專利名稱：從歐洲紅豆杉枝葉中提取分離10－去乙酰基巴卡?、蟮姆椒?br> 技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種從歐洲紅豆杉枝葉中提取分離10-去乙?；涂ㄍII的方法，特別是用有機(jī)酸的水溶液對(duì)紅豆杉枝葉進(jìn)行滲濾浸取，有機(jī)溶劑萃取后蒸干的浸取膏用乙腈溶解將10-去乙?；涂ㄍII析出的方法。
背景技術(shù)：
10-去乙?；涂ㄍII(10-DABIII)是人工半合成抗癌藥紫杉醇(Taxol)和多西紫杉醇(docetaxel)的前體原料。紫杉醇是由紫杉的樹(shù)干、樹(shù)皮或針葉中提取或半合成的有效成分，多西紫杉醇是人工合成的新化合物。它們具有較廣的抗癌譜，對(duì)順鉑、多柔比星等耐藥腫瘤細(xì)胞株有效。紫杉醇或多西紫杉醇能與腫瘤細(xì)胞微管蛋白結(jié)合，促進(jìn)微管聚合，抑制微管解聚，阻斷有絲分裂，從而抑制腫瘤生長(zhǎng)。臨床已證實(shí)紫杉醇或多西紫杉醇對(duì)晚期卵巢癌、肺癌、乳腺癌、頭頸部癌等有明確的抗腫瘤作用，目前其臨床應(yīng)用又?jǐn)U大到各軟組織癌，白血病及腸胃道癌等，紫杉醇被認(rèn)為是迄今人類發(fā)現(xiàn)的療效最好的抗癌藥。隨著紫杉醇和多西紫杉醇在臨床上的廣泛應(yīng)用，，其原料的需求量也日益增加。
由于用來(lái)提取紫杉醇的天然紅豆杉資源有限，且天然紅豆杉植物屬于國(guó)家珍稀保護(hù)植物，因而紫杉醇原料的生產(chǎn)和供應(yīng)受到限制，遠(yuǎn)遠(yuǎn)不能滿足紫杉醇臨床的應(yīng)用。現(xiàn)在人們大規(guī)模種植紅豆杉樹(shù)，從枝葉中提取10-DABIII，利用10-DABIII來(lái)制備合成紫杉醇和多西紫杉醇，以滿足臨床需求。人們研究認(rèn)為，歐洲紅豆杉枝葉中，10-DABIII含量較高，達(dá)到0.08％-0.15％左右。因而尋找一種簡(jiǎn)便快捷，成本低的從歐洲紅豆杉中提取10-DABIII方法，有很重要的意義。
目前有關(guān)10-DABIII方法大多用脂肪醇來(lái)提取原料，U.S.Pat.No.5,393,895，U.S.Pat.No.5,453,521，U.S.Pat.No.6,002,024，WO 94/07882，CN1473821A等專利介紹了用乙醇或甲醇對(duì)紫杉植物的枝葉進(jìn)行提取，得到浸取膏再通過(guò)重結(jié)晶或者色譜柱分離，得到10-DABIII及其同系物。也有一些專利文獻(xiàn)如WO 94/07881，U.S.Pat.No.5,736,366，CN1660827等報(bào)道采用大孔吸附樹(shù)脂進(jìn)行富集提取10-DABIII方法。另外還出現(xiàn)用液態(tài)二氧化碳在超臨界狀態(tài)下進(jìn)行紫杉醇和10-DABIII等同系物的提取分離方法。這些方法在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)上存在各種不利因素，成本高，對(duì)條件要求苛刻，操作不易掌握等等。而本發(fā)明目的就是提供一種從紅豆杉植物的枝葉中提取10-DABIII及其同系物的簡(jiǎn)單實(shí)用的方法。
本發(fā)明的目的可以通過(guò)以下技術(shù)方案來(lái)實(shí)現(xiàn)用5～10倍重的0.5％-3％濃度的有機(jī)酸稀溶液浸泡粉碎或未預(yù)粉碎的歐洲紅豆杉枝葉，得到的浸取液用有機(jī)溶劑提取。蒸去溶劑，得到粘狀物中加入乙腈，盡量使其溶解，得到的混合物放置冷卻析晶，得到粗品。粗品用熱甲醇溶解，過(guò)濾，除去不溶物。濾液冷卻析晶，即可得到90％以上10-去乙酰基巴卡汀III產(chǎn)品。重結(jié)晶可得98％的10-去乙?；涂ㄍII。有機(jī)酸稀水溶液采用的有機(jī)酸為檸檬酸、醋酸；有機(jī)溶劑為二氯甲烷、氯仿、乙酸乙酯。
本發(fā)明要點(diǎn)是在低濃度有機(jī)弱酸浸提得到浸取膏后，只用乙腈析晶，甲醇重結(jié)晶即可得到較高純度的10-去乙?；涂ㄍII產(chǎn)品，省去了層析分離等步驟，操作簡(jiǎn)單，對(duì)生產(chǎn)條件要求低，適用于大規(guī)模生產(chǎn)10-DABIII及其同系物。10-去乙?；涂ㄍII用HNMR進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)，含量用HPLC測(cè)定。
具體實(shí)施例方式試驗(yàn)用材料歐洲紅豆杉短枝葉，風(fēng)干。
案例1
取1Kg干燥歐洲紅豆杉枝葉，粉碎，放到下面帶控制閥的容器中，用8L1％檸檬酸水溶液浸泡12小時(shí)，打開(kāi)閥門開(kāi)始滲濾。得到浸取液為黃褐色或暗綠色。用3L的氯仿分3次提取。提取液減壓蒸千，得到黃褐色粘稠狀浸取膏14g。向浸取膏中加入50mL乙腈，加熱，混合物中有白色沉淀生成。冷卻析晶，過(guò)濾得到1.5克固體.。將得到的固體用20ml左右甲醇加熱溶解，趁熱快速過(guò)濾。濾液冷卻析晶。過(guò)濾得到1.2克10-DABIII的白色晶體。
案例2取1Kg干燥歐洲紅豆杉枝葉，不粉碎，放到下面帶控制閥的容器中，用8L 0.5％乙酸水溶液浸泡12小時(shí)，打開(kāi)閥門開(kāi)始滲濾。得到浸取液為黃色到黃褐色。用3L的氯仿分3次提取。提取液減壓蒸干，得到黃褐色粘稠狀浸取膏15g。向浸取膏中加入50mL乙腈，加熱，混合物中有白色沉淀生成。冷卻析晶，過(guò)濾，得到1.3克濾餅，用20ml左右甲醇加熱溶解，趁熱快速過(guò)濾。濾液冷卻析晶。過(guò)濾干燥，得到1.1克10-DABIII的白色晶體。
案例3取100Kg干燥歐洲紅豆杉枝葉，不粉碎，放到下面帶控制閥的2T浸提容器中，用800L1％檸檬酸水溶液浸泡24小時(shí)，打開(kāi)閥門開(kāi)始滲濾。得到浸取液為黃色到黃褐色。用300L的氯仿分3次提取。提取液減壓蒸干，得到深褐色粘稠狀浸取膏。向浸取膏中加入5L乙腈，加熱，機(jī)械攪拌，冷卻析晶，過(guò)濾，得到濾餅用3L左右甲醇加熱溶解，趁熱快速過(guò)濾。濾液冷卻析晶。過(guò)濾干燥得到約116克10-DABIII的白色晶體。
權(quán)利要求
1.一種從紅豆杉提取10-去乙?；涂ㄍII的方法，用0.5％-3％濃度的有機(jī)弱酸水溶液浸取，有機(jī)溶劑提取浸取液，蒸干溶劑，浸取膏用乙腈析晶，甲醇重結(jié)晶。
2.依權(quán)利要求1所述，其特征在于紅豆杉枝葉是歐洲紅豆杉(TaxusBaccata)。
3.依權(quán)利要求1所述，其特征是有機(jī)弱酸水為檸檬酸或乙酸水溶液，濃度范圍0.5％-3％；用來(lái)提取浸取液的有機(jī)溶劑為氯仿、二氯甲烷或者乙酸乙酯。
4.依權(quán)利要求1所述，其特征在于用乙腈溶解濃縮浸取膏，同時(shí)將10-去乙?；涂ㄍII從濃縮浸取膏液中析出，得到粗品。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種從歐洲紅豆杉提取10－去乙?；涂ㄍII(10－DAB)(10－deacetyl baccatinIII)的方法。用0.5％－3％濃度的有機(jī)弱酸水溶液浸取粉碎或未預(yù)粉碎的紅豆杉枝葉。得到的浸取液用氯仿、二氯甲烷或者乙酸乙酯提取。蒸去溶劑，得到粘狀物中加入乙腈，盡量使其溶解，得到的混合物放置冷卻析晶，得到粗品。粗品用熱甲醇溶解，過(guò)濾，除去不溶物。濾液冷卻析晶，即可得到90％以上10－去乙?；涂ㄍII產(chǎn)品，進(jìn)一步重結(jié)晶可得純度98％。本發(fā)明操作簡(jiǎn)單，流程短。溶劑可回收套用，成本低。
文檔編號(hào)A61K36/13GK1903849SQ20061008928
公開(kāi)日2007年1月31日 申請(qǐng)日期2006年8月15日 優(yōu)先權(quán)日2006年8月15日
發(fā)明者肖虎, 韓見(jiàn)生 申請(qǐng)人:北京諾瑞醫(yī)藥技術(shù)有限公司