專(zhuān)利名稱(chēng)：Bmp-2蛋白膠原水溶液及制法和在植骨材料中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種BMP-2蛋白膠原水溶液及制備方法及其在植骨材料中 的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
所說(shuō)的BMP—2蛋白，是一種對(duì)骨生長(zhǎng)和修復(fù)有明顯生物活性的細(xì)胞 因子——骨形態(tài)發(fā)生蛋白(Bone Morphogenetic Protein, BMP) ， BMP既 是多功能形態(tài)發(fā)生因子，同時(shí)又具有突出的誘骨成骨活性，具有巨大的基 礎(chǔ)研究?jī)r(jià)值和廣闊的臨床應(yīng)用前景。到目前為止，已發(fā)現(xiàn)二十種BMP，分 別命名為BMP-1， BMP-2，...。
BMP-2可從動(dòng)物組織內(nèi)提純(p-BMP2),也可用基因工程構(gòu)建重組細(xì)胞 表達(dá)合成(rhBMP-2)。如在1979年 Urist [UAnn Thorac Surg ， 1990;49(6):864-5]領(lǐng)導(dǎo)的小組率先從兔脫鈣骨中成功地分離純化了兔的 MP-2，于1982年從牛骨中提取出牛骨形態(tài)發(fā)生蛋白(bBMP)， 1987年Urist [Clin Orthop Relat Res.， 1987(214):295-304]建立了一套從人及牛骨中提取 BMP的標(biāo)準(zhǔn)步驟。目前，pBMP—2大多從牛、豬、羊、馬、兔、鼠等動(dòng)物 的正常骨中提取。天津中津藥業(yè)股份有限公司生產(chǎn)的金世植骨靈®重組 合異種骨(RBX)中的成骨誘導(dǎo)因子就是從牛骨中提取，然后再同牛骨基 質(zhì)復(fù)合而成，用于治療骨折延遲連接、不連接和骨缺損治療。
利用基因工程方法生產(chǎn)人BMP-2，不僅可保證大量生產(chǎn)，還可避免免 疫排斥反應(yīng)，是極具發(fā)展前景和吸引力的方法。自1988年Wozney等以牛骨為來(lái)源的BMP—2基因,并在重組大腸桿菌中成功表達(dá)后，基因工程大量 生產(chǎn)人的BMP—2也就成為可能(WozneyJM， Rosen V， Celeste AJ， etal, Novel regulators of bone formation:molecular clones and activities, science, 1988;242(4885):1525 — 34)。目前，用于表達(dá)BMP-2基因的系統(tǒng)既有真核， 也有原核細(xì)胞，兩種表達(dá)系統(tǒng)各有優(yōu)缺點(diǎn)。
BMP—2蛋白，可以與植骨材料組合，用于骨生長(zhǎng)和修復(fù)。但是，無(wú)論 是天然提取的BMP—2蛋白，還是原核基因表達(dá)的BMP-2蛋白，在一般緩 沖液中不能溶解，只能溶解在高濃度尿素或鹽酸胍中。而尿素或鹽酸胍不 可能在體內(nèi)使用，這就給該藥物的臨床使用以及與植骨材料的復(fù)合帶來(lái)極 大困難。這也是目前國(guó)內(nèi)外研究BMP-2應(yīng)用技術(shù)的難題之一，極大的限制 了 BMP—2蛋白在臨床上的應(yīng)用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)一種BMP-2蛋白膠原水溶液，以克 服現(xiàn)有技術(shù)存在的上述缺陷。
本發(fā)明需要解決的另一個(gè)技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)所述BMP-2蛋白膠原水溶液 的制備方法。
本發(fā)明再一個(gè)需要解決的技術(shù)問(wèn)題是公開(kāi)BMP-2蛋白膠原水溶液在植 骨材料中的應(yīng)用。
本發(fā)明所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液中
BMP-2蛋白的濃度為10mg 20mg/ml，膠原的重量濃度為0.5~5%，優(yōu) 選1 3%，特別優(yōu)選1%，以及包括使所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液的pH 為3—6的pH調(diào)節(jié)劑；
所說(shuō)的BMP-2蛋白，選自從動(dòng)物組織中提取的天然BMP-2或原核基因 表達(dá)的BMP-2蛋白；
術(shù)語(yǔ)"膠原"指的是從牛或豬的骨組織或筋腱中提取純化的膠原蛋白，純 度應(yīng)達(dá)到電泳純度。
所說(shuō)的pH調(diào)節(jié)劑選自稀釋的冰醋酸或鹽酸中的一種，重量濃度為5 30%;
本發(fā)明的BMP-2蛋白膠原水溶液的制備方法包括如下步驟
按照上述的比例，將BMP-2干粉與膠原水溶液攪拌混合，加入pH調(diào) 節(jié)劑調(diào)節(jié)pH至3—6，獲得所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液；膠原水溶液的 重量濃度為0.5~5%，優(yōu)選1 3%，特別優(yōu)選1%;
本發(fā)明所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液，可以與植骨材料復(fù)合，以組合 物的形式，對(duì)需要進(jìn)行植骨治療。
所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液與植骨材料復(fù)合形成的組合物中， BMP-2蛋白膠原水溶液與植骨材料的比例根據(jù)不同的植骨材料而定；
動(dòng)物試驗(yàn)證明，所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液無(wú)毒性，與所說(shuō)的植骨 材料復(fù)合后，可以采用常規(guī)的方法對(duì)患者進(jìn)行治療。
本發(fā)明很好的解決了 BMP-2的溶解問(wèn)題，從而解決了與各種材料難以 復(fù)合難題。膠原是抗原性極低的蛋白，而且具有結(jié)合BMP-2，促進(jìn)BMP-2 活性的作用，因此在體內(nèi)與BMP-2復(fù)合使用不僅不會(huì)帶來(lái)藥物的副作用， 而且有利于BMP-2活性的發(fā)揮。
具體實(shí)施例方式
實(shí)施例1將BMP-2干粉與重量濃度為1%的膠原水溶液攪拌混合，加入重量濃 度為10%的鹽酸調(diào)節(jié)pH至6，獲得所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液； BMP-2蛋白膠原水溶液中
BMP-2蛋白的濃度為20mg/ml， BMP-2蛋白選自從動(dòng)物組織中提取的 天然BMP-2。
實(shí)施例2
將BMP-2干粉與重量濃度為3%的膠原水溶液攪拌混合，加入重量濃 度為25%的冰醋酸調(diào)節(jié)pH至3，獲得所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液； BMP-2蛋白膠原水溶液中 BMP-2蛋白的濃度為10mg/ml; BMP-2蛋白，選自從動(dòng)物組織中提取的天然BMP-2。
權(quán)利要求
1. 一種BMP-2蛋白膠原水溶液，組分和濃度為BMP-2蛋白的濃度為10mg～20mg/ml，膠原的的重量濃度為0.5～5％。
2. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的BMP-2蛋白膠原水溶液，其特征在于，所說(shuō) 的BMP-2蛋白，選自從動(dòng)物組織中提取的天然BMP-2或原核基因表達(dá)的 BMP-2蛋白。
3. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的BMP-2蛋白膠原水溶液，其特征在于，膠原 的的重量濃度為1 3%。
4. 根據(jù)權(quán)利要求3所述的BMP-2蛋白膠原水溶液，其特征在于，膠原 的重量濃度為1%。
5. 根據(jù)權(quán)利要求l所述的BMP-2蛋白膠原水溶液，其特征在于，所說(shuō) 的pH調(diào)節(jié)劑選自稀釋的冰醋酸或鹽酸中的一種。
6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的BMP-2蛋白膠原水溶液的制備方法，其特征 在于，包括如下步驟按照比例，將BMP-2干粉與膠原水溶液攪拌混合， 加入pH調(diào)節(jié)劑調(diào)節(jié)pH至3 — 6，獲得所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液。
7. 權(quán)利要求1或2所述的BMP-2蛋白膠原水溶液在制備植骨材料中的 應(yīng)用。
全文摘要
本發(fā)明公開(kāi)了一種BMP-2蛋白膠原水溶液及制備方法及其在植骨材料中的應(yīng)用。所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液中BMP-2蛋白的濃度為10mg～20mg/ml，膠原的重量濃度為0.5～5％，優(yōu)選1～3％，特別優(yōu)選1％和使所說(shuō)的BMP-2蛋白膠原水溶液的pH為3-6的pH調(diào)節(jié)劑；本發(fā)明很好的解決了BMP-2的溶解問(wèn)題，從而解決了與各種材料難以復(fù)合難題。膠原是抗原性極低的蛋白，而且具有結(jié)合BMP-2，促進(jìn)BMP-2活性的作用，因此在體內(nèi)與BMP-2復(fù)合使用不僅不會(huì)帶來(lái)藥物的副作用，而且有利于BMP-2活性的發(fā)揮。
文檔編號(hào)A61L27/38GK101204593SQ200610147609
公開(kāi)日2008年6月25日 申請(qǐng)日期2006年12月20日 優(yōu)先權(quán)日2006年12月20日
發(fā)明者丁紅梅, 劉農(nóng)樂(lè), 王會(huì)信, 紹寧生 申請(qǐng)人:上海海泰藥業(yè)有限公司