專利名稱：：抗腫瘤化合物的制作方法
技術(shù)領域：
：本發(fā)明涉及新的抗腫瘤化合物、包含所述新抗腫瘤化合物的藥物組合物和它們作為抗肺瘤劑的用途。
背景技術(shù)：
：癌癥是導致動物和人類死亡的最主要的原因。人們已經(jīng)并且仍然在進行巨大的努力，為了獲得有活性并且安全施用于患有癌癥的患者的抗肺瘤劑。本發(fā)明要解決的問題是提供可用于治療癌癥的化合物。發(fā)明概述一方面，本發(fā)明涉及通式I的化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體(I)其中R！、R2、R3、R4、R5和R6每個獨立地選自氫、ORa、OC(=0)Ra、卣素、取代或未取代的C廣C]2烷基、取代或未取代的Crd2烯基和取代或未取代的CVCu炔基；其中Ra選自氫、取代或未取代的d-Cu烷基、取代或未取代的CVd2烯基、取代或未取代的C2-Cu炔基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的雜環(huán)基；其中X是O、S(O)m或NR;其中m是0、1或2;其中R選自氫、取代或未取代的CVCu烷基、取代或未取代的CVd2烯基和取代或未取代的CVd2炔基；其中Y代表取代或未取代的d-Cu亞烷基鏈；其中n是2-6;并且波浪線(ww)是指所述鍵可以以(E)-異構(gòu)體或(Z)-異構(gòu)體存在。這些化合物中的一些是已知化合物。標樁菌素A，是由B.Kunze等人(丄顛腸,.(1984),37，454-61)從橙色標樁菌分離出來的標才莊菌素A已經(jīng)公開了該化合物阻滯了牛心臟亞線粒體顆粒的呼吸鏈中在細胞色素b-cl片段的位點處的電子流動，產(chǎn)生了抗菌活性。它的抑制效力與抗霉素和粘噻唑的相同，并且象這些抗生素一樣，標樁菌素A引起還原細胞色素b的光譜移動(G.Thierbach等人，Woc/n.艦'ca"Szo//2jAS7ca(1984),765,227-35)。該文章還描述了一些標樁菌素衍生物的抑制活性和結(jié)構(gòu)，如描述了下列衍生值得注意的是，在所描述的衍生物中沒有一個比由粘細菌制造的天然化合物更有效。在現(xiàn)有技術(shù)中描述了其它的標樁菌素衍生物，參見例如G.Hoefle等人，"來自滑翔細菌XXIII的抗生素，標樁菌素A和B-來自才登色才示才莊菌(粘細菌)的兩種新抗生素"丄ze&g《Jwwa/ewC7zemw(1984),12，1883-1904,除了標樁菌素A和B夕卜，還描述了下列合成的標樁菌素衍生物的活性和結(jié)構(gòu)標樁菌素BN.Gaitatzis等人，"TheBiosynthesisoftheAromaticNovelTypeofModularPolyketideSynthase"Jow廠憩/o/'S/o/ogzc"/C/zemw^y(2002),277，13082-13090,除了標樁菌素的生物合成外，還描述了標樁菌素X和Y的結(jié)構(gòu)、作為粘細菌電子傳輸?shù)囊种苿┮约皹艘磺f菌素書于生物的抗菌活性。標樁菌素XOH標樁菌素YL.Domon和D.Uguen,"Towardatotalsynthesisofstigmatellin,obtentionofanadvancedfragmentfromgallicacid"7fe加/^t/n9w丄e"e^(2000)，41，5501-5505,其描述了一種O-千基標樁菌素。并且K.M.Giangiacomo等人"StigmatellinandotherelectrontransferinhibitorsasprobesfortheQbbindingsiteinthereactioncenterof<formula>formulaseeoriginaldocumentpage11</formula>photosyntheticbacteria"尸/zofo《j/w/7z.Aes.尸roc./w亡Cowgr尸/wo^"仇，第7版(1987),會議日期1986,2409-12,除了標樁菌素作為Qb結(jié)合位點的探針的用途外，還描述了標樁菌素II的活性和結(jié)構(gòu)。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>(CH3)(CH30)C=C—CH二CH-CH二CH—CH2-CH-CH-CH-CHj:-CH2CH3OCH3<formula>formulaseeoriginaldocumentpage12</formula>天然的標樁菌素A和B顯示出比前面提及的合成化合物的抗菌活性更好。還公開了標樁菌素A作為光合成電子傳輸?shù)膹娪行У囊种苿?"標樁菌素，一種光合成電子傳輸?shù)碾p重類型抑制劑"，O.Walter等，Woc/n'mz'cadB一/z戸'caJcto(1985),807，216-19)。在現(xiàn)有才支術(shù)中未公開標樁菌素A、B和它們的衍生物的抗腫瘤活性。我們未要求保護已知化合物。特別地，我們未要求保護在前面引用的文獻中所公開的已知化合物。因此，關于我們要求保護的化合物本身，我們設立的條件是(a)當所述結(jié)構(gòu)是并且R2是一OCH3，114是—OCH3日寸，115不是—OH、—〇CH-OCOCH3、-OCH2C02H、-OCH2Ph或-OCH2C02CH2CH3;當R2是—OH,114是—OCH3時，R5不是-OH、—OCH3;和當R4是-OH,Rs是-H時，R2不是-OH、-OCH3;(b)當所述結(jié)構(gòu)是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>并且R2是-OCH3，R4是-OCH3時，Rs不是-OH;(c)當所述結(jié)構(gòu)是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>時，R'不是H或曱基;(d)當所述結(jié)構(gòu)是<formula>formulaseeoriginaldocumentpage13</formula>時，R'不是曱基；和(e)當所述結(jié)構(gòu)是OR"OR"時，R"基團不全是H或不全是甲基。另一方面，本發(fā)明涉及包含如上定義的式I化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體以及藥學上可接受的載體或稀釋劑的藥物組合物。另一方面，本發(fā)明也涉及式I化合物或者其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體在治療癌癥中的用途或在制備用于治療癌癥的藥物中的用途(I)其中R!、R2、R3、R4、R5和R6每個獨立地選自氫、ORa、OC(-O)Ra、面素、取代或未取代的d-C12烷基、取代或未取代的C2-C12烯基和取代或未取代的C2-Cu炔基；其中Ra選自氫、取代或未取代的Crd2烷基、取代或未取代的C2-d2烯基、取代或未取代的CVQ2炔基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的雜環(huán)基；其中X是O、S(O)m或NR;其中m是0、1或2;其中R選自氫、取代或未取代的CVCu烷基、取代或未取代的C2-Cu烯基和取代或未取代的C2-d2炔基；其中Y代表取代或未取代的C廣Cu亞烷基鏈；其中n是0-6;并且波浪線()是指當n21時，所述鍵可以以(E)-異構(gòu)體或(Z)-異構(gòu)體存在。本發(fā)明的其它方面是治療方法以及用于所述方法中的化合物。本發(fā)明也涉及從Plakinidae科伏革菌屬的海綿動物中分離式I化合物以及由這些化合物形成書f生物。優(yōu)選實施方式的詳細描述本發(fā)明涉及如上述定義的通式I化合物。在這些化合物中，可以根據(jù)下面的教導選擇取代基烷基和烷氧基可以是支化的或未支化的，并且優(yōu)選具有1-12個碳原子。一個更優(yōu)選類別的烷基和烷氧基具有1個至約6個碳原子。甲基、乙基、丙基、丁基和戊基，包括異丙基、異丁基、異戊基、甲基丁基和曱基戊基是本發(fā)明化合物中特別優(yōu)選的烷基。甲氧基、乙氧基、丙氧基，包括異丙氧基是本發(fā)明化合物中特別優(yōu)選的烷氧基。亞烷基是指直鏈或支鏈的、二價的、飽和的烴基，優(yōu)選具有1-12個碳原子。一個更優(yōu)選的亞烴基的種類具有3至約8個碳原子。1,3-亞丙基、1,4-亞丁基、1，5-亞戊基、1,6-亞己基和1,7-亞庚基是本發(fā)明化合物中特別優(yōu)選的亞烷基。本發(fā)明化合物中優(yōu)選的烯基和炔基具有一個或多個不飽和鍵并且具有2至約12個碳原子。一個更優(yōu)選烯基的種類具有2至約6個碳原子，最優(yōu)選4-6個碳原子。一個更優(yōu)選的炔基種類具有2至約6個碳原子，最優(yōu)選2-4個碳原子。本發(fā)明化合物中合適的芳基包含單環(huán)化合物和多環(huán)化合物，其包括含有分離的和/或稠合的芳基的多環(huán)化合物。典型的芳基含有1_3個分離的環(huán)或裯合的環(huán)，并且含有6個至約18個碳環(huán)原子。特別優(yōu)選的芳基包括取代的或未取代的苯基、萘基、聯(lián)苯基、菲基和蒽基(anthmcyl)。合適的雜環(huán)基包括雜芳基和雜脂環(huán)基。本發(fā)明化合物中合適的雜芳基含有一個、兩個或三個選自N、O或S的雜原子，并且包括，例如包括8-香豆素基在內(nèi)的香豆素基、包括8-喹啉基的奮啉基、吡啶基、他。秦基、嘧口定基、呋喃基、p比咯基、噻吩基、漆唑基、卩惡唑基、咪唑基、吲哚基、苯并呋喃基和苯并噻唑基。本發(fā)明的化合物中合適的雜脂環(huán)基包含一個、兩個或三個選自N、O或S原子的雜原子，并且包，括四氬p夫喃、四氬p比喃、。底"定基、嗎啉基和p比卩各:t克基。前面提及的基團可以在一個或多個可能的位置處被一個或多個合適的基團如OR，、=0(氧代基團)、SR，、SOR，、S〇2R，、N〇2、NHR，、N(R，)2、=N-R，、NHCOR，、N(COR，)2、NHS02R，、CN、卣素、C(=0)R，、C02R，、OC^O)R，取代，其中每個R，獨立地選自H、OH、N02、NH2、SH、CN、卣素、C(=0)H、C(-O)烷基、C02H、取代或未取代的d-C12烷基、取代或未取代的C2-Cu烯基、取代或未取代C2-Cu炔基和取代或未取代的芳基。本發(fā)明化合物中合適的卣素取代基包括F、Cl、Br和I。當這樣的基團本身被取代時，所述取代基可以從上述名單中選擇。術(shù)語"藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥"是指藥學上可接受的鹽、S旨、溶劑化物、水合物或當施向接受者時，能夠提供(直接或間接)如此處描述的化合物的任何的其它化合物。然而，認識到非藥學上可接受的鹽也落在本發(fā)明的范圍內(nèi)，因為那些可以用于制備藥學上可接受的鹽。鹽、前藥和衍生物的制備可以通過本領域已知的方法來進行。例如，此處提供的化合物的藥學上可接受的鹽由含有堿或酸部分的母核化合物通過常規(guī)的化學方法來合成。一般而言，這類的鹽，例如，通過將游離酸或游離堿形式的這些化合物與化學計量量的合適的堿或酸在水中或在有機溶劑中或兩者的混合物中反應來制備。一般地，非水介質(zhì)象醚、乙酸乙酯、乙醇、異丙醇或乙腈是優(yōu)選的。酸加成鹽的實例包括無機酸加成鹽如，鹽酸鹽、氫溴酸鹽、氬捵酸鹽、>琉酸鹽、硝酸鹽、磷酸鹽，以及有機酸加成鹽如乙酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、檸檬酸鹽、草酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、蘋果酸鹽、扁桃酸鹽、曱石黃酸鹽(methanesulphonate)和對苯石黃酸鹽。石成加成鹽的實例包4舌無^/L鹽，如鈉鹽、鉀鹽、鈣鹽和銨鹽，以及有機堿鹽如乙二胺、乙醇胺、N,N-二亞烷基乙醇胺、三乙醇胺和堿性的氨基酸鹽。本發(fā)明化合物可以是游離化合物或溶劑化物(如水合物)的結(jié)晶形式，這意味著這兩種形式都在本發(fā)明的范圍內(nèi)。溶劑化的方法一般是本領域已知的。作為式I化合物前藥的任何化合物都在本發(fā)明精神范圍內(nèi)。術(shù)語"前藥"是在廣義上使用的，并且包括在體內(nèi)轉(zhuǎn)化成本發(fā)明化合物的那些衍生物。這類的衍生物對于本領域技術(shù)人員很容易想到，并且包括，例如其中游離羥基被轉(zhuǎn)化成酯衍生物的化合物。由前面描述的式I表示的本發(fā)明化合物可以包括對映異構(gòu)體或非對映異構(gòu)體，取決于它們是否對稱。雙健的立體異構(gòu)也是可以的，因此，一些情況下該分子可以以(E)-異構(gòu)體或(Z)-異構(gòu)體存在。單一異構(gòu)體和所述異構(gòu)體的混合物都落入本發(fā)明的范圍之內(nèi)。本發(fā)明優(yōu)選的化合物是通式I的那些(I)其中Ri是氳、ORa或取代的或未取代的CVd2烷基，特別優(yōu)選的是取代的或未取代的d-C6烷基，曱基、乙基、丙基、異丙基和丁基是特別優(yōu)選的。特別優(yōu)選的R2、R3、R4和R5是氪、ORa和OC(=0)Ra,其中Ra具有與前面給定的含義相同。更優(yōu)選的Ra是氫和取代或未取代的d-d2烷基，甚至更優(yōu)選Ra是氫和取代或未取代的CrQ;烷基，氫、甲基、乙基、丙基和異丙基是最優(yōu)選的。特別優(yōu)選的X是O、S(O)m或NR,其中m優(yōu)選是0，并且R優(yōu)選是氫和取代或非取代的CVCu烷基，更優(yōu)選是氫和取代或未取代的C廣C6烷基，并且氫、曱基、乙基、丙基、異丙基和丁基是最優(yōu)選的。最優(yōu)選的X是O。在優(yōu)選的實施方式中，Y是取代的或未取代的CVC8亞烷基鏈。Y基團可以包含一個或多個取代基。取代的1,4-亞丁基、1,5-亞戊基和1,6-亞己基是最優(yōu)選的。這些基團可以在一個或多個位置處被取代。優(yōu)選的取代基是CVd2烷基或OR，，其中R，如前面定義。在最優(yōu)選的實施方式中，取代基是CVC6烷基、OH、烷氧基和C(:O)烷基。甚至在最優(yōu)選的實施方式中，取代基是甲基、OH和-OCH3。特別優(yōu)選n是2-6，更優(yōu)選是2或3。特別優(yōu)選的R6選自取代的或未取代的d-Cu烷基、取代或未取代的CVd2烯基和取代或未取代的CVd2烯基。更優(yōu)選的R6是取代或未取代的d-C6烷基和取代的或未取代的C2-C6烯基、1-甲基丁基和1-甲基丙烯基是最優(yōu)選的。本發(fā)明特別優(yōu)選的化合物是下列化合物化合物I標樁菌素A本發(fā)明的化合物通過合成方法很容易制得。例如，本發(fā)明化合物可以用下列文獻中描述的工藝得到，L.Domon等人的r"ra/zedraw2000),41(29),5501—5505,N.Adje等人的r"ra/z^/raw丄e"e^(2000),41(29),5495-5499,D.Enders等人的C7z謹勿五腳尸簡Jow謹l(2000),6(8),1302-1309或G.Hoefle等人的Zj^g"應/e"c/erC/ze/me(1984),12,1883-1904。合成途徑可以-使用取自這些文章的一篇以上的步驟的組合。此外，本發(fā)明的一些化合物可以來源于海洋。化合物I是從Plakinidae科伏革菌屬的海綿動物分離出來的。標本的沖羊品^皮j呆藏在墨西哥的Mazatlan的UniversidadNacionalAutonomadeMexico的"InstitutodeCienciasdelCienciasdelMaryLimnologia，，,參考碼為LEB-ICML-UNAM-10-2004。該海綿動物是采用SCUBA潛水器在9和26m之間的深度下的WallisetFutuna(13°22，36，，S,175。15'37"W)中通過手工采集的，其描述如下Plakinidae科:PlakinidaeSchulze,1880具有帶殼的生長形態(tài)。身體的結(jié)構(gòu)是單一的，具有從單一的似單溝型的結(jié)構(gòu)變化到更復雜的折疊并且精細的管道系統(tǒng)的含水系統(tǒng)。礦物骨骼由二輻骨針、三輻骨針或四輻骨針組成，通常具有分支的末端(脊四輻骨針)，硅質(zhì)骨針和海綿絲纖維可以在一個屬，即Oscarella中缺少，其4又具有在間充質(zhì)中成膠的纖絲狀的海綿絲。外殼或厚重的生長形態(tài)，具有單一的身體結(jié)構(gòu)，從單一的似單溝型的結(jié)構(gòu)變化到更復雜的折疊并且精細的管道系統(tǒng)的含水系統(tǒng)。礦物骨骼由較小的棘和/或派生物(二輻骨針或三輻骨針)組成，通常具有分支末端(脊狀四輻骨針)，一般在海綿內(nèi)排列均勻，骨針常常以規(guī)則的"氣泡，，方式圍繞在含水系統(tǒng)周圍，硅質(zhì)骨針和海綿絲纖維在一個屬(Oscarella)中是缺少的，其僅具有在間充質(zhì)中成膠的纖絲狀的海綿絲，環(huán)細胞室具有300-500個環(huán)細胞，常常是大孔的，偶爾是海綿典型溝系的，幼蟲是獨特的兩極幼蟲類型。伏革菌屬薄外殼，有收縮性的表面，盡管骨針偶爾也全部缺少，但是骨針的形成完全是一種尺寸的四輻骨針和四軸多射單突骨針，海綿典型溝系為環(huán)細^^室。前面描述的式I化合物的一個重要特征是它們的生物活性，尤其是它們的細胞毒性和它們抑制EGFR細胞內(nèi)信號的活性。本發(fā)明我們提供了通式I化合物的新穎的藥物組合物，其具有細胞毒性以及抑制EGFR細l包內(nèi)活性，以及它們用作抗肺瘤劑的用途。因而，本發(fā)明進一步提供了含有本發(fā)明化合物、其藥學可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體和藥學上可接受的載體的藥物組合物。藥物組合物的實例包括任何固體(片劑、丸劑、膠嚢、顆粒等)或液體(溶液、懸浮液或乳液)的用于口服、局部或非腸道施用的組合物。本發(fā)明的化合物或組合物的施用可以通過任何合適的方法，如l爭脈內(nèi)注射、口服制劑、腹膜內(nèi)和靜脈內(nèi)施用。我們建議注射時間不超過24小時，更優(yōu)選1-12小時，l-6小時是最優(yōu)選的。短時間注射允許進行治療，而不必留在醫(yī)院過夜，這是尤其理想的。然而，如果需要的話，注射可能為12-24小時或更長時間。注射可以以l-4周的合適的時間間隔進行。含有本發(fā)明化合物的藥物組合物可以在緩釋制劑中通過脂質(zhì)體或包封納米球膠嚢釋放，或通過其它標準的釋放方式來釋放。化合物的正確的劑量將根據(jù)特定的制劑、給藥的方式、特定的位點、受體和治療的腫瘤而變化。其它的因素如年齡、體重、性別、飲食、給藥時間、排泄速率、受體的癥狀、藥物組合、反應敏感性和疾病的嚴重性將予以考慮。給藥可以連續(xù)進行或在最大耐受劑量內(nèi)周期性地進行。本發(fā)明的化合物和組合物可以與其它的藥物一<吏施用以纟是供組合治療。其它的藥物可以形成同一種組合物的一部分或作為單獨的組合物在相同時間或不同時間給藥來提供。這些化合物的抗腫瘤活性包括但不限于肺癌、結(jié)腸癌、乳癌、子宮頸癌、腎癌、白血病、肝癌、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌和胃癌。實施例實施例l:海生生物和收集方面的描述伏革菌屬是釆用SCUBA潛水器在9和26m之間的深度下的WallisetFutuna(13。22，36"S,]75。15，37"W)中通過手工進行采集的。所述材料是由JoseLuisCarballo(UniversidadNacionalAutonomadeMexico)進行鑒定的。標本的樣品陳列在墨西哥的Mazatlan的"InstitutodeCienciasdelCienciasdelMaryLimnologia，，。參考代碼為LEB-ICML-UNAM-10-2004。實施例2:化合物I的分離將實施例1的冷凍海綿(38g)粉碎，并用H20和MeOH:CH2Cl2(1:l)在室溫下進行萃取。將有機萃取物在減壓下蒸發(fā)得到0.22g的粗品。將該材料在LichroprepRP-18上用從H20至MeOH,隨后用MeOH:CH2Cl2(1:1)和CH2C12梯度進行色層層析。用MeOH(23.3mg)和MeOH:CH2Cl2(1:1)(106.0mg)洗脫下的級分進行反向HPLC半制備(X-TermRP-18,10x150mm,無梯度H20:CH3CN40:605分鐘，然后梯度至80%CH3CN15分鐘，UV檢測器)，得到5.6mg無色油狀的化合物I。化合物I:無色油狀。ESIMSm/z:531[M+H]+,499[M+H-MeOH]+,1083[2M+Na]+，！H(500MHz)和13CNMR(125MHz)參見表1。表l.化合物I的&和13CMNR數(shù)據(jù)(CD3OD，500MHz和125MHz)<table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table><formula>formulaseeoriginaldocumentpage23</formula>化合物I實施例3:抗鐘瘤篩選的生物試騶、這些試驗的最終結(jié)果是為了通過連續(xù)顯示待測樣品的細胞來中斷體外肺瘤細胞培養(yǎng)物的生長。細胞系名稱N。ATCC種類組織特征A549CCL-185人肺肺癌"NSCL"HT29HTB-38人結(jié)腸結(jié)腸腺癌MDA-MB-231HTB-26人乳房乳腺癌試驗的比色類型，使用磺基羅丹明B(SRB)反應，采用細胞生長和存活的定量測量來進行[采用由PhilipSkehan等人(1990)描述的技術(shù)，用于抗腫瘤藥物篩選的新比色細月包毒性試-驗，J.A^"Ca"cer/"w.82:1107-1112]。該試驗形式應用9mm直徑的96孑L細胞培養(yǎng)微孔板(Fairdoth等人，M^/zod5,c'e〃s"e"ce,(1988),11(4),201-205,Mosmann，./m/r腦/o/7otww"o/wc"/M"/w^(1983),65(1-2),55-63。大部分細胞系是從美國典型培養(yǎng)物保藏機構(gòu)(ATCC)的來自不同的人癌癥類型得到的。將細胞保存在補充了0.1g/L青霉素和0.1g/L鏈霉素的RPMI164010%FBS中，然后在37。C、5%(302和98%濕度下保溫培養(yǎng)。對于這些實驗，使用胰島素從補充分會合培養(yǎng)物收獲細胞，并在鋪板之前再懸浮在新鮮的培養(yǎng)基中。以195|iL培養(yǎng)基的等分，以每個孔5x103個細胞將細月包接種在96孔微滴培養(yǎng)板上，允許它們通過在無藥物的培養(yǎng)基上生長來附著到板表面上18小時。然后，將試樣以在10-10—Sjug/mL范圍內(nèi)的5juL的等分加入，溶解在DMSO:EtOH:PBS(0.5:0.5:99)中。暴露48小時后，通過SRB方法測量抗肺瘤效果通過加入50juL的冷50%(重量/體積)三氯乙酸(TCA)來將細胞固定，并在4。C下保溫60分鐘。將板用去離子水洗滌并干燥。將100juL的SRB溶液(0.4%重量/體積，在1%乙酸中)加入至每個微滴孔中，并在室溫下保溫10分鐘。未結(jié)合的SRB通過用1%乙酸洗滌而被除去。將板空氣干燥，將粘附的污物用Tris緩沖液溶解。在490nm的單波長下在自動的分光光度板讀數(shù)器上讀出光密度。計算來自三個重復的孔的平均值+ASD數(shù)據(jù)的值?？梢杂嬎慵毎磻膮?shù)G^生長抑制，TGI"悉生長抑制(抑制細胞效果)，LC=殺死細胞(細胞毒性效果)化合物I是根據(jù)實施例2得到的，標樁菌素A(CAS號91682-96-l)從Fluka購買(參考號85865)。表2闡明了本發(fā)明化合物的細胞毒性活性的數(shù)據(jù)。表2.活性數(shù)據(jù)(M)<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>將細胞系在37°c、5%c02和98%濕度下在它們各自的生長培養(yǎng)基中保存。在將細胞鋪板的前一天，將培養(yǎng)物用新鮮的、完全的、無抗生素的生長培養(yǎng)基再加入。在收獲那天(鋪板)，將細胞用錐蟲藍排阻染色方法計數(shù)，并接種在190juL培養(yǎng)基的96孔微滴板中，并保溫24小時以允許細胞在添加測試藥物之前粘合。通過使用Multidrop384Titan裝置或多通道移液管來進行鋪板。在100。/。DMSO中制備在2mg/mL濃度下標樁菌素A(CAS號91682-96-1,購于FLUKA(Ref.85865))的儲備溶液。儲備溶液被認為在24小時期間內(nèi)是穩(wěn)定的。如下面描述的，在無血清的培養(yǎng)基上制備另外的連續(xù)稀釋液，以得到最后的20倍的處理濃度。將10jLiL的經(jīng)稀釋的測試物品加入到每個孔中。通過MTS試3全(四唑)對細胞毒作用進行測定，該試-驗是測定存活細胞數(shù)量的比色方法。與藥物一起保溫72小時后，將25mL的MTS+PMS溶液加入至每個樣i:滴孔中，并在37。C下保溫4小時。然后將板從保溫箱中取出，并放在平板振蕩器上持續(xù)5分鐘(用鋁箔蓋住以避免光照)。在分光光度板讀數(shù)器上在490nm下讀出光密度。用SoftMax程序?qū)?shù)據(jù)進4于分析。計算IC5Q(在50%生長抑制下測定的濃度)。使用SoftMax程序得到回歸曲線，然后將50%抑制濃度手工內(nèi)插，并除以化合物的摩爾重量來將該濃度轉(zhuǎn)化成摩爾濃度(M)。表3顯示得到的每個細胞系的IC5o(用M表示)。表3.標樁菌素A的體外抗胂瘤活性(M)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>實施例4:EGFR信號抑制試驗方法在該試驗中，使用EGF反應性的、API-介導的熒光素酶報道系統(tǒng)來間接地定量由活化的表皮生長因子(EGF)膜受體引發(fā)的信號轉(zhuǎn)換途徑。使用被含有處于人膠原酶-3基因(在位置-56/-50處的AP-1一致反應元件TGACTCA)的近端引發(fā)劑控制下的熒光素酶報道基因的構(gòu)建體穩(wěn)定地轉(zhuǎn)染的HeLa-APl,—種HeLa細胞系的亞克隆(人子宮頸癌，ATCC#CCL-2)。將細胞保存在補充了10。/。FCS和100單位/mL青霉素和鏈霉素在37。C和5%C02下的DMEM中。在用EGF(25ng/mL)刺激之前，將HeLa-API細月包用指示的化合物預處理30分鐘。在再溫育18小時后，估計細胞的存活率，通過用活的焚光探針鈣黃綠素-AM(0.5juM)負載細胞30分鐘來歸一化。使用1420維克多2板多標記計數(shù)器(Wallac)將熒光定量。之后，將細胞裂解，并使用Bright-Glo系統(tǒng)(P腿ega)和1450Microbeta板發(fā)光計數(shù)器(Wallac-Trilux)試驗焚光素酶活性。將結(jié)果表示成與對照未處理的細胞相比的AP-1活性抑制百分數(shù)。根據(jù)實施例2得到化合物I,標樁菌素A(CAS號91682-96-1)從FLUKA購買的(參考號85865)。表4闡明了本發(fā)明化合物的抑制EGFR細胞內(nèi)信號活性(AP-1活性抑制)的數(shù)據(jù)。表4.活性數(shù)據(jù)(M)<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>實施例5:在小鼠中測得的信號給藥劑量范圍該試驗的最終結(jié)果是為了測定在小鼠中單獨使用藥物的最大耐受劑量(MTD)。將用于該研究的約重25g的CD-1雄性小鼠隨機分成幾個劑量組。動物受到標樁菌素A(CAS號91682-96-1,購買于FLUKA(Ref:85865))的單一靜脈給藥，劑量進入尾側(cè)靜脈。一旦給藥，以固定間隔觀察動物的臨床跡象，直到給藥后4天。記錄每天的死亡率。(MTD)基于在每個劑量水平測得的死亡率來確定最大耐受劑量，當死亡率-劑量為0%時所計算的。結(jié)果以及有關實驗方法的更具體的細節(jié)以及最終的結(jié)果被總結(jié)于表5中表5.最大耐受劑量數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>實施例6:在小鼠中測得的多給藥劑量范圍該試驗的最終結(jié)果是為了測定在小鼠中單獨使用藥物的最大耐受劑量(MTD)。將用于該研究的約重25g的CD-1雄性小鼠隨機分成幾個劑量組。動物受到通過靜脈內(nèi)或血管外(腹膜內(nèi))途徑多劑量給藥。一旦給藥，以固定間隔7見察動物的臨床跡象，直到給藥后4天。記錄每天的死亡率?；谠诿總€劑量水平測得的死亡率來確定最大耐受劑量(MTD)，當死亡率-劑量為0%時所計算的。標樁菌素A(CAS號91682-96-1，購買于FLUKA(參考號85865))的結(jié)果被總結(jié)于表6中表6.最大耐受多劑量數(shù)據(jù)<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>權(quán)利要求1.式(I)化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體其中R1、R2、R3、R4、R5和R6每個獨立地選自氫、ORa、OC(＝O)Ra、鹵素、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未被取代的C2-C12烯基和取代或未取代的C2-C12炔基；其中Ra選自氫、取代或未取代的C1-C12烷基、取代或未取代的C2-C12烯基、取代或未取代的C2-C12炔基、取代或未取代的芳基和取代或未取代的雜環(huán)基；其中X是O、S(O)m或NR；其中m是0、1或2；其中R選自氫、取代或未取代的C1～C12烷基、取代或未取代的C2-C12烯基和取代或未取代的C2-C12炔基；其中Y代表取代或未取代的C1-C12亞烷基鏈；其中n是2-6；波浪線是指所述鍵可以以(E)-異構(gòu)體或(Z)-異構(gòu)體存在；條件是(a)當所述結(jié)構(gòu)為；并且R2是-OCH3，R4是-OCH3時，R5不是-OH、-OCH3、-OCOCH3、-OCH2CO2H、-OCH2Ph或-OCH2CO2CH2CH3；當R2是-OH，R4是-OCH3時，R5不是-OH或-OCH3；和當R4是-OH，R5是-OCH3時，R2不是-OH或-OCH3；(b)當所述結(jié)構(gòu)是并且R2是-OCH3，R4是-OCH3時，R5不是-OH；(c)當所述結(jié)構(gòu)是時，R’不是H或甲基；(d)當所述結(jié)構(gòu)是時，R’不是甲基；和(e)當所述結(jié)構(gòu)是時，R”基團不全是H或不全是甲基；2.根據(jù)權(quán)利要求1的化合物，其中R!是氫、ORa或者取代或未取代的d-d2烷基，其中Ra如權(quán)利要求1中所定義。3.根據(jù)權(quán)利要求1或2的化合物，其中Ri是取代或未取代的Ci-。64.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一項的化合物，其中R^選自曱基、乙基、丙基、異丙基和丁基。5.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物，其中R2、R3、R4和R5是氫、ORa或OC(=0)Ra。6.根據(jù)權(quán)利要求5的化合物，其中&是氬或者取代或未取代的C]-Ci2貌基。7.根據(jù)權(quán)利要求6的化合物，其中Ra是氫或者取代或未取代的Ci-Cs坑^>o8.根據(jù)權(quán)利要求7的化合物，其中Ra是氳、曱基、乙基、丙基或異丙基。9.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物，其中X是O、S(O)m或NR,m是O,R是氫或者取代或未取代的d-Cu烷基。10.權(quán)利要求9的化合物，其中R是氫或者取代或未取代的CVC5烷基。11.根據(jù)權(quán)利要求10的化合物，其中R是氬、甲基、丙基、異丙基或丁基。12.根據(jù)權(quán)利要求9的化合物，其中X是O。13.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物，其中Y是取代或未取代的C3-Cs亞烷基鏈。14.根據(jù)權(quán)利要求13的化合物，其中Y是取代的1,4-亞丁基、1,5-亞戊基或1,6-亞己基。15.根據(jù)權(quán)利要求14的化合物，其中1,4-亞丁基、1,5-亞戊基或1,6-亞己基在一個或多個位置處被d-C6烷基、OH、烷氧基或C(=0)烷基取代。16.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物，其中R6是取代或未取代的CrC12烷基、取代或未取代的C2-C12烯基或者是取代或未取代的C2-C12塊基。17.根據(jù)權(quán)利要求16的化合物，其中R6是取代或未取代的CrC6烷基或者取代或未取代的C2-C6烯基。18.根據(jù)權(quán)利要求17的化合物，其中116是1-曱基丁基或1-甲基丙烯基。19.根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物，其中n是2或3。20.根據(jù)權(quán)利要求1的下式化合物<formula>formulaseeoriginaldocumentpage5</formula>21.用作藥物的根據(jù)前述任一項權(quán)利要求的化合物、或者其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體。22.用作治療癌癥的藥物的根據(jù)權(quán)利要求21的化合物。23.—種藥物組合物，包含根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項的化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體和藥學上可接受的稀釋劑或載體。24.根據(jù)權(quán)利要求1-20中任一項的化合物在制備用于治療癌癥的藥物中的用途，所述化合物包括那些被權(quán)利要求1的條件所排除的化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體。25.—種治療癌癥的方法，包括施用有效量的如權(quán)利要求1-20任一項定義的化合物，包含那些被權(quán)利要求1的條件所排除的化合物或其藥學上可接受的鹽、衍生物、前藥或立體異構(gòu)體。全文摘要通式(I)化合物用于治療癌癥，其中R₁、R₂、R₃、R₄、R₅、R₆和Y如所定義的，并且X為O、S(O)_m或NR。文檔編號A61P35/00GK101233125SQ200680028377公開日2008年7月30日申請日期2006年8月1日優(yōu)先權(quán)日2005年8月1日發(fā)明者A·M·弗朗西施索羅索,J·A·吉梅尼茨格雷羅,J·F·雷耶斯貝尼特茨,M·d·C·庫瓦斯馬錢特申請人:法馬馬有限公司