專利名稱：一種由丹參和紅景天制成的藥物組合物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種由丹參和紅景天或丹參提取物和紅景天提取物制成的藥物組合物，以及含有該藥物組合物的制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
心腦血管疾病一直號(hào)稱威脅人類健康的頭號(hào)殺手，據(jù)有關(guān)調(diào)查報(bào)告顯示，我國每年死于心腦血管病的人有300多萬，占我國每年總死亡人數(shù)的50％，而患病幸存下來的人75％不同程度喪失勞動(dòng)能力，4％重殘。特別是其發(fā)病和死亡的年齡日益呈年輕化趨勢，如何有效防治也就引起人們的高度重視。
心腦血管疾病包括冠心病、心絞痛、心肌梗塞，瘀血型肺心病，缺血性腦病、腦血栓、高血壓、高血脂等。這些疾病的主要發(fā)病原因是動(dòng)脈硬化造成管腔狹窄、管道阻塞，從而導(dǎo)致心腦供血不足，引起頭沉、頭暈、頭痛、胸悶等癥狀，嚴(yán)重者可導(dǎo)致腦中風(fēng)及心肌梗塞的發(fā)生。心腦缺血后影響能量代謝，繼發(fā)乳酸堆積、鈣超載、自由基損傷等多種變化。多靶點(diǎn)逆轉(zhuǎn)或改善這些變化，提高綜合療效是藥物治療的重要目標(biāo)。
丹參為唇形科植物丹參Salvia miltiorrhiza Bge.的干燥根及根莖。味苦，性微寒，歸心、肝經(jīng)，有祛瘀止痛、活血通經(jīng)、清心除煩的功效，用于月經(jīng)不調(diào)、經(jīng)閉通經(jīng)、胸腹刺痛、熱痹疼痛、瘡瘍腫痛、心煩不眠、肝脾腫大、心絞痛等癥。丹參原植物為多年生直立草本，主要分布于我國東北、華北、華東以及陜西等地，其它省區(qū)常有栽培。它具有多方面的藥理作用對心血管系統(tǒng)可增加冠脈流量，降低心肌興奮性和傳導(dǎo)性，改善微循環(huán)，抗血小板的聚集和血栓的形成，使血液粘度下降，抗氧化，增加耐氧能力，抗菌消炎，改善腎功能，對腦組織缺血和在灌注損傷的保護(hù)等作用。丹參的有效成分可分為脂溶性的和水溶性的，其中，脂溶性成分有丹參酮I、丹參酮IIA、丹參酮IIB、隱丹參酮等；水溶性成分有丹參素鈉、原兒茶酸、原兒茶醛、丹酚酸A、丹酚酸B、丹酚酸C等。丹參總酚酸為丹參活血化瘀的有效成分，其中丹酚酸B的作用最強(qiáng)。
紅景天為景天科Crassulaceae植物大花紅景天Rhodiola crenulata(Hook.f.et Thoms.)H.Ohba的干燥根及根莖。味甘、苦，性平，歸肺、心經(jīng)，有益氣活血、通脈平喘的功效，用于氣虛血瘀、胸痹心痛、中風(fēng)偏癱、倦怠氣喘等癥。紅景天原植物為多年生草本或亞灌木植物，主要分布在前蘇聯(lián)地區(qū)以及我國東北、華北、西北及西南等高寒地區(qū)。我國紅景天資源豐富，種類眾多，約有73種，目前研究較多的景天科紅景天屬植物，具體選自玫瑰紅景天Rhodiola rosea，大花紅景天Rhodiola crendata，棱葉紅景天Rhodiola henryi，高山紅景天Rhodiola sachlinensis，長鞭紅景天Rhodiola fasskisa，菱葉紅景天Rhodiola henryi，狹葉紅景天Rhodiola kirilowii，喜馬紅景天Rhodiola himalensis，圣地紅景天Rhodiola saera，裂紅紅景天Rhodiola quadtifida，云南紅景天Rhodiola yunnanensis，大紫紅景天Rhodiola atropupurea，互生紅景天Rhodiola alterna，帕米爾紅景天Rhodiola pantiro。《神農(nóng)本草經(jīng)》中紅景天被列為藥中上品，無毒，多服久服不傷人，有“輕身益氣”之功效。近年來，為綜合利用紅景天屬藥用植物資源，開展了廣泛的研究?，F(xiàn)代研究表明，紅景天具有顯著的抗衰老、抗輻射傷害等作用。近年的研究結(jié)果表明紅景天在心腦血管疾病的防治方面亦具有獨(dú)特的作用紅景天可以降低心肌耗氧量和耗氧指數(shù)，拮抗心率失常，劑量增大還能降低冠狀動(dòng)脈阻力，但是對冠脈血流量無顯著影響，并且還具有一定的降低血壓和減慢心跳速率的作用，還可以抑制血小板聚集和抗體外血栓形成；對心肌缺氧引起的心肌損傷者和腦血管阻塞引起的腦缺氧者有著良好的治療保護(hù)作用。
利用丹參與紅景天的相互作用，配伍組方，用于制備治療心腦血管疾病等方面的藥物，尚未見報(bào)道。

發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供一種由丹參和紅景天制成的治療心腦血管疾病的藥物，經(jīng)過發(fā)明人的大量勞動(dòng)證實(shí)二者有協(xié)同增效的作用，其重量配比份數(shù)為丹參100-1000份、紅景天25-300份。進(jìn)一步優(yōu)選為丹參250-750份、紅景天50-150份。
上述的丹參和紅景天可分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和藥用輔料混合加工制成制劑。
本發(fā)明藥物還可以由丹參提取物、紅景天提取物制成，其優(yōu)選重量配比為1∶0.01～20，進(jìn)一步優(yōu)選的配比為1∶0.02～10。其中丹參提取物的主要有效成分為丹參總酚酸，其含量優(yōu)選不低于50％，最好不低于70％，其中的丹酚酸B含量最好不低于30％；紅景天提取物的主要有效成分為總酚和/或多糖，其含量最好不低于50％，紅景天苷的含量最好不低于3％。
以上組成是按重量比作為配比的，在生產(chǎn)時(shí)可按照相應(yīng)比例增大或減小，如大規(guī)模生產(chǎn)可以以千克為原料，或以噸為單位，小規(guī)模生產(chǎn)也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。
以上重量配比的比例是經(jīng)過科學(xué)篩選得到的，對于特殊病人，可以相應(yīng)調(diào)整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
丹參和紅景天分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和藥用輔料混合加工制成任何一種制劑。本發(fā)明提供了上述丹參和紅景天的制備方法，但不僅限于下述工藝丹參的制備工藝丹參可以通過水提酸沉、醇提、水提醇沉、或水提過柱等多種方式制備，本發(fā)明對丹參的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，如下取丹參藥材粗粉，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。殘?jiān)覲H值2的酸水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用4倍柱體積的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，并真空干燥，即得。
通過上述工藝制備的丹參提取物，得率為1.5～2％，其中有效成分為丹參總酚酸，含量不低于70％，其中丹酚酸B含量不低于30％。
紅景天的制備工藝紅景天可以通過水提醇沉、醇浸后醇沉、醇提乙酸鉛沉淀分離、醇浸后微波破壁、醇浸后絮凝、醇提殼聚糖吸附制備，本發(fā)明對紅景天的提取工藝進(jìn)行了優(yōu)選，但不僅限于下述制備工藝1、紅景天總酚的制備工藝一取紅景天藥材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小時(shí)，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂后，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得紅景天提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物中紅景天苷含量不低于3％，總酚的含量不低于50％，得率為10～20％。
必要時(shí)還可進(jìn)一步精制將上述得到的紅景天提取物用適量水溶解后，加于已事先處理好的大孔樹脂柱上，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧干燥，得紅景天提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物中紅景天苷含量不低于10％，總酚的含量不低于50％，得率為1～5％。
工藝二取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用半量石油醚提取三次，棄去石油醚，再用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
工藝三紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，取濃縮液，上大孔樹脂柱或聚酰胺柱，先用濃縮液重量30倍量的水洗脫，棄去洗脫液，再用30倍量80％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
工藝四取紅景天藥材，加60％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使乙醇含量為80％，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，濾液減壓回收乙醇，真空干燥或噴霧干燥，即得?；蛘邔V液減壓回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚不低于50％。
2、紅景天多糖的制備取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時(shí)，第二次加10倍量，回流2小時(shí)，提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為4～6％，含紅景天苷不低于3％，多糖不低于50％。
3、紅景天總酚和多糖的制備工藝一取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時(shí)，第二次加10倍量，回流2小時(shí)。提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10。分成兩份，一份用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物A；另一份加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得提取物B；將提取物A和提取物B合并即得總提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝二取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加2倍量水，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，用等量正丁醇提取四次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于4％，總酚和多糖不低于50％。
工藝三取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，提取液濾過，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物C；藥渣加10倍量水提取三次，每次2小時(shí)，合并濾液，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇至含醇量達(dá)85％，靜置24小時(shí)以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物D；合并提取物C和提取物D即得總提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為7～9％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝四紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，上聚酰胺柱，先用水洗脫，再用80％乙醇洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，真空干燥或噴霧干燥，得提取物E；水洗脫液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇至含醇量達(dá)90％，靜置24小時(shí)以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，得提取物F；合并提取物E和提取物F，即得總提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
工藝五取紅景天藥材，加70％乙醇提取三次，第一次加10倍量，回流1小時(shí)，第二次加8倍量，回流1小時(shí)，第三次加8倍量，回流1小時(shí)，合并提取液，過濾，濾液回收乙醇，并減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液加2倍量水，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，過濾，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，濃縮液用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物G；水液加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，靜置24小時(shí)以上，過濾，沉淀物洗滌，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物H；合并提取物G和提取物H即得總提取物。通過本工藝制得的紅景天提取物得率為6～8％，含紅景天苷不低于3％，總酚和多糖不低于50％。
本發(fā)明的另一目的在于提供一種用于制備治療心腦血管疾病的藥物。本發(fā)明藥物可以降低心肌耗氧量和耗氧指數(shù)，拮抗心率失常；可以抑制血小板聚集，降低血液粘度，改善血液流變學(xué)和微循環(huán)；改善心臟供血功能，降低腦血管阻力，增加腦血管流量，改善腦微循環(huán)。主要用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞、血虛型心功能不全、缺血性腦血管疾病，以及中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥等。
上述藥物可以制成任何一種藥劑學(xué)上可以接受的劑型。優(yōu)選注射劑和常用口服制劑。
用于腸胃外給藥時(shí)，可將其制成注射劑，注射劑系指藥物制成的供注入體內(nèi)的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，包括注射液、注射用無菌粉末和注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內(nèi)用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，其標(biāo)示裝量可以為0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供靜脈滴注用的大體積注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，無菌粉末可以用溶媒結(jié)晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
用于口服給藥時(shí)，可將其制成常規(guī)的固體制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑和口服溶液劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑；片劑以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質(zhì)囊材中的固體制劑；膠囊劑依據(jù)其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑；顆粒劑可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當(dāng)方法制成的球狀或類球狀固體制劑；丸劑包括滴丸、糖丸、小丸等?？诜芤簞┫抵杆幬锶芙庥谶m宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。
本發(fā)明藥物與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有下述優(yōu)點(diǎn)(1)首次提供了一種丹參和紅景天的藥物組合物用于制備治療心腦血管疾病，滿足了臨床急需。
(2)對本發(fā)明藥物進(jìn)行了結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響、大鼠血液流變學(xué)的影響、大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響藥效篩選實(shí)驗(yàn)，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參提取物與紅景天提取物配比為1∶0.01～20，丹參和紅景天的配比為丹參(0.1g～1g)和紅景天(25mg～0.3g)時(shí)協(xié)同作用顯著。
(3)對本發(fā)明藥物的相互作用和配伍組方進(jìn)行了藥理學(xué)研究，發(fā)現(xiàn)了由丹參與紅景天制成的組合物，可以降低大鼠試驗(yàn)性心肌梗死面積；顯著抗血小板聚集；顯著減小心肌梗塞范圍；對家兔腦缺血再灌注損傷具有明顯的保護(hù)作用；降低外周血管阻力，增加心肌供血，降低左室舒張末期壓，降低心臟前負(fù)荷等，明顯改善犬血液流動(dòng)力學(xué)。本發(fā)明實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證明，丹參與紅景天合并用藥呈協(xié)同作用，藥效明顯增強(qiáng)。其結(jié)果是本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員所意想不到的；(4)本發(fā)明藥物可以以原料或提取物直接投料，制備工藝簡單，可以使不同批次藥品間質(zhì)量差異小，藥品質(zhì)量更均勻穩(wěn)定；(5)進(jìn)行的穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)表明本發(fā)明藥物的注射液各項(xiàng)指標(biāo)均比較穩(wěn)定，保證了臨床用藥的安全；(6)本發(fā)明藥物療效確切，具有廣泛的應(yīng)用前景。
以下通過試驗(yàn)例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明所述藥物的有益效果，丹參與紅景天組合物以下簡稱DH，丹參提取物和紅景天提取物的組合物以下簡稱DHT。丹參(丹參提取物)的制備源于實(shí)施例1，紅景天(紅景天提取物)的制備源于實(shí)施例2。
實(shí)驗(yàn)例1 DHT對大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重202～225g，130只，每組10只，隨機(jī)分為13組。
供試品丹參提取物，自制，得率為1.98％，丹參總酚酸含量74.6％，丹酚酸B含量39.8％；紅景天提取物，自制，得率為2.97％，其中紅景天苷的含量為14.5％，總酚的含量為58.6％；丹參提取物注射液，自制；紅景天提取物注射液，自制；DHT注射液，(不同配比)，自制；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為13組生理鹽水對照組；丹參提取物組；紅景天提取物組；DHT注射液組丹參提取物+紅景天提取物(1∶0.01、1∶0.05、1∶0.1、1∶0.3、1∶0.5、1∶1、1∶2、1∶5、1∶10、1∶20)。各藥物均以生理鹽水稀釋至所需濃度，尾靜脈注射給藥。
大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗死模型動(dòng)物戊巴比妥腹腔注射麻醉(45mg/kg)仰位固定。氣管插管，在胸骨左側(cè)作2cm的縱切口，近胸骨側(cè)剪斷第3、第4肋軟骨，打開胸腔后，連接人工呼吸機(jī)(通氣量2ml/100g，50次/min)。剪開心包膜，暴露心臟，冠狀動(dòng)脈左前降支根部穿線以備結(jié)扎，記錄標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖，穩(wěn)定10分鐘，結(jié)扎冠狀動(dòng)脈左前降支，關(guān)閉胸腔。用針筒吸出動(dòng)物喉部分泌物，使動(dòng)物恢復(fù)自主呼吸。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈15min后，靜脈給藥。結(jié)扎冠狀動(dòng)脈4小時(shí)后，摘取心臟，在結(jié)扎線以下橫切5片，進(jìn)行氯化硝基四氮唑藍(lán)(N-BT)染色，計(jì)算心肌梗死區(qū)面積占心室及心臟面積的百分比，并進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理(t檢驗(yàn))。結(jié)果見表1。
表1 DHT大鼠實(shí)驗(yàn)性心肌梗塞范圍的影響(X±SD)
注*p＜0.05，**p＜0.01與生理鹽水對照組相比；#p＜0.05，與丹參提取物組或紅景天提取物組相比；結(jié)論與生理鹽水對照組相比，各給藥組都具有明顯的抗心肌缺血作用(p＜0.05和p＜0.01)，其中丹參提取物與紅景天提取物配伍的各個(gè)配比(1∶0.01～20)組的療效優(yōu)于單用丹參提取物或紅景天提取物(p＜0.05)，提示兩藥配伍有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例2 DHT抗血小板聚集作用受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，體重205～223g，80只，每組10只，隨機(jī)分為8組。
供試品丹參提取物，自制，得率為1.98％，丹參總酚酸含量74.6％，丹酚酸B含量39.8％；紅景天提取物，自制，得率為2.97％，其中紅景天苷的含量為14.5％，總酚的含量為58.6％；丹參提取物注射液，自制；紅景天提取物注射液，自制；DHT注射液，(丹參提取物與紅景天提取物的不同配比)，自制；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
試驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為8組，每組10只，分別為生理鹽水對照組；丹參提取物注射液組；紅景天提取物注射液組；組合物注射液(丹參提取物+紅景天提取物的不同配比1∶0.1、1∶0.3、1∶0.5、1∶1、1∶2)組。各組動(dòng)物尾靜脈注射給藥，每日一次，連續(xù)給藥7天，末次給藥后1小時(shí)，動(dòng)物麻醉后自腹主動(dòng)脈取血，抗凝劑采用3.28％枸櫞酸鈉，與血液以1∶9比例混合。將抗凝全血在20℃條件下1500r.min-1離心5min獲得富血小板血漿(PPR)。留取定量PPR后，將剩余PPR再次以3000r.min-1離心10min，獲得自身對照貧富血小板血漿(PPP)。以PPP調(diào)節(jié)PPR濃度，使各PPR濃度相同。將PPR在37℃的恒溫孔中預(yù)熱后，加入ADP(終濃度為3μmol.L-1)引起血小板聚集，記錄最大聚集率。結(jié)果見表2。
表2 抗血小板聚集作用(X±SD)
注與生理鹽水對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與丹參提取物或紅景天提取物相比，#p＜0.05。
結(jié)論與生理鹽水對照組相比各給藥組都能明顯抑制血小板聚集(p＜0.05和p＜0.01)，其中DHT注射液的作用明顯強(qiáng)于單用丹參提取物或紅景天提取物(p＜0.05)，證明丹參提取物與紅景天提取物配伍的組合物有很好的抗血小板聚集作用。
實(shí)驗(yàn)例3 DHT對家兔腦缺血灌注損傷的保護(hù)作用受試動(dòng)物家兔，78只，體重2.3～2.6kg，隨機(jī)分為13組，每組6只。
供試品丹參提取物，自制，得率為1.98％，丹參總酚酸含量74.6％，丹酚酸B含量39.8％；紅景天提取物，自制，得率為2.97％，其中紅景天苷的含量為14.5％，總酚的含量為58.6％；丹參提取物注射液，自制；紅景天提取物注射液，自制；DHT注射液，制備方法參見實(shí)施例3。
供試液的配制所有供試品均配成20mg/ml的供試液給藥劑量20mg/kg試驗(yàn)方法將兔隨機(jī)分為缺血再灌注組(I/R組)、DHT注射液治療組、丹參提取物注射液治療組、紅景天提取物注射液治療組和假手術(shù)對照組(SOC組)。(1)缺血再灌注組(I/R組)18只，用25％的氨基甲酸乙脂溶液1g/kg體重耳緣靜脈麻醉，頸部正中切口分離氣管插入氣管套管，暴露兩側(cè)頸總動(dòng)脈，以動(dòng)脈夾兩側(cè)夾閉20min，造成腦缺血，松夾分別再灌注1h、6h和12h，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只。分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注生理鹽水5ml/kg體重。(2)DHT治療組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注組合物注射液20mg/kg。(3)丹參提取物注射液治療組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注丹參提取物注射液20mg/kg。(4)紅景天提取物注射液治療組18只，手術(shù)方法同I/R組，三個(gè)時(shí)間點(diǎn)各6只，分別在松夾10min后，耳緣靜脈推注紅景天提取物注射液20mg/kg。(5)假手術(shù)對照組(SOC組)6只，動(dòng)物僅行麻醉和動(dòng)脈分離術(shù)而不夾閉，1h后處死。上述各組實(shí)驗(yàn)結(jié)束后即斷頭，在冰浴中剝出大腦，冰盤上解剖出雙側(cè)海馬區(qū)組織，用錫紙包裹放在4℃冰箱中儲(chǔ)存，備用。應(yīng)用pH酸度計(jì)檢測海馬組織PLA2的活性；采用干濕重法、TTC染色法測定皮層腦組織含水量、梗死面積；光鏡下觀察腦組織病理變化。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對海馬組織PLA2活性的影響I/R組再灌注1h、6h和12h后，海馬組織PLA2活性較SOC明顯增高(p＜0.01)，且隨灌注時(shí)間延長，PLA2活性呈遞減趨勢，但各時(shí)間點(diǎn)間比較差異不顯著(p＞0.05)；組合物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性明顯降低，與SOC組和I/R各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有顯著性差異(p＜0.01，p＜0.001)，且隨再灌時(shí)間延長，PLA2活性逐漸向正常水平恢復(fù)；丹參提取物注射液治療組和紅景天提取物注射液治療組(1h、6h、12h)PLA2活性降低，與SOC組和I/R各相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)比較具有明顯差異(p＜0.05，p＜0.01)，紅景天提取物注射液的作用低于丹參提取物注射液。(2)對皮層組織含水量(％)和梗死面積(％)的影響I/R組各時(shí)間點(diǎn)腦含水量均增高；組合物注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與I/R組相比明顯減輕(p＜0.001)，腦梗死面積與I/R組相比明顯縮小(p＜0.01)；丹參提取物注射液治療組和紅景天提取物注射液治療組各時(shí)間點(diǎn)腦水含量與I/R組相比均減輕(p＜0.01)，腦梗死面積與I/R組相比均縮小(p＜0.01，p＜0.05)。(3)腦組織病理改變SOC組無梗死灶，神經(jīng)元結(jié)構(gòu)形態(tài)正常，無間質(zhì)水腫；I/R組有梗死灶，梗死灶周神經(jīng)元腫脹，細(xì)胞輪廓不清，間質(zhì)水腫明顯；組合物注射液治療組、丹參提取物注射液治療組、紅景天提取物注射液治療組梗死灶面積均縮小，梗死灶周神經(jīng)元腫脹不明顯，間質(zhì)水腫明顯減輕；組合物注射液治療組作用更明顯。
結(jié)論上述實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，DHT注射液、丹參提取物注射液、紅景天提取物注射液均可通過降低PLA2活性，改善腦循環(huán)，減輕腦缺血再灌注損傷，而發(fā)揮腦保護(hù)作用。DHT注射液在各項(xiàng)指標(biāo)中均高于丹參提取物注射液和紅景天提取物注射液單獨(dú)用藥的效果，提示兩藥具有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例4 DHT對麻醉開胸犬血流動(dòng)力學(xué)的影響受試動(dòng)物雜種犬，35只，體重在11.2～13.5kg，每組5只。
供試品丹參提取物，自制，得率為1.98％，丹參總酚酸含量74.6％，丹酚酸B含量39.8％；紅景天提取物，自制，得率為2.97％，其中紅景天苷的含量為14.5％，總酚的含量為58.6％。
丹參提取物注射液，自制；紅景天提取物注射液，自制；DHT注射液，制備方法參見實(shí)施例3；
氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
給藥劑量DHT注射液中劑量組給藥40mg/kg，高劑量組給藥60mg/kg，其它組均給藥20mg/kg。
實(shí)驗(yàn)方法取雜種犬，隨機(jī)分為7組，分別為生理鹽水對照組；丹參提取物組；紅景天提取物組；DHT注射液低、中、高劑量組。犬用3％戊巴比妥鈉1ml/kg前肢靜脈注射麻醉，仰臥位固定于手術(shù)臺(tái)上，剪去頸部、胸部和右后肢內(nèi)側(cè)的毛。75％乙醇消毒剪毛區(qū)。分離氣管，并插入氣管插管，備人工呼吸用；分離頸外靜脈，并從頸外靜脈插管經(jīng)上腔靜脈進(jìn)入右心房并達(dá)到心房竇處，用于抽取冠狀靜脈的血液；分離股靜脈，插入靜脈插管，整個(gè)實(shí)驗(yàn)過程中緩慢恒速注入10％葡萄糖。分離股動(dòng)脈，插入動(dòng)脈插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素鈉生理鹽水)，接通TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄血壓(收縮壓SAP，舒張壓DAP，平均動(dòng)脈壓MAP)。人工呼吸下，于第4肋間開胸，剪開心包膜，分離升主動(dòng)脈根部和左冠狀動(dòng)脈前降支，分別放置適宜內(nèi)徑的電磁血流量計(jì)探頭(13，2mm)測量心輸出量(CO)和冠狀動(dòng)脈血流量(CBF)。將左心室插管(管內(nèi)充滿25U/ml的肝素生理鹽水)經(jīng)左心室心尖部插入左心室內(nèi)，通過TP-400T型壓力換能器，由AP-641G型血壓放大器記錄左室內(nèi)壓(LVP)，通過AD-601G型放大器記錄左室舒張末期壓(LVEDP)將針狀電極插入犬四肢皮下，描記標(biāo)準(zhǔn)II導(dǎo)聯(lián)心電圖(ECG)。上述測量信號(hào)均輸入RM-6000型八道生理記錄儀記錄，描記。同時(shí)將心輸出量、心電、血壓及心室內(nèi)壓的電信號(hào)輸入微機(jī)的生物醫(yī)學(xué)生理信號(hào)處理系統(tǒng)進(jìn)行處理，并由微機(jī)讀出心室內(nèi)壓峰值(LVSP)、舒張末期壓(LVEDP)、心室收縮參數(shù)(+dP/dtmax)、心室舒張參數(shù)(-dP/dtmax)。最后，計(jì)算心指數(shù)(CI)、每搏輸出量(SV)、心搏指數(shù)(SI)、每搏功指數(shù)(SWI)、血管總外周阻力等參數(shù)(TPVR)。手術(shù)完成后穩(wěn)定20min，將藥物溶于100ml生理鹽水中，15min內(nèi)經(jīng)股靜脈恒速滴入。
在給藥前、給藥后1h、2h分別抽取左心室及冠狀靜脈血，肝素抗凝，注射于i-STAT G3±Cartridges(i-STAT公司G3+型測試片)中，通過血?dú)夥治鰞x測量動(dòng)、靜脈血氧分壓。心肌耗氧量由Kanter公式計(jì)算而來，其公式是MVO2＝3.25×10×CF(PaO2-PvO2)/Wt。MVO2是指每100g左室心肌的耗氧量，CF為冠脈流量，PaO2、PvO2分別表示動(dòng)、靜脈血氧分壓，Wt是左心室肌重。
所有數(shù)據(jù)均以平均值±標(biāo)準(zhǔn)偏差表示，根據(jù)用藥前后各組中各個(gè)指標(biāo)的變化，采用配對t-檢驗(yàn)來判斷用藥前后各種指標(biāo)改變的統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果(1)對麻醉犬總外周血管阻力的影響與對照組比較，DHT注射液低、中、高劑量組均能顯著降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.01)，丹參提取物組能明顯降低麻醉犬總外周血管阻力(p＜0.05)，紅景天提取物組的作用較丹參提取物注射液組低(p＜0.05)。
(2)對麻醉犬左室舒張末期壓的影響與對照組比較，DHT注射液低、中、高組均能顯著降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.01)，丹參提取物組以及紅景天提取物注射液組能明顯降低麻醉犬左室舒張末期壓(p＜0.05)。
(3)對麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量的影響與對照組比較，DHT注射液低、中、高組均能顯著增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p＜0.01)，丹參提取物組以及紅景天提取物注射液組能明顯增加麻醉犬冠狀動(dòng)脈血流量(p＜0.05)。
(4)對麻醉犬心室收縮參數(shù)的影響與對照組比較，DHT注射液低、中、高劑量組均能顯著增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.01)，丹參提取物組以及紅景天提取物注射液組能明顯增加麻醉犬心室收縮參數(shù)(p＜0.05)。
(5)對麻醉犬心室舒張參數(shù)的影響與對照組比較，DHT注射液低、中、高劑量組均能顯著增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.01)，丹參提取物組以及紅景天提取物注射液組能明顯增加麻醉犬心室舒張參數(shù)(p＜0.05)。
(6)對麻醉犬心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)以及心搏指數(shù)的影響與對照組比較DHT注射液低、中、高劑量組均能顯著增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.01)，丹參提取物組以及紅景天提取物注射液組能明顯增加麻醉犬的心輸出量、每搏輸出量、心指數(shù)、心搏指數(shù)(p＜0.05)。
結(jié)論丹參提取物和紅景天提取物合并用藥可通過增加冠狀動(dòng)脈血流量，使心肌的供血增加，降低左室舒張末期壓，使血液易于從心外膜向心內(nèi)膜下區(qū)域流動(dòng)，對冠狀動(dòng)脈血流量進(jìn)行重新分配；能明顯降低心臟前負(fù)荷，對后負(fù)荷無明顯影響；能顯著改善心臟的泵血功能；能明顯改善心臟的收縮和舒張功能。丹參提取物和紅景天提取物合并用藥的效果優(yōu)于丹參提取物或紅景天提取物單獨(dú)用藥的效果，提示兩藥有協(xié)同增效作用。
實(shí)驗(yàn)例5 DH對結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響受試動(dòng)物Wistar大鼠，雄性，150只，體重200～220g，隨機(jī)分為15組，每組10只。
供試品丹參組制備方法見實(shí)施例1，其中所得提取物中丹參總酚酸含量74.6％，丹酚酸B含量42.31％；紅景天組自制，制備方法見實(shí)施例2中總酚的制備，其中所得提取物中紅景天苷含量為4.02％，總酚含量為62.13％；DH顆粒(配比見表3)，自制，制備方法見實(shí)施例9；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為15組，每組10只，分別為生理鹽水對照組、丹參組、紅景天組、DH不同配比組。將大鼠用烏拉坦1g/kg腹腔注射麻醉，背位固定，記錄心電，接人工呼吸機(jī)進(jìn)行人工呼吸，打開胸腔，剪開心包，模型組灌胃給藥生理鹽水3ml，各給藥組按表3灌胃給藥，3min后結(jié)扎左側(cè)冠狀動(dòng)脈前降枝，全程記錄心電30min，結(jié)扎后1h取血，檢測磷酸肌酸激酶(CPK)和乳酸脫氫酶(LDH)。取出大鼠心臟，沿結(jié)扎線將心室肌均勻橫切4片，0.5％氯化硝基四氮唑蘭染色，用求積儀測每片心肌兩面的缺血面積，計(jì)算心肌缺血面積占心室面積的百分比。
表3 DH對結(jié)扎大鼠冠狀動(dòng)脈所致心肌缺血的影響(X±S，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01，與生理鹽水對照組比較。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。結(jié)扎后，心肌缺血對照組大鼠心電的QRS波均突然異常增高、加寬，心肌大范圍缺血，生化檢測表現(xiàn)為CPK和LDH均異常增高。
與生理鹽水對照組比較，丹參組、紅景天組能明顯減小因結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p＜0.05)，明顯減小心肌缺血范圍(p＜0.05)；DH組能顯著減小因結(jié)扎冠狀動(dòng)脈所致的心電和生化指標(biāo)的異常改變(p＜0.01)，顯著減小心肌缺血范圍(p＜0.01)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明丹參與紅景天合并用藥有協(xié)同增效作用，且本發(fā)明藥物組合物組中，丹參(1g～10g)和紅景天(0.25g～3g)時(shí)協(xié)同作用較顯著，丹參(2.5g～7.5g)和紅景天(0.5g～1.5g)時(shí)療效更好。
實(shí)驗(yàn)例6 DH對大鼠血液流變學(xué)的影響試驗(yàn)受試動(dòng)物Wistar大鼠，160只，體重200～220g，共160只。
供試品丹參組制備方法見實(shí)施例1，其中所得提取物中丹參總酚酸含量73.21％，丹酚酸B含量39.65％；紅景天組自制，制備方法見實(shí)施例2中多糖的制備，其中所得提取物中紅景天苷含量為3.65％，多糖含量為68.97％；DH顆粒(配比見表3)，自制，制備方法見實(shí)施例9；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法取Wistar大鼠，隨機(jī)分為16組，每組10只。分別為生理鹽水對照組、模型組、丹參組、紅景天組、DH不同配比組。連續(xù)灌胃給藥15d，1次/天，最后一次給藥后30min后，除對照組用0.9％NaCL外，其余各組均皮下注射0.1％腎上腺素(0.9mg/kg)，30min后將大鼠放入冰水中冷浴8min，間隔2h后再注射等量腎上腺素，制備血淤模型。然后取腹主動(dòng)脈血5ml，肝素抗凝，測定200S-1全血粘度、血漿比粘度、紅細(xì)胞壓積。實(shí)驗(yàn)室溫度控制在(20±1)℃。結(jié)果見表4。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果與結(jié)論與生理鹽水對照組比較，模型組的全血粘度、血漿比粘度均明顯升高(p＜0.01)，說明模型成功。
與模型組比較，丹參組、紅景天組、DH組的全血粘度、血漿比粘度顯著性降低(p＜0.05，p＜0.01)，說明此三種藥物組合物均能改變大鼠血流流變學(xué)指標(biāo)。
與丹參組、紅景天組比較，DH各配比組的全血粘度、血漿比粘度顯著降低(p＜0.01)，說明丹參與紅景天合并用藥有協(xié)同增效作用。且本發(fā)明藥物組合物中，丹參(1g～10g)和紅景天(0.25g～3g)時(shí)協(xié)同作用較顯著，丹參(2.5g～7.5g)和紅景天(0.5g～1.5g)時(shí)協(xié)同作用更為顯著。
表4 DH對急性血淤模型大鼠血液流變學(xué)的影響(X±S，n＝10)
注##p＜0.01，與生理鹽水對照組比較*p＜0.05，**p＜0.01，與模型組比較。
實(shí)驗(yàn)例7 DH對大鼠實(shí)驗(yàn)性高血脂癥的影響受試動(dòng)物 健康雄性大鼠，體重200～240g，隨機(jī)分為10組，每組10只，共100只。
供試品丹參組制備方法見實(shí)施例1，其中所得提取物中丹參總酚酸含量65.87％，丹酚酸B含量40.02％；紅景天組自制，制備方法見實(shí)施例2中總酚和多糖的制備，其中所得提取物中紅景天苷含量為4.56％，總酚和多糖的含量和為70.88％；DH顆粒(配比見表3)，自制，制備方法見實(shí)施例9；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為10組，生理鹽水對照組、模型組、丹參組、紅景天組、DH不同配比組。
生理鹽水對照組給予普通飼料正常飼養(yǎng)，其余各組均給予高脂飼料(配方為普通飼料86.8％、膽固醇3％、豬油10％、丙硫氧嘧淀0.2％)，連續(xù)喂飼10天建成高脂模型。模型建成后繼續(xù)給予高脂飼料，空白組和模型組分別灌胃給藥生理鹽水，給藥組分別按表5所示劑量灌胃給藥，1次/天，連續(xù)給藥20天后，取血測膽固醇水平。
表5 DH對飲食性高血脂大鼠血清膽固醇的影響(X±S，n＝10)
注**p＜0.01，與生理鹽水對照組比較；##p＜0.01，與模型組比較；ap＜0.05，與丹參組相比；bp＜0.05，與紅景天組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表5。
與生理鹽水對照組相比較，模型組大鼠血清膽固醇極顯著升高(p＜0.01)，說明造模成功。
與模型組相比較，丹參組、紅景天組、DH組合物各配比組均能顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇水平(p＜0.05，p＜0.01)。
與丹參組相比，DH組合物各配比組均能明顯降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇水平(p＜0.05)；與紅景天組相比，DH組合物各配比組均能明顯降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇水平(p＜0.05)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參(2.5g～7.5g)和紅景天(0.5g～1.5g)時(shí)能顯著降低飲食性高血脂大鼠的血清膽固醇水平，提示丹參與紅景天具有協(xié)同增效的作用。
實(shí)驗(yàn)例8 DH對大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成的影響受試動(dòng)物雄性大鼠，體重260～280g，共90只，隨機(jī)分為9組，每組10只。
供試品丹參組制備方法見實(shí)施例1，其中所得提取物中丹參總酚酸含量65.87％，丹酚酸B含量40.02％；紅景天組自制，制備方法見實(shí)施例2中總酚和多糖的制備，其中所得提取物中紅景天苷含量為4.56％，總酚和多糖的含量和為70.88％；DH顆粒(配比見表3)，自制，制備方法見實(shí)施例9；氯化鈉注射液，市購，250ml:2.25g，山東長富潔晶藥業(yè)有限公司。
實(shí)驗(yàn)方法將大鼠隨機(jī)分為10組，生理鹽水對照組、丹參組、紅景天組、DH不同配比組。
將各組大鼠用2.5％戊巴比妥鈉(25mg/kg)腹腔注射麻醉，仰臥位固定，分離右側(cè)頸總動(dòng)脈，采用電流損傷頸動(dòng)脈內(nèi)膜法，用BT87-3實(shí)驗(yàn)性體內(nèi)血栓形成儀測定不同組別動(dòng)物頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間。將刺激電極和溫度探頭掛于頸總動(dòng)脈上，按表6所示灌胃給藥，給藥后20min開始刺激，刺激強(qiáng)度為2mA，刺激5min后關(guān)閉刺激開關(guān)，取下電極，3min后調(diào)節(jié)溫控表至零位，觀察動(dòng)脈溫度突降時(shí)間。記錄電刺激開始至主動(dòng)脈溫度突降的時(shí)間，該時(shí)間定為頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(超過3000秒者以3000秒計(jì))。
表6 DH對大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間的影響(x±s，n＝10)
注*p＜0.05，**p＜0.01與生理鹽水對照組比較；ap＜0.05，與丹參組相比；bp＜0.05，與紅景天組相比。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果及結(jié)論實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表6。
與生理鹽水對照組相比較，丹參組、紅景天組可明顯延長大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(p＜0.05)，DH組可顯著延長大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(p＜0.01)。
與丹參組相比，DH不同配比組可明顯延長大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(p＜0.05)；與紅景天組相比，DH不同配比組可明顯延長大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間(p＜0.05)。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，丹參(2.5g～7.5g)和紅景天(0.5g～1.5g)時(shí)能顯著延長大鼠實(shí)驗(yàn)性頸動(dòng)脈血栓形成時(shí)間，提示丹參與紅景天具有協(xié)同增效的作用。
實(shí)驗(yàn)例9 DHT注射液穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)樣品DHT注射液，本實(shí)驗(yàn)采用實(shí)施例1所制得的DHT注射液。
考察項(xiàng)目性狀、PH值、澄明度長期穩(wěn)定性試驗(yàn)方法及結(jié)果將本品置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置6個(gè)月、12個(gè)月，各項(xiàng)指標(biāo)均無明顯變化，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明組合物注射液長期放置基本穩(wěn)定。
具體實(shí)施方式以下通過實(shí)施例來進(jìn)一步闡述本發(fā)明藥物組合物的制備方法。以下的實(shí)施例可以使本專業(yè)技術(shù)人員更全面地理解本發(fā)明。以下實(shí)施例3～10中丹參(丹參提取物)的制備方法源于實(shí)施例1；實(shí)施例3～10中處方1～3紅景天(紅景天提取物)的制備方法源于實(shí)施例2中紅景天總酚的制備；實(shí)施例3～10中處方4～6紅景天的制備方法源于實(shí)施例2中紅景天總酚性和多糖的制備；實(shí)施例3～10中處方7、8紅景天的制備方法源于實(shí)施例2中紅景天多糖的制備。
實(shí)施例1 丹參的制備取丹參藥材，粉碎成粗粉，加水煎煮二次，第一次加水12倍量，第二次加水10倍量，每次2小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度1.08～1.12的濃縮液，加乙醇至含醇量至85％，冷藏24小時(shí)，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加鹽酸調(diào)PH值至2，用醋酸乙酯振搖提取3次，合并醋酸乙酯液，蒸干。殘?jiān)覲H值2的酸水溶解，加于已處理好的聚酰胺柱上，先用2倍柱體積的水洗脫，棄去水洗液，再用4倍柱體積的95％乙醇洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，并真空干燥，即得。
總酚酸含量測定 比色法對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的原兒茶醛對照品1mg，加水溶解，定容至100ml。
供試品溶液的制備 精密稱取樣品適量，置50ml容量瓶中，加水稀釋至刻度精密量取0.1ml置25ml容量瓶中加乙醇5ml，加入0.3％十二烷基硫酸鈉2ml，0.6％鐵氰化鉀一0.9％三氧化鐵(臨用前等量混合)1ml，如此暗處放置5min，加入0.1mol/L鹽酸溶液至刻度，搖勻，暗處放置20min后，置lena比色池中，720nm處測定。
丹酚酸B的含量測定 高效液相色譜法色譜條件與系統(tǒng)適用性實(shí)驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-乙腈-甲酸-水(30∶10∶1∶59)為流動(dòng)相；檢測波長為286nm。理論塔板數(shù)按丹參素峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備 精密稱取丹酚酸B對照品適量，加75％甲醇制成每1ml含0.14mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 取本品適量，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入75％甲醇50ml，稱定重量，加熱回流1h，取出，放冷，再稱定重量，用75％甲醇補(bǔ)足減失重量，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
按照上述工藝，制得三批丹參提取物，其含量和得率見表7。
表7 丹參提取物的含量測定結(jié)果和得率
實(shí)施例2 紅景天提取物的制備1、制備工藝(1)紅景天總酚的制備取紅景天藥材，粉碎成粗粉，用70％乙醇提取三次每次1小時(shí)，第一次加醇10倍量，第二、三次分別為8、8倍量。濾過，合并提取液，回收乙醇至每5ml含1g生藥材，用2倍量石油醚脫脂后，棄去石油醚液，再用水飽和的正丁醇萃取，減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥，即得紅景天提取物。
必要時(shí)，還可進(jìn)一步精制，將上述得到的紅景天提取物用適量水溶解后，加于已事先處理好的大孔樹脂柱上，依次用水液、10％乙醇、15％乙醇、20％乙醇、30％乙醇洗脫，洗脫速度為10ml/min。減壓回收乙醇至相對密度為1.03～1.06(60℃)，噴霧干燥，得紅景天提取物。
(2)紅景天總酚和多糖的制備取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時(shí)，第二次加10倍量，回流2小時(shí)。提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10。分成兩份，一份用等量正丁醇提取三次，合并提取液，減壓回收，真空干燥或噴霧干燥，即得提取物A；另一份加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得提取物B；將提取物A和提取物B合并即得總提取物。
(3)紅景天多糖的制備取紅景天藥材，加水提取三次，第一次加10倍量，回流2小時(shí)，第二次加10倍量，回流2小時(shí)，提取液濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.05～1.10，加乙醇使含醇量達(dá)85％，攪勻，冷藏24小時(shí)以上，濾過，沉淀物低溫干燥，即得。
2、含量測定(1)紅景天苷含量測定色譜條件與系統(tǒng)適用性試驗(yàn) 以十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-水(15∶85)為流動(dòng)相，檢測波長為275nm。理論板數(shù)按紅景天苷峰計(jì)算應(yīng)不低于1500。
對照品溶液的制備 精密稱取紅景天苷對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密吸取上述各樣品液各20ml，水浴上蒸干后，殘?jiān)蛹状既芙?，移?0ml量瓶，用甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定，即得。
(2)紅景天總酚的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取沒食子酸對照品適量，置棕色量瓶中，加水制成每1ml含沒食子酸0.05mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液0.5ml、1.0ml、2.0ml、3.0ml、4.0ml、5.0ml，分別置25ml棕色量瓶中，各加磷鉬鎢酸試液1ml，再分別加水11.5ml、11ml、10ml、9ml、8ml、7ml，用29％碳酸鈉溶液稀釋至刻度，搖勻，放置30分鐘，以相應(yīng)的試劑為空白，紫外-可見分光光度法，在760nm波長處測定吸光度，以吸光度為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備精密稱取紅景天提取物25mg，置25ml量瓶中，加60％乙醇至刻度，搖勻，使樣品完全溶解，精密吸取2ml置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
測定法精密量取供試品溶液2ml，置25ml棕色量瓶中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備項(xiàng)下的方法，自“加入磷鉬鎢酸試液1ml”起，加水10ml，依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中讀出供試品溶液中沒食子酸的量(mg)，計(jì)算，即得。
(3)紅景天多糖的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的葡萄糖對照品約適量，加甲醇制成每1ml含0.15mg的溶液，即得。
標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密量取對照品溶液1ml、2ml、3ml、4ml、5ml置10ml量瓶中，加水稀釋至刻度，搖勻，作為各對照品溶液。分別精密量取各對照品溶液2ml，置25ml納氏比色管中，加入2％苯酚水溶液1ml，搖勻，迅速加入硫酸5.0ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中加熱10分鐘，取出迅速冷卻至室溫，紫外-可見分光光度法測定，在488±2nm波長處分別測定吸光度，以測定的吸光度為縱坐標(biāo)(y)，對照品的濃度(μg/ml)為橫坐標(biāo)(x)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。
供試品溶液的制備 精密稱取本品適量，置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，精密吸取5ml置25ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。
測定法 精密量取供試品溶液2ml，置25ml納氏比色管中，照標(biāo)準(zhǔn)曲線制備項(xiàng)下自“加入2％苯酚水溶液1ml”起依法測定吸光度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出供試品溶液中糖類(以葡萄糖計(jì))的量，計(jì)算，即得。
3、具體制備按照上述工藝分別制得三批以紅景天總酚為主要有效成分、總酚和多糖為主要有效成分、多糖為主要有效成分的紅景天提取物，其得率和含量測定結(jié)果分別見下表。
表8-1 紅景天提取物的含量測定結(jié)果和得率(以總酚為主要有效成分供口服用提取物的制備)
表8-2紅景天提取物的含量測定結(jié)果和得率(以總酚為主要有效成分供注射用提取物的制備)
表9 紅景天提取物的含量測定結(jié)果和得率
表10 紅景天提取物的含量測定結(jié)果和得率
實(shí)施例3本發(fā)明組合物水針劑的制備1、處方處方1丹參提取物 100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物30.1g(相當(dāng)于原藥材1kg)注射用水加至5000ml共制備 1000支處方2丹參5kg紅景天 1kg注射用水加至5000ml共制備 1000支處方3丹參10kg紅景天 25g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方4丹參1kg紅景天 3kg注射用水加至5000ml共制備 1000支處方5丹參7.5kg紅景天 1.5kg注射用水加至5000ml共制備 1000支處方6丹參2.5kg紅景天 500g注射用水加至5000ml共制備 1000支處方7丹參 7.5kg紅景天 500g注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg注射用水 加至5000ml共制備 1000支2、制法原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例4 本發(fā)明組合物粉針劑的制備1、處方處方1丹參提取物100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 30.1g(相當(dāng)于原藥材1kg)甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支處方2丹參 5kg紅景天1kg甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支處方3丹參 10kg紅景天25g甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支處方4丹參 1kg紅景天3kg甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支處方5
丹參 7.5kg紅景天 1.5kg甘露醇 300g無菌注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方6丹參 2.5kg紅景天 500g甘露醇 300g無菌注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方7丹參 7.5kg紅景天 500g甘露醇 300g無菌注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg甘露醇 300g無菌注射用水 加至5000ml共制備 1000支2、制法原輔料用無菌注射用水配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌裝、凍干、壓塞、軋蓋、包裝制成成品。
實(shí)施例5 本發(fā)明組合物氯化鈉注射液的制備1、處方處方1丹參提取物100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 30.1g(相當(dāng)于原藥材1kg)氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2丹參 5kg紅景天1kg氯化鈉900g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方3丹參 10kg紅景天 25g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶處方4丹參 1kg紅景天 3kg氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶處方5丹參 7.5kg紅景天 1.5kg氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶處方6丹參 2.5kg紅景天 500g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶處方7丹參 7.5kg紅景天 500g氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg氯化鈉 900g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶2、制法原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌裝、加塞、軋蓋、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例6 本發(fā)明組合物葡萄糖注射液的制備1、處方
處方1丹參100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天 30.1g(相當(dāng)于原藥材1kg)葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方2丹參5kg紅景天 1kg葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方3丹參10kg紅景天 25g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方4丹參1kg紅景天 3kg葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方5丹參7.5kg紅景天 1.5kg葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方6丹參2.5kg紅景天 500g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方7丹參7.5kg紅景天 500g葡萄糖 5000g注射用水加至100000ml共制備 1000瓶處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg葡萄糖 5000g注射用水 加至100000ml共制備 1000瓶2、制法原輔料用注射用水溶解配液，經(jīng)活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗(yàn)、灌裝、加塞、軋蓋、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實(shí)施例7 本發(fā)明組合物片劑的制備1、處方處方1丹參提取物100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 101.0g(相當(dāng)于原藥材1kg)淀粉 120g微晶纖維素40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 2g羧甲淀粉鈉4g共制備1000片處方2丹參 5kg紅景天 1kg淀粉 120g微晶纖維素 60g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 3g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片處方3丹參 10kg紅景天 25g淀粉 120g微晶纖維素 50g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 4g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片處方4丹參1kg紅景天 3kg淀粉120g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂3g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片處方5丹參7.5kg紅景天 1.5kg淀粉120g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂4g羧甲淀粉鈉 6g共制備 1000片處方6丹參2.5kg紅景天 500g淀粉120g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片處方7丹參7.5kg紅景天 500g淀粉120g微晶纖維素 40g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片處方8丹參2.5kg紅景天 1.5kg淀粉150g微晶纖維素 60g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2g羧甲淀粉鈉 4g共制備 1000片
2、制法原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉整粒，半產(chǎn)品檢驗(yàn)后確定片重，壓片、包裝得成品實(shí)施例8 本發(fā)明組合物膠囊劑的制備1、處方處方1丹參提取物100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 101.0g(相當(dāng)于原藥材1kg)淀粉 60g微晶纖維素20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備1000粒處方2丹參 5kg紅景天1kg淀粉 60g微晶纖維素20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備1000粒處方3丹參 10kg紅景天25g淀粉 60g微晶纖維素20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.5g共制備1000粒處方4丹參 1kg紅景天3kg淀粉 60g微晶纖維素20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備1000粒處方5丹參 7.5kg紅景天1.5kg淀粉 60g微晶纖維素20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備1000粒處方6丹參 2.5kg紅景天 500g淀粉 60g微晶纖維素 20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備 1000粒處方7丹參 7.5kg紅景天 500g淀粉 80g微晶纖維素 20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備 1000粒處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg淀粉 60g微晶纖維素 20g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1g共制備 1000粒2、制法原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂整粒，半產(chǎn)品檢驗(yàn)后確定裝量，裝膠囊、包裝得成品。
實(shí)施例9 本發(fā)明組合物顆粒劑的制備1、處方處方1丹參提取物 100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 101.0g(相當(dāng)于原藥材1kg)糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方2丹參 5kg紅景天 1kg糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方3丹參 10kg紅景天 25g糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方4丹參 1kg紅景天 3kg糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方5丹參 7.5kg紅景天 1.5kg糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方6丹參 2.5kg紅景天 500g糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方7丹參 7.5kg紅景天 500g糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg糖粉 1000g2％HPMC50％乙醇溶液適量共制備 1000包2、制法原料和糖粉加2％HPMC50％乙醇溶液制軟材，然后制粒、干燥，半產(chǎn)品檢驗(yàn)后確定裝量，分裝得成品。
實(shí)施例10 本發(fā)明組合物滴丸劑的制備1、處方
處方1丹參提取物 100.0g(相當(dāng)于原藥材5kg)紅景天提取物 30.1g(相當(dāng)于原藥材1kg)聚乙二醇6000 600g處方2丹參 5kg紅景天 1kg聚乙二醇6000 600g處方3丹參 10kg紅景天 25g聚乙二醇6000 600g處方4丹參 1kg紅景天 3kg聚乙二醇6000 600g處方5丹參 7.5kg紅景天 1.5kg聚乙二醇6000 600g處方6丹參 2.5kg紅景天 500g聚乙二醇6000 600g處方7丹參 7.5kg紅景天 500g聚乙二醇6000 600g處方8丹參 2.5kg紅景天 1.5kg聚乙二醇6000 600g2、制法將聚乙二醇6000在水浴中加熱熔融，待全部熔融后加入丹參提取物和紅景天提取物，攪拌溶解，60目篩過濾，保持60℃滴入冷至10℃以下的液體石蠟中制成丸。
權(quán)利要求
1.一種治療心腦血管疾病的藥物，其特征在于，制成該藥物所含藥效成分的原料藥的組成為丹參100-1000份、紅景天25-300份。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于，制成該藥物所含藥效成分的原料藥的組成為丹參250-750份、紅景天50-150份。
3.根據(jù)權(quán)利要求1-2所述的任一藥物，其特征在于所述的丹參和紅景天分別或混合經(jīng)過提取加工得到其提取物，提取物再和藥用輔料混合加工制成制劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的提取物，其特征在于丹參提取物的主要有效成分丹參總酚酸的含量不低于50％，其中的丹酚酸B含量不低于30％；紅景天提取物的主要有效成分為總酚和/或多糖，其含量不低于50％，紅景天苷的含量不低于3％。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的藥物，其特征在于該藥物還可以由丹參提取物、紅景天提取物組成，其重量配比為1∶0.01～20。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的藥物，其特征在于丹參提取物及紅景天提取物的重量配比為1∶0.02～10。
7.根據(jù)權(quán)利要求5、6所述的任一藥物，其特征在于丹參提取物的主要有效成分丹參總酚酸的含量不低于50％，其中的丹酚酸B含量不低于30％；紅景天提取物的主要有效成分為總酚和/或多糖，其含量不低于50％，紅景天苷的含量不低于3％。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的藥物，其特征在于，其中丹參提取物的主要有效成分丹參總酚酸的含量不低于70％，其中的丹酚酸B含量不低于30％。
9.根據(jù)權(quán)利要求1、2、5、6所述的任一藥物，其特征在于該藥物可以制成任何一種臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的藥物，其特征在于該藥物可以制成注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種用于治療心腦血管疾病的藥物組合物及其制備方法，該組合物主要由丹參和紅景天制成，兩者的重量配比為丹參100－1000份、紅景天25－300份；該組合物還可以由丹參提取物和紅景天提取物1∶0.01～20配比制成。兩者可以單獨(dú)或與藥用輔料組合，制成臨床上或藥學(xué)上可接受的劑型，如注射劑、口服制劑；兩藥合用，可協(xié)同發(fā)揮抗血小板聚集、抗血栓、改善腦缺血、改善心肌供血等藥理作用，可用于冠心病、心絞痛、心肌梗塞、缺血性腦血管疾病、中風(fēng)及中風(fēng)后遺癥等。
文檔編號(hào)A61P9/00GK1931236SQ20061015334
公開日2007年3月21日 申請日期2006年9月13日 優(yōu)先權(quán)日2005年9月14日
發(fā)明者蔡軍 申請人:蔡軍