衍生物的制備 本發(fā)明優(yōu)選的制備方法如下： 1.7 -雜環(huán)酯木犀草素衍生物的制備 將木犀草素溶于芐醚中，與過量的二氯二苯基甲烷（Ph2CCl2)反應(yīng)，得到 3'，4' -OH選擇性保護產(chǎn)物。該產(chǎn)物與雜環(huán)羧酸在DCC、DMAP催化下在THF中反應(yīng)數(shù) 小時，得7-雜環(huán)酯取代木犀草素衍生物。再經(jīng)選擇性脫保護、羥基乙?；玫浇K產(chǎn)物7-雜 環(huán)酯取代-全乙?；鞠菟匮苌铩?br>[0010] 以煙酸為例，下面反應(yīng)路線（Scheme 4)更清楚的表示出該反應(yīng)過程。
[0011]
Scheme 4 7-煙酸酯木犀草素衍生物的制備 2. 4' -雜環(huán)酯木犀草素衍生物的制備 將木犀草素溶于將木犀草素溶于芐醚中，與過量的二氯二苯基甲烷 (Ph2CCl2)反應(yīng)，得到3'，4' -OH選擇性保護產(chǎn)物。該產(chǎn)物溶于THF中，K2C03催化下與 氯甲基甲醚（M0MC1)反應(yīng)，得到7-0M0M保護產(chǎn)物。再經(jīng)3'，4' -OH脫保護后，與雜環(huán)羧酸 在DCC、DMAP催化下在THF中反應(yīng)數(shù)小時，得4' -雜環(huán)酯取代木犀草素衍生物。該衍生物 于酸性條件下脫除MOM保護、全乙?；玫?' -雜環(huán)酯取代-全乙?；鞠菟匮苌?。
[0012] 以煙酸為例，下面反應(yīng)路線（Scheme 5)更清楚的表示出該反應(yīng)過程。
[0013]
Scheme 5 4' -煙酸酯木犀草素衍生物的制備 3. 7 -雜環(huán)酯木犀草素衍生物、4' -雜環(huán)酯木犀草素衍生物及7, 4' -雙雜環(huán)酯木 犀草素衍生物的制備將木犀草素溶于THF中，于DCC、DMAP催化下與足量的雜環(huán)羧酸反 應(yīng)數(shù)小時后，所得產(chǎn)物在于DMAP催化下與醋酐反應(yīng)，得到7-雜環(huán)酯取代-全乙?；鞠?素衍生物和4' -雜環(huán)酯取代-全乙酰化木犀草素衍生物。
[0014] 以煙酸為例，下面反應(yīng)路線（Scheme 6)更清楚的表示出該反應(yīng)過程。
[0015]
Scheme 6 7, 4'-雙煙酸酯木犀草素衍生物的制備 上述反應(yīng)中合成化合物2b、3c、la和lb時，化合物2a、3b和1與雜環(huán)羧酸的摩爾比分 別為：1:1.廣3，1:1.廣3，1:2飛。
[0016] 合成化合物2, 3時，化合物2c、3d、la和lb與醋酐的摩爾比都為：1:4~20,保證過 量。
[0017] 本發(fā)明采用神經(jīng)氨酸酶抑制劑篩選試劑盒對合成的新化合物進行了神經(jīng)氨酸酶 抑制活性的篩選，發(fā)現(xiàn)所合成的化合物均具有一定神經(jīng)氨酸酶抑制活性，其中有4種化合 物的神經(jīng)氨酸酶抑制活性明顯優(yōu)于對照品木犀草素，可做來制備神經(jīng)氨酸酶抑制劑，用于 抗病毒藥物。
[0018] 具體實施方案： 以下結(jié)合具體的實施例對本發(fā)明的技術(shù)方案與應(yīng)用做進一步說明： 實施例1 :7_煙酸酯-5, 3'，4' -三醋酸酯基木犀草素衍生物的合成 將木犀草素1 (500 mg, 1.74 mmol)置于50 ml圓底燒瓶中，用15 ml節(jié)醚溶解后，加 入二氯二苯基甲烷（1.23 g，5. 19mmol)，于175°C反應(yīng)30min，減壓蒸干溶劑，減壓回收溶 劑后加10%HC1，酸化至pH~6,二氯甲燒（10 mlX3)萃取，合并萃取液，無水Na2S04干燥， 減壓回收溶劑，得殘留物2a。殘余物2a溶于20 ml THF后，加 DMAP (488 mg，4 mmol)， 于 40°C攪拌 30 min 后滴加 DCC (537 mg，2.61 mmol)，再攪拌 30min 后加煙酸（250 mg， 2. 1 mmol)于40°C下繼續(xù)反應(yīng)6 h。加入NH4C1飽和溶液10 ml終止反應(yīng)，分得THF層后， 繼續(xù)用CH2C12 (10 ml X 2)萃取水層，合并THF層和CH2C12萃取液，無水Na2S0 4干燥，減壓 回收溶劑，得殘余物2b。殘留物2b溶于20 ml THF-MeOH (1:1)中，于10%Pd/C催化下進 行氫化，室溫反應(yīng)48h，過濾，回收溶劑，得殘留物la。殘留物la溶于20 ml二氯甲烷中， 以DMAP (425 mg，3. 48 mmol)催化下，與3 ml醋酐（約32 mmol)室溫反應(yīng)7h，減壓回收 二氯甲烷后加 NH4C1飽和溶液溶解，AcOEt (10 ml X 3)萃取，合并萃取液，無水Na2S04干燥， 減壓回收溶劑，得殘余物2。殘留物2經(jīng)硅膠（10 g)柱層析分離，氯仿-甲醇（220:1)洗 脫，得到化合物2 (淡黃色無定形粉末，270 mg，產(chǎn)率54%)。4 NMR (400MHZ，DMS0) :2.32, 2.33，2.34，（each 3H，s，3 XOAc); 6.68 (1H，d，/= 2Hz，H-6); 7.11 (1H，d，/ = 2Hz，H-8); 7.17(1? s，H-3); 7.52(1? d，/=9. 2Hz，H-5'）； 7.73(1? dd，乂= 8 Hz, /2= 4.8Hz，H-5''）； 8.25 (1H，hidden, H-6''）； 8.27 (2H，hidden, H-6'，H-2'）； 8.65(1? dd，/!= 4.8 Hz, /2= 1.2Hz, H-4''）； 9.15(1? s，H-2''）； 12.78 (1H，s， 5，-OH); 13CNMR (400MHZ，DMS0) :182. 7(C-4)，168.6(OAc), 168.4(0Ac), 162. 7(C=0)， 162. 5(C-2)，160.9(C-5)，156.4(C-7)，156.1 (C-9)，152.9(C-4，，），151. 7(C-2，，）， 145.3(C-4，），142.7(C-3，），138.8(C-6，，），129.2(01，），125.4(01，，）， 125. l(C-6，），124.8(05,，），124.8(C-5，），122.4(C-2，），108.4(010)，106.4(06)， 106. 3(C-3), 102. 0(C-8), 21. l(OAc), 20. 5 (OAc) , 20. 5(0Ac); ESIMS m/z 556 [M +K]+。
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[0019] 實施例2 :4' -煙酸酯-5, 7, 3' -三醋酸酯基木犀草素衍生物的合成 將木犀草素1 (500 mg, 1.74 mmol)置于50 ml圓底燒瓶中，用15 ml節(jié)醚溶解后， 加入二氯二苯基甲烷（1.23 g，5. 19mmol)，于175°C反應(yīng)30min，減壓蒸干溶劑，減壓回收 溶劑后加10%HC1，