專利名稱：含巴羅沙星的凍干制劑及其用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，公開了含巴羅沙星的凍于制劑及其醫(yī)藥用途。
背景技術(shù)：
巴洛沙星化學(xué)名為1-環(huán)丙基-6-氟-1，4-二氫-8-甲氧基-7-(3甲氨基-1-哌啶基)-4-氧代-3-喹啉羧酸二水合物，為喹諾酮類抗菌藥物，結(jié)構(gòu)式如下 巴洛沙星首次記載于JP 122722/88。它是由日本Chugai和Novaritis公司開發(fā)的，于1994年完成III期臨床研究，1996年5月轉(zhuǎn)讓給韓國Choongwae Pharma公司繼續(xù)進行擴大的臨床研究，其片劑于2002年3月7日首次在韓國批準上市，商品名為Q-roxin。
巴洛沙星是非常有效的抗感染藥物，對革蘭氏陽性菌、革蘭氏陰性菌和厭氧菌具有廣譜抗菌活性，特別是對革蘭氏陽性菌的活性優(yōu)于目前上市的氧氟沙星和環(huán)丙沙星。此外，該藥對支原體、衣原體也是同類藥物中活性最強的。
由于巴羅沙星在水中溶解度小，僅為1∶3000，即飽和溶液的濃度僅為0.03％(W/V)。因此除了口服片劑目前沒有其他劑型上市，也未見報道，這在一定程度上限制了它的使用。對于眾多危重細菌感染患者，或因不能口服，或因病情危重，需要注射途徑給藥。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的主要目的是提供巴羅沙星的適合于注射途徑給藥的制劑，即巴羅沙星的凍干制劑。
本發(fā)明的另一個目的是所述制劑的應(yīng)用；本發(fā)明再一個目的是適合形成制劑的配方。
發(fā)明人經(jīng)過多次、反復(fù)的試驗，發(fā)現(xiàn)巴羅沙星在酸存在下，可以大幅度提高其在水中的溶解，這使巴羅沙星制備成注射劑成為可能。助溶較好的酸是鹽酸、硫酸、醋酸、乳酸、甲磺酸、枸椽酸、富馬酸、門冬氨酸等，用這些酸作助溶劑試驗，上述酸的用量，與巴洛沙星以摩爾數(shù)之比大于1，結(jié)果，巴洛沙星在水中的溶解度增加至1∶150-1∶5，即飽和溶液的濃度達0.7％-20％(W/V)。這極大地有利于注射制劑的制備，考慮到貯存穩(wěn)定性，本發(fā)明將巴羅沙星的溶液制劑進行凍干制備成凍干制劑。
本發(fā)明的具體方案是巴羅沙星的凍干制劑，其含有巴羅沙星和酸助溶劑，所述酸助溶劑是鹽酸、硫酸、乳酸、甲磺酸、枸櫞酸、富馬酸、門冬氨酸或它們的混合體系。
優(yōu)選的酸助溶劑是乳酸。
凍干制劑凍干前溶液中巴羅沙星的含量優(yōu)選2.0-8.0％(W/V)。
凍干前溶液中酸的濃度優(yōu)選0.4-4.0％(W/V)，更優(yōu)選0.8-3.0％(W/V)。
凍干制劑可進一步含有賦形劑，可以是藥學(xué)中常用的賦形劑。優(yōu)選的賦形劑是甘露醇或葡萄糖。
賦形劑的含量優(yōu)選0.5-10.0％(W/V)，更優(yōu)選的含量是2.0-5.0％(W/V)。所述含量指的是賦形劑在凍干前溶液中的含量。
如果需要，巴洛沙星水溶液中可加入一種或多種補充成份，例如用于調(diào)節(jié)pH的相應(yīng)酸或氫氧化鈉。
本發(fā)明的制備方法可用常用的凍干制劑的制備方法，在注射用水中加入酸，再加入巴羅沙星，充分溶解后，除菌過濾，灌裝于西林瓶中，冷凍干燥即得。制備得到的凍干制劑穩(wěn)定性好，水溶性好、溶解速度快。
臨床使用時，用數(shù)毫升注射用水將巴洛沙星凍干粉劑溶解，加到0.9％氯化鈉注射液或5％葡萄糖注射液中靜脈滴注。
制劑中巴羅沙星的含量可根據(jù)需要而定，可以制成每瓶中含100mg或200mg的巴羅沙星，或根據(jù)需要超過這個范圍。
本發(fā)明的制劑質(zhì)量穩(wěn)定，經(jīng)4500LX光照10天、60℃保溫10天，外觀色澤及分解產(chǎn)物均優(yōu)于液體制劑。
在將溶媒加入本發(fā)明的凍干制劑后，凍干物迅速溶解，溶解完全，溶液澄明度好。
巴羅沙星凍干制劑可用于治療人或動物細菌性感染，毒副作用低。
巴洛沙星凍干粉劑靜脈給藥的動物體內(nèi)抗菌活性測定結(jié)果對金黃色葡萄球菌MRSA、金黃色葡萄球菌敏感株、肺炎鏈球菌和溶血鏈球菌引起的小鼠全身性感染，其ED50分別為3.9202、1.2164、4.8760和4.0041mg/kg，明顯優(yōu)于對照品氧氟沙星注射液；對大腸桿菌、肺炎克雷伯茵、不動桿菌和福氏痢疾桿菌引起的小鼠全身性感染，其ED50分別為2.2729、4.3346、3.8482和2.1214mg/Kg，與對照品氧氟沙星注射液相當或稍遜。結(jié)果表明，巴洛沙星凍干粉劑靜脈注射給藥對G+菌的體內(nèi)抗菌活性明顯優(yōu)于氧氟沙星注射液。
小鼠耳腫脹試驗表明，巴洛沙星凍干粉劑靜脈注射劑量達80mg/kg時，未見光毒性作用產(chǎn)生。
本發(fā)明的巴洛沙星凍干粉劑安全，毒副作用小，對豚鼠全身致敏反應(yīng)；體外無溶血致凝集作用；家兔耳靜脈注射對血管及周圍組織無刺激作用，符合藥品安全要求。
以上試驗表明，巴洛沙星凍干制劑作為藥物安全、有效。
具體實施例方式
實施例1注射用水250ml，加入藥用乳酸9ml，再加入巴洛沙星20g，加熱使溶。用1-10乳酸調(diào)pH至3.5，加注射用水至30ml。在無菌條件下過濾除菌，濾液裝入10ml玻璃瓶中，每瓶3ml，經(jīng)冷凍干燥工藝制成凍干粉劑。每瓶含巴洛沙星0.2g。小瓶中的凍干粉劑作為本發(fā)明的試驗樣品貯存。
溶解性能試驗室溫條件下(15-25℃)，1小瓶中的凍干粉劑中加入1ml注射用水，輕微振搖5秒鐘，粉劑即可溶解成澄清溶液。巴洛沙星的濃度從凍干前的6.7％(W/V)增加至20.0％(W/V)；溶解速度也大大加快，方便臨床使用。
穩(wěn)定性試驗將凍干粉劑與凍干前溶液(3ml/瓶)進行對比試驗，貯存條件(A)于4500Lx光照10天；(B)于60℃保溫10天；(C)于室溫條件下避光3個月?？疾熘笜?；(1)樣品色澤。測試方法溶液樣品用注射用水稀釋至含巴洛沙星1％(W/V)的溶液，凍干粉劑樣品用注肘用水溶解成含巴洛沙星1％(W/V)的溶液，用分光光度計在450nm處測定吸收值。(2)降解產(chǎn)物。降解產(chǎn)物的量用高效液相色譜(HPLC)-歸一化法測定，十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，枸椽酸溶液(1000ml水+10.5g枸椽酸+5ml三乙胺)-乙腈(76∶24)為流動相，檢測波長233nm。結(jié)果如表1、表2所示。結(jié)果表明，凍干粉劑的穩(wěn)定性明顯好于溶液劑。
表1不同貯存條件對樣品色澤的影響(A值)

表2不同貯存條件對降解產(chǎn)物的影響(HPLC-歸-化法，％)

實施例2注射用水850ml，加入1N鹽酸50ml，再加入20g巴洛沙星和50g甘露醇，使溶。用0.1N鹽酸調(diào)節(jié)pH至3.5，加注射用水至1000ml，除菌，過濾，濾液裝入20ml玻璃瓶中，每瓶5ml，經(jīng)冷凍干燥工藝制成凍干粉針。每瓶含巴洛沙星0.1g。以下是對本發(fā)明的進一步的補充資料制劑處方及工藝的研究資料及文獻資料1.處方巴洛沙星(二水物)200.0g(195g，205g)枸 櫞 酸98.8g(95g，100g)注射用水至 2500ml制成1000瓶
2.3注射用巴洛沙星(0.2g)的處方篩選2.3.1巴洛沙星的溶解度溶劑名稱 溶解1g溶質(zhì)的溶劑量(ml) 溶解性水 3000 極微溶解0.1mol/L HCl 75略溶0.1mol/L NaOH 40略溶2.3.2用乳酸作增溶劑的試驗考慮到氧氟沙星、加替沙星等氟喹諾酮類藥物在制備注射劑時，均用乳酸作增溶劑(使其成鹽而增加溶解度)并調(diào)節(jié)pH，故我們首先對此進行了試驗。
巴洛沙星(二水物)的MW＝425.46；乳酸的MW＝90，含量為85.0～90.0％(g/g)，密度d＝1.20g/ml。故1000mg巴洛沙星(二水物)完全成鹽所需的乳酸量為0.208ml。與等摩爾的乳酸成鹽后，巴洛沙星(二水物)溶解試驗情況如下樣品A巴洛沙星1000mg+乳酸(1→10) 2.10ml+水至100ml；樣品B巴洛沙星1000mg+乳酸(1→10) 2.10ml+水至50ml；樣品C巴洛沙星1000mg+乳酸(1→10) 2.10ml+水至20ml；樣品D巴洛沙星1000mg+乳酸(1→10) 2.10ml+水至10ml；樣品A，B于室溫振搖全部溶解；樣品C室溫振搖有少量未溶，置60℃水浴10分鐘后即全部溶解；樣品D置60℃水浴30分鐘全部溶解。將上述樣品分置2～4℃(冷藏)和-5℃(冷凍)7天，結(jié)果如下。

結(jié)論巴洛沙星與乳酸等摩爾成鹽后，在水中的溶解度可達50mg/ml以上，且冷藏也未見主藥析出。當濃度為100mg/ml時，冷藏有結(jié)晶析出，取出至溫水中(40～50℃)振搖數(shù)分鐘即溶解、澄清。
2.3.3乳酸作增溶劑的溶液凍干試驗處方(三組)巴洛沙星(二水物) 5.00g(4.5g，5.5g)
乳酸 1.8ml(1.6ml，2ml)注射用水至 100ml制成 25瓶制備 取注射用水90ml，加乳酸1.8ml，混勻。將巴洛沙星5.0g加入，攪拌使溶。加0.1％(w/v)活性炭，于60～80℃保溫攪拌20分鐘，乘熱過濾除炭；用UV測巴洛沙星的濃度，必要時自濾器上添加注射用水使溶液濃度為50mg/ml。用0.22μm濾膜過濾，定量灌裝于10ml西林瓶中，每瓶裝量4.0ml。于凍干機內(nèi)凍干，成品為淺黃色疏松塊狀物，其它二組也按同樣的方法進行制備。
初步穩(wěn)定性試驗將凍干樣品分別置于2～4℃、40℃、60℃、4500Lx條件下10天。觀察形狀、色澤。結(jié)果如下

隨著放置時間的延長，60℃樣品成桔黃色球狀粘稠物。
結(jié)論單用乳酸作增溶劑制得的凍干品貯存中會產(chǎn)生萎縮、坍塌。
分析可能是缺少骨架物所致。
2.3.4添加甘露醇作骨架劑后的凍干試驗經(jīng)試驗，在上述處方中加入5～20％甘露醇，均能成溶液。選擇加10％甘露醇作骨架。
處方(三組)巴洛沙星(二水物) 5.00g(4.5g，5.5g)乳酸 1.8ml(1.6ml，2ml)甘 露 醇 10.0g(8g，12g)注射用水 至 100ml制 成25瓶制備 取注射用水90ml，加乳酸1.8ml，混勻。將巴洛沙星5.0g和甘露醇10.0g加入，攪拌使溶。加0.1％(w/v)活性炭，于60～80℃保溫攪拌20分鐘，乘熱過濾。用0.22μm濾膜過濾，定量灌裝于10ml西林瓶中，每瓶裝量4.0ml。于凍干機內(nèi)凍干，成品為淺黃色疏松塊狀物。(其它二組也按同樣的方法進行制備)初步穩(wěn)定性試驗將凍干樣品分別置于2～4℃、40℃、60℃、4500Lx條件下10天。觀察形狀、色澤。結(jié)果如下

隨著放置時間的延長，60℃樣品萎縮、坍塌越來越嚴重，表面有液狀感。
分析加入骨架劑后，萎縮、坍塌現(xiàn)象雖稍有好轉(zhuǎn)，但并未根本解決。根據(jù)該初步穩(wěn)定性試驗結(jié)果推測，樣品在室溫長期放置，也會出現(xiàn)此現(xiàn)象。因此，用乳酸作增溶劑并調(diào)pH是不可取的。原因可能是乳酸為液狀物，凍干物中少量乳酸可導(dǎo)致疏松塊狀物萎縮、坍塌。
2.3.5用枸櫞酸作增溶劑的試驗巴洛沙星(二水物)的MW＝425.46，枸櫞酸(一水物)的MW＝210.15。假設(shè)巴洛沙星與枸櫞酸以等摩爾成鹽，則1g巴洛沙星完全成鹽時需0.494g枸櫞酸。與枸櫞酸等摩爾成鹽后溶解度試驗情況如下樣品E 巴洛沙星1g+枸櫞酸0.494g+水至100ml；樣品F 巴洛沙星1g+枸櫞酸0.494g+水至50ml；樣品G 巴洛沙星1g+枸櫞酸0.494g+水至20ml；樣品H 巴洛沙星1g+枸櫞酸0.494g+水至10ml。
樣品E、F、G、H于室溫稍加攪拌即能溶解，樣品H室溫攪拌后有少量固體未溶，于40℃水浴攪拌2至3分鐘即全部溶解。
在樣品H中加入500mg甘露醇，稍加攪拌即溶解；繼續(xù)加500mg甘露醇，攪拌數(shù)分鐘后，仍能全部溶解。
結(jié)論巴洛沙星和枸櫞酸等摩爾成鹽后，在水中的溶解度可達0.1g/ml。此溶液加入0.1g/ml甘露醇(擬作骨架)后，仍能溶解。
2.3.6枸櫞酸作增溶劑溶液的凍干試驗處方號 H IJ巴洛沙星(二水物) 2.00g 2.00g2.00g
枸櫞酸 0.988g0.988g0.988g甘露醇 0g1.00g 2.00g注射用水 25.0ml25.0ml25.0ml制成 10瓶 10瓶 10瓶制備將枸櫞酸溶于20ml注射用水中，加入巴洛沙星，攪拌使溶；加入甘露醇，使溶，過濾，必要時添加注射用水至25ml。按2.5ml/瓶定量灌裝于7ml西林瓶中，于凍干機內(nèi)凍干。成品均為淺黃色疏松快狀物。
初步穩(wěn)定性試驗將樣品分別置于2～4℃、60℃、4500Lx條件下10天。觀察其形狀、色澤。結(jié)果如下

結(jié)論單用枸櫞酸的樣品，不僅凍干品形狀，色澤較佳，而且經(jīng)高溫，光照后仍然保持原有形狀，色澤沒有加深。加有甘露醇的樣品，凍干品色澤及形狀與不加甘露醇的一樣，但經(jīng)60℃放置后，形狀逐漸萎縮，坍塌。根據(jù)該初步穩(wěn)定性試驗結(jié)果推測，室溫長期放置也會出現(xiàn)萎縮現(xiàn)象，只是進程慢些而已。分析原因，可能是巴洛沙星與甘露醇形成低共溶物所致。
最終選定處方H作為進一步試驗。
2.3.7巴洛沙星凍干粉針(枸櫞酸作增溶劑)的進一步穩(wěn)定性試驗處方H(三組處方)巴洛沙星(二水物)20.00g(18g，22g)枸櫞酸 9.88g(9.5g，10.2g)注射用水至 250ml制 成 100瓶制備工藝將枸櫞酸溶于200ml注射用水中，加入巴洛沙星，攪拌使溶，加0.1％(w/v)活性炭，于60～80℃保溫攪拌20分鐘，乘熱過濾除炭。用紫外分光光度法測定含量，自濾器上添加注射用水，使2.5ml中主藥含量為200mg。其它二組的制備方法相同。
用0.22μm濾膜精濾，按每瓶2.5ml定量灌裝于7ml西林瓶中，部分塞上丁基橡膠塞，送入凍干箱，關(guān)閉箱門，開啟凍干機，進行凍干。經(jīng)停機，密塞，撤去真空，出箱，壓蓋。
穩(wěn)定性考察將樣品分別于2～4℃、60℃、4500Lx放置10天，對樣品的色澤、形狀、含量、有關(guān)物質(zhì)進行檢測。
含量用紫外分光光度法測定。
測定方法樣品用0.1N HCL溶解并稀釋制成每1ml約含巴洛沙星6μg的供試液；精密稱取巴洛沙星對照品適量，用0.1N HCL溶解并稀釋制成每1ml約含巴洛沙星6μg的溶液；照分光光度法(中國藥典2000年版二部IVA)，在294nm處測定吸收度，計算即得。
有關(guān)物質(zhì)用HPLC-歸一化法測定。條件十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；0.05mol/L枸櫞酸溶液(1000ml水+10.5g枸櫞酸+5ml三乙胺)-乙腈(76∶24)為流動相；檢測波長233nm。方法取本品用流動相溶解并稀釋成每1ml中約含巴洛沙星200μg的溶液，取20μg注入液相色譜儀，記錄圖譜至主峰保留時間的2倍。
結(jié)果見表8-1。
表8-1 巴洛沙星凍干劑的初步穩(wěn)定性

結(jié)論用枸櫞酸作增溶劑，用量與巴洛沙星等摩爾，可制備出色澤、形狀較佳，穩(wěn)定性較好的凍干粉針。
3.最終確定的處方及工藝3.1處方(三組配方)
巴洛沙星(二水物) 200g(195g，205g)枸櫞酸98.8g(95g，100g)注射用水至2500ml制 成1000瓶3.2制備工藝將枸櫞酸溶于2200ml注射用水中，加入巴洛沙星，攪拌使溶，加0.1％(w/v，約2.3g)活性炭，于60～80℃保溫攪拌20分鐘，乘熱過濾除炭。用紫外分光光度法測定濾液含量，必要時添加注射用水至使2.5ml中主藥含量為0.2g，攪勻。
用0.22μm濾膜精濾，按每瓶2.5ml灌裝于7ml西林瓶中，部分塞上丁基橡膠塞，裝盤，送入凍干箱，關(guān)閉箱門，開啟凍干機，利用導(dǎo)熱油對板層制冷，使樣品凍結(jié)，制品溫度達-35℃時，保持該溫度2小時。開啟冷凝器，冷凝器溫度達-40℃時，開啟真空泵，開始升溫、升華、干燥。制品溫度達35℃時，保持2小時，停機，密塞，撤去真空，壓蓋，檢查，包裝。其它二組的制備方法相同，本發(fā)明的說明書中的所述的三組處方是指順序或交叉進行，形成不同的處方配比。
4.注射用巴洛沙星與常用輸液的配伍試驗臨床使用時，需將注射用巴洛沙星用注射用水溶解后加到常用輸液中靜脈滴注。為給臨床使用提供參考，對注射用巴洛沙星與四種常用輸液配伍后24小時內(nèi)的穩(wěn)定性進行了初步考察。
4.1試藥品名規(guī)格 生產(chǎn)廠家 批號注射用巴洛沙星 0.2g 研究用樣品，自制0304125％葡萄糖注射液 100ml 山東華魯制藥有限公司030105-10葡萄糖氯化鈉注射液 100ml 山東華魯制藥有限公司030213-040.9％氯化鈉注射液100ml 山東華魯制藥有限公司030219-07復(fù)方氯化鈉注射液 100ml 南京小營制藥廠 030207-044.2配伍臨床使用時，巴洛沙星的劑量是每次200mg。
序號 配 伍A注射用巴洛沙星1瓶+5ml注射用水+5％葡萄糖注射液100mlB注射用巴洛沙星1瓶+5ml注射用水+葡萄糖氯化鈉注射液100ml
C注射用巴洛沙星1瓶+5ml注射用水+0.9％氯化鈉注射液100mlD注射用巴洛沙星1瓶+5ml注射用水+復(fù)方氯化鈉注射液100ml4.3檢測項目原試藥的pH，配伍后0、2、8、24小時各樣品的色澤、澄明度、pH值、巴洛沙星含量及有關(guān)物質(zhì)。
4.4結(jié)果4.4.1色澤與澄明度注射用巴洛沙星0.2g+5ml注射用水溶解后，為黃色澄明液。配伍前后的變化情況見表8-1。
表8-2注射用巴洛沙星與常用輸液配伍前后色澤與澄明度變化情況

注射用巴洛沙星與四種常用輸液配伍后，24小時內(nèi)色澤、澄明度均無變化。
4.4.2 pH值注射用巴洛沙星0.2g+5ml注射用水溶解后，pH＝3.75。配伍前后pH變化情況見表8-3。
表8-3 注射用巴洛沙星與常用輸液配伍后pH的變化情況

注射用巴洛沙星與四種常用輸液配伍后，pH值較配伍前稍有下降，但配伍后24小時內(nèi)無明顯變化。
4.4.3巴洛沙星含量巴洛沙星含量用紫外分光光度法測定，條件和方法見本資料2.3.7。配伍后巴洛沙星含量變化見表8-4。
表8-4 注射用巴洛沙星與常用輸液配伍后含量的變化情況(mg/ml)

各配伍液24小時內(nèi)主藥含量無明顯變化。
4.4.4有關(guān)物質(zhì)、有關(guān)物質(zhì)的測定采用HPLC-歸一化法。測定條件和方法見本資料2.3.7。配伍后各樣品有關(guān)物質(zhì)變化情況見表8-5。
表8-5注射用巴洛沙星與常用輸液配伍后有關(guān)物質(zhì)的變化情況(％)

各配伍液24小時內(nèi)有關(guān)物質(zhì)的個數(shù)和總量有隨時間的延長而曾加的趨勢，但不太明顯。
4.5結(jié)論注射用巴洛沙星與四種常用輸液配伍后，24小時內(nèi)其色澤、澄明度、pH值、主藥含量和有關(guān)物質(zhì)均沒有明顯變化。
提示臨床可以將注射用巴洛沙星與上述四種常用輸液配伍使用。
本發(fā)明所述的制劑，可在制備如下用途的藥物中進行應(yīng)用，所述的適應(yīng)癥包括鏈球菌，腸球菌，摩根菌屬，大腸桿菌屬，普羅維登斯菌屬，枸櫞酸菌屬，克雷伯桿菌屬，腸桿菌屬，沙雷菌屬，變形桿菌，假單胞菌屬，消化鏈球菌屬引起的單純性尿路感染。
成人每次200mg，每日兩次，將其用5ml注射用水溶解后加到100ml 5％葡萄糖注射液中，或100ml 0.9％氯化鈉注射液中，或100ml復(fù)方氯化鈉注射液中靜脈滴注。根據(jù)患者年齡，病情嚴重程度可酌情調(diào)整劑量。
主要研究結(jié)果的總結(jié)和評價體內(nèi)抗菌試驗對金黃色葡萄球菌MRSA、金黃色葡萄球菌敏感株、肺炎鏈球菌和溶血性鏈球菌等G+菌引起的小鼠全身性感染，巴洛沙星的ED50分別為3.9202、1.2164、4.8760和4.0041mg/Kg，抗菌活性明顯優(yōu)于對照品氧氟沙星注射液(ED50分別為14.9595、5.6100、10.2564和8.2461mg/Kg)；對大腸桿菌、肺炎克雷伯氏菌、不動桿菌和福氏痢疾桿菌等G-菌引起的小鼠全身性感染，巴洛沙星的ED50分別為2.2729、4.3346、3.8482和2.1214mg/Kg，抗菌活性弱于對照品氧氟沙星注射液(ED50分別為0.7863、1.4232、1.7377和1.0766mg/Kg)。
急性毒性試驗巴洛沙星小鼠靜脈注射的LD50為117.3mg/Kg，95％的置信限為108.3～127.2mg/Kg。
長期毒性試驗Beagle犬13周靜脈給藥的毒性試驗巴洛沙星劑量分別為12.5、25和50mg/Kg，Beagle犬靜脈注射每天一次，連續(xù)13周，結(jié)果表明50mg/Kg劑量組，第一周推注時或推注完可見角弓反張、瞳孔放大、大小便失禁、呼吸急促、呈現(xiàn)腹式呼吸，此癥狀大概維持20分鐘左右。給藥10天后，上述癥狀消失。25mg/Kg劑量組也出現(xiàn)類似毒性反應(yīng)，但癥狀輕于高劑量組。上述二個劑量組有體重增長抑制作用；升高血清AST、BUN；組織病理學(xué)檢查可見對肝、腎的一定毒性作用。
動物藥代動力學(xué)大鼠靜脈注射巴洛沙星5、10和20mg/Kg后，三種劑量的T1/2β分別為5.10、7.78和8.95h；AUC分別為6.79、17.23和26.02μg·h/ml；Cmax分別為2.44、6.19和9.59μg/ml。AUC與劑量及Cmax與劑量均有一定線性關(guān)系統(tǒng)。提示巴洛沙星大鼠靜脈給藥的體內(nèi)藥代動力學(xué)行為近似線性。
巴洛沙星在血漿中藥物濃度在0.99～6.22μg/ml范圍內(nèi)，血漿蛋白結(jié)合是線性的；與大鼠血漿蛋白結(jié)合率約為35.60±7.90％。
過敏性、溶血性和局部刺激性試驗巴洛沙星注射液對豚鼠無全身致過敏反應(yīng)，對家兔紅細胞無溶血及致凝集作用，靜脈給藥對家兔耳緣靜脈無明顯刺激作用；80mg/Kg小鼠靜脈注射給藥，未見明顯光毒作用。
巴洛沙星系新型喹諾酮類抗菌藥，本品為巴洛沙星無菌凍干品。本資料為注射用巴洛沙星的質(zhì)量研究工作結(jié)果的總結(jié)。
巴洛沙星為喹諾酮羧酸類藥物，具有喹諾酮羧酸的特征共軛骨架結(jié)構(gòu)，而具有特征的UV吸收行為，可以用其特征最大吸收峰進行鑒別。
本品采用HPLC法測定含量，可以利用含量測定項下記錄的色譜圖進行保留時間定性鑒別。
UV-Vis吸收譜鑒別巴洛沙星分子結(jié)構(gòu)中具有喹諾酮羧酸共軛結(jié)構(gòu)，有特征UV吸收行為。根據(jù)本品和巴洛沙星的溶解性，確定以0.1mol/L鹽酸為溶劑對本品進行UV吸收譜對測定和鑒別。方法精密量取本品適量，以0.1mol/L鹽酸為溶劑溶解并稀釋制成每1ml中含巴洛沙星約為10μg的溶液，照分光光度法(中國藥典2000版二部附錄IV A)測定。另外取巴洛沙星對照品同法測定。結(jié)果測得三批供試品(030408，030410，030412)與巴洛沙星對照品溶液的紫外吸收譜如

圖1所示。均在294nm的波長處有最大吸收。供試品溶液與巴洛沙星對照品溶液的UV吸收特征一致。
另取空白輔料按處方比制備供試液進行測定UV吸收譜測定。
結(jié)果空白輔料僅在UV末端有吸收，對本品的UV定性鑒別無干擾。
HPLC保留時間對照法鑒別本品采用HPLC法測定含量，利用本品在含量測定項下HPLC色譜圖中主成分峰的保留時間進行定性鑒別方便可靠。
方法在含量測定項下記錄的色譜圖中，供試品溶液主峰的保留時間應(yīng)與對照品溶液主峰的保留時間一致。
結(jié)果對三批供試品(030408，030410，030412)進行HPLC測定并與對照品進行比較。
結(jié)果見圖2，表明各供試品溶液主峰的保留時間均與對照品溶液的保留時間一致，空白輔料在主峰的保留時間處無干擾。故利用HPLC法對本品進行鑒別準確可靠。
四、檢查裝量檢查，取本品5瓶，除去標簽和鋁蓋，容器外壁用乙醇洗凈，干燥，開啟時注意避免異物落入容器中，分別迅速精密稱定，取出內(nèi)容物，西林瓶用水和乙醇洗凈，干燥后，再分別精密稱定每一西林瓶的重量，求出每1瓶的裝量與平均裝量。每一瓶中的裝量與平均裝量相比較，應(yīng)符合(藥典2000年版二部附錄IB注射用無菌粉末的裝量差異)規(guī)定。如有1瓶不符合，應(yīng)另取10瓶復(fù)試，均應(yīng)符合規(guī)定。對本品三批樣品的檢查結(jié)果如表1表1 注射用巴洛沙星裝量差異檢查

結(jié)果均符合中國藥典2000年版二部附錄IB注射用無菌粉末的裝量差異的規(guī)定。即平均裝量在0.15g以上至0.5g的注射用無菌粉末，每一瓶中的裝量與平均裝量相比較，其裝量差異限度為±7％。
澄清度與顏色取本品1瓶，加水5ml使溶解，依中國藥典2000年版二部附錄IXB和IXA第一法進行溶液的澄清度與顏色檢查觀測。
本品三批供試品觀測結(jié)果溶液均澄清、顯淡黃色、色澤比黃色10號標準比色液(附錄IXA)更深。
為了嚴格控制本品質(zhì)量，參考中國藥典二部氧氟沙星注射液質(zhì)量標準中的方法，采用溶液吸收度測定法控制本品中的有色雜質(zhì)的含量。
根據(jù)巴洛沙星的UV吸收特征，本品性質(zhì)，確定吸收度限度檢查的檢測波長為450nm。取本品，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至100ml后，在450nm的波長處進行吸收度測定。
三批樣品(030408，030410，030412)的測定結(jié)果分別為0.040，0.040，0.041，符合現(xiàn)有喹諾酮羧酸藥物注射液藥典標準的通常限度要求。
酸堿度取本品1瓶，加水5ml使溶解，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄VIH)。結(jié)果三批樣品(030408，030410，030412)的pH值分別為3.69，3.70，3.72。
4有關(guān)物質(zhì)有關(guān)物質(zhì)檢查方法本品為注射用巴洛沙星，為靈敏準確地分析控制可能存在的有關(guān)物質(zhì)，參考本品原料藥的研究結(jié)果，選擇高效靈敏的高效液相色譜法(中國藥典2000年版二部附錄VD)對本品中可能存在的有關(guān)物質(zhì)進行檢查測定。
有關(guān)物質(zhì)的含量采用不加校正因子的1.0％主成分自身對照法表示。
有關(guān)物質(zhì)檢查條件精密稱取本品內(nèi)容物適量(約相當于巴洛沙星50mg)，置50ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中約含巴洛沙星200μg的供試液；精密量取1ml，置100ml量瓶中用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照液。取對照液20μl注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)譜圖記錄量程，使主成分峰高約為記錄滿量程的10％，再量取上述兩種溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖至主峰保留時間的2倍。供試液的色譜圖中如有雜質(zhì)峰(溶劑峰除外)，量取各雜質(zhì)峰的面積的總和，與對照液主成分峰面積進行比較分析。
專屬性試驗為了檢驗上述HPLC法進行本品有關(guān)物質(zhì)檢查的適用性，對其進行專屬性試驗。取本品量取適量3份，分別經(jīng)強酸沸水浴(1mol/L HCl)、強堿沸水浴(1mol/L NaOH)、過氧化氫沸水浴破壞處理，中和后，分別用流動相溶解稀釋成濃度約為200μg/ml的供試液，進行HPLC分離分析。結(jié)果見圖3，表明在建立的色譜系統(tǒng)之下，巴洛沙星色譜峰與分降解產(chǎn)物的分離良好?？瞻纵o料不干擾巴洛沙星及其有關(guān)物質(zhì)的測定。
有關(guān)物質(zhì)檢查對本品三批供試品進行有關(guān)物質(zhì)的HPLC分析檢查，結(jié)果表明(表2和圖2)，三批供試品中有關(guān)物質(zhì)的含量均不大于對照液主峰的面積，即不大于1.0％。
表2注射用巴洛沙星有關(guān)物質(zhì)檢查結(jié)果

5水分取本品，照水分測定法(中國藥典2000年版二部附錄VIIIM第一法A)測定。結(jié)果(表3)，三批供試品中水分含量均約為1.4％。
6內(nèi)毒素取本品，依法測定(中國藥典2000年版二部附錄XIE)，每1mg巴洛沙星中內(nèi)毒素的量應(yīng)小于0.5EU。
三批供試品，試驗結(jié)果(表3)均符合規(guī)定。
7無菌取本品，依法檢查(中國藥典2000年版二部附錄XIH)檢查，應(yīng)符合規(guī)定。
三批供試品，試驗結(jié)果(表3)均符合規(guī)定。
表3注射用巴洛沙星水分、內(nèi)毒素和無菌檢查的結(jié)果

五、含量測定含量測定方法本品為注射用巴洛沙星。參考藥典中喹諾酮羧酸類藥物制劑質(zhì)量標準和本品原料藥的含量測定研究結(jié)果，選擇高效液相色譜法對本品中巴洛沙星的含量進行測定(照中國藥典2000年版二部附錄V D試驗)。
系統(tǒng)適用性試驗以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，0.05mol/L枸櫞酸溶液(1000ml水+10.5g枸櫞酸+5ml三乙胺)-乙腈(76∶24)為流動相(巴洛沙星保留時間約為8min，由乙腈的比例進行適當調(diào)節(jié))；檢測波長233nm；理論板數(shù)以巴洛沙星主峰計算應(yīng)不低于3000。
測定準確度與精密度精密稱取巴洛沙星對照品約24mg、20mg或16mg各三份，分別置10ml量瓶中，按處方比，各加空白溶液，制備成模擬制劑。用0.1mol/L鹽酸溶液稀釋至刻度，搖勻，各精密量取1ml，分別置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為供試品溶液，得高、中、低不同濃度的供試液各3份；另精密稱取巴洛沙星對照品約20mg，置10ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液適量使溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取該溶液1ml置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照液。精密量取上述溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖；按外標法以峰面積計算，得高、中、低不同濃度下巴洛沙星HPLC法測定的回收率與精密度。結(jié)果見表4，表明HPLC法測定本品中巴洛沙星的準確度(回收率)和精密度(RSD)良好。
表4注射用巴洛沙星HPLC分析準確度(回收率)

重復(fù)性試驗取本品(030408)內(nèi)容物混勻，精密稱取適量(約相當于巴洛沙星20mg)五份，分別置10ml量瓶中，用0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，各精密量取1ml，分別置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻作為供試液，精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取巴洛沙星對照品約20mg于10ml量瓶，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取1ml，置10ml量瓶中，加流動相稀釋至刻度，搖勻，作為對照液，同法測定。按外標法以峰面積計算含量。
結(jié)果(表5)表明HPLC法測定的重復(fù)性良好，偏差較小(RSD％＜1.0)。
表5注射用巴洛沙星(030408)HPLC法含量測定重復(fù)性

溶液穩(wěn)定性取重復(fù)性試驗中供試液一份，精密量取20μl，注入液相色譜儀，記錄色譜圖，作為對照，將此供試液室溫下放置約10小時后再次進行HPLC分析并與對照相比較。結(jié)果見表6，供試液在室溫放置11小時后測得的結(jié)果與0時的結(jié)果比較無明顯變化。表明本品含量測定供試液于室溫下放置穩(wěn)定。
表6供試液穩(wěn)定性試驗

HPLC測定的線性關(guān)系取巴洛沙星對照品適量，精密稱定，用流動相溶解并稀釋制成每1ml中含巴洛沙星濃度分別為0.4，20，40，100，160，200，240和300μg/ml的供試液，精密量取各供試液20μl，定量注入高效液相色譜儀進行測定，測量巴洛沙星色譜峰面積。以巴洛沙星的峰面積(A)對巴洛沙星濃度(C，μg/ml)進行線性回歸。結(jié)果(表7)表明在0.4～300μg/ml范圍內(nèi)，巴洛沙星色譜峰面積與其濃度成良好線性關(guān)系。HPLC法測定巴洛沙星的檢測限表明(圖4)，在上述測定條件下，檢測限濃度約為40ng/ml，靈敏度良好。
表7 巴洛沙星HPLC分析線性關(guān)系

含量測定取裝量差異項下的內(nèi)容物混合均勻，精密稱取適量(約相當于巴洛沙星50mg)，置50ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中含巴洛沙星約為200μg的溶液，作為供試液。另精密稱取巴洛沙星對照品約50mg，置50ml量瓶中，加0.1mol/L鹽酸溶液溶解并稀釋至刻度，搖勻，精密量取2ml，置10ml量瓶中，用流動相稀釋至刻度，搖勻，制成每1ml中約含巴洛沙星200μg的溶液，作為對照液。精密量取上述兩溶液各20μl，分別注入液相色譜儀，記錄色譜圖，按外標法以峰面積計算，即得。
對3批樣品測定的結(jié)果如表8所示。
表8注射用巴洛沙星HPLC分析結(jié)果

權(quán)利要求
1.巴羅沙星的凍干制劑，其特征是主要含巴羅沙星和酸助溶劑，所述酸助溶劑是鹽酸、硫酸、乳酸、甲磺酸、枸櫞酸、富馬酸、門冬氨酸或它們的混合體系。
2.權(quán)利要求1的凍干制劑，其特征是其中的酸助溶劑是乳酸。
3.權(quán)利要求1或2的凍干制劑，其特征是凍干前溶液中巴羅沙星的含量是2.0-8.0％(w/v)。
4.權(quán)利要求1或2的凍干制劑，其特征是凍干前溶液中酸的濃度是0.4-4.0％(w/v)。
5.權(quán)利要求4的凍干制劑，其特征是凍干前溶液中酸的濃度是0.8-3.0％(w/v)。
6.權(quán)利要求1的凍干制劑，其特征是進一步含有賦形劑。
7.權(quán)利要求6的凍干制劑，其特征是賦形劑是甘露醇或葡萄糖。
8.權(quán)利要求7的凍干制劑，其特征是凍干前溶液中賦形劑的含量是0.5-10.0％(w/v)。
9.權(quán)利要求8的凍干制劑，其特征是凍干前溶液中賦形劑的含量是2.0-5.0％(w/v)。
10.權(quán)利要求1至9中任一項凍干制劑用于制備治療人或動物細菌性感染的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及藥物制劑領(lǐng)域，公開了含巴羅沙星的凍干制劑及其用途，其特征是凍干制劑含巴羅沙星和酸。由于巴羅沙星微溶于水，因此加入本發(fā)明的酸助溶后，溶解度增大，制成的凍干制劑質(zhì)量穩(wěn)定，加入溶媒后溶解迅速，溶液澄明度好。巴羅沙星凍干制劑用于治療人或動物的細菌感染。
文檔編號A61K31/4709GK1682727SQ20051006357
公開日2005年10月19日 申請日期2005年4月13日 優(yōu)先權(quán)日2004年4月13日
發(fā)明者吳葆金, 周卓和 申請人:周卓和