專利名稱：評估患消化性潰瘍的危險度的方法,包括定量測定血清樣品中胃蛋白酶原i(pgi)和胃泌 ...的制作方法
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本發(fā)明涉及一種通過確定個體中胃炎的存在及其局部解剖表型來評價該個體患消化性潰瘍的危險度的方法。
慢性胃炎是一種非常常見的疾病。據評估全世界的人幾乎一半在其一生中的某個(些)階段患有胃炎。慢性胃炎最常見由幽門螺桿菌(Helicobacterpylori)感染引起，而且認為大多數(shù)病歷是因為抗這種細菌的免疫反應造成了慢性胃炎[1-6]。
慢性胃炎是一種由唯一的細菌感染引起的疾病，具有慢性和終身患病的特征。胃炎的自發(fā)治愈，胃竇和胃體粘膜的正常化，是很罕見的。慢性胃炎的自然進程通常是從炎癥到萎縮的一系列改變，其中萎縮明顯改變胃粘膜的結構和功能。慢性胃炎的后果表現(xiàn)為幾種重要的功能障礙，這些功能障礙看起來顯示與特異性改變有關并與胃炎進程中某些特定的狀態(tài)有關。
細菌感染導致胃粘膜的由免疫活性淋巴細胞和漿細胞，通常為粒細胞組成的單純炎癥[7-11]。對兒童和青年人群的研究提示慢性炎癥是早期胃炎的優(yōu)勢初始表型。對于年齡較大的人群，萎縮和粘膜下腸化生是普遍的現(xiàn)象，并隨著年齡的增長而增加[12-18]。
研究表明從慢性胃炎到萎縮是一個緩慢的過程。胃炎以及隨后的萎縮是胃粘膜的幾種功能和穩(wěn)態(tài)受損的重要原因。萎縮導致隨著萎縮的進展體部和竇部粘膜的酸、胃蛋白酶原和胃泌素的分泌故障(正常胃粘膜腺體損失)。
幽門螺桿菌感染和胃炎都是消化性潰瘍(包括十二指腸和胃潰瘍)重要的危險因子。胃炎能發(fā)展為十二指腸潰瘍和胃潰瘍，這提示幽門螺桿菌感染，胃炎及潰瘍形成之間的因果關系[19，20]。胃竇炎(炎癥僅局限于胃竇)或全胃炎(胃竇和胃體都有炎癥)使患十二指腸潰瘍的危險性增加約十倍[19]。胃竇炎或全胃炎同時伴有胃竇萎縮時與具有正常胃的人相比可能增加患胃潰瘍的危險度，尤其從積累和相關的角度說，可使該危險度增加幾十倍[21，22]。
胃炎也可能降低潰瘍發(fā)生的危險性，尤其是當胃炎發(fā)生在胃體并且進展為明顯的萎縮時。與胃竇損傷的有無和程度無關，消化性潰瘍發(fā)生的危險度降低到甚至比有一個正常的胃的人群更低的水平。
總的來說，患消化性潰瘍的危險度隨著胃竇損傷(胃炎和萎縮)程度的增加呈指數(shù)增加，但是隨著胃體損傷程度的增加呈指數(shù)下降。
源自人胃粘膜的胃蛋白酶原經電泳可以區(qū)分出7種表型。其中五種遷移速度最快的組成免疫學特性一致的胃蛋白酶原I組，其余的兩種形成胃蛋白酶原II組。I組的胃蛋白酶原僅由胃體部的主要細胞和分泌細胞合成。相對的，全胃的腺體都能合成I組I的胃蛋白酶原，某種程度上十二指腸上部的Brunner氏腺體也能合成。健康人血清中胃蛋白酶原I濃度大約是胃蛋白酶原II濃度的6倍。胃體部萎縮性胃炎的血清胃蛋白酶原I濃度下降，而血清胃蛋白酶原II濃度保持原有水平。因此，血清中胃蛋白酶原I濃度很好地反應了胃體部胃蛋白酶原分泌細胞的數(shù)量和狀態(tài)。胃體部萎縮性胃炎越重，血清中胃蛋白酶原I濃度越低。血清中低胃蛋白酶原I濃度可指示嚴重的萎縮性胃體炎，其靈敏度大于90％，特異性接近100％[23]。
胃泌素至少以三種形式在胃腸道中分泌，測定血清胃泌素(總血清胃泌素)便可檢測這三種胃泌素的免疫反應活性。胃泌素三種亞型分別被稱為極小胃泌素(G-14)，小胃泌素(G-17)，大胃泌素(G-34)。生理上最重要的是胃泌素-17和胃泌素-34。胃泌素-17促進鹽酸分泌的作用是胃泌素-34的6倍。分泌胃泌素的細胞被稱為G細胞，胃竇和十二指腸都有G細胞。最重要的胃泌素分泌加速劑是迷走神經的緊張和蛋白降解產物。pH值低于2.5減慢胃泌素的分泌。胃竇分泌的胃泌素90％以上是胃泌素-17，而十二指腸主要分泌胃泌素-34[24]。禁食時血清中主要為胃泌素-34，餐后血清中主要是胃泌素-17[25]。還用蛋白刺激試驗研究過胃泌素-17的分泌。在該試驗中，清晨采未進食時的血樣，病人進高蛋白飲食后，每隔15分鐘采血，共2小時。最大分泌量在進食后大約20分鐘時出現(xiàn)。
患萎縮性胃竇炎時竇部的粘膜萎縮并因此其胃泌素-17分泌下降，因而它在血清中的濃度也減少。因此血清胃泌素-17濃度的減少可以表明竇的萎縮和這個部位患癌癥的危險上升。竇部粘膜萎縮時，蛋白刺激試驗反應也下降，這種蛋白刺激試驗似乎比單純血清濃度測定更靈敏地反映萎縮。在WO 96/15456中介紹了一種通過測定胃的不同部位的萎縮來篩查癌癥危險度的方法。
因為慢性胃炎的高度流行，尤其是在老年人群中的流行，開發(fā)一種方法來評估慢性胃炎的存在及其局部解剖表型從而來評估患相關的消化性潰瘍的危險度是很重要的。尤其是開發(fā)一種以非侵入方式實施所述評估的方法較為有利，所述非侵入方式即無需在胃鏡診斷性檢查期間采集胃粘膜的活檢標本。開發(fā)一種不僅能評估患消化性潰瘍的危險度，還能區(qū)分患胃潰瘍和十二指腸潰瘍的危險度的差異的方法也是有利的。
本發(fā)明的方法能實現(xiàn)以上提及的目標。所述方法涉及評估個體患消化性潰瘍的危險度的方法，此方法包括以下步驟-定量確定該個體血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的濃度-選擇每種分析物的方法特異性參考值和閾值-將所測的胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度與它們各自的參考值和閾值比較，當血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于各自的參考值上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在其參考值范圍內或者小于其閾值時指示此個體患消化性潰瘍的危險度增加。
因此本發(fā)明包括一個步驟，此步驟將血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于分別的參考值上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在其參考值范圍內或者小于其閾值的個體鑒定為患消化性潰瘍的危險度增高，或有患消化性潰瘍的傾向。
根據發(fā)明的優(yōu)選實施方案，所述方法包括一個通過測定血清樣品中幽門螺桿菌(helicobacter pylori)抗體來診斷該個體還有幽門螺桿菌感染的方法。
根據本發(fā)明的方法因此對病人血清聯(lián)合應用兩種或優(yōu)選三種測定來篩查患消化性潰瘍的危險度，既血清胃蛋白酶原I(PGI)的測定，胃泌素-17的測定和任選幽門螺桿菌抗體的測定。
測定PGI，G-17和幽門螺桿菌抗體的不同方法是本領域技術人員熟知的，也有商品化的試劑盒。這些方法通常是免疫學方法，其利用所述分析物的單克隆或多克隆抗體來實施。用來檢測的方法包括，例如，測量吸收值，熒光或發(fā)光。也可同時進行這三種檢測，例如，在同一塊微滴板(microplate)上的不同孔中進行，這種聯(lián)合檢測體系為診斷提供了特別方便的方法。
本發(fā)明包括將所測的分析物濃度與該分析物的方法特異性閾值和參考值比較的步驟，對這些值的選擇是本領域技術人員熟知的，并且依賴于測定分析物濃度所用試驗方法的特異性和靈敏度，例如見William J Marshall，臨床化學，第三版，1995，Mosby。
有許多商品化的試劑盒可以用來測定幽門螺桿菌抗體(例如羅氏(Roche)公司的Orion Pyloriset EIA-G，Pyloriset EIA-A，EIA2G，WhittakerBioproducts公司的Pyloristat)?？乖梢杂糜拈T螺桿菌為材料通過不同的方法制備[26]，而且也有商品化產品。


圖1說明慢性胃炎的局部解剖表型和與胃病的相關危險度，和圖2說明SPGI，G-17和幽門螺桿菌感染的血清學檢測與慢性胃炎的局部解剖表型的關系。
本發(fā)明中，術語“局部解剖”或“局部解剖的”用來指胃炎在胃中的定位。無論在胃體還是在胃竇，表型區(qū)分為正常，胃炎(淺表型胃炎)和萎縮性胃炎，萎縮性胃炎又可根據嚴重程度依次分為輕度，中度和重度萎縮性胃炎。
如圖1所示，當胃體和胃竇粘膜的胃炎是淺表型胃炎或者輕度萎縮型胃炎(與胃健康的個體，圖中標記為“R”者相比)時胃潰瘍尤其是十二指腸潰瘍的患病率增高，患病危險度隨著胃竇部胃炎的嚴重程度的增加而增加。這種情況下血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都增加到高于它們的參考值，參考值的上限根據所用方法的特異性和靈敏度將PGI定為25-120μg/l胃泌素-17也高于其正常值或參考值，該參考值范圍是2-25pmol/l。幽門螺桿菌陽性的滴度閾值是200-500。
在胃體部正?；蛭阁w部胃炎是淺表型且胃竇部為中到重度萎縮型胃炎的情況下，患胃潰瘍(以及胃癌)的危險度增加，這種情況下，如上述，胃蛋白酶原I濃度也超過其參考值的上限，但是胃泌素-17的值在正常范圍內，在其較低的參考值處，或當嚴重萎縮時低于其閾值，該閾值根據所用方法的特異性和靈敏度定為0.1-2pmol/l。該方法還可與蛋白刺激試驗聯(lián)合使用，所述試驗是測量血清胃泌素17在基線狀態(tài)以及在蛋白刺激(如高蛋白標準餐)后的濃度。缺少對該試驗的反應說明有患胃潰瘍的危險。
從圖中還可以看出萎縮性胃體炎嚴重程度增加，且沒有或者只有淺表性胃竇炎時，血清胃蛋白酶原I濃度下降到低于閾值可指示患癌癥和惡性貧血的危險度增高，其中所述閾值根據所選方法的特異性和靈敏度為20-30μg/l。胃泌素-17濃度仍如上述高于它的參考值。
在胃竇和胃體的萎縮性胃炎嚴重程度都增加的情況下，血清胃蛋白酶原I濃度低于其閾值表明患癌癥的危險度增加，血清胃泌素-17在其參考值下限處，或者在其閾值以下，表明患癌癥的危險度增加。這些胃炎表型都與胃癌高風險度有關。
以上所說的用聯(lián)合的方法對胃不同部位的粘膜的胃炎表型的評價如表1所示。
表1血清胃蛋白酶原I和胃泌素-17聯(lián)合方法評價胃體或胃竇部粘膜的胃炎表型表1

表型1＝正常，2＝淺表型胃炎，3＝輕度，4＝中度，5＝重度萎縮性胃炎SPGI＝血清胃蛋白酶原ISG-17＝血清胃泌素-17參考文獻1. MARSHALL，BJ，WARREN JR胃炎和消化性潰瘍患者胃內未確定的彎曲狀桿菌。柳葉刀1984，i1311-1314。
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權利要求
1.評估個體患消化性潰瘍的危險度的方法，此方法包括以下步驟-定量確定所述個體的血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素-17的濃度-為每種分析物選擇方法特異性參考值和閾值-將所測的胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度與它們各自的方法特異性參考值和閾值比較，當血清中胃蛋白酶原I和胃泌素-17濃度都大于各自參考值的上限，或者血清胃蛋白酶原I濃度大于它的參考值上限且胃泌素-17濃度在參考值范圍內或者小于其閾值時，指示此個體患消化性潰瘍的危險度增加。
2.根據權利要求1的方法，其中在血清樣品中還測定幽門螺桿菌抗體。
3.根據權利要求1的方法，其中血清胃泌素-17濃度還用蛋白刺激試驗測定，在所述試驗中測量基線狀態(tài)下以及高蛋白標準餐后的所述濃度，缺乏應答則指示有胃潰瘍的危險。
4.根據權利要求1，2，或3的方法，其中胃蛋白酶原I和胃泌素-17利用塑料，玻璃，或纖維素支持物用免疫學方法測定。
5.根據權利要求4的方法，其中支持物是微滴板。
6.根據權利要求1到5中任何一項的方法，其中用基于測量吸收值，熒光或發(fā)光的方法來測定胃蛋白酶原I和胃泌素-17。
7.根據權利要求4到6中任何一項的方法，其中為了測定胃蛋白酶原I的濃度，使用抗胃蛋白酶原I的單克隆抗體或多克隆抗體。
8.根據權利要求4到7中任何一項的方法，其中為了測定胃泌素-17的濃度，使用抗胃泌素-17的單克隆抗體或多克隆抗體。
9.根據前述權利要求中任何一項的方法，其中胃蛋白酶原I，胃泌素-17和幽門螺桿菌測定方法與試劑盒方法相結合，其中用單克隆抗體和多克隆抗體以及基于吸收值，熒光或發(fā)光的檢測方法在微滴板上同時進行測定。
全文摘要
本發(fā)明關注一種通過確定個體中胃炎的存在及其局部解剖學表型而評價消化性潰瘍的方法,其中定量測定該個體血清樣品中胃蛋白酶原I和胃泌素－17濃度,選擇針對每種分析物的方法特異性參考值和閾值,根據所測胃蛋白酶原I和胃泌素－17濃度與它們各自的方法特異性參考值和閾值比較來評價胃炎的局部解剖特征和表型,將所評價的胃炎表型與消化性潰瘍的危險度相關聯(lián)。
文檔編號G01N33/577GK1355888SQ00808720
公開日2002年6月26日 申請日期2000年4月28日 優(yōu)先權日1999年4月30日
發(fā)明者彭蒂·西波南, 馬蒂·哈科南, 奧斯莫·斯沃瓦尼米, 埃里克·福斯布洛姆 申請人:拜奧希特公司