專利名稱：多糖與用于癌癥治療的化療劑的共同給藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及用于治療疾病的組合物和方法。具體地，本發(fā)明涉及包含多糖和藥劑的組合物，其中多糖降低了藥物的毒性性質(zhì)并且提高了其功效。
背景技術(shù)：
治療癌癥最廣泛使用的方法為手術(shù)、放射療法和化學(xué)療法。癌癥患者常常接受這些療法的組合并且約一半的患者接受化學(xué)療法。令人遺憾的是，化療劑由于其對患者的毒性作用以及用于靶向和殺死腫瘤細胞的特定劑量的功效而具有明顯的限制。
一旦癌細胞開始分裂和復(fù)制，大多數(shù)化療劑殺死癌細胞。細胞通過破壞細胞分裂而被殺死。例如，化療劑可阻止新DNA的形成或者阻斷細胞內(nèi)一些其它的基本功能。一些化療劑可通過誘導(dǎo)凋亡而起作用，主要通過引發(fā)細胞的程序性死亡過程而引起細胞自殺。雖然這些藥劑對于治療通常通過無限制的細胞分裂快速生長的癌細胞是有效的，但是其也殺死經(jīng)歷常規(guī)細胞分裂的健康的非癌細胞。該毒性作用在快速-生長的正常細胞，如骨髓細胞、消化道中的細胞、毛囊和生殖細胞中尤其明顯。由于化學(xué)療法損害健康組織，藥物的有效性因其劑量水平和治療頻率不應(yīng)該超出非-癌細胞的耐性水平而受到限制。此外，由于其身體的和情緒的副作用，化療方案常常顯著降低患者的生活質(zhì)量。由于沒有將藥物專門靶向癌組織的能力，化學(xué)療法的劑量必須維持在健康組織可耐受的范圍內(nèi)(即，治療指數(shù))，因此常常降低化學(xué)療法對疾病組織的最佳有效性。
如果能降低化療劑的毒性，則專業(yè)人員將能提高藥物的劑量而無不能接受的副作用的產(chǎn)生。提高藥物的功效可轉(zhuǎn)化為藥物減少的劑量，其在另一方面將潛在的對患者的有害作用降到最低同時提供最大的益處。通過提高化療藥物的功效而降低劑量與毒副作用的降低一起將通過控制腫瘤和通過降低有害的副作用而導(dǎo)致患者生活質(zhì)量的改善。
迄今為止已有用于權(quán)衡化療治療的有效性和有害副作用的各種方法。例如，一些方法包括為了幫助患者更好地耐受治療，通過更頻繁地給予較少的劑量而延長化療治療。其它方法包括添加額外的物質(zhì)于該化療方案。所述物質(zhì)包括推定能抵制化療劑毒副作用(如惡心)并且允許患者更好地耐受化療藥物的那些。由于患者的化療劑耐性可得到改善或提高，所述物質(zhì)還允許使用較高劑量的藥物來抵抗癌癥。
盡管化療方案已經(jīng)取得一些進展，仍然有明顯未滿足的對提高化療劑功效而同時降低其毒性的醫(yī)療需求。需要有通過降低大多數(shù)化療治療的有害性并且削弱其副作用而更有效地抵抗癌癥，而同時在治療期間提供給患者更好的生活質(zhì)量的療法。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明包括用于治療疾病如癌癥的組合物和方法。本發(fā)明的組合物包含一種或多種多糖以及一種或多種藥劑。本發(fā)明的方法包括一種或多種藥學(xué)制劑和一種或多種多糖共同給藥于需要其的受治療者，其中包含藥學(xué)制劑和多糖的該藥物制品具有降低的毒性。在一個方面，本發(fā)明的組合物具有降低的毒性和提高的功效。
在本發(fā)明的一個實施方案中，描述了一種在受治療者中治療癌癥的方法，包括將一種或多種多糖和有效劑量化療劑的混合物以藥學(xué)可接受的制劑給藥于受治療者，其中多糖選自半乳甘露聚糖，其可從許多植物和微生物來源獲得。該藥物制劑隨后以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的可接受的方式給藥于需要其的患者。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，一種或多種多糖和一種或多種化療劑的混合物給藥于需要其的受治療者，其中該混合物包含適于降低受治療者中的毒副作用而對所治療的特定病狀有效的比例的足夠量的多糖和化療劑，其中多糖選自半乳甘露聚糖(來自瓜爾豆)、阿拉伯半乳聚糖(來自美國落葉松)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(來自馬鈴薯)、角叉菜聚糖(來自麒麟海藻)和刺槐豆膠(來自角豆)。毒副作用被定義為通過受治療者由于缺乏多糖的化療劑的給藥而產(chǎn)生的那些生理效應(yīng)(癥狀)。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供的藥物制劑包括藥學(xué)可接受制劑中的一種或多種多糖和有效劑量的一種或多種化療劑的混合物，其中多糖選自半乳甘露聚糖(來自瓜爾豆)、阿拉伯半乳聚糖(來自美國落葉松)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(來自馬鈴薯)、角叉菜聚糖(來自麒麟海藻)和刺槐豆膠(來自角豆)。在一個方面，制劑中的混合物包含適于降低受治療者中任何毒副作用比例的一定量的一種或多種多糖和一種或多種化療劑。多糖與化療劑的比例可在10∶1至1∶10的范圍。具有50,000MW的修飾的半乳甘露聚糖時，最適比例在6∶1至1∶3的范圍。在另一個方面，混合物包含適于提高化療作用對治療癌癥功效的比例的一定量的一種或多種多糖和一種或多種化療劑。又一個方面，混合物包含適于有效地治療癌癥以及降低任何潛在毒副作用的比例的一定量的一種或多種多糖和一種或多種化療劑。在本發(fā)明更進一步的方面，提供了用于在需要其的受治療者中治療癌癥的方法，包括將以使在多糖組分存在時化療劑具有提高的治療功效而配制的一種或多種多糖和有效劑量的一種或多種化療劑的混合物給藥。
除非上下文中另外所需，以下術(shù)語將具有下列所指明的含義。
″受治療者″指動物，包括哺乳動物，如人、狗、貓、豬、母牛、綿羊、山羊、馬、大鼠、小鼠等等。
″患者″指人受治療者，其呈現(xiàn)具有特定癥狀或與病理生理學(xué)過程一致的癥狀的臨床背景。
″多糖″指主要由一種或多種糖和替代糖單體組成的聚合物。該糖單體可以本領(lǐng)域熟知的方式修飾。
有毒治療劑的″功效″指最小有效劑量和伴隨的毒副作用之間的關(guān)系。如果治療終點可通過較低劑量或較短劑量方案的給藥而完成，則藥劑的功效得到提高。如果可降低毒性，治療劑能以較長的劑量方案或甚至具有更大的患者適應(yīng)性和改善的生活質(zhì)量而長期給藥。此外，藥劑降低的毒性使得專業(yè)人員能提高劑量而更快地達到治療終點，或?qū)崿F(xiàn)更高的治療終點。無毒治療劑的″功效″指治療病癥時改善的治療效果。
″藥學(xué)可接受載體″指生理上相容的任何和所有溶劑，分散介質(zhì)，例如，人白蛋白或交聯(lián)的明膠多肽、包衣、抗菌劑和抗真菌劑、等滲劑，例如氯化鈉或谷氨酸鈉，和吸收延遲劑等等。上述介質(zhì)和試劑用于藥學(xué)活性物質(zhì)的用途是本領(lǐng)域所熟知的。優(yōu)選，載體適于口服、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、皮下、腸胃外、脊髓或硬膜外的給藥(例如，通過注射或輸液)。取決于給藥途徑，活性化合物可用材料包被以保護化合物免受酸類和可滅活該化合物的其它自然條件的作用。
″活性化合物″指此處用于癌癥治療的任何及所有化療劑，以及任何及所有添加的藥劑，其提高化療劑的功效和/或降低化療劑的毒性。
″腸胃外給藥″包括通過快速濃注或輸液的給藥，以及通過靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、動脈內(nèi)、鞘內(nèi)、囊內(nèi)、眶內(nèi)、心內(nèi)、皮內(nèi)、腹膜內(nèi)、氣管內(nèi)、皮下、表皮下、關(guān)節(jié)內(nèi)、囊下、蛛網(wǎng)膜下、脊髓內(nèi)、硬膜外以及胸骨內(nèi)的注射和輸液的給藥。
″有毒的″指當給藥于受治療者時由藥劑引起的任何副作用。
″腫瘤退化″分為(排除非特異性的死亡)″部分的″(小于治療開始時其大小的50％)，或″完全的″(腫瘤變得不可觸知)的等級。
″退化的持續(xù)時間″指分級為部分的或完全的退化的腫瘤持續(xù)為小于最初治療時其大小的50％的時間間隔。
″評估大小″指相對于治療開始時最初腫瘤大小以一個或兩個團加倍而選擇的腫瘤團。
″腫瘤團加倍所需的時間″為達到評估大小的時間；其用于半數(shù)腫瘤生長的總時延的計算[(T-C/C×100％]，其中T-C(天數(shù))為與對照(C)組的中值相比，腫瘤植入后治療(T)組達到評估大小的時間中值的差異。T-C值排除非特異性死亡，以及腫瘤未到達評估大小而死亡的任何其它動物而測定。
″有效劑量″為達到預(yù)定的生理效應(yīng)，如腫瘤大小縮小，而不超出患者對于該藥劑耐受性所需的化療劑的劑量。
提高的治療功效指與對照的化療劑的治療指數(shù)相比，化療劑(單獨的或如包含一種或多種多糖和一種或多種治療劑的組合物)的治療指數(shù)超過所期望的生理效應(yīng)，如腫瘤大小縮小、腫瘤生長延緩等等，和/或改善了患者對于該藥劑的耐受性。


圖1為半乳甘露聚糖的立體化學(xué)構(gòu)型；圖2為本發(fā)明的半乳甘露聚糖(來自瓜耳豆膠)和來自角豆樹(槐豆)樹膠的半乳甘露聚糖的1H-NMR光譜結(jié)果的圖示；圖3為圖2中所示1H-NMR結(jié)果的傅里葉變換；圖4為本發(fā)明的半乳甘露聚糖(來自瓜耳豆膠)和來自角豆樹膠的半乳甘露聚糖的13C-NMR光譜結(jié)果的圖示；圖5為本發(fā)明的半乳甘露聚糖的HPLC/RI-MALLS特征結(jié)果的圖示；圖6為生產(chǎn)本發(fā)明的半乳甘露聚糖的制造和純化過程的圖示；圖7為實施例3中所述的功效研究第一部分結(jié)果的圖表概要；圖8為實施例3中所述的功效研究第二部分結(jié)果的圖表概要；圖9為實施例4中所述的功效研究結(jié)果的圖表概要；圖10為實施例5中所述的功效研究結(jié)果的圖表概要；和圖11為實施例3、4和5中所述的三項功效研究結(jié)果的圖表概要。
詳述本發(fā)明提供用于治療需要其的個體的組合物和方法。本發(fā)明的組合物包含一種或多種多糖和一種或多種治療劑的混合物。本發(fā)明的組合物針對受疾病，如癌癥困擾的個體。本發(fā)明的多糖/治療劑組合物，一旦給藥于需要其的個體，優(yōu)選提高治療劑的治療功效而同時降低其毒副作用。
治療癌癥最廣泛使用的方法為手術(shù)、放射療法和化學(xué)療法。癌癥患者常常接受這些療法的組合并且約一半的患者接受化學(xué)療法。令人遺憾的是，化療劑由于其對患者的毒性作用以及用于靶向和殺死腫瘤細胞的特定劑量的功效而具有明顯的限制。
由于化學(xué)療法損害健康組織，藥物的有效性因其劑量水平和治療頻率不應(yīng)該超出非癌細胞的耐性水平而受到限制。此外，由于其身體的和情緒的副作用，化療方案常常顯著降低患者的生活質(zhì)量。由于沒有將藥物專門靶向癌組織的能力，化學(xué)療法的劑量必須維持在健康組織可耐受的范圍內(nèi)(即，治療指數(shù))，因此常常降低化學(xué)療法對疾病組織的最佳有效性。因此，如果可降低化療劑的毒性，則專業(yè)人員將能提高藥物的劑量而無毒副作用的產(chǎn)生。
一類藥物，氟代嘧啶(例如，5-氟尿嘧啶(5-FU))，已在許多實體腫瘤包括結(jié)腸直腸、乳房、非小細胞肺癌(NSCCL)、胃、胰腺、卵巢和頭以及頸部腫瘤的標準化療方案中使用超過四十年。包括延長的靜脈內(nèi)輸液和藥物動力學(xué)調(diào)節(jié)的5-FU給藥的日程安排改變已經(jīng)產(chǎn)生改善的響應(yīng)率和耐受性，然而其并不一定很好地轉(zhuǎn)化為提高的存活率。仍然有機會開發(fā)藥劑，其當與5-FU一起給予時，如此處所述的那樣，提高腫瘤的特異性傳遞以及提高給藥的安全性和簡便性。
最近的二十年中5-FU一直是用于如結(jié)腸直腸癌的癌癥治療的主要依靠。結(jié)腸直腸腺癌是占總數(shù)10-12％的癌死亡的第二個主要原因。美國每年發(fā)生估計130,000-155,000個新的病例。大約25％的患者呈現(xiàn)遠處轉(zhuǎn)移，而另外的20％在一生中發(fā)生轉(zhuǎn)移。1990年死亡率男性為24/100,000以及女性為16/100,000。不過，過去的二十年中主要由于較早的檢測該疾病的存活率大約提高了8％。
晚期結(jié)腸直腸癌治療中的進展主要歸因于圍繞5-FU為中心的方案的改進或增加，其仍然是轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌治療的首要化療劑?？焖贊庾㈧o脈內(nèi)(″IV″)治療，其在約十年前為護理標準，其產(chǎn)生11％至18％范圍的響應(yīng)率。通過″濃度對時間曲線″下面積而測定的暴露于5-FU的強度不僅與抗腫瘤活性而且與毒性很相關(guān)。包括每三周五天治療的方案產(chǎn)生了粘膜炎、腹瀉和中性白細胞減少。針對通過與甲酰四氫葉酸(亞葉酸)聯(lián)合的連續(xù)IV輸液或快速濃注而提高胸苷酸合酶抑制持續(xù)時間的方案提高響應(yīng)率至22％至38％的范圍。連續(xù)輸液方案可在大約20％的患者中產(chǎn)生手-足綜合癥，與快速濃注治療相比連續(xù)輸液中有類似的粘膜炎，但是通過連續(xù)輸液途徑，腹瀉和中性粒細胞減少具有較低的頻率。
拓撲異構(gòu)酶I抑制劑如依立替康已用于患有晚期結(jié)腸直腸癌的患者，其是首次接受化療的或5-FU方案無效的。在首次化療的患者中，南方意大利腫瘤小組的II期研究顯示在接受5-FU加亞葉酸的患者中18％的響應(yīng)率，以及恰好在接受5FU加亞葉酸之前給予依立替康的患者中40％的響應(yīng)率。3-4級毒性在兩種治療方案中都是很少見的。在5-FU無效的患者中，兩個隨機試驗表明與最好的維持護理或連續(xù)的5-FU輸液相比時，依立替康提高響應(yīng)率和存活率。依立替康產(chǎn)生比5-FU更嚴重的危及生命的脊髓抑制和腹瀉。這兩種藥劑的重疊毒性還限制了兩種化合物一起以最大劑量強度的使用。
奧沙利鉑為二氨基環(huán)己烷鉑復(fù)合物，其在以前所治療的結(jié)腸直腸癌患者中已顯示具有10％的單藥劑響應(yīng)率。當在接受首次治療的患者中與5-FU輸液聯(lián)合時，觀察到高達58％的響應(yīng)率。該藥物的并發(fā)癥包括外周神經(jīng)病和口-咽感覺遲鈍。目前正進行臨床試驗以比較5-FU奧沙利鉑與5-FU或依立替康的聯(lián)合與作為晚期結(jié)腸直腸癌的首次治療。
本發(fā)明提供聯(lián)合一種或多種多糖和一種或多種治療劑的用于治療受治療者疾病的方法和組合物。本發(fā)明的方法包括將有效劑量的一種或多種多糖和有效劑量的一種或多種治療劑的混合物給藥，以配制其中治療劑在多糖存在時具有提高的治療功效和降低的毒性的混合物。
本發(fā)明的一種目標疾病為癌癥。本發(fā)明范圍內(nèi)所設(shè)想的癌癥種類包括但不限于，慢性白血病、乳癌、肉瘤、卵巢癌、直腸癌、咽喉癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌、胃腸癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌和卡波西肉瘤。
然而，其它的治療方案也認為在本發(fā)明的范圍內(nèi)，包括但不限于，抗抑郁劑、消炎藥、腸胃病藥物(用于治療潰瘍和相關(guān)病癥)、抗-精神病藥物、抗-高血脂劑，等等，由于許多治療劑必須以慢性藥物給藥，即以長期的方式，因此潛在的劑量減少和生活質(zhì)量的改善成為有效性、治療劑成本和患者順應(yīng)性中的重要因素。
多糖組分的有效劑量為將接受化療劑的受治療者經(jīng)歷的一些、不一定全部的毒副作用減到最低程度或完全減輕所需的量。在一個方面，有效劑量為提高治療劑功效所需的量。在另一個方面，有效劑量為將藥物的毒副作用減到最低程度或消除并且提高該藥物在治療受治療者中功效所需的量。
提高的治療功效指與對照化療劑的治療指數(shù)相比，化療劑(作為包含一種或多種多糖和一種或多種治療劑的組合物)的治療指數(shù)超過所期望的生理效應(yīng)，如腫瘤大小縮小、腫瘤生長延緩等等，和/或改善患者對于該藥劑的耐受性。
在一個實施方案中，公開了包含一種或多種多糖和一種或多種治療劑的組合物。該多糖由單體單元形成。修飾的多糖也認為在本發(fā)明的范圍內(nèi)并且可以包括通過例如，有限控制的解聚，或例如，在該多糖的單體單元附加有脂類、蛋白質(zhì)或核酸部分的修飾。組合物的多糖可以為支鏈的或直鏈的。多糖包括但不限于，可獲自許多植物和微生物來源的半乳甘露聚糖，例如植物三棘皂莢、鐮狀苜蓿、四方瓜爾豆、胡蘆巴子和微生物的如角豆野油菜黃單胞菌、酵母和霉菌半乳甘露聚糖、阿拉伯半乳聚糖(來自美國落葉松)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(來自馬鈴薯)、角叉菜聚糖(來自麒麟海藻)和刺槐豆膠(來自角豆)。在一個方面，多糖可以是β-1，4-D-半乳甘露聚糖并且包含約1.7范圍比例的甘露糖比半乳糖。在另一個方面，半乳甘露聚糖多糖的分子量在約4,000至約200,000D的范圍內(nèi)。在一個具體的方面，半乳甘露聚糖具有約40,000至60,000D的平均分子量。在另一個方面，半乳甘露聚糖的結(jié)構(gòu)為聚-β-1，4甘露聚糖主鏈，帶有通過α-1-6-糖苷鍵而附加的側(cè)取代基。在一個方面，該半乳甘露聚糖多糖可以是β-1，4-D-半乳甘露聚糖。在一個具體的方面，該多糖為(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)。在另一個方面，半乳甘露聚糖可以為來自四方瓜爾豆種子的瓜耳豆膠的衍生物。
本發(fā)明的多糖可具有靶特異性糖的側(cè)支鏈，如半乳糖、鼠李糖、甘露糖或阿拉伯糖，其提供具有靶向細胞，尤其是腫瘤細胞表面上特定植物凝集素類型受治療者識別能力的聚合物表面。支鏈可以是低聚糖的單個單元或兩個或更多單元。
本發(fā)明的組合物可進一步包括增強子。所述增強子的實例為亞葉酸。研究表明增強子如亞葉酸的加入提高了響應(yīng)率。參見，Benson，A.B.，Oncology，12(10suppl 7)28-34，1998；Ardalan，B.，等，Cancer Invest.，16293-294，1998；和Harms，B.A.，等，Chapter62 in Clinical Oncology，2nd ed.，Abeloff(ed)，2000，ChurchillLivingstone，Inc.pp.1611-1637，其全部教導(dǎo)此處引入作為參考。在首次化療的患者中，南方意大利腫瘤小組進行的II期研究顯示在接受5-FU加亞葉酸的患者中18％的響應(yīng)率，以及恰好在接受5-FU加亞葉酸之前給予依立替康的患者中40％的響應(yīng)率。參見，Maiello，E.，等，Ann.Oncol.111045-51，2000，其全部教導(dǎo)此處引入作為參考。
本組合物的治療劑包括所有已知的列于例如，Physicians DeskReference中的藥物，以及實驗性的治療劑。在一個方面，治療劑為化療劑。
現(xiàn)代的癌癥化療是在二次世界大戰(zhàn)后以氮芥的引入起始的，氮芥為作為硫芥和一種葉酸拮抗劑，氨基蝶呤所遭遇的造血毒性后果而開發(fā)用于臨床應(yīng)用的烷基化劑。這些化合物在淋巴瘤患者和患有急性淋巴細胞性白血病的兒童中產(chǎn)生顯著的癥狀緩解。令人遺憾的是，由于抗藥性，一種已注意到的引入臨床的每種新藥的單劑治療的問題的快速發(fā)展，而未能獲得治愈。
實驗?zāi)[瘤中的研究已清楚地表明在所用劑量為可達到的、符合宿主耐受性的最高時產(chǎn)生最佳的抗腫瘤作用，其為本發(fā)明的主題。更近的數(shù)年中，術(shù)語劑量強度已用于定義每單位時間遞送的藥物量，通常為每周每平方米的毫克數(shù)。對于某些藥物，如并不是很依賴日程的烷基化劑，遞送的劑量強度直接影響治療結(jié)果?？赡苤斡拇蠖鄶?shù)腫瘤中，該問題變得很關(guān)鍵并且低于最佳規(guī)定劑量可能導(dǎo)致治療失敗。
在許多通過聯(lián)合化療可治愈的人腫瘤中，存在通常具有晚期的、巨大腫瘤的一部分患者，其通過這些方案不能有效地得到治療。即使是這部分患者通過利用自體骨髓拯救或造血生長因子提高劑量強度的治愈可能性還在繼續(xù)研究。
當使用單個藥物治療時，抗藥性很快就出現(xiàn)?；焺┑慕M合可用于治療各種癌癥。當一種藥物的劑量-限制毒性與另一種不重疊時，藥物可組合使用。當毒性產(chǎn)生時，由于可能并不知道主要的產(chǎn)毒作用藥劑，調(diào)節(jié)隨后的藥物劑量將是困難的。
周期-活性劑為需要細胞即將進入周期，即主動進入細胞分裂前細胞周期的、具有細胞毒性的藥物。這些藥物的某些主要對處于細胞一個時期的細胞有效。該命名的重要性為細胞周期-活性劑通常為日程-依賴性的，以及暴露的持續(xù)時間和劑量一樣重要并且通常比劑量更重要。相反，非細胞周期-活性劑通常不是日程-依賴性的，并且效果取決于給藥的總劑量，而不是日程表。烷基化劑通常認為是非周期活性的，而抗代謝物為周期-活性化合物的典型。
細胞周期-活性劑的實例為氟代嘧啶，如5-氟尿嘧啶(5-FU)和5-氟脫氧尿苷(5-FUdR)。5-FU通過DNA合成的抑制或通過摻入RNA，由此抑制RNA加工和功能而發(fā)揮其細胞毒性作用。通過胸苷酸合酶的有效抑制而抑制DNA合成的5-FU的活性代謝物為5-氟脫氧尿苷酸(5-FdUMP)。在快速生長的腫瘤中，胸苷酸合成酶的抑制似乎是由5-FU引起的細胞死亡的關(guān)鍵機制；然而，在其它腫瘤中，細胞死亡與5-FU摻入RNA更相關(guān)。也可能發(fā)生5-FU摻入DNA并且可能有助于5-FU的細胞毒性。
5-FU和5-FUdR具有針對一些實體腫瘤，最值得注意的是結(jié)腸癌、乳腺癌以及頭和頸部癌的抗腫瘤活性。包含5-FU的制品局部用于治療皮膚表皮角化病和表層基底細胞癌。
5-FU和5-FUdR主要的限制毒性包括骨髓和胃腸毒性。治療后4-7天通常發(fā)生口腔炎和腹瀉。通常停止進一步的治療直至從所產(chǎn)生的毒副作用中恢復(fù)。白細胞減少癥和血小板減少癥的最低點通常發(fā)生在5-天療程的單劑量后7-10天。通過肝動脈的5-FUdR輸液的劑量-限制毒性為短暫的肝臟毒性，有時引起膽硬化癥。5-FU全身給藥后所看到的較不常見的毒性為皮疹、小腦病征和結(jié)膜炎。
細胞周期-活性劑的另一個實例為氨甲蝶呤。該葉酸拮抗劑為在患有ALL的兒童中顯示誘導(dǎo)完全癥狀緩解最早的抗代謝物之一。氨甲蝶呤(4-氨基甲基蝶呤)和氨蝶呤為維生素葉酸的類似物。氨甲蝶呤和類似化合物通過抑制二氫葉酸還原酶而起作用。作為這種抑制的結(jié)果，胞內(nèi)的葉酸輔酶快速消耗。這些輔酶是胸苷酸生物合成以及嘌呤生物合成所必需的，因而，DNA合成因氨甲蝶呤和類似物的使用而被阻斷。存在和氨甲蝶呤的使用相關(guān)的很大毒性，如脊髓抑制和胃腸不適。氨甲蝶呤對胃腸道毒性的一個早期征兆是粘膜炎。嚴重的毒性可引起腹瀉，其歸因于可發(fā)展成潰瘍和出血的小腸損傷。
阿糖胞苷(ara-C)為脫氧胞苷的抗代謝物類似物。在該類似物中，OH基團在2′位處于β構(gòu)型中。該化合物最初分離自海綿Cryptothethya腺管。Ara-C為選擇用于急性髓細胞性白血病治療的藥物。Ara-C胞內(nèi)轉(zhuǎn)化為三磷酸核苷酸(ara-CTP)，其為DNA聚合酶的抑制劑并且摻入DNA中。后者事件被認為引起ara-C的致死作用。用ara-C治療的患者觀察到惡心和嘔吐。
許多其它化學(xué)療法被認為在本發(fā)明的范圍內(nèi)。嘌呤類似物，如6-巰基嘌呤和6-硫代鳥嘌呤，定義為也用作治療癌癥的藥物。羥基脲為用于治療癌癥的另一種藥物。羥基脲抑制核糖核苷酸還原酶，該酶將二磷酸水平的核糖核苷酸轉(zhuǎn)化為脫氧核糖核苷酸。長春花生物堿類也參與癌癥的治療。長春花生物堿類包括長春花堿、長春新堿和去乙酰長春酰胺。表鬼臼毒素為鬼臼毒素的衍生物，其用于所述癌癥如白血病、Hodgkin′s癥和其它癌癥的治療。
烷基化劑如二氯甲二乙胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮丙啶和甲基三聚氰胺以及烷基磺酸鹽用于治療各種癌癥。
亞硝基脲如亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲以及鏈脲霉素用于治療各種癌癥并且具有很容易通過血腦屏障的能力。
順氯氨鉑(二氨基-二氯-鉑)為具有廣譜抗腫瘤活性的鉑配位化合物。順氯氨鉑為反應(yīng)性分子并且能形成與DNA的內(nèi)部-和鏈內(nèi)連接以便DNA和蛋白質(zhì)交聯(lián)?？ㄣK為另一種基于鉑的抗腫瘤藥物。
三氮烯如氮烯唑胺以及甲基芐肼為抗腫瘤藥庫的一部分。
例如蒽環(huán)類的抗生素具有抗癌活性，如阿霉素、柔紅霉素和米托蒽醌。其它抗腫瘤抗生素包括博來霉素、放線菌素、絲裂霉素C和plycamycin。
其它的抗腫瘤藥物，如天冬酰胺酶，也認為在本發(fā)明的范圍內(nèi)。上述這些和其它藥物均具有本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的毒性特點。
可用于本發(fā)明的其它治療劑包括環(huán)磷酰胺(癌得星)、苯丙氨酸氮芥(馬法蘭)、苯丁酸氮芥(瘤可寧)、亞硝脲氮芥(BCNU)、硫替派、白血福恩(二甲磺酸丁酯)；糖皮質(zhì)激素例如脫氫可的松/氫化強的松、曲安縮松；其它的蛋白質(zhì)/DNA/RNA合成抑制劑例如氮烯唑胺(DTIC)、普魯芐肼(甲苯肼)；和紫杉醇。
可以與一種或多種多糖一起給藥而降低其毒性或提高功效的治療劑的實例包括以下抗感染藥包括抗生素、抗-病毒藥和疫苗、抗腫瘤藥，心血管藥物包括抗心率失常藥、抗高血壓藥等等，中樞神經(jīng)系統(tǒng)藥物包括鎮(zhèn)痛藥、減食欲藥、抗驚厥劑、抗炎藥和鎮(zhèn)靜劑等等，耳的(OTICS)、眼睛的(opthalmics)、胃腸的包括抗?jié)兯?、抗膽堿能藥等等，激素、呼吸藥物包括過敏藥物、支氣管擴張藥和解充血藥，局部藥物和維生素以及礦物質(zhì)。
并不希望受理論的束縛，有三個可能的機制可用于說明多糖如半乳甘露聚糖在與治療藥物如5-FU的混合物中的有益效果。一種機制涉及藥物和半乳甘露聚糖之間直接的物理相互作用。例如，作為靶細胞表面半乳糖特異的相互作用的結(jié)果，半乳甘露聚糖可能提高癌細胞膜的流動性和滲透性。多糖可由此充當遞送藥物至靶目標的有效載體。另外，半乳甘露聚糖可起作用而抑制腫瘤細胞的聚集以及其向正常細胞的粘附以使癌癥不能轉(zhuǎn)移。一旦聚合物-藥物偶聯(lián)物進入腫瘤，其由于其結(jié)構(gòu)和組成而為多糖所識別，多糖就可以釋放抗癌藥物。由于藥物只要與聚合物結(jié)合就是無活性的，所以治療劑的毒性可得到降低。一旦該聚合物-藥物偶聯(lián)物進入腫瘤，多糖就可以釋放治療劑。
多糖如半乳甘露聚糖另一種可能的作用模式可能涉及其與生物系統(tǒng)內(nèi)一些調(diào)節(jié)位點的相互作用，例如，如果那些位點受半乳糖-特異的殘基如半乳凝集素的控制。又一種可能的作用模式可能涉及具有特定化學(xué)結(jié)構(gòu)(特定的Man∶Gal比)和特定大小(分子量)的多糖對負責將治療劑快速清除出體內(nèi)的酶系統(tǒng)的抑制作用，因此可潛在地提高體內(nèi)藥物的生物利用率和延長藥物的平均滯留時間，由此改善藥物在癌癥治療中的治療特點。
在一個具體的方面，多糖為半乳甘露聚糖。包含半乳甘露聚糖的組合物的使用可具有提高患者對化療響應(yīng)的直接效果。例如，一種效果為有效化療所需治療劑劑量的減少。其可通過降低化療劑的毒性而對患者產(chǎn)生直接有益的效果，所述化療劑如此處例示的，但不限于，甲烯土霉素、5-FU、依立替康和順氯氨鉑。
半乳甘露聚糖可從各種如植物和微生物來源的天然來源獲得。多糖還可以合成制得。半乳甘露聚糖可源于角豆樹膠(角豆)、瓜耳豆膠(四方瓜爾豆)和皂莢樹(三棘皂莢)，為商業(yè)可獲得的半乳甘露聚糖的實例。
半乳甘露聚糖為包含甘露糖和半乳糖的聚合物。分離的多糖中甘露糖對半乳糖的最終比例可根據(jù)半乳甘露聚糖的來源和所用的分離方法而改變，一般介于一和四之間。
該多糖半乳甘露聚糖為可以各種大小范圍存在的聚合物。例如，半乳甘露聚糖可具有約20,000至約600,000D范圍的分子量。半乳甘露聚糖可在約90,000至約415,000D的大小范圍內(nèi)。此外，半乳甘露聚糖可以衍生或水解產(chǎn)生例如4000至60,000D范圍內(nèi)天然分子的片段。
在本發(fā)明的一個實施方案中，公開了用于治療疾病，如癌癥的方法，包括將一種或多種多糖和有效劑量的一種或多種化療劑的混合物以藥學(xué)可接受的制劑給予受治療者，其中多糖選自來自各種來源的半乳甘露聚糖。該藥物制劑隨后以本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的任何可接受的方式給予需要其的患者。在該實施方案的一個方面，組分，即多糖和藥物可以分別給予受治療者。
該實施方案的多糖組分可利用此處清楚說明的方法制備。如果例如半乳甘露聚糖為本實施方案的一種組分，其可從本身獲自四方瓜爾豆種子的瓜耳豆膠中提取。
一旦制備多糖其可以粉劑或水溶液形式儲存，例如在生理鹽水中。也可使用其它可接受的生理溶液。可利用制備的多糖和一種或多種藥劑組成藥物制劑。多糖的IV治療劑量可為10至200mg/kg范圍并且通常優(yōu)化至用于最佳治療表現(xiàn)的化療劑的最優(yōu)治療劑量。對于5-FU已確定最優(yōu)劑量(小鼠中)為30至150mg/kg，最佳結(jié)果為約120mg/kg。然而，其可隨其它化療而改變。可用于本組合物給藥的藥物載體為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的。
給藥途徑包括口服、靜脈內(nèi)、皮下、腹膜內(nèi)、肌內(nèi)及等等。給藥途徑可以是足以將組合物以符合良好醫(yī)療實踐的方式導(dǎo)入受治療者的任何途徑。這些不同的給藥途徑為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，將一種或多種多糖和化療劑的混合物給予需要其的受治療者，其中該混合物包含適于降低受治療者中的毒副作用而對所針對的特定病狀有效的比例的足夠量的多糖和化療劑，其中多糖選自來自不同植物來源的半乳甘露聚糖、阿拉伯半乳聚糖(來自美國落葉松)、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖(來自馬鈴薯)、角叉菜聚糖(來自麒麟海藻)和刺槐豆膠(來自角豆)。毒副作用定義為通過受治療者由于缺乏多糖的化療劑的給藥而產(chǎn)生的那些生理效應(yīng)(癥狀)。而足夠量的多糖此處理解為將藥劑給藥產(chǎn)生的毒副作用減到最低程度或減輕所需的量。
在本發(fā)明的另一個實施方案中，提供藥物制劑，在藥學(xué)可接受的制劑中包括一種或多種多糖和有效劑量化療劑的混合物，其中多糖選自植物來源的半乳甘露聚糖。在一個方面，制劑中的混合物包含適于有效地治療癌癥以及降低受治療者中任何毒副作用的比例的一定量的一種或多種多糖和化療劑。在另一個方面，混合物包含適于提高化療作用對治療癌癥功效的比例的一定量的一種或多種多糖和化療劑。在仍是本發(fā)明的另一個方面，提供用于治療需要其的受治療者中癌癥的方法，包括將一種或多種多糖和有效劑量的化療劑配制而使化療劑對受治療者具有提高的治療功效和降低的毒性作用的混合物給藥。
任何本發(fā)明確定的化合物可單獨或以藥物組合物，其中其與合適的載體或賦形劑以預(yù)防、治療或改善各種病癥，包括以此處描述為特征的那些的治療有效劑量混合，而給予受治療者，包括人。治療有效劑量進一步指足以達到與所述病癥相關(guān)的癥狀的預(yù)防或改善的化合物的量。用于本發(fā)明化合物配制和給藥的技術(shù)可在Goodman和Gilman的The Pharmacological Basis of Therapeutics，Pergamon Press，最新的版本中查找到。
本發(fā)明的化合物可通過直接注射入那些位點而靶向至特定位點。設(shè)計用于中樞神經(jīng)系統(tǒng)的化合物應(yīng)當能通過血腦屏障或適于通過局部注射給藥。
適合用于本發(fā)明的藥物組合物包括其中包含有效量的活性成分以達到預(yù)期目的的組合物。更具體地，治療有效量指預(yù)防所治療的受治療者現(xiàn)有癥狀和基本病狀發(fā)展或減輕之的有效量。有效量的確定在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力內(nèi)。
對于用于本發(fā)明方法的任何化合物，治療有效劑量可根據(jù)細胞培養(yǎng)測定法初步估計。例如，可在動物模型中調(diào)配劑量以達到包括如細胞培養(yǎng)中所測定的IC50(50％的細胞顯示預(yù)期效果的劑量)的循環(huán)濃度范圍。上述信息可用于更準確地測定人中的有效劑量。
治療有效劑量指引起受治療者中癥狀減弱或存活延長的化合物的量。所述化合物的毒性和治療功效可通過細胞培養(yǎng)或?qū)嶒瀯游镏械臉藴仕帉W(xué)方法確定，例如，用于測定LD50(50％既定群體致死的劑量)和ED50(50％既定群體治療有效的劑量)。毒性作用和治療作用間的劑量比為治療指數(shù)并且其可以表示為LD50和ED50的比例。顯現(xiàn)高治療指數(shù)的化合物為優(yōu)選的。獲自這些細胞培養(yǎng)測定法和動物研究的數(shù)據(jù)可用于調(diào)配用于人的劑量范圍。所述化合物的劑量優(yōu)選處于包括ED50而很少或沒有毒性的循環(huán)濃度范圍內(nèi)。該范圍內(nèi)的劑量可根據(jù)所用的劑量和使用的給藥途徑改變?？赏ㄟ^個人醫(yī)師視病情而選擇正確的制劑、給藥途徑和劑量。可分別調(diào)整劑量和時間間隔以提供活性部分足以維持預(yù)定效果的血漿水平。
在局部給藥或選擇性攝取的情況下，藥物的有效局部濃度不一定和血漿濃度有關(guān)。
當然，所給組合物的量將取決于所治療的受治療者、受治療者的體重、病痛的嚴重程度、給藥方式和處方醫(yī)師的判斷。
本發(fā)明的藥物組合物可以已知的方式，例如，通過常規(guī)混合、溶解、?；⒀心?、乳化、膠囊化、包埋(entrapping)或凍干的方法制造。
用于本發(fā)明的藥物組合物由此可以利用一種或多種生理學(xué)可接受載體用常規(guī)方法配制，包括賦形劑和輔劑，其能促進活性化合物加工成能在藥學(xué)上使用的制品。適當?shù)闹苿┤Q于所選的給藥途徑。
對于注射，本發(fā)明的藥劑可以在水溶劑中，優(yōu)選在生理相容的緩沖液如Hank′s溶液、Ringer′s溶液或生理鹽水緩沖液中配制。對于經(jīng)粘膜給藥，適于透過屏障的滲透劑用于制劑中。所述滲透劑通常是本領(lǐng)域已知的。
對于口服給藥，化合物可方便地通過將活性化合物和本領(lǐng)域熟知的藥學(xué)可接受載體結(jié)合而配制。所述載體可使得本發(fā)明的化合物配制為片劑、丸劑、糖錠、膠囊、液體、凝膠劑、糖漿劑、漿液、懸浮液等等，用于被所治療的受治療者口服攝入。用于口服使用的藥物制劑可通過添加固體賦形劑，選擇性地研磨得到的混合物和加工該顆粒混合物，如果需要，在添加合適的輔劑后獲得片劑或糖衣藥丸芯而獲得。合適的賦形劑尤其為，填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露糖醇或山梨糖醇；纖維素制品如，例如玉米淀粉、小麥淀粉、米淀粉、馬鈴薯淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可添加崩解劑，如交聯(lián)的聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或藻酸或其鹽如藻酸鈉。
可給糖衣藥丸芯提供合適的包衣。為此，可使用濃縮的糖溶液，其可選擇性地包含阿拉伯樹膠、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯凝膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液和合適的有機溶劑或溶劑混合物。染料或顏料可加入到片劑或糖衣藥丸包衣中用于標識或表征活性化合物劑量的不同組合。
可口服使用的藥物制劑包括由明膠制成的推入配合式(push-fit)膠囊以及由明膠和增塑劑，如甘油或山梨糖醇制成的軟的密封膠囊。推入配合式膠囊可以包含與填充劑如乳糖，粘合劑如淀粉、和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂以及可選擇的穩(wěn)定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可以溶解或懸浮在合適的液體中，例如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇。此外，可添加穩(wěn)定劑。所有用于口服的制劑都應(yīng)該為適于上述給藥的劑量。
對于口腔含化給藥，組合物可采取用常規(guī)方法配制的片劑或糖錠形式。
對于通過吸入法的給藥，用于本發(fā)明的化合物以用密閉包裝或噴霧器呈遞的氣霧噴劑的形式，借助合適的推進劑，例如二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟甲烷、二氧化碳或其它合適的氣體而方便地遞送。在密閉氣霧劑的情況下，劑量單位可通過提供一個用于遞送既定量的閥而確定。用于吸入器或吹入器的例如明膠的膠囊和藥筒可配制成包含化合物和合適的粉劑如乳糖或淀粉的粉末混合物。
化合物可配制用于通過注射，例如通過快速濃注或連續(xù)輸液的腸胃外給藥。用于注射的制劑可以和加入的防腐劑一起以單元劑量存在，例如，在安瓿中或在多劑量容器中。該組合物可采取如油或水性賦形劑中懸浮液、溶液或乳液的形式，并且可包含如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑的配制劑。
用于腸胃外給藥的藥物制劑包括水溶性形式活性化合物的水溶液。另外，活性化合物的懸浮液可以制備成適當?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。合適的親脂性溶劑或賦形劑包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸酯如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可包含增加懸浮液粘度的物質(zhì)，例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇或葡聚糖?？蛇x擇地，懸浮液也可以包含合適的穩(wěn)定劑或提高化合物溶解度從而使得能夠制備高濃縮的溶液的試劑。
或者，活性成分可以是粉劑形式而在使用前用于和合適的賦形劑，例如無菌的無熱原水組配。
該化合物還可配制為直腸組合物如栓劑或滯留灌腸劑，例如包含常規(guī)的栓劑基質(zhì)如可可脂或其它的甘油酯。
除了之前描述的制劑外，化合物還可配制成長效制劑。所述長效制劑可通過植入(例如，皮下或肌內(nèi)注射)或通過肌肉注射給藥。由此，例如，化合物可與合適的聚合或疏水材料(例如，作為可接受的油的乳劑)或離子交換樹脂一起，或以微溶衍生物，例如以微溶鹽而配制。
用于本發(fā)明疏水化合物的藥物載體為包含苯甲醇、非極性表面活性劑、水可混溶的有機聚合物和水相的共溶劑體系。當然，共溶劑體系的比例可在不破壞其溶解性和毒性特征的情況下相當大地進行改變。此外，可改變共溶劑組分的同一性。
或者，可使用用于疏水藥物化合物的其它遞送體系。脂質(zhì)體和乳劑為熟知的用于疏水藥物的遞送賦形劑或載體的實例。某些有機溶劑如二甲亞砜也可使用，雖然通常以更大的毒性為代價。另外，化合物可使用持續(xù)釋放系統(tǒng)，如包含治療劑的固體疏水聚合物的半滲透性的基質(zhì)來遞送。各種持續(xù)釋放材料已確立并且為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知。根據(jù)其化學(xué)性質(zhì)，持續(xù)釋放膠囊劑可以釋放化合物幾周至100天以上。根據(jù)治療試劑的化學(xué)性質(zhì)和生物學(xué)穩(wěn)定性，可以采用另外的蛋白質(zhì)穩(wěn)定化方案。
藥物組合物還可以包括適合的固體或凝膠相載體或賦形劑。所述載體或賦形劑的實例包括但不限于，碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖、淀粉、纖維素衍生物、明膠和聚合物，例如聚乙二醇。
本發(fā)明的許多化合物可作為具有藥物上相容的平衡離子的鹽而提供。藥物上相容的鹽可與許多酸類形成，包括但不限于鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等等。鹽傾向于在水或者其它質(zhì)子溶劑中比其相應(yīng)的游離堿形式更容易溶解。
合適的給藥途徑可例如，包括口服、直腸、經(jīng)粘膜、透皮或腸內(nèi)給藥；腸胃外的遞送，包括肌內(nèi)、皮下、髓內(nèi)注射以及鞘內(nèi)、直接心室內(nèi)、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)或眼內(nèi)注射。
或者，化合物可以局部而不是全身的方式給藥，例如通過化合物常常以長效或持續(xù)釋放的制劑直接注射進入患部。
此外，化合物可以在靶向藥物遞送系統(tǒng)中給藥，例如在包被有受感染細胞特異性抗體的脂質(zhì)體中。該脂質(zhì)體將靶向至細胞并且由細胞選擇性地攝取。
如果需要，該組合物可存在于包裝或配量器裝置中，其包含一種或多種包含活性成分的單位劑型。該包裝可例如包括金屬或塑料薄膜，如泡罩包裝。該包裝或配量器裝置可附有給藥的說明書。還可以制備包含配制在相容的藥物載體中的本發(fā)明化合物的組合物，將其置于合適的容器中，并且針對所示病癥的治療作出標明。標簽上所示的合適的病癥可包括此處所述疾病的治療。
藥學(xué)可接受載體通常加入一般的藥物制劑中。例如，在口服制劑中，可使用羥基丙基纖維素、膠體二氧化硅、碳酸鎂、甲基丙烯酸共聚物、淀粉、滑石、糖球、蔗糖、聚乙二醇、聚山梨酸酯80和二氧化鈦、交聯(lián)羧甲纖維素鈉、食用墨、明膠、一水合乳糖、硬脂酸鎂、聚乙烯吡咯烷酮、月桂基硫酸鈉、巴西棕櫚蠟、聚乙烯聚吡咯烷酮、羥丙基甲基纖維素、乳糖、微晶纖維素及其它組分。例如，半乳甘露聚糖已用作藥劑口服遞送的載體，其處于非液態(tài)的形式。參見美國專利4,447,337；5,128,143和6,063,402，其全部教導(dǎo)此處引入作為參考。
具體實施例方式
實施例1半乳甘露聚糖的結(jié)構(gòu)本發(fā)明的半乳甘露聚糖寡聚物為多糖。在一個方面其具有約48,000D的平均分子量。如下顯示的為本發(fā)明半乳甘露聚糖的認可的化學(xué)命名和結(jié)構(gòu)式。另顯示的為立體化學(xué)構(gòu)型。
完整的化學(xué)名稱(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)。
由線性(1→4)-β-D-吡喃甘露糖基單元組成的主鏈，單個β-D-吡喃半乳糖基通過(1→6)鍵與其連接，如以下圖示 圖2顯示了經(jīng)核磁共振(NMR)所測定的本發(fā)明半乳甘露聚糖多糖的結(jié)構(gòu)。將本發(fā)明的半乳甘露聚糖與來自角豆樹(角豆莢果)樹膠的半乳甘露聚糖相比。由于來自瓜耳豆膠的半乳甘露聚糖(本發(fā)明的半乳甘露聚糖)中Man/Gal的比為1.7∶1而來自角豆樹膠(角豆)的半乳甘露聚糖中為4∶1，兩個主要糖殘基，即甘露糖(Man)和半乳糖(Gal)的簡便鑒定分別來自位于4.8p.p.m.的兩個峰(雙峰)。
圖3顯示了本發(fā)明瓜耳豆膠半乳甘露聚糖1H-NMR光譜的傅里葉變換。半乳糖的異頭質(zhì)子信號出現(xiàn)在約4.9ppm(雙峰)。甘露糖的異頭質(zhì)子信號出現(xiàn)在約4.6ppm(寬的信號)。這些信號與游離單糖的信號完全分開；半乳糖的α質(zhì)子在5.1ppm而β在4.5ppm，甘露糖的α在4.8ppm而β在5.0ppm。甘露糖與半乳糖單元的比可針對這個工作標準很容易地計算，為1.7。
圖4顯示了本發(fā)明半乳甘露聚糖的13C-NMR光譜，顯示了化學(xué)位移的詳細位置和其強度。該研究證實了半乳甘露聚糖的上述化學(xué)結(jié)構(gòu)。
圖4說明下列情況1)在NMR光譜中看到所有的三種糖，即，β-D-吡喃半乳糖基、4-O-β-D-吡喃甘露糖基(未取代的)和4，6-雙-O-β-D-吡喃甘露糖基(取代的)。來自所有的三種糖C1至C6，即G-1至G-6、M-1至M-6和GM-1至GM-6的信號的位置分別顯示于圖中。(這些對內(nèi)G-2和G-4、M-1和GM-1、M-2和GM-2、M-3和GM-3、M-4和GM-4的位置是一致的)。
2)NMR光譜中半乳糖信號的位置完全對應(yīng)于游離吡喃半乳糖的碳原子的位置，提供了半乳甘露聚糖中Gal單元位置取代基缺失的證據(jù)。
3)某些甘露糖殘基的取代在C-6(由于信號從″正常的″未取代的亞甲基碳的63.6p.p.m.至69.6p.p.m.″取代的″亞甲基碳的信號位移，伴隨鄰近的C-5信號從″正常的″78p.p.m.至76.4p.p.m.的位移)；63.6p.p.m。亞甲基碳的位移得到很好的證明。
4)半乳糖殘基的C-1參與半乳糖苷鍵的形成(由于與游離半乳糖的C-1相比，NMR光譜中的C-1具有+6.5p.p.m的低磁場位移)。
5)甘露糖殘基彼此″頭-尾″連接，形成(1→4)主鏈。
6)未取代的Man-Man對與取代的，Man(Gal)-Man、Man-Man(Gal)和Man(Gal)-Man(Gal)在一起；來自瓜耳豆膠、角豆樹膠和苜蓿種子的半乳甘露聚糖在C-4(Man)共振區(qū)(分為三個峰)的NMR光譜顯示，觀察到來自角豆樹膠的半乳甘露聚糖在高磁場的最高峰(Man/Ga1＝3.8)；最低峰對應(yīng)于來自苜蓿種子的半乳甘露聚糖(Man/Gal＝1.4)和中間峰對應(yīng)于本發(fā)明的半乳甘露聚糖(來自瓜耳豆膠的半乳甘露聚糖，Man/Gal＝1.7)。
7)本發(fā)明的半乳甘露聚糖(來自瓜耳豆膠的半乳甘露聚糖)中甘露糖與半乳糖的比為1.7(其為甘露糖和半乳糖C-1信號的總強度比，并且從由C-4(Man)共振測定的，未取代的和取代的Man殘基的雙頻率計算得到)。
8)未取代的Man-Man對的相對頻率為22％，Man(Gal)-Man和Man-Man(Gal)的相對頻率總計為48％，而完全取代的Man(Gal)-Man(Gal)對的相對頻率為30％(來自C-4信號分離為各自的三個線/峰的強度)。
圖5顯示了本發(fā)明的半乳甘露聚糖經(jīng)HPLC/RI-MALLS(高效液相色譜法/折射率-多角度激光散射)的定量和分子量。
利用凝膠滲透色譜法(GPC)分離技術(shù)(亦稱體積排阻色譜法-SEC)的高效液相色譜法(HPLC)為用于聚合物表征的已知技術(shù)。GPC與多角度激光散射(MALLS)和折射率(RI)檢測的結(jié)合為用于聚合糖類絕對分子量測定的有效方法。光散射檢測的運用消除了對GPC體系耗時的、依賴構(gòu)象的校準的需要。GPC-MALLS超過標準GPC的另一個優(yōu)點為除了分子量，還可遵循有關(guān)在溶解狀態(tài)中半徑和構(gòu)象的額外信息。
GPC-MALLS方法的原理基于光被大分子比被小分子更強烈地散射的事實。在色譜分析進行期間，MALLS檢測器測定檢波器位于十五個不同角度時激光束的光散射程度。光散射檢測器的輸出與大分子的濃度和分子量的倍增成正比。因此，光散射峰的外形是不對稱的。此外，由于RI檢測器信號僅與濃度成正比(參見圖5)，其與RI峰不一致。在任何洗脫時間，從柱洗脫的聚合物的分子量可根據(jù)MALLS和RI信號的份額計算。獲得分子量對洗脫體積的曲線圖并且可計算(平均)分子量和分子量分布。
貫穿本發(fā)明的R&D和擴大時期，本研究者采用GPC/IR-MALLS技術(shù)定量藥物物質(zhì)并且表征其平均分子量和分布。MALLS分析法的使用消除了用″標準的GPC″的干擾MW評估的許多因素。GPC分離以流體動力學(xué)體積差異代替分子量差異為基礎(chǔ)。分子構(gòu)象的差異，例如葡聚糖的支化，可強烈影響流體動力學(xué)體積。其次，帶正電或負電聚合物的GPC洗脫由于固定相的排斥或吸引而可能是不理想的。GPC-MALLS的結(jié)果不受這些色譜缺點的影響，并且可獲得絕對分子量。
本發(fā)明半乳甘露聚糖的HPLC洗脫特點雙監(jiān)測的使用提供了兩個重要的化學(xué)鑒定，例如，經(jīng)折射率信號的定量測定和經(jīng)多角度激光散射(MALLS)檢測器的絕對分子量。此外，這些色譜可提供本發(fā)明半乳甘露聚糖的分子穩(wěn)定性和分解衍生物的數(shù)據(jù)。
實施例2純化和制造過程圖6顯示的為用于本發(fā)明半乳甘露聚糖純化和制造過程實例的流程圖。將優(yōu)質(zhì)的瓜耳豆膠以1％在45℃溶于溫水2小時。pH用1M HCl降至2.2并且溶液加熱至95℃2小時。pH用1M NaOH調(diào)節(jié)至5.8。溶液隨后冷卻至20℃并且用玻璃濾器過濾。接下來加入CuSO4/Na-K酒石酸鹽并且在200目過濾器上收集沉淀，用水溶液洗滌然后在5％HCl的96％EtOH中洗滌。隨后用75％EtOH洗滌并且用96％EtOH洗滌兩次。且最終真空冷凍干燥為白色固體。選擇來自很容易可獲得來源(例如，瓜耳豆膠)的半乳甘露聚糖用于過程優(yōu)化以及制造。在體內(nèi)(動物中)檢驗可溶半乳甘露聚糖寡聚物的功效和毒性的總降低。
上述制造過程產(chǎn)生了來自合格的高質(zhì)量瓜耳豆膠粉劑(來自瓜爾膠豆的種子)的半乳甘露聚糖(GM)高可溶寡聚物形式的產(chǎn)物。設(shè)計該過程用于產(chǎn)生具有約48,000道爾頓范圍內(nèi)的平均分子量，以及甘露糖與半乳糖的比例在約1∶7范圍內(nèi)的高純度可溶和均一的寡聚物。該過程包括四個主要階段；控制解聚作用以產(chǎn)生所需的半乳甘露聚糖寡聚物以及三個純化步驟，不溶性雜質(zhì)的除去、水溶性雜質(zhì)的除去、有機可溶性雜質(zhì)的除去，以及最終冷凍干燥產(chǎn)生純的和穩(wěn)定的形式的半乳甘露聚糖粉劑。
半乳甘露聚糖可在單一使用的小瓶中以無菌濃縮液包裝并且遞送，而批量的半乳甘露聚糖可以粉劑生產(chǎn)和儲存。此處所述的過程用于批量的藥物和最終的藥物產(chǎn)品。半乳甘露聚糖藥物產(chǎn)品可與形成藥物制劑活性成分的藥物如5-氟尿嘧啶一起結(jié)合和給藥。該藥物產(chǎn)品包含用于輸液的生理鹽水(約0.9M氯化鈉水溶液)并且具有約6.5的pH。
實施例3-5功效研究本發(fā)明的半乳甘露聚糖為包括連接于甘露糖主鏈的暴露的半乳糖部分的半乳甘露聚糖衍生物。該化合物認為與半乳糖結(jié)合的、通常位于細胞表面的植物凝集素或半乳凝集素相互作用。植物凝集素為糖結(jié)合蛋白質(zhì)，一般地位于細胞表面，其介導(dǎo)各種類型的細胞相互作用。人們通常認為植物凝集素在植物和在動物組織以及在腫瘤細胞系中介導(dǎo)許多生物學(xué)識別事件。植物凝集素在細胞-細胞粘附以及在細胞外基質(zhì)的組建中起作用。在細胞表面時，植物凝集素可充當參與選擇性的細胞間粘附和細胞遷移、循環(huán)糖蛋白的識別以及細胞-細胞和細胞-基質(zhì)相互作用調(diào)節(jié)的受治療者。半乳凝集素為具有相關(guān)氨基酸序列的β-半乳糖苷結(jié)合的植物凝集素家族的成員。半乳凝集素和植物凝集素已是許多實驗性試劑(單克隆抗體、單糖和一些多糖，如果膠)的靶目標，其推測在癌細胞表面上與之相互作用。一些這些試劑的使用已顯示導(dǎo)致腫瘤細胞集落發(fā)展的抑制。
不同于許多已知的多糖，由于其相當簡單的和相對規(guī)則的結(jié)構(gòu)，本發(fā)明的半乳甘露聚糖可被清楚地鑒定和表征。其暴露的半乳糖殘基可很容易地和生物學(xué)靶目標相互作用，如植物凝集素和半乳凝集素，因此調(diào)節(jié)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)、細胞間相互作用或其它功能。其由此可阻斷半乳凝集素(或其它的受治療者)的作用，從而與其特異性的(或非特異性的)配體競爭。當與5-FU結(jié)合和給藥時，本發(fā)明的半乳甘露聚糖提高了結(jié)腸直腸癌動物模型中5-FU的抗腫瘤作用，雖然明確的機制還有待確定。
在過去40年中，5-氟尿嘧啶(5-FU)已成為在轉(zhuǎn)移性結(jié)腸直腸癌的治療中單獨或與其它藥劑結(jié)合使用的標準首要藥劑。對多種可溶性半乳甘露聚糖寡聚物初步的動物研究已顯示對5-FU和具有1∶7甘露糖與半乳糖之比的半乳甘露聚糖聯(lián)合治療的可望好轉(zhuǎn)的響應(yīng)。
進行了三項非臨床藥理學(xué)研究以評估本發(fā)明的半乳甘露聚糖在攜帶腫瘤的小鼠中單獨或與5-FU結(jié)合的作用。來自植入了人結(jié)腸瘤COLO205的無胸腺MCr-nu小鼠中兩個分開實驗的結(jié)果表明本發(fā)明的半乳甘露聚糖提高了5-FU的抗腫瘤作用。
實施例3當抗腫瘤藥物5-FU在半乳甘露聚糖存在下給藥時腫瘤生長更大的降低該研究中，在無胸腺MCr-nu小鼠中利用人結(jié)腸瘤COLO 205表明5-FU的靜脈注射顯著降低了腫瘤生長。該研究的結(jié)果概括在圖7中。然而，當120mg/kg/天(360mg/m2)的本發(fā)明半乳甘露聚糖和上述劑量的5-FU聯(lián)合給藥時，腫瘤生長在腫瘤平均大小和生長速率上進一步降低。對比對照(未治療的)動物的12.5天，達到四倍腫瘤重量所需的時間從單獨5-FU的23.5天增加到本發(fā)明半乳甘露聚糖/5-FU聯(lián)合的56.0天。該研究的結(jié)果概括在圖8中。這兩項研究如下進行。
來自瓜爾膠豆的半乳甘露聚糖以120mg/kg/一劑(360mg/m2/一劑)每四日靜脈內(nèi)(i.v.)給藥一次，總共三次注射(q4d×3)，或作為與5-FU一起的一次注射以同樣的q4d×3治療方案，以120mg/kg/一劑的GM和75mg/kg/一劑(225mg/m2/一劑)的5-FU的劑量共同給藥。5-FU以同樣的q4d×3治療方案以75mg/kg/一劑(225mg/m2/一劑)的劑量單獨i.v.給藥。5-FU以3.75mg/mL的濃度，pH9.2配制于治療當天新鮮的鹽水中。在GM和5-FU共同給藥的組中，GM粉劑溶于5-FU溶液中以達到6mg/mL的GM濃度和3.75mg/mL的5-FU濃度。單獨的化合物和其混合物都根據(jù)準確的體重以0.2mL/10g體重的注射體積給藥。
總共有四組，每組10只s.c.-植入了COLO 205人結(jié)腸腫瘤異種移植物的動物。各組在腫瘤植入后第13天以q4d×3的給藥方案如下接受治療1)鹽水(NaCl，0.9％)、2)5-FU(75mg/kg/一劑)、3)GM(120mg/kg/一劑)、4)5-FU(75mg/kg/一劑)+GM(120mg/kg/一劑)。
對照未治療的腫瘤在所有小鼠中生長良好，達到四倍腫瘤體積的中值等于12.5天。該研究56天后沒有腫瘤的退化，并且事實上沒有腫瘤的減小。中值腫瘤體積從治療起始時(僅用鹽水的情況下)的111mm3增大至5-8周后的2058mm3。平均存活時間為14.2天。
5-FU 75mg/kg/一劑的劑量(即，超過8天的225mg/kg總劑量)超過了最大耐受劑量并且兩周內(nèi)十只小鼠的三只產(chǎn)生了治療-相關(guān)的死亡。治療引起四倍腫瘤體積的中值從12.5至23.7天的延遲。此外，該研究的56天后沒有腫瘤的退化；然而，觀察到兩個相對小的腫瘤，其從治療起始時每個75mm3長至126mm3并且在研究結(jié)束時為567mm3。中值腫瘤體積從治療起始的101mm3增加至該研究56天后的2254mm3。平均存活時間從14.2天(對照，未治療的動物)轉(zhuǎn)變至23.7天。
以120mg/kg/一劑的劑量以q4d×3的日程單獨給藥的GM得到很好的耐受。沒有觀察到死亡或體重下降。達到四倍腫瘤體積的中值為15.5天，其比未治療動物的值(12.5天)稍微長些。此外，該研究的56天后沒有腫瘤的退化；然而，觀察到兩個相對小的腫瘤(與中值腫瘤體積相比)，其從治療起始時的100mm3和126mm3分別長至研究結(jié)束時的270mm3和729m3。中值腫瘤體積從治療起始時的100mm3增加至該研究56天后的1813mm3，其比未治療動物的2058mm3以及5-FU(75mg/kg/一劑)-治療的動物的2254mm3明顯更小。平均存活時間從14.2天(對照，未治療的動物)延長至19.2天。
GM(120mg/kg/一劑)和5-FU(75mg/kg/一劑)以q4d×3日程的共同給藥產(chǎn)生了顯著的效果。其引起四倍腫瘤體積，從未治療動物(對照)的12.5天以及單獨的5-FU和單獨的GM各自的23.7和15.5天至其聯(lián)合的56.0天的明顯延遲。該研究結(jié)束時有一個腫瘤完全消失。該腫瘤經(jīng)歷最初的75mm3至首次注射后第三天的126mm3至第二和第三次注射后的144mm3，以及該研究兩周后，減小至勉強可檢測的，并且隨后完全消失。另兩個腫瘤大小相對較小，其在該研究結(jié)束時小于對照值的20％?？偟恼f來，中值腫瘤體積從治療起始時的111mm3增加至該研究56天后的僅379mm3，一個明顯小于未治療的動物或用5-FU單獨治療的動物的值。平均存活時間從14.2天(對照，未治療的動物)和23.7天(5-FU治療)增加至聯(lián)合治療的44.2天。
實施例4半乳甘露聚糖/5-FU與亞葉酸的相容性小鼠中利用COLO 205腫瘤的第二項研究評估了研究的半乳甘露聚糖/5-FU與亞葉酸(口服給予，25mg/kg/一劑)的相容性以及半乳甘露聚糖從6至600mg/kg/天(或18至1800mg/m2)的劑量逐步上升。5-FU+半乳甘露聚糖(分別為48mg/kg和120mg/kg)的組合對平均腫瘤大小和達到四倍腫瘤重量所需的時間具有最佳的抗腫瘤響應(yīng)，優(yōu)于單獨的5-FU或5-FU+亞葉酸組合。
與實施例3中所述研究的主要差異為(a)半乳甘露聚糖來自另一種來源，具有不同大小(分子量)和不同的Man/Gal比，(b)進行四次連續(xù)的注射，而不是三次，(c)所測試半乳甘露聚糖有四個劑量，而不是一個，(d)5-FU以48mg/kg/一劑，而不是如第一項研究中的75mg/kg/一劑給藥(i.v.)，以及(e)在功效和毒性方面比較半乳甘露聚糖(i.v.注射)與亞葉酸(口服管飼法，5-FU后兩小時給藥)。來自瓜爾膠豆的半乳甘露聚糖以120mg/kg/一劑(360mg/m2/一劑)的劑量每四日靜脈內(nèi)(i.v.)給藥一次，總共四次注射(q4d×4)，或作為與5-FU一起的一次注射以同樣的q4d×4治療方案，以6、30、120和600mg/kg/一劑(分別為18、90、360和1800mg/m2/一劑)的GM和48mg/kg/一劑(144mg/m2/一劑)的5-FU的劑量共同給藥。5-FU以同樣的q4d×4治療方案以48mg/kg/一劑的劑量單獨i.v.給藥。5-FU以4.8mg/mL的濃度，在pH9.2下配制于治療每天新鮮的鹽水中。在GM和5-FU共同給藥的組中，GM粉劑溶于5-FU溶液中以達到0.6、3.0、12和60mg/mL的GM濃度和4.8mg/mL的5-FU濃度。亞葉酸粉劑(臨床制劑，用于注射的亞葉酸鈣)與注射用水重構(gòu)以達到10mg/mL的濃度。在治療的每天，原液用注射用水稀釋以達到2.5mg/mL的濃度。5-FU和GM及其彼此的混合物和亞葉酸根據(jù)準確的體重以0.1mL/10g體重的注射或p.o.體積給藥。
另兩個組合-治療組也包含在該研究中。一組小鼠用5-FU(48mg/kg/一劑，i.v.，q4d×4)治療，隨后為亞葉酸以25mg/kg/一劑的劑量在5-FU后兩小時口服管飼法給予(p.o.)的給藥。另兩組小鼠用5-FU聯(lián)合半乳甘露聚糖(分別為48mg/kg/一劑和120mg/kg/一劑，i.v.，q4d×4)治療，隨后為亞葉酸以25mg/kg/一劑的劑量在5-FU加半乳甘露聚糖后兩小時p.o.給藥的治療。
總共有九個組，每組10只s.c.-植入了COLO 205人結(jié)腸腫瘤異種移植物的動物。各組在腫瘤植入后第14天以q4d×3的給藥方案如下接受治療1)鹽水(NaCl，0.9％)、2)5-FU(48mg/kg/一劑)、3)GM(120mg/kg/一劑)、4)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(6mgkg/一劑)、5)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(30mg/kg/一劑)、(6)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(120mg/kg/一劑)、(7)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(600mg/kg/一劑)、(8)5-FU(48mg/kg/一劑)+亞葉酸(口服，25mg/kg/一劑)和(9)5-FU(48mg/kg/一劑)+亞葉酸(口服，25mg/kg/一劑)+GM(120mg/kg/一劑)。引入最后兩組以比較亞葉酸與半乳甘露聚糖的效果。
該研究中沒有小鼠死亡。如同在實施例3中所述的研究中，所有小鼠中對照的未治療腫瘤生長良好。達到四倍腫瘤體積的中值為7.2天。該研究13天后沒有腫瘤的退化或減小。中值腫瘤體積從治療起始時(僅用鹽水的情況下)的162mm3增大至13天后的1288mm3。
5-FU 48mg/kg/一劑的劑量(即，在12天內(nèi)192mg/kg的總劑量)得到很好的耐受并且產(chǎn)生了達到四倍腫瘤體積的中值的少許生長延緩，從7.2天增加至8.7天。治療13天后，相比腫瘤大小的中值，10只小鼠組中兩個腫瘤明顯(三倍或更多)較小，分別從治療起始的100和163mm3長至研究結(jié)束時的270mm3和138mm3。腫瘤體積的中值從治療起始的172mm3增加至該研究13天后的800mm3，小于1288mm3的對照值。
按照q4d×4的給藥方案以120mg/kg/一劑的劑量單獨給藥的GM沒有延緩生長(相比于對照組中的7.2天，達到四倍腫瘤體積的中值為6.9天)。該研究13天后沒有出現(xiàn)腫瘤的退化，并且沒有觀察到相對小的腫瘤(相比于中值腫瘤體積)。中值腫瘤體積從治療起始時的157mm3增加至1152mm3，一個基本上等于未治療動物的值(1288mm3)。
5-FU(48mg/kg/一劑)和GM(6、30、120和600mg/kg/一劑)以q4d×4給藥方案的共同給藥在所有所測試劑量都得到很好的耐受。其引起四倍腫瘤體積，從未治療動物(對照)的7.2天以及單獨的5-FU和單獨的GM各自的8.7和6.9天至分別14.8、13.5、16.5和16.2天的明顯延緩。最佳的結(jié)果獲自5-FU和120mg/kg/一劑半乳甘露聚糖的組合，相比于5-FU單獨治療的800mm3，其在第13天，治療的最后一天產(chǎn)生540mm3的中值腫瘤體積。此外，5-FU+GM 120mg/kg/一劑的達到四倍腫瘤體積的中值天數(shù)幾乎兩倍于單獨的5-FU。
亞葉酸存在下用5-FU的治療對藥物的功效沒有增加任何作用。達到四倍腫瘤重量的中值天數(shù)甚至從8.7天降至8.2天，并且腫瘤重量的中值在治療起始的第13天稍有降低(從800mg至775mg)，但是均值明顯提高(從734mg至969mg)。半乳甘露聚糖120mg/kg/一劑加至5-FU和亞葉酸的組合僅稍微改善了情況，將達到四倍腫瘤重量的中值天數(shù)回升至8.7天，和將在第13天腫瘤重量的中值從800mg(5-FU)和775mg(5-FU/亞葉酸)稍微降低至725mg，以及均值分別從734mg和969mg降低至706mg。
實施例5不同劑量5-FU和半乳甘露聚糖組合的抗腫瘤功效研究NU/NU-nuBR裸鼠中的第二個人結(jié)腸腫瘤，HT-29來評估以48mg/kg/一劑的5-FU、以30和120mg/kg/一劑的半乳甘露聚糖的組合每4天I.V.給予，總共四次注射的抗腫瘤功效。所有組口服接受25mg/kg/一劑的亞葉酸。在第33天，對于5-FU+亞葉酸+半乳甘露聚糖120mg/kg，平均腫瘤體積最小。這些發(fā)現(xiàn)證實半乳甘露聚糖提高了在亞葉酸存在下5-FU的抗腫瘤活性。該研究結(jié)果概括在圖10中。
所有的三項功效研究結(jié)果一起概括在圖11中用于比較。
與第二項研究的主要差異為(a)使用另一種腫瘤(HT-29)，和(b)亞葉酸加至該治療療法中。GM以30和120mg/kg/一劑的劑量作為一次注射與5-FU(48mg/kg/一劑)每四天一次總共四次注射(q4d×4)通過尾部靜脈注射i.v.共同給藥，隨后亞葉酸在注射后2小時以25mg/kg/一劑的劑量以同樣的q4d×4的給藥方案口服管飼法(p.o.)給予而給藥。GM或5-FU還以120mg/kg/一劑(GM)或48mg/kg/一劑(5-FU)的劑量以相同的q4dx×4治療方案給藥，隨后為2小時后25mg/kg亞葉酸的給藥。
GM以12mg/mL的濃度配制于治療每天新鮮的0.9％無菌鹽水中。亞葉酸粉劑(臨床制劑，用于注射的亞葉酸鈣)與0.9％的無菌鹽水重構(gòu)以達到2.5mg/mL的濃度。5-FU以4.80mg/mL的濃度，在pH9.2下配制于治療每天新鮮的0.9％無菌鹽水中。在GM和5-FU共同給藥的組中，GM粉劑和5-FU溶于0.9％新鮮的鹽水中以達到3.0mg/mL或12mg/mL的GM濃度和4.80mg/mL的5-FU濃度。單一的化合物和其組合物都根據(jù)準確的體重以0.1mL/10g體重的注射體積給藥。
總共有五個組，每組10只s.c.-植入了HT-29人結(jié)腸癌異種移植物的動物。各組在腫瘤植入后第7天以q4d×4的給藥方案如下接受治療1)鹽水(NaCl，0.9％)、2)GM(120mg/kg/一劑)+亞葉酸(p.o.，25mg/kg/一劑)、3)5-FU(48mg/kg/一劑)+亞葉酸(p.o.，25mg/kg/一劑)、4)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(30mg/kg/一劑)+亞葉酸(p.o.，25mg/kg/一劑)、和5)5-FU(48mg/kg/一劑)+GM(120mg/kg/一劑)+亞葉酸(p.o.，25mg/kg/一劑)。
如在之前的兩項研究中，對照(未治療的)腫瘤在所有小鼠中生長良好，具有四倍腫瘤體積13.3的中值。中值腫瘤體積從治療起始時(腫瘤植入后第7天)的196mm3增大至26天后的1318mm3。
48mg/kg/一劑的5-FU(治療12天的總劑量192mg/kg)和如上所述亞葉酸口服一起的劑量在耐受劑量的最大值之內(nèi)，三周內(nèi)在10只小鼠的組中沒有產(chǎn)生治療-相關(guān)的死亡。治療引起四倍腫瘤體積的2天的延遲(從13.3至15.3天)。中值腫瘤體積從治療起始時的179mm3增大至研究第26天的1120mm3。5-FU與GM(30mg/kg/一劑)，以及和如上所述口服劑量的亞葉酸共同給藥進一步引起腫瘤生長的延緩，尤其在研究的前一半中四倍腫瘤從無GM的15.3天至具有GM的18.1天。
在和5-FU以q4d×4給藥方案以及如上所述亞葉酸口服一起共同給藥中提高GM劑量至120mg/kg/一劑再次產(chǎn)生四倍腫瘤體積的明顯延緩從未治療對照動物的13.3天和5-FU/亞葉酸-治療動物的15.3天至用所有三種藥物治療動物的23.5天。此外，當所有三種藥物組合使用時，1個腫瘤在治療起始后4周完全消失，另外2個腫瘤在研究結(jié)束時具有相對小的大小(269和352mm3)，而另外的3個腫瘤實際上穩(wěn)定在1000mm3以下的體積?？偟恼f來，中值腫瘤體積從治療起始時的176mm3增加至研究第26天的僅729mm3(顯著小于未治療動物的1318mm3，以及5-FU加亞葉酸-治療動物的1120mm3)。
實施例6生物分布研究在具有腫瘤和不具有腫瘤的小鼠中研究了3H-半乳甘露聚糖的生物分布。該研究中的主要發(fā)現(xiàn)表明氚化半乳甘露聚糖自由結(jié)合至肝臟、腎、肺、腫瘤和血漿。在6至60mg/kg(18至180mg/m2)的濃度下沒有出現(xiàn)結(jié)合的飽和。3H-半乳甘露聚糖的組織分布與注射劑量無關(guān)而當5-FU(342mg/m2)與3H-半乳甘露聚糖聯(lián)合時也沒有改變其模式。在不同的組中3H半乳甘露聚糖從血漿、腎、肺和腫瘤中的除去是快速的，在6小時時檢測到平均大約50％的一小時的放射性，在具有腫瘤的小鼠中除外，其中用6或60mg/kg 3H-半乳甘露聚糖在有或沒有5-FU治療的小鼠的腫瘤樣品中6小時后放射性仍然為平均大約72％。3H-半乳甘露聚糖從肝臟的除去比在其它組織中更緩慢，而按平均數(shù)計算，注射后一小時檢測到的超過50％的放射性在24小時時仍然存在。
雄性NCr-nu無胸腺裸鼠(Charles Rivers Laboratories，Raleigh，NC)如上述被馴化和圈養(yǎng)。第一組動物(總共18只小鼠)為不攜帶腫瘤的小鼠。第二組的18只小鼠如下攜帶腫瘤。來自COLO205人結(jié)腸腫瘤體內(nèi)傳代的三十至四十毫克碎片皮下(s.c.)植入如上所述的小鼠中，并且使之生長。腫瘤在治療開始前允許達到245-392毫克重量。足夠數(shù)目的小鼠被植入以便能夠為治療起始當天的試驗選擇重量范圍盡可能窄的腫瘤。將那些具有適當大小范圍腫瘤的所選動物分成不同的治療組。
來自三棘的GM的氚化如下進行。12.8mg GM溶于2.0mL水中并且在Pd/BaSO4催化劑(120mg，完全不溶于水)存在時暴露于25居里的氚氣體。一小時后移去氣體供給，過濾掉催化劑，并且GM的水溶液反復(fù)蒸發(fā)至干(4-倍，加水)，直至探測不到不穩(wěn)定的氚。標記的GM的總產(chǎn)量為3.8mCi，比放射性為300μCi/mg。
分成18個組的所有36只小鼠，在同一天給予冷的或氚化的GM(6或60mg/kg)或GM(60mg/kg，冷的或氚化的)和5-FU(114mg/kg)組合的單次靜脈注射。未-標記的GM配制在鹽水中，而氚化的GM添加至該溶液以使每只動物接受10μCi的放射性。5-FU溶于包含GM的溶液中(以6mg/mL的濃度)。所有規(guī)定劑量的溶液(每種100μL)一式兩份計數(shù)。
每組2只小鼠在注射后1、6和24小時放血，并且制備血漿。動物隨后處死；收集肝臟、腎、肺和腫瘤(來自具有腫瘤的動物)，稱重并快速-冷凍用于進一步分析。
稱重后，肝臟溶于10mL的Soluene 350(Packard Instruments，Downers Grove，IL)并且先在50℃孵育4小時，然后在室溫下孵育至組織溶解。一升所得溶液作為單個樣品在閃爍計數(shù)器中計數(shù)?；诮M織重量和樣品體積，計算每克組織氚化GM的μCi數(shù)量。
腎以同樣的方式處理，但是溶于2mL Soluene中。組織在室溫下溶解后，加入15mL Safety Solve閃爍液體(Research ProductsInternational，Mount Prospect，IL)并且樣品孵育過夜。5mL所得溶液稀釋于15mL Safety Solve中并且作為單個樣品在閃爍計數(shù)器中計數(shù)。肺以同樣的方式處理，但是溶于1mL Soluene中。血漿樣品(每個50μL)直接置于Safety Solve中并且作為單個樣品計數(shù)。
稱重后，腫瘤溶于1或2毫升Soluene中并且在50℃孵育三天直至溶解。隨后加入十五毫升Safety Solve并且樣品在室溫下孵育過夜。隨后加入2毫升水并且樣品作為單個樣品在閃爍計數(shù)器中計數(shù)。
將雄性NCr-nu無胸腺裸鼠分成兩個主要組，每組18只動物。第一組的動物為不具有腫瘤的小鼠。第二組的如下攜帶腫瘤。來自COLO205人結(jié)腸腫瘤體內(nèi)傳代的三十至四十毫克碎片皮下(s.c.)植入如上所述的小鼠中，并且使之生長。腫瘤在治療開始前允許達到245-392毫克重量。足夠數(shù)目的小鼠被植入以便能夠為治療起始當天的試驗選擇重量范圍盡可能窄的腫瘤。將那些具有適當大小范圍腫瘤的所選動物分成不同的治療組。
分成18個組的所有36只小鼠，在同一天給予冷的或氚化的GM(6或60mg/kg)或GM(60mg/kg，冷的或氚化的)和5-FU(114mg/kg)組合的單次靜脈注射。GM的氚化(具有300μCi/mg的所得比活性)如上所述。在鹽水中配制冷的GM，并且氚化的GM添加至該溶液以使每只動物接受10μCi的放射性。5-FU溶于包含GM的溶液中(以6mg/mL的濃度)。
每組2只小鼠在注射后1、6和24小時放血，并且制備血漿。如上所述，動物隨后處死；收集肝臟、腎、肺和腫瘤(來自具有腫瘤的動物)，稱重并快速-冷凍用于進一步分析。
觀察到半乳甘露聚糖自由結(jié)合至肝臟、腎、肺、腫瘤和血漿，并且沒有達到結(jié)合的限度，例如沒有達到6mg/kg和60mg/kg劑量之間結(jié)合的飽和。當6mg/kg(具有1.0的相對放射性)和60mg/kg(具有0.1的相對放射性)劑量的半乳甘露聚糖給藥時，結(jié)合的放射性半乳甘露聚糖的量是相同的；也就是說，結(jié)合的半乳甘露聚糖的量對于10-倍高的劑量提高了10倍。
對于6和60mg/kg的GM，放射性在整個組織以及每重量或體積(在血漿中)中的分布實際上相同，因此匯集相應(yīng)的數(shù)據(jù)。此外，對于具有腫瘤和不具有腫瘤的動物(腫瘤的除外，其明顯只在具有腫瘤動物中存在)，放射性在整個組織以及每重量或體積(在血漿中)中的分布實際上相同，因此匯集相應(yīng)的數(shù)據(jù)。總的說來，數(shù)據(jù)為8只動物的平均，而對于腫瘤的數(shù)據(jù)，為4只動物的平均。
該研究的主要結(jié)果如下5-FU存在時腫瘤中GM的量提高，并且在GM清除期間停止提高；和5-FU存在時肝臟中GM的量降低，并且在GM清除期間停止降低。
也就是說，當遞送到腫瘤中時，5-FU和GM協(xié)同作用。此可以解釋為什么GM和5-FU的組合提高了針對小鼠所攜帶的COLO 205人結(jié)腸腫瘤藥物的功效(參見上面)。
同時，當遞送到肝臟中時，5-FU和GM作為拮抗劑起作用(顯然，對肝臟中相同結(jié)合部位相互競爭)。
實施例7-9急性毒理學(xué)研究本發(fā)明半乳甘露聚糖急性毒理學(xué)研究在小鼠、大鼠和狗中進行而亞慢性的毒理學(xué)研究在大鼠和狗中進行。以下為這些研究發(fā)現(xiàn)的概要1500mg/m2(336mg/m2)半乳甘露聚糖或417/222mg/kg(1251/666mg/m2)5-FU/半乳甘露聚糖的單一IV劑量在小鼠中(n＝5/組)沒有產(chǎn)生毒性、死亡或體重下降的臨床病征，而409mg/kg(1227mg/m2)5-FU在13-16天后導(dǎo)致3/5小鼠死亡。
大鼠中(n＝5/性別/組)，140mg/kg(840mg/m2)5-FU、72mg/kg(432mg/m2)半乳甘露聚糖或140/72mg/kg其組合的單一IV劑量在任何組中沒有產(chǎn)生死亡。對照用5-FU單獨注射的那些，用其組合注射的大鼠中，在體重、飼料消耗和血液病學(xué)方面的毒性變化具有稍微更低的嚴重程度。單獨的半乳甘露聚糖沒有產(chǎn)生顯著的副作用。
28.5mg/kg(570mg/m2)5-FU、15mg/kg(300mg/m2)半乳甘露聚糖或28.5/15mg/kg 5-FU/半乳甘露聚糖的單一IV注射導(dǎo)致用5-FU注射的2/2只狗、用其組合注射的2/4只狗和單獨接受半乳甘露聚糖的0/2只狗的死亡。存活的狗在21天的研究期間仍然是臨床上正常的并且在體重、飼料消耗、ECG示蹤、臨床病理學(xué)或總體組織變化方面沒有治療相關(guān)的改變。
實施例7亞慢性的大鼠研究在用研究等級的未過濾半乳甘露聚糖進行的28天的亞慢性的大鼠研究中，10mL/kg鹽水、48mg/kg(288mg/m2)5-FU、48mg/kg(288mg/m2)半乳甘露聚糖或24/13mg/kg(144/78mg/m2)、36/19mg/kg(216/114mg/m2)或48/25mg/kg(288/150mg/m2)5-FU/半乳甘露聚糖組合的單一每日IV劑量以1mL/min的速度給予4個連續(xù)日。4種劑量的5-FU引起死亡(用48mg/kg 5-FU的7/8；分別用24/13、36/19和48/25mg/kg 5-FU/半乳甘露聚糖的1/8、2/8和7/8)。
在接受5-FU的所有組中觀察到脫發(fā)、體重和飼料消耗嚴重的瞬時降低以及紅細胞參數(shù)和血小板的瞬時下降。不定期死亡動物中的病變主要是由于5-FU對造血和淋巴系統(tǒng)的預(yù)期作用，其伴隨繼發(fā)的細菌侵害和由于對凝血影響的彌漫性出血。在研究第5天的尸檢時，病變包括明顯的骨髓細胞減少、胸腺的淋巴退化和小腸不同節(jié)段中絨毛的退化(所有的都認為是由于預(yù)期的5-FU的作用)。除了肺中輕微的肉芽腫病灶，研究的第29天在處死的動物中分辨了治療相關(guān)的組織病理學(xué)病變(第2組和第6組中僅一只雌性存活)。
實施例8重復(fù)劑量的大鼠研究利用包含48或96mg/kg(288或576mg/m2)過濾的GMP級半乳甘露聚糖材料在大鼠中進行直至52天恢復(fù)期的重復(fù)劑量I.V.的研究。每種性別的5只動物在第5、28和56天處死。核查的報告草案表明，第5天處死的一只大鼠肺中的組織學(xué)發(fā)現(xiàn)提示半乳甘露聚糖以96mg/kg的靜脈內(nèi)給藥與4個連續(xù)日給藥并且在第5天處死的大鼠肺痕量水平的肉芽腫炎癥的低發(fā)病率相關(guān)。以96mg/kg(大于第一項研究中所用最高劑量2倍的劑量)的半乳甘露聚糖給予并且在第28天處死的雄性大鼠在肺中具有痕量水平間質(zhì)性炎癥提高的發(fā)病率，而沒有肉芽腫炎癥的組織學(xué)證據(jù)。以96mg/kg的半乳甘露聚糖給予并且在第56天處死的雄性大鼠具有痕量水平肺泡巨噬細胞累積的提高的發(fā)病率，但再一次沒有肉芽腫炎癥的組織學(xué)證據(jù)。
本發(fā)明的半乳甘露聚糖僅對用GMP半乳甘露聚糖臨床溶液以48mg/kg劑量注射的、具有肉芽腫炎癥的1/30大鼠產(chǎn)生最低的組織學(xué)影響。用GMP半乳甘露聚糖臨床溶液以96mg/kg劑量注射的30只大鼠均未受影響。由此推斷半乳甘露聚糖臨床溶液，至多15mg/kg(555mg/m2；9mg/mL)的劑量，對于人的使用是安全的，并且對健康不會造成過度的風險。
實施例9犬科狗的研究在28天狗的研究中，鹽水、6mg/kg(120mg/m2)5-FU和500mg/m2(240mg/m2)半乳甘露聚糖或4/2mg/kg(80/40mg/m2)、6/3.2mg/kg(120/64mg/m2)或6/6mg/kg(120/120mg/m2)5-FU/半乳甘露聚糖的單一每日的IV劑量對六組小獵兔犬注射4個連續(xù)日。在研究的第2和第5天之間48只狗的13只發(fā)生死亡(5只瀕死的被處死而8只發(fā)現(xiàn)已死)(分別為5-FU的4/4雄性；4/2mg/kg 5-FU/半乳甘露聚糖組的3/4雄性；6/3.2和6/6mg/kg 5-FU/半乳甘露聚糖組的2/4雄性和1/4雌性)。
5-FU組中的副作用包括共濟失調(diào)、虛脫、叫喚、驚厥、顫動、對接觸的過敏、攻擊行為(僅在以6/3.25-FU/半乳甘露聚糖給予的三次劑量組中產(chǎn)生)、嘔吐、流涎、拉稀和降低的紅細胞參數(shù)和血小板計數(shù)。不定期死亡的動物中總體/顯微鏡可見的改變包括一種或多種器官的充血(提示心血管功能失調(diào))和胃腸道粘膜層的退化。在第5天的尸檢時，治療相關(guān)的組織學(xué)改變主要限于5-FU的雌性。在第29天的尸檢時，存活者中沒有顯著的改變。500mg/m2的半乳甘露聚糖沒有產(chǎn)生可觀察到的副作用。
實施例10致突變性研究進行致突變性研究并且包括2個Ames細菌回復(fù)突變測定法，其中本發(fā)明的半乳甘露聚糖通過在第一項研究中自身或在第二項研究中和5-FU聯(lián)合而評估。兩項研究中的測試物在利用鼠傷寒沙門氏菌菌株TA97a、TA98、TA100、TA1535和大腸桿菌菌株WP2uvrA(pKM101)的細菌測定法中，在外源代謝活化系統(tǒng)存在和缺乏的情況下評估。兩項研究的任一項中未檢測到致突變活性的證據(jù)。
總之，迄今為止進行的體內(nèi)藥理學(xué)研究表明本發(fā)明的半乳甘露聚糖增強了5-FU的抗腫瘤作用。細菌回復(fù)突變測定法中，無論是單獨或與5-FU聯(lián)合，半乳甘露聚糖并不是致突變的。小鼠、大鼠和狗中的毒性研究已經(jīng)表明半乳甘露聚糖具有非常低可能性的毒性以及改善某些5-FU毒副作用的能力。
112mg/kg(336mg/m2)(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)或417/222mg/kg(1251/666mg/m2)5-FU/(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)的單一IV劑量沒有產(chǎn)生毒性、死亡或體重降低的臨床癥征，而409mg/kg(1227mg/m2)5-FU在13-16天后導(dǎo)致3/5小鼠死亡。
大鼠中，140mg/kg(840mg/m2)5-FU、72mg/kg(432mg/m2)(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)或140/72mg/kg其組合的單一IV劑量在任何組中沒有產(chǎn)生死亡。對照用5-FU單獨注射的那些，用其組合注射的大鼠中，在體重、飼料消耗和血液病學(xué)方面的毒性變化具有稍微更低的嚴重程度。單獨的(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)沒有產(chǎn)生顯著的副作用。
實施例11半乳甘露聚糖對化療蛋白質(zhì)的作用體外研究中已顯示細胞因子和趨化因子通過免疫應(yīng)答提高癌細胞對破壞的敏感性。(細胞因子和趨化因子為本領(lǐng)域技術(shù)人員熟知的并且可在任何現(xiàn)代生物學(xué)/醫(yī)學(xué)課本中找到這樣的目錄)。在少數(shù)情況中，已顯示細胞因子直接抑制腫瘤細胞的生長。細胞因子作為免疫系統(tǒng)的信使通過對淋巴細胞和其它免疫細胞發(fā)揮各種作用而調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答的強度和持續(xù)時間來行使功能。細胞因子還控制細胞的增殖和分化。在美國，食品與藥物管理局(FDA)已經(jīng)批準了兩種細胞因子-IL-2和α-干擾素用于癌癥治療的使用。
已證實IL-2具有針對腎細胞疾病、黑素瘤、淋巴瘤和白血病的生物活性。干擾素對這些癌癥以及卡波西肉瘤、慢性髓細胞白血病和毛細胞白血病是有效的。
然而，由于細胞因子治療造成的有害副作用，存在在血液中的遞送問題和穩(wěn)定性。聚乙二醇化(Pegilation)已用于稍微提高干擾素的藥物有效性，但是仍認為是有毒的。
半乳甘露聚糖對化療藥物的作用還在用這些蛋白質(zhì)化療劑，例如細胞因子的治療中顯示。在下面研究中，單獨的IL-12(10μg/kg)和IL-12(40mg/kg)的組合或與半乳甘露聚糖(120mg/kg)的聯(lián)合用于治療植入了人結(jié)腸腫瘤HT-29的小鼠模型。當腫瘤大小達到110mg時開始IV注射并且以4天的間隔重復(fù)4次，最后一次注射后一星期(第26天)的結(jié)果顯示已經(jīng)實現(xiàn)對腫瘤生長抑制的明顯改善。
權(quán)利要求
1.一種組合物，包含一種或多種多糖和一種或多種治療劑，其中所述組合物增強治療功效并且降低與所述治療相關(guān)的毒性。
2.權(quán)利要求1的組合物，其中所述多糖為支鏈的或直鏈的。
3.權(quán)利要求1的組合物，其中所述多糖選自半乳甘露聚糖、阿拉伯半乳聚糖、鼠李糖半乳糖醛酸聚糖和其組合。
4.權(quán)利要求3的組合物，其中所述半乳甘露聚糖為β-1，4-D-半乳甘露聚糖。
5.權(quán)利要求3的組合物，其中所述半乳甘露聚糖為(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)。
6.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)具有約2,000Da至600,000Da范圍的分子量。
7.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)具有約50,000Da至415,000Da范圍的分子量。
8.權(quán)利要求5的組合物，其中所述的(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)具有約4000Da至60,000Da范圍的分子量。
9.權(quán)利要求1的組合物，其中所述治療劑選自5-FU、5-FUdR、氨甲蝶呤、ara-C、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、羥基脲、長春花堿、長春新堿、去乙酰長春酰胺、二氯甲二乙胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮丙啶、甲基三聚氰胺、烷基磺酸鹽、亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲、鏈脲霉素、順氯氨鉑、氮烯唑胺、普魯芐肼、阿霉素、放線菌素、絲裂霉素C、plycamycin、環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、三胺硫膦、白血福恩、脫氫可的松、氫化強的松、氟羥脫氫皮醇、紫杉醇和其組合。
10.權(quán)利要求9的組合物，其中所述治療劑選自5-FU、5-FUdR、順氯氨鉑和其組合。
11.權(quán)利要求10的組合物，其中所述治療劑為5-FU。
12.權(quán)利要求1的組合物，進一步包括亞葉酸。
13.用于癌癥治療的方法，包括將有效量的在藥學(xué)可接受載體中具有(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一種化療劑的混合物給予需要其的患者。
14.權(quán)利要求13的方法，其中所述化療劑選自5-FU、5-FUdR、氨甲蝶呤、ara-C、6-巰基嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、羥基脲、長春花堿、長春新堿、去乙酰長春酰胺、二氯甲二乙胺、苯丙氨酸氮芥、苯丁酸氮芥、氮丙啶、甲基三聚氰胺、烷基磺酸鹽、亞硝脲氮芥、環(huán)己亞硝脲、鏈脲霉素、順氯氨鉑、氮烯唑胺、普魯芐肼、阿霉素、放線菌素、絲裂霉素C、plycamycin、環(huán)磷酰胺、苯丙氨酸氮芥、三胺硫膦、白血福恩、脫氫可的松、氫化強的松、氟羥脫氫皮醇、紫杉醇和其組合。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述化療劑選自5-FU、5-FUdR、順氯氨鉑和其組合。
16.權(quán)利要求13的方法，其中所述化療劑為5-FU。
17.權(quán)利要求13的方法，進一步包括亞葉酸。
18.權(quán)利要求13的方法，其中所述癌癥選自慢性白血病、乳癌、肉瘤、卵巢癌、直腸癌、咽喉癌、黑色素瘤、結(jié)腸癌、膀胱癌、肺癌、乳腺癌、胃腸癌、胃癌、前列腺癌、胰腺癌和卡波西肉瘤。
19.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有以適于降低所述患者所經(jīng)受毒性的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的所述化療劑。
20.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有以適于增強所述化療劑治療功效的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的所述化療劑。
21.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有以適于降低所述患者所經(jīng)受毒性和增強所述化療劑治療功效的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的所述化療劑。
22.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有適于降低所述患者中毒性的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的細胞因子和化療劑。
23.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有適于降低所述患者所經(jīng)受毒性的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的IL-2、IL-12、α-干擾素或三者以及所述化療劑。
24.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有適于增強所述化療劑功效的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的細胞因子以及所述化療劑。
25.權(quán)利要求13的方法，其中所述混合物具有適于增強所述化療劑功效的比例的一定量的所述(((1，4)-連接的β-D-吡喃甘露糖)17-((1，6)-連接的-β-D-吡喃半乳糖)10)12)和一定量的IL-2、IL-12、α-干擾素或三者以及所述化療劑。
全文摘要
此處公開了用于治療疾病例如癌癥的組合物和方法。組合物包括一種或多種多糖和一種或多種治療劑的混合物。該混合物可以任何已知的給藥方法給藥于需要其的患者。該治療劑，如果單獨給藥，會在患者中產(chǎn)生不良的副作用。多糖組分最小化或消除了這些副作用。此處所述的組合物以提高的治療效果和降低的毒性而起作用。
文檔編號A61K31/715GK1867252SQ200480030017
公開日2006年11月22日 申請日期2004年9月7日 優(yōu)先權(quán)日2003年9月8日
發(fā)明者E·佐默, D·普拉特 申請人:普羅醫(yī)藥公司