專利名稱：一種麥冬須根有效部位及其制備方法和用途的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種中藥材的有效部位及其制備方法和用途，特別涉及一種麥冬須根有效部位及其制備方法和用途。
背景技術：
麥冬為百合科植物麥冬Ophiopogon japonicus(Thunb.)Ker-Gawl.的干燥塊根，其味甘苦，性微寒，歸心、肺、胃經(jīng)，有養(yǎng)陰生津、潤肺清心之功效，用于肺燥干咳、心煩失眠及內熱消渴之癥，其有效成分為麥冬皂苷類成分。傳統(tǒng)上一般以麥冬的塊根入藥，而塊根上連帶的大量須根在麥冬藥材采集時作為廢物被廢棄。但是據(jù)我們的研究發(fā)現(xiàn)須根中也含有大量的皂苷類成分，并且須根中麥冬總皂苷的含量較塊根中高。因此，為了開發(fā)新的藥用資源，我們發(fā)明了從麥冬須根中制備麥冬總皂苷的方法，希望能廢物利用。

發(fā)明內容
本發(fā)明的一個目的在于提供一種麥冬須根有效部位；本發(fā)明的第二個目的在于提供一種麥冬須根有效部位的制備方法；本發(fā)明第三個目的在于提供一種麥冬須根有效部位的用途。
本發(fā)明提供的麥冬須根有效部位，是從麥冬須根中提取、純化得到的，其總皂苷的含量在50％以上。其中主要成分麥冬皂苷D的含量在1.6％以上。
本發(fā)明提供的麥冬須根有效部位由如下的步驟得到取麥冬須根，加入生藥5-12倍量的50～90％(v/v)的甲醇、乙醇或丙酮等有機溶劑進行浸漬、滲漉或加熱回流提取1～4次；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入大孔吸附樹脂柱，先用5-15倍量柱體積的純化水洗脫(至無糖反應)，棄去，再用4～10倍量柱體積50～95％溶劑洗脫至無皂苷反應，收集該洗脫液，濃縮，干燥，粉碎。
甲醇、乙醇或丙酮等有機溶劑進行提取時，有機溶劑的優(yōu)選濃度為60-80％；提取方式以加熱回流提取方式為最佳；所述大孔吸附樹脂為以苯乙烯為骨架、二乙烯苯為交聯(lián)劑交聯(lián)而成的聚合物，或以苯乙烯為骨架、二乙烯苯為交聯(lián)劑，同時添加丙烯酸甲酯、丙烯腈等物質交聯(lián)而成的聚合物，包括D系列、HPD系列、SP系列以及NKA型和AB-8型；50～95％的洗脫溶劑優(yōu)選60～80％；所用的干燥方式可以為加熱干燥、真空干燥、冷凍干燥、常溫干燥。
本發(fā)明提供的提取方法簡單、易行，以HPLC為檢測手段，以麥冬須根總皂苷中的主要有效成分麥冬皂苷D的含量為檢測指標，對整個工藝流程進行了有效的質量控制，提高了有效部位的含量，得到的原料藥純度高，色澤好；另外，該提取方法使用常規(guī)提取設備，造價低廉，工藝中沒有用到有毒的有機溶劑，無污染，有利于保護環(huán)境，適于工業(yè)化生產(chǎn)。同時，通過實驗證明本發(fā)明麥冬須根的有效部位能夠對垂體后葉素致大鼠心肌缺血模型具有顯著的保護作用(與空白對照組比較，P＜0.05)。
下述實驗例用于進一步說明本發(fā)明實驗例1麥冬塊根和須根藥材中麥冬皂苷D的含量比較用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；乙腈-水(44∶56)為流動相；流速1mL/min；柱溫25℃，以蒸發(fā)光散射檢測器檢測。精密稱取麥冬皂苷D對照品適量，置10ml量瓶中，加甲醇制成每1ml中含0.6mg的溶液，即得對照品溶液。取本品(麥冬塊根和須根藥材)粉末1g，精密稱定，置園底燒瓶中，加30ml75％甲醇加熱回流提取2h，放冷，濾過，濾液置50ml量瓶中，用少量溶劑分次洗滌藥渣和容器，并入50ml量瓶中，搖勻，即得供試品溶液。分別吸取上述對照品溶液5μl和10μl與供試品溶液40μl，注入液相色譜儀，測定，按外標兩點法計算，即得。
測定結果見表1表1 麥冬塊根和須根中麥冬皂苷D的含量測定結果

結果表明麥冬須根中麥冬皂苷D的含量為麥冬塊根中的6倍。
實驗例2麥冬塊根和須根中麥冬皂苷類成分的比較色譜柱以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，流動相為乙腈(A)--水(B)梯度洗脫，21％～38％A(0～35min)，38％～44％A(35～60min)，44％～60％A(60～80min)；流速1mL/min；柱溫30℃；蒸發(fā)光散射檢測器。取麥冬皂苷D對照品適量，加甲醇制成每1mL含0.35mg的溶液，作為麥冬皂苷D對照品溶液。取麥冬(塊根和須根)粉末1g，精密稱定，置50mL三角瓶中，加30mL甲醇超聲提取，濾過，減壓濃縮至干，殘渣加水溶解并轉移至10mL量瓶中，用水稀釋至刻度，作為供試品溶液。分別精密吸取以上對照品溶液和供試品溶液10μl，注入高效液相色譜儀中，記錄90分鐘的圖譜，即得。
測定結果見圖1結果表明麥冬須根含有的皂苷類成分與麥冬塊根中的麥冬皂苷類成分有些相似，但還是具有一定的區(qū)別，而且須根中皂苷類成分的峰面積大于塊根中的皂苷峰面積。
實驗例3麥冬須根有效部位與麥冬塊根有效部位的比較各取麥冬須根與麥冬塊根140g，用75％乙醇(6倍量，5倍量，4倍量)加熱回流提取三次，每次1小時。合并濾液，濃縮，上AB-8大孔樹脂分離(藥材∶干樹脂(2∶1))，用水1000ml洗至無糖，用80％乙醇洗脫800ml，濃縮至干，稱重，即得麥冬須根有效部位和麥冬塊根有效部位。二者比較如下表2 麥冬須根有效部位和麥冬塊根有效部位皂苷含量的比較

從上面的結果可以看出麥冬須根有效部位和麥冬塊根有效部位二者還是具有較大的區(qū)別，麥冬須根有效部位中的麥冬皂苷D的含量比麥冬塊根有效部位中麥冬皂苷D的含量高了31％。并且從麥冬須根中制得有效部位的收率比從麥冬塊根制取有效部位的收率高了5倍。
實驗例4麥冬須根有效部位對垂體后葉素所致大鼠心肌缺血的影響取體重220-240g的健康SD大鼠50只，雌雄各半，按體重隨機分成4組，空白對照組，地奧心血康膠囊(200mg/kg)，麥冬須根有效部位組(200mg/kg)，麥冬塊根有效部位組(200mg/kg)。連續(xù)給藥八天，最后一天于給藥后30分鐘用戊巴比妥鈉ip麻醉后，仰位固定于鼠臺上，肢體導聯(lián)，心電圖機選擇標準電壓1mv＝20mm，紙速25mm/s，穩(wěn)定約5-10min，描記正常II導聯(lián)心電后，舌下靜脈注射垂體后葉素(1U/kg)，5s內注完。分別描記5s、15s、30s、1min、5min、8min各時間點的心電圖。
計算給予垂體后葉素前后，ST段和T波變化的差值，對差值進行t檢驗，判斷顯著性差異。
麥冬須根有效部位對大鼠注射垂體后葉素后II導聯(lián)心電圖ST波變化及變化率的影響各組大鼠注射垂體后葉素后即刻觀察II導聯(lián)心電圖ST段變化情況，與給垂體后葉素前比較，ST段明顯上移，于5-20秒左右為高峰，30秒后逐漸恢復，說明用1U/ml的垂體后葉素制造心肌缺血模型是成功的。從各組ST波變化來看，在30s內，麥冬須根有效部位組(200mg/kg)在5s、15s時間點能顯著對抗ST波變化，與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，地奧心血康在5s與空白對照比較有顯著性差異(P＜0.05)；從ST變化率來看，麥冬須根有效部位組(200mg/kg)和地奧在1min的變化率與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，麥冬塊根有效部位組(200mg/kg)在各時間點與空白對照組比較均無論是變化值還是變化率均無顯著性差異。這一結果表明麥冬須根有效部位組(200mg/kg)可減輕ST波的位置變化(見表3)。
麥冬須根有效部位對大鼠注射垂體后葉素后II導聯(lián)心電圖T波變化的影響從T波變化來看，30s內各給藥組大鼠給垂體后葉素后T波均抬高，與對照組大鼠比較各給藥組T波抬高的程度減輕，麥冬須根有效部位(200mg/kg)在5s、15s和1min三個時間點能明顯抑制T波變化，與空白對照組比較有顯著性差異(P＜0.05)，并且1min時變化率與空白對照組比較也有顯著性差異(P＜0.05)；地奧心血康在5s和1min時變化值與變化率均顯著降低，與空白對照組比較有顯著差異(P＜0.05)。麥冬塊根有效部位(200mg/kg)對T波變化有不同程度的抑制，但與空白對照組比較無顯著性差異(P＞0.05)這一結果表明麥冬須根有效部位可減輕T波的變化(見表4)。
麥冬須根有效部位對垂體后葉素致大鼠心肌缺血具有明顯的保護作用，提示麥冬須根有效部位可用于心、腦血管疾病方面的治療。
實驗例5麥冬須根有效部位對冠心病心肌缺血模型大鼠心梗面積的影響1材料
1.1動物雄性Wistar大鼠50只，體重200～220g，購自北京市通利實驗動物養(yǎng)殖廠，合格證號京動許字(2000)第010號。
1.2藥物和儀器SC3型呼吸機，上海醫(yī)療設備廠；MPIAS-500型多媒體彩色病理圖像分析系統(tǒng)，北京空海公司。
2方法2.1分組和給藥制造冠心病大鼠模型大鼠，腹腔注射水合氯醛，胸骨左側第四、五肋間開胸，剪開心包，暴露心臟，輕輕擠壓大鼠胸腔側壁，將心臟擠出胸腔，于肺動脈圓錐與左心耳之間，左心耳根部下方2～3mm處穿線、結扎冠狀動脈左前降支，剔除標準II導聯(lián)心電圖無ST段或T波改變的大鼠；關閉胸腔，縫合胸壁，恢復自主呼吸。將造模成功的大鼠隨機分為2組①模型組，②地奧心血康組，③麥冬須根有效部位組，每組10只。大鼠灌胃給藥，模型組給予等體積的蒸餾水。藥后24h，在心臟結扎線以下將心臟橫切為5片，N-BT染色，多媒體彩色病理圖文分析系統(tǒng)固定取像，測量正常心肌及梗塞心肌面積，計算心肌梗塞程度。
2.2數(shù)據(jù)統(tǒng)計數(shù)據(jù)用X±S表示，SPSS10.0軟件統(tǒng)計處理，單因素方差分析組間比較。
3結果結果顯示，麥冬須根有效部位組顯著減小冠心病模型大鼠的心肌梗死面積(與模型組比較，P＜0.05)，見表5。提示麥冬須根及其麥冬須根有效部位可用于治療心、腦血管疾病。
表5 對冠心病心肌缺血模型大鼠心肌梗塞面積的影響(X±S，)

*P＜0.05


圖1麥冬塊根和須根中麥冬皂苷類成分的比較(備注由下至上依次是麥冬皂苷D、麥冬塊根、麥冬須根)實施例1取麥冬須根，加生藥8倍量的85％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加10倍量的85％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，合并兩次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫，徐徐注入NKA大孔吸附樹脂柱，先用8倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積80％乙醇洗脫至無皂苷反應。收集該洗脫液，濃縮，真空干燥，粉碎，即得。
實施例2取麥冬須根，加生藥12倍量的70％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加8倍量的70％的乙醇加熱回流提取兩次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫，徐徐注入HPD100大孔吸附樹脂柱，先用10倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積80％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，即得。
實施例3取麥冬須根，加生藥6倍量的75％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加5倍量的75％的乙醇加熱回流提取2次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫，徐徐注入大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積70％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，冷凍干燥，粉碎，即得。
實施例4取麥冬須根，加入8倍生藥量的50％(v/v)的乙醇進行加熱回流提取2次，每次1小時；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入D101大孔吸附樹脂柱，先用8倍量柱體積的純化水洗脫至無糖反應，再用4倍量柱體積95％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，真空干燥，干燥溫度為50℃，粉碎。
表3 麥冬須根有效部位對垂體后葉素引起的大鼠心電ST波變化的影響(x±s，n＝10)

注與空白對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；(下同)
表4 麥冬須根有效部位對垂體后葉素引起的大鼠心電T波變化的影響(x±s，n＝10)

權利要求
1.一種麥冬須根有效部位，其中麥冬總皂苷的含量在50％以上。
2.如權利要求1所述的麥冬須根有效部位，其中的主要有效成分麥冬皂苷D的含量在1.5％以上。
3.如權利要求1或2所述的麥冬須根有效部位的制備方法，其特征在于該方法為取麥冬須根，加入生藥5-12倍量的50～95％的甲醇、乙醇或丙酮進行浸漬、滲漉或加熱回流提取1～4次；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入大孔吸附樹脂柱，先用5～15倍量柱體積的純化水洗脫至無糖反應，再用4～10倍量柱體積50％～95％溶劑洗脫至無皂苷反應；收集該洗脫液，濃縮，干燥，粉碎。
4.如權利要求3所述的麥冬須根有效部位的制備方法，其特征在于該方法為取麥冬須根，加生藥8倍量的85％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加10倍量的85％的乙醇加熱回流提取兩次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫，徐徐注入HPD100大孔吸附樹脂柱，先用8倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積80％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，干燥，粉碎，即得。
5.如權利要求3所述的麥冬須根有效部位的制備方法，其特征在于該方法為取麥冬須根，加生藥12倍量的70％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加8倍量的70％的乙醇加熱回流提取兩次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮至相對密度為1.25～1.30，濃縮液放置至室溫，徐徐注入HPD100大孔吸附樹脂柱，先用10倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積80％乙醇洗脫，收集該洗脫液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15～1.25，干燥，粉碎，即得。
6.如權利要求3所述的麥冬須根有效部位的制備方法，其特征在于該方法為取麥冬須根，加生藥6倍量的75％的乙醇加熱回流提取1小時，濾過，濾液備用；殘渣再加5倍量的75％的乙醇加熱回流提取2次，每次1小時，濾過，合并三次濾液，減壓濃縮，濃縮液放置至室溫，徐徐注入大孔吸附樹脂柱，先用6倍柱床體積的去離子水洗脫至無糖反應，再用6倍柱床體積70％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，冷凍干燥，粉碎，即得。
7.如權利要求3所述的麥冬須根有效部位的制備方法，其特征在于該方法為取麥冬須根，加入8倍生藥量的50％的乙醇進行加熱回流提取2次，每次1小時；合并提取液，減壓回收溶劑；將得到的濃縮液注入D101大孔吸附樹脂柱，先用8倍量柱體積的純化水洗脫至無糖反應，再用4倍量柱體積95％乙醇洗脫，收集該洗脫液，濃縮，真空干燥，干燥溫度為50℃，粉碎，即得。
8.如權利要求1或2所述的麥冬須根有效部位在制備治療心、腦血管疾病的藥物中的應用。
9.如權利要求8所述的應用，其特征在于所述的治療心、腦血管疾病是指減小心肌梗死面積、改善心肌缺血。
10.麥冬須根在制備治療心、腦血管疾病的藥物中的應用。
11.如權利要求10所述的應用，其特征在于所述的治療心、腦血管疾病是指減小心肌梗死面積、改善心肌缺血。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種來源于麥冬須根的麥冬須根有效部位及其制備方法和用途。該有效部位中麥冬總皂苷的含量在50％以上，其中的主要有效成分麥冬皂苷D的含量在1.6％以上。其制備方法為麥冬須根用一定濃度的溶劑提取，回收提取溶劑并濃縮至一定的相對密度，過大孔吸附樹脂，先用水洗脫至無糖反應，再用較高濃度的溶劑進行洗脫，干燥、粉碎而得。本發(fā)明的提取方法簡單、易行，得到的原料藥純度高，色澤好，無污染，適于工業(yè)化生產(chǎn)；本發(fā)明可利用廢物麥冬須根、節(jié)約資源，成本低廉。
文檔編號A61K125/00GK1903315SQ20051008555
公開日2007年1月31日 申請日期2005年7月28日 優(yōu)先權日2005年7月28日
發(fā)明者屠鵬飛, 齊學兵, 姜勇, 逄劍 申請人:北京華醫(yī)神農(nóng)醫(yī)藥科技有限公司