專利名稱：一種丹參藥材中有效部位的制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種中藥制劑及其制備方法，特別是涉及一種丹參藥材中有效部位的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
丹參為唇形科鼠尾草屬植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的根。味苦，性微寒，具有活血化瘀，養(yǎng)血安神，涼血排癰和排毒生肌的功效，是中藥活血化瘀的常用藥味?，F(xiàn)有丹參制劑工藝的局限性表現(xiàn)為1、醇提工藝雖然對(duì)丹參酮類提取較完全，但由于丹參酮類的不穩(wěn)定性，在濃縮、干燥過程中損失較多，導(dǎo)致丹參酮類在制劑中保留率低和含量重現(xiàn)性差；2、丹參酮類的溶解性差，制劑中溶出度低?，F(xiàn)有制劑未篩選適宜的輔料和工藝，以改善丹參酮類溶出度；3、水溶性丹酚酸類的提取以丹參素為指標(biāo)，醇沉精制工藝中丹參素等有效成分的損失較大，在制劑中保留率低；4、丹參素體內(nèi)吸收、代謝快，普通制劑難以保持口服給藥血藥濃度的穩(wěn)定性。
丹參藥材主含脂溶性的二萜類成分和水溶性的酚酸類成分，尚含有黃酮類、三萜類、甾醇等其他成分。二萜類成分中屬醌、酮型結(jié)構(gòu)的有丹參酮I、IIA、IIB、V、VI，隱丹參酮，異丹參酮I、II、IIB，二氫丹參酮I等。水溶性的酚酸類成分有丹參素、原兒茶醛、原兒茶酸、咖啡酸及丹參素與咖啡酸的衍生物或二聚物酯化而成的縮酚酸如丹酚酸A、B、C、D、E、G、紫草酸B、迷迭香酸、迷迭香酸甲酯等。
丹參酮IIA是丹參二萜類活血化瘀的代表成分之一?，F(xiàn)代藥理研究表明丹參酮IIA單體的藥理作用主要有對(duì)實(shí)驗(yàn)性心肌缺血和再灌注損傷具有改善作用；對(duì)心肌電生理的影響實(shí)驗(yàn)顯示有鈣拮抗作用；抗血小板聚集作用抗血栓作用。丹參二萜類另一代表成分隱丹參酮具有抗炎抑菌及雌激素樣作用。
丹參中水溶性酚酸類單體化合物的藥理作用主要有抗血栓作用包括抗血小板作用、抗凝作用、抗血栓形成作用；改善血液循環(huán)作用；抗氧化損傷作用；通過多途徑，發(fā)揮心肌保護(hù)作用；丹參藥材中活血化瘀活性的兩類有效部位具有確切的藥理研究基礎(chǔ)，并在長(zhǎng)期臨床實(shí)踐中得到證實(shí)。因此在開發(fā)丹參制劑時(shí)，不但應(yīng)根據(jù)處方功能主治，提取保留其有效部位；而且應(yīng)在成型工藝中施以制劑因素，改善有效成分的釋放。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種丹參藥材中有效部位的精制工藝和丹參制劑及其制備方法。
本發(fā)明目的是通過如下技術(shù)方案實(shí)現(xiàn)的丹參酮精制物及丹參酚酸提取物的制備將丹參藥材粉碎投料后，萃取條件為以20-40％用量的70-95％乙醇作為夾帶劑，萃取壓力30-40Mpa，萃取溫度50-75℃，流量為9-12Kg/hKg藥材原料；解析條件為，一級(jí)解析壓力14-18Mpa、解析溫度50-75℃；二級(jí)解析壓力4-8Mpa、解析溫度30-50℃；萃取時(shí)間2-4h；干燥；得丹參酮類提取物；精制得丹參酮精制物；藥渣加水浸泡過夜后，煎煮3-5次，每次0.5-2小時(shí)，合并煎液，濾過；濾液過樹脂柱，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，以丹參生藥量13-20倍的30-95％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇后，噴霧干燥，即得丹參酚酸提取物粉末；總固物得率為6.9±0.16％，丹參素含量為1.54±0.04％，丹參酚酸B含量為50％以上。
本發(fā)明丹參酮精制物速釋制劑的制備丹參酮精制物∶波洛沙姆為1∶0.5-12，其中波洛沙姆可由聚乙二醇替換，優(yōu)選比例為1∶5，制備工藝為熔融法或微粉化法，優(yōu)選工藝為微粉化法。上述組合物中還可加入輔料乳糖，比例為丹參酮精制物∶波洛沙姆∶乳糖1∶0.5-12∶0.5-12，其中乳糖可由甘露醇或葡萄糖替換，優(yōu)選比例為1∶10∶10。
本發(fā)明丹參酚酸提取物緩釋制劑的制備丹參提取物∶羥丙甲基纖維素100KM或羥丙甲基纖維素15KM為1∶0.4-1；優(yōu)選比例為1∶0.8；上述組合物中還可加入輔料乳糖，比例為丹參提取物∶乳糖∶羥丙甲基纖維素100KM或羥丙甲基纖維素15KM為0.4-1∶0.1-0.6∶0.4-1，其中乳糖可由微晶纖維素、β-CD、乙基纖維素替換，優(yōu)選比例為0.4∶0.2∶0.8。丹參提取物-羥丙甲基纖維素骨架片中羥丙甲基纖維素的用量為28.5％～44.4％，丹參素在骨架片中的含量為0.35％～0.85％，丹參酚酸B在骨架片中的含量為0.35％～0.85％含量為12--35％。
本發(fā)明所用大孔吸附樹脂為F2D型樹脂，以聚苯乙烯為骨架的均孔后交聯(lián)樹脂(Post crosslinked isoporous resin)，它的化學(xué)結(jié)構(gòu)如圖所示 它的主要理化性能如下外觀棕色球狀顆粒；粒徑范圍0.3～0.6mm；含水量45～50％；濕真密度1.05～1.07g/ml；濕視密度0.70～0.75g/ml；比表面積700～900m2/g；平均孔徑8～10nm；下面實(shí)驗(yàn)例用于進(jìn)一步說明本發(fā)明。


圖1254nm熒光斑點(diǎn)圖2F乙基纖維素l3顯色后斑點(diǎn)圖3HPMC粘度影響的實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖450℃乙醇溶液中丹參酚酸B隨受熱時(shí)間的濃度變化實(shí)驗(yàn)例1丹參酚酸的檢測(cè)TLC條件點(diǎn)樣量10μl。固定相高效GF254板(Merck公司)，展開劑氯仿-乙酸乙酯-苯-甲酸甲醇(1.5∶2∶1∶1∶0.1)檢視在紫外燈下(254nm)檢視，見圖1；FeCl3噴霧顯色，在可見光下檢視，見圖2。
圖1254nm熒光斑點(diǎn)，1、2、3樹脂水洗液，4、5、6樹脂乙醇洗脫液，7、8、9藥材水提液以乙酸乙酯萃取液。圖2FeCl3顯色后斑點(diǎn)，1、2、3樹脂水洗液，4、5、6樹脂乙醇洗脫液，7、8、9藥材水提液以乙酸乙酯萃取液。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，丹參藥材的TLC圖譜與F2D樹脂醇洗液的TLC圖譜一致，并且樹脂水洗液中未見斑點(diǎn)。提示樹脂精制工藝較好的保留了丹參藥材中的酚酸類成分。因此F2D型樹脂適宜對(duì)丹參水提液精制。
實(shí)驗(yàn)例2丹參酚酸精制物與水提物中丹參素含量比較稱取丹參超臨界萃取后藥材粉末1000g三份，按照選定工藝條件，進(jìn)行提取、大孔樹脂精制后回收乙醇干燥。取精制物測(cè)定，并與水提物比較。結(jié)果見表1。
表1 丹參精制物與水提物中丹參素含量比較批次(％)固形物得率(％) 丹參素含量(％) 轉(zhuǎn)移率(％)丹參水提物 2000110519.50.6590.2丹參精制物 200011066.7 1.6076.2丹參精制物 200011076.9 1.5174.1丹參精制物 200011087.1 1.5277.0結(jié)果丹參超臨界CO2萃取后藥渣中提取丹參酚酸的工藝制得丹參精制粉末，小試三批，總固物得率為6.9±0.16％，丹參素含量為1.54±0.04％，提示該工藝可降低總固物得率，富集丹參藥材中水溶性有效成分。
實(shí)驗(yàn)例3不同速釋輔料對(duì)丹參酮類體外釋放影響1、基質(zhì)的影響1)制劑處方(注DST為丹參超臨界萃取物經(jīng)乙醇結(jié)晶所得精制品簡(jiǎn)寫)處方1DST粉末； 處方2DST 1g，聚乙二醇 5g；處方3DST 1g，聚乙二醇 5g，乳糖 5g；處方4DST 1g，波洛沙姆 5g；2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照制劑處方制備樣品，進(jìn)行溶出度測(cè)定，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表2。
表2、不同基質(zhì)制劑中丹參酮IIA、丹參酮I溶出度取樣量W 丹參酮IIA丹參酮I(g) 含量 溶出濃度 溶出度 含量 溶出濃度 溶出度(％) (μg/ml) (％) (％) (μg/ml) (％)處方1 0.098350.80.09#0.19#18.50.04#0.21#處方2 0.59049.210.49 0.91 3.100.231.23處方3 0.97324.500.90 2.06 1.580.291.92處方4 0.22138.220.77 4.27 2.810.213.30上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明①未加輔料的DST粉末中丹參酮IIA、丹參酮I體外溶出度很差，僅分別溶出0.19％、0.21％；在人工胃液中溶出的濃度僅約為0.09μg/ml和0.04μg/ml。
②聚乙二醇、波洛沙姆、聚乙二醇與乳糖聯(lián)合載體均可促進(jìn)丹參酮結(jié)晶的體外分散和溶出，其中聚乙二醇與乳糖聯(lián)合載體優(yōu)于聚乙二醇。
③波洛沙姆可顯著提高體外溶出效果，其制劑使丹參酮IIA和丹參酮I分別溶出3.30％、4.27％，較聚乙二醇處方為高，在人工胃液中溶出濃度提高了80倍。
2、稀釋劑對(duì)波洛沙姆-丹參酮制劑溶出度的影響1)制劑處方設(shè)計(jì)處方1DST 1g，波洛沙姆 10g，甘露醇 10g；處方2DST 1g，波洛沙姆 10g，葡萄糖 10g；處方3DST 1g，波洛沙姆 10g，乳糖 10g；處方4DST 1g，波洛沙姆 10g；2)實(shí)驗(yàn)結(jié)果按照處方制備樣品，進(jìn)行溶出度測(cè)定，結(jié)果見表3、4。
表3、不同稀釋劑的DST-波洛沙姆制劑中丹參酮IIA、丹參酮I溶出度丹參酮IIA 丹參酮I取樣量含量溶出濃度 溶出度 含量 溶出濃度 溶出度(g) (％)(μg/ml) (％)(％) (μg/ml) (％)處方12.08512.0015.06 36.10.72 5.13 34.2處方22.33791.9113.89 31.10.69 4.58 28.4處方32.09612.1614.26 31.50.77 3.43 21.3處方41.08363.806.01 14.61.43 1.85 11.9
表4、不同時(shí)間點(diǎn)處方4中丹參酮溶出度丹參酮IIA 丹參酮I0.5h溶出度1h溶出度0.5h溶出度1h溶出度處方4 31.5％35.8％ 21.3％25.2％結(jié)果顯示①單純波洛沙姆∶DST(1∶10)固體分散劑中丹參酮IIA、丹參酮I的0.5h溶出度分別為14.6％和11.9％，加入乳糖、甘露醇、葡萄糖等水溶性糖類形成的聯(lián)合載體等均可促進(jìn)丹參酮-波洛沙姆制劑中丹參酮的釋放，其中乳糖與波洛沙姆聯(lián)用0.5小時(shí)可溶出21％---31％。因此選擇乳糖作為丹參酮-波洛沙姆制劑的輔料。
②不同時(shí)間點(diǎn)溶出度的測(cè)定結(jié)果顯示0.5h的溶出度接近于1h的溶出度，作為速釋顆粒篩選處方，本實(shí)驗(yàn)采用0.5h的溶出度作為考察指標(biāo)。
實(shí)驗(yàn)例4不同緩釋輔料對(duì)丹參酚酸緩釋骨架片中丹參素溶出的影響3、羥丙甲基纖維素用量的影響1)制劑處方處方1羥丙甲基纖維素100KM-丹參提取物(0.2∶1)；處方2羥丙甲基纖維素100KM-丹參提取物(0.4∶1)；處方3羥丙甲基纖維素100KM-丹參提取物(0.6∶1)；處方4羥丙甲基纖維素100KM-丹參提取物(0.8∶1)；2)溶出度測(cè)定結(jié)果按照以上制劑處方制備樣品，進(jìn)行溶出度測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。
表5不同羥丙甲基纖維素用量丹參制劑的溶出度溶出度(％)處方 片重(g) 1h 2h 4h 5h 7h 9h1 0.452487.993.22 0.419928.942.465.976.685.492.93 0.426326.741.654.661.172.782.14 0.376829.140.055.861.374.278.8實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示羥丙甲基纖維素的用量影響在一定范圍內(nèi)影響制劑中丹參素的釋放。當(dāng)羥丙甲基纖維素100KM與丹參提取物比例為0.2∶1時(shí)，丹參素迅速釋放；當(dāng)羥丙甲基纖維素100KM與丹參提取物比例為0.4∶1-0.8∶1時(shí)，形成骨架片，丹參素釋放呈緩釋過程，羥丙甲基纖維素用量在一定范圍內(nèi)增加，釋藥速度減慢。
4、羥丙甲基纖維素粘度的影響處方5羥丙甲基纖維素4KM-丹參提取物(0.4∶1)；處方6羥丙甲基纖維素15KM-丹參提取物(0.4∶1)；處方2羥丙甲基纖維素100KM-丹參提取物(0.4∶1)；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明羥丙甲基纖維素4KM∶丹參提取物(0.4∶1)制成的骨架片，藥片很快崩解，在2h左右?guī)缀跞咳艹觥Ａu丙甲基纖維素15KM與羥丙甲基纖維素100KM制劑中丹參素的溶出呈緩釋過程。5、疏水性輔料乙基纖維素的影響1)制劑處方處方6羥丙甲基纖維素15KM-丹參提取物(0.4∶1)；處方7羥丙甲基纖維素15KM-乙基纖維素-丹參提取物(0.4∶0.2∶0.8)；處方8羥丙甲基纖維素15KM-乙基纖維素-丹參提取物(0.4∶0.4∶0.6)；處方9羥丙甲基纖維素15KM-乙基纖維素-丹參提取物(0.4∶0.6∶0.4)；2)溶出度測(cè)定結(jié)果按照以上制劑處方制備樣品，進(jìn)行溶出度測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。
表6不同用量乙基纖維素對(duì)羥丙甲基纖維素--丹參制劑溶出度的影響溶出度(％)處方 片重g 1h 2h 3h 4h 5h 7h7 0.437126.438.747.556.466.478.28 0.451924.535.643.550.557.373.39 0.405324.333.441.947.954.767.36 0.439135.748.058.266.373.186.7結(jié)果表明在羥丙甲基纖維素-丹參酚酸中添加乙基纖維素，丹參素的釋放仍呈緩釋過程，隨乙基纖維素用量的增加，藥物的釋放越慢。
6、其它輔料種類的影響1)制劑處方處方10羥丙甲基纖維素15KM-β-CD-丹參提取物(0.4∶0.2∶0.8)；
處方11羥丙甲基纖維素15KM-微晶纖維素-丹參提取物(0.4∶0.2∶0.8)；處方12羥丙甲基纖維素15KM-乳糖-丹參提取物(0.4∶0.2∶0.8)；處方13羥丙甲基纖維素15KM-乙基纖維素-丹參提取物(0.4∶0.2∶0.8)；2)溶出度測(cè)定結(jié)果按照以上制劑處方制備樣品，進(jìn)行溶出度測(cè)定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表7。
表7不同輔料種類對(duì)羥丙甲基纖維素--丹參制劑溶出度的影響溶出度(％)處方 片重g 1h 2h 3h 4h 5h 7h 9h100.478824.436.946.255.763.772.3 79.8110.455727.040.250.358.668.677.9 82.2120.479628.243.253.963.172.082.6130.437126.438.747.556.466.4實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示在制劑中保持羥丙甲基纖維素用量比例固定的情況下，分別加入乳糖、微晶纖維素、β-CD、乙基纖維素，制劑中丹參素的釋放仍呈緩釋過程。其中含乳糖制劑藥物釋放最快，其次為微晶纖維素、乙基纖維素，最慢為β-CD。加入微晶纖維素的制劑處方，制粒均勻，壓片過程中不粘沖，易成型，經(jīng)進(jìn)一步考察，溶出度穩(wěn)定，易于工業(yè)化大生產(chǎn)。
實(shí)驗(yàn)例5丹參酚酸提取工藝研究1、提取次數(shù)的篩選確定稱取丹參藥材粉末20g，浸泡2小時(shí)，加水煎煮三次，每次0.5小時(shí)，濾過，測(cè)定提取液中丹參酚酸B的含量，計(jì)算提取率。(丹參藥材中丹參酚酸B的含量為6.2％)分次提取液中丹參酚酸B的提取率藥液體積 峰面積 稀釋倍數(shù) 藥液濃度提取量(mg) 提取率(％)(ml) (mg/ml)第一次280 2149.3 5 3.0424 851.968.7第二次295 658.7 5 0.9427 278.122.4第三次350 132.7 5 0.2018 70.6 5.7結(jié)論丹參藥材提取兩次，丹參酚酸B提取率超過90％，提取比較完全，第三次提取意義不大，因此確定提取次數(shù)為兩次。
2、提取時(shí)間的篩選稱取丹參藥材粉末5g兩份，浸泡2小時(shí)，分別加水煎煮1小時(shí)、2小時(shí)，濾過，測(cè)定提取液中丹參酚酸B的含量，計(jì)算提取率。(丹參藥材中丹參酚酸B的含量為6.2％)不同煎煮時(shí)間提取液中丹參酚酸B的提取率藥液體積(ml) 稀釋倍數(shù) 峰面積藥液濃度(mg/ml) 提取量(mg) 提取率(％)1h100 10 898.6 0.2561 256.1 82.62h100 10 710.8 0.2032 203.2 65.5結(jié)論丹參藥材煎煮1小時(shí)提取液中丹參酚酸B含量較煎煮2小時(shí)多，結(jié)果提示長(zhǎng)時(shí)間煎煮可使丹參酚酸B降解損失。
3、提取方式的比較稱取丹參藥材粉末1g，加水80ml，煎煮0.5小時(shí)，濾過，定容100ml，測(cè)定提取液中丹參酚酸B的含量，計(jì)算提取率。(丹參藥材中丹參酚酸B的含量為6.2％)稱取丹參藥材粉末1g，加水80ml，超聲提取1小時(shí)，濾過，定容100ml，測(cè)定提取液中丹參酚酸B的含量，計(jì)算提取率。(丹參藥材中丹參酚酸B的含量為6.2％)不同提取方式對(duì)丹參酚酸B提取率的影響藥液體積(ml) 峰面積 藥液濃度(mg/ml) 提取量(mg) 提取率(％)超聲 100 348.90.1013 10.1 16.3煎煮 100 1255.9 0.3568 35.7 57.5結(jié)論煎煮提取較超聲提取丹參酚酸B提取量多，因此確定提取方式為煎煮提取。
3、正交實(shí)驗(yàn)篩選確定提取條件稱取丹參藥材粉末10g，浸泡2小時(shí)，按照正交試驗(yàn)項(xiàng)下條件加水煎煮兩次，濾過，合并提取液，測(cè)定提取液中丹參酚酸B的含量，計(jì)算提取率。(丹參藥材中丹參酚酸B的含量為6.2％)丹參藥材中丹參酚酸B提取正交實(shí)驗(yàn)篩選因素水平表溶媒用量 提取時(shí)間1 10，80.5h2 15，10 1h
丹參藥材中丹參酚酸B提取正交實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)項(xiàng)溶媒用量提取時(shí)間1 10，8 0.5h2 10，8 1h3 15，10 0.5h4 15，10 1h丹參藥材中丹參酚酸B提取正交實(shí)驗(yàn)結(jié)果試驗(yàn)項(xiàng) 藥液體積 峰面積 藥液濃度 提取量(mg) 提取率(％)(ml) (mg/ml)15000 119.4 0.1018 508.9 82.125000 598.1 96.535000 127.5 0.1074 537.1 86.645000 150.3 0.1231 615.6 99.2溶媒用量提取時(shí)間1 178.6 168.72 185.8 192.7R 4.4 12結(jié)論在設(shè)定考察條件下，提取時(shí)間是主要影響因素，溶媒用量是次要因素。因此確定提取條件為水提兩次，加水量分別為10，8倍，提取時(shí)間為1小時(shí)。(因素水平設(shè)計(jì)的說明提取時(shí)間的予實(shí)驗(yàn)表明提取1小時(shí)，丹參酚酸B提取量較2小時(shí)多，因此主要提取時(shí)間因素設(shè)計(jì)為0.5H與1H；基于提取時(shí)間的限制，考慮采用相對(duì)多的溶媒量，在相對(duì)短的時(shí)間內(nèi)提取丹參酚酸B，以避免其在煎煮過程中破壞，因此溶媒水平設(shè)計(jì)為相對(duì)較大的10，8與15，10)正交實(shí)驗(yàn)的重復(fù)實(shí)驗(yàn)取丹參藥材粉末70g，加水煎煮兩次(10倍量，8倍量)，每次1小時(shí)，濾過，合并兩次提取液，測(cè)定藥液體積，取10ml藥液，加水稀釋定容至100ml，HPLC進(jìn)樣測(cè)定。
正交實(shí)驗(yàn)重復(fù)實(shí)驗(yàn)藥液體積 稀釋倍數(shù) 進(jìn)樣量 峰面積 藥液濃度 提取量 提取率(ml)(μl) (mg/ml) (mg)(％)1 1320 1051085.93 3.0891 4077.5 94.02 1020 103832.43.9578 4036.9 93.1
4、濃縮過程的考察考察丹參水提液在100℃和60℃水浴中丹參酚酸B的濃度變化100℃和60℃丹參水提液中丹參酚酸B的受熱時(shí)間-濃度變化曲線100℃受熱時(shí)間 峰面積藥液濃度 60℃受熱時(shí)間 峰面積 藥液濃度(mg/ml) (mg/ml)0h 895.2 0.25520h 895.2 0.25520.5h 618.9 0.17731h 505.3 0.14531h 753.3 0.21522h 401.7 0.11622h 684.8 0.19593h 235.1 0.06923h 599.2 0.17185h 124.2 0.03795h 506.7 0.14576h 85.3 0.02706h 444.9 0.12839h 46.2 0.01529h 358.5 0.1018結(jié)論在100℃受熱時(shí)間為1小時(shí)，降低約30％，受熱時(shí)間為9小時(shí)，降低約95％；在60℃受熱時(shí)間為1小時(shí)，降低約15％，受熱時(shí)間為9小時(shí)，降低約60％。在50℃受熱時(shí)間為1小時(shí)，幾乎不降低，受熱時(shí)間為8小時(shí)，降低約40％。
丹參水提液中丹參酚酸B對(duì)熱敏感，丹參水提液不宜長(zhǎng)時(shí)間高溫濃縮。
5、考察丹參水提液和丹參甲醇溶液在50℃水浴中丹參酚酸B的濃度變化丹參水提液和乙醇溶液在50℃水浴中丹參酚酸B的受熱時(shí)間-濃度變化水溶液 峰面積藥液濃度(mg/ml) 50℃甲醇液 峰面積 藥液濃度(mg/ml)0h 739.5 0.2113 0h 457.5 0.13191h 742.8 0.2122 1h 503.3 0.14482h 704.9 0.2016 2h 451.1 0.13013h 623.6 0.1787 3h 487.0 0.14025h 541.6 0.1556 5h 510.4 0.14688h 429.9 0.1241 8h結(jié)論在50℃水浴中丹參乙醇溶液中丹參酚酸B受熱5小時(shí)幾乎不變化，比丹參水提液中丹參酚酸B更為穩(wěn)定，提示乙醇體系更有利于丹參酚酸B的穩(wěn)定。
6、丹參大孔樹脂精制工藝研究取水提藥液1000ml，過潔凈大孔樹脂柱(10ml柱長(zhǎng)相當(dāng)于25cm3柱體積，樹脂干重7.2867g)，按照1ml/min速度上樣(2.5BV/H)，收集過柱液。測(cè)定過柱液中丹酚酸B的濃度，結(jié)果如下1-10號(hào)管 10ml/管 11-20號(hào)管 20ml/管 21-30號(hào)管 30ml/管序號(hào) 進(jìn)樣量(μl) 峰面積 濃度(mg/ml)百分比(％)120-- -- --320-- -- --520-- -- --720-- -- --920-- -- --11 20-- -- --13 20 37.489 0.0034 0.3215 20 244.749 0.0180 1.6817 20 345.909 0.0250 2.3519 20 490.801 0.0353 3.3121 10 335.981 0.0488 4.5723 20 932.315 0.0664 6.2225 20 1010.381 0.0719 6.7427 20 1399.317 0.0993 9.3029 20 1549.826 0.1099 10.331 20 919.981 0.1311 12.333 10 1068.397 0.1520 14.235 10 1166.283 0.1658 15.537 10 1379.072 0.1957 18.2上柱液 2 1504.626 1.0672 100動(dòng)態(tài)吸附曲線顯示，從第30管以后，丹酚酸B泄漏量開始顯著增大，說明樹脂柱開始不能完全吸附藥液中的丹酚酸B，確定0-600ml藥液為基本吸附區(qū)域，為了丹酚酸B保留完全，600ml作為最大上樣量，相當(dāng)于最大上樣量以丹酚酸B計(jì)為87.9mg/g干樹脂。
洗脫過程考察按實(shí)驗(yàn)確定的最大上樣量，以丹參藥材提取液過已予處理的樹脂柱，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，分別以2.5倍柱體積(60ml)40％、60％、80％、95％乙醇洗脫樹脂柱，收集洗脫液，定容至100ml，稀釋10倍后，測(cè)定其中丹酚酸B的含量。結(jié)果見下表
洗脫液體積 洗脫液濃度 累計(jì)洗脫量 占總洗脫量的百分比(ml) (mg/ml) (mg) (％)40％乙醇 1004.8983 489.868.860％乙醇 1001.5371 153.721.680％乙醇 1000.5284 52.8 7.495％乙醇 1000.1555 15.6 2.240％、60％、80％、95％乙醇洗脫液HPLC峰形基本一致。
洗脫過程確定為40％、60％、80％乙醇分別洗脫3倍柱體積。
7、干燥工藝的篩選藥液分別置于干燥條件下干燥，干燥完畢后，測(cè)定其中丹酚酸B含量，結(jié)果如下不同干燥方式丹酚酸B保留率實(shí)驗(yàn)結(jié)果藥粉中含量(％)保留率(％)烘干(100℃*5h)55.7 82.4減壓干燥(60℃*5h) 58.1 89.0噴霧干燥 61.2 94.1冷凍干燥 63.1 96.7理論含量 65.2 100結(jié)果顯示噴霧干燥與冷凍干燥丹酚酸B保留率高，因此確定干燥方式為噴霧干燥。
丹酚酸B標(biāo)準(zhǔn)曲線精密稱取丹酚酸B4.8mg，以乙腈0.5％HAC50ml溶解，按色譜條件注入高效液相儀，進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，丹酚酸B含量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果如下丹酚酸B進(jìn)樣量與響應(yīng)值進(jìn)樣量(μl)丹酚酸B含量(μg) 峰面積0 003 0.288195.05 0.48 328.810 0.96 652.315 1.44 1015.830 2.88 2038.3Y＝709.91x-10.547 r＝0.9999 線性范圍為0-2.88μg精密稱取丹酚酸B4.8mg，以乙腈0.5％HAC50ml溶解，按色譜條件注入高效液相儀，進(jìn)樣測(cè)定。以峰面積響應(yīng)值為縱坐標(biāo)，丹酚酸B含量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸。結(jié)果如下
丹酚酸B進(jìn)樣量與響應(yīng)值進(jìn)樣量(μl)丹酚酸B含量(μg) 峰面積5 0.48 119.310 0.96 234.315 1.44 375.530 2.88 789.940 3.84 1082.250 4.8 1384.7Y＝293.91x-41.066 r＝0.9996 線性范圍為0.48-4.8μg實(shí)施例1丹參酮精制物及丹參酚酸提取物的制備將丹參藥材粉碎至40目投料后，萃取條件為以30％用量的95％乙醇作為夾帶劑，萃取壓力35Mpa，萃取溫度60℃，流量為11Kg/hKg藥材原料；解析條件為，一級(jí)解析壓力16Mpa、解析溫度60℃；二級(jí)解析壓力6Mpa、解析溫度45℃；萃取時(shí)間3h；干燥；得丹參酮類提取物；精制得丹參酮精制物；藥渣加水浸泡過夜后，煎煮四次，每次半小時(shí)，合并煎液，濾過。濾液過F2D樹脂柱，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，以丹參生藥量15倍的70％乙醇洗脫后，以工業(yè)乙醇洗脫近無色，合并洗脫液，回收乙醇后，噴霧干燥，即得丹參酚酸提取物粉末；總固物得率為6.9±0.16％，丹參素含量為1.54±0.04％。
實(shí)施例2丹參提取物緩釋制劑的制備羥丙甲基纖維素100KM 0.4g微晶纖維素0.2g丹參提取物0.8g，制成片劑，每片0.45g，每日服3-6片。
實(shí)施例3丹參提取物緩釋制劑的制備羥丙甲基纖維素15KM 0.8g丹參提取物1g，制成片劑，每片0.45g，每日服3-6片。
實(shí)施例4丹參酮精制物速釋制劑的制備波洛沙姆5g丹參酮精制物1g，以微粉化工藝制備，顆粒制成片劑或膠囊每片0.45g，每日服2-6片(粒)。
實(shí)施例5丹參酮精制物速釋制劑的制備波洛沙姆10g乳糖10g丹參酮精制物1g，以熔融法制劑，顆粒制成片劑或膠囊，片劑或膠囊每片0.45g，每日服3-9片(粒)。
實(shí)施例6丹參酮精制物速釋制劑的制備聚乙二醇5g丹參酮精制物1g，以熔融法制劑，顆粒制成片劑或膠囊，片劑或膠囊每片0.45g，每日服2-6片(粒)。
實(shí)施例7丹參酮精制物速釋制劑的制備波洛沙姆10g乳糖10g丹參酮精制物10g，以微粉化法制備顆粒，制成片劑或膠囊，片劑或膠囊每片0.45g，每日服1-3片(粒)。
實(shí)施例8丹參酚酸提取物的制備稱取丹參藥材粉末或超臨界萃取后藥渣20g，浸泡2小時(shí)，加水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過；取水提藥液500ml，過潔凈大孔樹脂柱，10ml柱長(zhǎng)相當(dāng)于25cm3柱體積，樹脂干重7.2867g，收集過柱液；600ml作為最大上樣量，相當(dāng)于最大上樣量以丹酚酸B計(jì)為87.9mg/g干樹脂；洗脫過程確定為40％、60％、80％乙醇3倍柱體積分別洗脫；丹參乙醇溶液50℃左右減壓濃縮；噴霧干燥或冷凍干燥，得丹參酚酸提取物。
實(shí)施例9丹參酚酸提取物緩釋片劑原料丹參酚酸提取物0.8g，乳糖0.2g，羥丙甲基纖維素100KM 0.8g，制成片劑，每片0.45g，每日服4-12片。
實(shí)施例10原料丹參酚酸提取物0.6g，β-CD0.4g，羥丙甲基纖維素15KM 0.6g，制成片劑，每片每粒0.45g，每日服5-15片。
權(quán)利要求
1.一種丹參酮精制物速釋制劑，其特征在于該制劑是由如下原料制成的丹參酮精制物∶波洛沙姆或聚乙二醇比例為1∶0.5-12。
2.如權(quán)利要求1所述的丹參酮精制物速釋制劑，其特征在于所述比例為1∶5。
3.如權(quán)利要求1所述的丹參酮精制物速釋制劑，其特征在于該制劑是由如下原料制成的丹參酮精制物∶波洛沙姆∶乳糖1∶0.5-12∶0.5-12。
4.如權(quán)利要求3所述的丹參酮精制物速釋制劑，其特征在于其中乳糖可由甘露醇或葡萄糖替換。
5.如權(quán)利要求3或4所述的丹參酮精制物速釋制劑，其特征在于所述比例為1∶10∶10。
6.如權(quán)利要求1、2、3或4所述的速釋制劑的制備方法采用熔融法或微粉化法。
7.一種丹參酚酸提取物緩釋制劑，其特征在于該制劑是由如下原料制成的丹參提取物∶羥丙甲基纖維素100KM或羥丙甲基纖維素15KM為1∶0.4-1。
8.如權(quán)利要求7所述的丹參酚酸提取物緩釋制劑，其特征在于優(yōu)選比例為1∶0.8。
9.如權(quán)利要求7所述的丹參酚酸提取物緩釋制劑，其特征在于該制劑是由如下原料制成的丹參提取物∶乳糖∶羥丙甲基纖維素100KM或羥丙甲基纖維素15KM為0.4-1∶0.1-0.6∶0.4-1。
10.如權(quán)利要求7所述的丹參酚酸提取物緩釋制劑，其特征在于其中乳糖可由微晶纖維素、β-CD、乙基纖維素替換。
11.如權(quán)利要求9或10所述的丹參酚酸提取物緩釋制劑，其特征在于所述比例為0.8∶0.2∶0.4。
12.一種丹參酮精制物及丹參酚酸精制物的制備方法將丹參藥材粉碎投料后，萃取條件為以20-40％用量的70-95％乙醇作為夾帶劑，萃取壓力30-40Mpa，萃取溫度50-75℃，流量為9-12Kg/hKg藥材原料；解析條件為，一級(jí)解析壓力14-18Mpa、解析溫度50-75℃；二級(jí)解析壓力4-8Mpa、解析溫度30-50℃；萃取時(shí)間2-4h；干燥；得丹參酮類提取物；精制得丹參酮精制物；藥渣加水浸泡過夜后，煎煮2-5次，每次0.5-2小時(shí)，合并煎液，濾過；濾液過樹脂柱，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，以丹參生藥量13-20倍的30-95％乙醇洗脫，洗脫液回收乙醇后，噴霧干燥，即得丹參酚酸提取物精制粉末。
13.如權(quán)利要求12所述的制備方法，其特征在于該方法為將丹參藥材粉碎至40目投料后，萃取條件為以30％用量的95％乙醇作為夾帶劑，萃取壓力35Mpa，萃取溫度60℃，流量為11Kg/hKg藥材原料；解析條件為，一級(jí)解析壓力16Mpa、解析溫度60℃；二級(jí)解析壓力6Mpa、解析溫度45℃；萃取時(shí)間3h；干燥；得丹參酮類提取物；精制得丹參酮精制物；藥渣加水浸泡過夜后，煎煮四次，每次半小時(shí)，合并煎液，濾過。濾液過樹脂柱，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，以丹參生藥量15倍的70％乙醇洗脫后，工業(yè)乙醇洗脫至近無色，合并洗脫液，回收乙醇后，噴霧干燥，即得丹參提取物精制粉末；總固物得率為6.9±0.16％，丹參素含量為1.54±0.04％，丹參酚酸B含量為50％以上。
14.丹參酚酸提取物的制備方法，其特征在于該方法為取丹參藥材粗粉或丹參超臨界萃取后藥渣，浸泡2小時(shí)，加水煎煮2次，每次1小時(shí)，濾過，藥液過潔凈大孔樹脂柱，上樣至相當(dāng)于最大上樣量以丹酚酸B計(jì)為87.9mg/g干樹脂，水洗至糖的反應(yīng)為陰性后，以40％-80％乙醇3-9倍柱體積洗脫至幾乎無色，收集乙醇洗脫液；丹參乙醇溶液50℃左右減壓濃縮；濃縮液噴霧干燥或冷凍干燥，得丹參酚酸提取物。
15.如權(quán)利要求12.13或14所述的制備方法，其特征在于該方法中大孔吸附樹脂為以聚苯乙烯為骨架的均孔后交聯(lián)樹脂，外觀呈棕色球狀顆粒；粒徑范圍0.3～0.6mm；含水量45～50％；濕真密度1.05～1.07g/ml；濕視密度0.70～0.75g/ml；比表面積700～900m2/g；平均孔徑8～10nm。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種丹參的速釋制劑和緩釋制劑，本發(fā)明還公開了丹參酮類提取物以及丹參酚酸類提取物的制備方法。本發(fā)明速釋制劑由丹參酮精制物Poloxamer或PEG乳糖為1∶0.5－12∶0.5－12經(jīng)熔融法或微粉化法制成；本發(fā)明緩釋制劑由丹參酚酸提取物MCHPMC100KM或HPMC15KM為0.4－1∶0.1－0.6∶0.4－1制成。本發(fā)明采用超臨界二氧化碳萃取工藝組合水提—大孔樹脂工藝提取富集丹參藥材中丹參酮類和丹參酚酸類有效部位，具有提取保留率高，提取物中丹參酮類和丹參酚酸類含量高的優(yōu)勢(shì)，丹參酮類成分在速釋制劑中溶出度高，丹參酚酸類成分自緩釋骨架片中釋藥平穩(wěn)。
文檔編號(hào)A61P7/02GK1498615SQ20031011345
公開日2004年5月26日 申請(qǐng)日期2003年11月12日 優(yōu)先權(quán)日2002年11月12日
發(fā)明者張軍, 姚育法, 劉良, 張政樸, 賴小平, 張 軍 申請(qǐng)人:張軍, 姚育法, 張 軍