專利名稱：：用于藥物重構(gòu)或稀釋的氯化鈉溶液的制作方法用于藥物重構(gòu)或稀釋的氯化鈉溶液本申請(qǐng)要求于2005年11月1日提交的美國(guó)序列號(hào)60/732,221的優(yōu)先權(quán)，將其全部?jī)?nèi)容在此引入作為參考。文中引用的所有專利、專利申請(qǐng)以及出版物以其全部?jī)?nèi)容在此引入作以更加完整地描述直至本文所描述和要求保護(hù)的本發(fā)明之日本領(lǐng)域技術(shù)人員所公知的本領(lǐng)域的狀況。本專利文件的一部分公開(kāi)內(nèi)容中含有受著作權(quán)保護(hù)的材料。著作權(quán)擁有人不反對(duì)任何人對(duì)該專利文件或?qū)＠_(kāi)內(nèi)容進(jìn)行摹寫復(fù)制(facsimilereproduction),因?yàn)樗霈F(xiàn)于專利商標(biāo)局專利檔案或記錄內(nèi)，但在其它方面則保留所有的著作權(quán)。
背景技術(shù)：
：當(dāng)全血與藥物溶液混合時(shí)，例如在給藥可靜脈內(nèi)(IV)注射藥物期間、在靜脈管路內(nèi)，如果藥物溶液不含有足夠的離子強(qiáng)度，可能會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞疊聯(lián)(rouleaux)或紅細(xì)胞聚集(也稱為紅細(xì)胞凝集)。例如，在使用5%右旋糖水溶液(一種常用大體積注射液)和許多具有低離子強(qiáng)度的藥品(pharmaceuticalproducts)時(shí)，會(huì)發(fā)生紅細(xì)胞聚集。經(jīng)常將藥品冷凍干燥，因此在腸胃外注射前，需要使用溶液進(jìn)行重構(gòu)(reconstituted)。然而，當(dāng)將凍干產(chǎn)品用低離子強(qiáng)度的溶液重構(gòu)時(shí)，所得到的制劑也可能引起紅細(xì)胞聚集。盡管相對(duì)于無(wú)菌注射用水，使用生理鹽水溶液(0.9%NaCl)重構(gòu)凍干塊(lyophilizedcake)會(huì)提供額外的離子強(qiáng)度，但是得到的藥物溶液可能是高滲的，并且在注射時(shí)可能會(huì)有不希望的副作用。因此，仍需要如下所述的溶液，其用于重構(gòu)凍干塊或稀釋藥物溶液，以提供注射用制劑，該制劑與血漿等滲并且具有足夠的離子強(qiáng)度，因此它不會(huì)引起紅細(xì)胞聚集。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供以下發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞凝集是由與血液接觸的低離子強(qiáng)度溶液所造成的。因此，當(dāng)藥物制劑是通過(guò)在低離子強(qiáng)度溶液(例如5%右旋糖、3%葡聚糖或sWFI(無(wú)菌注射用水))中重構(gòu)或稀釋而制備以供靜脈注射時(shí)，所得到的制劑可能具有與血液大約等滲的所必需的同滲容摩(osmolarity),但它們通常不具有足以防止凝集的離子強(qiáng)度。另一方面，當(dāng)藥物制劑是通過(guò)使用高離子強(qiáng)度溶液[例如鹽水溶液(0.9。/。NaCl或154mMNaCl)重構(gòu)或稀釋而制備以供靜脈內(nèi)注射時(shí)，所得到的制劑可能具有可防止凝集的足夠的離子強(qiáng)度，但它可能具有對(duì)于血液而言為高滲的同滲容摩，因而，如果重復(fù)注射是頻繁的或長(zhǎng)期的話，會(huì)造成紅細(xì)胞(RBCs)脫水、靜脈發(fā)炎和/或可能引起血栓性靜脈炎。一方面，本發(fā)明提供配制用于靜脈內(nèi)注射的藥物制劑方法，該方法包括將約25mM至約150mM的氯化鈉溶液加至藥物制劑中，從而得到配制的用于靜脈內(nèi)注射的制劑，其中該配制的制劑對(duì)于血漿而言大約是等滲的，或者對(duì)于血漿而言是稍微低滲的或稍微高滲的，并且該配制的制劑具有可防止紅細(xì)胞凝集(或紅細(xì)胞聚集)的足夠的離子強(qiáng)度。例如，當(dāng)配制的制劑具有約270mOsm/L至約330mOsm/L的同滲容摩時(shí)，它對(duì)于血漿而言大約是等滲的。例如，當(dāng)配制的制劑具有約220mOsm/L至約270mOsm/L的同滲容摩時(shí)，它對(duì)于血漿而言是稍微低滲的。例如，當(dāng)配制的制劑具有約330mOsm/L至約600mOsm/L的同滲容摩時(shí)，它對(duì)于血漿而言是稍微高滲的。在一個(gè)方面，當(dāng)配制的制劑具有例如至少約25mEq/L的Na+和Cl一離子時(shí)，它具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。在另一個(gè)方面，當(dāng)配制的制劑具有例如在少約40mEq/L的Na+和Cl—離子時(shí)，它具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。在另一個(gè)方面，當(dāng)配制的制劑具有例如至少約40mEq/L的Na+和C廠離子且低于約150mEq/L的Na+和C「離子時(shí)，它具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。在另一個(gè)方面，當(dāng)配制的制劑具有例如以導(dǎo)電率測(cè)定的至少為約2.5mS/cm的離子強(qiáng)度時(shí)，它具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。在另一個(gè)方面，當(dāng)配制的制劑具有例如以導(dǎo)電率測(cè)定至少為約4.0mS/cm的離子強(qiáng)度時(shí)，它具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。配制的用于注射的該藥物制劑可以是例如非液體制劑或溶液制劑。因此，非液體制劑可用氯化鈉濃度為約25-150mM、25-100mM、25-80mM、25-40mM、25-35mM、25-30mM或約40mM的氯化鈉溶液重構(gòu)為溶液。因此，液體或溶液制劑可用氯化鈉濃度為約25-150mM、25-100mM、25-80mM、25-40mM、25-35mM、25-30mM或約40mM的氯化鈉溶液稀釋。非液體制劑可以例如是凍干制劑。在一個(gè)方面，被加入的氯化鈉溶液含有約40mM至約150mM氯化鈉。在一個(gè)方面，被加入的氯化鈉溶液基本上是由約40mM至約150mM氯化鈉所構(gòu)成。在一個(gè)方面，纟皮加入的氯化鈉溶液含有約40mM氯化鈉。在一個(gè)方面，被加入的氯化鈉溶液基本上是由40mM氯化鈉溶液所構(gòu)成。在一個(gè)方面，被加入的氯化鈉溶液基本上是由溶液(其含有約40mM±10mM氯化鈉的氯化鈉溶液)所構(gòu)成。在一個(gè)方面，其中在加入上述氯化鈉溶液之前，藥物制劑不含有可察覺(jué)(appreciable)量的離子化鹽。離子化鹽的可察覺(jué)量可以是例如大于約5mM的量。在另一個(gè)方面，離子化鹽的可察覺(jué)量可以是例如大于約25mM的量。如果該藥物制劑是凍干制劑，當(dāng)該凍干制劑在水中重構(gòu)時(shí)，如果它含有不高于例如5mM或25mM的離子化鹽，則它不含有可察覺(jué)量的離子化鹽。在一個(gè)方面，其中在加入該氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖和聚山梨醇酯。在另一個(gè)方面，其中在加入該氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯和治療性蛋白質(zhì)。在文中，治療性蛋白質(zhì)可以是例如用于治療凝血障礙或用于止血的蛋白質(zhì)，包括但不限于凝血因子VII、凝血因子VIII、凝血因子IX、凝血因子X(jué)III、抗體、它們的相關(guān)類似物以及它們的衍生物。在另一個(gè)方面，其中在加入該氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯以及凝血因子IX[包含重組凝血因子IX(rFIX)]。如文中所使用，凝血因子IX可包含凝血因子IX的修飾型(modifiedversion),包括例如，聚乙二醇化凝血因子IX;含有凝血因子IX的蛋白質(zhì)融合體，例如白蛋白-凝血因子IX或免疫球蛋白[它的整體或區(qū)域(domains)卜凝血因子IX;以及糖基化凝血因子IX。在一個(gè)方面，其中藥物制劑是凍干制劑，在加入該氯化鈉溶液之前，該制劑，就如將其重構(gòu)于水中[體積等于填充體積(fillvolumn)，即該制劑在凍干前的體積來(lái)測(cè)定，含有(a)約5mM至約30mM的組氨酸；(b)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(c)約0.5%至約2%的蔗糖；和(d)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯(或約0.005%至約0.05%)。在一個(gè)方面，就如將其重構(gòu)于水中來(lái)測(cè)定，該制劑可另外含有(e)約O.lmg/mL至約100mg/mL或更多的治療性蛋白質(zhì)，或者約10、50、100、200、300、400、500、1000、2000IU/mL(國(guó)際單位/mL)或更多的治療性蛋白質(zhì)。在一個(gè)方面，就如將其重構(gòu)于水中來(lái)測(cè)定，該制劑可另外含有(e)約0.1mg/mL至約100mg/mL或更多的凝血因子IX，或約0.4mg/mL至約20mg/mL的凝血因子IX，或約10、50、100、200、300、400、500、1000、2000IU/mL(國(guó)際單位/mL)或更多的凝血因子IX。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供用于防止由靜脈內(nèi)注射所引起的紅細(xì)胞凝集的方法，該方法包括"使用約25mM至約150mM的氯化鈉溶液重構(gòu)或稀釋藥物制劑，從而使得重構(gòu)或稀釋的藥物制劑具有足夠的離子強(qiáng)度，以在將該重構(gòu)或稀釋的藥物制劑靜脈內(nèi)注射給藥至個(gè)體時(shí)防止紅細(xì)胞凝集。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供配制用于靜脈內(nèi)注射的凍干藥物制劑的方法，該方法包括使用約25mM至約150mM的氯化鈉溶液重構(gòu)該凍干藥物制劑，從而使得在重構(gòu)之后，該制劑具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度，并具有大約等滲的(或稍微高滲的或稍微低滲的)的同滲容摩。在一個(gè)方面，使用上述氯化鈉溶液重構(gòu)凍干的制劑，其中用于重構(gòu)的氯化鈉溶液體積少于凍干前制劑的體積(即填充體積)。以此方式，本發(fā)明提供用于減少被注射的制劑的體積的方法。在一個(gè)方面，使用上述氯化鈉溶液重構(gòu)凍干的制劑，其中用于重構(gòu)的氯化鈉溶液的體積大于凍干前制劑的體積(即填充體積)。以此方式，本發(fā)明提供用于維持被注射制劑的等滲性的方法。例如，凍干制劑可用大于凍干前的制劑的體積的氯化鈉溶液重構(gòu)，例如當(dāng)該凍干前的制劑體積是4mL時(shí)，可用5mL氯化鈉重構(gòu)。例如，重構(gòu)于4mL水中的凍干的4mL制劑是含有10mM組氨酸、260mM甘氨酸、1%蔗糖、0.005%聚山梨醇酯的等滲溶液，它約是300mOsm/L。但是如果該凍干制劑用4mL的40mMNaCl(80mOsm/L)溶液重構(gòu)，則所得到的制劑將為稍微高滲的溶液(300mOsm/L+80mOsm/L=380mOsm/L)。但如果該凍干制劑用5mL的40mMNaCl溶液重構(gòu)，則所得到的溶液含有約8mM(8mOsm/L)組氨酸、208mM(208mOsm/L)甘氨酸、0.8%(24mOsm/L)蔗糖、0.004%(可忽略的同滲容摩)聚山梨醇酯和40mM(80mOsm/L)NaCl，其約為320mOsm/L。因此，通過(guò)用體積大于填充體積的氯化鈉溶液重構(gòu)凍干前約為等滲的制劑，本發(fā)明可以提供仍為大約等滲的制得的溶液。換言之，用體積少于或約等于填充體積的氯化鈉溶液來(lái)重構(gòu)凍干前大約為等滲的制劑可以形成稍微高滲的溶液。為避免這種情況發(fā)生，本發(fā)明提供用以維持等滲性的方法，該方法通過(guò)用體積大于凍干前的制劑的體積的氯化鈉溶液來(lái)重構(gòu)凍干制劑。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供用以維持凍干制劑在重構(gòu)后的等滲性的方法，該方法包括將凍干制劑重構(gòu)于比凍干前制劑的體積至少大20%的體積內(nèi)，其中該凍干前的制劑大約是等滲的，從而重構(gòu)的制劑大約是等滲的并且具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。通過(guò)將凍干制劑重構(gòu)于大于它的凍干前體積的體積內(nèi)，與凍千前相比，凍干塊對(duì)于同滲容摩的貢獻(xiàn)隨重構(gòu)的體積的增加呈正比'f生降低。例如，在體積X內(nèi)的凍干前制劑具有300mOsm/L的滲壓性，如果用比體積X大20%的體積Y重構(gòu)于溶液中，則上述300mOsm/L變?yōu)轶w積Y中的240mOsm/L(由于體積增加20%，所以同滲容摩減少20%)。如果具有體積Y的溶液是氯化鈉溶液，則氯化鈉溶液對(duì)于張力的貢獻(xiàn)是該溶液中氯化鈉濃度的兩倍。例如，如果具有體積Y的溶液是40mM，則重構(gòu)的溶液具有240mOsm/L加上80mOsm/L的張力，它大約是等滲的，而且它具有足夠的離子強(qiáng)度以防止紅細(xì)胞聚集。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供配制用于靜脈內(nèi)注射的凍干的凝血因子IX制劑的方法，該方法包括將約25mM至約150mM的氯化鈉溶液加至凍干的凝血因子IX制劑中，從而形成配制的用于靜脈內(nèi)注射的制劑，其中該配制的制劑對(duì)于血漿而言大約是等滲的，或者對(duì)于血漿而言是稍微低滲的或稍微高滲的，并且其中該配制的制劑具有足以防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度。在一個(gè)方面，該凍干的凝血因子IX制劑，當(dāng)就如重構(gòu)于水中來(lái)測(cè)量時(shí)，含有(a)約5mM至約30mM的組氨酸；(b)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(c)約0.5%至約2°/。的蔗糖；(d)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯；以及(e)約0.4mg/mL至約20mg/mL的凝血因子IX，或約0.1mg/mL至約100mg/mL或某種其它可溶量的凝血因子IX，或約10IU/mL至約500IU/mL的凝血因子IX，或約10IU/mL至約5000IU/mL的凝血因子IX。在一個(gè)方面，將約40mM的氯化鈉溶液加至凍干的凝血因子IX制劑中。在一個(gè)方面，將大約5mL的約40mM氯化鈉溶液加至凍干的凝血因子IX制劑中。在一個(gè)方面，就如將其它重構(gòu)于水中來(lái)測(cè)量時(shí)，該凍干的凝血因子IX制劑含有約10mM的組氨酸、約0,26M的甘氨酸、約1%的蔗糖以及約0.005%的聚山梨醇酯。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供藥盒(pharmaceuticalkit)，該藥盒包含(a)含有凍干塊的小瓶，其中如果將該凍干塊重構(gòu)于5mL的水中，則該溶液將含有(i)約5mM至約30mM的組氨酸；(ii)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(iii)約0.5%至約2%的蔗糖；(iv)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯；和(v)約0.4mg/mL至約20mg/mL的凝血因子IX，或約0.1mg/mL至約100mg/mL或某種其它可溶量的凝血因子IX,或約50IU/mL至約500IU/mL的凝血因子IX，或約10IU/mL至約5000IU/mL的凝血因子IX;(b)Z5mM至約1S0mM的氯化鈉溶液；以及(c)-使用該氯化鈉溶液來(lái)重構(gòu)該凍干塊的說(shuō)明書(shū)，使得在重構(gòu)之后，所形成的溶液大約是等滲的，并且具有足夠的離子強(qiáng)度以在靜脈內(nèi)注射時(shí)防止紅細(xì)胞聚集。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供藥盒，該藥盒含有(a)含有凍干塊的小瓶，其中如果將該凍干塊重構(gòu)于4mL的水中，則該溶液將含有(i)約10mM的組氨酸；(ii)約0.26M的甘氨酸；(iii)約1%的蔗糖;(iv)約0.005%的聚山梨醇酯80;和(v)約50IU/mL至約5000IU/mL的凝血因子IX;(b)約40mM的氯化鈉溶液；以及(c)用約5mL的約40mM氯化鈉溶液來(lái)重構(gòu)該小瓶中的凍干塊的說(shuō)明書(shū)，使得在重構(gòu)之后，所形成的溶液含有(i)約7或8至約10mM的組氨酸；(ii)約200至約210mM的甘氨酸；(iii)約0.7%至約0.9%的蔗糖；(iv)約0.004%的聚山梨醇酯80;(v)約50IU/mL至約5000IU/mL的凝血因子IX;和(vi)約40mM的NaCl。圖1顯示來(lái)自實(shí)施例3中描述的實(shí)驗(yàn)的紅細(xì)胞沉降結(jié)果。紅細(xì)胞沉降是使用改良的韋斯特格倫氏法(modifiedWestergrenmethod)的調(diào)整方法(adaptation)在60分鐘時(shí)進(jìn)行測(cè)量的(參見(jiàn)實(shí)施例2)，其中收集在EDTA中的人類血液與測(cè)試溶液1:4混合。在60分鐘后，以mm為單位測(cè)定零點(diǎn)標(biāo)記(zeromark)和紅細(xì)胞血漿界面之間的距離。水平短線(horizontalbars)表示來(lái)自總共12個(gè)供體的平均值，而垂直括號(hào)(verticalbrackets)代表標(biāo)準(zhǔn)偏差。結(jié)果是合并自4個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)，每個(gè)實(shí)驗(yàn)評(píng)估來(lái)自于3個(gè)供體的血液。圖2顯示對(duì)使用NaCl溶液重構(gòu)的BeneFIX⑧制劑的紅細(xì)胞沉降的評(píng)估。當(dāng)用于重構(gòu)當(dāng)前市售的BeneFIX⑧產(chǎn)品或BeneFIX⑧的新制劑(BeneFIX-R，其中在凍干前，填充溶液為4mL并且含有10mM組氨酸、260mM甘氨酸、1%蔗糖、0.005%聚山梨醇酯80;而在凍干后，將它用5mL的40mM氯化鈉重構(gòu)，從而在重構(gòu)后，BeneFIX-R含有40mMNaCl、8mM組氨酸、208mM甘氨酸、0.8%蔗糖和0.004%聚山梨醇酯)時(shí)，40mMNaCl溶液足以防止紅細(xì)胞凝集。發(fā)明詳述本發(fā)明提供配制用于注射的藥物制劑(特別是即可靜脈內(nèi)注射的制劑)的方法，該藥物制劑不會(huì)引起紅細(xì)胞凝集、溶血和/或細(xì)胞皺縮。為防止凝集，即可注射的藥物制劑需要具有足夠的離子強(qiáng)度。為防止溶血或細(xì)胞皺縮，即可注射的藥物制劑需要與血漿大約等滲。本發(fā)明提供配制用于注射的藥物制劑的方法，該用于注射的藥物制劑具有足以防止凝集的離子強(qiáng)度以及防止明顯的溶血或細(xì)胞脫水或皺縮的必需的張力。本發(fā)明方法涉及約為25mM至約150mM的氯化鈉溶液用以重構(gòu)凍干塊(或其它非液體藥物制劑)成為溶液或用以稀釋藥物制劑溶液的用途。無(wú)論該氯化鈉溶液是用于重構(gòu)還是用于稀釋的，加入特定的氯化鈉溶液致使形成用于注射的藥物制劑，它與血漿或血液是大約等滲的，并且具有足夠的離子強(qiáng)度以在注射時(shí)(特別是靜脈內(nèi)注射時(shí))防止紅細(xì)胞聚集。術(shù)語(yǔ)如文中所用，溶液的"質(zhì)量摩爾濃度"是每千克溶劑中溶質(zhì)的摩爾數(shù)。如文中所用，溶液的"體積摩爾濃度"是每升溶液中的溶質(zhì)的摩爾數(shù)。如文中所用，"滲摩(osmole)"是一種物質(zhì)在理想溶液中使溶劑的凝固點(diǎn)降低1.86K的那個(gè)粒子數(shù)[阿佛加德羅常數(shù)(Avogadro，snumber)I的數(shù)量。如文中所用，溶液的"同滲質(zhì)量摩爾濃度"是每千克溶劑中的溶質(zhì)的滲摩的數(shù)目。同滲質(zhì)量摩爾濃度是存在于溶液中的粒子數(shù)目的量度，而與粒子的尺寸或重量無(wú)關(guān)。它可以僅通過(guò)利用溶液的只依賴于粒子濃度的性質(zhì)進(jìn)行測(cè)量。這些性質(zhì)是蒸氣壓降低、凝固點(diǎn)降低、沸點(diǎn)升高和滲透壓，并且統(tǒng)稱為依數(shù)性。如文中所用，溶液的"同滲容摩"是每升溶液中的溶質(zhì)的滲摩的數(shù)目。如文中所用，即可注射的或配制的用于注射的"藥物制劑，，可以是任何意欲給藥至個(gè)體的藥物。例如，藥物制劑可以是凍干塊、溶液、粉末或固體。該制劑，如果不為液體形式，用本發(fā)明的NaCl溶液重構(gòu)成溶液。如果該制劑是液體形式的，該制劑可用本發(fā)明的NaCl溶液稀釋或混合。離子強(qiáng)度離子強(qiáng)度是電解質(zhì)溶液(正和負(fù)電荷離子溶解于內(nèi)的液體)的一種特性。它通常表現(xiàn)為電解質(zhì)離子間的平均靜電相互作用。電解質(zhì)的離子強(qiáng)度是通過(guò)將各個(gè)離子的重量摩爾濃度(每單位質(zhì)量溶劑中的物質(zhì)的量)與其價(jià)數(shù)的平方相乘所得到的總數(shù)的一半。離子強(qiáng)度與電解質(zhì)的濃度是密切相關(guān)的，并且表明在特定的離子上的電荷是如何有效地被電解質(zhì)中的其它離子(所謂的離子氛)遮蔽或禾穩(wěn)定化。離子強(qiáng)度與電解質(zhì)濃度之間的主要差異是如果某些離子是更高電荷的，前者是更高的。例如，含有被完全解離(分解)的硫酸鎂(Mg"S042—)的溶液的離子強(qiáng)度是相同濃度的氯化鈉(Na+Cl—)溶液的離子強(qiáng)度的4倍。在該二者之間的另一個(gè)差異是離子強(qiáng)度反映自由離子的濃度，而不只是有多少鹽被加入溶液中。有時(shí)鹽可能被溶解但是各個(gè)離子仍然成對(duì)地結(jié)合在一起，類似于溶液中的無(wú)電荷的分子。在該情況下，離子強(qiáng)度要比鹽濃度低得多。就本發(fā)明而言，將藥物制劑配制用于注射，使得它們不但是等滲的，而且具有足夠的離子強(qiáng)度以防止RBC凝集。可立即注射的制劑(即用本發(fā)明的NaCl溶液重構(gòu)的凍千塊或用本發(fā)明的NaCl溶液稀釋的藥物溶液)的足夠的離子強(qiáng)度可為例如每升至少約25毫當(dāng)量(mEq/L)的Na+和C1—離子。在一個(gè)實(shí)施方案中，足夠的離子強(qiáng)度是至少約30、31、32、33、34、35、36、37、38、39或至少約40mEq/L的Na+和Cl—離子。離子強(qiáng)度也可用溶液的導(dǎo)電率進(jìn)行描述。導(dǎo)電率是物質(zhì)或溶液傳導(dǎo)電流的能力。儀器用來(lái)測(cè)量導(dǎo)電率的原理是簡(jiǎn)單的-將兩個(gè)極板置于樣品中，將電位施加于上述極板(通常是正弦波電壓)，測(cè)量電流。導(dǎo)電率(G)，電阻率(R)的倒數(shù)，是根據(jù)奧姆定律G-I/Rd(安培)/E(伏特)由電壓和電流值得到的。因?yàn)槿芤褐械碾x子上的電荷會(huì)促進(jìn)電流的電導(dǎo)，所以溶液的導(dǎo)電率正比于它的離子濃度。然而，在某些情況中，導(dǎo)電率可能與濃度不直接相關(guān)。但是，對(duì)于氯化鈉溶液而言，導(dǎo)電率直接與離子濃度成正比。導(dǎo)電率的基本單位是西門子(siemens，S)，先前被稱為姆歐(mho)。因?yàn)闇y(cè)試樣品的幾何形狀會(huì)影響導(dǎo)電率的值，標(biāo)準(zhǔn)化的量測(cè)用比導(dǎo)電率單位(S/cm)表示，以補(bǔ)償電極尺寸上的差異。比導(dǎo)電率(C)僅是測(cè)得的導(dǎo)電率(G)與電極電池常數(shù)(L/A)的乘積，其中L是介于電極之間的液柱的長(zhǎng)度，而A是電極的面積。C=Gx(L/A)。如果該電池系數(shù)是lcm",比導(dǎo)電率與測(cè)得的溶液的導(dǎo)電率相同。盡管電極的形狀會(huì)不同，但是電極總可用等價(jià)的理論電池代表。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，即可注射的制劑的足夠的離子強(qiáng)度可具有，例如，至少約為4mS/cm或更高的導(dǎo)電率。在另一個(gè)實(shí)施方案中，即可注射的溶液的足夠的離子強(qiáng)度是至少約2.5、2.6、2.7、2.8、2.9、3.0、3.1、3.2、3.3、3.4、3.5、3.6、3.7、3.8或至少約3.9mS/cm。還可用溶液是否具有足夠的可防止紅細(xì)胞凝集的離子強(qiáng)度的操作性定義解釋術(shù)語(yǔ)"足夠的離子強(qiáng)度"。例如，這可以根據(jù)如下實(shí)驗(yàn)確定將測(cè)試溶液加至全血，并觀察紅細(xì)胞沉降的距離。(參見(jiàn)實(shí)施例2;經(jīng)調(diào)整的改良的韋斯特格倫氏法)。在一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)以4:1的比例與全血混合時(shí)，如果測(cè)試溶液在60分鐘時(shí)提供小于約10mm的紅細(xì)胞沉降(例如，參見(jiàn)實(shí)施例2，圖1和圖2)，則該測(cè)試溶液具有可防止紅細(xì)胞凝集的足夠的離子強(qiáng)度。在另一個(gè)實(shí)施方案中，當(dāng)以4:1的比例與全血混合時(shí)，如果測(cè)試溶液在60分鐘時(shí)提供小于約5mm的紅細(xì)胞沉降，則該測(cè)試溶液具有足以防止紅細(xì)胞凝集的足夠的離子強(qiáng)度。溶液同滲容摩本發(fā)明的方法提供用于注射的藥物制劑，它與血液大約是等滲的。為了確定藥物制劑是否與血液大約等滲，人們應(yīng)計(jì)算包括稀釋劑的溶液的全部化學(xué)組分的同滲容摩。用于注射的藥物制劑(腸胃外溶液的容積滲摩濃度(osmolarconcentration))可以對(duì)人體的血液細(xì)胞和血管產(chǎn)生不良作用。可以計(jì)算得到流體以及經(jīng)溶解或經(jīng)稀釋的藥物的張力，它以每升液體的毫滲摩爾(mOsm/L)的數(shù)值表示。此數(shù)值也稱為同滲容摩。血液的同滲容摩范圍落在285和310mOsm/L之間。當(dāng)將低滲的或高滲的溶液注射至血液中時(shí)，液體移進(jìn)或移出細(xì)胞，這可造成各種負(fù)面效應(yīng)。液體同滲容摩部分地基于滲透和滲透壓的概念。滲透是通過(guò)例如血管或細(xì)胞膜的半透膜的溶質(zhì)(被溶解的粒子)的擴(kuò)散或液體的轉(zhuǎn)移。滲透壓可促進(jìn)分子跨膜輸送，它以容積滲摩濃度表示，并且當(dāng)與例如血液或血漿的生物流體相比較時(shí)，將其稱為低滲的(低張的)、等滲的(等張的)或高滲的(高張的)。通常將術(shù)語(yǔ)"張力，，以及"滲透壓，，視為是同義的。滲透壓是對(duì)抗水因應(yīng)"滲透梯度"(即在膜兩側(cè)的不同粒子濃度)而通過(guò)半透膜移動(dòng)所需的流體靜壓(或液壓)。血清同滲容摩可以通過(guò)使用滲透壓計(jì)進(jìn)行測(cè)量，或者它可以作為存在于溶液中的溶質(zhì)濃度的總和而被計(jì)算。在實(shí)驗(yàn)室中測(cè)得的數(shù)值通常指同滲質(zhì)量摩爾濃度。從溶質(zhì)濃度計(jì)算出的數(shù)值被實(shí)驗(yàn)室以同滲容摩進(jìn)行報(bào)導(dǎo)。該滲摩差異(osmolargap)是這兩個(gè)數(shù)值之間的差異。在文中，認(rèn)為張力和滲透壓是同義的，并且應(yīng)進(jìn)行廣義地理解。張力可以指有效的同滲質(zhì)量摩爾濃度，并且等于溶液中的溶質(zhì)的濃度的總和，所述溶質(zhì)有能力產(chǎn)生跨膜(包括細(xì)胞膜)滲透力。嚴(yán)格來(lái)說(shuō)，同滲質(zhì)量摩爾濃度是特定溶液的性質(zhì)而與任何膜無(wú)關(guān)。張力是溶液相對(duì)于特定膜的性質(zhì)。然而，本發(fā)明涉及與生物溶液(例如血液或血漿)等滲的溶液，該說(shuō)法將包含下列意義對(duì)于在血液或血漿或其它生物溶液中的細(xì)胞的細(xì)胞膜而言，該特定溶液與血液或血漿是等滲的。"張力"的操作性定義可用于解釋該術(shù)語(yǔ)。這可以基于將測(cè)試溶液加至全血并且觀察結(jié)果的實(shí)驗(yàn)來(lái)完成。如果全血中的RBCs膨脹并破裂，則該測(cè)試溶液與正常血漿相比是低滲的。如果RBCs鈹縮并變成圓鋸齒狀的，則該測(cè)試溶液與正常血漿相比是高滲的。如果RBC保持不變，則該測(cè)試溶液與血漿是等滲的。RBC細(xì)胞膜是參考膜(referencemembrane)。例如，置于生理鹽水(即0.9%氯化鈉)中的全血不會(huì)膨脹，因此生理鹽水是等滲的。等滲溶液的特性本發(fā)明提供配制或預(yù)備用于注射至個(gè)體的藥物制劑的方法，其中將該制劑配制成溶液，該溶液(l)就血液(或血漿或其它生物流體)而言大約是等滲的，或者是不會(huì)引起明顯的溶血、血栓或血管刺激的高滲或低滲的；且(2)具有足夠的離子強(qiáng)度以防止紅細(xì)胞聚集。在一個(gè)實(shí)施方案中，即可注射的等滲(對(duì)于血液而言)藥物制劑具有大于約270mOsm/L并且低于約330mOsm/L的張力或同滲容摩。在一個(gè)實(shí)施方案中，即可注射的等滲藥物制劑具有大于約270mOsm/L并且低于約328mOsm/L的張力或同滲容摩。盡管例如0.9%氯化鈉和5%右旋糖的溶液是等滲的，但是當(dāng)將它們用于重構(gòu)或稀釋許多藥物制劑時(shí)，所形成的溶液可能不具有可防止紅細(xì)胞凝集的足夠的離子強(qiáng)度(就5%右旋糖而言)，或可能具有太高的離子強(qiáng)度而使得所形成的溶液是高滲的。因此，本發(fā)明的方法使用用于稀釋或重構(gòu)的溶液，該溶液含有如下的最小濃度的氯化鈉，其提供(a)足夠的離子強(qiáng)度以減輕紅細(xì)胞聚集，和(b)足夠的張力以防止溶血；和如下的最大濃度的氯化鈉，其提供(c)未大到可成為高滲溶液的得到的張力。此外，本發(fā)明的方法使用用于稀釋或重構(gòu)的溶液，它可以提供足夠的離子強(qiáng)度并對(duì)于血液是等滲的，而同時(shí)對(duì)于藥物制劑而言可保持實(shí)用的注射體積。低滲溶液的特性本發(fā)明提供配制用于注射至個(gè)體的藥物制劑的方法，其中該制劑被配制成溶液，該溶液對(duì)于血液而言不是低滲的或者不是可引起明顯溶血那樣低滲的(即對(duì)于血液而言是稍微低滲的)。在一個(gè)實(shí)施方案中，被認(rèn)為對(duì)于血液而言是稍微低滲的即可注射的藥物制劑可能具有低于約270mOsm/L并且大于約240mOsm/L的張力或同滲容摩。在一個(gè)實(shí)施方案中，被認(rèn)為對(duì)于血液而言是稍微低滲的即可注射的藥物制劑可能具有少于約270mOsm/L并且大于約220mOsm/L的張力或同滲容摩。低張力溶液的實(shí)例包括許多含有無(wú)菌水的即可注射的藥物制劑。當(dāng)將低張力溶液注射時(shí)，發(fā)生流體轉(zhuǎn)移(fluidshift),水移動(dòng)至靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞和血液細(xì)胞中。吸收太多水的細(xì)胞會(huì)破裂，而因此低張力溶液的注射可引起血管刺激、靜脈炎和溶血。高張力溶液的特性本發(fā)明提供配制用于注射至個(gè)體的藥物制劑的方法，其中該制劑被配制成溶液，該溶液對(duì)于血液而言不是高滲的或者不是可引起明顯的血栓和/或血管刺激那樣高滲的(即稍微高滲的)。在一個(gè)實(shí)施方案中，被認(rèn)為是稍微高滲的即可注射的藥物制劑可能具有大于約340mOsm/L并且低于約600mOsm/L的張力或同滲容摩。在一個(gè)實(shí)施方案中，被認(rèn)為是稍微高滲的即可注射的藥物制劑可能具有大于約340并且少于約375、400、425、450、475、500或約575mOsm/L的張力或同滲容摩。一般而言，高滲溶液具有大于約340mOsm/L的張力。具有大于約600mOsm/L的同滲容摩的溶液在注射時(shí)應(yīng)小心使用。非所期的高滲溶液的實(shí)例包括許多含有10%右旋糖或多種可影響同滲容摩的添加劑的即可注射的藥物制劑。當(dāng)高滲溶液被注射時(shí)，發(fā)生流體轉(zhuǎn)移，水被從靜脈的內(nèi)皮細(xì)胞和血液細(xì)胞中吸出。損失太多水的細(xì)胞會(huì)鈹縮，因此注射高滲溶液可引起血管刺激、靜脈炎以及血栓。pH值血液的pH值范圍落在約7.35至約7.45，這被j見(jiàn)為是中性的。認(rèn)為具有低于7的pH值的藥物制劑是酸性藥物，而具有低于4.1的pH值的那些是非常酸性的。認(rèn)為具有高于7.5的pH值的藥物是堿性(basic)或堿性(alkaline)藥物，而具有高于9.0的pH值的那些是非常堿性的。非常酸性或非常堿性的藥物溶液可引起靜脈炎和血栓。因此，在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供用于重構(gòu)凍千藥物制劑或用于稀釋液體藥物制劑以使這些制劑即可靜脈內(nèi)注射的氯化鈉溶液，其中該即可注射的制劑(1)具有不小于4.1或不大于9.0的pH值，(2)具有可防止紅細(xì)胞聚集的足夠的離子強(qiáng)度，和(3)對(duì)于血液而言大約是等滲的(或稍微高滲或低滲的)，從而使RBC不會(huì)發(fā)生溶血或皺縮。然而，對(duì)于溶液是否具有足夠的離子強(qiáng)度以防止紅細(xì)胞聚集而言，不用考慮溶液的pH值。也就是說(shuō)，如果當(dāng)用水重構(gòu)時(shí)凍干制劑具有小于4.1或大于9.0的pH值，這不妨礙使用用于重構(gòu)的氯化鈉溶液以防止紅細(xì)胞凝集。計(jì)算同滲容摩任何藥物制劑的同滲容摩可以通過(guò)下列公式進(jìn)行計(jì)算同滲容摩=(物質(zhì)的重量(g)除以物質(zhì)的分子量(g/L))乘以物種的數(shù)目乘以1000作為毫同滲容摩。術(shù)語(yǔ)"物種"是指當(dāng)溶解發(fā)生時(shí)所形成的離子或化學(xué)物種的數(shù)目?？闪⒓词褂玫幕蚺渲频挠糜谧⑸涞乃幬镏苿┍景l(fā)明提供將凍干藥物產(chǎn)品重構(gòu)成溶液以配制用于注射至個(gè)體的藥物產(chǎn)品的方法。因?yàn)榫哂凶銐虻碾x子強(qiáng)度和對(duì)于血液而言大約是等滲的張力，該重構(gòu)藥物產(chǎn)品是即可注射的。本發(fā)明的方法還涉及稀釋藥物溶液以配制用于注射至個(gè)體的藥物溶液。因?yàn)槠渚哂凶銐虻碾x子強(qiáng)度并且對(duì)于血液而言大約是等滲的，稀釋的藥物溶液是即可注射的。在一個(gè)實(shí)施方案中，凍干或干燥的藥物產(chǎn)品/制劑，如果重構(gòu)于水中，會(huì)具有約100mOsm/L至約360mOsm/L的同滲容摩。因?yàn)楸景l(fā)明提供使用約25mM至約150mM的氯化鈉溶液進(jìn)行重構(gòu)的方法，醫(yī)師應(yīng)根據(jù)重構(gòu)成氯化鈉溶液的凍干藥物產(chǎn)品的預(yù)期組合同滲容摩而使用特定的氯化鈉溶液。因此，例如，如果凍干的藥物產(chǎn)品(如重構(gòu)于水中時(shí))具有約300mOsm/L的同滲容摩，則用于重構(gòu)的NaCl溶液應(yīng)該是約25mM至約30mM。在另一個(gè)實(shí)例中，如果凍干的藥物產(chǎn)品(如重構(gòu)于水中時(shí))具有約100mOsm/L的同滲容摩，則用于重構(gòu)的NaCl溶液應(yīng)該是約25mM至約130mM。在一個(gè)實(shí)施方案中，通過(guò)本發(fā)明方法而被配制以供注射的藥物產(chǎn)品(不論是凍干的或是溶液中的)不含有HES(羥乙基淀粉)。含有HES的制劑，盡管為了離子強(qiáng)度而使用NaCl溶液重構(gòu)或稀釋，在體外實(shí)驗(yàn)中可引起紅細(xì)胞沉降和凝集。在另一個(gè)實(shí)施方案中，因?yàn)榻?jīng)調(diào)整的改良韋斯特格倫氏法(參見(jiàn)實(shí)施例2)顯示NaCl的加入不會(huì)抵消葡聚糖類可能引起的增強(qiáng)的沉降效應(yīng)，所以通過(guò)本發(fā)明方法而被配制以供注射的藥物產(chǎn)品不含有葡聚糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供配制用于靜脈內(nèi)注射的藥物制劑的方法，其中該藥物制劑是含有主要填充劑(bulkingagent)的凍干塊。該主要填充劑可以例如基本上是非離子化的。非離子化的填充劑包括但不限于甘露糖醇、甘氨酸、蔗糖、乳糖、其它二醣類、治療性蛋白質(zhì)或制劑本身的活性成分或本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的其它填充劑。非離子化的填充劑的濃度不會(huì)顯著影響溶液是否具有可防止凝集的足夠的離子強(qiáng)度。然而，它們的濃度對(duì)同滲容摩有影響，因此它們的濃度可能對(duì)張力有影響。例如，甘氨酸的濃度等于它對(duì)同滲容摩的貢獻(xiàn)，因此10mM甘氨酸相當(dāng)于10mOsm/L。藥物制劑中的蛋白質(zhì)成分，包括活性成分，不會(huì)明顯地影響溶液的離子強(qiáng)度或溶液的同滲容摩。例如，假設(shè)蛋白質(zhì)分子量為50,000，并且假設(shè)1-2mL溶液中的2.5mg該蛋白質(zhì)將被注射。這相當(dāng)于0.05mM，因此，該蛋白質(zhì)對(duì)同滲容摩的貢獻(xiàn)是可忽略不計(jì)的。藥物制劑還通常含有表面活性劑，例如聚山梨醇酯-80。聚山梨醇酯-80和其它表面活性劑是大分子量分子，因此通常存在于制劑中的量(例如0.001%到0.01%)太少，以致于對(duì)同滲容摩或離子強(qiáng)度的貢獻(xiàn)是可忽略不計(jì)的。其它表面活性劑包括Brij⑧35、Brij30、Lubrol-pxTM、TritonX曙IO、PluronicF127以及十二烷基硫酸鈉(SDS)?？赡苄×看嬖谟谒幬镏苿┲械膶?duì)同滲容摩或離子強(qiáng)度的貢獻(xiàn)可忽略的其它大分子量分子是聚合物，前提是它們不是類似于硫酸葡聚糖的鹽。示例性聚合物包括葡聚糖、聚乙烯醇(PVA)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、明膠、聚乙二醇(PEG)以及聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。藥物制劑通常還含有蔗糖或其它糖類或多元醇類，通常以0-2、0-5或0-10%或更高的量存在。例如，當(dāng)制劑不含有填充劑時(shí)，可以使用5-10%的蔗糖。一般而言，當(dāng)制劑是凍干的時(shí)，當(dāng)該制劑的量在文中以百分比或體積摩爾濃度的量表征時(shí)，這是意指溶液在凍干前的百分比和體積摩爾濃度(即填充量)。因此，當(dāng)溶液具有1%蔗糖，這是相當(dāng)于29.2mM。因?yàn)檎崽窃谌芤褐袔缀醪浑x子化或解離，29mM的蔗糖相當(dāng)于29mOsm/L。其它在溶液中幾乎不離子化或解離的糖類或多元醇類包括甘油、木糖醇、山梨糖醇、甘露醇(也可用作填充劑)、葡萄糖、肌醇、棉子糖、麥芽三糖、乳糖以及海藻糖。藥物制劑還可含有緩沖劑。緩沖劑包括例如醋酸鹽、檸檬酸鹽、甘氨酸、組氨酸、磷酸鹽(鈉或鉀)、二乙醇胺以及三幾甲基氨基甲烷(Tris)。緩沖劑包括那些維持溶液pH值在可接受的范圍內(nèi)的物質(zhì)。例如甘氨酸、組氨酸以及二乙醇胺的緩沖劑基本上是非離子化的，因此它們的濃度等于同滲容摩，而在考慮即可注射的制劑是否是約等滲的時(shí)應(yīng)將其考慮在內(nèi)。例如醋酸鹽和檸檬酸鹽的緩沖劑是通常使用的鹽，并是離子化的，就計(jì)算它們對(duì)溶液同滲容摩的貢獻(xiàn)而言，它們的濃度要被乘算。藥物制劑基本上可以包含任何活性成分，包括蛋白質(zhì)、核酸、病毒以及化學(xué)化合物。這些分子大部分幾乎不影響要被注射的溶液的離子強(qiáng)度或同滲容摩。如果這些分子是鹽，如小分子化合物經(jīng)常是藥用鹽類，則它們能夠可感知地影響離子強(qiáng)度和/或同滲容摩。某些氨基酸還見(jiàn)于某些藥物制劑中，并且用作為抗凍劑(cryoprotectants)、冷凍保護(hù)劑(lyoprotectants)和/或填充劑。某些氨基酸(例如組氨酸)基本上是非離子化的，因此當(dāng)計(jì)算溶液的同滲容摩時(shí)，應(yīng)當(dāng)只考慮制劑中的氨基酸的濃度，以使即可注射的制劑對(duì)于血液而言大約是等滲的。BeneFIXBeneFIX⑧是通過(guò)遺傳工程化的中國(guó)倉(cāng)鼠卵巢(CHO)細(xì)胞系制備的，該細(xì)胞系被廣泛地特性鑒定并顯示不含有傳染原(infectiousagent)。被保存的細(xì)胞庫(kù)不含血液或血漿產(chǎn)物。該CHO細(xì)胞系分泌重組型凝血因子IX(rFIX)至不含有任何衍生自動(dòng)物或人類來(lái)源的蛋白質(zhì)的確定的細(xì)胞培養(yǎng)基中，該重組型凝血因子IX通過(guò)不需要單克隆抗體步驟的色譜純化方法進(jìn)行純化，得到高純度的活性產(chǎn)物。為了另外的病毒安全性(viralsafety),采用了具有能留置表觀分子量〉70,000的分子(例如大的蛋白質(zhì)和病毒粒子)能力的膜過(guò)濾步驟。通過(guò)SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳評(píng)估，BeneFIX⑧主要是一單一組分。效力(以國(guó)際單位I.U.(IU)計(jì))是使用針對(duì)凝血因子IX濃縮物的世界衛(wèi)生組織(WHO)國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)的活體外單期血凝實(shí)驗(yàn)(one-stageclottingassay)進(jìn)行測(cè)定的。一個(gè)國(guó)際單位是存在于lmL匯集的正常人血漿中的凝血因子IX活性的量。BeneFIX⑧的比活性(specificactivity)大于或等于每毫克的蛋白質(zhì)180IU。BeneFIX⑧不衍生自人類血液并且不含有防腐劑或添加的動(dòng)物或人類組分。BeneFIX⑧被配制成無(wú)菌無(wú)熱原的凍千散劑。BeneFIX⑧意欲用于靜脈內(nèi)(IV)注射。它可在單次使用的小瓶中使用，該小瓶含有標(biāo)示量的凝血因子IX活性(以國(guó)際單位(IU)表示)。各個(gè)小瓶含有例如標(biāo)稱的250、500或1000IU(或更多，包括2000IU)的凝固因子IX(重組型)。在使用無(wú)菌水重構(gòu)凍干的藥物產(chǎn)品之后，在500和1000IU劑量強(qiáng)度中的賦形劑的濃度是10mML-組氨酸、1%蔗糖、260mM甘氨酸、0.005。/。聚山梨醇酯80。在250IU劑量強(qiáng)度中的重構(gòu)后的濃度是上述其它兩種劑量強(qiáng)度的濃度的一半。500和1000IU劑量強(qiáng)度在重構(gòu)之后是等滲的，而250IU劑量強(qiáng)度在重構(gòu)之后具有上述其它兩種劑量強(qiáng)度的一半的張力。經(jīng)重構(gòu)后，全部劑量強(qiáng)度得到透明的無(wú)色溶液。在一個(gè)實(shí)施方案中，本發(fā)明提供配制注射至個(gè)體的BeneFIX⑧的方法，其中BeneFIX⑧重構(gòu)于氯化鈉溶液中，其中氯化鈉溶液大于約25mM并且少于約150mM。在一個(gè)實(shí)施方案中，用于重構(gòu)BeneFIX⑧的氯化鈉溶液是約40mM。在一個(gè)實(shí)施方案中，將一瓶?jī)龈傻腂eneFIX⑧重構(gòu)于約4-5mL的25mM-150mM氯化鈉溶液中。再制的(reformulated)BeneFIX⑧(BeneFIX-R)因?yàn)橹貥?gòu)于水中的BeneFIX⑧是低離子強(qiáng)度的，所以制備各種不同的再制劑(reformulations)(再制的BeneFIX(BeneFIX-R))。目的是將足夠的離子強(qiáng)度加入BeneFIX⑧制劑，以減少RBC凝集的可能性。為了增強(qiáng)BeneFIX⑧的離子強(qiáng)度，通過(guò)替換作為重構(gòu)溶液的sWFI，可將氯化鈉溶液引入至重構(gòu)產(chǎn)品中?；蛘呖蓪aCl加至凍干前的制劑而將BeneFIX⑧再配制，如此重構(gòu)可以仍用水來(lái)實(shí)現(xiàn)，但要凍干鹽溶液是更為困難的，而使用NaCl溶液簡(jiǎn)便地重構(gòu)凍千塊是更為可行的。對(duì)于其它當(dāng)使用sWFI重構(gòu)以防止凝集時(shí)不具有足夠的離子強(qiáng)度的凍干藥物制劑而言，這亦是真實(shí)的。在一個(gè)實(shí)施方案中，BeneFIX⑧-R可在與BeneFIX(10mML-組氨酸、260mM甘氨酸、1%蔗糖、0.005%聚山梨醇酯80)相同的制劑中凍干，而只是rFIX濃度會(huì)不同。BeneFIX-R原藥物產(chǎn)品(bulkdrugproduct)可能用10mML-組氨酸、260mM甘氨酸、1%蔗糖、0.005%聚山梨醇酯80填充為例如每小瓶4mL，并凍干。在與當(dāng)前的凍干前BeneFIX⑧制劑相比較時(shí)，當(dāng)將BeneFIX-R用25-150mMNaCl溶液(例如40mMNaCl)重構(gòu)至每小瓶5mL時(shí)，賦形劑的濃度減少了20%。這個(gè)策略得到的制劑是(l)等滲的，(2)具有足夠的離子強(qiáng)度以降低RBC凝集的可能性，以及(3)對(duì)較高劑量的rFIX而言，降低注射體積。BeneFIX-R可以以例如每小瓶250、500、1000和2000IU的rFIX的劑量強(qiáng)度提供。因此，在使用5mL的25-150mMNaCl溶液重構(gòu)之后，所得到的BeneFIX-R制劑溶液可以含有約7至約9mM組氨酸；約188至約220mM甘氨酸；約0.7%至約0.9%蔗糖；以及約0.004%聚山梨醇酯80。根據(jù)小瓶中rFIX的量，例如，250、500、1000或2000IU,在5mLNaCl溶液中重構(gòu)會(huì)分別得到約50、100、200或400IU/mL的rFIX濃度。重構(gòu)于5mL的40mMNaCl溶液中的BeneFIX-R制劑的同滲容摩是約320mOsm/L。配制的用于注射的示例性制劑重組型凝血因子IX還可在美國(guó)專利號(hào)6,372,716中描述的制劑中凍干，為了所有目的將該專利在此引入作為參考，包括其中描述的制劑。描述在該專利中的制劑可被本發(fā)明所使用，其中所述制劑不限于含有rFIX作為活性成分。因此，例如，可以使用25mM-150mM氯化鈉溶液重構(gòu)凍干制劑，以將它們配制為注射液，所述凍千制劑包括含有下列成分的制劑甘氨酸、聚山梨醇酯、蔗糖、組氨酸和活性成分。例如，該活性成分基本上可以是任何蛋白質(zhì)、病毒、核酸或化學(xué)化合物。甘氨酸可以具有例如約0.1M到0.3M的濃度。聚山梨醇酯可以具有例如約0.001至約0.05%的濃度。蔗糖可以具有例如約0.5%至約2%的濃度。組氨酸可以具有例如約5mM至約30mM的濃度。在一個(gè)實(shí)施方案中，欲使用25-150mM氯化鈉溶液重構(gòu)的凍干制劑含有約0.1到0.3M的甘氨酸、約0.5-2°/。的蔗糖、0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯、約5至約30mM的組氨酸以及約0.1至約20mg/mL的活性成分。活性成分可以是例如rFIX。在另一個(gè)實(shí)施方案中，欲使用25-150mM氯化鈉溶液重構(gòu)的rFIX凍干制劑含有約0.13至約3mg/ml的rFIX或約50至約600IU/mL的rFIX、約0.26M的甘氨酸、約10mM的組氨酸、約1%的蔗糖以及約0.005%聚山梨醇酯。實(shí)施例提供下面所述的實(shí)施例，以例示說(shuō)明本發(fā)明的方面，而不是為了限制本發(fā)明的目的將其引入。實(shí)施例1:抗凝血?jiǎng)┖椭苿┙M分對(duì)BeneFIX⑧-相關(guān)的RBC凝集的影響在蝶型導(dǎo)管管路(butterflycatheterlines)和注射器內(nèi)的BeneFIX⑧-相關(guān)的RBC凝集的偶有報(bào)道。對(duì)來(lái)自于血友病犬的血液的最近研究證實(shí)在制劑緩沖液中缺乏重組型人類FIX時(shí)，凝集會(huì)發(fā)生。因此本研究調(diào)查標(biāo)準(zhǔn)的抗凝血?jiǎng)?、不同的BeneFIX⑧組分和離子強(qiáng)度是否會(huì)影響B(tài)eneFIX-相關(guān)的凝集現(xiàn)象。血液得自于一群匿名的人類自愿者，并且收集于含有標(biāo)準(zhǔn)抗凝血?jiǎng)?例如乙二胺四乙酸(EDTA)、檸檬酸鈉或肝素)的真空采血管(Vacutainertubes)(BectonDickinson,FranklinLakes,NJ)內(nèi)。為了測(cè)試凝集，首先將真空采血管中的血液樣品在章動(dòng)器(nutator)上持續(xù)地混合。在48-孔細(xì)胞培養(yǎng)板中，將血液(12.5nL)稀釋于87.5jiL的測(cè)試溶液中，大室溫下孵育2分鐘，然后在倒置相差顯微鏡下以400X放大倍率觀察。將各個(gè)孔錄像以捕捉靜止影像，根據(jù)列在下面表l中的以下標(biāo)準(zhǔn)對(duì)RBC凝集評(píng)分。表l:RBC凝集評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)<table>tableseeoriginaldocumentpage26</column></row><table>標(biāo)準(zhǔn)抗凝血?jiǎng)?duì)RBC凝集的影響第一個(gè)研究包括對(duì)來(lái)自于3個(gè)供體的血液樣品的分析。就每個(gè)供體而言，將血液收集至EDTA、肝素和檸檬酸鈉真空采血管內(nèi)。將包含BeneFIX(100IU/mL)的檢品重構(gòu)于以下各濃度的NaCl溶液中0mM(sWFI)、20mM、40mM、60mM以及77mMNaCl。此外，將在水中的5。/。右旋糖(D5W)作為陽(yáng)性對(duì)照。將樣品以血液對(duì)BeneFIX⑧或血液對(duì)D5W為l:8的比例進(jìn)行稀釋。就凝集而言，將影像捕捉、數(shù)字化儲(chǔ)存、遮蔽(masked)并計(jì)分。在將血液加至使用sWFI重構(gòu)的BeneFIX⑧后的2分鐘時(shí)，不管使用的抗凝血?jiǎng)┑念愋褪鞘裁矗趤?lái)自于全部3個(gè)供體的樣品中觀察到凝集。當(dāng)使用增加濃度的NaCl時(shí)，凝集反應(yīng)減輕。當(dāng)將血液加入D5W中時(shí)，觀察到顯著的凝集。NaCl對(duì)經(jīng)預(yù)篩選供體(pre-screeneddonor)的RBC凝集的影響將供體樣品收集于肝素化真空采血管內(nèi)。因?yàn)橐延谀承┫惹暗臉悠分杏^察到自發(fā)性凝集，所有的供體最初使用154mMNaCl進(jìn)行篩選。如果觀察到凝集，就取消該樣品進(jìn)行進(jìn)一步分析的資格。剩余的來(lái)自各個(gè)供體的樣品以1:8稀釋至下列兩種制劑之一中(l)使用sWFI重構(gòu)的100IU/mLBeneFIX,和(2)4吏用154mMNaCl重構(gòu)的100IU/mLBeneFIX。就凝集而言，將影像捕捉、數(shù)字化儲(chǔ)存、遮蔽并計(jì)分。對(duì)于使用sWFI重構(gòu)的BeneFIX⑧而言，觀察到凝集，而對(duì)于使用154mMNaCl的重構(gòu)減少或消除凝集作用(參見(jiàn)關(guān)于評(píng)分的表2)。表2:<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table>制劑組分和BeneFIX⑧濃度的影響對(duì)BeneFIX⑧的數(shù)個(gè)制劑進(jìn)行評(píng)估，以確定不同組分對(duì)RBC凝集的影響。制備含有或不含有154mMNaCl的8種不同的混合物，總數(shù)為16種混合物(表3)。就自發(fā)性凝集，對(duì)12個(gè)供體進(jìn)行篩選，將2個(gè)供體取消進(jìn)行進(jìn)一步研究的資格。將剩余的來(lái)自10個(gè)供體中的5個(gè)供體的血液樣品用于第一組的8個(gè)制劑(樣品l-A至l-H)，而將另外5個(gè)供體樣品用于第二組的8個(gè)制劑(樣品2-1至2-P)。如前將樣品1:8稀釋，如前所述捕捉影像并計(jì)分。表3:<table>tableseeoriginaldocumentpage27</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage28</column></row><table>表4A:凝集評(píng)分-不同的BeneFIX⑧濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>表4B:凝集評(píng)分-賦形劑影響<table>tableseeoriginaldocumentpage29</column></row><table>較低濃度的NaCl在經(jīng)預(yù)篩選的供體中對(duì)RBC凝集的影響將供體樣品收集至肝素化真空采血管中。因?yàn)橐言谀承┫惹暗臉悠分斜挥^察到凝集，所以所有的供體最初用154mMNaCl進(jìn)行篩選。如果觀察到凝集，則取消樣品的進(jìn)一步分析的資格。剩余的來(lái)自各個(gè)供體的樣品如前以1:8稀釋在下列3種制劑當(dāng)中的一種(1)100IU/mLBeneFIX(使用sWFI);(2)100IU/mLBeneFIX(使用40mMNaCl);或(3)100IU/mLBeneFIX(使用77mMNaCl)。如前所述進(jìn)行影像捕捉、收集并評(píng)分。結(jié)果提供在下面表5中。在含有用水重構(gòu)的BeneFIX⑧的所有5個(gè)樣品中觀察到凝集，而使用40Mm或77mMNaCl的BeneFIX⑧的重構(gòu)會(huì)降低或消除凝集反應(yīng)。表5:凝集評(píng)夯<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>分析當(dāng)以血液與重構(gòu)的BeneFIX⑧體積比為1:8的比例與BeneFIX混合時(shí)，在用肝素、EDTA或檸檬酸鈉抗凝的血液中可發(fā)生RBC凝集。沒(méi)有觀察到抗凝血?jiǎng)╊愋蛯?duì)凝集的影響，因此將肝素用作隨后的評(píng)估中的抗凝血?jiǎng)?。在某些樣品中，在僅0.9%NaCl(就凝集而言的陰性對(duì)照)存在下發(fā)生凝集。因此，隨后的評(píng)估只用那些使用0.9。/。NaCl對(duì)照而沒(méi)有表現(xiàn)出凝集的樣品來(lái)進(jìn)行。當(dāng)與肝素抗凝的血液以血液對(duì)BeneFIX⑧體積比為1:8混合時(shí)，將重構(gòu)于sWFI或NaCl溶液的3個(gè)濃度(IOO、300或600IU/mL)的BeneFIX和BeneFIX⑧的各個(gè)單獨(dú)組分對(duì)RBC凝集的影響進(jìn)行評(píng)估。去除任何特定組分(包括重組型人類FIX蛋白質(zhì))并對(duì)凝集反應(yīng)沒(méi)有影響。這表明可以使用NaCl溶液制備(重構(gòu)或稀釋)許多不同的藥物制劑，以用于靜脈內(nèi)注射。移除甘氨酸會(huì)造成RBC溶胞。然而，使用40mM(0.234%NaCl，可注射的)、77mM(0.45%NaCl,可注射的)或154mMNaCl(0.9%NaCl,可注射的)進(jìn)行重構(gòu)可降低或消除凝集反應(yīng)和溶胞。因此，這些結(jié)果顯示BeneFIX⑧制劑沒(méi)有與觀察到的凝集相關(guān)的特定的組分。雖然從BeneFIX⑧制劑移除甘氨酸以及使用水進(jìn)行重構(gòu)致使得到引起溶胞的低滲溶液，但是同滲容摩和張力是與離子強(qiáng)度和凝集不同的概念(concern)。結(jié)果顯示凝集與重構(gòu)于sWFI中的重組型凝血因子IX的低離子強(qiáng)度有關(guān)，使用NaCl重構(gòu)可減弱或消除凝集。因此，使用NaCl溶液(甚至濃度低于154mM的NaCl溶液)重構(gòu)其它藥物制劑可以防止在靜脈內(nèi)注射時(shí)的凝集和溶胞。實(shí)施例2:用以評(píng)估由藥學(xué)物質(zhì)或藥物制劑所誘導(dǎo)的紅細(xì)胞聚集的紅細(xì)胞沉降速率量定的改良韋斯特格倫氏法的調(diào)整方法當(dāng)前市售的BeneFIX⑧制劑是非離子制劑。在將重構(gòu)于sWFI中的BeneFIX⑧制劑給藥期間，當(dāng)患者的血液與重構(gòu)的BeneFIX⑧混合時(shí)，少見(jiàn)地觀察到紅細(xì)胞聚集(即凝集)，例如在靜脈管路中。本發(fā)明提供下列發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞聚集與制劑而非rFIX相關(guān)，并可被含有至少40mMNaCl的稀釋劑所阻止。為了協(xié)助設(shè)計(jì)含有至少約40mMNaCl的特制的(custom)稀釋劑，設(shè)計(jì)了可用于測(cè)量紅細(xì)胞沉降的可定量實(shí)驗(yàn)，這是用來(lái)評(píng)估體外紅細(xì)胞聚集的已建立的方法。將改良的韋斯特格倫氏法(其中血液以4:5稀釋于生理鹽水中)進(jìn)行調(diào)整，以評(píng)估已用鹽水或測(cè)試溶液(即特制的稀釋劑)以1:4或l:8稀釋的血液中的聚集。人類血液取自于健康成人志愿者，并且收集至含有EDTA的試管中。為了證明血液樣品對(duì)于沉降實(shí)驗(yàn)的適合性，通過(guò)改良的韋斯特格倫氏法測(cè)量臨床上定義的紅細(xì)胞沉降速率(ESR6Q)。簡(jiǎn)單地說(shuō)，將經(jīng)充分混合的血液使用154mMNaCl以4:5稀釋，緩和地混合充分，然后立即裝載至已置放于特制的10-試管架中的自動(dòng)調(diào)零(self-zeroing)的韋斯特格倫氏管。在60分鐘之后測(cè)量并記錄自試管頂部的零標(biāo)記起至血漿紅細(xì)胞界面的以mm計(jì)的距離。將ESR6o結(jié)果與公開(kāi)的標(biāo)準(zhǔn)參考值相比較(Morris，M.W.等人，血液的基本檢查(BasicExaminationofBlood)，在Henry，J.B.，編者，ClinicalDiagnosisandManagementbyLaboratoryMethods,Philadelphia,PA，WBSaunders,2001:479-519)。進(jìn)行了顯示經(jīng)調(diào)整的改良韋斯特格倫氏法(用以評(píng)估與藥物制劑有關(guān)的紅細(xì)胞聚集)的合適性的兩個(gè)實(shí)驗(yàn)。人類血液樣品適于在這些分析中使用，因?yàn)樗鼈內(nèi)烤哂性跇?biāo)準(zhǔn)限度內(nèi)的ESR6。值。這些樣品在笫一個(gè)實(shí)驗(yàn)中以1:4稀釋，并且在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中以l:8稀釋。在第一個(gè)實(shí)驗(yàn)中，紅細(xì)胞沉降被5%葡聚糖70或者被用sWFI或10mMNaCl重構(gòu)的BeneFIX⑧增強(qiáng)。在5分鐘內(nèi)，在已裝填有使用3%葡聚糖70或重構(gòu)于sWFI中的BeneFIX⑧稀釋的血液的試管中可觀察到凝聚物。到60分鐘時(shí)，當(dāng)與鹽水對(duì)照相比較時(shí)，這些試管中的紅細(xì)胞沉降明顯增強(qiáng)(表6)。到90分鐘時(shí)，用重構(gòu)于10mMNaCl中的BeneFIX⑧稀釋的來(lái)自一個(gè)供體的血液具有兩相沉降式樣，其帶有位于離零標(biāo)記8mm處的澄清紅細(xì)胞血漿界面以及另一位于離零標(biāo)記149mm處的介于密集堆積的與較不密集堆積的紅細(xì)胞之間的界面。表6:以1:4稀釋于BeneFIX⑧或3%葡聚糖中的人類血液的紅細(xì)胞沉降(以mm測(cè)得的從零標(biāo)記起的沉降距離)<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>NaCl濃度是用于重構(gòu)BeneFIX⑥的那些NaCl濃度在第二個(gè)實(shí)驗(yàn)中，紅細(xì)胞沉降被5%右旋糖、"MFR-927，，(用于缺乏rFIX的BeneFIX⑧的制劑緩沖液)以及使用10mMNaCl重構(gòu)的BeneFIX⑧(表7)所增強(qiáng)。不同于第一個(gè)實(shí)驗(yàn)，這些試管中的沉降是快速的，在15至30分鐘時(shí)達(dá)至最大或接近最大沉降。表7:以1:8稀釋于MFR-927、BeneFIX⑧或5。/。右旋糖的人類血液的紅細(xì)胞沉降<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>NaCl濃度是用于重構(gòu)BeneFIX⑧的那些NaCl濃度；MFR-927是用于缺乏rFIX的BeneFIX的制劑緩沖液。這些實(shí)驗(yàn)的結(jié)果證實(shí)可以將用于測(cè)量紅細(xì)胞沉降的改良韋斯特格倫氏法進(jìn)4亍調(diào)整，以評(píng)估由藥物制劑(preparations)或制劑(formulations)所豫導(dǎo)的紅細(xì)胞聚集。例如，在裝載用測(cè)試溶液以1:4稀釋的血液60分鐘之后，測(cè)量韋斯特格倫氏管內(nèi)的紅細(xì)胞沉降足以區(qū)分增強(qiáng)聚集的試劑(即，5%右旋糖、3%葡聚糖70、MFR-927和重構(gòu)于sWFI中的BeneFIX⑧)和那些不增強(qiáng)聚集的試劑(即，鹽水和重構(gòu)于含有約25mM或更多NaCl的稀釋劑中的BeneFIX)。實(shí)施例3:就再制的BeneFIX⑧而言，在稀釋劑中的40mMNaCl對(duì)減輕與制劑有關(guān)的紅細(xì)胞聚集的適當(dāng)性(adequacy)當(dāng)前市售的BeneFIX⑧的非離子制劑與體外紅細(xì)胞聚集有關(guān)，當(dāng)患者血液在靜脈管路內(nèi)與BeneFIX⑧混合時(shí)，在給藥期間可能發(fā)生紅細(xì)胞聚集。本發(fā)明提供下列發(fā)現(xiàn)紅細(xì)胞聚集與制劑而非重組型凝血因子IX相關(guān)，并且可以通過(guò)^f吏用含有至少40mMNaCl來(lái)重構(gòu)BeneFIX⑧而防止聚集。該實(shí)施例的目標(biāo)是測(cè)試用于重構(gòu)再制的BeneFIX⑧(BeneFIX⑧-R)制劑的40mM稀釋劑的穩(wěn)健性(robustness)。特別地，設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)以確定對(duì)于防止與制劑有關(guān)的紅細(xì)胞聚集而言，偏離40mM達(dá)10%的NaCl濃度是否是足夠的，這可用測(cè)量紅細(xì)胞沉降速率(ESR)的經(jīng)調(diào)整的改良韋斯特格倫氏法進(jìn)行評(píng)估。此外，用高(即2000IU)和低(即250IU)劑量小瓶的BeneFIX-R評(píng)估NaCl濃度對(duì)紅細(xì)胞沉降的穩(wěn)健性。BeneFIX-R制劑、MFR-927和3%葡聚糖70對(duì)紅細(xì)胞沉降的影響是在室溫下利用如實(shí)施例2中所述的改良的韋斯特格倫氏法的經(jīng)調(diào)整方法進(jìn)行測(cè)量的。將本研究設(shè)計(jì)概述于表8中。表8:實(shí)施侈3的研究設(shè)計(jì)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage34</formula><table>tableseeoriginaldocumentpage35</column></row><table>在實(shí)驗(yàn)的當(dāng)天，高劑量小瓶(包含2000IUrFIX的凍干BeneFIX-R的小瓶)和低劑量小瓶(包含250IUrFIX的凍干BeneFIX-R的小瓶)的BeneFIX-R在使用之前，用5mL的36mM、40mM或44mMNaCl立即重構(gòu)。陽(yáng)性對(duì)照溶液3。/。(w/v)葡聚糖70在無(wú)菌的Dulbecco氏改良的不含鈞和鎂的磷酸緩沖鹽溶液(PBS-CMF，pH7.4)中制備。人類血液取自于供體并收集至含有EDTA的真空采血管中。在收集后3小時(shí)內(nèi)，將血液樣品用于紅細(xì)胞沉降實(shí)驗(yàn)。將全血以1:4稀釋于測(cè)試溶液中(即，400|LiL全血加至1.2mL測(cè)試溶液中)，充分混合，然后裝載于絕對(duì)水平地放置于專用的定制架子中的自動(dòng)調(diào)零的一次性的玻璃韋斯特格倫氏管中。在紅細(xì)胞沉降60分鐘后，測(cè)量并且記錄從試管頂部的零標(biāo)記到血漿-紅細(xì)胞界面的以mm計(jì)的距離。來(lái)自全部12個(gè)供體的結(jié)果是類似的。當(dāng)前市售的缺乏rFIX的BeneFIX⑧制劑緩沖液(MFR-927)和3。/。葡聚糖70(標(biāo)準(zhǔn)陽(yáng)性對(duì)照溶液)與已經(jīng)混于NaCl測(cè)試溶液中的血液相比較時(shí)，展現(xiàn)出增強(qiáng)的紅細(xì)胞沉降(參見(jiàn)圖1)。不管緩沖液內(nèi)的NaCl濃度(36mM、40mM,或44mM)或產(chǎn)品內(nèi)的rFIX濃度如何，只要BeneFIX⑧-R是用NaCl稀釋劑重構(gòu)的，則它不會(huì)增強(qiáng)紅細(xì)胞沉降。來(lái)自本研究的結(jié)果證實(shí)在BeneFIX-R稀釋劑內(nèi)的比40mM高或低10%的NaCl濃度對(duì)于防止紅細(xì)胞沉降或聚集(凝集)增強(qiáng)是足夠的。結(jié)果還表明NaCl對(duì)與制劑有關(guān)的紅細(xì)胞聚集的減輕效果不受活性成分(即，rFIX)的濃度影響。實(shí)施例4:用于重構(gòu)BeneFIX⑧的緩沖液的離子強(qiáng)度在引起RBC凝集中的作用通過(guò)靜脈穿刺從4位不同供體收集人類血液標(biāo)準(zhǔn)的肝素化采集管中。RBC凝集物的形成是通過(guò)吸出2.6mL的緩沖液或重構(gòu)的BeneFIX⑧蛋白質(zhì)到注射器內(nèi)，然后吸取0.6mL經(jīng)肝素化的血液來(lái)測(cè)試的。在這些注射器中隨時(shí)間推移觀察凝集物的混合/沉降行為，并用數(shù)碼相機(jī)照像記錄。當(dāng)前的BeneFIX⑧制劑凍干前的組成是rFIX、約10mM組氨酸、約260mM的甘氨酸、約1%的蔗糖以及約0.005%的聚山梨醇酯-80，pH為6.8。BeneFIX⑧制劑是凍干的，并且在注射之前重構(gòu)于sWFI中。最初，懷疑蔗糖是凝集的原因。因此，測(cè)試緩沖液用1%、0.5%或0%蔗糖配制。將各個(gè)蔗糖測(cè)試緩沖液吸取至注射器中，然后吸取少量的經(jīng)肝素化的血液。發(fā)現(xiàn)對(duì)于這三種緩沖液而言RBC的凝集和隨后的快速沉降是相同的，這暗示BeneFIX⑧制劑的蔗糖含量并不是所觀察到的凝集的原因。重構(gòu)于生理鹽水溶液而非無(wú)菌水的BeneFIX不造成凝集。這些資料指出當(dāng)BeneFIX⑧重構(gòu)于水中時(shí)，BeneFIX⑧制劑的離子強(qiáng)度不足以防止凝集。為了測(cè)定消除凝集所需要的最小離子強(qiáng)度，使用具有不同濃度的NaCl溶液(O、10、15、20、25、30、35、40、50、75、100和137mM)重構(gòu)BeneFIX(或者可以將BeneFIX的凍干前制劑改變成包含氯化鈉，但是與凍干不含氯化鈉的制劑相比較，用于凍干氯化鈉制劑的方法是較困難的)。還將BeneFIX⑧重構(gòu)于含有154mMNaCl的生理鹽水中。在全部這些溶液中檢測(cè)RBC凝集和沉降行為。表9顯示這些溶液中的一些溶液以及其它常見(jiàn)靜脈內(nèi)用溶液的同滲質(zhì)量摩爾濃度和離子強(qiáng)度(以導(dǎo)電率表示)。一旦將氯化鈉加至BeneFIX⑧制劑中，不論是在凍干之前直接加入還是使用氯化鈉溶液重構(gòu)凍干物(lyophilisate)，預(yù)期NaCl將完全解離為等濃度的Na+和C廠離子。因此，如果制劑緩沖液不含有其它離子，預(yù)測(cè)加有NaCl的制劑緩沖液的離子強(qiáng)度(以mEq/L(毫當(dāng)量/L)表示的Na+和C廠)等于NaCl濃度。表9:不同溶液的特性<table>tableseeoriginaldocumentpage37</column></row><table>一旦血液與表9內(nèi)的溶液在注射器內(nèi)接觸，逐個(gè)觀察RBC凝集，然后將注射器溫和地混合，并倒置以觀察血液沉降。在使用至少約40mMNaCl重構(gòu)的全部BeneFIX⑧制劑中沒(méi)有觀察到凝集形成(注意在上述實(shí)施例中，約36mMNaCl也足以防止凝集)。血液細(xì)胞在這些含有至少40mMNaCl的溶液中的行為與在生理鹽水中的行為是無(wú)法區(qū)別的。在一系列含有稀釋(如凍干前的)/重構(gòu)(如經(jīng)凍干的)于降低濃度的NaCl(起始于40mM)的BeneFIX⑧制劑中，在倒置15分鐘之后，測(cè)定血液沉降。對(duì)于凝集形成和隨后的沉降速率而言，存在有一致性的濃度-依賴響應(yīng)隨著緩沖液中的NaCl濃度的降低，凝集增加而且沉降加快。對(duì)于一個(gè)含有￡25mMNaCl的緩沖液內(nèi)的血液樣品和另一個(gè)含有;S30mMNaCl的緩沖液中的血液樣品而言，可觀察到明顯的凝集。在具有^40mMNaCl的緩沖液的全部制劑中，血液細(xì)胞的行為與在生理鹽水或重構(gòu)于生理鹽水的BeneFIX⑧中的那些血液細(xì)胞行為是無(wú)法區(qū)別的。使用40mMNaCl重構(gòu)的BeneFIX⑧對(duì)應(yīng)于為4mS/cm的計(jì)算導(dǎo)電率。5%右旋糖注射溶液(每mL溶液含有在注射水中的50mg無(wú)水右旋糖USP)具有250mOsm/L的計(jì)算同滲質(zhì)量摩爾濃度和0mS/cm的計(jì)算離子強(qiáng)度。該溶液通常靜脈給藥，它也會(huì)造成類似于對(duì)重構(gòu)于水中的BeneFIX制劑所觀察到的RBC凝集和非?？焖俚难撼两?。因此，這些結(jié)果指出由重構(gòu)于水中的BeneFIX⑧所引起的RBC凝集是由于BeneFIX⑥制劑的低離子強(qiáng)度(0mEq/L計(jì)算離子強(qiáng)度，<0.2mS/cm測(cè)量導(dǎo)電率)的緣故。此問(wèn)題可以通過(guò)重構(gòu)于含有^40mMNaCl的NaCl溶液中而矯正，使得用于注射的重構(gòu)溶液具有為約40mEq/L或更高的計(jì)算離子強(qiáng)度(防止凝集的足夠的離子強(qiáng)度也可以計(jì)算為約4mS/cm或更高的導(dǎo)電率)。權(quán)利要求1.配制用于靜脈內(nèi)注射的藥物制劑的方法，該方法包括將約25mM至約150mM的氯化鈉溶液加至該藥物制劑，從而得到配制的用于靜脈內(nèi)注射的制劑，其中該配制的制劑對(duì)于血漿而言大約是等滲的，或者對(duì)于血漿而言是稍微低滲或稍微高滲的，并且其中該配制的制劑具有防止紅細(xì)胞凝集的足夠的離子強(qiáng)度。2.權(quán)利要求l的方法，其中配制的制劑對(duì)于血漿而言大約是等滲的，并且具有約270mOsm/L至約330mOsm/L的同滲容摩。3.權(quán)利要求l的方法，其中配制的制劑對(duì)于血漿而言是稍微低滲的，并且具有約220mOsm/L至約270mOsm/L的同滲容摩。4.權(quán)利要求l的方法，其中配制的制劑對(duì)于血漿而言是稍微高滲的，并且具有約330mOsm/L至約600mOsm/L的同滲容摩。5.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有至少為約25mEq/L的Na+與Cl—離子的離子強(qiáng)度。6.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有至少為約30mEq/L的Na+與Cl—離子的離子強(qiáng)度。7.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有至少為約36mEq/L的Na+與Cr離子的離子強(qiáng)度。8.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有至少為約40mEq/L的Na+與C「離子的離子強(qiáng)度。9.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有至少為約40mEq/L的Na+與Cl—離子并且低于約150mEq/L的Na+與Cr離子的離子強(qiáng)度。10.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有以導(dǎo)電率測(cè)得的至少為2.5mS/cm的離子強(qiáng)度。11.權(quán)利要求1-4中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的制劑具有以導(dǎo)電率測(cè)得的至少為4.0mS/cm的離子強(qiáng)度。12.權(quán)利要求l-ll中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的用于注射的藥物制劑是凍干制劑。13.權(quán)利要求l-ll中任何一項(xiàng)的方法，其中配制的用于注射的藥物制劑是溶液。14.權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的方法，其中氯化鈉溶液是約40mM至約150mM。15.權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的方法，其中氯化鈉溶液是約36mM至約44mM。16.權(quán)利要求1-13中任何一項(xiàng)的方法，其中氯化鈉溶液是約40mM。17.權(quán)利要求1-16中任何一項(xiàng)的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，藥物制劑不含有可察覺(jué)量的離子化鹽。18.權(quán)利要求10的方法，其中凍干制劑，當(dāng)重構(gòu)于水中時(shí)，不含有高于5mM的離子化鹽。19.權(quán)利要求10的方法，其中凍干制劑，當(dāng)重構(gòu)于水中時(shí)，不含有高于25mM的離子化鹽。20.權(quán)利要求1-19中任何一項(xiàng)的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖和聚山梨醇酯。21.權(quán)利要求1-19中任何一項(xiàng)的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯和治療性蛋白質(zhì)。22.權(quán)利要求1-21中任何一項(xiàng)的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，藥物制劑含有組氨酸、甘氨酸、蔗糖、聚山梨醇酯和凝血因子IX。23.權(quán)利要求1-21中任何一項(xiàng)的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，所述藥物制劑當(dāng)被重構(gòu)于水中時(shí)含有(a)約5mM至約30mM的組氨酸；(b)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(c)約0.5%至約2%的蔗糖；和(d)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯。24.權(quán)利要求23的方法，其中在加入所述氯化鈉溶液之前，所述藥物制劑當(dāng)被重構(gòu)于水中時(shí)另外含有(e)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX。25.配制用于靜脈內(nèi)注射的凍干凝血因子IX制劑的方法，該方法包括將約25mM至約150mM的氯化鈉溶液加至凍干的凝血因子IX制劑，從而得到配制的用于靜脈內(nèi)注射的制劑，其中該配制的制劑對(duì)于血漿而言大約是等滲的，或者對(duì)于血漿而言是稍微低滲或稍微高滲的，并且其中該配制的制劑具有足以防止紅細(xì)胞凝集的足夠的離子強(qiáng)度。26.權(quán)利要求25的方法，其中凍干的凝血因子IX制劑當(dāng)被重構(gòu)于水中時(shí)含有(a)約5mM至約30mM的組氨酸；(b)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(c)約0.5%至約2%的蔗糖；以及(d)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯。27.權(quán)利要求26的方法，其中將約40mM的氯化鈉溶液加至所述凍干的凝血因子IX制劑中。28.權(quán)利要求27的方法，其中將約5mL的約40mM氯化鈉溶液加至所述凍干的凝血因子IX制劑中。29.權(quán)利要求28的方法，其中所述凝血因子IX制劑具有約4mL的凍千前體積。30.權(quán)利要求26的方法，其中所述凍干的凝血因子IX制劑當(dāng)被重構(gòu)于水中時(shí)含有約10mM組氨酸、0.26M甘氨酸、1%蔗糖、0.005%聚山梨醇酯和凝血因子IX。31.藥盒，該藥盒含有(a)含有凍干塊的小瓶，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于5mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約5mM至約30mM的組氨酸；(ii)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(iii)約0.5%至約2%的蔗糖；(iv)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯；和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX;(b)25mM至約150mM的氯化鈉溶液；和(c)使用該氯化鈉溶液重構(gòu)該凍干塊的說(shuō)明書(shū)，以使得在重構(gòu)之后所得到的溶液大約是等滲的，并且具有足夠的離子強(qiáng)度以防止在靜脈內(nèi)注射時(shí)的紅細(xì)胞聚集。32.藥盒，該藥盒含有(a)含有凍干塊的小瓶，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于4mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約10mM的組氨酸；(ii)約0.26M的甘氨酸；(iii)約1%的蔗糖；(iv)約0.005%的聚山梨醇酯80;和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX;(b)約40mM的氯化鈉溶液；和(c)使用約5mL該氯化鈉溶液重構(gòu)該小瓶中的凍干塊的說(shuō)明書(shū)，以使得在重構(gòu)之后所得到的溶液含有(i)約7至約9mM的組氨酸；(ii)約200至約210mM的甘氨酸；(iii)約0.7%至約0.9%的蔗糖；(iv)約0.004%的聚山梨醇酯80;(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX;和(vi)約40mM的NaCl。33.凍干塊，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于5mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約5mM至約30mM的組氨酸；(ii)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(iii)約0.5%至約2%的蔗糖；(iv)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯；和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX。34.凍千塊，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于4mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約10mM的組氨酸；(ii)約0.26M的甘氨酸；(iii)約1%的蔗糖；(iv)約0.005%的聚山梨醇酯訓(xùn)；和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX。35.含有凍干塊的小瓶，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于5mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約5mM至約30mM的組氨酸；(ii)約0.1M至約0.3M的甘氨酸；(iii)約0.5%至約2%的蔗糖；(iv)約0.001%至約0.05%的聚山梨醇酯；和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX。36.含有凍干塊的小瓶，其中當(dāng)將該凍干塊重構(gòu)于4mL水中時(shí)，溶液將含有(i)約10mM的組氨酸；(ii)約0.26M的甘氨酸；(iii)約l。/。的蔗糖；(iv)約0.005%的聚山梨醇酯80;和(v)約50IU/mL至約2000IU/mL的凝血因子IX。全文摘要本發(fā)明提供配制用于注射的藥物制劑的方法，以使得一經(jīng)注射，該制劑不會(huì)引起紅細(xì)胞凝集、溶血和/或細(xì)胞皺縮。為防止凝集，即可注射的藥物制劑需要具有足夠的離子強(qiáng)度。為防止溶血或細(xì)胞皺縮，即可注射的藥物制劑對(duì)于血漿而言需要大約是等滲的。本發(fā)明提供配制用于注射的藥物制劑的方法，該藥物制劑具有足以防止凝集的離子強(qiáng)度和防止明顯的溶血或細(xì)胞脫水或皺縮所必需的張力。本發(fā)明方法涉及約25mM至約150mM的氯化鈉溶液用以將凍干塊(或其它非液態(tài)的藥物制劑)重構(gòu)成溶液或用以稀釋藥物制劑溶液的用途。文檔編號(hào)A61K47/18GK101351190SQ200680040080公開(kāi)日2009年1月21日申請(qǐng)日期2006年10月27日優(yōu)先權(quán)日2005年11月1日發(fā)明者C·A·韋布,J·澤爾法斯申請(qǐng)人:惠氏公司