專利名稱：三環(huán)吲哚衍生物和它們在治療阿爾茨海默病中的用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及具有Asp2(β-分泌酶、BACE1或Memapsin)抑制活性的新的羥基乙基胺化合物、其制備方法、包含這些化合物的組合物以及其在治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病尤其是阿爾茨海默病中的用途。
阿爾茨海默病為一種退行性腦病，其中老年斑形式的細胞外Aβ沉積為該疾病的關鍵性病理特點(Selkoe，D.J.(2001)Physiological Reviews 81741-766)。老年斑的存在伴隨顯著的炎性反應以及神經元喪失。β-淀粉樣蛋白(Aβ)存在可溶的和不溶的纖絲形式并且特定的纖絲形式已經確定為主要的神經毒性物質(Vassar，R.and Citron，M.(2000)Neuron 27419-422)。此外，已經報道，癡呆與可溶淀粉樣蛋白水平而不是斑痕負荷更緊密地相關(Naslund，J.等(2000)J.Am.Med.Assoc.121571-1577；Younkin，S.(2001)Nat.Med.18-19)。已知Aβ通過被公知為Asp2(也已知為β-分泌酶、BACE1或Memapsin)的天冬氨酰蛋白酶裂解β淀粉樣蛋白前體蛋白(也被稱為APP)而產生(De Strooper，B.and Konig，G.(1999)Nature 402471-472)。
因此，已經有人建議抑制Asp2酶可降低APP處理的水平并因此降低見于腦內的Aβ肽水平。因此，也認為抑制Asp2酶為治療阿爾茨海默病的有效治療靶標。
APP可被多種蛋白水解酶裂解(De Strooper，B.和Konig，G.(1999)Nature 402471-472)。淀粉樣蛋白酶解通路(amyloidogenic pathway)的關鍵酶為Asp2(β-分泌酶)和γ-分泌酶，二者都為天冬氨酰類蛋白酶，并通過這些酶裂解APP產生Aβ。非淀粉樣蛋白酶解的α-分泌酶通路，其阻止Aβ的形成，已經顯示可被許多蛋白酶催化，最佳的候選者為ADAM10、解聯蛋白和金屬蛋白酶。Asp1已經顯示出體外的α-和β-分泌酶活性。Asp1和Asp2的表達模式完全不同，Asp2在胰腺以及腦中表達最多，而Asp1表達發(fā)生在許多其他的外周組織中。Asp2敲出小鼠顯示Asp2的缺乏破壞了Aβ的產生，并且還表明在這種動物模型中，內源性的Asp1不能代替Asp2的不足(Luo，Y.等(2001)Nat Neurosci.4231-232；Cai，H.等(2001)Nat Neurosci.4233-234；Roberds，S.L.等(2001)Hum.Mol.Genet.101317-1324)。
對于可在治療上用于治療阿爾茨海默病的藥劑，優(yōu)選所述的藥劑為Asp2酶的強效抑制劑，但是理想地其對Asp2的選擇性應該強于天冬氨酰蛋白酶家族中的其他酶，例如，組織蛋白酶D(Connor，G.E.(1998)CathepsinD in Handbook of Proteolytic Enzymes，Barrett，A.J.，Rawlings，N.D.，&Woesner，J.F.(Eds)Academic Press London.pp828-836)。
WO 01/70672、WO 02/02512、WO 02/02505和WO 02/02506(ElanPharmaceuticals Inc.)記載了一系列具有β-分泌酶活性的羥基乙基胺化合物，暗示其可用于治療阿爾茨海默病。
我們發(fā)現了新的一系列為Asp2酶強效抑制劑的化合物，因此表明這些化合物具有有效用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積(β-amyloid deposits)為特征的疾病如阿爾茨海默病的潛力。
因此，根據本發(fā)明第一方面，我們提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物 其中R1和R2獨立地表示C1-3烷基、C2-4鏈烯基、鹵素、C1-3烷氧基、氨基、氰基或羥基；m和n獨立地表示0、1或2；p表示1或2；A-B表示-NR5-SO2-或-NR5-CO-；R5表示氫、C1-6烷基、C3-6鏈烯基、C3-6炔基、C3-8環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基-、雜芳基C1-6烷基-、芳基C3-8環(huán)烷基-或雜芳基C3-8環(huán)烷基-；X-Y-Z表示-N-CR8＝CR9-；R8表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基；R9表示氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基-、雜芳基C1-6烷基-、芳基C3-8環(huán)烷基-、雜芳基C3-8環(huán)烷基-、-COOR10、-OR10、-CONR10R11、-SO2NR10R11、-COC1-6烷基或-SO2C1-6烷基(其中R10和R11獨立地表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基)；R3表示任選取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-雜環(huán)基；R4表示氫、任選取代的C1-10烷基、C2-6炔基、-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烷基-芳基、-雜環(huán)基-芳基、-C1-6烷基-芳基-雜芳基、-C(RaRb)-CONH-C1-6烷基、-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-S-C1-6烷基、-C1-6烷基-NRcRd、-C(RaRb)-C1-6烷基、-C(RaRb)-芳基、-C(RaRb)-雜芳基、-C(RaRb)-雜芳基-雜芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜環(huán)基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜環(huán)基；Ra和Rb獨立地表示氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基或C3-8環(huán)烷基，或Ra和Rb與其相連的碳原子一起可形成C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基；Rc和Rd獨立地表示氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基或Rc和Rd與其相連的氮原子一起可形成含氮雜環(huán)基；其中R3-R5、R9和Ra-Rd中的所述芳基、雜芳基或雜環(huán)基可任選被一個或多個(例如1-5個)下列基團所取代C1-6烷基、鹵素、鹵代C1-6烷基、鹵代C1-6烷氧基、氧代、C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6鏈烯基、氨基、氰基、硝基、-NR22COR23、-CONR22R23-SO2R22、-SO2NR22R23、-COOR22、-C1-6烷基-NR22R23(其中R22和R23獨立地表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基)、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷酰基或羥基基團；并且其中R1-R5、R8-R11、R22R23和Ra-Rd中的所述烷基和環(huán)烷基可任選被一個或多個(例如1-6個)下列基團所取代鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、氨基、氰基、羥基、羧基或-COOC1-6烷基。
在本發(fā)明的一個具體方面，提供了如上定義的式(I)化合物，其中p表示2；和R5表示氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基-、雜芳基C1-6烷基、芳基C3-8環(huán)烷基或雜芳基C3-8環(huán)烷基；和R3表示任選取代的C1-6烷基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-雜環(huán)基；和R4表示氫、任選取代的C1-10烷基、-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烷基-芳基、-雜環(huán)基-芳基、-C1-6烷基-芳基-雜芳基、-C(RaRb)-CONH-C1-6烷基、-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-S-C1-6烷基、-C1-6烷基-NRcRd、-C(RaRb)-C1-6烷基、-C(RaRb)-芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜環(huán)基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜環(huán)基；和Ra和Rb獨立地表示氫、C1-6烷基，或Ra和Rb與其相連的碳原子一起可形成C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基；Rc和Rd獨立地表示氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基，或Rc和Rd與其相連的氮原子一起可形成雜環(huán)基；R3和R4中的烷基和環(huán)烷基的任選的取代基包括一個或多個(例如1、2或3個)鹵素、C1-6烷氧基、氨基、氰基或羥基基團；并且其中R3、R4、R5和R9中的所述芳基、雜芳基或雜環(huán)基可任選被一個或多個(例如1、2或3個)下列基團所取代C1-6烷基、鹵素、-CF3、-OCF3、氧代、C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6鏈烯基、氨基、氰基、硝基、-NR22COR23、-CONR22R23-C1-6烷基-NR22R23(其中R22和R23獨立地表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基)、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷?；蛄u基基團。
烷基包括直鏈和相應烷基的支鏈的脂肪族異構體。應當理解鏈烯基和炔基應該作類似的解釋。
關于C3-8環(huán)烷基包括相應烷基的所有的脂環(huán)族的(包括支鏈的)異構體。
關于‘芳基’包括單環(huán)的碳環(huán)芳香環(huán)(如苯基)以及二環(huán)的碳環(huán)芳香環(huán)(如萘基)或碳環(huán)苯稠合的環(huán)如稠合苯基環(huán)的C3-8環(huán)烷基(如二氫茚基)。
關于‘雜芳基’包括包含1-4個選自氮、氧和硫的雜原子的單-和二環(huán)的雜環(huán)芳香環(huán)。單環(huán)雜環(huán)芳環(huán)的實例包括但不限于如噻吩基、呋喃基、吡咯基、三唑基、咪唑基、噁唑基、噻唑基、噁二唑基、異噻唑基、異噁唑基、噻二唑基、吡唑基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基、吡啶基、四唑基等。二環(huán)的雜環(huán)芳環(huán)的實例包括如喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、肉啉基、二氮雜萘基、吲哚基、吲唑基、吡咯并吡啶基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、苯并噁唑基、苯并異噁唑基、苯并噻唑基、苯并異噻唑基、苯并噁二唑基、苯并噻二唑基等。
關于′雜環(huán)基′包括包含1-3個選自氮、硫或氧的雜原子的5-7員非芳香的單環(huán)。非芳香的雜環(huán)的實例包括如嗎啉基、哌啶基、哌嗪基、硫嗎啉基、氧硫雜環(huán)己基(oxathianyl)、二噻烷基(dithianyl)、二噁烷基(dioxanyl)、吡咯烷基、二氧環(huán)戊基(dioxolanyl)、氧硫雜環(huán)戊基(oxathiolanyl)、咪唑烷基、四氫吡喃基、四氫噻喃基、吡唑烷基等。
術語″含氮雜環(huán)基″表示含有氮原子的如上所定義的任何雜環(huán)基。
優(yōu)選地，A-B表示-NR5-SO2-。
優(yōu)選地，R5表示氫、任選被一個或多個(如1、2或3個)鹵素原子(如三氟乙基)、羧基(如-CH2COOH)或-COOC1-6烷基基團(如-CH2-COO-t-Bu)取代的C1-6烷基(如甲基、乙基或異丙基)，芳基(如苯基)或芳基C1-6烷基-(如芐基)。更優(yōu)選地，R5表示C1-6烷基(如甲基或乙基)或芳基(如苯基)，特別是C1-6烷基(如甲基或乙基)。
優(yōu)選地，m表示0或1，更優(yōu)選地為0。
當存在時，R1優(yōu)選為C1-3烷基(如甲基)。
優(yōu)選地，n表示0。
優(yōu)選地，p表示2。
優(yōu)選地，R8表示氫。
優(yōu)選地，R9表示氫或C1-6烷基(如甲基、乙基、丙基或異丙基)，更優(yōu)選地為C1-6烷基(如乙基、丙基或異丙基)。
優(yōu)選地，R3表示-C1-6烷基-芳基(如芐基)，其任選被一個或兩個鹵素原子(如氯或氟)所取代。例如R3優(yōu)選表示未取代的芐基、3-氯芐基、3-氟芐基或3，5-二氟芐基。
優(yōu)選地，R4表示-氫；-C1-10烷基(如甲基、乙基、異丙基、丙基、甲基丙基、二甲基乙基、丁基、1，5-二甲基己基或1，1，5-三甲基己基)，其任選被一個或多個鹵素(如氟代乙基、二氟乙基或五氟丙基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)基團所取代；C2-6炔基(如丙炔基)；-C3-8環(huán)烷基(如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基)，其任選被一個或多個鹵素原子(如氟)或C1-6烷基基團(如甲基)所取代；
-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基(如-CH2-環(huán)丙基)；芳基(如二氫茚基)；-雜環(huán)基(如四氫吡喃基)；-C(RaRb)-芳基(如芐基、1-甲基-1-苯基乙基或α，α-二甲基芐基)，其任選被一個或多個下列基團所取代(如在3和5位上被取代)鹵素、氰基、硝基、鹵代C1-6烷基(如-CF3)、鹵代C1-6烷氧基(如-OCF3)、C1-6烷基(如甲基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)、C2-6炔基、C2-6鏈烯基、氨基、-NR22COR23、-CONR22R23、-SO2R22、-SO2NR22R23、-COOR22、-C1-6烷基-NR22R23、-C1-6烷?；蛄u基基團；-C(RaRb)-雜芳基(如-CH2-吡唑基、-CH2-吡啶基、-CH2-喹喔啉基、-CH2-喹啉基、-CH2-噻吩基、-CH2-吡嗪基或-CH2-異噁唑基)，其任選被一個或多個下列基團所取代C1-6烷基(如甲基或乙基)、鹵素(如溴)、鹵代C1-6烷基(如三氟乙基)或-CONR22R23(如-CONHMe)基團；-C(RaRb)-雜芳基-雜芳基(如-CH2-吡啶基-吡啶基)；-C(RaRb)-C1-6烷基-芳基(如-(CH2)2-苯基)；-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基(如C(RaRb)-CONH-環(huán)己基)；或-C3-8環(huán)烷基-芳基。
更優(yōu)選地，R4表示-C1-10烷基(如甲基、乙基、異丙基、丙基、甲基丙基、二甲基乙基、丁基、1，5-二甲基己基或1，1，5-三甲基己基)，其任選被一個或多個下列基團所取代鹵素(如氟乙基、二氟乙基或五氟丙基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)；-C3-8環(huán)烷基(如環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基或環(huán)己基)，其任選被一個或多個鹵素原子(如氟)或C1-6烷基基團(如甲基)所取代；芳基(如二氫茚基)；-雜環(huán)基(如四氫吡喃基)；-C(RaRb)-芳基(如芐基、1-甲基-1-苯基乙基或α，α-二甲基芐基)，其任選被一個或多個下列基團所取代(如在3和5位上被取代)鹵素、氰基、鹵代C1-6烷基(如-CF3)、鹵代C1-6烷氧基(如-OCF3)、C1-6烷基(如甲基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)；-C(RaRb)-雜芳基(如-CH2-吡唑基、-CH2-吡啶基、-CH2-喹喔啉基、-CH2-喹啉基、-CH2-噻吩基、-CH2-吡嗪基或-CH2-異噁唑基)，其任選被一個或多個下列基團所取代C1-6烷基(如甲基或乙基)、鹵素(如溴)、鹵代C1-6烷基(如三氟乙基)或-CONR22R23(如-CONHMe)；或-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基(如C(RaRb)-CONH-環(huán)己基)。
最優(yōu)選地，R4表示-C1-10烷基(如1，1，5-三甲基己基)；-C3-8環(huán)烷基(如環(huán)丙基或環(huán)己基)，其任選被一個或多個鹵素原子(如氟)或C1-6烷基基團(如甲基)所取代；芳基(如二氫茚基)；-雜環(huán)基(如四氫吡喃基)；-C(RaRb)-芳基(如芐基或1，1-二甲基-苯基)，其任選被一個或多個下列基團所取代(如在3和5位上被取代)鹵代C1-6烷基(如-CF3)、鹵代C1-6烷氧基(如-OCF3)、C1-6烷基(如甲基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)；-C(RaRb)-雜芳基(如-CH2-吡唑基、-CH2-吡啶基、-CH2-噻吩基或-CH2-異噁唑基)，其任選被一個或多個下列基團所取代C1-6烷基(如乙基)、鹵代C1-6烷基(如三氟乙基)或-CONR22R23(如-CONHMe)；或-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基(如C(RaRb)-CONH-環(huán)己基)。
特別優(yōu)選地，R4表示-C3-8環(huán)烷基(如環(huán)丙基或環(huán)己基)，其任選被一個或多個鹵素原子(如氟)所取代；-雜環(huán)基(如四氫吡喃基)；-C(RaRb)-芳基(如芐基)，其任選被一個或多個下列基團所取代(如在3和5位上被取代)鹵代C1-6烷基(如-CF3)、鹵代C1-6烷氧基(如-OCF3)、C1-6烷基(如甲基)或C1-6烷氧基(如甲氧基)；-C(RaRb)-雜芳基(如-CH2-吡唑基、-CH2-吡啶基、-CH2-噻吩基或-CH2-異噁唑基)，其任選被一個或多個下列基團所取代C1-6烷基(如乙基)、鹵代C1-6烷基(如三氟乙基)或-CONR22R23(如-CONHMe)；或-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基(如C(RaRb)-CONH-環(huán)己基)。
優(yōu)選地，Ra和Rb獨立地表示氫或甲基，或Ra和Rb與其相連的碳原子一起形成環(huán)丙基或環(huán)己基。更優(yōu)選地，Ra和Rb都代表氫，都代表甲基或與其相連的碳原子一起形成環(huán)丙基。
根據本發(fā)明優(yōu)選的化合物包括如下所示的實施例E1-E106，或其可藥用鹽。
式(I)化合物可形成其酸加成鹽。應當理解，當用于醫(yī)學的時候，式(I)化合物的鹽應該為可藥用的。合適的可藥用鹽對本領域的普通技術人員而言是顯而易見的，并且包括在J.Pharm.Sci.，1977，66，1-19中公開的那些鹽類，如與無機或有機酸形成的酸加成鹽如鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽、乙酸鹽、苯甲酸鹽、檸檬酸鹽、硝酸鹽、琥珀酸鹽、乳酸鹽、酒石酸鹽、富馬酸鹽、馬來酸鹽、1-羥基-2-萘甲酸鹽、palmoates、甲磺酸鹽、對甲苯磺酸鹽、萘磺酸鹽、甲酸鹽或三氟乙酸鹽。本發(fā)明在其范圍內包括所有可能的化學計量的和非化學計量的形式。
式(I)化合物可制備成晶體或非晶體的形式，并且，如果為晶體，可任選被溶劑合，如為水合物。本發(fā)明包括在其范圍內化學計量的溶劑合物(如水合物)以及包含變量溶劑(如水)的化合物。
一些式(I)化合物能以立體異構體(如非對映體和對映體)的形式存在，并且本發(fā)明延伸至這些立體異構體形式中的每一種以及其混合物包括外消旋體。不同的立體異構體形式可利用常規(guī)的方法從其他的形式中分離出來，或任何指定的異構體可利用立體特異性或不對稱合成得到。本發(fā)明還延伸至任何互變異構形式及其混合物。優(yōu)選地，式(I)化合物為式(Ia)的單一對映體形式 式(I)化合物及其鹽和溶劑合物可根據下文中描述的方法進行制備，構成了本發(fā)明的另一方面。
根據本發(fā)明制備式(I)化合物的方法，所述方法包括(a)使式(II)化合物或其活化的和/或任選保護的衍生物與式(III)化合物反應，
在式(II)中，R1、R2、m、n、p、A、B、X、Y和Z如上所定義， 在式(III)中，R3和R4如上所定義；或(b)制備式(I)化合物，其包括用適當的醛或酮對式(IV)化合物進行還原烷基化作用， 在式(IV)中，R1、R2、R3、m、n、p、A、B、X、Y和Z如上所定義；或(c)對保護的式(I)化合物進行脫保護；并且任選之后(d)將一種式(I)化合物轉化成另一種式(I)化合物。
方法(a)典型地包括使用水溶性的碳二亞胺、HOBT以及合適的堿如三級烷基胺或吡啶在合適的溶劑如DMF中并在合適的溫度下，如在0℃和室溫之間反應。
當方法(a)使用式(II)化合物的活性衍生物(如通過羧酸活化為?；取⒒旌纤狒?、活化酯、O-?；?異脲或其它類型)時，方法(a)典型地包括用胺處理所述的活化的衍生物(Ogliaruso，M.A.；Wolfe，J.F.in The Chemistry ofFunctional Groups(Ed.Patai，S.)Suppl.BThe Chemistry of Acid Derivatives，Pt.1(John Wiley and Sons，1979)，pp 442-8；Beckwith，A.L.J.in TheChemistry of Functional Groups(Ed.Patai，S.)Suppl.BThe Chemistry ofAmides(Ed.Zabricky，J.)(John Wiley and Sons，1970)，p 73 ff。
方法(b)典型地包括使用三乙酸基硼氫化鈉在合適的溶劑如乙醇、二氯甲烷和1，2-二氯乙烷存在下并在合適的溫度，如在0℃和室溫之間反應。
在方法(c)中，保護基團以及去除保護基的實例可見于T.W.Greene和P.G.M.Wuts‘Protective Groups in Organic Synthesis’(J.Wiley and Sons，3rd Ed.1999)。合適的胺保護基團包括芳基磺?；?如甲苯磺?；?、?；?如乙酰基)、氨基甲?；?如芐氧基羰基或叔丁氧基羰基)和芳基烷基(如芐基)，其可合適地通過水解或氫解去除。其他的合適的胺保護基團包括三氟乙酰基(-COCF3)，其可通過堿催化水解去除。合適的羥基保護基團可為基于甲硅烷基的基團如叔丁基二甲基甲硅烷基，其可利用標準的方法去除，例如使用酸如三氟乙酸或氫氯酸或氟源如氟化四正丁基銨。
方法(d)可利用常規(guī)的轉換步驟進行，如差向異構化、氧化、還原、烷基化、芳香取代、酯水解、酰胺鍵形成或去除以及磺酰化。
式(II)化合物和/或其活化的以及任選保護的衍生物可按照下述方法進行制備 其中R1、R2、m、n、p、A、B、X、Y和Z如上所定義，P1表示合適的基團如C1-6烷基，L1和L2獨立地表示合適的離去基團如鹵素原子(如氯)。
當B表示CO時，步驟(i)典型地包括在合適的溫度如室溫下，在合適的溶劑如二氯甲烷存在下，使用合適的堿如三乙胺。
當B表示SO2時，步驟(i)典型地包括在合適的溫度如室溫下，在合適的試劑如DMAP和合適的溶劑如二氯甲烷存在下，使用合適的堿如吡啶。
當B表示CO時，步驟(ii)典型地包括在合適的溫度如100℃下，在合適的溶劑如二甲基甲酰胺存在下，使用氫化鈉。
當B表示SO2時，步驟(ii)典型地包括在合適的溫度如室溫下，在合適的溶劑如二氯甲烷存在下，使用合適的堿如三乙胺，隨后在合適的溫度如100℃下，在合適的溶劑如二甲基甲酰胺存在下與氫化鈉進行后續(xù)的反應。
步驟(iii)典型地包括用于將羧酸酯轉化為酸的標準步驟，如使用合適的堿金屬氫氧化物如鋰或鈉的氫氧化物，在合適的溶劑如甲醇中在合適的溫度如室溫下進行反應。在叔丁基酯的情況下，此轉化可通過使用合適的酸如三氟乙酸在合適的溶劑如二氯甲烷中在合適的溫度如0℃下來完成。然后可按照如上方法(a)中所述的制備得到式(II)化合物的活化的衍生物。
式(III)化合物可按照下述方法進行制備 其中R3和R4如上所定義，并且P2表示合適的胺保護基團，如叔丁氧基羰基。
步驟(i)典型地包括使式(VIII)化合物與式NH2R4化合物在合適的溶劑如乙醇存在下在合適的溫度如回流溫度下反應。
步驟(ii)典型地包括使用如上方法(c)中所述的合適的脫保護反應，如當P2表示叔丁氧基羰基的時候，脫保護典型地包括使用三氟乙酸在合適的溶劑如二氯甲烷存在下在合適的溫度如介于0℃和室溫之間進行反應。
式(IV)化合物可按照下述方法進行制備
其中R1、R2、R3、m、n、p、A、B、X、Y、Z和P2如上所定義，并且P3表示與P2不同的合適的胺保護基團，如-COOCH2-苯基。
步驟(i)典型地包括將式(VIII)化合物在氨水中在合適的溶劑如乙醇存在下在合適的溫度，如回流溫度下反應。
當P3表示-COOCH2-苯基的時候，步驟(ii)典型地包括在合適的堿如三乙基胺、合適的溶劑如二甲基甲酰胺存在下在合適的溫度，如介于0℃和室溫之間使用ClCOOCH2-苯基。
步驟(iii)典型地包括使用如上方法(c)中所述的合適的脫保護反應，如當P2表示叔丁氧基羰基的時候，脫保護典型地包括在合適的溶劑如二氯甲烷存在下在合適的溫度如介于0℃和室溫之間使用三氟乙酸。
步驟(iv)典型地包括使式(XI)化合物與式(II)化合物在水溶性碳二亞胺和HOBT存在下進行反應。
步驟(v)典型地包括使用如上方法(c)中所述的合適的脫保護反應，如當P3表示-COOCH2-苯基的時候，脫保護典型地包括使用合適的催化劑，如鈀在合適的溶劑如水和乙醇存在下以及在合適的氫氣源如甲酸銨存在下在合適的溫度如60℃進行反應。
式(V)和(VIII)化合物或者是市售的或可使用標準方法由市售的化合物制備得到。
因此，本發(fā)明另一方面提供了式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物用作藥物，尤其是用于治療患有以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的患者。
根據本發(fā)明另一方面，提供了式(I)化合物或其生理可接受的鹽或溶劑合物在制備用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的患者的藥物中的用途。
在另一個或替代性的方面，提供了一種治療患有以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的人或動物對象的方法，所述的方法包括對所述的人或動物對象施用有效量的式(I)化合物或其生理可接受的鹽或溶劑合物。
本發(fā)明另一方面，因此提供了一種包括式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物的藥物組合物，其用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病。
本領域的普通技術人員應該意識到這里的治療延伸至以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的預防以及治療。
根據本發(fā)明的化合物可以任何常規(guī)的方式進行配制以用于給藥，并且因此本發(fā)明還在其范圍內包括用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的藥物組合物，所述的組合物包括式(I)化合物或其生理可接受的鹽或溶劑合物以及，如果需要，與一種或多種生理可接受的稀釋劑或載體一起。
應當理解以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病包括阿爾茨海默病、輕度認知損害(mild cognitive impairment)、唐氏綜合征(Down′s syndrome)、帶有Dutch型β-淀粉樣變的遺傳性腦出血(hereditarycerebral haemorrhage with β-amyloidosis of the Dutch type)、腦β-淀粉樣蛋白血管病(cerebral β-amyloid angiopathy)以及多種類型的退行性癡呆(degenerativedementias)，如與帕金森病有關的那些疾病、進行性核上性麻痹(progressivesupranuclear palsy)、皮質基質病變(cortical basal degeneration)以及彌散型Lewis體型的阿爾茨海默病(diffuse Lewis body type of Alzheimer′s disease)。
最優(yōu)選地，所述的以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病為阿爾茨海默病。
這里還提供了一種制備所述的藥用制劑的方法，包括將成分混和。
式(I)化合物可與其他的治療劑聯用。其他的治療劑的合適實例為乙酰膽堿酯酶抑制劑(如四氫氨基吖啶(tetrahydroaminoacridine)、鹽酸多奈哌齊(donepezil hydrochloride)和雷司替明(rivastigmine))、γ分泌酶抑制劑、消炎藥(如環(huán)氧合酶II抑制劑)、抗氧化劑(如維生素E和ginkolidesor)、斯坦類(statins)或p-糖蛋白(P-gp)抑制劑(如環(huán)孢霉素A(cyclosporin A)、維拉帕米(verapamil)、他莫昔芬(tamoxifen)、奎尼定(quinidine)、維生素E-TGPS、利托那韋(ritonavir)、醋酸甲地孕酮(megestrol acetate)、黃體酮、雷怕霉素(rapamycin)、10，11-methanodibenzosuberane、吩噻嗪(phenothiazines)、吖啶衍生物如GF120918、FK506、VX-710、LY335979和PSC-833)。
當本發(fā)明的化合物與其他的治療劑聯用的時候，所述的化合物可以以任何途徑依次或同時給藥。
本發(fā)明的化合物可例如，配制成適于口服、吸入、鼻內、口腔、腸內、腸胃外、局部、舌下、鞘內或直腸給藥，優(yōu)選地用于口服給藥。
用于口服給藥的片劑和膠囊可包含常規(guī)的賦形劑如粘合劑，例如糖漿、阿拉伯膠、明膠、山梨醇、黃蓍膠、淀粉膠漿、纖維素或聚乙烯基吡咯烷酮；填充劑，例如，乳糖、微晶纖維素、糖、玉米淀粉、磷酸鈣或山梨醇；潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸、滑石、聚乙二醇或硅土；崩解劑，例如，馬鈴薯淀粉、交聯羧甲纖維素鈉或淀粉羥乙酸鈉；或濕潤劑如月桂基硫酸鈉。片劑可根據本領域中公知的方法進行包衣?？诜后w制劑可為，例如，水性或油性懸浮液、溶液、乳劑、糖漿劑或酏劑的形式，或可以干粉產物的形式存在，在使用前與水或其他的合適的媒介(vehicles)重建(constitution)。所述的液體制劑可包含常規(guī)的添加劑如助懸劑，例如，山梨醇糖漿、甲基纖維素、葡萄糖/食糖糖漿(sugar syrup)、明膠、羥基甲基纖維素、羧基甲基纖維素、硬脂酸鋁凝膠或氫化食用脂肪；乳化劑，例如，卵磷脂、去水山梨糖醇單-油酸酯或阿拉伯膠；非水性媒介(可包括食用油)，例如杏仁油、分餾椰子油(fractionated coconut oil)、油酯、丙二醇或乙醇；或防腐劑，例如，對-羥基苯甲酸甲酯或丙酯或山梨酸。適當的時候，該制劑還可包含緩沖鹽、調味劑、著色劑和/或甜味劑(如甘露醇)。
對于口腔給藥，組合物可按照常規(guī)的方式配制成片劑或糖錠劑的形式。
所述的化合物還可配制成栓劑，如包含常規(guī)的栓劑基質如可可脂或其他的甘油酯。
根據本發(fā)明的化合物也可配制成經快速濃注(bolus injection)或連續(xù)輸注的腸胃外給藥的形式，并可以單位劑型的形式提供，例如為安瓿、小瓶、小體積的輸液(small volume infusions)或預-填的注射器(pre-filled syringes)的形式，或為含有添加的防腐劑的多劑量容器的形式。組合物可為在水或非水媒介中的溶液、懸浮液或乳劑的形式，并且可包含制劑物質如抗氧化劑、緩沖劑、抗菌劑和/或張力調節(jié)劑。或者，活性成分可為散劑的形式，用于在使用前與合適的媒介如無菌、無熱原水重建。干燥的固體制劑可通過將無菌的粉末通過無菌的方式填充到單個的無菌容器中或通過將無菌的溶液以無菌的方式充填到各個容器中并凍干而進行配制。
當本發(fā)明的化合物進行局部給藥的時候，其可以乳膏、軟膏或貼劑形式提供。
組合物可包含0.1％～99％重量，優(yōu)選地10～60％重量的活性物質，取決于給藥方法。
用于治療前述疾病的化合物的劑量可按常規(guī)的方式隨疾病的嚴重程度、患者的體重以及其他的類似的因素而變。但是，作為一般性的指導，合適的單位劑量可為0.05～3000mg；并且所述的單位劑量可以每天多于一次給藥，例如每天一、二、三或四次(優(yōu)選地一次或兩次)；并且所述的治療可延長至數周、數月或數年。
在本申請中引用的所有的公開，包括但不限于專利和專利申請，這里引入作為參考一如每篇具體地以及單獨地引入作為參考一樣公開充分。
中間體的制備說明14-氨基-3-硝基苯甲酸甲酯(D1)在室溫下，向4-氨基-3-硝基苯甲酸(50g，270mmol，1當量)的MeOH(600ml)的懸浮液中滴加SOCl2(20ml，270mmol，1當量)。將生成的懸浮液回流16小時，然后冷卻至室溫。濾出懸浮液，得到黃色固體的甲基-4-氨基-3-硝基苯甲酸酯(D1)(53g，100％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝197.3，RT＝2.42分鐘。
說明2
4-氨基-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(D2)在室溫下，向甲基-4-氨基-3-硝基苯甲酸酯(D1)(48g，244mmol，1當量)的CH2Cl2(1.41)溶液中加入溴(16.3ml，318mmol，1.3當量)。將生成的溶液回流2小時，然后加入另外的6ml(117mmol，0.5當量)溴，并將溶液攪拌1小時，然后冷卻至室溫。將有機相用10％硫代硫酸鈉水溶液(200ml)、然后用H2O(200ml)洗兩次，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到黃色固體的4-氨基-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(D2)(66.2g，98％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M-H]-＝274.1，RT＝2.90分鐘。
說明33-溴-5-硝基-4-[(三氟乙?；?氨基]苯甲酸甲酯(D3)在0℃，向4-氨基-3-溴-5-硝基苯甲酸甲酯(D2)(66g，240mmol，1當量)的CH2Cl2(1.41)溶液中加入吡啶(100ml，720mmol，3當量)，然后加入(CF3CO)2O(51ml，360mmol，1.5當量)，并將生成的溶液攪拌1小時。加入MeOH(29ml，720mmol，3當量)，并將溶液攪拌15分鐘。然后真空濃縮。將殘余物溶于AcOEt(350ml)中，并將有機相用2N HCl水溶液(200ml)洗三次。將合并的水相用濃HCl酸化至pH為1，并用AcOEt萃取。將合并的有機相用鹽水、飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗，然后經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到褐色油狀的3-溴-5-硝基-4-[(三氟乙?；?氨基]苯甲酸甲酯(D3)(87.2g，93％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝372.2，RT＝2.92分鐘。
說明43-溴-4-[(2E/Z)-2-丁烯-1-基(三氟乙?；?氨基]-5-硝基苯甲酸甲酯(D4)在室溫下，在氮氣下，向3-溴-5-硝基-4-[(三氟乙?；?氨基]苯甲酸甲酯(D3)(84.5g，228mmol，1當量)的CH3CN(1l)溶液中加入K2CO3(37.7g，273mmol，1.2當量)和(2E/Z)-1-溴-2-丁烯(30.5ml，296mmol，1.3當量)，并將生成的懸浮液回流2小時。然后加入(2E/Z)-1-溴-2-丁烯(5ml，48mmol，0.2當量)，并將懸浮液再回流1小時，然后冷卻至室溫。濾去該沉淀，并用AcOEt洗，并真空濃縮該有機相。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到褐色油狀的3-溴-4-[(2E/Z)-2-丁烯-1-基(三氟乙?；?氨基]-5-硝基苯甲酸甲酯(D4)(95g，98％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
RT＝3.70分鐘。
說明5和6(D5和D6)說明5和6是使用說明4(D4)中所述的類似方法，由說明3(D3)使用下表中所示的合適的烯丙基溴制備得到 說明73-乙基-7-硝基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯和(3Z)-3-亞乙基-7-硝基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D7)在室溫下，在氮氣下，向裝填有3-溴-4-[(2E/Z)-2-丁烯-1-基(三氟乙?；?氨基]-5-硝基苯甲酸甲酯(D4)(11.1g，26.1mmol，1當量)、NaCOOH(1.8g，26.1mmol，1當量)、Na2CO3(6.9g，65.3mmol，2.5當量)、NBu4Cl(8g，28.7mmol，1.1當量)和Pd(OAc)2(440mg，2.0mmol，0.075當量)的燒瓶中加入DMF(100ml)，并將生成的混合物于100℃攪拌1小時，然后冷卻至室溫。濾出不溶物，并用AcOEt洗，并將合并的有機相真空濃縮。將殘余物溶于AcOEt中，并濾出形成的紅色沉淀(2.6g)。將有機相用水和鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物用CH2Cl2研磨，并濾出形成的紅色沉淀(2.1g)。真空濃縮該有機相，并將殘余物(7g，黑色油)在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt6/4然后1/1)純化，得到淡紅色固體的3-乙基-7-硝基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D7)(1.56g，24％)。將所有所獲得的紅色固體(D7和四丁基銨鹽的混合物)用CH3CN洗，得到3-乙基-7-硝基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯和(3Z)-3-亞乙基-7-硝基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D7)的混合物(3.36g，52％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M-H]-＝247.2，RT＝3.42分鐘。
說明8-9(D8-D9)說明8-9是使用說明7中所述的類似方法，由下表所示的合適前體制備得到
說明107-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D10)在室溫下，在氮氣下，向3-乙基-7-硝基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯和(3Z)-3-亞乙基-7-硝基-2，3-二氫-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D7)(3.1g，12.5mmol，1當量)的甲苯(150ml)的懸浮液中加入鈀-碳(palladium on charcoal)(10％w/w和50％wet，620mg，10％w/w)，并將生成的懸浮液在氫氣下(1bar)攪拌24小時。通過celite墊濾出催化劑，并用AcOEt大量地洗。真空濃縮合并的有機相，得到淡黃色固體的7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D10)(2.65g，97％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝219.4，RT＝2.82分鐘。
說明11-12(D11-D12)說明11-12(D11-D12)是按照說明10中所述的類似方法，由下表所示的合適前體制備得到
說明137-[(乙烯基磺酰基(ethenylsulfonyl))氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D13)
在室溫下，向7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D10)(2.15g，9.87mmol，1當量)的CH2Cl2(70ml)溶液中加入吡啶(2ml，24.7mmol，2.5當量)、DMAP(120mg，0.98mmol，0.1當量)和2-氯乙烷磺酰氯(1.24ml，11.8mmol，1.2當量)，并將生成的混合物攪拌12小時，然后用AcOEt稀釋。將有機相用2N HCl水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到紫色固體的粗的7-[(乙烯基磺酰基)氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D13)(2.98g，98％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝309.1，RT＝3.29分鐘。
說明14-15(D14-D15)說明14-15(D14-D15)是使用說明13中所述的類似方法，由下表所示的合適前體制備得到
說明167-[(3-氯丙?；?propanoyl))氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D16)向7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D10)(300mg，1.29mmol，1當量)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入NEt3(216μl，1.55mmol，1.2當量)和3-氯丙酰氯(136μl，1.42mmol，1.1當量)，并將生成的溶液于室溫攪拌48小時，然后用AcOEt稀釋，并用H2O洗。將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt3/1)純化，得到白色固體的7-[(3-氯丙?；?氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D16)(300mg，72％)。[M+H]+＝309.4，RT＝3.18分鐘。
說明17-18(D17-D18)說明17-18(D17-D18)是使用酯2(B2)中所述的類似方法，由下表所示的合適前體制備得到
說明191，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(D19)向1，1-二甲基乙基{(1S)-1-[(2S)-2-環(huán)氧乙烷基]-2-苯基乙基}氨基甲酸酯(25g，95.1mmol，1當量))[Chirex 1819W94 Lot#9924382]的MeOH(350ml)溶液中加入氨水(32％w/w，180ml，3.2mol，3.3當量)。將生成的混合物于室溫攪拌16小時，然后真空濃縮，得到白色固體的1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(D19)(25.2g，95％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明20-25(D20-D25)說明20-25是使用實施例1(E1)中所述的類似方法，由下表所示的合適的酸和合適的胺制備得到
說明26
7-{[(氯甲基)磺?；鵠氨基}-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D26)在室溫下，向7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D10)(471mg，2.16mmol，1當量)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入吡啶(260μl，3.24mmol，1.5當量)、DMAP(26mg，0.22mmol，0.1當量)和氯代甲磺酰氯(354mg，2.4mmol，1.1當量)，并將生成的混合物攪拌2小時，然后在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。分離兩層，并將有機相用H2O洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。用Et2O研磨該殘余物，得到紫色固體的7-{[(氯甲基)磺酰基]氨基}-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D26)(630mg，92％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明27-29(D27-D29)說明27-29是由(2S)-2-(1-甲基乙基)-3，6-雙(甲氧基)-2，5-二氫吡嗪，根據P.dalla Croce，C.la Rosa，E.Pizzatti TetrahedronAsymmetry 2000，11，2635-2642中所述的一般方法制備得到
說明302-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸乙酯(D30)向(3-甲氧基苯基)乙酸乙酯(19.72g，0.101m，1當量)的THF(200ml)溶液中加入NaH(8.8g，0.222mol，2.2當量)，然后加入碘甲烷(26ml，0.4mol，4當量)。將生成的混合物于室溫攪拌16小時，然后在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。分離兩層，并將有機相用鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到橙色油狀物的2-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸乙酯(D30)(20.85g，98％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明312-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸乙酯(D31)
2-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸乙酯(D31)是按照說明30(D30)中所述的類似方法，由[3-(三氟甲基)苯基]乙酸乙酯制備得到。
說明322-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸(D32)向2-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸乙酯(D30)(20.95g，94mmol，1當量)的EtOH(200ml)溶液中加入2N NaOH水溶液(90ml，180mmol，1.9當量)，并將生成的混合物于70℃攪拌16小時，然后冷卻至室溫。真空除去大部分EtOH，并將殘余物用AcOEt萃取，然后酸化至pH為1。然后用AcOEt萃取該含水層，并將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到黃色油狀的2-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸(D32)(15g，82％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明332-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸(D33)2-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸(D33)是按照說明32(D32)中所述的類似方法，由2-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸乙酯(D31)制備得到。
說明34[1-(3-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基甲酸芐基酯(D34)在室溫下，向2-(3-甲氧基苯基)-2-甲基丙酸(D32)(1g，5.15mmol，1當量)的甲苯(20ml)溶液中加入NEt3(1.07ml，7.72mmol，1.5當量)，并然后加入二苯基磷?；B氮化物(2.2ml，10.3mmol，2當量)。然后將生成的混合物于80℃加熱2小時，然后加入芐基醇(1.61ml，15.45mmol，3當量)，并將溶液再加熱2小時，冷卻至室溫，并在EtOAc和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。分離兩相，并將水相經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘留物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1)純化，得到黃色膠狀的[1-(3-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基甲酸芐基酯(D34)(1g，65％)。
說明35{1-甲基-1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}氨基甲酸芐基酯(D35)
{1-甲基-1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}氨基甲酸芐基酯(D35)是按照說明34(D34)中所述的類似方法，由2-甲基-2-[3-(三氟甲基)苯基]丙酸(D33)制備得到。
說明365-溴-3-噻吩甲醛(thiophenecarbaldehyde)(D36)在0℃，向3-噻吩甲醛(10.6g，94.6mmol，1當量)的CH2Cl2(225ml)的懸浮液中加入AlCl3(26.5g，199mmol，2.1當量)和Br2(5.1ml，99mmol，1.05當量)，并將生成的混合物回流7小時，然后冷卻至室溫。真空除去大部分的溶劑，并將殘余物慢慢地倒在冰上。將含水層用AcOEt萃取兩次，并將合并的有機相用2N HCl水溶液、然后用10％NaHSO3水溶液、飽和的NaHCO3水溶液洗四次，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物再溶于AcOEt中，并與飽和的Rochelle’s鹽溶液劇烈攪拌2小時。分離兩層，并將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到褐色油狀的5-溴-3-噻吩甲醛(D36)，將其不需進一步純化用于下一步驟。RT＝2.38分鐘。
說明375-乙烯基-3-噻吩甲醛(D37)向5-溴-3-噻吩甲醛(D36)(2g，10.4mmol，1當量)的DME(45ml)和H2O(15ml)溶液中加入四(三苯基膦)-鈀(0)(600mg，0.52mmol，0.05當量)，并將懸浮液攪拌10分鐘。加入三乙烯基環(huán)硼氧烷-吡啶復合物(Triethenylboroxin-pyridine complex)(根據F.Kerins和D.F.O′Shea in J.Org.Chem，2002，67，4968-4971制備得到；2.64g，11mmol，1.05當量)和K2CO3(1.45g，10.5mmol，1當量)，并將生成的混合物于90℃攪拌4小時，冷卻至室溫，并用AcOEt稀釋。將有機相用飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1)純化，得到淡黃色油狀物的加合物5-乙烯基-3-噻吩甲醛(D37)(660mg，100％)。
RT＝2.38分鐘。
說明38
1，1-二甲基乙基2-丙炔-1-基氨基甲酸酯(D38)在室溫下，向2-丙炔-1-胺(2g，36.36mmol，1當量)的CH2Cl2(20ml)溶液中加入NEt3(5.3ml，38.18mmol，1.05當量)和雙(1，1-二甲基乙基)二碳酸酯(dicarbonate)(8.32g，38.18mmol，1.05當量)，并將生成的混合物于室溫攪拌3小時，然后用2N HCl水溶液和飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到無色針狀的1，1-二甲基乙基2-丙炔-1-基氨基甲酸酯(D38)(4.05g，72％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明39(1E/Z)-丙醛肟(D39)向羥基胺鹽酸鹽(5g，86.2mmol，1當量)的H2O(60ml)溶液中加入K2CO3(12.49g，90.5mmol，1.05當量)和丙醛(12.49g，90.5mmol，1.05當量)，并將生成的混合物于室溫攪拌16小時，然后用Et2O萃取3次。將合并的有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到透明油狀的(1E/Z)-丙醛肟(D39)(4.59g，73％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明401，1-二甲基乙基[(3-乙基-5-異噁唑基)甲基]氨基甲酸酯(D40)向(1E/Z)-丙醛肟(D39)(4g，54.8mmol，1當量)的CH2Cl2(200ml)溶液中加入N-氯代琥珀酰亞胺(7.44g，55.8mmol，1.02當量)，并將生成的溶液于室溫攪拌2.5小時，然后加入吡啶(20ml，過量的)，并將褐色的溶液攪拌2小時。加入1，1-二甲基乙基2-丙炔-1-基氨基甲酸酯(D38)(1.36g，8.72mmol，0.16當量)和DIPEA(9.5ml，55.8mmol，1.02當量)，并將生成的溶液于室溫攪拌48小時，然后用2N HCl水溶液和飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1)純化，得到透明油狀的1，1-二甲基乙基[(3-乙基-5-異噁唑基)甲基]氨基甲酸酯(D40)(1.91g，91％)。
說明41N-{3-(二甲基氨基)-2-[(二甲基亞氨基(iminio))甲基]-2-亞丙烯-1-基}-N-甲基甲銨(methanaminium)二-四氟硼酸鹽(D41)
在0℃，用2.5小時的時間向100ml的DMF(1.34mol，15當量)中加入POCl3(25.2ml，294mmol，3.3當量)，同時保持溫度低于4℃。向生成的淡黃色溶液中加入溴乙酸(12.5g，89.9mmol，1當量)，并將混合物于90℃攪拌5小時，然后冷卻至室溫，并真空濃縮。在0℃向此殘余物中小心地加入2.5g冰，隨后加入四氟硼酸鈉(20g，182mmol，2.0當量)的H2O(40ml)溶液。將溶液冷卻至-30℃，并濾出形成的沉淀，并用CH3CN研磨，得到白色固體的N-{3-(二甲基氨基)-2-[(二甲基亞氨基)甲基]-2-亞丙烯-1-基}-N-甲基甲銨(methanaminium)二-四氟硼酸鹽(D41)(11.8g，33mmol，37％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明42(羥基亞甲基)丙二醛(propanedial)(D42)向N-{3-(二甲基氨基)-2-[(二甲基亞氨基)甲基]-2-亞丙烯-1-基}-N-甲基甲銨(methanaminium)二-四氟硼酸鹽(D41)(11.8g，33mmol，1當量)的H2O(36ml)溶液中加入K2CO3(1.8g，13mmol，0.4當量)，并將生成的混合物于40℃攪拌5分鐘。然后冷卻至室溫，并慢慢地加入濃HCl(29ml)。將含水層用CH2Cl2萃取5次，并將合并的有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到白色固體的(羥基亞甲基)丙二醛(D42)(2.25g，68％)，將其直接使用。
說明431-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-甲醛(D43)在室溫下，向(羥基亞甲基)丙二醛(D42)(2.25g，22.5mmol，1當量)的MeOH(300ml)和濃HCl(4.4ml)的溶液中加入(2，2，2-三氟乙基)肼鹽酸鹽(3.39g，150mmol，6.7當量)，并在室溫下將生成的混合物攪拌16小時，然后真空濃縮。將殘余物在AcOEt和H2O之間分配，并分離兩層。將含水層經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt4/1至1/1)純化，得到淡黃色油狀物的1-(2，2，2-三氟乙基)-1H-吡唑-4-甲醛(D43)(2.8g，83％)。
說明441，1-二甲基乙基[(1S)-2-(環(huán)己基氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(D44)將N-{[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}-L-丙氨酸(1.5g，8.0mmol，1當量)、EDAC.HCl(1.84g，9.6mmol，1.2當量)、HOBT(1.47g，9.6mmol，1.2當量)、4-乙基嗎啉(1.76g，16mmol，2當量)和環(huán)己基胺(1.1ml，9.6mmol，1.2當量)的CH2Cl2(10ml)溶液于室溫攪拌16小時。真空濃縮該溶液，并將殘余物溶于AcOEt中。將有機相用2N HCl水溶液、飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到無色油狀的1，1-二甲基乙基[(1S)-2-(環(huán)己基氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(D44)(2.12g，98％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明454-((Z/E)-丁-2-烯基氨基)-3，5-二碘-苯甲酸乙酯(D45)在氮氣氣氛下在0℃下，用2分鐘的時間向4-氨基-3，5-二碘-苯甲酸乙酯(來自Maybridge的市售產品)(72.6g，0.17mmo1，1當量)的DMF溶液(450ml)中分批加入NaH(60％在礦物油中的分散體，7.3g，0.18mmol，1.05當量)。10分鐘后，通過套管用5分鐘加入巴豆基溴(21.5ml，0.21mmol，1.2當量)的DMF溶液(50ml)，并將得到的混合物用30分鐘溫熱至室溫。加入5ml的EtOH，并將混合物真空濃縮。將殘留物溶解在AcOEt中，并將有機相用H2O洗滌。將水相用AcOEt萃取，并將合并的有機相用鹽水洗滌，經MgSO4干燥，并真空濃縮得到粉紅色固體的標題化合物(D45)(82g，100％)，不經進一步的純化直接用于下一步驟。[M+H]+＝472.0，RT＝4.93分鐘。
說明463-乙基-7-碘-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D46)在氮氣下，在室溫下，向4-((Z/E)-丁-2-烯基氨基)-3，5-二碘-苯甲酸乙酯(D45)(15g，31.8mmol，1當量)的DMF溶液(150ml)中加入Pd(OAc)2(357mg，1.6mmol，0.05當量)、NaCOOH(6.5g，95.6mmol，3當量)、Na2CO3(8.4g，79.6mmol，2.5當量)和Nbu4Cl(8.0g，35.0mmol，1.1當量)。將形成的懸浮液在氮氣氣氛下80℃攪拌30分鐘，然后冷卻至室溫并真空濃縮。將殘留物在AcOEt和H2O之間分配并分離兩相。將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘留物在硅膠上通過快速色譜法(異己烷/AcOEt9/1)純化，得到白色固體的標題化合物(D46)(6.3g，58％)。[M+H]+＝344.0，RT＝3.86分鐘說明477-苯甲氧基羰基氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D47)在室溫下，在氮氣下，向3-乙基-7-碘-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D46)(850mg，2.48mmol，1當量)的甲苯(20ml)溶液中加入芐基氨基甲酸酯(562mg，3.72mmol，1.5當量)、碘化銅(24mg，0.13mmol，0.05當量)、K3PO4(1.05g，4.8mmol，2當量)和N，N′-二甲基乙二胺(26μl，0.25mmol，0.1當量)，并將生成的懸浮液于100℃攪拌30分鐘，然后冷卻至室溫并真空濃縮。將殘余物在AcOEt和H2O之間分配，并分離兩相。將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1)純化，得到灰白色固體的標題化合物(D47)(250mg，27％)。[M+H]+＝367.1，RT＝3.73分鐘。
說明487-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D48)向7-苯甲氧基羰基氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D47)(250mg，0.68mg，1當量)的EtOH(10ml)溶液中加入NH4COOH(431mg，6.8mmol，10當量)、H2O(2ml)、Pd(10％w/w在碳上，50mg，0.02當量w/w)，并將生成的混合物于70℃攪拌1.5小時。然后加入另外的200mg的Pd(10％w/w在碳上，0.08當量w/w)，并將生成的混合物于70℃再攪拌30分鐘，然后冷卻至室溫。通過celite墊濾出催化劑，并真空除去大部分的EtOH。將殘余物在AcOEt和H2O之間分配，并分離兩相。將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到灰白色固體的標題化合物(D48)(150mg，95％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。+＝233.1，RT＝3.19分鐘。
說明497-(3-氯-丙?；被?-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D49)向7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D48)(300mg，1.29mmol，1當量)的CH2Cl2(10ml)溶液中加入NEt3(216μl，1.55mmol，1.2當量)和3-氯丙酰氯(136μl，1.42mmol，1.1當量)，并將生成的溶液于室溫攪拌48小時。然后用AcOEt稀釋，并用H2O洗。將有機相經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt3/1)純化，得到白色固體的標題化合物(D49)(300mg，72％)。[M+H]+＝323.4，RT＝3.18分鐘。
說明507-乙磺?；被?3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D50)在室溫下，向7-氨基-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D48)(1.1g，4.74mmol，1當量)的CH2Cl2(20ml)溶液中加入吡啶(575μl，7.11mmol，1.5當量)、DMAP(66mg，0.47mmol，0.1當量)和2-氯乙烷磺酰氯(545μl，5.22mmol，1.1當量)，并將生成的混合物攪拌5分鐘，然后用AcOEt稀釋。將有機相用2N HCl水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物溶于CH2Cl2(20ml)中，并加入NEt3(1ml，過量的)，并將生成的溶液于室溫攪拌16小時，然后用AcOEt稀釋。將有機相用H2O、2N HCl水溶液和鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到褐色油狀的粗的標題化合物(D50)(1.7g，110％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝323.1，RT＝3.29分鐘。
說明51[(1S，2R)-1-芐基-2-羥基-3-(3-甲氧基-芐基氨基)-丙基]-氨基甲酸叔丁基酯(D51)將((S)-(S)-1-環(huán)氧乙烷基-2-苯基-乙基)-氨基甲酸叔丁基酯(10g，38mmol，1當量)[Chirex 1819W94 Lot#9924382]溶解在EtOH(100ml)中，并加入3-甲氧基-芐基胺(14.6ml，114mmol，3當量)。將得到的混合物在氮氣氣氛下在回流溫度下加熱12小時。將混合物冷卻并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。將殘余物溶于AcOEt中，并用H2O洗三次，經MgSO4干燥，并真空濃縮。在硅膠上通過快速色譜法(CH2Cl2/MeOH98/2至95/5)純化，得到白色固體的標題化合物(D51)(10.0g，66％)。
說明521，1-二甲基乙基(4，4-二氟環(huán)己基)氨基甲酸酯(D52)
向1，1-二甲基乙基(4-氧代環(huán)己基)氨基甲酸酯(3.56g，16.7mmol，1當量)的CH2Cl2(50ml)溶液中加入DAST(4.6ml，35.1mmol，2.1當量)，并將生成的混合物于室溫攪拌16小時。加入飽和的NaHCO3水溶液(20ml)，并將得到的兩相混合物于室溫劇烈攪拌1小時。分離兩層，并將水相用CH2Cl2萃取。將合并的有機層經MgSO4干燥，并真空濃縮。用己烷研磨該殘余物，得到白色固體的1，1-二甲基乙基(4，4-二氟環(huán)己基)氨基甲酸酯(D52)(1.7g，43％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明F1[1-(3-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]胺(F1)向燒瓶中裝填[1-(3-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]氨基甲酸芐基酯(D34)(1g，3.34mmol，1當量)、10％鈀-碳(50％wet，100mg，10％w/w)、NH4COOH(2.1g，33mmol，10當量)、EtOH(40ml)和H2O(8ml)。將生成的混合物于80℃攪拌2小時，冷卻至室溫，并使用celite墊濾出催化劑。真空除去大部分的EtOH，并將殘余物用1N HCl水溶液稀釋。將含水層用AcOEt萃取，然后堿化至pH為13，并用AcOEt萃取兩次。將這些合并的有機層經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到黃色樹膠狀的[1-(3-甲氧基苯基)-1-甲基乙基]胺(F1)(290mg，53％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明F22-[3-(三氟甲基)苯基]丙-2-胺(F2)2-[3-(三氟甲基)苯基]丙-2-胺(F2)是按照說明F1(F1)中所述的類似方法，由{1-甲基-1-[3-(三氟甲基)苯基]乙基}氨基甲酸芐基酯(D35)制備得到。
說明F32，6-二甲基-2-庚胺(F3)2，6-二甲基-2-庚胺(F3)是根據S.S.Berg和D.T.Cowling，J.Chem.Soc.(C)1971，1653-1658中所述的方法制備得到。
說明F4[(3-乙基-5-異噁唑基)甲基]胺鹽酸鹽(F4)
將1，1-二甲基乙基[(3-乙基-5-異噁唑基)甲基]氨基甲酸酯(D40)(1.28g，5.53mmol，1當量)溶于4M HCl的二噁烷(20ml)溶液中，并將生成的溶液于室溫攪拌2小時，然后真空濃縮。將殘余物用Et2O研磨，得到白色固體的[(3-乙基-5-異噁唑基)甲基]胺鹽酸鹽(F4)(0.82g，92％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
說明F5N1-環(huán)己基-L-丙氨酰胺(alaninamide)鹽酸鹽(F5)N1-環(huán)己基-L-丙氨酰胺鹽酸鹽(F5)是按照說明F4中類似的方法，由1，1-二甲基乙基[(1S)-2-(環(huán)己基氨基)-1-甲基-2-氧代乙基]氨基甲酸酯(D44)制備得到。
說明F64，4-二氟環(huán)己胺對甲苯磺酸鹽(tosic salt)(F6)將1，1-二甲基乙基(4，4-二氟環(huán)己基)氨基甲酸酯(D52)(1.0g，4.25mmol，1當量)溶于CH3CN(20ml)中，并加入PTSA.H2O(1.61g，8.5mmol，2當量)。將生成的混合物攪拌16小時。濾出形成的沉淀，并用Et2O研磨，得到白色固體的4，4-二氟環(huán)己胺對甲苯磺酸鹽(F6)(865mg，66％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
環(huán)氧化物的制備環(huán)氧化物11，1-二甲基乙基{(1S)-2-(3，5-二氟苯基)-1-[(2S)-2-環(huán)氧乙烷基]乙基}氨基甲酸酯(K1)1，1-二甲基乙基{(1S)-2-(3，5-二氟苯基)-1-[(2S)-2-環(huán)氧乙烷基]乙基}氨基甲酸酯(K1)是根據專利US 2003/0004360A1中記載的步驟，由3，5-二氟-L-苯基丙氨酸甲酯(D27)制備得到。
環(huán)氧化物2-3(K2-K3)環(huán)氧化物2-3是按照環(huán)氧化物1(K1)中所述的類似方法，使用下表所示的合適的丙氨酸酯制備得到
酯的制備酯17-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫[1，4]二氮雜并(diazepino)[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸甲酯(B1)在室溫下，在氮氣下，向7-[(3-氯丙酰基)氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D16)(300mg，0.93mmol，1當量)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，41mg，1.02mmol，1.1當量)。將生成的溶液于100℃加熱1小時，并然后冷卻至室溫。用MeOH(2m1)中和過量的NaH，并真空濃縮該溶液。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用H2O洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt2/3)純化，得到白色固體的7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸甲酯(B1)(120mg，45％)。[M+H]+＝273.0，RT＝3.08分鐘。
酯27-乙基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B2)在室溫下，在氮氣下，向7-[(乙烯基磺?；?氨基]-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D13)(2.98g，9.69mmol，1當量)的DMF(40ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，465mg，11.6mmol，1.2當量)。5分鐘后，將混合物于100℃加熱1小時，并然后冷卻至室溫。加入MeOH(1ml)，并將溶液真空濃縮。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。用Et2O研磨該殘余物，得到褐色固體的7-乙基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B2)(1.67g，55％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝309.3，RT＝2.93分鐘。
酯3(步驟A)7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B3)在室溫下，在氮氣下，向7-乙基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B2)(2.07g，6.74mmol，1當量)的DMF(50ml)溶液中加入K2CO3(4.65g，33.7mmol，5當量)和碘甲烷(2.1ml，33.7mmol，5當量)。將生成的混合物于80℃攪拌1小時，然后冷卻至室溫，通過celite墊過濾，并真空濃縮。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物用Et2O研磨，得到白色固體的7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B3)(1.58g，73％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝323.1，RT＝2.90分鐘。
酯3(步驟B)7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B3)在室溫下，向7-乙基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B2)(191mg，0.62mmol，1當量)的DMF(3ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，50mg，1.25mmol，2當量)和碘甲烷(46μl，0.74mmol，1.2當量)，并將生成的溶液攪拌1小時，然后在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。分離兩層，并將有機相用鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt4/1至1/1)純化，得到褐色樹膠狀的7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B3)(44mg，22％)。
酯47-乙基-1-苯基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B4)向7-乙基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B2)(200mg，0.65mmol，1當量)的CH2Cl2(30ml)溶液中加入苯基硼酸(312mg，2.5mmol，3.8當量)、Cu(OAc)2(228mg，1.25mmol，1.9當量)、NEt3(350μl，2.5mmol，3.8當量)和powered活化的4A分子篩(300mg，150％w/w)。將生成的混合物于室溫攪拌2小時，然后通過celite墊濾出分子篩，并將有機相用2N HCl水溶液和2N NaOH水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt1/2)純化，得到白色固體的7-乙基-1-苯基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B4)(30mg，12％)。[M+H]+＝385.2，R.T.＝3.54分鐘。
酯57-乙基-1，3-二甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B5)7-乙基-1，3-二甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B5)是作為酯3(步驟B)合成的副產物得到的。
酯9和11(B9和B11)酯9和11(B9和B11)是按照酯3(步驟A)中所述的類似方法使用下表所示的合適前體制備得到
酯B6-B8、B10和B12-B13下面的酯是使用酯3(步驟A)中所述的類似方法，由下表所示的合適的前體和烷基化試劑制備得到
酯146-乙基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B14)在室溫下，向7-{[(氯甲基)磺?；鵠氨基}-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸甲酯(D26)(630mg，1.91mmol，1當量)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，153mg，3.82mmol，2當量)，并在5分鐘后，將溶液于100℃攪拌1小時，然后冷卻至室溫。加入NaH(60％在礦物油中的分散體，50mg，1.25mmol，0.6當量)，并將溶液于100℃再攪拌1小時，然后冷卻至室溫，并真空濃縮。將殘余物在AcOEt和2N HCl水溶液之間分配。分離兩層，并將有機相用飽和的NaHCO3水溶液和鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1至1/1)純化，得到褐色固體的6-乙基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B14)(143mg，41％)。
酯166-乙基-1-甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B16)在室溫下，向6-乙基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B14)(27mg，91μmol，1當量)的DMF(1ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，7mg，0.182mmol，2當量)和碘甲烷(200μl，3.2mmol，過量的)，并將生成的溶液攪拌1小時，然后在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。分離兩層，并將有機相用鹽水洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt9/1至4/1)純化，得到褐色固體的6-乙基-1-甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B16)(20mg，71％)。+＝309.1，R.T.＝2.90分鐘。
酯156-乙基-1，3-二甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B15)6-乙基-1，3-二甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B15)是作為酯B16合成的副產物獲得的。
酯176-乙基-1，3，3-三甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B17)
6-乙基-1，3，3-三甲基-1H-[1，2，5]噻二嗪并[3，4，5-hi]吲哚-8-羧酸甲酯2，2-二氧化物(B17)是作為酯B16合成的副產物獲得的。
酯187-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸乙酯(B18)在室溫下，在氮氣下，向7-(3-氯-丙?；被?-3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D49)(300mg，0.93mmol，1當量)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，41mg，1.02mmol，1.1當量)。將生成的溶液于100℃加熱1小時，并然后冷卻至室溫。用EtOH(2ml)中和過量的NaH，并真空濃縮該溶液。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用H2O洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt2/3)純化，得到白色固體的標題化合物(B18)(120mg，45％)。[M+H]+＝287.0，RT＝3.08分鐘。
酯192-乙基-7，7-二氧代-6，7，8，9-四氫-7l6-硫雜-6，9a-二氮雜-苯并[cd]薁-4-羧酸乙酯(B19)在室溫下，在氮氣下，向7-乙烯磺?；被?3-乙基-1H-吲哚-5-羧酸乙酯(D50)(130mg，0.4mmol，1當量)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，19mg，0.45mmol，1.2當量)。5分鐘后，將混合物于100℃加熱1小時，并然后冷卻至室溫。加入EtOH(1ml)，并將溶液用AcOEt稀釋。將有機相用2N HCl水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到褐色固體的標題化合物(B19)(100mg，77％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝323.3，RT＝2.93分鐘。
酯202-乙基-6-甲基-7，7-二氧代-6，7，8，9-四氫-7l6-硫雜-6，9a-二氮雜-苯并[cd]薁-4-羧酸乙酯(B20)在室溫下，在氮氣下，向2-乙基-7，7-二氧代-6，7，8，9-四氫-7l6-硫雜-6，9a-二氮雜-苯并[cd]薁-4-羧酸乙酯(B19)(200mg，0.621mmol，1當量)的DMF(10ml)溶液中加入NaH(60％在礦物油中的分散體，50mg，1.24mmol，2當量)，2分鐘后，加入MeI(46μl，0.74mmol，1.2當量)。將生成的混合物于室溫攪拌30分鐘，然后加入EtOH(1ml)，并將溶液真空濃縮。將殘余物溶于AcOEt中，并將有機相用H2O洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt1/1)純化，得到白色固體的標題化合物(B20)(150mg，76％)。[M+H]+＝337.1，RT＝3.24分鐘。
酯212-乙基-7，7-二氧代-6-苯基-6，7，8，9-四氫-7l6-硫雜-6，9a-二氮雜-苯并[cd]薁-4-羧酸乙酯(B21)向2-乙基-7，7-二氧代-6，7，8，9-四氫-7l6-硫雜-6，9a-二氮雜-苯并[cd]薁-4-羧酸乙酯(B19)(200mg，0.62mmol，1當量)的CH2Cl2(30ml)溶液中加入苯基硼酸(312mg，2.5mmol，4當量)、乙酸銅(II)(220mg，1.25mmol，2當量)、NEt3(350ml，2.5mmol，4當量)和活化的4A分子篩(300mg)。將生成的混合物于室溫攪拌2小時，并然后過濾。將濾液用2N HCl水溶液、2N NaOH水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOEt2/1)純化，得到白色固體的標題化合物(B21)(30mg，12％)。[M+H]+＝399.2，RT＝3.54分鐘。
BOC-保護的胺的制備BOC-保護的胺1[(1S，2R)-1-芐基-3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基丙基]氨基甲酸叔丁基酯(H1)將{(1S)-1-[(2S)-環(huán)氧乙烷-2-基]-2-苯基乙基}氨基甲酸叔丁基酯(10g，38mmol，1當量)[Chirex 1819W94 Lot#9924382]溶于EtOH(100ml)中，并加入環(huán)己基胺(13ml，114mmol，3當量)。在氮氣下將生成的混合物于回流溫度加熱12小時。冷卻該混合物，并通過真空蒸發(fā)除去溶劑。將生成的白色固體用H2O并然后用Et2O洗，隨后真空干燥，得到[(1S，2R)-1-芐基-3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基丙基]氨基甲酸叔丁基酯(H1)(9.0g，66％)。+＝363.2BOC-保護的胺2-46(H2-H46)
下述BOC-保護的胺2-46是按照BOC-保護的胺H1中所述的類似方法，用下表所示的合適的環(huán)氧化物或胺(只給出非市售的胺)代替環(huán)己基胺制備得到
BOC-保護的胺471，1-二甲基乙基[(1S，2R)-1-[(3-氯苯基)甲基]-2-羥基-3-(甲基氨基)丙基]氨基甲酸酯(H47)向甲胺(2N的MeOH溶液，6ml，12mmol，7.1當量)的溶液中加入1，1-二甲基乙基{(1S)-2-(3-氯苯基)-1-[(2S)-2-環(huán)氧乙烷基]乙基}氨基甲酸酯(K3)(500mg，1.68mmol，1當量)，并將生成的混合物在微波激活下于60℃攪拌10分鐘，然后冷卻至室溫，并真空濃縮，得到米色固體的1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-1-[(3-氯苯基)甲基]-2-羥基-3-(甲基氨基)丙基]氨基甲酸酯(H47)(245mg，44％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝329.4，RT＝2.13分鐘。
BOC-保護的胺48-49(H48-H49)Boc-保護的胺48-49是根據BOC-保護的胺47中所述的類似方法，使用下表所示的合適的環(huán)氧化物制備得到
BOC-保護的胺50苯基甲基[(2R，3S)-4-(3-氯苯基)-3-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-2-羥基丁基]甲基氨基甲酸酯(H50)在0℃，向1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-1-[(3-氯苯基)甲基]-2-羥基-3-(甲基氨基)丙基]氨基甲酸酯(H47)(245mg，0.75mmol，1當量)的CH2Cl2(5ml)溶液中加入吡啶(91ml，1.12mmol，1.5當量)和苯基甲基氯化碳酸酯(117ml，0.825mmol，1.1當量)，并將生成的溶液在此溫度下攪拌4小時，然后真空濃縮。將殘余物在硅膠上通過快速色譜法(異-己烷/AcOet4/1至1/1)純化，得到白色泡沫狀的苯基甲基[(2R，3S)-4-(3-氯苯基)-3-({[(1，1-二甲基乙基)氧基]羰基}氨基)-2-羥基丁基]甲基氨基甲酸酯(H50)(227mg，66％)。[M+H]+＝463.4，RT＝3.58分鐘。
BOC-保護的胺51-52(H51-H52)Boc-保護的胺H51-H52是根據BOC-保護的胺50中所述的類似方法，使用下表所示的合適前體制備得到
BOC-保護的胺531，1-二甲基乙基[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)丙基]氨基甲酸酯(H53)在0℃，將1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(D19)(25.6g，91.4mmol，1當量)的DMF(250ml)溶液用NEt3(15ml，108mmol，1.2當量)處理，并然后滴加氯甲酸芐基酯(14ml，98mmol，1.1當量)的DMF(50ml)溶液。將生成的溶液于0℃攪拌1小時，并在室溫下攪拌16小時，并然后真空濃縮。將殘余物在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配。將生成的沉淀用H2O稀釋，并過濾，得到白色固體的1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)丙基]氨基甲酸酯(H53)(31.5g，83％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
BOC-保護的胺541，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-{[(6-溴-2-吡啶基)甲基]氨基}-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(H54)向1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(D19)(280mg，1mmol，1當量)的CH2Cl2(6ml)溶液中加入6-溴-2-吡啶甲醛(186mg，1mmol，1當量)、AcOH(280μl，5mmol，5當量))和NaBH(OAc)3(848mg，4mmol，4當量)，并將生成的混合物于室溫攪拌1小時，然后用飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮。在硅膠上通過快速色譜法純化，得到白色固體的1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-{[(6-溴-2-吡啶基)甲基]氨基}-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(H54)(360mg，80％)。[M+H]+＝450.4，RT＝2.44分鐘。
BOC-保護的胺55-61(H55-H61)BOC-保護的胺55-61(H55-H61)是按照BOC-保護的胺54中所述的類似方法，使用下表所示的合適的醛(只給出非市售的醛)制備得到
BOC-保護的胺621，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-{[(5-乙基-3-噻吩基)甲基]氨基}-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(H62)在室溫下，向1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-{[(5-乙烯基-3-噻吩基)甲基]氨基}-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(H55)(520mg，1.3mmol，1當量)的EtOH(100ml)溶液中加入10％鈀-碳(50％wet，260mg，25％w/w)和NH4COOH(1.6g，25.4mmol，20當量)，并將生成的混合物在回流下攪拌2小時，然后冷卻至室溫。通過celite墊濾出催化劑，并除去大部分的溶劑。將殘余物在AcOEt和飽和的NaHCO3水溶液之間分配，并分離兩層。將有機相用飽和的NaHCO3水溶液洗，經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到白色固體的1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-3-{[(5-乙基-3-噻吩基)甲基]氨基}-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]氨基甲酸酯(H62)(410mg，79％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。[M+H]+＝505.1，RT＝2.71分鐘。
BOC-保護的胺63-66(H63-H66)
BOC-保護的胺63-66是按照BOC-保護的胺H1中所述的類似方法，用下表所示的合適的環(huán)氧化物或胺(只給出非市售的胺)代替環(huán)己基胺制備得到
酸的制備酸17-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸(A1)向7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸甲酯(B1)(120mg，0.42mmol，1當量)的EtOH(20ml)溶液中加入2N NaOH水溶液(20ml，40mmol，95當量)。將生成的混合物攪拌14小時，然后真空除去大部分的EtOH。將殘余物用Et2O萃取。將含水層使用2N HCl水溶液酸化，并將形成的白色沉淀用AcOEt萃取兩次。將合并的有機溶液經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到白色固體的7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸(A1)(62mg，57％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。+＝259.4，RT＝2.56分鐘。
酸1(另一種方法)7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸(A1)向7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸乙酯(B18)(120mg，0.42mmol，1當量)的EtOH(20ml)溶液中加入2N NaOH水溶液(20ml，40mmol，95當量)。將生成的混合物攪拌14小時，然后真空除去大部分的EtOH。將殘余物用Et2O萃取。將含水層使用2N的HCl水溶液酸化，并將形成的白色沉淀用AcOEt萃取兩次。將合并的有機溶液經MgSO4干燥，并真空濃縮，得到白色固體的標題化合物(A1)(62mg，57％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。+＝259.4，RT＝2.56分鐘。
酸2-17(A2-A17)酸2-17是按照酸1中所述的類似方法，由下表中所示的相應的酯制備得到
酸2-4(A2-A4)酸2-4是使用酸1(另一種方法)中所述的類似方法，由相應的酯制備得到
胺的制備胺1(2R，3S)-3-氨基-1-(環(huán)己基氨基)-4-苯基丁-2-醇二-鹽酸鹽(C1)將[(1S，2R)-1-芐基-3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基丙基]氨基甲酸叔丁基酯(H1)(9g，25mmol，1當量)溶于MeOH(70ml)中，并然后加入4M HCl的二噁烷(60ml，過量的)溶液。將生成的混合物在室溫下攪拌3小時，并然后通過真空蒸發(fā)除去溶劑。將生成的殘余物用AcOEt并然后用Et2O洗，隨后真空干燥，得到白色固體的(2R，3S)-3-氨基-1-(環(huán)己基氨基)-4-苯基丁-2-醇二-鹽酸鹽(C1)(7.4g，88％)。
胺2-46(C2-C46)胺2-46是按照胺1(C1)中所述的類似方法，分別由BOC-保護的胺H2-H46制備得到。在一些情況下，4M HCl的二噁烷溶液用3當量的對甲苯磺酸代替得到作為產物的對甲苯磺酸鹽。

胺50-52(C50-C52)胺50-52是按照胺53(C53)中所述的類似步驟，分別由BOC-保護的胺H50-H52制備得到
胺53苯基甲基[(2R，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁基]氨基甲酸酯鹽酸鹽(C53)將1，1-二甲基乙基[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[(苯基甲基)氧基]羰基}氨基)丙基]氨基甲酸酯(H53)(31.5g，76.1mmol，1當量)的THF(300ml)溶液用4N HCl的二噁烷(40ml，160mmol，2.1當量)溶液處理。將生成的溶液于室溫攪拌2小時，然后真空濃縮。將殘余物用Et2O/異-己烷研磨，得到白色固體的苯基甲基[(2R，3S)-3-氨基-2-羥基-4-苯基丁基]氨基甲酸酯鹽酸鹽(C53)(22.1g，83％)，將其不需進一步純化用于下一步驟。
胺54和56-66(C54和C56-C66)胺54和56-66是按照胺1(C1)中所述的類似方法，用合適的BOC-保護的胺代替[(1S，2R)-1-芐基-3-(環(huán)己基氨基)-2-羥基丙基]氨基甲酸叔丁基酯制備得到。在一些情況下，4M HCl的二噁烷溶液用3當量的對甲苯磺酸代替得到作為產物的對甲苯磺酸鹽。
實施例的制備實施例17-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸[(1S，2R)-1-芐基-2-羥基-3-(3-甲氧基-芐基氨基)-丙基]-酰胺(E1) 在室溫下，向7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸(A1)(31mg，0.12mmol，1當量)的DMF(2ml)和CH2Cl2(8ml)的溶液中加入(2R，3S)-3-氨基-1-(3-甲氧基-芐基氨基)-4-苯基-丁-2-醇二-甲苯磺酸鹽(C2)(77mg，0.12mmol，1當量)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基-碳二亞胺鹽酸鹽(28mg，0.15mmol，1.2當量)、1-羥基苯并三唑水合物(22mg，0.15mmol，1.2當量)和4-乙基嗎啉(34μl，0.27mmol，2.2當量)。將生成的混合物攪拌4小時，然后加入飽和的NaHCO3水溶液(10ml)。將生成的混合物劇烈攪拌20分鐘。通過疏水的玻璃料分離兩層，并真空濃縮該有機相。將殘余物通過用Et2O研磨來純化，得到白色固體的7-乙基-2-氧代-1，2，3，4-四氫-[1，4]二氮雜并[3，2，1-hi]吲哚-9-羧酸[(1S，2R)-1-芐基-2-羥基-3-(3-甲氧基-芐基氨基)-丙基]-酰胺(E1)(43.5mg，67％)。[M+H]+＝541.5，RT＝2.51分鐘。
實施例2-88(E2-E88)實施例2-88是按照實施例1中所述的類似方法，使用合適的酸和合適的胺制備得到


















實施例89N-[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]-7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-甲酰胺2，2-二氧化物(E89) 向苯基甲基((2R，3S)-3-{[(7-乙基-1-甲基-2，2-二氧代-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-基)羰基]氨基}-2-羥基-4-苯基丁基)氨基甲酸酯(D24)(1.35g，2.27mmol，1當量)的AcOEt(20ml)溶液中加入10％鈀-碳(50％wet，270mg，10％w/w)，并在氫氣下將生成的混合物于室溫攪拌2小時。通過celite墊濾出催化劑，并將溶液真空濃縮，得到白色泡沫狀的N-[(1S，2R)-3-氨基-2-羥基-1-(苯基甲基)丙基]-7-乙基-1-甲基-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-9-甲酰胺2，2-二氧化物(E89)(900mg，90％)。[M+H]+＝471.4，RT＝2.14分鐘。
實施例90-94(E90-E94)實施例90-94是使用實施例89中所述的類似方法，由下表所示的合適前體制備得到


實施例95[7-乙基-9-({[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基)丙基]氨基}羰基)-2，2-二氧代-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-1-基]乙酸(E95) 向1，1-二甲基乙基[7-乙基-9-({[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基)丙基]氨基}羰基)-2，2-二氧代-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-1-基]乙酸酯甲酸鹽(E73)(10mg)的CH2Cl2(1ml)溶液中加入TFA(1ml)，并將生成的溶液于室溫攪拌1小時，然后真空濃縮。將殘余物用Et2O研磨，得到白色固體的[7-乙基-9-({[(1S，2R)-2-羥基-1-(苯基甲基)-3-({[3-(三氟甲基)苯基]甲基}氨基)丙基]氨基}羰基)-2，2-二氧代-3，4-二氫-1H-[1，2，5]硫雜二氮雜并[3，4，5-hi]吲哚-1-基]乙酸(E95)(5mg，50％)。+＝673.3，RT＝2.71分鐘。
實施例96-106(E96-E106)實施例96-106是按照實施例1(E1)中的類似方法，使用下表所示的合適的酸和合適的胺制備得到



可按照下述分析，測定本發(fā)明的化合物體外的生物活性(I)Asp-2抑制試驗對于每一個分析的化合物，在384孔板中，加入-a)1μl的受試化合物的DMSO溶液(IC50曲線使用10個從500μM得到的1/2連續(xù)稀釋濃度)。
b)10μl底物(FAM-SEVNLDAEFK-TAMRA)的緩沖液溶液。通過下述方式配制將2ml的2mM底物的DMSO溶液稀釋成400ml緩沖液溶液(100mM乙酸鈉pH＝4.5，1l Milli-Q水，0.06％Triton X-100(0.5ml/l)，利用冰醋酸調節(jié)pH至4.5)。氨基甲基熒光素(FAM)以及四甲基若丹明(TAMRA)為熒光分子，一旦SEVNLDAEFK肽分解，二者協同在535nm處發(fā)出熒光。
c)10μl酶溶液。通過將16ml的500nM酶溶液稀釋到384ml的緩沖液溶液中(制備同上)。
在各板上包括空白孔(酶溶液用緩沖液替換)作為對照。將孔在室溫孵育1小時，并利用Tecan Ultra Fluorimeter/Spectrophotometer(485nm激發(fā)，535nm發(fā)射)讀取熒光。
(II)組織蛋白酶D抑制試驗對于每一個分析的化合物，在384孔板中，加入a)1μl的受試化合物的DMSO溶液(IC50曲線使用10個從500μM得到的1/2連續(xù)稀釋濃度)。
b)10μl底物(FAM-SEVNLDAEFK-TAMRA)的緩沖液溶液。通過下述方式配制將2ml的2mM底物的DMSO溶液稀釋成400ml緩沖液溶液(100mM乙酸鈉pH＝4.5，1l Milli-Q水，0.06％Triton X-100(0.5ml/l)，利用冰醋酸調節(jié)pH至4.5)。
c)10μl酶溶液。通過將1.6ml的200unit/ml(10mM HCl溶液)酶溶液稀釋到398.4ml的緩沖液溶液中(制備同上)。
在各板上包括空白孔(酶溶液用緩沖液替換)作為對照。將孔在室溫孵育1小時，并利用Tecan Ultra Fluorimeter/Spectrophotometer(485nm激發(fā)，535nm發(fā)射)讀取熒光。
藥理數據
E1-E106的化合物在Asp-2抑制試驗中進行測試并顯示抑制＜10μM。更特別地，實施例E3-E7、E9-E11、E13、E15-E16、E21、E27、E32、E36、E37-E39、E44、E47-E48、E51、E67、E70、E72、E74、E78-E79、E83、E86、E97、E102、E104和E105-E106的化合物在Asp-2抑制試驗中顯示抑制＜1μM。更特別地，實施例E3、E5、E15-E16、E39、E47、E51、E67、E70、E74、E97、E102、E104和E105的化合物在Asp-2抑制試驗和組織蛋白酶D抑制試驗中進行測試，并且在Asp-2抑制試驗中所顯示的抑制＜1μM，并且對Asp2的選擇性大于對CatD的選擇性＞100倍。
縮寫DMF 二甲基甲酰胺DMSO 二甲基亞砜DMAP 二甲基氨基苯酚DABCO 1，4-二氮雜二環(huán)[2.2.2]辛烷DME 二甲基醚THF 四氫呋喃HOBT N-羥基苯并三唑FAM 羧基熒光素TAMRA 羧基四甲基若丹明[]與肽序列有關的單氨基酸字母代號
權利要求
1.式(I)的化合物或其可藥用鹽或溶劑合物 其中R1和R2獨立地表示C1-3烷基、C2-4鏈烯基、鹵素、C1-3烷氧基、氨基、氰基或羥基；m和n獨立地表示0、1或2；p表示1或2；A-B表示-NR5-SO2-或-NR5-CO-；R5表示氫、C1-6烷基、C3-6鏈烯基、C3-6炔基、C3-8環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基-、雜芳基C1-6烷基-、芳基C3-8環(huán)烷基-或雜芳基C3-8環(huán)烷基-；X-Y-Z表示-N-CR8＝CR9-；R8表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基；R9表示氫、C1-6烷基、C3-8環(huán)烷基、芳基、雜芳基、芳基C1-6烷基-、雜芳基C1-6烷基-、芳基C3-8環(huán)烷基-、雜芳基C3-8環(huán)烷基-、-COOR10、-OR10、-CONR10R11、-SO2NR10R11、-COC1-6烷基或-SO2C1-6烷基(其中R10和R11獨立地表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基)；R3表示任選取代的C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-雜環(huán)基；R4表示氫、任選取代的C1-10烷基、C2-6炔基、-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烯基、芳基、雜芳基、雜環(huán)基、-C1-6烷基-C3-8環(huán)烷基、-C3-8環(huán)烷基-芳基、-雜環(huán)基-芳基、-C1-6烷基-芳基-雜芳基、-C(RaRb)-CONH-C1-6烷基、-C(RaRb)-CONH-C3-8環(huán)烷基、-C1-6烷基-S-C1-6烷基、-C1-6烷基-NRcRd、-C(RaRb)-C1-6烷基、-C(RaRb)-芳基、-C(RaRb)-雜芳基、-C(RaRb)-雜芳基-雜芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜芳基、-C(RaRb)-C1-6烷基-雜環(huán)基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-芳基、-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜芳基或-C1-6烷基-O-C1-6烷基-雜環(huán)基；Ra和Rb獨立地表示氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基或C3-8環(huán)烷基，或Ra和Rb與其相連的碳原子一起可形成C3-8環(huán)烷基或雜環(huán)基；Rc和Rd獨立地表示氫、C1-6烷基、C2-6鏈烯基、C2-6炔基、C3-8環(huán)烷基或Rc和Rd與其相連的氮原子一起可形成含氮雜環(huán)基；其中R3-R5、R9和Ra-Rd中的所述芳基、雜芳基或雜環(huán)基可任選被一個或多個(例如1-5個)下列基團所取代C1-6烷基、鹵素、鹵代C1-6烷基、鹵代C1-6烷氧基、氧代、C1-6烷氧基、C2-6炔基、C2-6鏈烯基、氨基、氰基、硝基、-NR22COR23、-CONR22R23-SO2R22、-SO2NR22R23、-COOR22、-C1-6烷基-NR22R23(其中R22和R23獨立地表示氫、C1-6烷基或C3-8環(huán)烷基)、-C1-6烷基-O-C1-6烷基、-C1-6烷酰基或羥基基團；并且其中R1-R5、R8-R11、R22-R23和Ra-Rd中的所述烷基和環(huán)烷基可任選被一個或多個(例如1-6個)下列基團所取代鹵素、C1-6烷基、C1-6烷氧基、C1-6烷基氨基、氨基、氰基、羥基、羧基或-COOC1-6烷基。
2.根據權利要求1的化合物，其為式E1-E106的化合物或其可藥用鹽。
3.藥物組合物，其包括如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物以及一種或多種可藥用稀釋劑或載體。
4.如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物，其用作藥物。
5.如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病中的用途。
6.如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物在制備用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的藥物中的用途。
7.一種治療或預防以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病的方法，所述方法包括給予患者有效量的如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物。
8.藥物組合物，其包括如權利要求1或權利要求2中所定義的式(I)化合物或其可藥用鹽或溶劑合物，其用于治療以升高的β-淀粉樣蛋白水平或β-淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病。
全文摘要
本發(fā)明涉及具有Asp2(β－分泌酶、BACE1或Memapsin)抑制活性的新的羥基乙基胺化合物，它們的制備方法，涉及包含它們的組合物以及它們在治療以升高的β－淀粉樣蛋白水平或β－淀粉樣蛋白沉積為特征的疾病尤其是阿爾茨海默病中的用途。
文檔編號A61K31/554GK1809573SQ200480017561
公開日2006年7月26日 申請日期2004年4月21日 優(yōu)先權日2003年4月23日
發(fā)明者伊曼紐爾·H·德蒙特, 薩利·雷德肖, 達里爾·S·沃爾特 申請人:葛蘭素集團有限公司