專利名稱：生物黏附性環(huán)孢素a固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑及其制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，涉及一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納 米粒原位凝膠制劑及其制備方法，更具體而言，涉及一種用帶正電的材料 包衣的固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑及其制備方法。
背景技術(shù)：
環(huán)孢素A是一種脂溶性的、由ll個(gè)氨基酸所構(gòu)成的環(huán)狀多肽化合物。 1983年，美國食品藥品監(jiān)督管理局批準(zhǔn)環(huán)孢素A正式注冊(cè)上巿，主要用于 器官或組織移植后排異反應(yīng)的防治和自身免疫性疾病的治療。全身應(yīng)用環(huán) 孢素制劑生物利用度低、個(gè)體差異大，易引起腎毒性、肝毒性、中樞神經(jīng) 系統(tǒng)毒性、消化道反應(yīng)等副作用，局部應(yīng)用環(huán)孢素制劑可以直接作用于病 灶部位，用藥量少，副作用少。眼部應(yīng)用環(huán)孢素A主要治療角膜移植排斥、 單純皰瘆病毒性角膜炎、過敏性結(jié)膜炎、干眼癥、壞死性鞏膜炎、增殖性 玻璃體視網(wǎng)膜病變等；皮膚應(yīng)用環(huán)孢素A用于治療銀屑病等。
局部環(huán)孢素制劑有環(huán)孢素滴眼劑、微乳、脂質(zhì)體等。上巿的局部應(yīng)用 制劑主要是環(huán)孢素油溶液滴眼劑，藥物載體主要是一些植物油等，具有刺 激性，且藥物在用藥部位停留時(shí)間短，生物利用度差。固體脂質(zhì)納米粒生 物相容性好，藥物生物利用度高，易于大規(guī)模生產(chǎn)。正電荷包衣的固體脂 質(zhì)納米粒由于表面帶正電，易于與帶負(fù)電的皮膚或生物膜表面結(jié)合，與普 通的固體脂質(zhì)納米粒相比，納米粒顆粒在生物膜表面的滯留時(shí)間長，有利 于藥物的充分吸收。關(guān)于帶正電的環(huán)孢素脂質(zhì)納米粒目前在國內(nèi)外沒有報(bào) 道，僅有帶正電荷的微乳制劑在國外有報(bào)道。
與此同時(shí)，原位凝膠又區(qū)別于普通的凝膠制劑，它在體外為粘度很小 的流體，入眼后隨溫度的升高，迅速轉(zhuǎn)變?yōu)檎扯葮O大的透明凝膠，粘附于 生物膜表面，延長了納米粒與生物膜的接觸時(shí)間，有助于藥物的充分吸收。 而且，所形成的凝膠為假塑性流體，眨眼過程的剪切力足以使之變?yōu)檎扯?很小的流體，從而易于在眼表的均勻涂布。
目前，國內(nèi)已有含環(huán)孢素A的眼用凝膠專利，"環(huán)孢素眼用凝膠(公開 號(hào)CN1456350 )"。固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠與普通凝膠制劑相比，具有 如下優(yōu)點(diǎn)(1 )脂質(zhì)納米粒原位凝膠具有雙重緩釋作用，即從納米粒到凝 膠層，從凝膠層到眼部，而普通凝膠劑只有凝膠層的緩釋作用。(2)脂質(zhì) 納米粒原位凝膠在眼部的停留時(shí)間長，即凝膠的黏附和納米粒的黏附雙重 作用，即使凝膠層溶蝕了，帶正電荷的納米粒對(duì)帶負(fù)電的眼黏膜具有黏附 作用，充分延長藥物的作用時(shí)間，而普通凝膠劑只是通過凝膠的物理黏附 作用增加眼部的滯留時(shí)間，凝膠溶蝕后藥物隨眼淚流出，作用時(shí)間相對(duì)短。 (3")原位凝膠在室溫下黏度小，流動(dòng)性好，有利于眼部給藥，藥物在眼部 形成凝膠延長停留時(shí)間，而普通凝膠劑室溫粘度大，流動(dòng)性不好，使用不 方便。(4)原位凝膠在室溫黏度小，有利于配制的罐裝，而普通凝膠劑粘 度大，配制時(shí)易產(chǎn)生大量的氣泡，工業(yè)生產(chǎn)和灌裝不方便。(5)原位凝膠
在滴眼時(shí)由于黏度小，有利于均勻分布在眼內(nèi)，然后形成凝膠，而普通凝 膠粘度大，藥物不易在角膜、結(jié)膜表面均勻分布，只能靠眨眼動(dòng)作均勻涂 布。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問題是提供一種表面帶正電的固體脂質(zhì)納米粒， 并將其載于凝膠基質(zhì)中，此制劑可以增加藥物的穩(wěn)定性，達(dá)到藥物的緩慢 釋放，延長藥物的作用時(shí)間，提高藥物的生物利用度。本發(fā)明還提供了正 電固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑的制備方法。
本發(fā)明的局部應(yīng)用帶正電的環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑， 基于1000ml的總量，其包含
環(huán)孢素A 0. 05g — 5. 0g
脂質(zhì)材料 0. 0g — 50g
乳化劑 0. 5g _ 60g
包衣材料 Q. lg — 30g
凝膠基質(zhì) 200. 0g — 500. 0g
純化水 加至1000ml
其中的活性成分是環(huán)孢素A，但不局限于環(huán)孢素A,大部分親脂性藥物 均可適用。并且，此劑型不僅適合于眼部給藥，還適用于其他粘膜給藥或 皮膚給藥方式。
可應(yīng)用于本發(fā)明的脂質(zhì)材料包括硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、雙硬脂 酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、月桂酸甘油酯、甘油棕櫚酸 硬脂酸酯、二十二酸單、雙、三甘油酯的混合物、三豆蔻酸甘油酯、枸櫞 酸甘油酯、十八醇、棕櫚酸、二十二碳烷酸、癸酸、豆蔻酸、山崳酸、月 桂酸、膽固醇、鯨蠟醇棕櫚酸酯、蜂蠟中的一種或多種；優(yōu)選山崳酸甘油 酯與單硬脂酸甘油酯的混合物，混合物中山i酸甘油酯的比例為10% — 70%，最佳比例為10%—30%。
乳化劑可以是泊洛沙姆188、泊洛沙姆182、泊洛沙姆407、泊洛沙姆 908、泰洛沙姆、卵磷脂、大豆磷脂和/或合成嫌脂、膽酸鈉、甘膽酸鈉、 牛黃膽酸鈉、去氧牛黃膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十八烷基硫酸鈉、十二 烷基苯磺酸鈉、吐溫-80、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙 二醇、節(jié)澤、賣澤中的一種或多種；可以添加助乳化劑，如乙醇，或無助 乳化劑。
—包衣材料為十八胺、磷酸鯨蠟酯、氯化苯曱烴銨、溴化十六烷基三甲 .胺、氯化十六烷基嘧啶、溴化二甲基雙十八烷基銨。首先將包衣材料溶于 稀鹽酸，稀鹽酸也作為fiH調(diào)節(jié)劑，用量使最終制劑PH在6 - 7之間，然
后用此稀酸溶液包衣。S包衣材料用量的增加，納米粒表面逐漸由帶負(fù)電 轉(zhuǎn)變?yōu)椴粠щ姟д?，繼續(xù)增加包衣材料用量，正電電位提高。
.凝膠基質(zhì)選用泊洛沙姆407，或泊洛沙姆407與188的混合物，使最終凝膠的膠凝溫度在室溫以上，體溫以下。眼部應(yīng)用制劑經(jīng)模擬淚液稀釋 后，膠凝溫度在眼表溫度(34°C)以下。
本發(fā)明的帶正電的固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑，外觀呈半透明且具
有藍(lán)色乳光，PH值為6. 0—7. 0,納米粒平均粒徑小于200nm， zeta電勢(shì)大 于23mv，環(huán)孢素A的包封率大于80t
本發(fā)明提供上述正電固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑的制備方法，該方 法的特點(diǎn)在于，釆用正電荷材料包裹納米粒，方法簡(jiǎn)單。操作步驟包括
(一) 固體脂質(zhì)納米粒的制備稱取脂質(zhì)材料，置8(TC的水浴中熔融后， 相繼加入藥物、乳化劑，攪拌混合均勻，加水適量，繼續(xù)攪拌10分鐘左右 直到形成均勻初乳，經(jīng)過高壓乳勻機(jī)或探頭超聲，過0. 45um微孔濾膜即可。
(二) 正電荷包衣納米粒的制備包衣材料用少量溫?zé)岬臒o水乙醇溶解后， 慢慢加入稀鹽酸，搖勻，趁熱將此稀酸溶液加入上述制備好的納米?；鞈?液中，整個(gè)過程最好保持溫度不低于7(TC,混懸液繼續(xù)超聲半分鐘混句。
(三) 納米粒原位凝膠制劑的制備將上一步制備的包衣納米?；鞈乙褐?于冰箱中冷藏片刻，于高速磁力攪拌下緩緩加入準(zhǔn)確稱量的泊洛沙姆407, 或泊洛沙姆407與188按比例的混合物，繼續(xù)攪拌使其分散均勻，然后將 其放入4。C冰箱中保存12小時(shí)以上，直至聚合物完全溶解，得到澄明溶液。
本發(fā)明的帶正電固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑的制備方法，是釆用先 制備納米粒，再將正電荷材料包裹于納米粒表面的方法，取代已有文獻(xiàn)報(bào) 道的將正電荷材料混于脂質(zhì)材料中的方法。此方法簡(jiǎn)便，減少正電荷材料 的用量，同時(shí)增加了納米粒的穩(wěn)定性。
本發(fā)明中所述的固體脂質(zhì)納米粒的制備方法中，除可用高壓乳勻或探 頭式超聲法，還可以用微乳法，乳化溶劑擴(kuò)散法。
上述方法利用探頭超聲的超聲功率為400w。若加大超聲功率可適當(dāng)減 少超聲時(shí)間。超聲功率控制在400w—600w,不低于400w。超聲時(shí)間4到6 分鐘，最好不超過6分鐘。制備的納米粒粒徑在120nm—160nm。
本發(fā)明用泊洛沙姆作為凝膠基質(zhì)制備的原位凝膠為溫度敏感型原位凝 膠，非離子表面活性劑泊洛沙姆室溫下為自由流動(dòng)的液體，達(dá)到臨界膠束 溫度后，聚合物鏈上的疏水性聚氧丙烯(PPO)嵌段脫水，泊洛沙姆分子在 溶液中聚集成以脫水PPO鏈為核心，以水化膨脹的聚氧乙烯(PEO)鏈為外 殼的球狀膠束，隨溫度升高，膠束間的纏結(jié)與堆砌作用加劇而誘發(fā)膠凝。 低濃度的泊洛沙姆在模擬淚液稀釋下不能形成凝膠，固體脂質(zhì)納米粒的加 入使泊洛沙姆原位凝膠的膠凝溫度上升，納米粒濃度越大，膠凝溫度上升 越高，凝膠透明度下降。本發(fā)明找到最優(yōu)的納米粒濃度范圍及相應(yīng)的凝膠 基質(zhì)含量如下 每1000ml制劑中包含
環(huán)孢素A 0. 05g — 5. Og
脂質(zhì)材料 G. Gg — 50g
0. 5g 一 60g 料 0. lg — 30g
質(zhì) 200. 0g — 500. 0g
加至1000ml
本發(fā)明除可以用于眼部給藥外，還適用于其他粘膜給藥或皮膚給藥方式。
本發(fā)明制劑相比于現(xiàn)有的油溶性滴眼液和普通凝膠劑具有如下的有益 效果
1、 油溶液對(duì)眼部有刺激性，易損失，藥物生物利用度低，原位凝膠的 緩慢溶蝕作用.及納米粒表面正電荷效應(yīng)使載藥納米粒在眼部停留時(shí)間延 長，有利于藥物的充分吸收，增加生物利用度。
2、 相比于普通凝膠制劑，由于室溫下為自由流動(dòng)的液體，便于滴入眼 中，生產(chǎn)、使用方便，且易在眼表均勻涂布。
3、 粒徑小，對(duì)于脂溶性藥物包封率高，脂質(zhì)材料對(duì)眼部幾乎無刺激和 毒副作用。
本發(fā)明開發(fā)的固體脂質(zhì)納米粒凝膠制劑，將納米粒和原位凝膠的優(yōu)勢(shì) 結(jié)合，納米粒又用正電荷材料包衣，可知納米粒凝膠制劑此大大增加了藥 物的局部滯留，為提高藥物的生物利用度提供了新的方法。


圖1為環(huán)孢素固體脂質(zhì)納米粒的粒度分布。 圖2為正電固體脂質(zhì)納米粒混懸液的zeta電位。 圖3為帶正電與帶負(fù)電的固體脂質(zhì)納米粒在角膜上的粘附照片。 圖3a, b分別為模擬淚液稀釋前、稀釋后角膜表面納米粒滯留情況圖，
每幅圖左方角膜表示帶負(fù)電的納米粒滯留情況，右方角膜為帶正電納米粒
滯留情況
具體實(shí)施例方式
下面的實(shí)施例將有助于理解本發(fā)明，但本發(fā)明不局限于這些實(shí)施例 實(shí)施例1
按照下表1給出的實(shí)施例1的組成，將400mg單硬脂酸甘油酯和100mg 山崳酸甘油酯混合物在80。C水浴中熔融，相繼加入40mg環(huán)孢素A、 600mg 泊洛沙姆188,攪拌混合均勾后，滴加同溫度的去離子水7.5ml,攪拌10 分鐘至形成初乳。初乳400w超聲6分鐘，趁熱過0. 45腿微孔濾膜后，滴 入預(yù)先配制好的十八胺酸溶液，繼續(xù)超聲半分鐘，室溫冷卻。
十八胺酸溶液的配制340mg十八胺用0. 5ml熱無水乙醇溶解后，加 入5。/。稀鹽酸2ml，搖勻即可。
取上述納米?；鞈乙?. 5ml，用去離子水稀釋至10ml,于高速磁力攪 拌下，緩緩加入2.4g泊洛沙姆407,繼續(xù)攪拌使其分散均勻，然后放入4 匸冰箱中保存12小時(shí)。
實(shí)施例2 — 4
釆用與實(shí)施例1相同的制備方法，由表1中給出的組成和工藝參數(shù)，
劑材基水
化衣膠化
乳包凝純
制得實(shí)施例2 — 4的納米粒原位凝膠制劑。
表l實(shí)施例l一4納米粒原位凝膠制劑組成和制備工藝
買施例1 買施例2 買施例3 買施例4
40mg
單硬脂酸甘 油酯400mg
山蔬酸甘油 酯100mg 泊洛沙姆
188 600mg
340fflg 泊洛沙姆 407 2.4g
20mg
單硬脂酸甘 油酯450mg
山崳酸甘油 酯50mg 泊洛沙姆 188 400mg
340mg 泊洛沙姆 407 2. 3g
40mg
單硬脂酸甘 油酯350mg 山崳酸甘油 酯15 0mg 泊洛沙姆 188 500mg
340mg 泊洛沙姆 407 2. 5g
40mg
單硬脂酸 甘油酯 5 00mg
泊洛沙姆 188 400mg
440rag 泊洛沙姆 407 2. 4g
400w
6分鐘
121nm
95. 6%
600w
4分鐘
117咖
86. 8%
600w
4分鐘
128nm
92. 6%
400w 6分鐘 110nm 82. 3%
施
包 孢
體脂質(zhì)納米粒的粒徑、zeta電位、包封率和角膜粘附性指標(biāo)的評(píng)價(jià)試驗(yàn)如 下
(1 )測(cè)定納米粒的粒度分布和zeta電位
將納米粒混懸液以蒸餾水適當(dāng)稀釋，用Coulter LS 230測(cè)定樣品粒度 分布，Nicomp-380/ZLS動(dòng)電電位測(cè)定儀測(cè)定電位。 ,(2)測(cè)定環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒的包封率
以SephadexG25葡聚糖凝膠微柱離心法分離環(huán)孢素固體脂質(zhì)納米粒和 游離藥物，分別測(cè)定納米粒及混懸液中環(huán)孢素的含量，根據(jù)以下公式計(jì)算 包封率
EN (%) = C/C。x簡(jiǎn)
其中，EN代表包封率；C和C。分別代表被包裹的藥量和納米?；鞈乙?中的總藥量。
(3)納米粒對(duì)角膜的粘附試驗(yàn)
實(shí)驗(yàn)所用的納米?；烊霟晒馑刈鳛闃?biāo)志探針。取家兔完整角膜，去除
孢A
環(huán)素
質(zhì)料化 八 膠質(zhì)聲率聲間均徑封 I
脂材乳、齊十0-凝基超功超時(shí)平粒包率_
實(shí)例對(duì)衣環(huán)嗇
多余組織后，用蒸餾水沖洗幾次，首先將角膜置于納米?；鞈乙褐薪? 分鐘，再轉(zhuǎn)移至模擬淚液中浸泡5分鐘。模擬淚液浸泡前后納米粒對(duì)角膜 的粘附情況，可以通過將角膜置于紫外燈下觀察角膜表面熒光區(qū)域的大小 來斷定。熒光區(qū)域大，證明納米粒對(duì)角膜的粘附性好。如圖3所示，模擬 淚液稀釋前后，帶正電的納米粒比帶負(fù)電。
權(quán)利要求
1、一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑，其特征在于它包括治療有效量的環(huán)孢素A、脂質(zhì)材料、乳化劑、包衣材料凝膠基質(zhì)、純化水，其處方組成為每1000ml制劑中包含環(huán)孢素A 0.05g-5.0g脂質(zhì)材料 0.0g-50g乳化劑0.5g-60g包衣材料 0.1g-30g凝膠基質(zhì) 200.0g-500.0g純化水加至1000ml。
2、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒 原位凝膠制劑，其特征在于所述的脂質(zhì)材料是硬脂酸、單硬脂酸甘油酯、 雙硬脂酸甘油酯、三硬脂酸甘油酯、山崳酸甘油酯、月桂酸甘油酯、甘油 棕櫚酸硬脂酸酯、二十二酸單、雙、三甘油酯的混合物、三豆蔻酸甘油酯、 枸櫞酸甘油酯、十八醇、棕櫚酸、二十二碳烷酸、癸酸、豆蔻酸、山崳酸、 月桂酸、膽固醇、鯨蠟醇棕櫚酸酯、蜂蠟中的一種或多種；所述的乳化劑 可以是泊洛沙姆188、泊洛沙姆182、泊洛沙姆407、泊洛沙姆908、泰洛 沙姆、卵磷脂、大豆磷脂和/或合成磷脂、膽酸鈉、甘膽酸鈉、牛黃膽酸 鈉、去氧牛黃膽酸鈉、十二烷基硫酸鈉、十八烷基硫酸鈉、十二烷基苯磺 酸鈉、吐溫-80、聚氧乙烯蓖麻油、聚氧乙烯氫化蓖麻油、聚乙二醇、節(jié) 澤、賣澤中的一種或多種；所述的凝膠基質(zhì)可以選用泊洛沙姆407,或泊 洛沙姆407與188的混合物；包衣材料可以是十八胺、磷酸鯨蠟酯、氯化 苯甲烴銨、溴化十六烷基三甲胺、氯化十六烷基嘧啶、溴化二甲基雙十八 烷基銨。
3、 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒 原位凝膠制劑，其特征在于該制劑除可以用于眼部給藥外，還適用于粘 膜給藥或皮膚給藥方式。
4、 一種如權(quán)利要求1所述的一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米 粒原位凝膠制劑的制備方法，其特征在于該方法先將正電荷材料包裹于 納米粒表面，再制備成原位凝膠制劑。
5、 一種如權(quán)利要求1所述的生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒原 位凝膠制劑的制備方法，其特征在于其操作步驟包括(l)固體脂質(zhì)納 米粒的制備脂質(zhì)材料水洛熔融后，相繼加入藥物、乳化劑，攪拌下加入 同溫度的純化水，形成初乳后經(jīng)過高壓乳勻機(jī)或探頭超聲，形成固體脂質(zhì) 納米粒(2)包衣材料用少量稀酸溶液溶解后，趁熱滴入上述納米?；鞈?液中，混合均勻即可(3)納米粒原位凝膠制劑的制備向上述制備好的 納米粒中，緩慢加入凝膠基質(zhì)，同時(shí)高速攪拌，最后放于冰箱中冷藏保存 1 2小時(shí)以上。環(huán)孢素A脂質(zhì)材料乳化劑包衣材料凝膠基質(zhì)純化水0. 05g — 5. Og 0. Og — 50g 0. 5g — 60g 0. lg — 30g200. Og 一 500. Og 加至lOOOml。
6、根據(jù)權(quán)利要求5所述的生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒原位凝 膠制劑的制備方法，其特征在于所述的固體脂質(zhì)納米粒的制備方法中， 可以用微乳法，乳化溶劑擴(kuò)散法代替高壓乳勻或探頭式超聲法。
全文摘要
本發(fā)明屬于醫(yī)藥技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種生物黏附性環(huán)孢素A固體脂質(zhì)納米粒原位凝膠制劑及其制備方法。此制劑包括治療有效量的環(huán)孢素A、乳化劑、脂質(zhì)材料及電荷調(diào)節(jié)劑/包衣材料等，每1000ml制劑中包含環(huán)孢素A0.05g-5.0g，脂質(zhì)材料0.0g-50g，乳化劑0.5g-60g，包衣材料0.1g-30g，凝膠基質(zhì)200.0g-500.0g，純化水加1000ml。先將正電荷材料包裹于納米粒表面，再制備成原位凝膠制劑。本發(fā)明制備的納米粒粒徑小于200nm，具有較高的包封率，表現(xiàn)大于+23mv的zeta電位，并隨電荷調(diào)節(jié)劑/包衣材料用量增大，電位提高。本發(fā)明制劑顯示出了較好的雙重粘膜粘附性，可用于局部給藥，并因在給藥部位滯留時(shí)間延長，藥物的作用時(shí)間長，可提高藥物生物利用度和藥物治療指數(shù)，可以減少用藥劑量和毒副作用。
文檔編號(hào)A61K9/00GK101181227SQ20071015877
公開日2008年5月21日 申請(qǐng)日期2007年12月10日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月10日
發(fā)明者崔福德, 鈕萌萌 申請(qǐng)人:沈陽藥科大學(xué)