專利名稱：土貝母苷甲用于制備抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及土貝母苷甲作為抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物，該藥物包括土貝母苷甲及可藥用的載體。
本發(fā)明涉及如權(quán)利要求1所定義的藥物的制備方法，該藥物包括土貝母苷甲和/或可藥用的載體。
土貝母苷甲可與任何可藥用的載體混合或溶解，如經(jīng)皮膚、粘膜、胃腸內(nèi)和胃腸外給藥的可藥用載體。該藥物以常規(guī)藥用制劑的形式使用，如固體形式的片劑、顆粒劑、粉劑、膠囊劑、扁囊劑、拴劑等，或半固體形式的油膏、軟膏等，或液體形式的針劑、懸浮劑、糖漿劑、乳劑、搽劑等。該藥物中使用可藥用的賦形劑和添加劑，這些可藥用的賦形劑和添加劑包括無毒的可相容的填料、粘合劑、崩解劑、緩沖劑、防腐劑、抗氧化劑、潤滑劑、矯味劑、增稠劑、著色劑、乳化劑、穩(wěn)定劑等。如乳糖、檸檬酸、硬脂酸、硬脂酸鎂石膏粉、蔗糖、玉米淀粉、滑石粉、明膠、瓊脂、果膠、花生油、可可脂、乙二醇、葡萄糖、鹽酸普魯卡因、鹽酸利多卡因、抗壞血酸等。該藥物可按各種制劑的常規(guī)工藝制備。
本發(fā)明涉及土貝母苷甲作為預防惡性腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物，可作為食品添加劑、化妝品添加劑加入到食品或化妝品中。
本發(fā)明涉及土貝母苷甲作為治療惡性腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物，可用于各種實體形腫瘤，如食道癌、肝癌、胃癌、胰腺癌、結(jié)腸癌、直腸癌、宮頸癌、卵巢癌、乳腺癌、鼻煙癌、口腔癌、唇癌、皮膚癌、膀胱癌、絨毛膜上皮癌、腮腺瘤、淋巴瘤、骨瘤、黑色素瘤和各種顱內(nèi)腫瘤等。所制成的各種口服藥物中土貝母苷甲的含量為每日每kg體重大約0.001-100mg，優(yōu)選約0.01-50mg，更優(yōu)約0.05-30mg，最佳約0.1-10mg。每日分2-4次服用，10-30天為一療程，一般用藥3-6個療程，每個療程間隔10-30天。所制成的注射用藥物，可供肌肉注射或靜脈點滴，其中土貝母苷甲的含量為每日每kg體重0.001-50mg，優(yōu)選約0.01-25mg/kg，更優(yōu)約0.05-15mg，最佳約0.1-3mg。每日分1-3次使用，10-30天為一療程，一般用藥3-6個療程，每個療程間隔10-30天。然而，精確的劑量應由醫(yī)生確定，主要取決于病人的年齡、體重、病情、反應等。
下面列舉實驗研究的結(jié)果，作為土貝母苷甲可用于制備抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物的證據(jù)。
1、土貝母苷甲對人高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌PGCL3細胞侵襲行為的影響 材料和方法 藥物和試劑土貝母苷甲自土貝母塊莖分離純化。定量稱取土貝母苷甲，無菌蒸餾水溶解，過濾除菌，-20℃冰箱保存?zhèn)溆?。超級無支原體新生牛血清、RPMI-1640培養(yǎng)基、層粘連蛋白、纖維粘連蛋白、MTT[3-(4，5-dimethylthiazol-z-yl)-2，5-diphenyl-tetrazoliumbromide]、丙烯酰胺、雙丙烯酰胺、四甲基乙二胺(TEMED)、過硫酸胺、Triton-100、蘇木精、伊紅、優(yōu)凱特、十二烷基磺酸鈉、胰酶、Transwell室(直徑6.5cm、孔徑8μm)、聚碳酸酯膜(直徑13cm、孔徑8μm)、膠原，等。
細胞株人高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌PGCL3細胞，該細胞株由北京醫(yī)科大學病理系建立的高轉(zhuǎn)移肺巨細胞癌系中進一步單克隆化所得。
細胞培養(yǎng)PGCL3細胞培養(yǎng)于含10％小牛血清，100kU/L青霉素和100mg/L鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃、5％CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)。取對數(shù)生長期細胞用于實驗。
土貝母苷甲對PGCL3細胞生長的影響采用MTT法檢測土貝母苷甲對PGCL3細胞生長的影響。取培養(yǎng)細胞制成細胞懸液，接種于96孔板，每孔接種90μl(含1.0×104細胞)。培養(yǎng)過夜后，分別加入不同濃度的土貝母苷甲溶液10μl，使終濃度分別為5.0、10.0、15.0、20.0μmol·L-1。對照組則加入相同體積的培養(yǎng)液，每一濃度設(shè)3個平行孔。充分混勻后，繼續(xù)培養(yǎng)24、48、72h。每孔加入MTT(5g/L)20μl，繼續(xù)培養(yǎng)4～6h。每孔加入三聯(lián)液(10％SDS、5％異丁醇、0.012mol/L HCL，W/V/V))100μl。放置過夜后，用DG-5031型酶標儀在570nm波長處測量OD值，調(diào)零孔則用培養(yǎng)液代替細胞懸液。以Bliss法計算半數(shù)抑制濃度。
細胞侵襲實驗Transwell室為無聚乙烯吡咯烷酮的聚碳酸酯濾膜分隔開的兩個小室，朝上室方向的上膜面已鋪好Matrigel，朝下室方向的下膜面涂纖維粘連蛋白10μl(約2μg)，置超凈臺上風干后放入已加入600μl含0.1％牛血清白蛋白(BSA)的RPMI-1640培養(yǎng)液的下小室，37℃孵育1h，取出備用。將經(jīng)1.25、2.50、5.00μmol/L土貝母苷甲處理24h的PGCL3細胞用胰酶消化，重懸于含0.1％BSA的RPMI-1640培養(yǎng)液中，調(diào)整細胞濃度至1.0×109/L，加100μl細胞懸液于Transwell室的上小室。對照組為未經(jīng)土貝母苷甲處理的PGCL3細胞，每組設(shè)3個平行試驗。37℃、5％CO2飽和濕度的細胞培養(yǎng)箱孵育6h。取出上小室，甲醇固定3min，蘇木精染色3min，水洗。伊紅染色10s，水洗。用棉簽擦掉上膜面的Matrigel及未穿過膜的細胞，優(yōu)凱特膠封片。在400倍光學顯微鏡下隨機選擇5個視野，計數(shù)每個視野穿過膜的細胞數(shù)。計算平均值，以穿過膜的細胞數(shù)的相對數(shù)目來表示腫瘤細胞的侵襲能力。土貝母苷甲對PGCL3細胞侵襲的抑制率按下式計算。侵襲抑制率＝(1-實驗組侵襲細胞數(shù)/對照組侵襲細胞數(shù))×100％。
細胞運動實驗除濾膜上不涂纖維粘連蛋白外，其余方法步驟同細胞侵襲實驗。
細胞與纖維粘連蛋白、層粘連蛋白的粘附實驗分別將5.0μg纖維粘連蛋白、層粘連蛋白鋪于96孔板，置超凈臺上過夜風干。用50μl含2％BSA的RPMI-1640培養(yǎng)液封閉1h后，PBS洗兩次，待用。將經(jīng)1.25、2.50、5.00μmol·L-1土貝母苷甲處理24h的PGCL3細胞用胰酶消化，重懸于含0.1％BSA的無血清RPMI-1640培養(yǎng)液中，調(diào)整細胞濃度至8×108·L-1，每孔加100μl細胞懸液，對照組為未經(jīng)土貝母苷甲處理過的PGCL3細胞，每一濃度設(shè)3個平行孔。37℃孵育1h，吸去培養(yǎng)液，每孔加入200μl 37℃預熱的PBS輕輕吹打10次，重復3次，洗去未粘附細胞。每孔加入100μl無血清RPMI-1640溶解的MTT(0.1mg)，調(diào)零孔則無細胞，于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4h后，每孔加入100μl三聯(lián)液，放置過夜。用DG-5031型酶標儀在570nm波長處測量OD值，細胞粘附率按下式計算。細胞粘附率＝實驗組OD值/對照組OD值×100％。
膠原酶分泌量測定將對數(shù)生長期PGCL3細胞懸液400μl(含8×104細胞)接種于24孔板，37℃、5％CO2飽和濕度培養(yǎng)過夜。棄去培養(yǎng)液上清，PBS洗2次，換無血清培養(yǎng)液培養(yǎng)1h。棄去培養(yǎng)液，PBS洗2次，加無血清培養(yǎng)液400μl，同時加不同濃度的土貝母苷甲40μl，使其終濃度分別為1.25、2.50、5.00μmol·L-1，對照組僅加入400μl的無血清RPMI-1640，繼續(xù)培養(yǎng)24h。收集上清，200r·min-1低速離心去除細胞碎片，用胰酶消化細胞并計活細胞數(shù)。按照活細胞數(shù)取相應體積的上清與等體積的上樣緩沖液混合。分離膠中加入終濃度為1g·L-1的明膠，常規(guī)SDS-PAGE電泳，約3～4h后電泳完畢，剝膠。用蒸餾水漂洗數(shù)次后，移入100ml 2.5％Triton-100溶液中，在搖床上低速搖動洗脫SDS。半小時后換新的100ml Triton-100溶液，繼續(xù)洗脫1小時。蒸餾水漂洗后加100ml明膠酶緩沖液(50mol·L-1 Tris·HCl，10mmol·L-1 CaCl2，200mmol·L-1 NaCl，1μmol·L-1 ZnCl2，pH7.5)，在37℃恒溫搖床中溫育12～16h。取出凝膠，蒸餾水漂洗后放入染色液中(0.1％考馬斯亮藍R-250)染色4h。漂洗后在脫色液中(甲醇∶水∶冰醋酸＝45∶45∶10)脫色1～2h，至對照出現(xiàn)清晰的負染酶帶。
膠原酶活性測定將4ml的PGCL3細胞懸液接種于50ml培養(yǎng)瓶內(nèi)(含8×105細胞)，37℃、5％CO2恒溫培養(yǎng)24h。無血清RPMI-1640洗3遍，加入4ml無血清培養(yǎng)液繼續(xù)培養(yǎng)24h。收集培養(yǎng)液上清，200r·min-1低速離心去除細胞碎片。取50μl上清與10μl的上樣緩沖液相混合，按上文相同條件電泳。剝離膠前先把膠切成一定寬度的條狀，同上法洗脫后放入已加入明膠酶緩沖液的雜交袋中。同時分別加入不同濃度的土貝母苷甲200μl，使其終濃度分別為1.25、2.50、5.00μmol·L-1。密封雜交袋，做好標記，在37℃恒溫搖床中溫育96h。其余步驟同上。
統(tǒng)計分析數(shù)據(jù)采用均數(shù)±標準誤(

)表示，結(jié)果用Student′s t test進行統(tǒng)計分析。
當P＜0.05時，視為差異顯著；有統(tǒng)計意義；當P＜0.01時，視為差異非常顯著。
結(jié)果 土貝母苷甲對人高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌PGCL3生長的抑制作用土貝母苷甲明顯抑制PGCL3細胞的生長，且與劑量相關(guān)。土貝母苷甲作用PGCL3細胞24、48、72h的IC50值分別為15.70、14.20、13.32μmol/L(圖2)。
土貝母苷甲對PGCL3細胞侵襲基底膜能力的影響Matrigel經(jīng)重建后能在聚碳酸酯膜表面形成類似天然基底膜的結(jié)構(gòu)，細胞侵襲穿過重組基底膜的能力反應該細胞的侵襲能力。土貝母苷甲1.25、2.50、5.00μmol/L作用24h，PGCL3細胞侵襲重組基底膜的能力明顯受到抑制，抑制率分別為28.7％、41.0％、57.5％(表1)。
表1土貝母苷甲對PGCL3細胞侵襲能力的影響 土貝母苷甲對PGCL3細胞運動能力的影響土貝母苷甲1.25、2.50、5.00μmol/L作用PGCL3細胞24h，PGCL3細胞的運動能力受到抑制，且呈劑量依賴性，抑制率分別為21.6％、35.2％、53.7％(表2)。
表2土貝母苷甲對PGCL3細胞運動能力的影響 土貝母苷甲對PGCL3細胞與纖維粘連蛋白、層粘連蛋白粘附能力的影響1.25、2.50、5.00μmol/L的土貝母苷甲作用PGCL3細胞24h，降低PGCL3細胞對基質(zhì)成分纖維粘連蛋白、層粘連蛋白的粘附能力(圖3)。
土貝母苷甲對PGCL3細胞IV型膠原酶的分泌量及酶活性的影響IV型膠原酶中，MMP-2(72000IV型膠原酶/明膠酶A)、MMP-9(92000IV型膠原酶/明膠酶B)與轉(zhuǎn)移的關(guān)系成為基質(zhì)金屬蛋白酶研究的熱點。PGCL3細胞主要分泌MMP-2，而MMP-9的分泌量很少。土貝母苷甲1.25、2.50、5.00μmol/L作用PGCL3細胞24h，能夠抑制細胞分泌IV型膠原酶(MMP-2)，并呈一定的劑量依賴關(guān)系(圖4)。土貝母苷甲1.25、2.50、5.00μmol/L作用IV型膠原酶(MMP-2)96h，能夠降低IV型膠原酶的活性，并呈一定的劑量依賴關(guān)系(圖5)。2、土貝母苷甲對裸BALB/c小鼠B16黑色素瘤(B16)實驗轉(zhuǎn)移和Lewis肺癌(LLC)自發(fā)轉(zhuǎn)移的影響 材料和方法 藥物和試劑土貝母苷甲，同上。環(huán)磷酰胺，超級無支原體新生牛血清，RPMI-1640培養(yǎng)基，Dulbecco’s modified Eagle’s medium(DMEM)培養(yǎng)基，兔多克隆抗CD44v6、抗ErbB-2、抗nm23-H1抗體，免疫組化超敏S-P試劑盒。
實驗動物成年BALB/c裸小鼠，雌雄各半，飼養(yǎng)于SPF級動物實驗室。飼料、飲水、籠具和操作器材及其他用品均滅菌處理后使用，實驗時按無菌原則操作。
細胞株小鼠B16黑色素瘤細胞株，培養(yǎng)于含10％小牛血清，100kU/L青霉素和100mg/L鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)液中，37℃、5％CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。B16對淋巴細胞敏感，小鼠靜脈內(nèi)移植后主要形成肺轉(zhuǎn)移灶。LLC細胞株培養(yǎng)于含5％小牛血清，10％胎牛血清，100kU/L青霉素和100mg/L鏈霉素的DMEM培養(yǎng)液中，37℃、5％CO2飽和濕度細胞培養(yǎng)箱培養(yǎng)，取對數(shù)生長期細胞用于實驗。LLC為自發(fā)性肺未分化上皮樣癌，移植于動物皮下、肌肉、爪墊等特定部位，移植瘤增殖后開始侵襲周圍正常組織和血管，繼之癌細胞進入血液循環(huán)形成血行播散，粘附于靶器官并穿出血管，癌細胞增殖成為克隆，最終形成轉(zhuǎn)移瘤。上述過程基本類似于人類腫瘤從生長到轉(zhuǎn)移瘤形成所經(jīng)歷的一系列步驟。
B16實驗轉(zhuǎn)移模型取對數(shù)生長期B16黑色素瘤細胞，調(diào)整濃度至1×106細胞/ml，按每只0.2ml(2×105細胞)接種于裸鼠尾靜脈。隨機分為陰性對照組、陽性對照組和實驗組，每組8只小鼠，雌雄各半。接種當日即開始給藥。實驗組每日每只裸鼠腹腔注射不同劑量土貝母苷甲(2，3mg/kg·d)，連續(xù)14天；陰性對照組同時腹腔注射同體積無菌生理鹽水；陽性對照組每周每只裸鼠腹腔注射環(huán)磷酰胺50mg/kg·w，共注射2次。接種后第15天，稱體重，摘除眼球放血、頸椎脫位法犧牲動物。取出肺，稱重并計轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。按下列公式分別計算腫瘤轉(zhuǎn)移抑制率。
腫瘤轉(zhuǎn)移抑制率(％)＝(陰性對照組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)-給藥組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù))/陰性對照組平均轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)×100％ LLC自發(fā)轉(zhuǎn)移模型取對數(shù)生長期Lewis肺癌細胞，調(diào)整濃度至2×107細胞/ml，按每只0.2ml(4×106細胞)接種于裸鼠右側(cè)背部皮下。分組方式同B16實驗轉(zhuǎn)移模型。接種后第7天開始給藥。給藥方式同B16實驗轉(zhuǎn)移模型。接種后第21天，稱體重，摘除眼球放血、頸椎脫位法犧牲動物，剝離腫瘤衡重。10％中性福爾馬林固定腫瘤組織用于病理和免疫組化檢查。取出肝，稱重并計轉(zhuǎn)移結(jié)節(jié)數(shù)。按下列公式計算土貝母苷甲腫瘤生長抑制率，腫瘤轉(zhuǎn)移抑制率。
腫瘤生長抑制率(％)＝(陰性對照組平均瘤重-給藥組平均瘤重)/陰性對照組平均瘤重×100％ 免疫組化實驗檢測腫瘤轉(zhuǎn)移基因表達水平將分離出的LLC組織用10％中性福爾馬林固定，常規(guī)脫水，制備成石蠟包埋組織塊。將石蠟標本4μm連續(xù)切片。參考文獻作免疫組化實驗。CD44v6陽性標準陽性顯色為棕黃色，以胞膜著色為主，少量胞漿著色；ErbB-2陽性標準陽性顯色為棕黃色，以胞膜或胞漿著色為主；nm23-H1陽性標準陽性顯色為棕黃色，主要位于胞漿。以胞膜或胞漿淡黃至褐黃色細顆粒狀著色為陽性細胞，著淡黃色為弱陽性(+)，棕黃色為陽性(++)，棕褐色為強陽性(+++)，無著色為陰性(-)。
結(jié)果 土貝母苷甲對接種B16、LLC細胞裸小鼠生長的影響實驗組與對照組相比，裸鼠的體重無明顯改變(表3)。
表3土貝母苷甲對接種B16、LLC裸小鼠生長的影響 土貝母苷甲對B16細胞實驗性肺轉(zhuǎn)移的影響B(tài)ALB/c裸小鼠尾靜脈接種B16細胞發(fā)生肺轉(zhuǎn)移。土貝母苷甲(2，3mg/kg·d×14)對B16細胞肺轉(zhuǎn)移的抑制率分別為68.8％和82.8％(表4，圖6)。
表4土貝母苷甲對B16細胞實驗性肺轉(zhuǎn)移的影響 土貝母苷甲對接種LLC裸小鼠原發(fā)瘤生長的影響B(tài)ALB/c裸小鼠接種LLC細胞7天后，可見皮下長出原發(fā)瘤。土貝母苷甲可明顯抑制原發(fā)瘤的生長，并呈一定的劑量依賴關(guān)系(表5)。HE染色病理檢查顯示，對照組瘤組織邊界不清，細胞密集排列，異型性明顯，而苷甲組瘤組織中心及邊緣見大片狀或灶性壞死(圖7)。
表5土貝母苷甲對接種LLC裸小鼠原發(fā)瘤生長的影響 土貝母苷甲對LLC自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移的影響B(tài)ALB/c裸鼠背部皮下接種LLC細胞，自發(fā)性發(fā)生肝轉(zhuǎn)移。在肝表面可見清晰的轉(zhuǎn)移灶(圖8)。土貝母苷甲可明顯抑制LLC細胞的肝轉(zhuǎn)移，抑制率分別為46.3％和52.0％(表6)。
表6土貝母苷甲對LLC細胞自發(fā)性轉(zhuǎn)移的抑制作用 土貝母苷甲對轉(zhuǎn)移基因表達的影響免疫組化檢測的結(jié)果顯示，在Lewis肺癌細胞中，CD44v6和ErbB-2表達于細胞膜與細胞漿，nm23主要表達于細胞漿；給小鼠注射土貝母苷甲后，Lewis肺癌細胞中促轉(zhuǎn)移基因CD44v6和ErbB-2的表達下調(diào)(圖9，10)，抑轉(zhuǎn)移基因nm23-H1的表達上調(diào)(圖11)。
實施例下面的配方舉例說明本發(fā)明的劑型。
實施例1片劑 NO組分 用量 mg/片mg/片 1 土貝母苷甲50 100 2 乳糖USP 122 123 3 玉米淀粉(呈10％的純水漿狀物)，食品級 30 40 4 玉米淀粉，食品級 95 130 5 硬脂酸鎂 37合計 300 400 制造方法 在適當?shù)幕旌蠙C中混合第1項和第2項組分15分鐘，第3組分與混合物?；?。如果需要，通過一個初篩研磨潮濕的顆粒，并使之干燥。如果需要，將干燥的顆粒過篩，并與第4項混合10-15分鐘。加入第5項混合1-3分鐘。在適當?shù)膲浩瑱C中將混合物壓成適當?shù)某叽绾椭亓俊?br> 實施例2膠囊劑 NO組分用量mg/粒mg/粒 1 土貝母苷甲 50 100 2 乳糖USP106 120 3 玉米淀粉，食品級 40 73 4 硬脂酸鎂NF 47 合計 200 300 制造方法 將第1、2和第3項在適當?shù)幕旌蠙C中混合10-15分鐘，加入第4項混合1-3分鐘。在適當?shù)陌覚C上將該混合物裝入適當?shù)哪z囊中。
實施例3注射液 土貝母苷甲 10g或50g 葡萄糖 490g或450g 注射用水 加至10000ml 實施例4栓劑 以生產(chǎn)發(fā)明產(chǎn)品10000粒為例所用的原料及其配比為 土貝母苷甲 300g或600g 吐溫80 800g或800g 可可豆酯(或半合成脂肪酸苷油) 加至10000g 制造方法 混合按本實施例的配比稱取土貝母苷甲、吐溫80和可可豆酯(或半合成脂肪酸苷油)，將可可豆酯(或半合成脂肪酸苷油)放入不銹鋼鍋水浴加熱至大部分溶化，停止加熱，然后分別加入吐溫80和土貝母苷甲，用不銹鋼攪拌機攪拌至混合均勻，便得到本發(fā)明的混合藥物。
潤滑劑的配制 用軟肥皂和苷油各一份與5倍的80％醫(yī)用酒精充分混合攪拌均勻，制成潤滑劑。
成型在栓模上涂上已配制的潤滑劑。將本發(fā)明的混合藥物倒入栓模中至溢出?？?，讓其自然冷卻。待完全凝固后，用刀切去溢出部分。然后開啟模具，將栓劑從模具中取出。
無菌包裝將所制備的拴劑進行質(zhì)量檢查，每粒重量應為1g，含土貝母苷甲30mg或60mg。
檢查合格后包裝，鈷60滅菌。



圖1土貝母苷甲的化學結(jié)構(gòu)式 圖2土貝母苷甲對人高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌PGCL3細胞生長的影響 圖中橫坐標代表土貝母苷甲的作用時間，縱坐標代表OD值。PGCL3細胞在不同濃度的土貝母苷甲作用不同時間(h)后，采用MTT實驗檢測細胞的增殖能力，圖中的數(shù)據(jù)是三個平行實驗的均值。
圖3土貝母苷甲對PGCL3細胞與纖維粘連蛋白、層粘連蛋白粘附能力的影響 圖中橫坐標代表纖維粘連蛋白、層粘連蛋白，縱坐標代表粘附率(％)。
圖4土貝母苷甲對PGCL3細胞分泌IV型膠原酶的能力的影響 A對照；B土貝母苷甲(1.25μmol/L，24h)。
C土貝母苷甲(2.50μmol/L，24h)；D土貝母苷甲(5.00μmol/L，24h) 圖5土貝母苷甲對IV型膠原酶活性的影響 A對照；B土貝母苷甲(1.25μmol/L，24h)。
C土貝母苷甲(2.50μmol/L，24h)；D土貝母苷甲(5.00μmol/L，24h)。
圖6土貝母苷甲對B16黑色素瘤細胞肺轉(zhuǎn)移的抑制作用(圖中灰白點為轉(zhuǎn)移灶). A對照；B土貝母苷甲。
圖7土貝母苷甲誘導的Lewis肺癌瘤組織的病理變化(HE染色，×200) A對照；B土貝母苷甲。
圖8土貝母苷甲對Lewis肺癌細胞自發(fā)性肝轉(zhuǎn)移的抑制作用 A對照；B土貝母苷甲(圖中灰白點為轉(zhuǎn)移灶)。
圖9土貝母苷甲對Lewis肺癌細胞CD44v6表達的影響 A對照(+++)；B土貝母苷甲(-)。
圖10土貝母苷甲對Lewis肺癌細胞ErbB-2表達的影響 A對照(++)；B土貝母苷甲(-)。
圖11土貝母苷甲對Lewis肺癌細胞nm23-H1表達的影響(SP，×200) A對照(-)；B土貝母苷甲(++)。
權(quán)利要求
1.土貝母苷甲用于制備抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物的用途。
全文摘要
本發(fā)明涉及土貝母苷甲用于制備抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物。土貝母苷甲是從中藥土貝母中提取出來的一種化學成分。土貝母苷甲明顯抑制人高轉(zhuǎn)移巨細胞肺癌PGCL3細胞的生長；土貝母苷甲明顯抑制PGCL3細胞的粘附、侵襲和遷移能力；土貝母苷甲明顯抑制小鼠B16黑色素細胞的實驗轉(zhuǎn)移和Lewis肺癌細胞的自發(fā)轉(zhuǎn)移；土貝母苷甲誘導Lewis肺癌組織中促轉(zhuǎn)移基因CD44v6和ErBb-2的表達下調(diào)，抑轉(zhuǎn)移基因nm23-H1的表達上調(diào)。土貝母苷甲可用于制備抗腫瘤生長、侵襲和轉(zhuǎn)移的藥物。
文檔編號A61K9/48GK101095687SQ20061003610
公開日2008年1月2日 申請日期2006年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2006年6月27日
發(fā)明者于立堅, 馬潤娣 申請人:廣東海洋大學