專利名稱：作為治療或預(yù)防糖尿病的二肽基肽酶抑制劑的β－氨基四氫咪唑并(1,2－A)吡嗪和四氫 ...的制作方法
本申請是以下申請的分案申請申請?zhí)?2813558.X(PCT/US02/21349)；申請日2002年7月5日；發(fā)明名稱“作為治療或預(yù)防糖尿病的二肽基肽酶抑制劑的β-氨基四氫咪唑并(1，2-A)吡嗪和四氫三唑并(4，3-A)吡嗪”。
背景技術(shù)：
糖尿病指一種由多種致病因素引起的疾病過程，其特征在于，在禁食狀態(tài)或口服葡萄糖耐受測試期間服用葡萄糖后，血漿葡萄糖水平升高或高血糖癥。持續(xù)或失控性的高血糖與病情的過早形成和死亡率增高相關(guān)。經(jīng)常性的非正常葡萄糖體內(nèi)平衡直接或間接與脂、脂蛋白和載脂蛋白代謝性和其它代謝和血流動(dòng)力性疾病有關(guān)。因此乙型糖尿病患者大血管和微血管并發(fā)癥的風(fēng)險(xiǎn)性特別高，并發(fā)癥包括冠心病、中風(fēng)、未梢血管病、高血壓、腎病、神經(jīng)病和視網(wǎng)膜病。因此，在糖尿病的臨床處理和治療上，葡萄糖體內(nèi)平衡、脂代謝和高血壓的治療性控制是極為重要的。
糖尿病有兩種常見形式。在1型糖尿病或胰島素依賴型糖尿病(IDDM)中，患者很少或完全不產(chǎn)生胰島素—一種調(diào)節(jié)葡萄糖利用的激素。在2型糖尿病或非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM)中，與非糖尿病患者相比，患者的血漿胰島素水平往往相同甚至更高；然而，這些患者對主要的胰島素敏感組織，指肌肉、肝和脂肪組織中的胰島素對葡萄糖和脂代謝的刺激作用已產(chǎn)生抗性，且升高的血漿胰島素水平不足以克服顯著的胰島素抗性。
胰島素抗性不完全起因于胰島素受體量的減少，而起因于尚未知曉的后胰島素受體結(jié)合的不足。對胰島素響應(yīng)的抗性導(dǎo)致肌肉內(nèi)對葡萄糖攝取、氧化和貯存的胰島素活性的不足，以及對脂肪組織中脂類分解和肝中葡萄糖生成和分泌的不適當(dāng)?shù)囊葝u素抑制。
多年來基本未變的2型糖尿病的有效治療方法已經(jīng)承認(rèn)到其的局限。盡管體育鍛煉和膳食熱量攝取的減少會(huì)大大改善糖尿病的癥狀，但由于完全束縛的固定不變的生活方式和過量的食物(尤其是含大量飽和脂肪的食物)消耗，照此治療是極為不利的。通過給與刺激胰的β-細(xì)胞分泌更多胰島素的磺酰脲類(例如，甲苯磺丁脲和格列吡嗪)或美格列奈，和/或在磺酰脲類或美格列奈無效時(shí)，通過注射胰島素來增加血漿的胰島素水平，可導(dǎo)致胰島素濃度高到足以刺激高胰島素抗性組織。然而，危險(xiǎn)的低水平的血漿葡萄糖可由給予胰島素或胰島素的促分泌素(磺酰脲類或美格列奈)引起，且會(huì)出現(xiàn)由于更高的血漿胰島素水平引起的高水平的胰島素抗性。雙胍類能提高胰島素敏感性，從而使高血糖癥有所緩和。但是，兩種雙胍，苯乙雙胍和二甲雙胍，都可誘發(fā)乳酸中毒和惡心/腹瀉。二甲雙胍比苯乙雙胍副作用少，故常作為治療2型糖尿病的處方藥。
Glitazones(即，5-芐基噻唑烷-2，4-二酮)是最近公開的一類有效改善2型糖尿病多種癥狀的化合物。在幾種2型糖尿病的動(dòng)物模型中，這些藥物基本提高了肌肉、肝和脂肪組織內(nèi)的胰島素敏感性，從而導(dǎo)致部分或完全的高血漿葡萄糖水平修復(fù)而不出現(xiàn)高血糖癥。目前市售的Glitazones是過氧物酶體增殖劑活化受體(PPAR)(主要是PPAR-γ亞型)的激動(dòng)劑。一般認(rèn)為，PPAR-γ激動(dòng)作用是用Glitazones觀察到的胰島素靈敏化提高的原因。正在測試的用于治療II型糖尿病的較新的PPAR激動(dòng)劑是α、γ或δ亞型激動(dòng)劑，或這些II型的混合物，在許多情況下，與所述Glitazones有化學(xué)上的區(qū)別(即，它們不是噻唑烷二酮)。某些Glitazones(例如曲格列酮)已出現(xiàn)嚴(yán)重的副作用(例如肝中毒)。
治療所述疾病的其它方法尚在研究中。最近已引進(jìn)或還在研制的新的生物化學(xué)方法包括用α葡萄糖苷酶抑制劑(例如，阿卡波糖)和蛋白酪氨酸磷脂酸酶-1B(PTP-1B)抑制劑治療。
作為可用于糖尿病(尤其是2型糖尿病)治療的藥物的二肽基肽酶-IV(“DP-IV”或“DPP-IV”)酶的抑制劑的化合物也在研究中。例如參見WO97/40832、WO98/19998、美國專利第5,939,560，Bioorg.Med.Chem.Lett.，6(10)，1163-1166(1996)；和Bioorg.Med.Chem.Lett.，6(22)，2745-2748(1996)。DP-IV抑制劑在治療2型糖尿病中的用途是基于體內(nèi)DP-IV易于滅活胰高血糖素樣肽-1(GLP-1)和胃抑制肽(GIP)的事實(shí)。GLP-1和GIP是腸降血糖素，產(chǎn)生于消化食物時(shí)。該腸降血糖素刺激了胰島素的產(chǎn)生。DP-IV的抑制作用導(dǎo)致腸降血糖素滅活下降，這同樣也導(dǎo)致通過胰臟刺激胰島素產(chǎn)生中所述腸降血糖素的作用的提高。因此DP-IV抑制作用能引起血清胰島素水平的提高。由于所述腸降血糖素僅當(dāng)消化食物時(shí)，才由身體產(chǎn)生，因此不期望在不適當(dāng)?shù)臅r(shí)間(例如兩餐之間)DP-IV抑制作用增加胰島素的水平，從而導(dǎo)致血糖過低(低血糖癥)。因此，期望DP-IV的抑制作用能增加胰島素而不增加低血糖癥的風(fēng)險(xiǎn)，低血糖癥是與胰島素促分泌素的使用有關(guān)的危險(xiǎn)性副作用。
DP-IV抑制劑也具有本文討論的其它治療用途。目前尚未廣泛研究DP-IV抑制劑，尤其是除糖尿病外的用途。為治療糖尿病和潛在的其它疾病和癥狀，需要新的化合物以發(fā)現(xiàn)改良的DP-IV抑制劑。
發(fā)明概述本發(fā)明涉及作為二肽基肽酶-IV酶抑制劑(“DP-IV抑制劑”)的化合物，其在治療和預(yù)防涉及二肽基肽酶-IV酶的疾病(例如糖尿病，尤其是2型糖尿病)中的用途。本發(fā)明還涉及包括這些化合物的藥用組合物以及這些化合物和組合物在涉及二肽基肽酶-IV酶的疾病的預(yù)防和治療中的用途。
發(fā)明詳述本發(fā)明涉及式I化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其各單一非對映異構(gòu)體 其中Ar是未被取代或被1-5個(gè)R3取代的苯基，其中R3獨(dú)立地選自(1)鹵素，(2)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵素取代的C1-6烷基，(3)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵素取代的OC1-6烷基，和(4)CN；X選自(1)N，和(2)CR2；R1和R2獨(dú)立地選自(1)氫，(2)CN，(3)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵素取代的C1-10烷基，或未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、CN、OH、R4、OR4、NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的苯基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)，(4)未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、CN、OH、R4、OR4、NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的苯基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)，和(5)飽和或不飽和的5-或6-元雜環(huán)，它包括1-4個(gè)獨(dú)立地選自N、S和O的雜原子，該雜環(huán)未被取代或被1-3個(gè)獨(dú)立地選自氧基、OH、鹵素、C1-6烷基和OC1-6烷基的取代基所取代，其中所述C1-6烷基和OC1-6烷基為直鏈或支鏈基團(tuán)并任選被1-5個(gè)鹵素取代；R4為直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立地選自鹵素、CO2H和CO2C1-6烷基所取代的C1-6烷基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案包括式Ia化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其各單一非對映異構(gòu)體 其中X、Ar和R1如本文所定義。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案包括式Ib化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其各單一非對映異構(gòu)體 其中Ar和R1如本文所定義。
本發(fā)明的另一實(shí)施方案包括式Ic化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽和其各單一非對映異構(gòu)體
其中Ar、R1和R2如本文所定義。
本發(fā)明中，Ar優(yōu)選為未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立地選自下列的取代基所取代的苯基(1)氟，(2)溴，和(3)CF3。
本發(fā)明中，更優(yōu)選Ar選自(1)苯基，(2)2-氟代苯基，(3)3，4-二氟代苯基，(4)2，5-二氟代苯基，(5)2，4，5-三氟代苯基，(6)2-氟-4-(三氟代甲基)苯基，和(7)4-溴-2，5二氟代苯基。
本發(fā)明中，優(yōu)選R1選自(1)氫，和(2)直鏈或支鏈且未被取代或被苯基或1-5個(gè)氟取代的C1-6烷基。
本發(fā)明中，更優(yōu)選R1選自(1)氫，(2)甲基，(3)乙基，(4)CF3，
(5)CH2CF3，(6)CF2CF3，(7)苯基，和(8)芐基。
本發(fā)明中，更優(yōu)選R1選自(1)氫，(2)甲基，(3)乙基，(4)CF3，和(5)CH2CF3。
本發(fā)明中，最優(yōu)選R1為氫或CF3。
本發(fā)明中，優(yōu)選R2選自(1)氫，(2)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)氟所取代的C1-6烷基，(3)未被取代或被1-3個(gè)獨(dú)立地選自氟、OCH3和OCF3的取代基所取代的苯基。
本發(fā)明中，更優(yōu)選R2選自(1)氫，(2)甲基，(3)乙基，(4)CF3，(5)CH2CF3，(6)CF2CF3，(7)苯基，(8)(4-甲氧基)苯基，(9)(4-三氟代甲氧基)苯基，(10)4-氟代苯基，和(11)3，4-二氟代苯基。
本發(fā)明中，更優(yōu)選R2為CF3或CF2F3。
本發(fā)明中，優(yōu)選R3為F、Br或CF3。
本發(fā)明的化合物可含有一或多個(gè)不對稱中心，因而可作為外消旋體和外消旋混合物、單一對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體混合物和單一非對映異構(gòu)體出現(xiàn)。本發(fā)明的化合物在β碳原子有一個(gè)不對稱中心。根據(jù)分子中各取代基的性質(zhì)，可出現(xiàn)其它不對稱中心。這類不對稱中心各自會(huì)獨(dú)立地產(chǎn)生兩個(gè)光學(xué)異構(gòu)體，本發(fā)明范圍包括所有可能的光學(xué)異構(gòu)體和非對映體混合物和純的或部分純的化合物。本發(fā)明包括這些化合物的所有這類異構(gòu)形式。
本文所述的部分化合物含有烯烴雙鍵，除非特別說明，本發(fā)明均包括順式或反式幾何異構(gòu)體。
本文所述的部分化合物可以以互變異構(gòu)體形式存在，其通過一個(gè)或多個(gè)雙鍵位移而具有不同的氫的連結(jié)點(diǎn)。例如，酮和它的烯醇形式是酮-烯醇互變異構(gòu)體。各互變異構(gòu)體及其混合物都包括在本發(fā)明的化合物中。
式I表示未優(yōu)選立體化學(xué)的那類化合物的結(jié)構(gòu)。式Ia表示連接β氨基酸的氨基的碳原子上的優(yōu)選立體化學(xué)，從中制備這些化合物。
通過對本文公開方法的適當(dāng)改進(jìn)，如本領(lǐng)域所知的方法，可進(jìn)行這些非對映異構(gòu)體的獨(dú)立合成或其色譜分離。可通過晶狀產(chǎn)物或晶狀中間體(如必要，用含有已知絕對構(gòu)型的不對稱中心的試劑衍生)的x-射線晶體學(xué)，確定他們的絕對立體化學(xué)。
如需要，可分離所述化合物的外消旋混合物，以分離所述的單一對映異構(gòu)體?？赏ㄟ^本領(lǐng)域熟知的方法進(jìn)行拆分，例如使化合物的外消旋混合物偶合至對映體純的化合物上，以形成非對映異構(gòu)體混合物，然后通過標(biāo)準(zhǔn)方法(例如分級結(jié)晶法或色譜法)分離各非對映異構(gòu)體。采用對映體純的酸或堿的偶合反應(yīng)常常形成鹽。然后通過將所加入的手性殘基裂解，可使所述非對映異構(gòu)體衍生物轉(zhuǎn)化為純的對映異構(gòu)體。也可直接通過利用手性固定相的色譜法(該方法為本領(lǐng)域所熟知)分離所述化合物的外消旋混合物。
另外，通過本領(lǐng)域熟知的方法，通過采用已知構(gòu)型的光學(xué)純原料或試劑的立體選擇性合成，可以得到化合物的任何對映異構(gòu)體。
術(shù)語“藥學(xué)上可接受的鹽”指由藥學(xué)上可接受的、非毒性堿或酸(包括無機(jī)或有機(jī)堿和無機(jī)或有機(jī)酸)制備的鹽。衍生自無機(jī)堿的鹽包括鋁、銨、鈣、銅、鐵、亞鐵、鋰、鎂、錳鹽、二價(jià)錳、鉀、鈉、鋅鹽等。特別優(yōu)選的是銨、鈣、鎂、鉀和鈉鹽。呈固體形式的鹽可以以一種以上的晶體結(jié)構(gòu)存在，且也可呈水合物形式。衍生自藥學(xué)上可接受的有機(jī)無毒性堿的鹽包括伯、仲和叔胺的鹽，被取代胺包括天然存在的取代胺、環(huán)胺和堿離子交換樹脂，例如精氨酸、甜菜堿、咖啡因、膽堿、N，N’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙氨基乙醇、2-二甲氨基乙醇、乙醇胺、乙二胺、N-乙基-嗎啉、N-乙基哌啶、葡糖胺、氨基葡糖、組氨酸、海巴明、異丙基胺、賴氨酸、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、聚胺樹脂、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。
當(dāng)本發(fā)明的化合物為堿性時(shí)，鹽可由藥學(xué)上可接受的、無毒性酸(包括無機(jī)和有機(jī)酸)制備。這類酸包括乙酸、苯磺酸、苯甲酸、樟腦磺酸、檸檬酸、乙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、氫溴酸、氫氯酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、甲磺酸、粘酸、硝酸、雙羥萘酸、泛酸、磷酸、琥珀酸、硫酸、酒石酸、對甲苯磺酸等。特別優(yōu)選檸檬酸、氫溴酸、氫氯酸、馬來酸、磷酸、硫酸、富馬酸和酒石酸。
應(yīng)理解本文所用的有關(guān)式I化合物也包括其藥學(xué)上可接受的鹽。
本領(lǐng)域的技術(shù)人員明白，本文所用的鹵代基或鹵素包括氟、氯、溴和碘。類似地，C1-8烷基中的C1-8被定義為在直鏈或支鏈排列中具有1、2、3、4、5、6、7或8個(gè)碳原子的基團(tuán)，因此，C1-8烷基特別包括甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、異丁基、叔丁基、戊基、己基、庚基和辛基。同樣地，將C0烷基中的C0定義為直接共價(jià)鍵的存在。一個(gè)被表示為被取代基獨(dú)立取代的基團(tuán)可以獨(dú)立地被多個(gè)這類取代基所取代。本文所用的術(shù)語“雜環(huán)”包括5-或6元環(huán)系統(tǒng)，其包括在下列環(huán)系苯并咪唑基、苯并二烷基、苯并呋喃基、苯并吡唑基、苯并噻二唑基、苯并三唑基、苯并噻吩基、苯并二唑基、苯并唑基、咔唑基、咔啉基、苯并二氫吡喃基、噌啉基、呋喃基、咪唑基、二氫吲哚基、吲哚基、indolazinyl、吲唑基、異苯并呋喃基、異吲哚基、異喹啉基、異噻唑基、異唑基、1，5-二氮雜萘基、二唑基、唑基、吡嗪基、吡唑基、吡啶并吡啶、噠嗪基、吡啶基、嘧啶基、吡咯基、喹唑啉基、喹啉基、喹喔啉基、四唑基、噻二唑基、噻唑烷基、噻唑基、噻吩基、三唑基、氮雜環(huán)丁烷基、1，4-二氧雜環(huán)己烷基、六氫氮雜?；⑦哙夯?、哌啶基、吡咯烷基、嗎啉基、硫代嗎啉基、二氫苯并咪唑基、二氫苯并呋喃基、二氫苯并噻吩基、二氫苯并唑基、二氫呋喃基、二氫咪唑基、二氫吲哚基、二氫異唑基、二氫異噻唑基、二氫二唑基、二氫唑基、二氫吡嗪基、二氫吡唑基、二氫吡啶基、二氫嘧啶基、二氫吡咯基、二氫喹啉基、二氫四唑基、二氫噻二唑基、二氫噻唑基、二氫噻吩基、二氫三唑基、二氫氮雜環(huán)丁烷基、亞甲二氧基苯甲酰基、四氫呋喃基、四氫咪唑基、四氫異喹啉基和四氫噻吩基。
本發(fā)明的實(shí)施例是對公開于本實(shí)施例和本文中的化合物的使用。
本發(fā)明的具體化合物包括選自公開于下列實(shí)施例中的化合物及其藥學(xué)上可接受的鹽及其各非對映異構(gòu)體。
本發(fā)明化合物用于抑制需要這些抑制作用的患者(例如哺乳動(dòng)物)的二肽基肽酶-IV酶的方法，該方法包括給與有效量的所述化合物。本發(fā)明涉及作為抑制二肽基肽酶-IV酶活性抑制劑本文所公開的化合物的用途。
除靈長目動(dòng)物(例如人類)外，本發(fā)明的方法還可用于治療多種其它哺乳動(dòng)物。例如，可以治療的哺乳動(dòng)物包括(但不限于)牛、綿羊、山羊、馬、狗、貓、豚鼠、豬、大鼠或其它牛、綿羊、馬、犬、貓科、嚙齒目動(dòng)物或鼠科類動(dòng)物。而且，所述方法也可用于其它類動(dòng)物，例如禽類(例如，小雞)。
本發(fā)明還涉及用于抑制人和動(dòng)物的二肽基肽酶-IV酶活性的藥物的制備方法，該方法包括使本發(fā)明的化合物與藥用載體或稀釋劑相結(jié)合。
本發(fā)明方法的治療對象通常為需要抑制二肽基肽酶-IV酶活性的哺乳動(dòng)物，優(yōu)選人類，男性或女性。術(shù)語“治療有效量”指由研究者、獸醫(yī)、主治醫(yī)生或其它臨床醫(yī)師所尋求的將引起組織、系統(tǒng)、動(dòng)物或人體的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的所用化合物的量。
本文所用的術(shù)語“組合物”包括含特定量的特定成分的產(chǎn)物和任何由特定量的特定成分的組合的直接或間接得到的產(chǎn)物。涉及藥用組合物的這類術(shù)語包括含有所述活性成分和充當(dāng)載體的惰性成分的產(chǎn)物，和任何由任何兩種或多種成分的組合、絡(luò)合或聚集，或由一種或多種成分的離解，或由一種或多種成分的其它類型的反應(yīng)或相互作用的直接或間接得到的產(chǎn)物。因此，本發(fā)明的藥用組合物包括使本發(fā)明化合物和藥學(xué)上可接受的載體混合而制備的任何組合物。“藥學(xué)上可接受的”是指載體、稀釋劑或賦形劑必須與制劑的其它成分相容而不能有害于其受體。
術(shù)語“化合物的給與”和/或“給與化合物”應(yīng)被理解為向需要治療的個(gè)體提供本發(fā)明的化合物或本發(fā)明的化合物的前藥。
通過本領(lǐng)域已知的方法可證明本發(fā)明的化合物作為二肽基肽酶-IV酶活性抑制劑的用途。如下確定抑制常數(shù)。采用通過DP-IV裂解底物Gly-Pro-AMC而釋放熒光AMC離去基團(tuán)的熒光分析法進(jìn)行。描述該反應(yīng)的動(dòng)力學(xué)參數(shù)為Km＝50μM；kcat＝75s-1；kcat/Km＝1.5×106M-1s-1。在100μl總反應(yīng)體積中，典型反應(yīng)含約50pM酶、50μMGly-Pro-AMC和緩沖溶液(100mM HEPES，pH 7.5，0.1mg/ml BSA)。采用360nm激發(fā)波長和460nm發(fā)射波長，在96孔板熒光儀中連續(xù)監(jiān)測AMC的釋放。在此條件下，25℃下，30分鐘內(nèi)產(chǎn)生約0.8μMAMC。用于這類研究的酶是在桿狀病毒表達(dá)系統(tǒng)(Bac-To-Bac，GibcoBRL)中產(chǎn)生的可溶性(跨膜域和細(xì)胞質(zhì)擴(kuò)散除外)人體蛋白。發(fā)現(xiàn)Gly-Pro-AMC和GLP-1的水解動(dòng)力學(xué)常數(shù)與天然酶的文獻(xiàn)值相符。為測量化合物的解離常數(shù)，向含有酶和底物(DMSO最終濃度為1％)的反應(yīng)物中加入抑制劑的DMSO溶液。采用上述標(biāo)準(zhǔn)反應(yīng)條件，于室溫下進(jìn)行所有實(shí)驗(yàn)。為確定解離常數(shù)(Ki)，通過非線性回歸將反應(yīng)速率擬合至競爭抑制作用的Michaelis-Menton方程中。重現(xiàn)所述解離常數(shù)的誤差一般低于兩倍。
尤其是，下列實(shí)施例的化合物在上述試驗(yàn)中具有抑制二肽基肽酶-IV酶的活性，一般其IG50小于1μM。這一結(jié)果表明了所述化合物用作二肽基肽酶-IV酶活性抑制劑的固有的活性。
二肽基肽酶-IV酶(DP-IV)是一種涉及多種生物學(xué)功能的細(xì)胞表面蛋白。它具有廣泛的組織分布(腸、腎、肝、胰臟、胎盤、胸腺、脾、上皮細(xì)胞、血管內(nèi)皮、淋巴和髓細(xì)胞、血清)和清晰的組織以及細(xì)胞類型表達(dá)水平。DP-IV被確定為T型細(xì)胞激活標(biāo)志物CD26，它能在體外裂解大量免疫調(diào)節(jié)的、內(nèi)分泌的和神經(jīng)病學(xué)的肽。這表明這種肽酶在人體或其它動(dòng)物的各種疾病過程中的潛在作用。
因此，所述化合物可用于下列疾病、病癥和癥狀的預(yù)防和治療的方法中。
II糖尿病和相關(guān)疾病現(xiàn)完全確認(rèn)腸降血糖GLP-1和GIP可被DP-IV在體外快速滅活。對DP-IV(-/-)-有缺陷的小鼠的研究和初期臨床試驗(yàn)表明DP-IV抑制作用能增加GLP-1和GIP的穩(wěn)定態(tài)濃度，從而提高了葡糖耐受性。與GLP-1和GIP類似，其它涉及到葡糖調(diào)節(jié)的高血糖素系列肽也可被DP-IV(例如PACAP，高血糖素)滅活。這些肽被DP-IV滅活也可在葡萄糖體內(nèi)平衡方面發(fā)揮作用。
因此，本發(fā)明的DP-IV抑制劑可用于治療II型糖尿病和治療和預(yù)防伴隨著II型糖尿病的大量病癥，包括代謝綜合征X、反應(yīng)性低血糖和糖尿性異常脂血癥(diabetic dyslipidemia)。下文討論的肥胖癥是經(jīng)常發(fā)現(xiàn)伴隨著II型糖尿病的另一種癥狀，它對本發(fā)明的化合物的治療有響應(yīng)。
下列疾病、病癥和癥狀與2型糖尿病有關(guān)，因此可通過采用本發(fā)明化合物的治療方法來治療、控制或在某些情況下預(yù)防(1)高血糖癥，(2)低葡萄糖耐受性，(3)抗胰島素性，(4)肥胖癥，(5)質(zhì)脂疾病，(6)異常脂血癥，(7)高脂血癥，(8)高甘油三酯血癥，(9)高膽固醇血癥，(10)低HDL水平，(11)高LDL水平，(12)動(dòng)脈粥樣硬化及其后遺癥，(13)血管再狹窄，(14)腸易激惹綜合征，(15)腸炎，包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，(16)其它炎癥，(17)胰腺炎，(18)腹部肥胖癥，(19)神經(jīng)變性病，(20)視網(wǎng)膜病，(21)腎病，(22)神經(jīng)病，(23)X綜合征，(24)卵巢的雄激素過多癥(多囊性卵巢綜合征)及其它具抗胰島素性的疾病。
肥胖癥DP-IV抑制劑可用于治療肥胖癥。這是基于觀察到的GLP-1和GLP-2對食物攝入和對胃的排空的抑制作用。對人體的GLP-1的外源性給予能明顯降低食物攝取和減慢胃的排空(Am.J.Physiol.277，R910-R916(1999))。對大鼠和小鼠的GLP-1的ICV給藥對食物攝入也產(chǎn)生明顯的效果(Nature Medicine 2，1254-1258(1996))。在GLP-1R(-/-)小鼠中并沒有觀察到這種進(jìn)食抑制，這表明這些作用是通過腦GLP-1受體誘發(fā)的。與GLP-1類似，GLP-2也受DP-IV調(diào)節(jié)。類似于用GLP-1觀察到的效果，GLP-2的ICV給藥也抑制食物的攝入(Nature Medicine 6，802-807(2000))。
生長激素缺乏癥基于生長激素釋放因子(GRE)—一種刺激生長激素從垂體前葉釋放的肽，在體內(nèi)被所述的DP-IV酶裂解(WO00/56297)的假說，DP-IV抑制作用可用于生長激素缺乏癥的治療。下列資料提供了GRF是內(nèi)源性底物的證據(jù)(1)GRE在體外被有效裂解生成失活產(chǎn)物GRF[3-44](BBA 1122，147-153(1992))；(2)GRF在血漿中快速降解成GRF[3-44]；其可被DP-IV抑制劑diprotin A抑制；和(3)在人體GRE轉(zhuǎn)基因豬的血漿中發(fā)現(xiàn)GRF[3-44](J.Clin.Invest.83，1533-1540(1989))。因此，DP-IV抑制劑可用于生長素的促分泌劑所被認(rèn)定的相同征狀范圍。
腸損傷研究表明高血糖素類肽-2(GLP-2)，一種可能內(nèi)源性的DP-IV的底物，可對腸上皮呈現(xiàn)出營養(yǎng)性作用(Regulatory Peptides 90，27-32(2000))，此結(jié)論說明采用DP-IV抑制劑治療腸損傷的可能性。GLP-2的給予引起嚙齒動(dòng)物小腸質(zhì)量的增加，并減輕了結(jié)腸炎和小腸炎的嚙齒動(dòng)物模型中的腸損傷。
免疫抑制作用基于有關(guān)T細(xì)胞激活和趨化因子合成中的DP-IV酶的研究和體內(nèi)病癥模型中DP-IV抑制劑的效果，DP-IV抑制作用可用于調(diào)節(jié)免疫應(yīng)答。已表明DP-IV被確定為CD26，一種活化免疫細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記物。通過免疫細(xì)胞的分化和活化狀態(tài)調(diào)節(jié)CD26的表達(dá)。一般認(rèn)為在T細(xì)胞活化的體外模型中，CD26起共同刺激分子的作用。大量趨化因子在其倒數(shù)第二的位置上都含有脯氨酸，估計(jì)可能是保護(hù)其免于被非特異性氨基肽酶降解。已表明許多這些趨化因子被DP-IV體外處理。在幾種情況下(RANTES、LD78-β、MDC、eotaxin、SDF-1α)，裂解導(dǎo)致趨藥性和信號(hào)測定方面的活性的變化。在某些情況下，受體的選擇性也可被改變(RANTES)。在體外細(xì)胞培養(yǎng)系統(tǒng)內(nèi)已證實(shí)有大量趨化因子的多個(gè)N末端去尾形式，包括預(yù)期到的DP-IV水解產(chǎn)物。
已表明DP-IV抑制劑是移植和關(guān)節(jié)炎的動(dòng)物模型中的有效的免疫抑制劑。普羅地平(Pro-Pro-二苯基-磷酸鹽)，一種DP-IV的單向抑制劑，被證明能將大鼠心臟同種異體移植后7-14日的成活率增倍(Transplantation 63，1495-1500(1997))。已在大鼠的膠原和烷基二胺誘發(fā)的關(guān)節(jié)炎中測試了DP-IV抑制劑，結(jié)果表明在所述模型中后爪的抖動(dòng)非常顯著地減弱(Int.J.Immunopharmacology 19，15-24(1997)，Immunopharmacology 40，21-26(1998))。在許多自身免疫疾病，包括類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、多發(fā)性硬化、毒性彌漫性甲狀腺腫和甲狀腺炎中，DP-IV被上調(diào)(Immunology Today 20，367-375(1999))。
HIV感染DP-IV抑制作用可用于HIV感染或AIDS的治療或預(yù)防，因?yàn)樵S多抑制HIV細(xì)胞進(jìn)入的趨化因子是DP-IV的潛在底物(Immunology Today 20，367-375(1999))。對于SDF-1α，裂解能降低抗病毒活性(PNAS 95，6331-6(1998))。因此，期望通過抑制DP-IV穩(wěn)定SDF-1α而減少HIV感染。
血細(xì)胞生成因?yàn)镈P-IV可能涉及血細(xì)胞生成，所以DP-IV抑制作用可用于治療或預(yù)防血細(xì)胞生成。在環(huán)磷酰胺誘發(fā)的中性白細(xì)胞減少的小鼠模型中，一種DP-IV抑制劑(Val-Boro-Pro)能刺激血細(xì)胞生成(WO 99/56753)。
神經(jīng)元疾病因?yàn)樵S多與各種神經(jīng)元過程相關(guān)的肽被DP-IV體外裂解，所以DP-IV抑制作用可用于治療或預(yù)防各種神經(jīng)元病或精神病。因而，DP-IV抑制劑在治療神經(jīng)元疾病方面可能具有治療作用。Endomorphin-2、β-casomorphin和P物質(zhì)已被證明都是DP-IV的體外底物。所有情況下，體外裂解都是高效的，Kcat/Km約為106M-1s-1或更大。在大鼠的痛覺缺失電擊跳躍測試模型中，DP-IV抑制劑表現(xiàn)出顯著的作用，該作用與外源性endomorphin-2的出現(xiàn)無關(guān)(BrainResearch 815，278-286(1999))。
腫瘤侵入和轉(zhuǎn)移因?yàn)樵谡＜?xì)胞向惡性表型的轉(zhuǎn)化過程中，已經(jīng)觀察到幾種外肽酶(包括DP-IV)的表達(dá)的增加或減少，所以DP-IV抑制作用可用于治療或預(yù)防腫瘤侵入和轉(zhuǎn)移(J.Exp.Med.190，301-305(1999))。這些蛋白的上調(diào)或下調(diào)表明為組織和細(xì)胞類型的特異性。例如，已經(jīng)在T細(xì)胞淋巴瘤、T細(xì)胞急性原始淋巴細(xì)胞的白血病、細(xì)胞衍生的甲狀腺癌、基底細(xì)胞癌和乳腺癌上已觀察到增加的CD26/DP-IV表達(dá)。因此，DP-IV抑制劑可用于這類癌癥的治療。
良性前列腺肥大因?yàn)樵贐PH患者的前列腺組織中觀察到增加的DP-IV活性，所以DP-IV抑制作用可用于良性前列腺肥大的治療(Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem 30，333-338(1992))。
精液能動(dòng)性/男性避孕因?yàn)樵诰褐?，前列腺衍生的、對精液能?dòng)性起重要作用的細(xì)胞器prostatosomes具有非常高水平的DP-IV活性，所以DP-IV抑制作用可用于改變精液能動(dòng)性和用于男性避孕(Eur.J.Clin.Chem.Clin.Biochem 30，333-338(1992))。
齦炎因?yàn)樵邶l縫流體和某些與牙周病嚴(yán)重性相關(guān)的研究中發(fā)現(xiàn)DP-IV活性，所以DP-IV抑制作用可用于齦炎的治療。
骨質(zhì)疏松癥因?yàn)镚IP受體存在于成骨細(xì)胞中，所以DP-IV抑制作用可用于骨質(zhì)疏松癥的治療或預(yù)防。
本發(fā)明化合物可用于治療或預(yù)防一種或多種下列病癥或疾病(1)高血糖癥，(2)低葡萄糖耐受性，(3)抗胰島素性，(4)肥胖癥，(5)質(zhì)脂疾病，(6)異常脂血癥，(7)高脂血癥，(8)高甘油三酯血癥，(9)高膽固醇血癥，(10)低HDL水平，(11)高LDL水平，(12)動(dòng)脈粥樣硬化及其后遺癥，(13)血管再狹窄，(14)腸易激惹綜合征，(15)腸炎，包括Crohn氏病和潰瘍性結(jié)腸炎，(16)其它炎癥(17)胰腺炎，(18)腹部肥胖癥，(19)神經(jīng)變性病，(20)視網(wǎng)膜病，(21)腎病，(22)神經(jīng)病，(23)X綜合征，(24)卵巢雄激素過多癥(多囊性卵巢綜合征)，(25)II型糖尿病，(26)生長激素缺乏癥，(27)中性白細(xì)胞減少，(28)神經(jīng)元疾病，(29)腫瘤轉(zhuǎn)移，(30)良性前列腺肥大、(32)牙齦炎、(33)高血壓、(34)骨質(zhì)疏松癥，及其它可通過抑制DP-IV治療或預(yù)防的疾病。
所述化合物還可與其它藥物聯(lián)合，用于上述疾病、紊亂和癥狀的預(yù)防或治療的方法中。
本發(fā)明的化合物可與一種或多種其它藥物聯(lián)合，用于式I化合物或所述其它藥物可發(fā)揮作用的疾病或癥狀的治療、預(yù)防、抑制或緩解，其中所述藥物聯(lián)合比單一藥物更安全或更有效?？蓪⑦@些其它藥物與式I化合物同時(shí)或相繼通過一種途徑并以其常用量給藥。當(dāng)式I化合物與一種或多種其它藥物同時(shí)給藥時(shí)，優(yōu)選為含所述其它藥物和式I化合物的單位劑量形式的藥用組合物。然而，所述的聯(lián)合治療也可包括其中將式I化合物和一種或多種其它藥物在不同的交錯(cuò)療程中給藥的療法。還計(jì)劃在與一種或多種其它活性成分聯(lián)合用藥時(shí)，可使用比各自單獨(dú)用藥時(shí)的更低劑量的本發(fā)明的化合物和所述其它活性成分。因此，本發(fā)明的藥用組合物包括除含式I化合物外還含一種或多種其它活性成分的組合物。
可與式I化合物聯(lián)合用藥及或分別給藥或在同一藥用組合物中給藥的其它活性成分的實(shí)例包括，但不限于(a)其它二肽基肽酶IV(DP-IV)抑制劑；(b)胰島素敏化物包括(i)PPARγ激動(dòng)劑例如glitazones(例如曲格列酮、吡格列酮、恩格列酮、MCC-555、羅西格列酮等)和其它PPAR配體，包括PPARα/γ雙效激動(dòng)劑，例如KRP-297，和PPARα激動(dòng)劑例如非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、氯貝丁酯、非諾貝特和苯扎貝特)，(ii)雙胍類，例如二甲雙胍和苯乙雙胍，和(iii)蛋白酪氨酸磷酸酯酶-1B(PTP-1B)抑制劑；(c)胰島素或胰島素模擬物；(d)磺酰脲類和其它胰島素促分泌劑，例如甲苯磺丁脲和格列吡嗪、美格列奈和相關(guān)藥物；(e)α-葡萄糖苷酶抑制劑(例如acarbose)；(f)高血糖素受體拮抗劑，例如公開于WO 98/04528、WO99/01423、WO 00/39088和WO 00/69810的化合物；(g)GLP-1、GLP-1模擬物和GLP-1受體激動(dòng)劑例如WO00/42026和WO 00/59887公開的化合物；(h)GIP和GIP模擬物(例如WO 00/58360公開的化合物)和GIP受體激動(dòng)劑；(i)PACAP、PACAP模擬物和PACAP受體3激動(dòng)劑例如WO01/23420公開的化合物；(j)膽固醇降低劑，例如(i)HMG-CoA還原酶抑制劑(洛伐他汀、辛伐他汀、普伐他汀、氟伐他汀、阿托伐他汀、rivastatin、伊伐他汀、羅蘇伐他汀和其它他汀類藥物)，(ii)螯合劑(考來烯胺、考來替泊和交聯(lián)右旋糖酐的二烷基氨基烷基衍生物)，(iii)煙醇、煙酸或其鹽，(iv)PPARα激動(dòng)劑，例如非諾貝酸衍生物(吉非貝齊、氯貝丁酯、非諾貝特和苯扎貝特)，(V)PPARα/γ雙效激動(dòng)劑，例如KRP-297，(vi)膽固醇吸收抑制劑，例如β-谷甾醇和依澤替米貝，(vii)乙酰基CoA膽固醇?；D(zhuǎn)移酶抑制劑，例如阿伐麥布，和(Vii)抗氧化劑，例如普羅布考；(k)PPARδ激動(dòng)劑，例如公開于WO97/28149的化合物；(l)抗肥胖癥化合物，例如芬氟拉明、右芬氟拉明、芬特明、西布曲明、奧利司他、神經(jīng)肽Y5抑制劑和β3腎上腺素能受體激動(dòng)劑；(m)回腸膽汁酸轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白抑制劑；和(n)用于炎癥的藥劑，例如阿斯匹林、非類固醇消炎藥、糖皮質(zhì)類固醇、柳氮磺吡啶和環(huán)氧酶2選擇抑制劑。
上述聯(lián)合包括本發(fā)明的化合物不僅與一種其它活性化合物而且與兩種或多種其它活性化合物的聯(lián)合。非限定性實(shí)例包括具有式I的化合物與兩種或多種選自雙胍、磺酰脲類、HMG-CoA還原酶抑制劑、PPAR激動(dòng)劑、PTP-1B抑制劑、其它DP-IV抑制劑和抗肥胖癥化合物的活性化合物的聯(lián)合。
同樣地，本發(fā)明的化合物可與用于治療/預(yù)防/抑制或緩解本發(fā)明的化合物可起作用的疾病或癥狀的其它藥物聯(lián)合用藥?？蓪⑦@些其它藥物通過某種途徑并以常用量與本發(fā)明的化合物同時(shí)或相繼給藥。當(dāng)本發(fā)明的化合物與一種或多種其它藥物同時(shí)使用時(shí)，優(yōu)選除本發(fā)明化合物之外還含有這類其它藥物的藥用組合物。因此，本發(fā)明的藥用組合物包括除本發(fā)明化合物之外還含一種或多種其它活性成分的那些。
本發(fā)明化合物與第二種活性成分的重量比可以變化，其取決于各種成分的有效劑量。一般說來，將采用各自的有效劑量。因此，例如，當(dāng)本發(fā)明的化合物與其它藥物聯(lián)合用藥時(shí)，本發(fā)明化合物與其它藥物的重量比一般在約1000∶1到約1∶1000之間，優(yōu)選約200∶1到約1∶200之間。本發(fā)明化合物和其它活性成分的聯(lián)合用藥一般也會(huì)在上述范圍內(nèi)，但在每一情況下，應(yīng)使用各活性成分的有效劑量。
在所述聯(lián)合用藥中，可將本發(fā)明化合物和其它活性成分分別或同時(shí)給藥。另外，可將一種成分先于、同時(shí)于、或相繼于其它試劑的給藥時(shí)給藥。
本發(fā)明化合物可經(jīng)口服、腸胃外(例如肌內(nèi)、腹腔內(nèi)、靜脈內(nèi)、ICV、腦池內(nèi)注射或輸液、皮下注射或植入)、通過吸入噴霧、鼻腔、陰道、直腸、舌下或局部給藥途徑給藥，也可單獨(dú)或一起制成含適于各種給藥途徑的、常用無毒的、藥學(xué)上可接受的載體、輔劑和介質(zhì)的合適劑型的制劑。除治療溫血?jiǎng)游锢缧∈?、大鼠、馬、黃牛、綿羊、狗、貓、猴等外，本發(fā)明化合物也可用效地用于人體。
用于本發(fā)明化合物給藥的藥用組合物一般為單位劑型形式，并可通過制藥領(lǐng)域內(nèi)熟知的任何方法制備。所有方法都包括使所述活性成分與由一種或多種輔助成分組成的載體混合的步驟。一般說來，通過將所述活性成分與液體載體或分散均勻的固體載體或兩者均勻和緊密地混合，然后如果需要，將所述產(chǎn)物制成所需要的劑型形狀，而制備所述藥用組合物。在所述藥用組合物中，所述活性目標(biāo)化合物的量足以對疾病的病程和癥狀起到所要求的效果。本文所用的術(shù)語“組合物”包括含有特定量的特定成分的產(chǎn)物以及任何直接或間接得自于特定量的特定成分的組合的產(chǎn)物。
含所述活性成分的藥用組合物可以是適于口服的形式，例如，片劑、藥片、錠劑、水性或油性懸浮液、可分散性粉末劑或顆粒劑、乳劑、硬或軟膠囊或糖漿劑或酏劑。可根據(jù)藥用組合物制備領(lǐng)域任何已知的方法制備用于口服的組合物，這類組合物可含有選自甜味劑、矯味劑、著色劑和防腐劑的一種或多種試劑，以提供藥學(xué)上優(yōu)良和可口的制劑。片劑含有所述的活性成分，并與適用于片劑制備的、無毒的、藥學(xué)上可接受的賦形劑相混合。這些賦形劑可為例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸鈣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或藻酸；粘合劑，例如淀粉、明膠或阿拉伯膠，和潤滑劑，例如硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。所述片劑可不包衣或可通過已知技術(shù)包衣，以延緩在胃腸道中的崩解和吸收，從而提供較長期的持續(xù)作用。例如，可以使用延時(shí)原料，例如硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。還可通過美國專利4,256,108、4,166,452和4,265,874中描述的技術(shù)包衣以形成緩釋的滲透泵片劑。
口服制劑也可為硬明膠膠囊，其中將所述活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)相混合，或?yàn)檐浢髂z膠囊，其中將所述活性成分與水或油性介質(zhì)(例如花生油、液體石蠟或橄欖油)相混合。
水溶性懸液含有與適于制備水溶性懸浮液的賦劑劑相混合的所述活性藥物。這些賦形劑為懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基-丙甲基纖維素、藻酸鈉、聚乙烯基吡咯烷酮、黃芪膠和阿拉伯膠；分散劑或濕潤劑可為天然磷酯，例如卵磷酯或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇(例如十七乙烯氧基鯨蠟醇)的縮合產(chǎn)物，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯山梨糖醇單油酸酯，或環(huán)氧乙烷與衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的部分酯的縮合產(chǎn)物，例如聚乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。所述水溶性懸浮液也可含一種或多種防腐劑，例如，乙基或正丙基的對羥基苯甲酸酯，一種或多種著色劑，一種或多種矯味劑和一種或多種甜味劑，例如蔗糖或糖精。
可通過使所述活性成分懸浮于植物油(例如花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(例如液體石蠟)中配制油性懸浮液。所述油性懸浮液可含有增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或鯨蠟醇?？杉尤肴缟纤鎏鹞秳┖统C味劑以提供可口的口服制劑。這些組合物可通過加入抗氧化劑(例如抗壞血酸)保護(hù)。
適用于經(jīng)加水制備水溶性懸浮液的可分散性粉末劑和顆粒劑包含所述活性成分，并與分散劑或濕潤劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑相混合。適用的分散劑或濕潤劑和懸浮劑可通過上述提及的那些來舉例說明。也可出現(xiàn)其它賦形劑，例如甜味劑，矯味劑和著色劑。
本發(fā)明的藥用組合物也可為水包油乳化劑形式。所述油相可為植物油(例如橄欖油或花生油)或礦物油(例如液體石蠟)或這些油的混合物。適用的乳化劑可為天然膠(例如阿拉伯膠或黃芪膠)、天然磷脂(例如大豆、卵磷酯，和衍生自脂肪酸和己糖醇酸酐的酯或部分酯)(例如山梨糖醇酐單油酯)和所述部分酯與環(huán)氧乙烷的縮合產(chǎn)物(例如聚乙烯山梨糖醇酐單油酸酯)。所述乳劑也可含有甜味劑和矯味劑。
糖漿劑和酏劑可用甜味劑，例如甘油、丙二醇、山梨糖醇或蔗糖配制。這些制劑也可含有緩和劑、防腐劑和矯味劑以及著色劑。
所述藥用組合物可為滅菌注射用水溶性或油溶性懸浮液形式。根據(jù)已知的工藝，采用上述那些適用的分散劑或濕潤劑和懸浮劑，可配制這種懸浮液。所述滅菌注射制劑也可為在無毒、胃腸道外可接受的稀釋劑或溶劑中的滅菌注射溶液劑或懸浮劑，例如1，3-丁二醇中的溶液?？墒褂玫目山邮艿慕橘|(zhì)和溶劑中，有水、林格氏溶液和等滲氯化鈉溶液。另外，滅菌、精餾油也常用作溶劑或懸浮介質(zhì)。包括合成單-或二脂酰甘油酯在內(nèi)的任何溫和的、精餾油都可用于此目的。另外，脂肪酸(例如油酸)可用于注射劑的制備中。
本發(fā)明的化合物也可以以栓劑形式進(jìn)行藥物的直腸給藥。通過將所述藥物與適當(dāng)?shù)姆谴碳ば再x形劑混合制備這些組合物，該賦形劑在常溫下為固體，而在直腸溫度下為液體，因而會(huì)在直腸中溶解以釋放出所述藥物。這類原料有可可脂和聚乙二醇。
對局部用藥，可用含有本發(fā)明化合物的霜?jiǎng)④浉鄤?、凝膠劑、溶液劑或懸浮劑等。(為此，局部用藥還應(yīng)包括口腔洗滌劑和漱口劑。)本發(fā)明的藥用組合物和方法還包括其它有治療活性的上述化合物，它們一般用于上述病理學(xué)癥狀的治療中。
在治療或預(yù)防需要抑制二肽基肽酶-IV酶活性的癥狀中，適用的劑量每天每公斤患者體重水平通常為約0.01-500mg之間，可以單劑量或多劑量給藥。所述劑量水平優(yōu)選在每日約0.1-250mg/kg；更優(yōu)選在每日約0.5-100mg/kg。適用的劑量水平可為每日約0.01-250mg/kg、每日約0.05-100mg/kg，或每日約0.1-50mg/kg。在此范圍內(nèi)，所述劑量可為每日0.05-0.5、0.5-5或5-50mg/kg。對口服給藥，優(yōu)選提供片劑形式的組合物，其含1.0-1000毫克所述活性成分，根據(jù)要治療的患者的癥狀調(diào)整劑量，具體為1.0、5.0、10.0、15.0、20.0、25.0、50.0、75.0、100.0、150.0、200.0、250.0、300.0、400.0、500.0、600.0、750.0、800.0、900.0和1000.0毫克的所述活性成分?？砂疵咳?-4次的安排，優(yōu)選每日一到兩次給予所述化合物。
當(dāng)治療或預(yù)防糖尿病和/或高血糖或高甘油三酯血癥或本發(fā)明化合物可治療的其它疾病時(shí)，當(dāng)本發(fā)明化合物以約0.1毫克-約100毫克每公斤動(dòng)物體重的日劑量給藥，優(yōu)選單劑量給藥或一日二至六次的分劑量給藥，或以緩釋形式給藥時(shí)，可得到基本滿意的結(jié)果。對最大的哺乳動(dòng)物，總?cè)談┝考s為1.0毫克到約1000毫克的范圍，優(yōu)選約1毫克到約50毫克范圍。對70kg的成年人，總?cè)談┝恳话慵s為7毫克到350毫克?？烧{(diào)整該劑量方案以產(chǎn)生最佳治療應(yīng)答。
然而，應(yīng)理解任何特定患者的具體劑量水平和給藥次數(shù)可以變化，這取決于多種因素，包括所用的具體化合物的活性、該化合物的代謝穩(wěn)定性和該化合物的作用持續(xù)時(shí)間、宿主年齡、體重、總體健康情況、性別、膳食、給藥的方式和時(shí)間、排泄速度、聯(lián)合用藥情況、具體癥狀的嚴(yán)重性和宿主經(jīng)歷的治療等。
下列流程和實(shí)施例說明本發(fā)明化合物的幾種制備方法。起始原料可根據(jù)本領(lǐng)域已知或本文所述的方法制備。
采用標(biāo)準(zhǔn)肽偶合條件，隨后去保護(hù)，可從β-氨基酸中間體(例如式II化合物)和取代雜環(huán)中間體(例如式III化合物)，制備本發(fā)明化合物。這些中間體的制備描述于下列流程中。
其中Ar、X和R1如上文定義，P為適當(dāng)?shù)牡Ｗo(hù)基，例如叔-丁氧基羰基、芐氧基羰基或9-芴基甲氧基羰基。
流程1 式II化合物是市售可提供的、文獻(xiàn)中已知的化合物或可通過本領(lǐng)域技術(shù)人員熟悉的各種方法方便地制備。流程1列出了一種常用的路線。酸1可由市售提供或經(jīng)由對應(yīng)的氨基酸通過用例如碳酸氫二叔丁酯(P＝Boc)、羰基苯甲氧基(P＝Cbz)或N-(9-芴基甲氧基羰基氧基)琥珀酰亞胺(P＝Fmoc)保護(hù)方便地制備，可將酸1用氯甲酸異丁基酯和堿(例如三乙胺或二異丙基乙胺)處理，接著再用重氮甲烷處理。然后在溶劑(如甲醇或二烷水溶液)中，將得到的重氮酮用苯甲酸銀處理，然后按Sewald等，Synthesis，837(1997)的方法進(jìn)行超聲處理，得到β氨基酸II。本領(lǐng)域的技術(shù)人員明白，為制備對映體純的β氨基酸II，可用對映體純的α氨基酸1。在下列綜述中可找到這些化合物的其它制備路線E.Juaristi，Enantioselective Synthesis of β-Amino Acids，Ed.，Wiley-VCH，New York1997，Juaristi等，Aldrichimica Acta，27，3(1994)，Cole等，Tetrahedron，32，9517(1994)。
流程2
化合物III可由市售提供、文獻(xiàn)中已知的化合物或用各種本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的方法方便地制備。流程2表示一種方便的方法。例如通過用氫氣和催化劑(例如披鈀碳或氧化鉑)在溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理，還原不飽和衍生物2，以提供化合物III。
流程3 流程2中的中間體2本身可由市售獲得，文獻(xiàn)中了解，或通過本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟悉的各種方法方便地制備。流程3說明當(dāng)X為CR2時(shí)的一種此類方法。用2-鹵代酮(例如2-溴代酮4)在溶劑(例如甲醇或乙醇)中處理氨基吡嗪3，得到中間體2a。另外，為制備其中R2為H的中間體2a，可用2-溴代二甲基乙縮醛5和催化量的酸(例如鹽酸)代替中間體4。
流程4
流程4說明其中X為N的中間體2b的方便的制備方法。用肼處理氯代吡嗪6，得到肼基吡嗪7?？墒够衔?與原酸酯(例如三乙基原酸酯)縮合得到2b，或與羧酸9在多聚磷酸中在升高的溫度下縮合生成2b。
流程5 流程5說明其中X為N的化合物IIIb的另一種制備路線。根據(jù)以上所列的方法，用二氯代吡嗪10代替氯代吡嗪6制備化合物12。
然后用催化劑(例如氧化鉑)將化合物12催化氫化，得到其單鹽酸鹽形式的化合物IIIb。
流程6 流程6表示在標(biāo)準(zhǔn)肽偶合條件下，例如用1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺(EDC)、1-羥基苯并三唑(HOBT)和堿(一般為二異丙基乙胺)在溶劑(例如N，N-二甲基甲酰胺(DMF)或二氯甲烷)中，在室溫下，使中間體II和III偶合3-48小時(shí)，生成中間體13。例如保護(hù)基為Boc情況下，使用例如三氟乙酸或甲醇氯化氫，然后除去所述保護(hù)基，生成所需的胺I。如需要，通過重結(jié)晶、研磨、制備性薄層色譜法、W.C.Still等在J.Org.Chem.，43，2923(1978)所述的硅膠快速色譜法或HPLC，從不需要的副產(chǎn)物中提純所述產(chǎn)物。經(jīng)HPLC提純的化合物被分離成相應(yīng)的鹽。用同樣的方法提純中間體。
在某些情況下，在除去保護(hù)基團(tuán)前，可通過例如將X或R1上取代基處理，而將得自流程6中所述的偶合反應(yīng)的中間體13-進(jìn)一步修飾。這些處理可包括(但不限于)本領(lǐng)域的技術(shù)人員普遍知道的還原、氧化、烷基化、?；退夥磻?yīng)。
在某些情況下，可改變前述反應(yīng)流程的順序，以促進(jìn)所述反應(yīng)進(jìn)行或避免不需要的反應(yīng)產(chǎn)物。為更完全地理解本發(fā)明，提供下列實(shí)施例。這些實(shí)施例只用做說明，而不應(yīng)構(gòu)成對本發(fā)明的任何限制。
中間體1 (3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸步驟A.(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，5-二氟代苯基丙氨酸向0.5g(2.49mmol)2，5-二氟代-DL-苯基丙氨酸的5mL叔丁醇溶液中，相繼加入1.5mL 2N氫氧化鈉水溶液和543mg碳酸氫二叔丁酯。室溫下，攪拌所述反應(yīng)物16小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋。用1N鹽酸和鹽水順次洗滌有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。經(jīng)快速層析法(硅膠，二氯甲烷∶甲醇∶乙酸為97∶2∶1)純化粗產(chǎn)物，得到671mg的目標(biāo)化合物。MS 302(M+1)。
步驟B.(R，S)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-1-重氮基-4-(2，5-二氟代苯基)丁-2-酮0℃下，向2.23g(7.4mmol)(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，5-二氟代苯基丙氨酸的100mL乙醚溶液中，順次加入1.37mL(8.1mmol)三乙胺和0.931mL(7.5mmol)氯甲酸異丁酯，并在此溫度下攪拌所述反應(yīng)物15分鐘。然后加入冷卻的重氮甲烷的乙醚溶液，直到得到持續(xù)黃色溶液，然后再攪拌16小時(shí)。經(jīng)逐滴加入乙酸使該過量重氮甲烷猝滅，用乙酸乙酸稀釋所述反應(yīng)物，并順次用5％鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后真空濃縮。經(jīng)快速層析法(硅膠，己烷∶乙酸乙酯為4∶1)純化，得到1.5g重氮酮。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.03-6.95(m，1H)，6.95-6.88(m，2H)，5.43(bs，1H)，5.18(bs，1H)，4.45(bs，1H)，3.19-3.12(m，1H)，2.97-2.80(m，1H)，1.38(s，9H)。
步驟C.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸-30℃下，向2.14g(6.58mmol)(R，S)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-1-重氮基-4-(2，5-二氟代苯基)丁-2-酮的100mL甲醇溶液中順次加入3.3mL(19mmol)二異丙基乙胺和302mg(1.32mmol)苯甲酸銀。將該反應(yīng)物攪拌90分鐘，然后用乙酸乙酯稀釋，再相繼用2N鹽酸、碳酸氫鈉飽和水溶液和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)相，真空濃縮，經(jīng)制備性手性HPLC(Chiralpak AD柱，5％乙醇的己烷溶液)分離出對映異構(gòu)體，首先洗脫出的是550mg所需的(R)-對映異構(gòu)體。使該物質(zhì)溶解于50mL四氫呋喃∶甲醇∶1N氫氧化鋰水溶液(3∶1∶1)的混合物中，并于50℃下攪拌4小時(shí)。冷卻所述反應(yīng)物，用5％稀鹽酸酸化，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌混合有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后真空濃縮，生成360mg為白色泡沫狀固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.21(m，1H)，6.98(m，2H)，6.10(bs，1H)，5.05(m，1H)，4.21(m，1H)，2.98(m，2H)，2.60(m，2H)，1.38(s，9H)。
中間物2 (3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[2-氟-4-(三氟代甲基)苯基]丁酸步驟A.(2R，5S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-(2’-氟-4’-(三氟代甲基)芐基)-5-異丙基吡嗪-70℃下，向3.32g(18mmol)市售提供的(2S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪的100mL四氫呋喃溶液中，加入12mL(19mmol)的1.6M丁基鋰的己烷溶液。此溫度下攪拌20分鐘后，加入5g(19.5mmol)的2-氟-4-三氟代甲基芐基溴的20mL四氫呋喃溶液，并繼續(xù)攪拌3小時(shí)，然后將所述反應(yīng)物加熱至室溫。用水猝滅所述反應(yīng)物，真空濃縮，再用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥，然后真空濃縮。經(jīng)快速層析法純化(硅膠，0-5％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到5.5g目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.33-7.25(m，3H)，4.35-4.31(m，1H)，3.75(s，3H)，3.65(s，3H)，3.60(t，1H，J＝3.4Hz)，3.33(dd，1H，J＝4.6，13.5Hz)，3.03(dd，1H，J＝7，13.5Hz)，2.25-2.15(m，1H)，1.0(d，3H，J＝7Hz)，0.66(d，3H，J＝7Hz)。
步驟B.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基-丙氨酸甲酯向5.5g(15mmol)(2R，5S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-(2’-氟-4’-(三氟代甲基)芐基)-5-異丙基吡嗪的50mL乙腈∶二氯甲烷(10∶1)的混合物溶液中，加入80mL 1N三氟乙酸水溶液。攪拌所述反應(yīng)物6小時(shí)，真空除去有機(jī)溶劑。加入碳酸鈉直到溶液呈堿性(＞pH 8)，然后用100mL四氫呋喃稀釋所述反應(yīng)物，加入10g(46mmol)碳酸氫二叔丁酯。攪拌所生成的漿狀物16小時(shí)，真空濃縮，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，干燥，真空濃縮。經(jīng)快速層析法純化(硅膠，20％乙酸乙酯的己烷溶液)，得到5.1g目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.38-7.28(m，3H)，5.10(bd，1H)，4.65-3.98(m，1H)，3.76(s，3H)，3.32-3.25(m，1H)，3.13-3.05(m，1H)，1.40(s，9H)。
步驟C.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基丙氨酸于50℃下，將5.1g(14mmol)的(R，S)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2-氟-4-三氟代甲基)苯基丙氨酸甲酯的350mL四氫呋喃∶甲醇∶1N氫氧化鋰(3∶1∶1)混合物的溶液攪拌4小時(shí)。冷卻該反應(yīng)物，用5％稀鹽酸酸化，再用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，得到4.8g目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.45-7.38(m，3H)，4.44-4.40(m，1H)，3.38-3.33(m，1H)，2.98(dd，1H，J＝9.6，13.5Hz)，1.44(s，9H)。
步驟D.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[2-氟-4-(三氟代甲基)-苯基]丁酸0℃下，向3.4g(9.7mmol)步驟C的產(chǎn)物的60mL四氫呋喃溶液中，順次加入2.3mL(13mmol)的二異丙基乙胺和1.7mL(13mmol)氯甲酸異丁基酯，并在此溫度下攪拌所述反應(yīng)物30分鐘。再加入冷卻的重氮甲烷的乙醚溶液，直到維持黃色溶液，繼續(xù)攪拌16小時(shí)。逐滴加入乙酸使過量重氮甲烷猝滅，用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)物，順次用5％鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮。經(jīng)快速層析純化(硅膠，己烷∶乙酸乙酯為9∶1)，得到0.5g重氮酮。于0℃，向0.5g(1.33mmol)溶于100mL甲醇的重氮酮溶液中相繼加入0.7mL(4mmol)二異丙基乙胺和32mg(0.13mmol)苯甲酸銀。將該反應(yīng)物2小時(shí)攪拌，然后用乙酸乙酯稀釋再相繼用2N鹽酸、飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)相，真空濃縮，然后溶于50mL四氫呋喃∶甲醇∶1N氫氧化鋰水溶液(3∶1∶1)的混合物，再于50℃攪拌3小時(shí)。冷卻所述反應(yīng)物，用5％稀鹽酸酸化，然后用乙酸乙酯萃取。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮，得到410mg為白色泡沫狀固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ7.47-7.33(m，3H)，4.88(bs，1H)，4.26-3.98(m，1H)，3.06-3.01(m，1H)，2.83-2.77(m，1H)，2.58-2.50(m，2H)，1.29(s，9H)。
中間物3 (3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酸步驟A.(2S，5R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基-5-(2’，4’，5’三氟代芐基)-吡嗪用中間物2步驟A所述的制備方法，由3.42g(18.5mmol)的(2S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪制備目標(biāo)化合物(3.81g)。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ7.01(m，1H)，6.85(m，1H)，4.22(m，1H)，3.78(m，3H)，3.64(m，3H)，3.61(m，1H)，3.20(m，1H)，2.98(m，1H)，2.20(m，1H)，0.99(d，3H，J＝8Hz)，0.62(d，3H，J＝8Hz)。
步驟B.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸甲酯向3.81g(11.6mmol)(2S，5R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基-5-(2’，4’，5’三氟代-芐基)吡嗪的20mL乙腈溶液中，加入20mL2N鹽酸。攪拌所述反應(yīng)物72小時(shí)，然后真空濃縮。使殘余物溶于30mL二氯甲烷中，然后加入10mL(72mmol)三乙胺和9.68g(44.8mmol)碳酸氫二叔丁酯。攪拌反應(yīng)物16小時(shí)，用乙酸乙酯稀釋，然后相繼用1N鹽酸和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鈉干燥有機(jī)相，真空濃縮，經(jīng)快速層析(硅膠，己烷∶乙酸乙酯9∶1)純化，得到2.41g目標(biāo)產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ6.99(m，1H)，6.94(m，1H)，5.08(m，1H)，4.58(m，1H)，3.78(m，3H)，3.19(m，1H)，3.01(m，1H)，1.41(s，9H)。
步驟C.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸采用中間物2步驟C所述的方法，由2.41g(7.5mol)(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸甲酯制備目標(biāo)化合物(2.01g)。MS(M+1)-BOC 220.9。
步驟D.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)-丁酸-20℃下，向0.37g(1.16mmol)(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-2，4，5-三氟代苯基丙氨酸的10mL乙醚溶液中，順次加入0.193mL(1.3mmol)的三乙胺和0.18mL(1.3mmol)的氯甲酸異丁基酯，并在此溫度下攪拌該反應(yīng)物15分鐘。然后加入冷卻的重氮甲烷的乙醚溶液直到保持黃色溶液，再繼續(xù)攪拌1小時(shí)。經(jīng)逐滴加入乙酸使過量重氮甲烷猝滅，用乙酸乙酯稀釋該反應(yīng)物，然后順次用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥，真空濃縮。經(jīng)快速層析(硅膠，己烷∶乙酸乙酯3∶1)純化，得到0.36g重氮酮。向溶于12mL 1，4-二烷∶水(5∶1)的0.35g(1.15mmol)重氮酮溶液中，加入26mg(0.113mmol)苯甲酸銀。將所生成的溶液超聲振蕩2小時(shí)，然后用乙酸乙酯稀釋，順次用1N鹽酸和鹽水洗滌，經(jīng)硫酸鎂干燥并真空濃縮?？焖賹游?硅膠，二氯甲烷∶甲醇∶乙酸97∶2∶1)純化，得到401mg目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.06(m，1H)，6.95(m，1H)，5.06(bs，1H)，4.18(m，1H)，2.98(m，2H)，2.61(m，2H)，1.39(s，9H)。
中間體4 (3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(4-溴-2，5-二氟代苯基)丁酸步驟A.4-溴-2，5-二氟代芐基溴向2g(8.44mmol)4-溴-2，5-二氟代苯甲酸(根據(jù)Ishikawa等，KogyoKagaku Zasshi，第972-979頁，1970的方法制備)的20mL四氫呋喃溶液中，加入40mL 1M硼烷-四氫呋喃復(fù)合物溶液。回流加熱該反應(yīng)物64小時(shí)，冷卻到室溫，然后加入100mL甲醇。再加熱該反應(yīng)物2小時(shí)，冷卻并真空濃縮。經(jīng)快速層析(硅膠，己烷∶乙酸乙酯9∶1)純化，得到1.6g 4-溴-2，5-二氟代芐基醇。0℃下，向1.3g(5.6mmol)的4-溴-2，5-二氟代芐基醇的20mL二氯甲烷溶液中，加入2.27g(6.7mmol)四溴化碳和1.8g(6.7mmol)三苯膦。此溫度下攪拌該反應(yīng)物2小時(shí)，真空除去溶劑，用100mL乙醚攪拌所述殘余物。過濾所述溶液，真空濃縮，經(jīng)快速層析法純化(硅膠，己烷∶乙酸乙酯9∶1)，得到1.5g目標(biāo)化合物。
步驟B.(2S，5R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基-5-(4’-溴-2’，5’-二氟代芐基)吡嗪采用中間體2步驟A所述的方法，由0.865g(4.7mmol)(2S)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基吡嗪和1.5g(5.2mmol)4-溴-2，5-二氟代芐基溴制備目標(biāo)化合物(1.61g)。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.21(m，1H)，6.97(m，1H)，4.25(m，1H)，3.78(s，3H)，3.70-3.64(m，4H)，3.25-3.18(m，1H)，2.96-2.90(m，1H)，2.25-2.16(m，1H)，1.01(d，3H，J＝8Hz)，0.65(d，3H，J＝8Hz)。
步驟C.(R)-N-1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸甲酯向1.61g(4.14mmol)(2S，5R)-2，5-二氫-3，6-二甲氧基-2-異丙基-5-(4’-溴-2’，5’-二氟代芐基)吡嗪的10mL乙腈溶液中，加入10mL 2N鹽酸。攪拌該反應(yīng)物16小時(shí)，真空濃縮。使殘余物溶解于30mL二氯甲烷，然后加入5.6mL(40mmol)三乙胺和2.2g(10mmol)碳酸氫二叔丁酯。攪拌該反應(yīng)物16小時(shí)，用乙酸乙酯稀釋，然后順次用飽和碳酸氫鈉水溶液和鹽水洗滌。經(jīng)硫酸鎂干燥有機(jī)相，真空濃縮，經(jīng)快速層析法純化(硅膠，己烷∶乙酸乙酯9∶1)，得到1.22g目標(biāo)化合物。1H NMR(400MHz，CDCl3)δ7.27-7.15(m，1H)，6.98-6.93(m，1H)，5.08(bs，1H)，4.61-4.55(m，1H)，3.78(s，3H)，3.23-3.18(m，1H)，3.05-2.95(m，1H)，1.41(s，9H)。
步驟D.(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸采用中間物2步驟C所述的方法，由1.4g(3.5mmol)(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸甲酯制備目標(biāo)化合物(1.34g)。MS(M+1)380.3和382.3。
步驟E.(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(4’-溴-2’，5’-二氟代苯基)丁酸采用中間物3步驟D所述的方法，由0.6g(1.57mmol)(R)-N-(1，1-二甲基乙氧基羰基)-4-溴-2，5-二氟代苯基丙氨酸制備目標(biāo)化合物(0.36g)。MS(M+1)394.1和396.1。
實(shí)施例1 7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽步驟A.2-(三氟代甲基)咪唑并[1，2-a]吡嗪向2-氨基吡嗪(5.25g，55.2mmol)的乙醇(120mL)溶液中加入1-溴-3，3，3-三氟代乙酮(5.73mL，55.2mmol)?；亓骷訜嵯?，攪拌反應(yīng)物20小時(shí)。溶劑蒸發(fā)后，將殘留物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。用乙酸乙酯萃取含水層(三次)。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，然后濃縮。經(jīng)快速層析(硅膠，乙酸乙酯∶己烷1∶1，然后100％的乙酸乙酯)純化，得到2.35g固體的目標(biāo)產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.02(m，2H)，8.13(m，1H)，9.22(s，1H)。ESI-MS188(M+1)。
步驟B.2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪向2-(三氟代甲基)咪唑并[1，2-a]吡嗪(2.0g，10.46mmol，來自步驟A)的甲醇(100mL)溶液中加入10％披鈀碳(400mg)。在常壓氫氣及室溫下，攪拌所述混合物14小時(shí)。通過硅藻土過濾該混合物，然后用甲醇洗滌(三次)。濃縮濾液，然后經(jīng)快速層析法(硅膠，10％甲醇的乙酸乙酯溶液，然后用帶有1％氫氧化銨水溶液的15％甲醇的氯仿溶液)純化，得到1.33g固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.93(bs，1H)，3.26(t，2H，J＝5.5Hz)，3.99(t，2H，J＝5.5Hz)，4.10(s，1H)，7.16(s，1H)。ESI-MS 192(M+1)。
步驟C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪0℃下，向2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(64.3mg，0.34mmol，得自步驟B)和(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酸(105.9mg，0.34mmol)的二氯甲烷(5mL)溶液中加入HOBT(54.5mg，0.42mmol)。0℃下，攪拌該反應(yīng)物10分鐘，再加入EDC(96.6mg，0.50mmol)。移去冰浴后，于室溫下攪拌所述反應(yīng)物14小時(shí)。濃縮該混合物，經(jīng)HPLC(Gilson；YMC-Pack Pro C18柱，100×20mm I.D.；溶液梯度從10％乙腈、90％水和0.1％三氟乙酸至90％乙腈、10％水和0.1％三氟乙酸)純化，得到115mg泡沫狀固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.36(s，9H)，2.62(m，2H)，2.86(m，2H)，3.34(bs，1H)，3.86(m，1H)，4.05(m，4H)，4.85(m，1H)，5.30-5.38(m，1H)，6.97(m，3H)，7.28(m，1H)。LC/MS 489(M+1)。
步驟D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽向7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-[3，4-二氟代苯基]丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(110.8mg，0.226mmol，得自步驟C)中，加入2mL用氯化氫飽和的甲醇。室溫下攪拌所述反應(yīng)物1小時(shí)。濃縮得到89.5mg泡沫狀固體目標(biāo)化合物。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ2.97-3.10(m，4H)，3.91-4.34(m，5H)，4.90-5.04(m，2H)，7.16-7.33(m，2H)，8.01-8.08(m，1H)。ESI-MS 389(M+1)。
實(shí)施例2 7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽步驟A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪除其提純方法外，采用類似于實(shí)施例1的步驟C中所述的方法，由2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(277mg，1.45mmol，得自實(shí)施例1的步驟B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸(中間物1，416mg，1.32mmol)、DIPEA(226mg，1.58mol)、HOBT(216mg，1.98mol)和HATU(753mg，1.98mol)在DMF溶液(6ml)中制備目標(biāo)化合物。用制備性TLC(硅膠，先用20％己烷的乙酸乙酯溶液，再用10％甲醇的二氧甲烷溶液)純化，得到360mg的泡沫狀固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.35(s，9H)，2.62(m，2H)，2.88(m，2H)，3.88-4.16(m，5H)，4.73(s，1H)，4.85(m，1H)，5.26-5.39(m，1H)，6.90(bs，1H)，7.06(m，2H)，7.24(m，1H)。ESI-MS 489(M+1)。
步驟B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽采用類似于實(shí)施例1步驟D所述的方法，由用氯化氫飽和的1.5mL甲醇中的7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(349.8mg，0.72mol，得自步驟A)制備目標(biāo)化合物。蒸發(fā)溶劑，得到299mg泡沫狀固體目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ3.10-3.17(m，2H)，2.89-2.99(m，2H)，3.94-4.22(m，4H)，4.33(m，1H)，4.91-5.48(m，2H)，7.07-7.23(m，3H)，8.05(m，1H)。ESI-MS 389(M+1)。
實(shí)施例3 7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁?；鵠-2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽步驟A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1的步驟C所述的方法，由2-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(31.7mg，0.166mmol，得自實(shí)施例1的步驟B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酸(中間體3，57mg，0.166mmol)、HOBT(26.9mg，0.199mmol)和EDC(47.8mg，0.249mol)的4mL二氯甲烷溶液制備目標(biāo)化合物。用制備性TLC(硅膠，先用100％乙酸乙酯，再用10％甲醇的二氯甲烷溶液)純化，得到40mg的泡沫狀固體的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.35(s，9H)，3.00(m，2H)，3.30(m，2H)，3.93(m，1H)，4.04-4.24(m，2H)，4.23(s，1H)，4.35(m，1H)，4.97-5.48(m，2H)，7.22(m，1H)，7.44(m，1H)，8.04(m，1H)。ESI-MS 507(M+1)。
步驟B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽采用類似于實(shí)施例1的步驟D所述的方法，由用氯化氫飽和的1.5mL甲醇中的7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(38mg，0.075mmol，得自步驟A)制備目標(biāo)化合物。蒸發(fā)溶劑，得到34mg泡沫狀固體目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.59-2.66(m，2H)，2.92(m，2H)，3.89-4.16-4.22(m，5H)，4.70-4.84(m，2H)，5.42(m，1H)，6.86(m，1H)，7.06(m，1H)，7.24(m，1H)。ESI-MS 407(M+1)。
實(shí)施例4 7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸鹽步驟A.咪唑并[1，2-a]吡嗪向2-氨基吡嗪(2.0g，21.03mmol)的乙醇(40mL)溶液中加入2-溴-1，1-二甲氧基乙烷(2.5mL，21.03mmol)，再滴入5滴濃鹽酸?；亓?4小時(shí)后，蒸發(fā)溶劑。將所述殘余物在乙酸乙酯和飽和碳酸氫鈉水溶液之間分配。用乙酸乙酯萃取含水層(三次)。用鹽水洗滌合并的有機(jī)相，經(jīng)硫酸鎂干燥，濃縮。經(jīng)快速層析(100％乙酸乙酯，10％甲醇的乙酸乙酯溶液，然后10％甲醇的二氯甲烷溶液)純化，得到536g固體的目標(biāo)產(chǎn)物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ7.70(bs，1H)，7.82(bs，1H)，7.89(d，1H，J＝4.4Hz)，8.10(d，1H，J＝4.6Hz)，9.12(s，1H)。
步驟B.5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1步驟B所述的方法，由咪唑并[1，2-a]吡嗪(500mg，4.20mmol，得自步驟A)和氧化鉑(250mg)在甲醇(50mL)中制備目標(biāo)化合物。濃縮得到粘性油狀物的目標(biāo)化合物(512mg)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ3.37(t，1H，J＝5.5Hz)，4.18(t，2H，J＝5.6Hz)，4.88(s，1H)，7.27(d，J＝1.6Hz，1H)，7.33(d，1H)。
步驟C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1步驟C所述的方法，由5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(31.3mg，0.254mmol，得自步驟B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酸(80mg，mmol)、DIPEA(32.8mg，0.254mmol)、HOBT(41.2mg，0.305mmol)和EDC(73mg，0.381mmol)的5mL二氯甲烷溶液制備目標(biāo)化合物。經(jīng)HPLC(Gilson；YMC-Pack Pro C18柱，100×20mm I.D.；溶液梯度從10％乙腈、90％水和0.1％三氟乙酸至90％乙腈、10％水和0.1％三氟乙酸)純化，得到75mg粘性油狀物的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.38(s，9H)，2.05(bs，1H)，2.62(m，2H)，2.89(m，2H)，3.81-4.04(m，5H)，4.64-4.88(m，2H)，5.38(m，1H)，6.88(m，2H)，7.05(m，3H)。ESI-MS 421(M+1)。
步驟D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪，二鹽酸化物采用類似于實(shí)施例1步驟D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-[3，4-二氟代苯基]丁?；鵠-5，6，7，8-四氫咪唑并[1，2-a]吡嗪(72mg，0.171mmol，得自步驟C)在用氯化氫飽和的1.5mL甲醇中制備目標(biāo)化合物。濃縮得到66mg泡沫狀固體目標(biāo)化合物。1HNMR(500MHz，CD3OD)δ2.96-3.13(m，4H)，3.93(m，1H)，4.13(m，2H)，4.26-4.38(m，2H)，4.26-4.38(m，2H)，4.90-5.04(m，2H)，7.19-7.36(m，3H)，7.58(m，1H)。ESI-MS 321(M+1)。
實(shí)施例5 7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，二鹽酸鹽步驟A.8-氯-3-乙基-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪3-氯-2-肼基吡嗪(向采用類似于文獻(xiàn)(Huynh-Dinh等，J.Org.Chem.1979，44，1028)所述方法由2，3-二氯吡嗪和肼制備)(3.0g，20.75mmol)中，加入8mL鄰丙酸三乙酯?；亓骷訜?0小時(shí)后，使反應(yīng)液冷卻到室溫，然后過濾沉淀。經(jīng)快速層析(先用100％乙酸乙酯，再用10％甲醇的乙酸乙酯溶液)提純所述固體，得到2.73g固體的目標(biāo)產(chǎn)物。1HNMR(500MHz，CDCl3)δ1.54(t，3H，J＝7.6Hz)，3.16(q，2H，J＝7.8Hz)，7.70(d，1H，J＝4.5Hz)，7.83(d，1H，J＝4.8Hz)。
步驟B.3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，鹽酸鹽在paar振蕩器中，氫氣下(50psi)由8-氯-3-乙基-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(2.70g，14.8mmol，得自步驟A)和氧化鉑(0.4g)在200mL甲醇中反應(yīng)14小時(shí)，制備目標(biāo)化合物。經(jīng)硅藻土過濾后，再濃縮得到固體狀目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ1.36(t，3H，J＝6.0Hz)，2.84(q，2H，J＝6.0Hz)，3.70(t，2H，J＝8.0Hz)，4.28(t，2H，J＝8.0Hz)，4.06(s，2H)。ESI-MS 153(M+1)。
步驟C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1步驟C所述的方法，由3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪鹽酸鹽(400mg，2.12mmol，得自步驟B)、(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酸(668mg，2.12mmol)、DIPEA(1.1mL，4.24mmol)、HOBT(343.8mg，2.54mmol)和EDC(609.6mg，3.18mmol)在20mL二氯甲烷中制備所述標(biāo)題化合物。經(jīng)HPLC(Gilson；YMC-Pack Pro C18柱，100×20mm I.D.；溶液梯度從10％乙腈、90％水和0.1％三氟乙酸至90％乙腈、10％水和0.1％三氟乙酸)提純該粗產(chǎn)物，得到366.3mg粘性油狀物的目標(biāo)化合物。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.31-1.34(m，12H)，2.67-2.92(m，6H)，4.03-4.12(m，4H)，5.03-5.31(m，3H)，6.93(s，1H)，7.05(m，2H)。ESI-MS 450(M+1)。
步驟D.7-[(3R)-3-氨基-4-(3，4-二氟代苯基)丁?；鵠-3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，二鹽酸鹽采用類似于實(shí)施例1步驟D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(3，4-二氟代苯基)丁酰基]-3-乙基-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(30mg，0.067mmol，得自步驟C)在用氯化氫飽和的1.5mL甲醇中制備目標(biāo)化合物。蒸發(fā)溶劑得到28mg粘性油狀物的目標(biāo)化合物。1H MR(500MHz，CD3OD)δ1.45(t，3H)，2.93-3.07(m，6H)，3.90-4.31(m，5H)，5.08(m，2H)，7.16(s，1H)，7.31(m，2H)。ESI-MS 350(M+H)。
實(shí)施例6
7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，鹽酸鹽步驟A.3-(三氟代甲基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪攪拌下，將用類似于文獻(xiàn)(P.J.Nelson和K.T.Potts，J.Org.Chem.1962，27，3243，除將粗產(chǎn)物萃取入10％甲醇/二氯甲烷中，過濾，濃縮濾液，再采用硅膠、以100％乙酸乙酯再用10％甲醇的二氯甲烷作為洗脫液，快速層析提純之外)所述方法由2-氯代吡嗪和肼制備的2-肼基吡嗪(820mg，7.45mmol)、TFA(2.55g，22.4mmol)和多聚磷酸(10mL)的混合物加熱至140℃18小時(shí)。將該溶液加入到冰中，然后通過加入氫氧化銨中和。用乙酸乙酯萃取該含水溶液(3次)，用鹽水洗滌，然后經(jīng)無水硫酸鎂干燥。濃縮后，經(jīng)快速層析(硅膠，己烷∶乙酸乙酯1∶1，然后用100％乙酸乙酯)，得到固體的目標(biāo)產(chǎn)物(861mg)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ8.17-8.20(m，2H)，9.54(s，1H)。LC/MS(M+1)189。
步驟B.3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪在室溫下，在常壓氫氣下，用10％Pd/C(200mg)作為催化劑，在乙醇(10mL)中，將3-(三氟代甲基)-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(540mg，2.87mmol，得自步驟A)氫化18小時(shí)。經(jīng)Celite過濾后，濃縮得到深色油狀物。向上述油狀物中加入二氯甲烷，濾出不溶性的黑色沉淀。濃縮該濾液，得到油狀物的目標(biāo)化合物(495mg)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ2.21(br，1H)，3.29(t，2H，J＝5.5Hz)，4.09(t，2H，J＝5.5Hz)，4.24(s，2H)。LC/MS(M+1)193。
步驟C.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1步驟C所述的方法，由(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酸(中間物1，50mg，0.16mmol)和3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(30mg，0.16mmol)制備所述標(biāo)題化合物。經(jīng)制備性TLC(硅膠，先用100％乙酸乙酯，再用10％甲醇/二氯代甲烷(2遍))純化粗產(chǎn)物，得到固體狀的目標(biāo)化合物(38.1mg)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.38(s，9H)，2.57-3.05(m，4H)，3.85-4.30(m，5H)，4.90(s，1H)，4.95-5.15(m，1H)，5.22-5.40(br，1H)，6.86-7.24(m，3H)。LC/MS(M+1-t-Boc)390。
步驟D.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，5-二氟代苯基)丁?；鵠-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，鹽酸鹽采用類似于實(shí)施例1步驟D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，5-二氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(19.1mg，0.039mmol，得自步驟C)制備目標(biāo)化合物。濃縮得到固體的目標(biāo)化合物(16.1mg)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.75-3.16(m，4H)，3.86-4.35(m，5H)，4.95-5.05(m，2H)，7.03-7.20(m，3H)。LC/MS(M+1)390。
實(shí)施例7 7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，鹽酸鹽步驟A.7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪采用類似于實(shí)施例1步驟C所述的方法，由(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酸(中間物3，50.1mg，0.15mmol)和3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(39.2mg，0.20mmol)制備目標(biāo)化合物。經(jīng)制備型TLC(硅膠，100％乙酸乙酯)純化粗產(chǎn)物，得到固體的目標(biāo)產(chǎn)物(29mg)。1H NMR(500MHz，CDCl3)δ1.37(s，9H)，2.61-3.00(m，4H)，3.92-4.30(m，5H)，4.93(s，1H)，4.95-5.12(m，1H)，5.22-5.35(br，1H)，6.83-6.95(m，1H)，7.02-7.12(m，1H)。LC/MS(M+1-t-Bu)452。
步驟B.7-[(3R)-3-氨基-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪，鹽酸鹽采用類似于實(shí)施例1步驟D所述的方法，由7-[(3R)-3-[(1，1-二甲基乙氧基羰基)-氨基]-4-(2，4，5-三氟代苯基)丁酰基]-3-(三氟代甲基)-5，6，7，8-四氫-1，2，4-三唑并[4，3-a]吡嗪(22mg，0.039mmol，得自步驟A)制備目標(biāo)化合物。濃縮得到固體的目標(biāo)化合物(16.5mg)。1H NMR(500MHz，CD3OD)δ2.75-3.15(m，4H)，3.82-4.35(m，5H)，4.90-5.05(m，2H)，7.16-7.25(m，1H)，7.30-7.42(m，1H)。LC/MS(M+1)408。
基本按照實(shí)施例1-7所述的方法，制備列于表1中的化合物。
表1
盡管已通過本發(fā)明的某些具體實(shí)施方案描述和說明了本發(fā)明，但本領(lǐng)域的技術(shù)人員理解，在不背離本發(fā)明的精神和范圍下，可對本發(fā)明的方法和方案進(jìn)行各種修改、變化、修飾、替換、減少或增加。例如，可將有效劑量(而不是本文前面提出的具體劑量)看作是用上述本發(fā)明的化合物來治療哺乳動(dòng)物的任何所述癥狀的響應(yīng)的變量結(jié)果。根據(jù)并依據(jù)所選的具體活性化合物或是否含有藥物載體以及所用的制劑形式和用藥方式，可觀察到具體藥理學(xué)響應(yīng)會(huì)變化，而且這些結(jié)果中所預(yù)期的變化或差別與本發(fā)明的目的和實(shí)現(xiàn)一致。因此，計(jì)劃通過后面的權(quán)利要求書來定義本發(fā)明，并對本權(quán)利要求書作合理的廣義理解。
權(quán)利要求
1.一種用于治療非胰島素依賴型糖尿病的藥用組合物，該組合物含有下式I所示化合物或其藥學(xué)上可接受的鹽、二甲雙胍和藥學(xué)上可接受的載體 其中Ar是未被取代或被1-5個(gè)R3取代的苯基，其中R3獨(dú)立地選自(1)鹵素，(2)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵原子取代的C1-6烷基，(3)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵原子取代的OC1-6烷基，和(4)CN；X選自(1)N，和(2)CR2；R1和R2獨(dú)立地選自(1)氫，(2)CN，(3)直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)鹵原子取代的C1-10烷基，或者未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立選自鹵素、CN、OH、R4、OR4、NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基的取代基所取代的苯基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)，(4)未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立選自鹵素、CN、OH、R4、OR4、NHSO2R4、SO2R4、CO2H和CO2C1-6烷基的取代基所取代的苯基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)；R4為直鏈或支鏈且未被取代或被1-5個(gè)獨(dú)立選自鹵素、CO2H和CO2C1-6烷基的基團(tuán)所取代的C1-6烷基，其中所述CO2C1-6烷基為直鏈或支鏈的基團(tuán)。
2.權(quán)利要求1的藥用組合物，其中所述式I化合物為下式化合物 或其藥學(xué)上可接受的鹽。
全文摘要
本發(fā)明涉及二肽基肽酶－IV酶抑制劑(“DP－IV抑制劑”)的化合物，其用于治療或預(yù)防二肽基肽酶－IV酶涉及的疾病，例如糖尿病，尤其是2型糖尿病。本發(fā)明還涉及包含這些化合物的藥用組合物，和這些化合物和組合物在預(yù)防或治療二肽基肽酶－IV酶涉及的疾病方面的用途。
文檔編號(hào)A61K45/06GK1861077SQ20061007769
公開日2006年11月15日 申請日期2002年7月5日 優(yōu)先權(quán)日2001年7月6日
發(fā)明者S·D·埃蒙森, M·H·費(fèi)舍爾, D·金, M·麥科斯, E·R·帕梅, A·E·韋伯, 徐錦優(yōu) 申請人:麥克公司