專利名稱：設(shè)計用于藥物遞送的納米顆粒的制作方法
設(shè)計用于藥物遞送的納米顆粒
本發(fā)明涉及通過微粒乳狀液法(miniemulsion method)制備納米顆粒 的方法，所述納米顆粒是通過向反應(yīng)系統(tǒng)添加一定量的穩(wěn)定劑而產(chǎn)生的。 本發(fā)明進(jìn)一步涉及通過該方法制備的納米顆粒以及它們用于治療疾病和 病癥的用途，所述治療需要藥劑穿過一個或更多的生理屏障，特別是血腦屏障。
納米顆粒為檢測和治療多種疾病，特別是癌癥，提供了新希望。因此， 納米顆粒在許多醫(yī)藥領(lǐng)域，特別是癌癥治療中，具有巨大的潛力。保證直 接向癌細(xì)胞遞送腫瘤殺死藥物，從而避免化學(xué)療法不受歡迎的副作用，在 醫(yī)藥界中引起了對納米顆粒的極大興趣。
另外，除靶向遞送外，納米顆粒在其穿越人和動物體某些屏障的能力 上顯示了驚人的效果。例如，在美國專利申請S.N. 08/203,326和平行的國 際專利申請?zhí)朠CT/EP95/00724 (相應(yīng)地，WO 95/22963)中報導(dǎo)了通過納 米顆粒的方式能夠?qū)⑺幬镞f送到哺乳動物的機(jī)體，特別是人的機(jī)體，并且 能夠穿越血腦屏障進(jìn)行傳輸，所述納米顆粒是與藥物復(fù)合的(摻入的，吸 附的或吸收的)，并且由適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣┲瞥傻陌滤鶉@。上述兩篇 申請中均教導(dǎo)了藥物可以是免疫抑制劑或抗癌劑。描述了大量的常規(guī)和可 商購的表面活性劑，例如聚山梨酯80或吐溫80，作為適當(dāng)?shù)谋砻婊钚詣?br> W098/56361也涉及納米顆粒，并且其公開了不需要如WO 95/22963 所教導(dǎo)地那樣應(yīng)用圍繞納米顆粒/藥物復(fù)合物的額外包衣。
按照現(xiàn)有技術(shù)，根據(jù)摻入的藥劑是疏水性或親水性的不同，利用單(水 包油)或多乳化作用(水包油包水)，通過一般稱為"溶劑中乳化-揮發(fā)技 術(shù)"制備納米顆粒。
產(chǎn)生納米顆粒后，溶劑從乳化劑中揮發(fā)掉。通過離心法，或優(yōu)選地超 速離心法(120,000-145,000g)從殘余物分離納米顆粒，用水洗滌，重新離心 并傾析。從現(xiàn)有技術(shù)還已知在微粒乳狀液中實現(xiàn)向多聚體的轉(zhuǎn)化。微粒乳狀液
是例如水，油相和一種或多種具有小滴尺寸約為50-500nm的表面活性劑 的分散體。認(rèn)為微粒乳狀液是亞穩(wěn)定的(參見乳狀液聚合作用和乳狀液多 聚體(Emulsion Polymerization and Emulsion Polymers, 編輯P. A. Lovell禾口 Mohamed S. El-Aasser， John Wiley禾卩Sons, Chichester,紐約,Weinheim, 1997，第700頁以及下列等等；Mohamed S. El-Aasser,乳狀液聚合作用和 乳膠技術(shù)中的進(jìn)展 (Advances in Emulsion Polymerization and Latex Technology),第30界年度短期課程(30th Annual Short Course)，巻3， 6 月7-11日，1999，乳狀液多聚體學(xué)院(Emulsion Polymers Institute) , Lehigh University,伯利恒(Bethlehem),賓夕法尼亞州，美國)。這些分散體在清 潔產(chǎn)品，化妝品或美體產(chǎn)品領(lǐng)域中發(fā)現(xiàn)了廣泛的應(yīng)用。
例如，由國際專利申請WO 98/02466或由德國專利DE-A-196 28 143 和DE-A-196 28 142己知，通過烯屬不飽和單體的自由基微粒乳狀液聚合 作用制備水性第一分散體。在這些已知過程的情形中，單體在不同的低分 子量、低聚或多聚疏水性物質(zhì)的存在下能夠共聚合。
優(yōu)選的納米顆粒形成方法是如K. Landfester等開發(fā)的微粒乳狀液技
術(shù)
此時，將微粒乳狀液定義為臨界穩(wěn)定的、大小為50-500nm的油滴的 分散體，是通過剪切包含水、表面活性劑(或"穩(wěn)定劑")和疏水物的系 統(tǒng)而制備的。該微粒乳狀液中單體的聚合作用導(dǎo)致具有與最初小滴大約相 同尺寸的粒子。

圖1中示意性地顯示了微粒乳狀液聚合作用的原理(K. Landfester，微粒乳狀液中的聚合反應(yīng)(Polyreactions in miniemulsions),高 分子快訊(Macromol. Rapid Comm.) 2001, 896-936. K. Landfester, N. Bechthold, F. Tiarks，和M. Antonietti,可多聚微粒乳狀液的劑型和穩(wěn)定機(jī)制 (Formulation and stability mechanisms of polymerizable miniemulsions).高 分子(Macromolecules) 1999, 32, 5222. K. Landfester,微粒乳狀液中的近
其月發(fā)展--齊lj型禾口禾急定機(jī)帝lJ (Recent Developments in miniemulsions -
Formation and Stability Mechanisms).高分子專題i侖文(Macromol. Symp.) 2000， A5。， 171)。
WO0209862 (DE 10101892)公開了用于制備包含活性成分或物質(zhì)的多聚體膠囊、小丸或小滴的方法，該方法借助于利用適當(dāng)單體的非自由基微 粒乳化液聚合作用，優(yōu)選地加聚作用，原位包封所述活性成分或物質(zhì)。由 上述方法制備的包含活性成分或物質(zhì)的多聚體媒介物系統(tǒng)能夠作為遞送 系統(tǒng)使用，特別是在化妝品和美體領(lǐng)域、醫(yī)藥品、粘和過程和/或洗滌和清 潔劑領(lǐng)域中。
DE19852784公開了借助于表面活性劑(Sl)和共表面活性劑(S2) 穩(wěn)定油/水微乳狀液(micro-emulsion)或微粒乳狀液(miniemulsion)的方法， 其中(S2)由為提供滲透性穩(wěn)定的乳狀液而選出不溶于水的化合物組成， 該化合物不包括十六垸、十六醇、十二垸硫醇、長鏈甲基丙烯酸烷基酯和 染料藍(lán)70。還公開了滲透性穩(wěn)定的微乳狀液或微粒乳狀液，其包含油相， 水相，表面活性劑(Sl)和如上所定義的超疏水性共表面活性劑(S2)。
WO2004017945公開了納米顆粒對將DNA轉(zhuǎn)染到真核細(xì)胞中的用途。 其進(jìn)一步公開了在人或動物體內(nèi)向靶器官的DNA施用。特別地， WO2004017945教導(dǎo)了納米顆粒對向人或動物體內(nèi)受腫瘤影響的靶器官 如，例如腦腫瘤情形中的腦，施用與癌癥治療相關(guān)DNA的用途。 WO2004017945還公開了利用對DNA和納米顆粒間結(jié)合起增強(qiáng)劑作用的 物質(zhì)("穩(wěn)定劑")。特別是，將二乙基氨基乙基-(DEAE)-葡聚糖和葡聚糖 70.000列為穩(wěn)定劑。
然而，按照WO2004017945,制備那些納米顆粒的唯一方法是通過常 規(guī)乳狀液聚合作用，例如，直接從溶劑中的單體溶液形成納米顆粒。
本發(fā)明的目的是提供改進(jìn)的用于制備藥物遞送媒介物的方法，所述媒 介物能夠高產(chǎn)率地，并以固體含量(solid content)獲得。此外，本發(fā)明的 目的是提供用于制備藥物遞送媒介物的方法，所述方法適合于該媒介物的 大規(guī)模生產(chǎn)。此外，本發(fā)明的目的是提供用于藥劑遞送媒介物，其明確地 與所需的釋放特征相適應(yīng)。本發(fā)明的目的尤其是提供遞送媒介物，該媒介 物適合用于改變醫(yī)學(xué)狀態(tài)，能夠明確地穿過動物或人體的主要生理或生物 屏障，并且隨之顯示出在靶組織中改良的釋放特征，如藥劑持續(xù)的釋放或 延長的釋放。本發(fā)明另外的目的是避免使用表面活性劑，例如聚山梨酯80， 作為納米顆粒上的包衣。
這些目的通過獨立權(quán)利要求的主題實現(xiàn)。在從屬權(quán)利要求中闡述了優(yōu)
6選的實施方案。
作為一般說明，本發(fā)明的納米顆粒是通過"微粒乳狀液法"形成的，
其本身是眾所周知的，并且例如公開于K. Landfester,"微粒乳狀液中的 聚合反應(yīng)(Polyreactions in miniemulsions)"，高分子快訊(Macromol. Rapid Comm. )2001, 896-936. K. Landfester, N. Bechthold， R Tiarks，和M. Antonietti: "可聚合微粒乳狀液的劑型和穩(wěn)定性機(jī)制(Formulation and stability mechanisms of polymerizable miniemulsions)"中。該技術(shù)主要通過涉及不 同順序的制備步驟而區(qū)別于眾所周知的常規(guī)方法(如，例如WO2004017945 中所使用的)在該方法中，使微粒乳狀液形成多聚粒子，該微粒乳狀液 在親水性連續(xù)相中包含分散的疏水性、含有單體的小滴。在常規(guī)方法中， 多聚體直接由含有單體的溶液形成。
因此，術(shù)語"微粒乳狀液"用于本文時通常指一種技術(shù)，通過該技術(shù) 產(chǎn)生分散體，該分散體含有分散在連續(xù)相中的連續(xù)的W(親水的)和O(疏 水的)相。而且，該術(shù)語涉及形成的1-1.000 nm的乳狀液滴，通常大約 50-500nm (聚合作用后的粒子尺寸相同或幾乎相同)。
常規(guī)方法和微粒乳狀液方法的另一個區(qū)別是后者中，在方法開始時使 兩液相相接觸，且隨后形成乳狀液。在常規(guī)乳狀液法中，在開始時僅將一 相的小滴滴入另一相中。
基于通過常規(guī)方法僅能獲得含有大約1%納米顆粒(固體含量)的混 懸液的事實能夠看出其主要缺點之一。相反，本微粒乳狀液方法容許含有 甚至15-24%或更高固體含量的納米顆粒，該含量基于25% w/w單體含量 (基于o/w反應(yīng)系統(tǒng)的總重)。因此，固體納米顆粒的產(chǎn)率顯著提高，并 且相當(dāng)于所用單體的大約60-96%。
通過本方法，有可能獲得高固體含量(范圍15-24%)以及由此獲得 高產(chǎn)率(60-96%)的納米顆?；鞈乙?，這在擴(kuò)大規(guī)模的方面是非常重要的。 該過程是可重復(fù)的。所產(chǎn)生的納米顆粒的平均直徑是200-300 nm(范圍〈1 iam)(見圖2)。
作為實施例，如果O相由6g單體+250mg疏水物組成，W相是24g 0.01 N HC1+穩(wěn)定齊U，則固體的最大含量應(yīng)是25% w/w (6/24 x 100)，相當(dāng)于100% 的產(chǎn)率。那么，20。/。w/w的含量相當(dāng)于80。/。的產(chǎn)率。在這種情形中，剩余的20%表現(xiàn)為單體，其在聚合作用的過程中，例如通過在器皿表面上或在
均化器等上的聚合損失掉了。
然而，本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)方法的主要區(qū)別存在于這樣的事實中，所述 事實是按照本發(fā)明對納米顆粒沒有使用表面活性劑包衣。令人驚訝地證實 了眾所周知的表面活性劑包衣如果運送一種或多種藥物，則可能對納米顆
粒的治療安全性具有有害的影響。特別地，實驗結(jié)果顯示高達(dá)40重量-% 是初始加入的藥物(吸附于納米顆粒)由表面活性劑包衣所替代。然而， 這導(dǎo)致無法接受地變化的和不精確量的藥物與納米顆粒結(jié)合，從而降低了 藥物包被的納米顆粒的治療功效和可靠性。
但是，省去納米顆粒的表面活性劑包衣導(dǎo)致這些納米顆粒穿過生理屏 障，例如血腦屏障的能力降低?？梢酝ㄟ^這樣的事實對其進(jìn)行解釋，所述 事實是表面活性劑包被物質(zhì)(例如，吐溫80)能夠分別吸收血液中出現(xiàn)的 ApoE和ApoA，從而容許向血腦屏障的脂蛋白受體呈遞納米顆粒。這依次 引起受體介導(dǎo)的納米顆粒內(nèi)吞作用，以及由此引起納米顆粒通過血腦屏 障。
因此，.為了避免吸附于納米顆粒上的藥物的替換，簡單地去除表面活 性劑包衣是不利的。
本發(fā)明人現(xiàn)在創(chuàng)建了一種溶液，該溶液克服了這兩個問題，即避免與 使用表面活性劑包衣相關(guān)的缺點并維持包衣對穿過生理屏障，特別是血腦
屏障的積極作用
與形成現(xiàn)有技術(shù)表面活性劑包衣的那些表面活性劑相同或相似的表面 活性劑已經(jīng)在它們的制備過程中被摻入到納米顆粒中了。更確切地，發(fā)現(xiàn)
如果將表面活性劑或穩(wěn)定劑以基于可聚合單體總重10-25重量％的量摻入
于納米顆粒中，它們是有效的。因此，本發(fā)明的方法由于在應(yīng)用于生物體 前不再需要與表面活性劑混合，相當(dāng)大地簡化了加工程序，并促進(jìn)臨床應(yīng) 用。
因此，在第一方面，按照本發(fā)明的制備納米顆粒的方法包括下列步驟 a)提供反應(yīng)系統(tǒng)，其包括O和W型液相， 一種或多種穩(wěn)定劑和可聚
合單體，其中以基于可聚合單體總重10-25重量％的量加入所述一種或多
種穩(wěn)定劑，b) 形成o/w型微粒乳狀液，所述o相小滴含有所述單體，
c) 聚合所述單體，從而形成納米顆粒，其中將一種或多種能夠與所述
納米顆粒結(jié)合的藥劑加入到所述納米顆粒中，從而生成由所述一種或多種
藥劑包被的納米顆粒，和/或，其中在步驟a)中加入一種或多種藥劑。
一種或多種穩(wěn)定劑的量是基于可聚合單體總重的10-25重量％，即優(yōu) 選地不包括10和25重量％的值。還應(yīng)該注意用于本文的"穩(wěn)定劑的量" 還包括若干組合的穩(wěn)定劑的總量。例如，所述10-25重量％的量可以由10% 十二垸基硫酸鈉和10%聚山梨酯80組成(見實施例2)。
術(shù)語"穩(wěn)定劑"用于本發(fā)明時應(yīng)該包括任何能夠穩(wěn)定乳狀液的物質(zhì)。 這些物質(zhì)優(yōu)選地是表面活性物質(zhì)，即表面活性劑。
在另一方面，本發(fā)明提供制備納米顆粒的方法，該方法由上文提及的 步驟組成。
本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定劑或表面活性劑與本發(fā)明納米顆粒相摻入的最寬可 能范圍是基于可聚合單體總重的10-25重量％。該范圍對于測試的所有穩(wěn) 定劑(表面活性劑)都是正確的。可以通過這樣的實驗結(jié)果解釋該范圍， 所述實驗結(jié)果顯示基于可聚合單體總重的10重量％及更少的量不足以容 許足量的納米顆粒穿過生理屏障。另一方面，如果使用基于可聚合單體總 重的25重量％或更多，則無法接受的大量穩(wěn)定劑(表面活性劑)會被遞送 到患者體內(nèi)。
此外，證實了超過25重量％的量的穩(wěn)定劑能夠?qū)е虏恍枰木酆线^程 本身的開始。這種不利情形的結(jié)果是由于粒子凝聚從而沒有明顯的納米顆 粒形成。
將術(shù)語"反應(yīng)系統(tǒng)"在用于本文時定義為任何環(huán)境，該環(huán)境實現(xiàn)形成 按照上文定義的微粒乳狀液的要求。
如上所述，如，例如Landfester等(見上)中所公開地，已知的微粒乳狀 液技術(shù)能夠用于制備微粒乳狀液。這能夠例如通過首先結(jié)合單體，O和W 相和穩(wěn)定劑(如下定義)完成。注意到W相可以含有更多成分，例如HC1 或H3P04，從而調(diào)整適當(dāng)?shù)膒H值。第二，可以通過例如均化器等混合反 應(yīng)系統(tǒng)，從而混合全部成分。
通過對反應(yīng)系統(tǒng)應(yīng)用高剪切力，例如通過超聲波和高壓均化器，實現(xiàn)微粒乳狀液自身的制備。此外，依賴于反應(yīng)系統(tǒng)的尺寸和所使用的均化器，
應(yīng)用剪切力2-5分鐘?；旧?，認(rèn)為3-4分鐘的時間范圍是充足的。
超聲波均化器可以具有大約60-100%的振幅，優(yōu)選地，大約70-90%。 該方法中所使用的溫度優(yōu)選地為-l-5。C，優(yōu)選地，0°C。 通常，O對W相的重量比是15-40 °/。w/w，優(yōu)選地，20-30 %w/w，和 更優(yōu)選地，大約25。/。w/w。
制備微粒乳狀液后，例如通過僅僅升高pH到PH7.0等起始聚合過程。 這只要是在反應(yīng)系統(tǒng)中使用PBCA單體并例如通過向反應(yīng)系統(tǒng)加入足量 K2C03或通過將微粒乳狀液倒入基本溶液而實現(xiàn)pH的增高，就能夠完成， 所述基本溶液由水性0.5MNH3或水性0.1 Mtris-堿或水性O(shè).l MNaOH溶 液組成。
本發(fā)明的納米顆粒優(yōu)選地具有在50-500nm范圍內(nèi)的直徑，更優(yōu)選地， 200-300nm (見圖2作為實例)，然而，可以觀察到當(dāng)使用更高摩爾濃度的 水性H3P04溶液制備微粒乳狀液時，粒子尺寸減小。
在本發(fā)明中，令人驚訝地證實了通過上述微粒乳狀液法制備的納米顆 粒具有未預(yù)料到的特征和優(yōu)點。首先，如上所述，該制備方法的產(chǎn)率比常 規(guī)方法的產(chǎn)率高得多。此外，然而，證實了由本發(fā)明的方法制備的納米顆 粒具有改善的使藥劑與其表面結(jié)合的能力。令人驚訝地，能夠顯示該效果 不依賴于所涉及的藥劑(或藥物)的特性。
在不與任何特殊理論相結(jié)合的情況下，認(rèn)為本發(fā)明納米顆粒的三維結(jié) 構(gòu)容許藥物分子與納米顆粒更穩(wěn)定的附著。顯微鏡測定顯示出不是平滑一 致的納米顆粒表面，而是線團(tuán)狀表面結(jié)構(gòu)。我們的理論是該線團(tuán)狀結(jié)構(gòu)不 依賴于它們的物理或化學(xué)行為，促進(jìn)藥物分子與納米顆粒的結(jié)合。
然而，還應(yīng)該提及所述一種或多種藥劑不必須必要地包被在納米顆粒 上。還可能通過已經(jīng)在步驟a)中加入所述試劑，將它們摻入到納米顆粒 中。在這種情形中，其依賴于藥劑以及其在優(yōu)選地將其引入的兩相中的化 學(xué)和/或物理特性。清楚的是優(yōu)選地將親脂性試劑摻入到O型液相中，將 親水性試劑引入到W型液相中。這兩種方法的結(jié)合也是可能的，即在步 驟a)中添加藥劑并在制備后將該藥劑包被在納米顆粒上。
在優(yōu)選的實施方案中，步驟a)中添加基于可聚合單體總重的12-23重量％，優(yōu)選地，15-20重量％的量的穩(wěn)定劑。
在另外實施方案中，執(zhí)行了另外的步驟d)，其中向所提供的納米顆粒 添加媒介物，從而容許所述納米顆粒在給藥后向哺乳動物內(nèi)或上的靶標(biāo)傳 輸。更優(yōu)選地，步驟d)提供藥物組合物形式的納米顆粒。
所述藥物組合物包括生理上可接受的載體和/或稀釋劑，從而容許所述 納米顆粒在給藥后向哺乳動物，優(yōu)選地人體內(nèi)的靶標(biāo)傳送。優(yōu)選地，所述 載體和/或稀釋劑選自由水、生理上可接受的水性溶液組成的組，所述生理 上可接受的水性溶液包含鹽和/或緩沖液以及任何可用于向哺乳動物給藥 的其他溶液。所述載體和稀釋劑對于本領(lǐng)域中的技術(shù)人員是熟知的，并且 包括蒸餾水、去離子水、純或超純水、鹽水、磷酸鹽緩沖液(PBS)，含有 與藥物靶向系統(tǒng)等的其他成分相容的常用緩沖液的溶液。
為了在體內(nèi)使用納米顆粒，可以在生理pH和同滲濃度(osmolarity)下， 將它們與普通鹽水或磷酸鹽緩沖水溶液重建到混懸液中。
典型地，納米顆粒以O(shè).lmg納米顆粒/ml混懸液流體-100mg納米顆粒 /ml混懸液流體的濃度存在于可注射的混懸液中。lOmg納米顆粒/ml是優(yōu) 選的。所使用的納米顆粒的量強(qiáng)烈依賴于每個納米顆粒中所包含藥劑的 量，并且負(fù)責(zé)的技術(shù)人員或醫(yī)師能夠無困難地使納米顆粒的劑量適合于特 定的情況。
備選地，藥物組合物可以選擇傳輸本發(fā)明的遞送媒介物到達(dá)和穿過其 他生理屏障，例如達(dá)到和穿過腦-氣屏障，所需要的其他形式。于是它可以， 例如具有氣霧劑等的形式，從而通過吸入到有問題的屏障中而遞送該組合 物。
藥物組合物優(yōu)選地選擇用于口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、 鼻內(nèi)、肺或直腸給藥，優(yōu)選地用于口服或靜脈內(nèi)給藥的藥物形式。
在本發(fā)明的方法中，用藥劑包被納米顆粒的步驟優(yōu)選地包括混合所述 納米顆粒和所述一種或多種藥劑的溶液，并容許充足的時間使足量的所述 一種或多種藥劑吸附到納米顆粒上和/或被納米顆粒吸收。
本方法中所使用的O相優(yōu)選地含有疏水物，其選自橄欖油、miglyol、 大豆油和/或十六烷、正-己烷、液體石蠟、維生素E或甘油三酯的脂肪酸 酯。疏水物的量通常相對較少，且應(yīng)該足以防止奧斯特瓦爾德熟化(基于O相總重的大約2-200/。w/w (進(jìn)一步含有單體)。
使用了可聚合單體，從而形成多聚物質(zhì)，所述多聚物質(zhì)優(yōu)選地選自由
下列各項組成的組聚丙烯酸脂，聚甲基丙烯酸酯，聚氰基丙烯酸酯，優(yōu) 選地，聚烷基氰基丙烯酸酯，聚芳基酰胺，聚乳酸酯，聚乙醇酸酯，聚酸 酐，聚原酸酯，明膠，多糖，清蛋白，聚苯乙烯，聚乙烯，聚丙烯醛，聚 戊二醛，及其衍生物、共聚物和混合物。
優(yōu)選的多聚物質(zhì)包括固態(tài)或薄膜形式的多聚體，優(yōu)選地，聚垸基氰基 丙烯酸酯，更優(yōu)選地，聚丁基氰基丙烯酸酯，聚乳酸和聚丁酸，及其混合 物和衍生物。
本發(fā)明中所使用(產(chǎn)生)的多聚物質(zhì)優(yōu)選地是可生物降解的。這個術(shù) 語表示己知適合于在生物體內(nèi)使用的任何合成的或天然來源的多聚物質(zhì)， 即是生物學(xué)上惰性的和生理學(xué)上可接受的，無毒的，并且，在本發(fā)明的遞 送系統(tǒng)中，在使用環(huán)境中是可生物降解的，即能夠被身體再吸收。
也能夠用于配制納米顆粒的其他可生物降解的多聚體包括，但不僅限
于，聚酯，諸如聚乙交酯，聚乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA);聚醚，諸如
羥基末端的聚(S-己內(nèi)酯)-聚醚或聚己內(nèi)酯(PCL);聚酐；聚丙烯酰胺； 聚(原酸酯)；聚氨基酸；和可生物降解的聚氨基甲酸脂。應(yīng)該理解應(yīng)該 將術(shù)語多聚體解釋為包括共聚物和低聚物。
步驟a)中提供的穩(wěn)定劑的實施方案包括一種或多種下列物質(zhì)
甘油、山梨醇和其他單或多功能醇的脂肪酸酯，優(yōu)選地苯甲醇，甘油
單硬脂酸酯，失水山梨醇單月桂酸酯，或失水山梨糖醇單油酸酯；多糖， 苯甲酸節(jié)酯，聚乙二醇(PEG200， 300， 400， 500， 600)，聚乙二醇羥基 硬脂酸酯，優(yōu)選地，SolutolHS 15; poloxamines，優(yōu)選地，poloxamine 904， 908，或1508;聚氧乙烯醚和聚氧乙烯酯；乙氧基化甘油三酯；乙氧基化 苯酚和乙氧基聯(lián)苯酚；polyoxyl蓖麻油，優(yōu)選地，ELP;卵磷脂，脂肪酸 的金屬鹽，脂肪醇硫酸酯的金屬鹽(metal salts of fatty alcohol sulfates);和 磺基琥珀酸酯(sulfosuccinates)的金屬鹽；優(yōu)選地聚山梨醇酯，更優(yōu)選地， 聚山梨醇酯20， 60和最優(yōu)選地，聚山梨酯80;優(yōu)選地，泊洛沙姆，更優(yōu) 選地，泊洛沙姆188， 388或407;優(yōu)選地，聚乙二醇，更優(yōu)選地，Lutensol 50或80;陰離子表面活性劑，例如十二垸基硫酸鈉；以及兩種或更多種所述物質(zhì)的混合物。
應(yīng)該注意全部這些穩(wěn)定劑(或表面活性劑)的分子結(jié)構(gòu)顯示出相似性， 它們的特性也如此。
用于包被納米顆粒的一種或多種藥劑選自治療劑和診斷劑。 治療劑優(yōu)選地選自在無遞送媒介物或載體的情況下不能穿過生理屏障 的物質(zhì)。生理屏障優(yōu)選地選擇，盡管不限于，由血腦屏障(bbb)，血-氣屏 障，血-腦脊髓液屏障和口腔粘膜組成的組。另外，所述一種或多種治療劑 具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性，但在無遞送媒介物的情況下不能穿過血腦屏障。 注意到在本文中術(shù)語"藥物"和"治療劑"可交替使用。 按照優(yōu)選的實施方案，本發(fā)明的遞送媒介物包括一種或多種治療劑， 所述一種或多種治療劑選自由下列各項組成的組在突觸位點和神經(jīng)效應(yīng) 器連接位點處作用的藥物；通用和局部止痛劑；催眠劑和鎮(zhèn)靜劑；用于治 療精神病學(xué)病癥，如憂郁癥和精神分裂癥的藥物；抗癲癇藥劑和抗痙攣劑； 用于治療帕金森氏癥和亨廷頓氏癥、老化和阿爾茨海默氏癥的藥物；興奮 性氨基酸拮抗劑，神經(jīng)營養(yǎng)因子和神經(jīng)再生劑；營養(yǎng)因子；針對CNS創(chuàng) 傷或中風(fēng)治療的藥物；用于治療上癮和藥物濫用的藥物；抗肥胖藥； antacoids和消炎藥；用于由微生物引起的寄生性感染和疾病的化學(xué)治療 劑；免疫抑制劑和抗癌藥；激素和激素拮抗劑；重金屬和重金屬拮抗劑； 非金屬毒性試劑的拮抗劑；用于治療癌癥的細(xì)胞生長抑制劑；核醫(yī)學(xué)中使 用的診斷物質(zhì)；免疫活性和免疫反應(yīng)性試劑；遞質(zhì)以及它們各自的受體激 動劑和受體拮抗劑，它們各自的前體和代謝物；輸送物抑制劑；抗生素； 鎮(zhèn)痙藥；抗組胺劑；止吐劑；弛緩劑；興奮劑；有義和反義寡核苷酸； 腦擴(kuò)張器；神經(jīng)藥物；抗狂躁藥；脈管擴(kuò)張劑和收縮劑；抗高血壓藥；用 于偏頭痛治療的藥物；催眠藥；高血糖癥和低血糖癥試劑；平喘藥；抗病 毒劑；優(yōu)選地，抗HIV試劑；適合于疾病的DNA， si-RNA或反義治療的 遺傳物質(zhì)；及其混合物。
術(shù)語"DNA"用于本說明書時主要指本技術(shù)領(lǐng)域中可能的任何DNA。 在優(yōu)選的實施方案中，術(shù)語"DNA"有意包括兩種DNA類型，即質(zhì)粒DNA 和反義寡核苷酸， 一方面，所述質(zhì)粒DNA，更優(yōu)選地為，包含腫瘤抑制 劑基因信息的質(zhì)粒DNA，甚至更優(yōu)選地，包含腫瘤抑制劑基因p53和pRB信息的質(zhì)粒DNA，另一方面，所述反義寡核苷酸，更優(yōu)選地為，針對癌 基因的反義寡核苷酸，甚至更優(yōu)選地，針對癌基因，如Bcl2的反義寡核 苷酸。本發(fā)明可以使用一種DNA類型(和從而負(fù)載一種DNA類型的納米 顆粒)。備選地，可以使用兩種或更多種DNA類型，從而導(dǎo)致大量負(fù)載了 不同DNA類型并可以按照本發(fā)明使用的納米顆粒類型。
令人驚訝地，DNA且尤其是上述兩種類型的DNA能夠吸附在納米顆 粒上，且能夠?qū)⒂纱水a(chǎn)生的DNA-納米顆粒復(fù)合物接種到生物體中，尤其 是患有癌癥(特別地，但不僅限于，腦癌)的生物體中。隨后，能夠觀察 到腫瘤增殖的抑制，且甚至能夠誘導(dǎo)腫瘤壞死和程序性細(xì)胞死亡。
在本發(fā)明優(yōu)選的而非基本的實施方案中，能夠?qū)瑔幼拥馁|(zhì)粒 DNA，更優(yōu)選地包含可誘導(dǎo)的啟動子的質(zhì)粒DNA加載到納米顆粒上。通 過將含有可誘導(dǎo)啟動子的DNA加載到納米顆粒上和在細(xì)胞內(nèi)對其進(jìn)行表 達(dá)的新步驟，能獲得可誘導(dǎo)的啟動子，以及從而獲得相關(guān)基因表達(dá)的外部 控制，并且能夠隨意地將基因開啟或關(guān)閉。作為未預(yù)料到的超越現(xiàn)有技術(shù) 的優(yōu)勢，能夠控制基因/DNA表達(dá)的時刻。該控制能夠減少連續(xù)基因表達(dá) 的毒性副作用，和/或能夠降低細(xì)胞對基因產(chǎn)品產(chǎn)生抗性，及由此產(chǎn)生負(fù)選 擇的可能性。
在本發(fā)明優(yōu)選的實施方案中，將人乳頭狀瘤病毒上游調(diào)節(jié)區(qū)域 (HPV-URR)用作可誘導(dǎo)的啟動子。施用了地塞米松或其他誘導(dǎo)物或化合物 后，誘導(dǎo)了腫瘤抑制劑的表達(dá)。通過該方法，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤細(xì)胞程序性細(xì) 胞死亡以及腫瘤的衰退。按照本發(fā)明可以使用的其他示范性啟動子是巨細(xì) 胞病毒(CMV)啟動子或猿猴病毒40 (SV40)啟動子。
此外，通過組合施用含有一種或超過一種DNA類型的納米顆粒和含 有一種或超過一種抑制細(xì)胞生長的有效物質(zhì)，能夠?qū)崿F(xiàn)腫瘤衰退的強(qiáng)烈效 果。
在優(yōu)選的實施方案中，能夠在接種含有抑制細(xì)胞生長有效化合物的納 米顆粒復(fù)合體前注射腫瘤抑制劑DNA，甚至更優(yōu)選地在可誘導(dǎo)啟動子之 后。在甚至更優(yōu)選的實施方案中，抑制細(xì)胞生長的有效化合物是多柔比星 (doxorubicine)。
在DNA向細(xì)胞轉(zhuǎn)染的過程中，以及還有在向人或動物體內(nèi)的耙器官施用DNA的過程中，第一步包括以如上定義的方式制備納米顆粒。
為了獲得更多的信息，明確地參考WO 2004/017945，并將其內(nèi)容作為 整體引入本文。
更多的典型活性成分(例如，藥物)可以是任何作用于神經(jīng)系統(tǒng)或用 于神經(jīng)系統(tǒng)診斷測試的物質(zhì)。這些記述在Gilman等(1990),"古德曼和吉 爾曼一治療學(xué)的藥理學(xué)基礎(chǔ)"("Goodman and Gilman's - The Pharmacological Basis of Therapeutics") , Pergamon出版社,紐約，中，并
且包括下列試劑
乙酰膽堿和合成的膽堿酯，天然存在的擬膽堿生物堿和它們合成的同 類物，抗膽堿脂酶試劑，神經(jīng)節(jié)興奮劑，阿托品，東莨菪堿和相關(guān)的抗毒 蕈堿藥物，兒茶酚胺和類交感神經(jīng)藥物，如腎上腺素，去甲腎上腺素和多
巴胺，腎上腺素激動劑，腎上腺素受體拮抗劑，遞質(zhì)諸如GABA，甘氨酸， 谷氨酸鹽(酯)，乙酰膽堿，多巴胺，5-羥色胺，和組胺，神經(jīng)活性肽；止 痛劑和麻醉劑，諸如阿片樣止痛劑和拮抗劑；前麻醉劑和麻醉藥物，諸如 苯并二氮，巴比妥酸酯，抗組胺劑，吩噻嗪和butylphenones;阿片樣物質(zhì)， 止吐劑；抗膽堿能藥物，諸如阿托品，東莨菪堿或格隆溴銨；可卡因；氯 醛衍生物；乙氯維諾；苯乙哌啶酮；甲乙哌酮；氨甲丙二酯；三聚乙醛； 雙硫醒；嗎啡，芬酞尼和納洛酮；神經(jīng)病學(xué)藥物，諸如吩噻嗪，噻噸和其 他雜環(huán)化合物(例如，氟哌啶醇)；三環(huán)抗抑郁劑，諸如去丙咪嗪和丙咪 嗪；非典型抗抑郁劑(例如，氟西汀和曲唑酮)，去單胺氧化酶抑制劑， 諸如異唑肼；鋰鹽；抗焦慮藥，諸如氯氮萆和地西泮；抗癲癇藥，包括乙 內(nèi)酰脲，抗痙攣巴比妥酸酯，iminostilbines (如卡馬西平)，琥珀酰亞胺， 丙戊酸，噁唑烷二酮和苯二氮雜萆類?？古两鹕Y藥物，諸如左旋多巴/ 卡比多巴，阿樸嗎啡，阿馬他定(amatadine)，麥角靈，司來吉蘭，累匹 利洛，甲磺酸溴隱亭和抗膽堿藥；抗痙攣藥，諸如巴氯芬，地西泮和達(dá)者 倫；神經(jīng)保護(hù)劑，諸如興奮性氨基酸拮抗劑，神經(jīng)營養(yǎng)因子，和腦衍生的 神經(jīng)營養(yǎng)因子，睫狀神經(jīng)營養(yǎng)因子，或神經(jīng)生長因子；神經(jīng)營養(yǎng)(NT) 3 (NT3); NT4和NT5;神經(jīng)節(jié)苷脂；神經(jīng)再生試劑；用于治療上癮和藥 物濫用的藥物，包括阿片樣拮抗劑和抗抑郁劑；autocoids和消炎藥，諸如 組胺，緩激肽，賴氨酰緩激肽和它們各自的激動劑和拮抗劑；用于寄生性
15感染和微生物疾病的化學(xué)治療劑；抗癌藥，包括垸化劑(例如，亞硝基脲)
和抗代謝物；氮芥，乙烯胺和甲蜜胺；垸基磺酸酯；葉酸類似物；嘧啶類 似物，嘌呤類似物，長春胺類似物；抗肥胖藥，如苯雙甲嗎啉，苯丁胺， 安非拉酮，西布茶明；和抗生素。
按照優(yōu)選的實施方案，診斷劑選自由在核醫(yī)學(xué)和發(fā)射治療中用于診斷 的診斷劑組成的組。
實施方案中本發(fā)明的方法還優(yōu)選地包括一個步驟，其中在步驟c)之 后從納米顆粒中至少部分地去除所述穩(wěn)定劑。然而，應(yīng)該遵守本發(fā)明的步 驟a)中所指出的10-25重量％的范圍。
優(yōu)選地，通過透析或離心能完成額外的步驟。令人驚訝地證實了盡管 制備方法本身需要穩(wěn)定劑，在最終納米顆粒形成后，可以至少部分地去除 穩(wěn)定劑。換言之，可以去除"過量的"穩(wěn)定劑，所述"過量的"穩(wěn)定劑對 于維持納米顆粒的穩(wěn)定性是不需要的，但是能夠?qū)υ隗w應(yīng)用引起潛在的風(fēng)
險。假設(shè)將納米顆粒中穩(wěn)定劑的最低可能量認(rèn)為是具有最低的體內(nèi)風(fēng)險。 然而，該量不能太低，其原因在于那會妨礙納米顆粒穿過生理屏障的能力。
在第二方面中，本發(fā)明提供通過如上定義的方法所獲得的包被的納米 顆粒或藥物組合物。
所述包被的納米顆?；蛩幬锝M合物能夠用于制備治療疾病和病癥的藥 物，其需要藥劑從而穿過一個或多個生理屏障，特別是血腦屏障。
將本文提及的全部出版物、專利申請、專利以及其他參考整體引入作 為參考。在沖突的情形中，以本說明書，包括定義為準(zhǔn)。另外，物質(zhì)、方 法和實施例僅用于進(jìn)行舉例說明，而非意欲進(jìn)行限制。
現(xiàn)在通過附圖進(jìn)一步舉例說明本發(fā)明，其中
圖1是顯示微粒乳狀液聚合作用技術(shù)的圖表；
圖2是按照本發(fā)明制備的納米顆粒的照片；
圖3是實施例1中制備的納米顆粒粒子尺寸分布的圖像；
圖4顯示向由十二烷基硫酸鈉(SDS)所穩(wěn)定的聚丁基氰基丙烯酸酯 納米顆粒中摻入不同量的聚山梨酯80 (1,4 %， 2,5 %, 5 %, 7,5 %和10 %)。 由此生成的納米顆粒混懸液的粒子尺寸是通過光子關(guān)聯(lián)能譜法測量的。顯 示出所獲得的納米顆粒混懸液的粒子尺寸取決于聚山梨酯80的摻入量；圖5表示靜脈注射純FITC標(biāo)記的納米顆粒后的大鼠腦組織恒冷箱切 片(不按照本發(fā)明)；
圖6顯示靜脈注射FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的SDS-納米 顆粒后的大鼠腦組織恒冷箱切片(按照本發(fā)明)。
圖7顯示靜脈注射FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的納米顆粒后 的大鼠腦組織恒冷箱切片(按照本發(fā)明)。
實施例1
利用微粒乳狀液法將聚山梨酯80摻入到由SDS穩(wěn)定的聚丁基氰基丙烯酸 酯納米顆粒中
制備兩種單獨的溶液。
溶液1:將2.4 ml鹽酸(O.l moll")加入到10 ml的燒瓶中(PP)。再向 該溶液中加入0.06g十二烷基硫酸鈉(SDS)和30mg聚山梨酯80。攪拌 由此生成的溶液直到形成澄清的溶液。
溶液2:將32.3 nL十六烷和545.5 (0.6 g) "-丁基-a -氰基丙烯酸酯 (Indermil)加入到5ml的燒瓶中。轉(zhuǎn)動該燒瓶直到形成均勻的溶液。
將溶液2加入到溶液1中，并且通過超聲波處理(振幅70%，0°0由 此生成的混懸液2分鐘立即形成微粒乳狀液。然后，通過將該微粒乳狀液 加入到2.4ml 0.1 mol r1水性NaOH溶液(10ml燒瓶)中，迅速將pH值從 1改變至7，從而開始單體小滴的聚合作用。再攪拌所獲得的混懸液5分 鐘l該納米顆?；鞈乙壕哂泄腆w含量111. 8mg/ml和平均粒子尺寸118.4 ± 0.7 nm (光子關(guān)聯(lián)能譜法)。
實施例2
利用微粒乳狀液法將聚山梨酯80和FITC-葡聚糖摻入到由SDS穩(wěn)定的聚 丁基氰基丙烯酸酯納米顆粒中 制備兩種單獨的溶液。
溶液1:將2.4 ml鹽酸(O.l moll")加入到10 ml的燒瓶中(PP)。再向 該溶液中加入0.06g十二烷基硫酸鈉(SDS)、 60mg聚山梨酯80和9.0mg熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖77.000 (FITC-葡聚糖)。攪拌由此生成的溶液直 到形成澄清的溶液。
溶液2:將32.3 pL十六烷和545.5 (0.6 g) "-丁基-a -氰基丙烯酸酯 (Indermil)加入到5ml的燒瓶中。轉(zhuǎn)動該燒瓶直到形成均勻的溶液。
將溶液2加入到溶液1中，并且通過超聲波處理(振幅70%，0°0由 此生成的混懸液2分鐘立即形成微粒乳狀液。然后，通過將該微粒乳狀液 加入到2.4ml的0.1 mol l"水性NaOH溶液(10ml燒瓶)中，迅速將pH 值從1改變至7，從而開始單體小滴的聚合作用。然后攪拌所獲得的混懸 液5分鐘。再對由此生成的標(biāo)記的納米顆粒進(jìn)行透析(10次)，從而去除 可能未結(jié)合的FITC-葡聚糖和過量的穩(wěn)定劑。該納米顆?；鞈乙壕哂泄腆w 含量28.9 mg/ml和平均粒子尺寸(光子關(guān)聯(lián)能譜法)258.4 ± 7.0 nm。
然后用0.9Q/。NaCl溶液(1: 1)稀釋所獲得的納米顆?；鞈乙?，從而 進(jìn)行體內(nèi)試驗。
實施例3
利用微粒乳狀液法將聚山梨酯80和FITC-葡聚糖摻入到聚丁基氰基丙烯 酸酯納米顆粒中
制備兩種單獨的溶液。
溶液1:將0.0338 g熒光素異硫氰酸酯77.000 (FITC-葡聚糖)(1.5 %) 和0.513g吐溫80 (22.75%)加入到50ml的燒瓶中。再加入9ml磷酸(0.8 mo1/1)，并攪拌由此生成的溶液30分鐘直到形成澄清的溶液。
溶液2:將0.09g大豆油(4%)加入到10ml燒瓶中。再加入2.050ml (2.255g) "-丁基-a-氰基丙烯酸酯(Indermil，冷卻至4°C)。通過抽吸混 合由此生成的溶液。
將溶液2加入到溶液1中，并且通過超聲波處理(振幅70%, 0°C， TitanplateTT 13)由此生成的混懸液4分鐘立即形成微粒乳狀液。然后， 通過將該微粒乳狀液加入到9ml的0.5moll"氨水溶液(50ml燒瓶)中， 迅速將pH值從1改變至7，從而開始單體小滴的聚合作用。再攪拌所獲 得的混懸液5分鐘。利用pH計檢查pH值。只要pH值到達(dá)7，加入氨水 溶液。該納米顆粒混懸液具有固體含量97.46 mg/ml和平均粒子尺寸(光子關(guān)聯(lián)能譜法)151畫± 1.31 (PDI0.244)。透析(27次)后該納米顆?；?懸液具有平均粒子尺寸(光子關(guān)聯(lián)能譜法)143 nm士 1.0 (PDI 0.232)。利 用紫外光譜法確定摻入的FITC-葡聚糖的量為33.98 % (11.48 mg)。
跟隨在實施例3的程序之后的另外的備選說明是
1. 吐溫80: 20 %,大豆油4.2 %, 0.8 M H3P04, 0.5 M NH3,粒子尺寸: 120 nm; PDI: 0,14,固體含量100 mg / ml
2. 吐溫80: 20 %，大豆油4.0 %, 1 M H3P04， 0.5 M NH3，粒子尺寸: 140nm;PDI: 0，19，固體含量110 mg/ml
3. 吐溫80: 22.75 %，大豆油4.0 %， 0.8 M H3P04, 0.1 M Tris-堿,粒子尺 寸120 nm;PDI: 0.15，固體含量40mg/ml
4. 吐溫80: 20 %,大豆油4.2 °/。， 1 M H3P04, 0,1 M Tris-堿，粒子尺寸 125 nm;PDI: 0.13，固體含量45 mg/ml
然后用0.9 %NaCl溶液稀釋所獲得的納米顆?；鞈乙?，從而進(jìn)行體內(nèi) 試驗。
實施例4
利用微粒乳狀液法將FITC-葡聚糖摻入到由SDS穩(wěn)定的聚丁基氰基丙烯酸 酯納米顆粒中(比較實施例) 制備兩種單獨的溶液。
溶液1:將2.4 ml鹽酸(O.l moll")加入到10 ml的燒瓶中(PP)。再向 該溶液中加入0.06g十二垸基硫酸鈉(SDS)和9.0mg熒光素異硫氰酸酯-葡聚糖77.000 (FITC-葡聚糖)。攪拌由此生成的溶液直到形成澄清的溶液。
溶液2:將32.3 十六垸和545.5 (0.6 g) "-丁基-a -氰基丙烯酸酯 (Indermil)加入到5ml的燒瓶中。轉(zhuǎn)動該燒瓶直到形成均勻的溶液。
將溶液2加入到溶液1中，并且通過超聲波處理(振幅70%，0°0由 此生成的混懸液2分鐘立即形成微粒乳狀液。然后，通過將該微粒乳狀液 加入到2.4ml的0.1 mol l'1水性NaOH溶液(10ml燒瓶)中，迅速將pH 值從1改變至7，從而開始單體小滴的聚合作用。然后攪拌所獲得的混懸 液5分鐘。再對由此生成的標(biāo)記的納米顆粒進(jìn)行透析(10次)，從而去除
19可能未結(jié)合的FITC-葡聚糖和過量的穩(wěn)定劑。該納米顆?；鞈乙壕哂泄腆w 含量25.2mg/ml和平均粒子尺寸(光子關(guān)聯(lián)能譜法)230.9 士9.8nm。
然后用0.9y。NaCl溶液(1: 1)稀釋所獲得的納米顆?；鞈乙?，從而 進(jìn)行體內(nèi)試驗。
體內(nèi)試驗 實施例5
每組大鼠的數(shù)目2
組1:靜脈注射500 pl純FITC標(biāo)記的SDS-納米顆粒(實施例4) 組2:靜脈注射500 ^ FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的SDS-納
米顆粒(實施例2)
靜脈注射標(biāo)記的納米顆粒后45分鐘，利用異氟醚麻醉并通過斷頸法殺
死大鼠。摘除腦并將其保存在液氮中。制備恒冷箱切片(15pm)，并通過熒
光顯微鏡法進(jìn)行檢測(見圖5和6)。
結(jié)果
圖5顯示靜脈注射純FITC標(biāo)記的SDS-納米顆粒后的大鼠腦組織。該 腦組織沒有顯示出任何來自標(biāo)記的納米顆粒向腦中傳輸?shù)臒晒?。相反，圖 6證明在靜脈注射了由FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的SDS-納米顆 粒后大鼠腦組織中的顯著熒光?？梢缘贸鼋Y(jié)論，在納米顆粒的制備過程中 摻入特定量的穩(wěn)定劑(在該情形中是聚山梨酯80)導(dǎo)致這些納米顆粒穿過 血腦屏障進(jìn)入大鼠腦中的顯著傳輸，其中所述納米顆粒不需要表面活性劑 包衣。
實施例6
每組大鼠的數(shù)目1
組靜脈注射500 pi FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的PBCA-納米顆粒(實施例3)
靜脈注射標(biāo)記的納米顆粒后60分鐘，利用異氟醚麻醉并通過斷頸法殺 死大鼠。摘除腦并將其保持在液氮中。制備恒冷箱切片(15 pm)，并通過熒光顯微鏡法進(jìn)行檢測(見圖7)。 結(jié)果
圖7證明在靜脈注射了由FITC標(biāo)記的含有摻入的聚山梨酯80的 PBCA-納米顆粒后大鼠腦組織中的顯著熒光，其注射量為22.75 %。該結(jié) 果強(qiáng)調(diào)了這樣的假設(shè)，所述假設(shè)是在納米顆粒的制備過程中摻入聚山梨酯 80導(dǎo)致這些納米顆粒穿過血腦屏障進(jìn)入大鼠腦中的顯著傳輸。
權(quán)利要求
1. 一種制備納米顆粒的方法，所述納米顆粒包含一種或多種藥劑，所述方法包括下列步驟a)提供反應(yīng)系統(tǒng)，其包括O和W型液相，一種或多種穩(wěn)定劑和可聚合單體，其中以基于可聚合單體總重10-25重量％的量加入所述一種或多種穩(wěn)定劑，b)形成O/W型微粒乳狀液，所述O相小滴含有所述單體，c)聚合所述單體，從而形成納米顆粒，其中將一種或多種能夠與所述納米顆粒結(jié)合的藥劑加入到所述納米顆粒中，從而生成由所述一種或多種藥劑包被的納米顆粒，或，其中在步驟a)中加入一種或多種藥劑。
2. 權(quán)利要求1的方法，其中在步驟a)中加入基于可聚合單體總重 12-23%的量的所述一種或多種穩(wěn)定劑。
3. 權(quán)利要求1或2的方法，其中在步驟a)中加入基于可聚合單體總重 15-20重量％的量的所述一種或多種穩(wěn)定劑。
4. 權(quán)利要求l-3的方法，其中進(jìn)行了進(jìn)一步的步驟d)，其中向所述納 米顆粒中加入了媒介物，從而容許在施用后所述納米顆粒向哺乳動物內(nèi)或 哺乳動物上的靶標(biāo)傳輸。
5. 權(quán)利要求4的方法，其中步驟d)提供藥物組合物形式的納米顆粒， 所述藥物組合物優(yōu)選地采取用于口服、靜脈內(nèi)、腹膜內(nèi)、皮下、肌肉內(nèi)、 鼻內(nèi)、肺或直腸給藥，更優(yōu)選地用于口服或靜脈內(nèi)給藥的藥物形式。
6. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中用所述一種或多種藥劑包 被所述納米顆粒的步驟包括混合所述納米顆粒和所述一種或多種藥劑溶 液，并容許充足的時間使有效量的所述一種或多種藥劑吸附到所述納米顆 粒上和/或被所述納米顆粒吸收。
7. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述O相包含橄欖油、 miglyol禾口/或十六烷。
8. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述多聚物質(zhì)選自由下列 各項組成的組聚丙烯酸脂，聚甲基丙烯酸酯，聚氰基丙烯酸酯，優(yōu)選地，聚烷基氰基丙烯酸酯，聚芳基酰胺，聚乳酸酯，聚乙醇酸酯，聚酸酐，聚 原酸酯，明膠，多糖，清蛋白，聚苯乙烯，聚乙烯，聚丙烯醛，聚戊二醛， 及其衍生物、共聚物和混合物。
9. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中步驟a)中提供的穩(wěn)定劑包括一種或多種下列物質(zhì)山梨醇的脂肪酸酯，優(yōu)選地，失水山梨糖醇單月桂酸酯或失水山梨糖醇單油酸酯；poloxamines，優(yōu)選地，poloxamine 904或1508;聚氧乙烯醚 和聚氧乙烯酯；月桂基硫酸鈉；十二烷基硫酸鈉；聚山梨醇酯；泊洛沙姆； 聚乙二醇；和兩種或更多種所述物質(zhì)的混合物。
10. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述聚山梨醇酯是聚山 梨醇酯60或聚山梨酯80。
11. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述泊洛沙姆選自泊洛沙姆188,338或407。
12. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述聚乙二醇選自 Lute腦l 50或80。
13. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中所述一種或多種藥劑選 自治療劑和診斷劑，其中所述治療劑優(yōu)選地選自具有中樞神經(jīng)系統(tǒng)活性但 在無遞送媒介物的情形下不能穿過血腦屏障的治療劑，和其中所述診斷劑 選自由在核醫(yī)學(xué)中和在放射療法中用于診斷的診斷劑組成的組。
14. 前述權(quán)利要求的一項或多項的方法，其中在制備納米顆粒的方法 之后從納米顆粒中至少部分地去除了所述穩(wěn)定劑，其中優(yōu)選地通過透析或 離心完成去除。
15. 通過權(quán)利要求1-14的一項或多項的方法獲得的納米顆?；蛩幬锝M 合物。
16. 權(quán)利要求15的納米顆粒或藥物組合物在制備用于治療疾病和病癥 的藥物中的用途，所述治療需要藥劑穿過一個或多個生理屏障，特別是血 腦屏障。
全文摘要
本發(fā)明涉及通過微粒乳狀液法生成納米顆粒的方法，所述納米顆粒是通過向反應(yīng)系統(tǒng)中加入一定量的穩(wěn)定劑而制成的。本發(fā)明還涉及通過該方法制成的納米顆粒及其治療疾病和病癥的用途，所述治療需要藥劑穿過一個或多個生理屏障，特別是血腦屏障。
文檔編號A61K9/51GK101437495SQ200780004479
公開日2009年5月20日 申請日期2007年2月2日 優(yōu)先權(quán)日2006年2月3日
發(fā)明者克斯廷·林格, 尤利婭·庫巴施, 漢斯-?？ㄌ亍だ仄?申請人:納諾德爾技術(shù)股份有限公司