專利名稱：：用于治療消化性潰瘍病的包含月見草鞣質c的藥物組合物的制作方法用于治療消化性潰瘍病的包含月見草鞣質c的藥物組合物發(fā)明領域本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含治療有效量的化合物月見草鞣質(oenothein)C和任選地一種或多種藥物可接受的載體、添加劑、潤滑劑和稀釋劑。更具體地，本發(fā)明涉及使用所述藥物組合物在個體中治療消化性潰瘍病的方法。另外，本發(fā)明還涉及化合物月見草鞣質C在治療包括胃潰瘍、十二指腸潰瘍和胃炎、胃食管反流病(GERD)的消化性潰瘍病中的用途。
背景技術：
：和現有技術消化性潰瘍病(PUD)是包括不同類型的胃潰病和十二指腸潰瘍的粗分類，所有消化性潰瘍病在臨床上均以胃腸道的一個或多個區(qū)域中的被覆粘膜的腐蝕為特征。當攻擊因素和防御因素平衡時不發(fā)生PUD，只有當前一種因素變得比常態(tài)強或后一種因素變弱時才出現[l]。然而，幽門螺桿菌(//6//(:0&"^py/on')存在于超過90。/。的十二指腸潰瘍和70-80%的胃潰瘍中是目前公認的[2]。因此，PUD現在也被當作傳染病對待，用抗生素來治療。消化性潰瘍病的兩種主要病因是胃酸分泌過多和病原幽門螺桿菌(//."/on')引起的感染。對于不是由幽門螺桿菌引起的潰瘍，除了簡單地使用諸如抗酸劑的酸中和劑，推薦以H2受體拮抗劑或質子泵抑制劑的形式單獨釆用酸抑制療法。然而，在治療幽門螺桿菌時，應當總是將抗生素療法與酸抑制療法結合。因此，目前對于由幽門螺桿菌引起的PUD的治療方案包含兩種抗生素，一種是抗分泌藥，一種是粘膜涂層劑(四聯(lián)療法)，粘液涂層劑由下述藥物中的適當的四種組成阿莫西林、四環(huán)素、曱紅霉素、曱硝唑和碌4t鋁或次水楊酸鉍、或次枸櫞酸鉍以及兩種酸抑制劑H2受體阻斷劑或質子泵抑制劑之一[3]。然而，與大多數藥物一樣，許多副作用與它們的^f吏用有關。細胞色素P450系統(tǒng)與H2受體阻斷劑的藥物不良相互作用，由質子泵抑制劑引起的超敏反應和肝損傷，將抗酸劑的劑量加倍以減輕僅緩解癥狀的狀況的需要，以及抗生素抗性的發(fā)展，加上潰瘍復發(fā)問題[4]，使得尋找更好的PUD治療手段成為必需。為了開發(fā)出具有低毒性的有效的抗?jié)儎?，本發(fā)明者研究了寬廣范圍的印度藥用植物。結果發(fā)現奸子花的花及其提取物具有低毒性和優(yōu)秀的抗?jié)兓钚?，從而完成本發(fā)明，同時待審的專利申請(WO03/080095PCTIN/03/0067)和美國專利20060040005描述了植物花蟲下子花(『/w"cwa)的提取物的抗消化性潰瘍活性[5]，記述了新的活性成分月見草鞣質C。奸子花(,o咖niz'ayh^'cosaKurz)(syn.W/ZoWZm"(iaSalisb.)屬于千屈菜科。頻繁用于該植物的英文名稱是FireFlameBush(火焰灌木)和Shimnjitea。由于其廣泛的傳統(tǒng)應用，地方和傳統(tǒng)的名稱數不勝數，特別是在印度。在印度，一些眾所周知的名稱有Z)/2ato"、"aW、/wgf、/7"otw7'、P/wAy""/、Z)/^vA等[6，7]。才直物蝦子花在印度各地大量存在，上升至高達約1500米的海拔。植物蝦子花也存在于東南亞和遠東亞的大部分國家，如馬來西亞、印度尼西亞、斯里蘭卡、中國、曰本和巴基斯坦以及熱帶非洲[8]。在整個印度和不同的東南亞國家，這種才直物長久以來已在傳統(tǒng)醫(yī)學的醫(yī)師中有經常需求。在印度，該植物在阿育吠陀(Ayurvedic)和尤那尼(Unani)醫(yī)學體系中是廣泛使用的藥物植物[8-13]。雖然這種植物的所有部分均具有有價值的藥用性能，但是對花有大量的需求，其在國內和國際市場都專門用于草藥的制備[14]。根據印度的醫(yī)學體系，這種花是刺鼻的、辛辣的、涼性的、有毒的、alexiteric、子宮鎮(zhèn)靜的和驅蟲的，用于口渴、痢疾、麻瘋病、丹毒、血液疾病、白帶、月經過多和牙痛[8-19]。許多已上市的藥物包含該植物的花和其它部分[ll，16-18]。該花用于制備被稱為'^^to，s和'Asava，s的阿育吠陀發(fā)酵藥物[9，19],并且在印度次大陸和其它南非國家非常受歡迎[20,21]。這些花能夠進行酒精發(fā)酵，如通常通過使用純酵母培養(yǎng)實現的那樣[9,19]。印度尼西亞和馬來西亞的流4亍的天然藥物(被稱為'5Wowaya，或'5Wawa戸/z，)主要包含蝦子花的干燥花[22]。該植物也是用來使不孕婦女懷孕的藥劑的成分[22，23]。蝦子花的花的系統(tǒng)的植物化學研究表明，在水和醇提取物中特征性地存在約22%的鞣質和皂苷類[6]。據報道，在低極性溶劑提取物中，除類固醇和類固醇類分子、生物堿和黃酮之外，還存在三萜系化合物[6,7，24,25]。描述了存在槲皮素-3-鼠李糖苷、2-羥基-l:4-萘醌、多酚類和痕量的生物石成[24-29]。鞣花酸作為主要的多酚從花和葉中分離[30]。所分離的其它多酚包括蓼屬苷、楊梅黃酮-3-半乳糖苷和天竺葵色素-3,5-二葡糖苷，最后一種是賦予花漂亮顏色的猩紅色素[30]。到目前為止已經分離出一系列大環(huán)的可水解鞣質-單體的、二聚的以及三聚的-并且通過光譜和化學證據闡明了它們的結構[31-34]?；谠撝参锛捌洳糠值膫鹘y(tǒng)療法的系統(tǒng)藥理學和生物化學研究證實了許多早期的經驗觀察。傳統(tǒng)上，被稱為'Jn、/2to，s的發(fā)酵的阿育吠陀藥物在東南亞國家非常流行。它們被用來治療各種各樣的疾病。在許多MnWto，s的制備中，蝦子花的干燥花被用來促進蔗糖水解[35]。證實了包含蝦子花的花的阿育吠陀藥物'iWw^a^^/zto，的免疫調節(jié)活性。觀察到了對人補體活性和由酶原刺激的人多形核白細胞產生的化學發(fā)光的抑制的明顯增加。這樣的增加的生物活性歸因于從蝦子花的花中釋放出的免疫活性組分[36]。'Aava，和'^^/to，組的藥物是被稱為'Sa/anWto，的阿育吠陀藥物，包含作為主要組分之一的蝦子花的花，并用于治療灼熱感G4gm'mfl"辦a)、虛弱(DflM^a(ya)和風濕性疾病(^toj'a[37]。這種廣泛用于治療風濕病的多成分的阿育吠陀藥物在大白鼠中對由小棉球誘導的肉芽腫已顯示出抗炎活性。與參考抗炎藥物保泰松相比，這樣的阿育吠陀制劑顯著降低了標志酶如酸性磷酸酶、GPT(谷丙轉氨酶)和GOT(谷草轉氨酶)的活性[38]?；ǖ乃嵛锉挥涗洖樵诎讕Ш驮陆涍^多時有效的子宮鎮(zhèn)靜劑[6，39]。研究表明包含蝦子花的阿育吠陀制劑的抗白帶(leucorrhoeic)特性對功能障礙性子宮出血有效[40]。最近，基于從蝦子花的花和葉中分離的一些復雜大分子的臨床前觀察結果的新生物學正變得越來越可獲得。從葉的曱醇提取物中分離出的大環(huán)二聚可水解鞣質壞子花鞣質C[33],對體外DNA拓樸異構酶II和體內抗肺瘤活性顯示出顯著的抑制作用[41]。在人癌細胞系和肉瘤180荷瘤ICR小鼠中評價了蟲下子花鞣質C和月見草鞣質B的抗腫瘤活性[42]。大環(huán)鞣花鞣質在體內和體外抑制了肉瘤-180腫瘤細胞的生存能力。細胞培養(yǎng)中的細胞毒性作用被證明是選擇性的，并可能通過宿主免疫防御體系來表達，如NK細胞的激活作用和/或白細胞介素分泌的增加[42，43]。最近，奸子花鞣質I已經顯示出誘導人慢性骨髓性白血病(CML)K562細胞的細胞凋亡。蟲下子花鞣質I抑制了這些CML細胞的增殖并i秀導了這些CML細胞的細胞凋亡，如通過細胞形態(tài)學、核小體間DNA碎裂和磷脂酰絲氨酸的分泌所判斷的那樣。從蝦子花以及其它藥用植物中分離的幾種天然存在的多酚類化合物，包括黃酮、蒽醌和某些大環(huán)鞣花鞣質，抑制了LPS誘導型iNOS和COX-2基因的表達，暗示出它們在抗炎治療中的推定作用[44,45]。已經乂>開了描述來自植物提取物如補骨脂(Aora/aecoo;/《/b"a)[46]、五加科人參屬CP朋axgem^)[47]或多草藥制劑[48,49]的抗?jié)儎┑陌l(fā)明的專利。植物蝦子花在各種傳統(tǒng)醫(yī)學體系中的應用，以及包含在其中的若干成分的作用，如上所述，引起了一些涉及婦科疾病和雄激素過多癥[50,51]或支氣管哮喘[52]的治療的專利。包含蝦子花植物提取物的皮膚美白化妝品已經在日本專利中公開[53]。PUD是特殊的病理狀態(tài)，其中酸HC1和病菌幽門螺桿菌^皮/H人為胃十二指腸潰瘍發(fā)病機制的兩種主要病因。由于目前的醫(yī)學治療在使用適當的四聯(lián)療法(曱紅霉素、阿莫西林、質子泵抑制劑或H2受體阻斷劑和硫糖鋁)后在復發(fā)和抗生素抗性方面的失敗，需要無毒并且有效的天然藥劑來同時治療胃和十二指腸潰瘍。
發(fā)明內容因此，本發(fā)明竭力開發(fā)出藥物組合物，其包含治療有效量的通過生物測定引導的分級分離技術從植物蟲下子花的花的水-曱醇(50%)提取物中分離的化合物月見草鞣質C,所述月見草鞣質C將有效地治療以酸HC1和病菌幽門螺桿菌為兩種主要病理學原因的消化性潰瘍病。發(fā)明目的本發(fā)明的主要目的在于提供用于治療消化性潰瘍病的藥物組合物。本發(fā)明的另一目的在于提供使用所述藥物組合物在個體中治療消化性潰癡病的方法。另外，本發(fā)明的另一目的在于提供化合物月見草鞣質c在治療包括胃潰瘍、十二指腸潰瘍和胃炎、胃食管反流病(GERD)的消化性潰瘍病中的用途。本發(fā)明的另一目的在于提供用于治療各種與消化性潰瘍相關的各種疾病的安全的化合物月見草糅質C，所述消化性潰瘍包括胃潰瘍、十二指腸潰瘍和胃炎、胃食管反流病(GERD)。發(fā)明概述因此，本發(fā)明涉及藥物組合物，其包含治療有效量的化合物月見草鞣質C和任選地一種或多種藥物可接受的載體、添加劑、潤滑劑和稀釋劑，所述化合物月見草鞣質C從植物壞子花的生物活性部分中獲得。此外，本發(fā)明還提供使用所述藥物組合物在個體中治療消化性潰瘍病的方法。本發(fā)明還涉及月見草鞣質c在治療消化性潰瘍相關疾病中的用途和分離所述化合物的方法。在本發(fā)明的一實施方案中，用于治療消化性潰瘍病的藥物組合物，其中所述藥物組合物包含治療有效量的化合物月見草鞣質c，或任選地和一種或多種藥物可接受的載體、添加劑、潤滑劑和稀釋劑。在本發(fā)明的另一實施方案中，用于治療消化性潰瘍病的藥物組合物，包含從植物蟲下子花的生物活性部分中獲得的化合物月見草鞣質c。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物含有的載體選自蛋白、碳水化合物、糖、硬脂酸鎂、纖維素、碳酸鈣、淀粉-明膠糊或藥物可接受的載體、賦形劑、稀釋劑或溶劑。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C以0.005mg/Kg體重/天至0.5mg/Kg體重/天的劑量給予。在本發(fā)明的一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C優(yōu)選以至少0.05mg/Kg體重/天的劑量給予。在本發(fā)明的另一實施例中，藥物組合物，其中單劑量水平達到250mg/Kg體重時，化合物月見草鞣質C沒有顯示任何毒性作用。在本發(fā)明的另一實施方案中，所述組合物所用的給藥途徑選自口腔、肌內或靜脈內。在本發(fā)明的另一實施方案中，使用所述組合物的劑型選自散劑、注射劑、糖漿劑、膠嚢劑或片劑。在本發(fā)明的一實施方案中，所述組合物用于治療的消化性潰瘍病選自胃潰瘍、十二指腸潰瘍或胃炎、胃食管反流病(GERD)。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C在抗胃質子泵和抗幽門螺桿菌活性方面具有雙重功能。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C在0.13(iM至1.3pM的濃度范圍內體外抑制胃質子泵活性，其中ICso值為0.6iaM至0.8nM。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C對幽門螺桿菌的臨床和標準菌抹顯示抑菌和殺菌活性。在本發(fā)明的一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C對幽門螺桿菌顯示抑菌活性，最低抑制濃度(MIC)范圍為6.25嗎/mL至25.0嗎/mL。在本發(fā)明的另一實施方案中，藥物組合物，其中化合物月見草鞣質C對幽門螺桿菌顯示殺菌活性，最低殺菌濃度(MBC)范圍為25.0|ig/mL至50.0嗎/mL。在本發(fā)明的另一實施方案中，化合物月見草鞣質C僅特異性抑制幽門螺桿菌，而不抑制其它需氧細菌，以對革蘭陽性和革蘭陰性菌具有較高的MIC值來證明(〉400嗎/mL)。圖表簡述圖1(a)表示從植物蟲下子花中獲得的生物活性部分的HPLC圖譜。圖1(b)表示從植物蝦子花的生物活性部分中獲得的沒食子酸曱酯的HPLC圖譜。該圖示出與最初的生物活性部分中的主峰之一對應的單峰。圖1(C)表示從植物蟲下子花的生物活性部分中獲得的化合物月見草鞣質C的HPLC圖譜。該圖示出與最初的生物活性部分中的主峰之一對應的單峰。生物活性部分中的月見草鞣質c的相對豐度(產量％)被測定為0.008%。圖2表示化合物月見草鞣質C的質子NMR圖譜。圖3表示化合物月見草鞣質C的13CNMR圖譜。圖4表示化合物月見草鞣質C的質譜圖。從ESI-MS譜推斷，其分子量為784(準分子離子峰為m/z807)。對]H、"C和2D-NMR譜的詳細分析表明，所分離的化合物是作為異頭混合物存在的酚苷(a和b)。文獻研究顯示出兩種密切相關的結構來自于月見草(OewoAeraeo^mse;a/a)的月見草鞣質C[54,55]和來自于柳葉菜(五j^7o6^m/z^M^m)的月見草鞣質C的同分異構體[56]。特別地，2D-NMR研究證實了前者的可能性。發(fā)現月見草鞣質C的[a]D為+68°(文獻值為+72°)。月見草鞣質C的系統(tǒng)化學命名為D-葡萄糖2-[2-[(5,10-二氫-3，7,8-三羥基-5，10-二氧代[l]苯并吡喃[5,4,3-ccfe][l]苯并吡喃-2-基)氧]-3，4，5-三羥基苯曱酸酯]-3-(3,4,5-三羥基苯曱酸西旨)。[54-58]中描述了各種大環(huán)鞣花鞣質如蟲下子花鞣質和月見草鞣質的結構說明。圖5表示化合物沒食子酸曱酯的質子NMR圖譜。圖6表示化合物沒食子酸曱酯的質譜圖。圖7表示化合物月見草鞣質C和沒食子酸曱酯的化學結構。表1示出月見草鞣質C的抗胃質子泵活性。表2示出月見草鞣質C和曱紅霉素的抗幽門螺桿菌活性。表3示出月見草鞣質C、曱紅霉素、阿莫西林和曱硝唑在不同的幽門螺桿菌菌^^中的MIC和MBC值。發(fā)明詳述從可在印度次大陸大量獲得的植物蝦子花的花中已經分離出月見草鞣質C分子。通過在室溫下用1:1的曱醇-水浸泡過夜來提取蝦子花的干燥花。重復該過程三次。在旋轉蒸發(fā)器中于45。C下使合并后的提取物蒸發(fā)，得到粗提物。使粗提物在正丁醇和水之間分開。將各層于45。C下分別濃縮，獲得兩部分。按照生物測定引導的分級分離技術用diaionHP-20和sephadexLH-20柱重復地色譜分離正丁醇可溶部分以獲得純化的月見草鞣質C，其性質為灰白固體，無定形。其可溶于曱醇、丙酮和DMSO。在HPLC中，月見草鞣質C顯示出與粗提物中的主峰之一對應的單峰。粗提物的HPLC圖語如圖l(a)所示。圖1(c)示出所分離的單分子月見草鞣質C的HPLC圖語。圖2、3和4表示化合物月見草鞣質C的NMR圖i普和質i普圖。在通過色譜法的分級分離過程中，還分離出另一化合物沒食子酸曱酯。其結構通過iHNMR和ESI-質譜來闡明，然后通過與在實驗室中制備的標準樣品比較來證實。圖1(b)示出其HPLC圖譜。沒食子酸曱酯相對于生物活性部分的相對豐度(收率百分數)被測定為0.003%。圖5和圖6分別表示化合物沒食子酸曱酯的NMR圖譜和質譜圖。然而，化合物沒食子酸曱酯在下述任何測試中都沒有顯示出任何活性。然而，沒食子酸曱酯會與月見草鞣質C一起在最終的藥物制劑中作為HPLC圖譜的兩種指紋成分，由此可以判斷生物活性部分的真實性。沒食子酸曱酯和月見草鞣質C兩種分子已經被確定描繪為由生物活性部分制成的藥物制劑的指紋成分。以下實施例以闡述本發(fā)明的方式給出，而不應該被解釋為限制本發(fā)明的范圍。實施例-1在#為、庠化合#力JS革潔jC浚分子月見草鞣質C和沒食子酸曱酯已經從植物蝦子花的花中分離。通過在室溫下用1:1的曱醇-水浸泡過夜來提取蝦子花的干燥花。重復該過程三次。在旋轉蒸發(fā)器中于45。C下使合并后的提取物蒸發(fā)，得到粗提物。使粗提物在正丁醇和水之間分開。將各層于45°C下分別蒸發(fā)，獲得兩部分。按照生物測定引導的分級分離技術用diaionHP-20和sephadexLH-20柱重復地色譜分離正丁醇可溶部分來獲得純化的月見草鞣質C，其性質為灰白固體，無定形(收率0.008%)。其可溶于曱醇、丙酮和DMSO。沒食子酸曱酯的相應的收率為0.003%。實施例-2^合#力^草模#(7付拔ff殺話遂；根據[59]制備頂端富集的豬胃膜和微管泡膜。這樣的膜具有能夠被奧美拉唑特異性阻斷的K+刺激的H+轉運三磷酸腺苷酶活性[60]。37°C下在含有2mMMgCl2、2mMATP、10mMPIPES(pH6.8)、10mMKCl和IO至12嗎膜蛋白的1-mL反應混合物中測定11+,:^+-三磷酸腺苷酶活性。在開始與ATP反應之前，將另外的完全測定混合物在存在和不存在不同濃度的月見草鞣質C或奧美拉唑的情況下預孵育10min。預孵育10min后，通過添加1mL冰凍的TCA(14%)終止反應。被稱為11+乂+-三磷酸腺苷酶的K+刺激的活性，通過Mg+加K+存在下的活性與Mg+單獨存在下的基本活性(Mg、三磷酸腺苷酶)的差異來計算。膜顯示出約40至501imolpi/mg/h的高K+刺激的活性，而僅約10(imolpi/mg/h的基本活性。按照酶測定方法[61]評價了月見草鞣質C的抑制活性。效果根據11+,1^-三磷酸腺苷酶的抑制百分數來定量，并與胃11+,1^+-三磷酸腺苷酶的特異性抑制劑奧美拉唑的效果進行比較。月見草鞣質C分子顯示出對胃質子泵活性的極強抑制。在1.3jiM下，在相同的實一驗條件下進^f亍比較時，月見草鞣質C對約70-90°/0的11+，1^+-三磷酸腺苷酶產生抑制(表1)，高于標準藥物奧美拉唑(在3pM下抑制約20%)。因此，月見草鞣質C對胃質子泵的抑制程度(在0.13pM至1.30(iM下為20%至卯％)與標準藥物奧美拉唑(在3至30|iM下抑制10%至卯％)相比，約高20倍。表l:月見草鞣質C的抗胃質子泵活性<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實施例-3必合參力^革薦產CW戎幽/7螺，并蘿活遂,月見草鞣質C抗幽門螺桿菌活性的作用采用圓片擴散敏感性測定并通過用微量肉湯稀釋法測定MIC/MBC值來確定。在適當的條件下(C0210%、025%、N285%和相對濕度大于95%)，將六種不同的幽門螺桿菌菌抹維持于37°C的培養(yǎng)箱中，其中兩種是臨床菌林[80A(無致病力)和121A(有致病力)]，四種是標準菌抹[ATCC43504、ATCC49503、NCTC26695和ATCC43629]。將月見草鞣質C分子溶解于DMSO中。對于圓片擴散敏感性試驗[62],培養(yǎng)板用添加10%的胎牛血清(FCS)、Isovitalex(0.5。/。)和Dent(0.0025。/。)的腦心浸液瓊脂制成。板中注滿lxl06CFU/mL的幽門螺桿菌的液態(tài)培養(yǎng)物，將圓片放置于板上，在5iiL/圓片或10iiL/圓片的劑量下使樣品直接在圓片上浸透以便得到100(ig/圓片和200pg/圓片。孵育3天后，測量抑菌圈的直徑，并與標準抗生素曱紅霉素的抑菌圈進行比較。在測試6種不同的幽門螺桿菌菌抹時，月見草鞣質C分子在100(ig/圓片至200(ig/圓片的劑量下產生1.7cm至2.5cm的抑菌圈直徑。在相似的實驗條件下測定標準抗生素曱紅霉素的活性(表2)。表2:月見草鞣質C和曱紅霉素的抗幽門螺桿菌活性<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>對于曱紅霉素，括弧中的值表示使用各個菌抹的濃度。對于通過微量肉湯稀釋法來測定MIC和MBC值[63],在含有總體積100(iL的添加5%FCS的布魯氏肉湯的96-孔微量滴定板中制備月見草鞣質C的兩倍連續(xù)稀釋液(l|ag/mL至50(ig/mL)。在布魯氏肉湯中將幽門螺桿菌的3天的液態(tài)培養(yǎng)物稀釋10倍，并將100的這些培養(yǎng)物接種到各個孔中以得到約io6CFU/mL的終濃度。在微需氧性空氣中于37。C將該板孵育3天。孵育后，對板進行目檢，顯示出完全抑制生長的最低濃度被記為各個化合物的MIC。對于MBC測定，從上述的微量滴定板中取出沒有檢測到生長的72-h培養(yǎng)物的等分部分(10pL)，并且用于在新鮮的腦心浸液瓊脂板上劃線。于37。C進一步培養(yǎng)72小時后，通過對這些板進行目4全來測定MBC,將沒有出現生長的點(小于10個菌落)看作MBC。納入標準抗生素曱紅霉素、阿莫西林和曱硝唑，用來與使用不同幽門螺桿菌菌林的月見草鞣質C進行比較。通過微量肉湯稀釋法測定月見草鞣質C分子對五種菌抹的MIC和MBCM直。對于菌才朱80A、ATCC43504、ATCC49503、NCTC26695和ATCC43629,觀測到的MIC值分別為25、25、6.25、12.5和25(ig/mL(表3)。在相同實驗條件下，曱紅霉素對各個菌抹的MIC值為20、25、6.25、62.5和50ng/mL。同樣，觀測到使用這些菌林的阿莫西林的MIC值分別為20、25、12.5、100和25ng/mL。基于對不同菌林的MIC值，與曱紅霉素和阿莫西林兩者相比，月見草鞣質C分子的效力約低500-1000倍。然而，對于曱硝唑的MIC值(12.5、50、1.56、1.56和1.56|ig/mL)，月見草鞣質C的效力僅低約2-20倍，如在五種這樣的菌林中觀察到的那樣。在殺菌活性的量度MBC值方面，本發(fā)明人注意到月見草鞣質C同三種標準抗生素的效力相比趨勢相似。表3:月見草鞣質C、曱紅霉素、阿莫西林和曱硝唑在不同幽門螺桿菌菌林中的MIC和MBC值。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>總之，月見草鞣質C分子對臨床的和標準的不同菌抹的效力是明顯的。另外，由于某些菌林產生毒素(cag-A、vac-A，細胞毒素陽性)，期望該分子在致病條件下對這樣的菌林具有效力。另外，基本上按照NCCLS(國家臨床試驗標準委員會)的指導原則，在水解酪蛋白胨肉湯中，采用微量肉湯稀釋法測定了月見草鞣質C對四種需氧細菌(1種革蘭陽性(蠟狀芽孢桿菌(及cere^))和3種革蘭陰性(傷寒沙門菌(S.^p/n')、大腸桿菌(Eco/0和肺炎克雷伯菌(《./"ewmom'fle)))的抗菌活性[64]。月見草鞣質C分子沒有對任何細菌菌林顯示出活性(MI0400嗎/mL)。因此該化合物對幽門螺桿菌是特異性的。實施例-4^合參刀^革模產C^#遂#斧；檢測化合物月見草鞣質C對瑞士小白鼠的致死率。通過口腔途徑將250mg/Kg體重的最大劑量的化合物月見草鞣質C給予5只瑞士小白鼠。24小時后，沒有看到任何小鼠死亡。此外，將小鼠保持監(jiān)視15天，在此期間發(fā)現它們仍然健康，并且沒有觀察到行為異常。有益效果1化合物月見草鞣質C對胃質子泵的抑制作用比標準藥物奧美拉唑強很多(約20倍)。2本發(fā)明還提供了相同的月見草鞣質C分子對幽門螺桿菌的臨床菌林和不同的標準菌林的適當低的MIC值(6.25jig/mL至25.0(ig/mL)。3從月見草鞣質C分子對需氧細菌組的高MIC值(〉400嗎/mL)來看，其明顯具有特異性的抗幽門螺桿菌活性，暗示其作為有效的治療劑的潛力。4由于酸HC1和病菌幽門螺桿菌是胃十二指腸潰瘍發(fā)病的兩種主要原因，作為單分子抗胃十二指腸潰瘍藥物，月見草鞣質C的地位是獨一無二的。這更多地是因為目前的醫(yī)學治療即使是使用三聯(lián)療法和四聯(lián)療法(曱紅霉素、阿莫西林、質子泵抑制劑、H2受體阻斷劑、^琉糖鋁-根據診斷和其它標準的任何3種或4種)后在復發(fā)和抗生素抗性方面的失敗。參考文獻Rogers,A.I.1990.PostgradMed.88，57-60.LeeA.1996.In7/e//coZ)ac/er;y/on':TechniquesforClinicalDiagnosis&BasicResearch(幽門螺桿菌臨床診斷與基礎研究技術)(Eds.AdrianLee&FrancisMegraud)，WBSaundersCo.Ltd,,London,pp.xiii-xiv.Hoogerwerf,W.A.andPasricha，PJ.InGoodman&Gilman，sPharmacologicalBasisofTherapeutics(Goodman與Gilman的治療學的藥理學基礎)(Eds.Hardman，J.G.&Limbird,L.E.)McGraw-Hill2001,pp1005-1020.Bullard,W.PepticUlcerDiseases(消化性潰病病)，USNationalCommunityPharmacistsAssociation,June1997.Das，P.K.,Sahu,N.P.,Banerjee,S.,Sett,S.,Goswami，S.,Bhattacharya，S"2003.PCT(WO03/080095「PCT/IN/03/00671)&美國專利申請20060040005.Shome,U.,Mehrotra,S.，Sharma,H,P.,1981.ProceedingsofIndianAcademyofSciences(PlantScience)90,335-351.Khare，C.R，2004.EncyclopediaofIndianMedicinalPlants:RationalWesternTherapy,AyurvedicandOtherTraditionalUsage,Botany(印度藥用植物百科全書合理的西方療法，阿育吠陀及其它傳統(tǒng)用法，植物學).Springer,Berlin,pp.483-484.Kirtikar,K.R.,Basu,B.D.，1935.IndianMedicinalPlants(印度藥用植物).Parts1-3,L.M.Basu，Allahabad,India.CentralCouncilforResearchinIndianMedicineandHomeopathy.(1978)T/a"(io/Do騰WcMe血/"eawc/Com附o"4>wveAc7eweA^(家庭醫(yī)療和普通印度草藥治療手冊)，MinistryofHealthandFamilyWelfare,NewDelhi,pp.334-35.Krish腿，RN.,Seeni,S.,1994.PlantCellReports14,55-58.Chopra,R.N.,Nayar，S丄.，Chopra,I.C.,1956.GlossaryofIndianMedicinalPlants(印度藥用植物辭典)(CSIR，Delhi,India).[12]Watt,G.，1972.ADictionaryofEconomicProductsofIndiaIII(印度經濟產品詞典III).(PeriodicalExpert,Shahdara,Delhi,India).Dymock，W.,Warden,C丄H.,Hooper,D.,(1995).AHistoryofthePrincipalDrugsofVegetableOriginmetwithinBritishIndiaRepublic(英屬印度共和國出現的才直物來源的首選藥物歷史).PharmacographiaIndica.Vol.I(VivekVlhar，Delhi,India).Oudhia,P"2003.InteractionwiththeherbcollectorsofGandairegion(與Gandai地區(qū)藥農的相互作用)，Chhatisgarh，M.P.India,www.botanical.com.Sharma,P.V.，1956.DravyagunVigyan(Varanasi:TheChowkhamba).Dutt，U.C.，1922.TheMateriaMedicaoftheHindus(印度人的藥材).AdiAyurvedaMachinePress,Kolkata，India.Nadkarni,K.M.，1954.IndianMateriaMedicavol.2，3rdEdin.PopularBookDepot(流行書庫)，Mumbai,India,pp.489-497.Ahuja,B.S.，1965.MedicinalPlantsofSaharanpur(薩哈蘭普爾的藥用才直物).GumkulKangriPrintingPress,Hardwar，India.Atal,C.K.，Bhatia，A.K.,Singh，R.P"1982.JournalofResearchinAyurvedaandSiddhaIII((3&4),193-199.Jayaweera,D.M.A.,1981.MedicinalPlantsusedinCeylonPartIII(錫蘭使用的藥用植物第三部分)(TheNationalScienceCouncilofSriLanka，Colombo)p.289.Weersaooiya,M.K.B.,Yatawara，H.P.，2002.IndianJournalofBiochemistryandBiophysics39,347-350.Burkill，I.H.,1966.ADictionaryofEconomicProductsoftheMalayPeninsula(馬來亞半島經濟產物詞典)，(MinistryofAgricultureandCo-operatives,Kualalampur)p.2305.Dey，K丄.，1984.TheIndigenousDrugsofIndia(印度本土藥斗勿).InternationalBookDistributors,Dehradun，India,p.311.Deshmukh，V.K.，Pandit,U.，1967.IndianJournalofPharmacy29,341.Chauhan，J.S.,Srivastava,S.K.，Srivastava,S.D.,1979.PlantaMedica36，183-184.P6jDan，S.，Dan，S.S.，1984.JournaloftheIndianChemicalSociety61,726-727.Kalidhar，S.B.，Parthasarathy，M.R.,Sharma，P.,1981.IndianJournalofChemistry20B,720-721.Dastur，J.F.,1951.MedicinalPlantsofIndiaandPakistan(印度和巴基斯坦的藥用才直物)，TaraporevalaSons&Co.Ltd.,Mumbai,India.Saoji,A.G.,Saoji,A.N.,Deshmukh,V.K.,1972.CurrentScience41，192.Nair，A.G.R.,Kotiyal,J.P.,Ramesh，P.，Subramanian，S.S.，1976.IndianJournalofPharmacy38,110-111.Yoshida，T.,Chou，T.，Haba，K.,OkanosY.，Shingu，T.,Miyamoto,K.,Koshiura，R.，Okuda，T.,1989.ChemicalandPharmaceuticalBulletin37，3174-3176.Yoshida,T.,Chou,T.，Nitta，A.,Miyamoto,K.，Koshiura,R.,Okuda,T.，1990.ChemicalandPharmaceuticalBulletin38，1211-1217.Kadota,S.，Takamori,Y.,Nyein，K.N.,Kikuchi，T,Tanaka,K.，Ekimoto,H.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