專利名稱：一種含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于中藥制藥技術(shù)領(lǐng)域，具體涉及一種含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物及其制備方法。
背景技術(shù)：
銀杏葉提取物(GBE)及其制劑中主要藥用活性成分為銀杏黃酮類、銀杏內(nèi)酯類成分，目前已經(jīng)被廣泛用于心腦血管和外周血管疾病的治療，國內(nèi)外已有大量報道及相關(guān)專利。而銀杏中除已被開發(fā)為藥物的上述兩類成分外，還用一類聚戊烯類化合物，它以兩種形式存在于銀杏中，一為聚戊烯醇，另一類為聚戊烯乙酸酯，其中聚戊烯醇因其結(jié)構(gòu)中與哺乳動物中具有重要生物作用的多萜醇結(jié)構(gòu)相近而引起關(guān)注。
銀杏葉聚戊烯醇在體內(nèi)能代謝為多萜醇磷酸酯，參與細胞膜糖蛋白的生物合成。人體中多萜醇磷酸酯不足，將影響機體免疫功能，細胞分裂和再生，并導致癌變。腫瘤病人的血、尿中多萜醇含量明顯高于正常人。研究表明銀杏葉聚戊烯醇具有明顯的抑制腫瘤的生物活性，對移植性肝癌具有較好的抑制作用，與化療藥聯(lián)合使用能提高腫瘤抑制率，可用于腫瘤的防治和輔助化療藥。
中國專利(ZL01113696.0)報道用溶劑提取、皂化反應、溶劑萃取、沉淀分離和柱層析法制備銀杏葉聚戊烯醇，從實施例來看，該方法工藝比較復雜，采用的硅膠柱層析法難以進行工業(yè)化生產(chǎn)。中國專利(申請?zhí)?2113681.5)公開了一種從銀杏葉中提取聚異戊烯醇的工藝，它包括浸提、純化、精制、皂化、萃取、純化等步驟，該方法提取率和產(chǎn)品純度高，但該工藝包括兩步硅膠柱層析工藝，依然存在工業(yè)化生產(chǎn)困難的問題。日本專利(JP昭58-20174和EP166436A2)報道用溶劑提取、柱層析分離、溶劑溶解分級、冷凍沉淀分離、分子精餾等方法制備銀杏葉聚戊烯醇，該專利用銀杏黃葉為原料，氯仿室溫浸泡、硅膠柱分離制備聚戊烯醇乙酸酯、再經(jīng)水解和硅膠柱層析分離，制備聚戊烯醇，產(chǎn)品得率僅有0.2％-0.3％。該方法產(chǎn)品得率低，成本高，工藝復雜，且同樣存在難以工業(yè)化生產(chǎn)的問題。

發(fā)明內(nèi)容
超臨界萃取技術(shù)是近30年來引起人們極大興趣的化工新技術(shù)，近年來超臨界二氧化碳萃取技術(shù)被廣泛應用于中草藥的提取分離和純化。超臨界二氧化碳萃取對不同物質(zhì)的溶解能力差別很大，與物質(zhì)的極性、沸點和相對分子量有密切關(guān)系，一般來說具有以下規(guī)律(1)親脂性、低沸點成分可在104kPa以下萃取，如揮發(fā)油、烴、酯、內(nèi)酯、醚、環(huán)氧化合物等。
(2)強的極性集團(如-OH，-COOH)的引入，使得萃取變得困難。
(3)更強的極性物質(zhì)，如醣類、氨基酸類在40Mpa以下是不能被萃取出的(4)化合物的相對分子量越高，越難萃取，相對分子量在200-400范圍內(nèi)的組分容易萃取，有些低分子量甚至可直接用二氧化碳液體提??；高相對分子量物質(zhì)則很難萃取。
(5)當混合物中的組分間的相對揮發(fā)度較大或極性有較大差別時。可以在不同的壓力下使混合物得到分餾。
基于上述原因，本發(fā)明將銀杏葉用親脂性溶劑提取后，采用超臨界二氧化碳萃取技術(shù)除雜純化聚戊烯醇，可以得到純度較高的聚戊烯醇，聚戊烯醇是一類強親脂性的化合物，用石油醚等溶劑提取銀杏葉時，除了可以得到聚戊烯醇外，其它一些脂溶性成分如胡蘿卜素、葉綠素、蠟質(zhì)、脂肪酸也隨之溶出，由于這些成分與聚戊烯醇的極性相差不大，因而分離比較困難，目前主要是用柱層析方法分離，根據(jù)超臨界萃取的相關(guān)特點，雖然聚戊烯醇脂溶性較強，但由于聚戊烯醇其相對分子量較大而難以被萃取出來，而胡蘿卜素、葉綠素、蠟質(zhì)、脂肪酸等其它脂溶性成分則都可以萃取出來，從而可以使聚戊烯醇得到純化。將提取得到的聚戊烯醇制備成適合的制劑，可用于腫瘤的防治及輔助化療藥。
本發(fā)明旨在提供一種含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物及其制備方法。
本發(fā)明另一目的在提供一種適合于工業(yè)化生產(chǎn)銀杏葉聚戊烯醇的制備方法。
本發(fā)明的內(nèi)容通過以下方案實現(xiàn)。
一、工藝制法(1)取干燥銀杏葉，加親脂性溶劑分次進行提取，提取液過濾，合并濾液，濾液加10％-20％堿的醇溶液，水解4～8小時，靜置分層，石油醚水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為10～30Mpa，溫度30～60℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，即為聚戊烯醇。聚戊烯醇含量不得低于80％。
(3)本發(fā)明的制劑處方為軟膠囊組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料30-150重量份；滴丸組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料40-200重量份；乳劑組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料10-50重量份；口服液組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料10-50重量份；注射劑組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料160-800重量份。
(4)本發(fā)明的制劑的制備方法為軟膠囊制備方法為取聚戊烯醇，加輔料混勻后，過膠體磨，壓制軟膠囊，即得。
滴丸制備方法為取輔料加熱熔融后，加入聚戊烯醇，密閉并保溫在80℃，滴入冷卻的二甲基硅油中，收集滴丸，吸取表面的冷卻劑，干燥，即得。乳劑制備方法為取處方量輔料與聚戊烯醇，用組織搗碎機攪拌5分鐘，加入適量水，立即攪拌5分鐘，再加水至全量攪拌5分鐘，乳化溫度70℃，即得。
口服液制備方法為取聚戊犧醇、單油酸酯、黃原膠分散均勻，另取聚山梨酯-80加水溶解后，加入上述液體中，加入山梨醇、香精，加水至全量，攪勻，灌裝，即得。
注射劑制備方法為取處方量卵磷脂和聚戊烯醇放入高速搗碎機內(nèi)，加甘油及適量注射用水，在氮氣流下作成均勻的磷脂分散液，分散液轉(zhuǎn)入二步高壓乳勻機內(nèi)，再加入精制豆油，在氮氣流下經(jīng)兩步乳化，冷卻后，在氮氣流下用垂熔玻傻漏斗濾過，灌裝，滅菌。，即得。
以上制劑中軟膠囊的輔料可以是植物油、聚乙二醇400、蜂蠟中的一種或幾種的混合物。
滴丸的輔料可以是聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一種。
乳劑的輔料可以是吐溫-20、卵磷脂中的一種或幾種的混合物。
口服液的輔料可以是山梨醇、聚山梨酯-80、單油酸酯、香精、黃原膠中的一種或幾種的混合物。
注射液的輔料可以為精制油、卵磷脂、甘油中的一種或幾種的混合物。
以上制劑首選軟膠囊、滴丸和乳劑.
二、檢測分析高效液相色譜法測定聚戊烯醇的含量實驗儀器日本島津GC-9A型氣相色譜儀；C-R3A微處理機。
實驗藥品聚戊烯醇對照品(純度大于99％)聚戊烯醇(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)色譜條件色譜柱G.L science ODS-3(4.6mm*250mm，5μm)；流動相異丙醇-甲醇-正己烷-水(90∶50∶30∶5)；流速1.0ml/min；柱溫40℃；檢測波長215nm。
實驗方法精密稱取干燥至恒重的聚戊烯醇對照品5.0mg，置于10ml容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，配制成0.5mg/ml的對照品溶液，精密量取對照品溶液1、2、4、6、8ml微升，注如入高效液相色譜儀中，得到回歸方程為Y＝2756150 X-59877，r＝0.9992.
分別精密稱取不同批次的聚戊烯醇樣品5批，置于10ml容量瓶中，加正己烷稀釋至刻度，進樣4μl，進行計算，得到結(jié)果見表1表1 不同批次聚戊烯醇含量測定結(jié)果聚戊烯醇百分含量批次(％)1 85.532 83.143 82.774 84..015 82.82結(jié)論通過上述分析檢測實驗，按照本發(fā)明的方法制備得到的聚戊烯醇含量可達80％以上，提取物純度高，充分說明本發(fā)明的工藝具有實際意義，利于制成制劑。
四.藥理實施例實驗動物健康小鼠，體重18-22g，雌雄各半。
瘤株肉瘤S180，艾氏癌EC，肝癌Heps均由上海藥物所引進，江蘇省腫瘤研究所傳代接種。
實驗藥物生理鹽水(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)本發(fā)明各組制劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)康萊特注射液(浙江康萊特藥業(yè)有限公司)實驗方法取健康、腫瘤生長旺盛的荷瘤小鼠，處死后取出瘤塊，在勻漿器中加入生理鹽水，制成腫瘤勻漿液，再以生理鹽水1∶3稀釋，然后取0.2ml注入小鼠左腋下皮下，24小時稱重，口服制劑每日小鼠灌胃給藥一次，注射劑每日小鼠尾靜脈給藥一次，連續(xù)給藥8-10天。停藥次日處死小鼠，稱體重并細心剝離皮下瘤塊，于EM50電子天平稱取瘤重。
結(jié)果；1.對小鼠移植性腫瘤S180的生長抑制作用按上述實驗方法進行試驗，結(jié)果見表2表2 各組制劑對小鼠S180腫瘤生長抑制作用組別瘤體重量(g) 抑瘤率％生理鹽水2.0145市售康萊特注射液1.028948.92**本發(fā)明軟嬌囊劑 0.867456.94**#本發(fā)明滴丸 0.862457.19**#本發(fā)明乳劑 0.872356.70**#本發(fā)明口服液劑 0.870156.81**#本發(fā)明注射劑0.861157.25**#
注與生理鹽水組比較**P＜0.01，與陽性對照組比較#P＜0.052.對小鼠移植性艾氏癌EC的抑制作用按上述實驗方法進行試驗，結(jié)果見下表4。
表3 各組制劑對小鼠移植性艾氏癌EC的抑制作用組別瘤體重量(g) 抑瘤率％生理鹽水1.4952市售康萊特注射液0.7744 48.21**本發(fā)明軟嬌囊劑 0.7613 49.08**本發(fā)明滴丸 0.7497 49.86**本發(fā)明乳劑 0.7587 49.25**本發(fā)明口服液劑 0.7549 49.51**本發(fā)明注射劑0.7405 50.47**注與生理鹽水組比較**P＜0.01，3.對小鼠移植性肝癌Heps的抑制作用表3 各組制劑對小鼠移植性肝癌Heps的抑制作用組別 瘤體重量(g) 抑瘤率％生理鹽水 2.6425市售康萊特注射液 1.602939.34**本發(fā)明軟嬌囊劑1.578740.25**本發(fā)明滴丸1.564440.80**本發(fā)明乳劑1.569340.61**本發(fā)明口服液劑1.569740.60**本發(fā)明注射劑 1.533141.98**注與生理鹽水組比較**P＜0.01，結(jié)論通過以上藥效實驗表明，本發(fā)明的各組制劑對移植性腫瘤S180，EC和Heps都具有很好的抑制效果，效果都好于陽性對照組，特別對S180較敏感，說明本發(fā)明的銀杏葉聚戊烯醇制劑具有較強的抗腫瘤作用。
五.制備實施例實施例1(1)取干燥銀杏葉20kg，粉碎，放入提取器中，加石油醚(60-90℃)200kg，50℃浸提10小時，濾過，殘渣再加100kg石油醚(60-90℃)提取二次，合并濾液。濾液加10％NaOH的乙醇溶液，水解8小時，靜置分層，石油醚水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為30Mpa，溫度45℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，得聚戊烯醇119g。(聚戊烯醇含量為85.53％)。
(3)制劑處方為軟膠囊處方銀杏葉聚戊烯醇40g，花生油60g，蜂蠟1g；滴丸處方銀杏葉聚戊烯醇10g，聚乙二醇6000 12g乳劑處方銀杏葉聚戊烯醇8g，吐溫-20 2g，卵磷脂0.3g；口服液處方銀杏葉聚戊烯醇8g，山梨醇0.08g，聚山梨酯-80 2.5g，單油酸酯0.6g，橘子香精0.5g，黃原膠0.4g；注射劑處方聚戊烯醇8g，精制大豆油100g，卵磷脂6g，甘油25g；(4)分別取處方量聚戊烯醇和輔料，制備成軟膠囊1000粒、滴丸1000粒、乳劑1000ml、口服液1000ml和注射劑1000ml。
實施例2(1)干燥銀杏葉10kg，粉碎，放入提取器中，加石油醚(60-90℃)120kg，熱回流提取4小時，濾過，殘渣再加50kg石油醚(60-90℃)提取一次，合并濾液。濾液加20％KOH的甲醇溶液，水解4小時，靜置分層，石油醚水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為20Mpa，溫度40℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，得聚戊烯醇60g。(聚戊烯醇含量為83.14％)。
(3)制劑處方為軟膠囊處方銀杏葉聚戊烯醇20g，液體石蠟30g，蜂蠟0.5g；滴丸處方銀杏葉聚戊烯醇5g，聚乙二醇4000 6g乳劑處方銀杏葉聚戊烯醇4g，吐溫-20 1g，卵磷脂0.16g；口服液處方銀杏葉聚戊烯醇4g，山梨醇0.05g，聚山梨酯-80 1.2g，單油酸酯0.3g，薄荷香精0.25g，黃原膠0.2g；注射劑處方聚戊烯醇4g，精制大豆油50g，卵磷脂2.5g，甘油28g；(4)分別取處方量聚戊烯醇和輔料，制備成軟膠囊1000粒、滴丸1000粒、乳劑1000ml、口服液1000ml和注射劑1000ml。
實施例3(1)干燥銀杏葉15kg，粉碎，放入提取器中，加正己烷150kg，60℃提取6小時，濾過，殘渣再加90kg正己烷提取一次，合并濾液。濾液加10％KOH的乙醇溶液，水解8小時，靜置分層，正己烷水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為10Mpa，溫度30℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，得聚戊烯醇90g。(聚戊烯醇含量為82.77％)。
(3)制劑處方為軟膠囊劑處方銀杏葉聚戊烯醇50g，聚乙二醇75g，蜂蠟1.25g；滴丸處方銀杏葉聚戊烯醇12.5g，聚乙二醇4000 15g乳劑處方銀杏葉聚戊烯醇10g，吐溫-20 2.5g，卵磷脂0.4g；口服液劑處方銀杏葉聚戊烯醇10g，山梨醇0.1g，聚山梨酯-80 3.2g，單油酸酯0.75g，蘋果香精0.625g，黃原膠0.5g；注射劑處方聚戊烯醇10g，精制大豆油100g，卵磷脂7.5g，甘油32g；(4)分別取處方量聚戊烯醇和輔料，制備成軟膠囊1000粒、滴丸1000粒、乳劑1000ml、口服液1000ml和注射劑1000ml。
實施例4(1)取干燥銀杏葉12kg，粉碎，放入提取器中，加石正己烷120kg，60℃循環(huán)回流提取8小時，濾過，合并濾液。濾液加15％NaOH的乙醇溶液，水解6小時，靜置分層，正己烷水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為20Mpa，溫度60℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，得聚戊烯醇72g。(聚戊烯醇含量為84.01％)。
(3)制劑處方為軟膠囊劑處方銀杏葉聚戊烯醇30g，大豆油45g，蜂蠟1.0g；
滴丸處方銀杏葉聚戊烯醇7.5g，聚乙二醇4000 10g乳劑處方銀杏葉聚戊烯醇5g，吐溫-20 1.1g，卵磷脂0.2g；口服液劑處方銀杏葉聚戊烯醇5g，山梨醇0.05g，聚山梨酯-80 1.5g，單油酸酯0.4，薄荷香精0.3g；注射劑處方聚戊烯醇5g，精制大豆油50g，卵磷脂3g，甘油15g(4)分別取處方量聚戊烯醇和輔料，制備成軟膠囊1000粒、滴丸1000粒、乳劑1000ml、口服液1000ml和注射劑1000ml。
實施例5(1)干燥銀杏葉20kg，粉碎，放入提取器中，加石油醚(60-90℃)200kg，50℃浸泡8小時，濾過，殘渣再加120kg石油醚(60-90℃)提取二次，合并濾液。濾液加10％KOH的乙醇溶液，水解8小時，靜置分層，石油醚水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。
(2)將聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為30Mpa，溫度45℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，得聚戊烯醇120g。(聚戊烯醇含量為82.82％)。
(3)制劑處方為軟膠囊劑處方銀杏葉聚戊烯醇40g，菜油60g，蜂蠟1g；滴丸處方銀杏葉聚戊烯醇10g，聚乙二醇4000 12g乳劑處方銀杏葉聚戊烯醇8g，吐溫-20 2g，卵磷脂0.4g；口服液劑處方銀杏葉聚戊烯醇8g，山梨醇0.08g，聚山梨酯-80 2.5g，單油酸酯0.5，橘子香精0.4g；
注射劑處方聚戊烯醇8g，精制大豆油90g，卵磷脂6g，甘油24g；(4)分別取處方量聚戊烯醇和輔料，制備成軟膠囊1000粒、滴丸1000粒、乳劑1000ml、口服液1000ml和注射劑1000ml。
權(quán)利要求
1.一種含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物，其特征在于是由下述方法制備而成的(1)銀杏葉葉，加親脂性溶劑分次進行提取，提取液過濾，合并濾液，濾液加10％-20％堿的醇溶液，水解4～8小時，靜置分層，石油醚水洗后減壓回收溶劑，得聚戊烯醇粗提物。(2)聚戊烯醇粗提取物置超臨界萃取設(shè)備中，用超臨界二氧化碳萃取除雜，在壓力為10～30Mpa，溫度30～60℃的超臨界狀態(tài)下抽提，并在30～60℃下逐級降壓，除去脂溶性雜質(zhì)，從萃取釜中放出得到萃余物，即為聚戊烯醇。其中于聚戊烯醇的純度不低于80％。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物，其特征在于將其制成軟膠囊、滴丸、乳劑、口服液或注射劑其中(1)軟膠囊組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料30-150重量份，其制備方法為取聚戊烯醇，加輔料混勻后，過膠體磨，壓制軟膠囊，即得。(2)滴丸組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料40-200重量份，其制備方法為取輔料加熱熔融后，加入聚戊烯醇，密閉并保溫在80℃，滴入冷卻的二甲基硅油中，收集滴丸，吸取表面的冷卻劑，干燥，即得。(3)乳劑組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料10-50重量份，其制備方法為取處方量輔料與聚戊烯醇，用組織搗碎機攪拌5分鐘，加入適量水，立即攪拌5分鐘，再加水至處方量攪拌5分鐘，乳化溫度70℃，即得。(4)口服液組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料10-50重量份，其制備方法為取聚戊犧醇、單油酸酯、黃原膠分散均勻，另取聚山梨酯-80加水溶解后，加入上述液體中，再加入山梨醇、香精，加水至全量，攪勻，灌裝，即得。(5)注射劑組成為聚戊烯醇20-100重量份，藥用輔料160-800重量份，其制備方法為取處方量卵磷脂和聚戊烯醇放入高速搗碎機內(nèi)，加甘油及適量注射用水，在氮氣流下做成均勻的磷脂分散液，分散液轉(zhuǎn)入二步高壓乳勻機內(nèi)，再加入精制豆油，在氮氣流下經(jīng)兩步乳化，冷卻后，在氮氣流下用垂熔玻傻漏斗濾過，灌裝，滅菌。，即得。
3.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中軟膠囊的藥用輔料是植物油、液體石蠟、聚乙二醇400、蜂蠟中的兩種的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中滴丸的藥用輔料是聚乙二醇4000、聚乙二醇6000中的一種。
5.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中乳劑的藥用輔料是吐溫-20和卵磷脂。
6.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中口服液的藥用輔料是山梨醇、聚山梨酯-80、單油酸酯、香精、黃原膠中的四種或五種的混合物。
7.根據(jù)權(quán)利要求2的藥物組合物，其中注射劑的藥用輔料為精制大豆油、卵磷脂、甘油的混合物。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含銀杏葉聚戊烯醇的藥物組合物及其制備方法，其特征在于采用了超臨界二氧化碳萃取法除去聚戊烯醇中的雜質(zhì)，聚戊烯醇的純度可以達到80％以上，采用本發(fā)明制備的聚戊烯醇與適當輔料混合，可以制成軟膠囊、滴丸、乳劑、口服液或注射液。藥理實驗結(jié)果表明，本發(fā)明的聚戊烯醇制劑具有較好的藥理作用。
文檔編號A61K31/74GK1628696SQ200410074088
公開日2005年6月22日 申請日期2004年9月3日 優(yōu)先權(quán)日2004年9月3日
發(fā)明者張平 申請人:張平