專利名稱：：抑制粘連的組合物和方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：無(wú)
背景技術(shù)：
：粘連為通常相互分離的組織、器官或其它解剖學(xué)結(jié)構(gòu)之間的連接。其通常是由疤痕樣組織的纖維帶構(gòu)成且一般是在諸如手術(shù)、損傷或感染等刺激后產(chǎn)生。由于手術(shù)后粘連必然伴有諸如腹部和盆腔痛、不孕和腸梗阻等嚴(yán)重并發(fā)癥，故其為常見(jiàn)且潛在地嚴(yán)重的事件。據(jù)估計(jì)，80%的腹部手術(shù)會(huì)引起粘連，致使人的身體和經(jīng)濟(jì)蒙受巨大損失。盆腔區(qū)手術(shù)后形成的粘連為引起手術(shù)后盆腔痛、不孕和小腸梗阻的主導(dǎo)原因。創(chuàng)傷和感染、尤其腹部或盆腔區(qū)域中的創(chuàng)傷和感染也會(huì)導(dǎo)致粘連。已至少在動(dòng)物模型中測(cè)試預(yù)防或治療粘連的多種藥理學(xué)和基于障壁的方法，并且數(shù)種基于障壁的方法已用于商業(yè)用途。這些方法包括諸如因特隙(TC7)可吸收粘連障壁(Interceed(TC7)AbsorbableAdhesionBarrier)(強(qiáng)生公司(Johnson&Johnson))禾口適福⑧膜(Seprafilmmembrane)(基因酶公司(GenzymeCorp.))的產(chǎn)品。許多現(xiàn)有的障壁裝置至少部分是由交聯(lián)多糖或糖胺聚糖構(gòu)成。將透明質(zhì)酸(HA)用作達(dá)成這些目的的材料已引起廣泛關(guān)注(伯恩斯(Burns)等人，通過(guò)用透明質(zhì)酸溶液預(yù)涂組織來(lái)預(yù)防組織損傷和術(shù)后粘連(Preventionoftissueinjuryandpostsurgicaladhesionsbyprecoatingtissueswithhyaluronicacidsolutions.),手術(shù)研究雜志(JournalofSurgicalResearch)1995;59:644-652;派克(Peck)等人，作為組織保護(hù)和障壁佐劑的聚合物;容夜和薄膜(Polymersolutionsandfilmsastissue-protectiveandbarrieradjuvants.),迪澤佳GS(diZeregaGS)編，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)紐約(NewYork):施普林格(Springer),2000.第499-520頁(yè)和羅杰斯(Rodgers)等人，兔腹膜手術(shù)后用透明質(zhì)酸再現(xiàn)粘連形成(Reproductionofadhesionformationwithhyaluronicacidafterperitonealsurgeryinrabbits.)生殖與避孕(Fw7^SVe〃7.)1997;67(3):553-558，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。HA是由(3-l，4連接D-葡糖醛酸(GlcUA)和(3-1,3N-乙?；?D-葡糖胺(GIcNAc)二糖單元構(gòu)成的線性多糖，并且為哺乳動(dòng)物細(xì)胞外基質(zhì)的常見(jiàn)組分。HA的天然形式為生物可相容、生物可降解且相對(duì)非免疫原性的。盡管其具有這些所需特性，但現(xiàn)有的用于抑制手術(shù)后粘連新生或復(fù)發(fā)的基于HA的方法具有明顯缺點(diǎn)。舉例來(lái)說(shuō)，當(dāng)以溶液形式應(yīng)用時(shí)，HA的效力因腹腔快速清除而受到損害(梭尼(Sawhney)等人，用于預(yù)防粘連的光聚合生物侵蝕水凝膠特性的優(yōu)化(Optimizationofphotopolymerizedbioerodiblehydrogelpropertiesforadhesionprevention.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(J.Biomed.Mater.Res.)1994;28:831-838，其以引用的方式并入本文中)。單獨(dú)或與其它材料組合的(例如)所制備出的薄片形式的HA固體調(diào)配物具有包括以下缺陷難以施用薄膜(例如，難以處理、千燥的薄膜粘附于手套上、柔韌性不足、需要去除)、與腹腔鏡程序不相容和低于所需功效。因此，所屬領(lǐng)域中需要抑制粘連的改進(jìn)組合物和方法。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明提供抑制粘連的組合物和方法。盡管所述組合物和方法可用于抑制體內(nèi)任何位置處粘連的形成、進(jìn)展或復(fù)發(fā)，但預(yù)期其將尤其適用于抑制腹膜粘連。本發(fā)明一個(gè)目的在于提供可用于抑制粘連發(fā)展、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)的適于在體內(nèi)原位聚合的多糖衍生物，例如HA、纖維素或葡聚糖衍生物。本發(fā)明另一目的在于提供抑制粘連形成、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)的方法，其是通過(guò)投與在施用于組織損害或損傷部位后迅速原位相互交聯(lián)從而形成抑制粘連形成、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)的水凝膠的多糖衍生物實(shí)現(xiàn)。本發(fā)明另一目的在于提供多糖衍生物和其組合，其將在有利于其原位施用的時(shí)間范圍內(nèi)迅速交聯(lián)和膠凝。本發(fā)明另一目的在于提供產(chǎn)生由交聯(lián)多糖所形成的水凝膠從而提供對(duì)諸如膠凝時(shí)間和半衰期等參數(shù)的控制的方法。本發(fā)明另一目的在于提供雜化多糖基水凝膠組合物，其中所述組合物視情況以持續(xù)的方式使生物活性劑(例如，治療劑)傳遞到體內(nèi)。在某些實(shí)施例中，生物活性劑為消炎劑，例如糖皮質(zhì)激素(例如，潑尼松(prednisone)、地塞米松(dexamethasone)、布地奈德(budesonide))和非甾體消炎劑(例如，布洛芬(ibuprofen)、阿司匹林(aspirin))。在某些實(shí)施例中，生物活性劑為纖維蛋白溶解劑，諸如纖溶酶原活化劑或鏈激酶?？梢暻闆r將這些藥劑并入聚合材料或基質(zhì)中以供所述藥劑的延長(zhǎng)或受控釋放。在某些實(shí)施例中，將所述藥劑與水凝膠或一種水凝膠前體直接連結(jié)。本發(fā)明另一目的在于提供水凝膠組合物，其含有視情況將生物活性劑傳遞到體內(nèi)的顆粒。一方面，本發(fā)明提供一種抑制粘連的方法，其包含以下步驟將第一水凝膠前體和第二水凝膠前體投與個(gè)體體內(nèi)位置處；其中所述第一和第二水凝膠前體在相互接觸后交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連。第一與第二水凝膠前體可以一種或多種溶液的形式提供。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，水凝膠前體為多糖衍生物。一方面，本發(fā)明提供一種抑制粘連的方法，其包含以下步驟將第一多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和將第二多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中在所述第一與第二多糖衍生物相互接觸后，所述多糖衍生物交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物包含第一官能團(tuán)且第二多糖衍生物包含第二官能團(tuán)，并且所述第一和第二官能團(tuán)在生理?xiàng)l件下相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，-一個(gè)官能團(tuán)為酰肼且一個(gè)官能團(tuán)為醛。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物為HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，一種多糖衍生物為HA衍生物且另一多糖衍生物為纖維素衍生物(例如，羧甲基纖維素(CMC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、甲基纖維素(MC))。在本發(fā)明某些其它實(shí)施例中，一種多糖衍生物為HA衍生物且另一多糖衍生物為葡聚糖衍生物。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明包含將包含第一多糖衍生物的溶液投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和將包含第二多糖衍生物的第二溶液投與所述個(gè)體體內(nèi)所述位置處。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種多糖衍生物包含非多糖部分。在其它實(shí)施例中，至少一種水凝膠前體為非多糖聚合物。另一方面，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的透明質(zhì)酸(HA)衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度大于5mg/ml。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的透明質(zhì)酸(HA)衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度大于10mg/ml。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的透明質(zhì)酸(HA)衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度大于15mg/ml。在另一實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的透明質(zhì)酸(HA)衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度大于25mg/ml。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，HA衍生物的濃度小于或等于100mg/ml。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，HA衍生物的濃度介于50mg/ml與75mg/ml之間。另一方面，本發(fā)明提供一種包含交聯(lián)HA衍生物的水凝膠，其中所述水凝膠在存在10U/ml透明質(zhì)酸酶的情況下具有至少IO天的半衰期。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種HA-纖維素、HA-葡聚糖或HA-其它多糖衍生物，其中所得水凝膠對(duì)透明質(zhì)酸酶不如相應(yīng)HA-HA水凝膠敏感。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的纖維素或葡聚糖衍生物的組合物，其中所述纖維素或葡聚糖衍生物的濃度大于5mg/ml、大于IOmg/ml、大于15mg/ml或大于25mg/ml。另一方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含第一多糖衍生物和多個(gè)顆粒。多糖衍生物可為HA衍生物、纖維素衍生物或葡聚糖衍生物。另一方面，本發(fā)明提供一種組合物，其包含第一和第二多糖衍生物，和多個(gè)顆粒。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一與第二多糖衍生物交聯(lián)形成水凝膠。所述顆粒可含有生物活性劑。在某些實(shí)施例中，生物活性劑為消炎劑(例如，地塞米松、潑尼松、布地奈德、布洛芬、阿司匹林等)。在其它實(shí)施例中，生物活性劑為纖維蛋白溶解劑(例如纖溶酶原活化劑、鏈激酶)。本發(fā)明另外提供一種抑制粘連的方法，其包含以下步驟將多個(gè)顆粒和至少一種多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處，其中單獨(dú)或與第二多糖衍生物組合的第一多糖衍生物在投與后交聯(lián)形成截留所述顆粒的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述方法包含投與第一和第二多糖衍生物，其中至少一種衍生物為HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種衍生物為纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種衍生物為葡聚糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種衍生物包含非多糖部分。本發(fā)明另外提供一種抑制粘連的方法，其包含以下步驟將包含第一多糖衍生物的第一溶液投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和將包含第二多糖衍生物的第二溶液投與所述位置，其中所述溶液中任一種或兩種包含多個(gè)顆粒，且其中所述多糖衍生物在投與后交聯(lián)形成截留顆粒的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液包含第一HA衍生物且第二溶液包含第二HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液包含HA衍生物且第二溶液包含纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液包含HA衍生物且第二溶液包含葡聚糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液包含HA衍生物且第二溶液包含另一多糖衍生物。另一方面，本發(fā)明提供一種將顆粒投與體內(nèi)位置的方法，其包含將包含顆粒和一種或多種水凝膠前體的組合物投與所述位置，其中所述一種或多種水凝膠前體形成將顆粒截留于其中的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種水凝膠前體為多糖衍生物。圖l.HAX凝膠的掃描電子顯微照相。比例尺=10pm。圖2.在存在HAX凝膠(20mg/ml)的情況下間皮細(xì)胞的活力。白色條和灰色條分別指示在普通培養(yǎng)基和含有10U/ml透明質(zhì)酸酶的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)胞。數(shù)據(jù)為中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)(n=4)。圖3.(A)施用于受損腹壁和盲腸上的HAX。箭頭指示粘附于施用部位的凝膠。(B)在經(jīng)HAX治療的動(dòng)物中未觀察到粘連。(C)在未經(jīng)治療的對(duì)照中觀察到3分的粘連。AW-腹壁。圖4.組織學(xué)檢査。(A)來(lái)自未經(jīng)治療動(dòng)物的粘連(5x)。箭頭指示受損肌細(xì)胞；(B)來(lái)自另一未經(jīng)治療動(dòng)物的粘連的特寫影像(10x)。注意指示發(fā)炎和纖維化的高細(xì)胞群帶。(C)來(lái)自經(jīng)20mg/mlHAX治療的動(dòng)物的無(wú)粘連腹壁(20x)。注意內(nèi)腔側(cè)上的藍(lán)色涂層。AW-腹壁肌肉，Sn^平滑肌。圖5.(A)在10U/ml透明質(zhì)酸酶中降解HAX凝膠期間釋放葡糖醛酸(n=5)。(B)在存在透明質(zhì)酸(HA)和其單體組分的情況下由間皮細(xì)胞產(chǎn)生tPA。圖6.HA-CH0的(A)濃度和(C)Mw對(duì)宏觀凝膠降解動(dòng)力學(xué)的影響。圖例指示HA-ADH或HA-CHO的Mw和濃度(mg/ml)。所指示的值為四個(gè)測(cè)量值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。圖7.(A)PLGA納米顆粒、(B)凍干HAX凝膠和(C)凍干雜化凝膠的SEM圖片。圖8.在存在雜化凝膠(20mg/mlHAX、PLGA納米顆粒)的情況下間皮細(xì)胞的活力。白色條和灰色條分別指示在普通培養(yǎng)基和含有10U/ml透明質(zhì)酸酶的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)的細(xì)胞。數(shù)據(jù)為中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)(n=4)。圖9.注射后2天或7天腹膜內(nèi)剩余的雜化凝膠(以箭頭指示)。(A)10mg/mlHAX+20mg/mlPLGA納米顆粒，(B和C)20mg/mlHAX+20mg/mlPLGA。(A)中的插圖展示與腹膜分離的雜化凝膠。B-腸，AW-腹壁。圖10.(A)施用于受損腹壁和盲腸上的雜化凝膠。箭頭指示粘附于施用部位的雜化凝膠。(B)在經(jīng)雜化凝膠治療的動(dòng)物中未觀察到粘連。AVv^腹壁。圖ll.組織學(xué)檢查。(A)從術(shù)后7天的兔回收的雜化凝膠(200x)。注意泡沫狀巨噬細(xì)胞。(B)與注射后7天小鼠(插圖)中所見(jiàn)凝膠殘余物類似的泡沫狀巨噬細(xì)胞的特寫影像(400x)。(C)來(lái)自經(jīng)雜化凝膠治療的兔的無(wú)粘連腹壁肌肉(200x);(D)在手術(shù)期間經(jīng)雜化凝膠覆蓋的腹壁肌肉表面的特寫影像(400x)。注意巨噬細(xì)胞的起泡度。AW=經(jīng)擦傷腹壁肌肉。圖12.展示各種合成多糖衍生物的化學(xué)結(jié)構(gòu)。(A)HA-ADH、(B)HA-ALD、(C)CMC-ALD(R=CH2COOH或H)、HPMC-ALD(R=CH2CH(OH)CH3或H)或MC-ALD12(R二CH3或H)。圖13繪示可用于投與含有可交聯(lián)多糖衍生物的溶液的裝置。圖14繪示可用于投與含有可交聯(lián)多糖衍生物的溶液的多通道裝置。圖15繪示可用于投與含有可交聯(lián)多糖衍生物的溶液的多管裝置。圖16為展現(xiàn)將HA衍生物與纖維素衍生物交聯(lián)所形成的多種水凝膠抑制粘連的能力的條形圖。圖17.在37'C下水凝膠于PBS中的10單位/ml透明質(zhì)酸酶中的降解動(dòng)力學(xué)。水凝膠的體積(％)為各吋間點(diǎn)時(shí)水凝膠的體積與初始體積的比率，以百分比表示。數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=4)。圖18.通過(guò)MTT分析所測(cè)量的醛聚合物(HA-CHO、CMC-CHO、MC-CHO和HPMC-CHO)對(duì)細(xì)胞活力的影響。(A)與聚合物一起培養(yǎng)3天后的間皮細(xì)胞。(B)與聚合物一起培養(yǎng)2天后的巨噬細(xì)胞(J774.A1細(xì)胞系)。數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=4)。圖19.注射水凝膠后1周小鼠的腹膜。(A)HAX:無(wú)殘余物。(B)HA-CMC:注意凝膠狀材料的薄涂層。(C)HA-MC:注意增加量的殘余材料，表明鑷子浸沒(méi)于其下。圖20.兔擦傷模型中腹膜粘連的預(yù)防。(A)粘連的誘發(fā)。注意腹壁缺損(箭頭)和盲腸的出血表面。(B)1周后在經(jīng)生理鹽水治療的動(dòng)物的剖面可見(jiàn)粘連。(C)l周后在經(jīng)HA-MC治療的動(dòng)物中無(wú)粘連。圖21.損傷后1周在兔側(cè)壁缺損的腸擦傷模型中回收的組織的顯微照片。(A)生理鹽水治療的動(dòng)物中擦傷的橫截面。盲腸腔(CE)在圖片的左上角。盲腸平滑肌5腹部肌肉組織(AM)的橫紋肌融合。放大100X。(B)從經(jīng)HA-MC治療的動(dòng)物回收的水凝膠，具有發(fā)炎細(xì)胞(主要為巨噬細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)。放大100X。(C)經(jīng)HA-MC治療的動(dòng)物中腹壁缺損的部位。所述缺損已再生上皮(箭頭)，具有愈合組織下層(主要為成纖維細(xì)胞)。放大400X。(D)正常的未經(jīng)治療的壁層腹膜。間皮(箭頭)位于結(jié)締組織(CT)和腹肌上。圖22.(A)DX、(B)DX-CHO、(C)CMDX、(D)CMDX-ADH、(E)CMC和(F)CMC-CHO的化學(xué)結(jié)構(gòu)。圖23.(A)DX、(B)CMD和(C)CMD-ADH的FT-IR光譜。圖24.37t:下水凝膠于PBS緩沖液中的膨脹體積。所測(cè)量的值為平均值士標(biāo)準(zhǔn)差(N=4)。圖25.水凝膠的膠凝時(shí)間。所測(cè)量的值為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(N=5)。圖26.37。C下水凝膠于PBS緩沖液中的膨脹體積。所測(cè)量的值為平均值±標(biāo)準(zhǔn)差(N=4)。圖27.37'C下浸沒(méi)于PBS緩沖液中后5天水凝膠的圖片。(A)70kDa-CMDX-DX(5%(w/v)/6%(w/v))。(B)70kDa-CMDX-CMC(5%(w/v)/6%(w/v))。圖28.通過(guò)MTT分析所測(cè)量的未經(jīng)修飾和合成聚合物(DX、CMC、CMDX-ADH、CMC-CHO禾卩DX-CHO)對(duì)細(xì)胞活力的影響。數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=4)。(A)與聚合物一起培養(yǎng)3天后的間皮細(xì)胞。CMC-CHO的資料描述于上述實(shí)例12中。(B)與聚合物一起培養(yǎng)2天后巨噬細(xì)胞細(xì)胞系J774.A1。圖29.注射70kDa-CMDX-DX后2周小鼠的腹膜。圖30.以兔擦傷模型進(jìn)行的粘連預(yù)防測(cè)試的腹膜。在粘連誘發(fā)手術(shù)后1周執(zhí)行剖腹術(shù)。(A-l、A-2)70kDa-CMDX-DX(2%(w/v)/5%(w/v))。CMDX-DX凝膠使腹膜粘連惡化。(B)70kDa-CMDX-CMC(5%(w/v)/6%(w/v));(C-l，C-2)500kDa-CMDX-CMC(4%(w/v)/6%(w/v))。CMDX-CMC凝膠減少腹膜粘連。對(duì)照實(shí)驗(yàn)的結(jié)果引用自前述研究。圖31.兔側(cè)壁缺損的腸擦傷模型實(shí)驗(yàn)的組織學(xué)圖片。(A)CMDX-DX凝膠粘在盲腸袋14上(5x)。(B)圖A的粘附表面的放大圖(40x)。(C)在CMDX-DX凝膠情況下回收的腹壁(5x)。(D)在500kDa-CMDX-CMC凝膠情況下的正常腹壁(5x)。圖32.合成含有地塞米松的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(HAX-DEX)的示意圖。最終的水凝膠是通過(guò)將醛衍生化透明質(zhì)酸與透明質(zhì)酸-肥酸二酰肼-琥珀酸地塞米松(劃陰影線的化合物)混合而形成。圖33.通過(guò)MTT分析所測(cè)定的與不同濃度合成聚合物一起培養(yǎng)的人類間皮細(xì)胞的活力。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。圖34.在釋放培養(yǎng)基中地塞米松濃度的時(shí)程。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。圖35.HAX和HAX-DEX的膨脹體積的時(shí)程。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。圖36.地塞米松對(duì)原代小鼠巨噬細(xì)胞的TNF-oi和IL-6的產(chǎn)生的影響。值為兩次測(cè)量的平均值。圖37.原代小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生IL-6的時(shí)程。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。圖38.原代小鼠巨噬細(xì)胞產(chǎn)生TNF-a的時(shí)程。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。圖39.注射后2天取出的水凝膠。(A)離體HAX-DEX水凝膠。(B)代表性蘇木素伊紅染色的HAX-DEX凝膠(上部)和下層肌肉(下部)樣本，20x。(C禾BD)HAX凝膠中和HAX凝膠周圍發(fā)炎性細(xì)胞的兩個(gè)樣本，分別為20x和40x。藍(lán)色相對(duì)均勻的物質(zhì)為凝膠(G)。14圖40.凍干布地奈德-HAX的掃描電子顯微照相。比例尺=100pm。圖41.37'C下布地奈德于生理鹽水中的溶解度。(A)相溶解度圖。(B)隨時(shí)間流逝布地奈德的濃度和沉淀質(zhì)量。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差(ti-4)。圖42.布地奈德-HAX中布地奈德的活體外釋放動(dòng)力學(xué)。數(shù)據(jù)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差(n=4)。圖43.(A)第二次剖腹術(shù)后的重量損失(表示為相對(duì)于起始體重的百分比)。(B)具有各種粘連得分的動(dòng)物的百分比。0分=無(wú)粘連；2分=通過(guò)鈍器解剖可分離的組織粘連；3分=需要利器解剖的粘連。(C)2分和3分粘連的面積總和(cm2)。重量損失與粘連面積都表示為中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)(n=6)。*表示與生理鹽水對(duì)照的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，且t和t表示所比較的各組之間的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。經(jīng)生理鹽水治療的對(duì)照和HAX組來(lái)自參考(ref)[tPA]。圖44.來(lái)自經(jīng)布地奈德-生理鹽水治療的動(dòng)物的組織和正常組織。(A)腹壁表面(200x);(B)盲腸表而(200x);和(C)盲腸表而(400x)。SK:腹壁骨骼肌；SM:內(nèi)臟平滑肌；Me:間皮層。圖45.注射后2天取出的水凝膠。(A-D)解剖的大體外觀。(A)原位的HAX。注意發(fā)炎且明顯的血管分布。(B)原位的布地奈德-HAX。(C)不可與皮膚分離的離體HAX。(D)從除有意存留的小皮層(smallrind)外的皮膚分離的布地奈德-HAX。(E禾卩F)蘇木素伊紅染色的部分(都為40x)。(E)HAX。注意大量的發(fā)炎反應(yīng)。(F)布地奈德-HAX。注意發(fā)炎的相對(duì)不存在。在E禾t!F中，內(nèi)腔巾的淺藍(lán)色物質(zhì)為水凝膠，其為esosi叩hiliccapsule所圍繞。具體實(shí)施例方式定義術(shù)語(yǔ)"血管生成抑制劑"和"抗血管生成劑"在本文中可互換使用以指能夠抑制或減少一個(gè)或多個(gè)與血管生成相關(guān)的過(guò)程的藥劑，所述過(guò)程包括(但不限于)內(nèi)皮細(xì)胞增殖、內(nèi)皮細(xì)胞存活、內(nèi)皮細(xì)胞遷移、前體細(xì)胞分化成內(nèi)皮細(xì)胞和毛細(xì)管形成。如本文所使用，"抗感染劑"是指抑制一種或多種感染性病原體(例如病毒、細(xì)菌、真菌、原生動(dòng)物、蠕蟲、吸蟲或其它寄生蟲)增殖的任何物質(zhì)?？垢腥緞┛稍诨铙w外(即，細(xì)胞培養(yǎng)物中)、活體內(nèi)(即，當(dāng)投與有感染風(fēng)險(xiǎn)的動(dòng)物或感染動(dòng)物時(shí))或二者中展現(xiàn)抑制活性?？垢腥緞﹥?yōu)選以治療耐受的劑量在活體內(nèi)具有抑制活性。如本文中所使用，"消炎劑"是指抑制一種或多種發(fā)炎癥兆或癥狀的任何物質(zhì)。如本文所使用，"水性介質(zhì)"意思指含有水和視情況一種或多種可與水混溶的溶劑(例如，二甲基甲酰胺、二甲亞砜和烴基醇、二醇或甘油)的液體介質(zhì)。水性介質(zhì)可含有至少50體積％、60體積％、70體積％、80體積％、90體積％或更多水。應(yīng)了解，水性介質(zhì)可含有多種溶解、分散或懸浮于其中的物質(zhì)。除非另作說(shuō)明或另外從上下文中可顯而易見(jiàn)(除所述數(shù)字將超過(guò)可能值的100%的情形外)，否則關(guān)于數(shù)字的術(shù)語(yǔ)"約"通常包括在所述數(shù)字的任一方向(大于或小于所述數(shù)字)的5%范圍內(nèi)的數(shù)字。"生物可相容"是指以所使用的量在所使用的位置處對(duì)受者的細(xì)胞實(shí)質(zhì)上無(wú)毒并且在所使用的位置處也不會(huì)對(duì)受者的身體引發(fā)或引起顯著有害或不利的影響(例如，不可接受的免疫或發(fā)炎反應(yīng)、不可接受的疤痕組織形成等)的物質(zhì)。"生物可降解"意思指能夠例如通過(guò)在生理?xiàng)l件下水解，和/或通過(guò)天然生物過(guò)程(諸如細(xì)胞或體內(nèi)存在的酶作用)，禾P/或諸如溶解、分散等過(guò)程在細(xì)胞或個(gè)體體內(nèi)物理和/或化學(xué)分解以形成較小化學(xué)物質(zhì)的物質(zhì)，所述較小的化學(xué)物質(zhì)通常能夠被身體代謝且視情況使用和/或排泄或以其它方式處理。生物可降解化合物優(yōu)選為生物可相容的。出于本發(fā)明的目的，認(rèn)為分子量在活體內(nèi)因單體數(shù)量減少而隨時(shí)間減小的聚合物為生物可降解的。"生物活性劑"為在活體內(nèi)具有所需生物活性(例如治療、診斷和/或預(yù)防特性)的任何化合物或藥劑，或其醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽。應(yīng)了解，可能需要從顆粒和/或水凝膠中釋放所述藥劑以使其發(fā)揮生物活性。生物活性劑包括(但不限于)如本文所使用的治療劑。生物活性劑可為(但不限于)人工或天然存在的小分子、肽或多肽、免疫球蛋白，例如抗體、核酸等。且無(wú)限制性地，激素、生長(zhǎng)因子、藥物、細(xì)胞因子、趨化因子、凝血因子和內(nèi)源凝血抑制劑等也為生物活性劑。術(shù)語(yǔ)"內(nèi)窺鏡"意思指小直徑管狀儀器，其通常使用光纖，經(jīng)設(shè)計(jì)以插入身體的切口中，在微創(chuàng)手術(shù)程序期間用于可視化且操作。所述術(shù)語(yǔ)包括"腹腔鏡"，其經(jīng)設(shè)計(jì)以使腹盆腔中的組織和器官可視和可操作；和"關(guān)節(jié)鏡"，其經(jīng)設(shè)計(jì)以使關(guān)節(jié)間隙內(nèi)的組織可視和可操作等。如本文中所使用，"纖維蛋白溶解劑"是指直接或間接引起纖維蛋白降解的任何物質(zhì)。"HAX水凝膠"為由交聯(lián)HA衍生物形成的水凝膠。"雜化水凝膠"為包含顆粒和交聯(lián)多糖衍生物的復(fù)合水凝膠。"水凝膠"為包含含有大量水的親水性聚合物的三維網(wǎng)狀物。水凝膠以重量/重量計(jì)可例如含有30%、40%、50%、60%、70%、80%、卯％或甚至更多量的水。"水凝膠前體"為至少部分溶于水性介質(zhì)中并且能夠交聯(lián)形成水凝膠的聚合物。"抑制粘連"是指投與組合物和/或執(zhí)行程序從而使粘連數(shù)量、粘連范圍(例如面積)和/或粘連的嚴(yán)重程度(例如，密度或抗機(jī)械或化學(xué)破壞性)相對(duì)于無(wú)所述投藥時(shí)將出現(xiàn)的粘連的數(shù)量、范圍和/或嚴(yán)重程度有所降低。組合物或程序可在促進(jìn)粘連的刺激后抑制粘連形成或生長(zhǎng)；可抑制粘連進(jìn)展；和/或可在其自發(fā)消退后或者機(jī)械或化學(xué)破壞后抑制粘連復(fù)發(fā)。"原位"意思指水凝膠實(shí)質(zhì)上形成于需要水凝膠的位置處而非形成于別處并且隨后將其施用于需要其的位置。舉例來(lái)說(shuō)，出于本發(fā)明的目的，認(rèn)為個(gè)體身體上或體內(nèi)水凝膠的形成為"原位"的。"脂質(zhì)體"為通過(guò)將脂質(zhì)雙層(或多層)封入可含有生物活性劑的水性隔室中形成的人工微觀球形顆粒。"延長(zhǎng)的局部腹膜投藥"是指投與一種或多種組合物，以使所述組合物整體接觸腹膜中面積至少等于距損害部位邊界10cm距離內(nèi)的面積的一部分，例如以致在所述組合物中存在的多糖衍生物交聯(lián)后，面積至少等于距損害部位邊界10cm距離內(nèi)的面積的一部分腹膜為水凝膠層所覆蓋。受損害部位可為顯然危及腹膜實(shí)體或功能的任何部位，例如手術(shù)切口、損傷、感染導(dǎo)致腹膜中可見(jiàn)的實(shí)體改變的部位(例如，發(fā)炎、滲出液等)。所覆蓋的面積可例如與損害部位毗鄰且在損害部位周圍，或者可位于腹膜的相對(duì)表面上。舉例來(lái)說(shuō)，損害可為腹壁中的手術(shù)切口以致壁層腹膜受損，并且所覆蓋的面積可在與損害部位相對(duì)的臟層腹膜上。"全腹膜投藥(Pan-peritonealadministration)"是指投與一種或多種組合物以使所述組合物在投與后整體接觸腹膜的實(shí)質(zhì)部分(例如，至少10%的腹膜表面積)，例如從而在所述組合物中存在的多糖衍生物交聯(lián)后，使得至少10%的腹膜表面積為水凝膠層所覆主皿。"顆粒"是指小物體、片段或小件材料且其包括(但不限于)聚合顆粒、生物可降解顆粒、非生物可降解顆粒、單乳液顆粒、雙乳液顆粒、凝聚質(zhì)、脂質(zhì)體、微米顆粒(microparticle)、納米顆粒(nanoparticle)、宏觀顆粒、小球、晶體、聚集物、復(fù)合物，經(jīng)研磨、碾磨或經(jīng)其它方式破壞的基質(zhì)、交聯(lián)蛋白或多糖顆粒(包括包含HAX的顆粒)。顆粒可由單一物質(zhì)或多種物質(zhì)構(gòu)成。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，顆粒并非病毒顆粒。術(shù)語(yǔ)"腹膜"是指順腹盆腔壁排列的漿液狀膜，其從橫隔膜的內(nèi)表面延伸到骨盆底的上表面。此外，腹膜至少部分覆蓋各種腹盆腔器官，例如腸、胃、肝、腎、腎上腺、脾、膀胱、子宮、卵巢和輸卵管。液體薄膜使腹膜表面潤(rùn)滑并且通常促進(jìn)內(nèi)臟相對(duì)于彼此或相對(duì)于腹壁或盆壁自由移動(dòng)。術(shù)語(yǔ)"腹膜粘連"是指腹膜腔中發(fā)生的粘連。腹膜粘連使得器官或組織相互連在一起或與腹盆腔壁連在一起。"預(yù)防粘連"是指在形成粘連之前投與或施用治療性組合物和/或程序以便降低將響應(yīng)特定損傷、刺激或病狀形成粘連的可能性。應(yīng)了解，"預(yù)防粘連"不需要粘連形成的可能性降低到零。而是說(shuō)，"預(yù)防粘連"是指使特定損傷或刺激后粘連形成的可能性在臨床上顯著降低，例如響應(yīng)特定粘連促進(jìn)損傷、病狀或刺激的粘連發(fā)生率或數(shù)量在臨床上顯著降低。"小分子"是指天然存在或人工產(chǎn)生(例如，經(jīng)由化學(xué)合成)的有機(jī)化合物，其具有相對(duì)低的分子量且不為蛋白質(zhì)、多肽或核酸。通常，小分子具有小于約1500g/mol的分子量。此外，小分子通常具有多個(gè)碳碳鍵。"溶解度"是指在特定溫度和pH值下溶解于指定體積的溶劑中(例如)形成飽和溶液的物質(zhì)的量。溶解度可例如使用搖瓶溶解方法(ASTM:E1148-02，用于測(cè)量水溶液溶角軍度的標(biāo)準(zhǔn)測(cè)試方法(StandardTestMethodforMeasurementsofAqueousSolubility),標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)(BookofStandards)，第11.05巻)測(cè)定。可在介于3.0與9.0之間，例如介于4.0與8.0之間、介于5.0與8.0之間、介于6.0與8.0之間，例如介于6.5與7.6之間，例如介于6.8-7.4之間，例如為7.0或上述范圍的任何中間值的pH值下測(cè)定溶解度?？稍诮橛?0與4(TC之間，例如約25-37°C，例如為約37。C或上述范圍的任何中間值的溫度下測(cè)試溶解度。舉例來(lái)說(shuō)，可在約pH7.0-7.4和約37i:下測(cè)定溶解度。如本文所使用，"個(gè)體"是指擬傳遞藥劑(例如)至其以込到實(shí)驗(yàn)、診斷和/或治療目的的個(gè)體。優(yōu)選個(gè)體為哺乳動(dòng)物，尤其家養(yǎng)哺乳動(dòng)物(例如狗、貓等)、靈長(zhǎng)類動(dòng)物或人類。處于醫(yī)師或其它健康護(hù)理人員護(hù)理下的個(gè)體可稱為"患者"。"持續(xù)釋放調(diào)配物"為包含生物活性劑作為其組分中的一種且另外包含--種或多種視情況部分由于調(diào)配物的實(shí)體結(jié)構(gòu)有效使所述治療劑持續(xù)釋放的其它組分、元件或結(jié)構(gòu)的相關(guān)組合物。持續(xù)釋放為在一段時(shí)間內(nèi)，例如至少2、3、4、5或6、至少l、2、4或6周、長(zhǎng)達(dá)約l、2、3、4、6、8、10、12、15、18或24個(gè)月內(nèi)連續(xù)或間歇發(fā)生的釋放或傳遞。也稱為"藥物"的"治療劑"本文中是指投與個(gè)體以治療疾病、病癥或其它臨床上認(rèn)可的對(duì)個(gè)體有害的病狀或達(dá)成預(yù)防目的的藥劑，且其對(duì)身體的疾病、病癥或病狀的治療或預(yù)防具有臨床上顯著的作用。治療劑包括(但不限于)以下文獻(xiàn)中所列的藥劑美國(guó)藥典(UnitedStatesPharmacopeia,USP)、(Goodmtm)/〃(G〃ma")治#，18游,麥學(xué)基鄉(xiāng)(7TzeP/za廠macoZog/cflZo/7VjerapeMn'c^),第10版，(麥克勞希爾(McGrawHill))，2001;卡卓恩B.(Katzung，B.)(編)基礎(chǔ)與臨床藥理學(xué)(細(xì)!'ca"rfCZZm'caZP/iarmacoZogy),麥克勞希爾/阿普爾頓和蘭格(Appleton&Lange);第8版(2000年9月21日)；醫(yī)師桌上手冊(cè)(尸/^!'dfl"'jZ)e^We/^e"")(湯姆遜出版公司(ThomsonPublishing)),和/或默克手冊(cè)的診斷與治療(77zeMercfcMa"wa/o/￡)!agm"朋c/7T^ra/;y),第17版(1999)或其后出版的第18版(2006)，馬克H.比爾(MarkH.Beers)和羅伯特貝爾考(RobertBerkow)(編),默克出版公司(MerckPublishingGroup),或在動(dòng)物的情況下，默克獸醫(yī)手冊(cè)(7T^Merc/tVfeM〃'Mao;似a肌a/),第9版，卡恩C.A,(Kahn,C.A.)(編)，默克出版公司(MeratP"W!i!'"gGrawp),2005中。如本文所使用，"治療粘連"是指遵循用于破壞或降低粘連的范圍或嚴(yán)重程度的程序，投與或施用可逆轉(zhuǎn)、緩解、減輕和/或抑制粘連進(jìn)展和/或嚴(yán)重程度或者可降低粘連復(fù)發(fā)的可能性和/或粘連復(fù)發(fā)的嚴(yán)重程度的組合物和/或程序。"治療粘連"還指投與或施用可逆轉(zhuǎn)、緩解、減輕、抑制粘連的一種或多種癥狀(例如，疼痛、腸梗阻、不孕)的進(jìn)展或降低其復(fù)發(fā)的可能性和/或嚴(yán)重程度的組合物和/或程序。因此，"治療粘連"涉及在損傷或刺激后已形成粘連后即投與或施用治療組合物和/或程序。"腫瘤"是指由過(guò)度細(xì)胞分化所引起的異常組織腫塊。腫瘤可為良性(非癌性的)或惡性(癌性的)。"腫瘤"包括以造血細(xì)胞過(guò)度分化為特征的病癥。所述病癥包括惡性和惡變前血液病癥，諸如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤和骨髓增生性病癥。可使用多種技術(shù)認(rèn)可的方法中的任一種診斷腫瘤，包括物理診斷、影像研究、組織病理學(xué)(例如，對(duì)細(xì)胞或組織樣本執(zhí)行)、生化測(cè)試等。腫瘤的特定非限制性實(shí)例包括肉瘤、前列腺癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌、血液腫瘤(例如，白血病、霍奇金氏和非霍奇金氏淋巴瘤(non-Hodgkin'slymphoma)、多發(fā)性骨髓瘤和其它漿細(xì)胞病癥、骨髓增生性病癥)、腦腫瘤(例如，低級(jí)別星形細(xì)胞瘤、間變型星形細(xì)胞瘤、多形性膠質(zhì)母細(xì)胞瘤、少突膠質(zhì)細(xì)胞瘤和室管膜瘤)和胃腸道間質(zhì)瘤(GIST)。肉瘤包括骨肉瘤、尤文氏肉瘤(Ewing'ssarcoma)、軟組織肉瘤和胃平滑肌肉瘤。惡性腫瘤的其它實(shí)例包括小細(xì)胞和非小細(xì)胞肺癌、腎癌(例如，腎細(xì)胞癌)、肝細(xì)胞癌、胰腺癌、食道癌、結(jié)腸癌、直腸癌、胃癌、乳腺癌、卵巢癌、膀胱癌、睪丸癌、甲狀腺癌、頭癌和頸癌、甲狀腺癌等。如本文所使用，"腫瘤"包括原發(fā)性腫瘤的轉(zhuǎn)移。"粘度"是指對(duì)于在指定溫度下液體稠度或抗液體流動(dòng)性的測(cè)量?？墒褂盟鶎兕I(lǐng)域中已知的多種方法和儀器測(cè)定粘度。舉例來(lái)說(shuō)，首先稱量聚合物且隨后將其溶解于適當(dāng)溶劑中。將溶液和粘度計(jì)放入恒溫水浴中。使溶液內(nèi)獲得熱平衡。隨后將液體放到粘度19計(jì)上的頂部分度標(biāo)記上。記錄溶液從頂部流到底部分度標(biāo)記的時(shí)間?？筛鶕?jù)ASTM標(biāo)準(zhǔn)手冊(cè)(ASTMBookofStandards)中關(guān)于聚合物稀溶液粘度的實(shí)踐(ASTMD2857)第08.01巻(2005年6月)或者關(guān)于特定聚合物的相關(guān)ASTM標(biāo)準(zhǔn)測(cè)定包含聚合物的溶液的粘度?？稍诮橛?0與4(TC之間，例如約25-37。C，例如為約37'C或上述范圍的任何中間值的溫度下測(cè)試溶解度。舉例來(lái)說(shuō)，可在約pH7.0-7.4和約37'C下測(cè)定溶解度。I.包含原位可交聯(lián)多糖衍生物的抗粘連組合物據(jù)悉，粘連是由復(fù)雜的發(fā)炎過(guò)程引起，其中在體內(nèi)通常保持分離的組織常因手術(shù)創(chuàng)傷、損傷或感染而相互連在-一起。這些粘連(包括由其它原因引起的粘連)為諸如腸梗阻和不孕等嚴(yán)重并發(fā)癥的主要原因。其它粘連相關(guān)并發(fā)癥包括慢性腹盆腔痛、尿路梗阻和排尿功能障礙。懷疑在粘連形成中起到作用的發(fā)炎過(guò)程包括嗜中性粒細(xì)胞積累和受損組織的活化、纖維蛋白沉積和相鄰組織的粘合、巨噬細(xì)胞侵入、成纖維細(xì)胞增生到區(qū)域中、膠原蛋白沉積、血管生成和持久粘連組織產(chǎn)生。當(dāng)前治療方法包括使用甾體和非甾體消炎藥物以及涉及施用試圖保持組織分離的薄膜或膜的多種基于障壁的方法。然而，這些方法的功效有限。本發(fā)明提供預(yù)防和/或治療粘連的組合物和方法。本發(fā)明部分是由發(fā)明者的發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生某些多糖(例如，透明質(zhì)酸(HA)或纖維素衍生物)當(dāng)以溶液形式投與體內(nèi)一部位(例如，組織損傷或損害的部位)時(shí)原位(即，在體內(nèi)投藥部位處或接近體內(nèi)投藥部位處)相互交聯(lián)形成抑制粘連的水凝膠。第-方面，本發(fā)明提供-種抑制粘連的方法，其包含以下步驟將第一多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和將第二多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中在所述第一與第二多糖衍生物相互接觸后，所述多糖衍生物交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連。在投與前，將多糖衍生物溶解于溶液中?？蓪⑷芤簩?shí)質(zhì)上同時(shí)地投與個(gè)體。可在投藥前將溶液混合以形成單一溶液，在此情況下，優(yōu)選在發(fā)生實(shí)質(zhì)交聯(lián)之前將其投與。本文中主要例示說(shuō)明HA、纖維素和葡聚糖的衍生物，而本發(fā)明涵蓋在抑制粘連的組合物和方法中以及本文中所述的其它組合物和方法中使用其它多糖和其衍生物與非多糖聚合物水凝膠前體。水凝膠是在可能另外相互接觸的組織或結(jié)構(gòu)之間以及例如能在創(chuàng)傷愈合過(guò)程中因此發(fā)展粘連的組織或結(jié)構(gòu)之間形成。因此，水凝膠用于分離已經(jīng)歷損傷、創(chuàng)傷、外部環(huán)境暴露或任何其它類型損害的組織或結(jié)構(gòu)。本發(fā)明因此提供一種使組織或結(jié)構(gòu)保持分離的方法，其包含以下步驟將第一多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和將第二多糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中在所述水凝膠前體相互接觸后，所述第一與第二多糖衍生物交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠位于需保持相互分離的組織或結(jié)構(gòu)之間。水凝膠抑制組織或結(jié)構(gòu)相互粘附且抑制所述組織或結(jié)構(gòu)之間疤痕狀纖維帶的發(fā)展?？稍谡尺B促進(jìn)刺激(即，增加粘連形成、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)的可能性的任何事件)后投與溶液。粘連促進(jìn)刺激物的實(shí)例包括手術(shù)、損傷和感染。水凝膠在體內(nèi)降解且因此無(wú)需去除。本發(fā)明提供通過(guò)將第一多糖衍生物與第二多糖衍生物交聯(lián)形成的水凝膠，其中所述第一多糖衍生物與第二多糖衍生物不同。舉例來(lái)說(shuō)，第一多糖衍生物可為包含第一官能團(tuán)的HA衍生物，且第二多糖衍生物可為包含第二官能團(tuán)的纖維素衍生物。另舉例來(lái)說(shuō)，第一多糖衍生物為包含第一官能團(tuán)的HA衍生物，且第二多糖衍生物為包含第二官能團(tuán)的葡聚糖衍生物。第一與第二官能團(tuán)可選自胺、酰胺、醛、酯、羥基或酰肼。本發(fā)明另外提供通過(guò)將第一多糖衍生物與第二多糖衍生物交聯(lián)形成的水凝膠，其中所述第一多糖與第二多糖相同，且其中所述第一多糖衍生物包含第一官能團(tuán)且所述第二多糖衍生物包含第二官能團(tuán)，其中所述第一與第二官能團(tuán)能夠相互交聯(lián)。多糖可例如為HA、纖維素、葡聚糖或任一者的衍生物?？墒褂枚喾N多糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種多糖衍生物為HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，兩種多糖衍生物都為HA衍生物。因此，本發(fā)明提供一種方法，其(i)將包含第一HA衍生物的溶液投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和(ii)將包含第二HA衍生物的溶液投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中在所述溶液相互接觸后，所述第一與第一.HA衍生物交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連形成。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖為不被對(duì)于人類為內(nèi)源的酶特異性降解的多糖。不希望受任何理論的束縛，至少部分由所述多糖的衍生物形成的水凝膠可在體內(nèi)具有比由HA衍生物所形成的水凝膠長(zhǎng)的半衰期。在木發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種多糖衍生物為纖維素衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物為HA衍生物且第二多糖衍生物為纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種多糖衍生物為葡聚糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物為HA衍生物且第二多糖衍生物為葡聚糖衍生物。HA(也稱為透明質(zhì)素或透明質(zhì)酸鹽)為含有由N-乙?；?D-葡糖胺與D-葡糖醛酸構(gòu)成的重復(fù)二糖亞單元的未分枝多糖。(參看勞倫特T.C.(Laurent,T.C.)(編).,透明質(zhì)素及其衍生物的生物禾卩醫(yī)學(xué)應(yīng)用(S/o/ogyMe&c"〖App〃c""'o/Mq/"i/ya/"ra"fl"Z)en.v""薦)，倫敦波特蘭出版社(London:PortlandPress),1998)。HA的結(jié)構(gòu)如下文所示。如本文所使用，術(shù)語(yǔ)"透明質(zhì)酸(HA)"是指HA及其任何鹽，例如透明質(zhì)酸鈉、透明質(zhì)酸鉀、透明質(zhì)酸鎂、透明質(zhì)酸鈣等。術(shù)語(yǔ)"HA衍生物"是指已由上文所示的天然形式化學(xué)修飾的HA。修飾可包括添加或產(chǎn)生新的官能團(tuán)(例如，胺、酰胺、醛、酯、羥基、酰肼等)，在此情況下，稱HA"經(jīng)官能化"。經(jīng)修飾的二糖亞單元的比例可變化，并且可選擇修飾的程度以便控制諸如膠凝時(shí)間、半衰期、硬度等特性。某些修飾保持天然HA的主鏈結(jié)構(gòu)，而其它修飾打開(kāi)至少一些糖環(huán)。舉例來(lái)說(shuō)，某些修飾打開(kāi)葡糖酸酸部分的至少一些糖環(huán)。本發(fā)明的第一和第二HA衍生物分別包含第一和第二官能團(tuán)，其相互反應(yīng)形成將第一與第二HA衍生物連接在一起的共價(jià)鍵。因此將溶液以液體形式施用并且使其相互接觸，并視情況在投藥之前或投藥時(shí)或者投藥后相互接觸之前或接觸時(shí)將其混合在一起。足量交聯(lián)的形成使液體轉(zhuǎn)變成半固體或類凝膠狀態(tài)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用包含至少兩個(gè)不同官能團(tuán)的HA衍生物，其中所述官能團(tuán)在生理?xiàng)l件下相互反應(yīng)形成交聯(lián)?？蛇x擇官能團(tuán)從而使其實(shí)質(zhì)上不相互反應(yīng)，直到暴露于pH值、溫度和/或鹽濃度的生理?xiàng)l件。因此，應(yīng)了解，本發(fā)明不需要兩個(gè)可相互區(qū)別的HA衍生物，而是可使用包含多個(gè)能夠交聯(lián)的不同官能團(tuán)的單一物質(zhì)。多種不同HA衍生物可用于本發(fā)明中。適當(dāng)衍生物的重要特征在于，第一與第二官能團(tuán)必須以足量反應(yīng)且足夠迅速，從而允許在溶液相互接觸后的一段時(shí)間范圍內(nèi)形成水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，水凝膠是溶液相互接觸后(例如投藥后)在介于l-3秒與5分鐘之間、介于1-3秒與3分鐘之間、介于1-3秒與60秒之間、介于1-3秒與30秒之間或介于1-3秒與15秒之間的時(shí)間內(nèi)形成。通常將溶液在投與體內(nèi)一部位前混合在一起，或?qū)⑷芤夯旌吓c其對(duì)體內(nèi)一部位的投與同時(shí)進(jìn)行。舉例來(lái)說(shuō)，可使用多管注射裝置(例如，多管注射器)投與溶液，其中各溶液在投與前都包含于單獨(dú)接受器或管中。溶液可在投與過(guò)程中和/或投與之后相互接觸。優(yōu)選衍生物在生理?xiàng)l件下，(例如)在介于6.0與8.0之間的pH值的水性環(huán)境中交聯(lián)。適當(dāng)HA衍生物的另一重要特征在于，所得水凝膠本身不應(yīng)明顯促使粘連發(fā)展、發(fā)炎或其它不合需要的作用。已提出多種適用作組織粘結(jié)劑或粘合劑的HA衍生物。與本發(fā)明的HA衍生物相比，所述衍生物可使粘連的問(wèn)題惡化而非將其解決。已提出多種作為組織再生的支架的HA衍生物，其可為細(xì)胞生長(zhǎng)和浸潤(rùn)提供適當(dāng)環(huán)境。然而，出于抑制粘連的目的，增強(qiáng)細(xì)胞浸潤(rùn)和/或增殖的環(huán)境是不合需要的。本發(fā)明鑒別出適于原位迅速交聯(lián)且形成抑制粘連的水凝膠的多糖衍生物，例如HA衍生物?？墒褂枚喾N可交聯(lián)多糖衍生物和形成所述衍生物的方法。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物相互交聯(lián)而無(wú)需單獨(dú)交聯(lián)劑，例如第一和第二衍生物包含相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵的官能團(tuán)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物相互反應(yīng)產(chǎn)生無(wú)毒、生物可相容產(chǎn)物，例如水。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，兩種多糖衍生物都未通過(guò)使用交聯(lián)劑來(lái)修飾。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物在不需要光的情況下交聯(lián)。在本發(fā)明一個(gè)或多個(gè)方面中，可使用多種HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，通過(guò)在葡糖醛酸部分的羧基(COOH)處形成活性酯且隨后執(zhí)行在一端含有親核基團(tuán)且在另一端含有經(jīng)保護(hù)官能團(tuán)的側(cè)鏈的取代來(lái)引入官能團(tuán)，例如，如以下文獻(xiàn)中所述美國(guó)專利第6,630,457號(hào)，其以引用的方式并入本文中；和布彼特P.(BulpiU，P.)和埃施利曼D.(Aeschlimann,D.)，(1999)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(J.Biomed.Mater.Res.)'47,152-169，其以引用的方式并入本文中。所述方法可例如用于產(chǎn)生包含胺或醛官能團(tuán)的HA衍生物?？墒褂?-羥基苯并三唑(HOBT)或N-輕基硫代琥珀酰亞胺且隨后使用碳化二亞胺(諸如EDC)供偶聯(lián)來(lái)形成HA的活性酯。能夠與立即用HOBT形成的酯反應(yīng)的胺包括肼和活性胺(諸如乙二胺)，其具有在適當(dāng)范圍內(nèi)的pKa值以致其在酸性pH值(例如，約5.5到7.0)下未質(zhì)子化。N-羥基硫代琥珀酰亞胺的使用使得能在約7.0到8.5的pH值下進(jìn)行偶聯(lián)，從而允許使用伯胺。這些方法可用于執(zhí)行以下反應(yīng)HA匿COOH+H2N-R—>HA-CO掘-R(I)，HA匿COOH+R'-NH-R—>HA-CO-NR'—R(II)。R和R'可為多種部分中的任一種，諸如氫、烷基、芳基、垸基芳基或芳基烷基，其可含有諸如氧、氮和硫的雜原子。側(cè)鏈可分枝或未分枝的并且可為飽和，或可含有一個(gè)23或多個(gè)重鍵(multiplebond)。側(cè)鏈的碳原子可連續(xù)，或可經(jīng)一個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)分隔，諸如氧原子、酮基、氨基、氧基羰基等。側(cè)鏈可經(jīng)芳基部分或鹵素原子取代，或可整體或部分由諸如環(huán)戊基、環(huán)己基、環(huán)庚基等環(huán)結(jié)構(gòu)形成。側(cè)鏈可具有末端官能團(tuán)以供交聯(lián)，所述官能團(tuán)諸如醛、胺、芳基疊氮化物、酰肼、馬來(lái)酰亞胺、巰基、酯、羧酸酯、酰亞胺酯、羥基等。因此，可使用此方法產(chǎn)生包含多種不同官能團(tuán)中任一種的HA衍生物。適用于形成HA衍生物的碳化二亞胺可提供如下R—N=C=N—R',(III)。R和R'可為(例如)如上文所述的多種部分中的任一種。舉例來(lái)說(shuō)，R和R'可獨(dú)立地選自由以下各基團(tuán)組成的群組氫、具有l(wèi)-25個(gè)碳原子的烴基且包括經(jīng)取代烴基、烷氧基、芳氧基、垸芳氧基等。舉例來(lái)說(shuō)，R和R'可為垸基、環(huán)垸基、芳基或其經(jīng)取代形式。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用例如在約20-8(TC范圍內(nèi)的溫度下至少部分可溶于水性介質(zhì)中的碳化二亞胺。例示性碳化二亞胺包括EDC(1-乙基-3-(3-二甲基氨基丙基)碳化二亞胺)、ETC(l-(-3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳化二亞胺甲碘化物)、N，N'-二環(huán)己基碳化二亞胺、N-烯丙基-N'-((3-羥乙基)碳化二亞胺、N-(a-二甲基氨基丙基)-N'-叔丁基碳化二亞胺、N-(a-二甲基氨基丙基)-N'-(p-溴烯丙基)碳化二亞胺、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-(6-苯甲?；被夯?碳化二亞胺和N-環(huán)己基-N'-(3-(4-甲基嗎啉鎿)乙基碳化二亞胺(CMC)等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，側(cè)鏈包含二酰肼?？扇缟衔乃鲂纬砂ｋ碌腍A衍生物。也可使用用于形成包含二酰肼官能團(tuán)的HA衍生物的其它方法。舉例來(lái)說(shuō)，美國(guó)專利第5，616，568號(hào)(其以引用的方式并入本文中)教示一種利用二酰肼使HA官能化以形成二酰肼基-HA的方法。首先將二酰肼添加到HA中，隨后添加碳化二亞胺。所述反應(yīng)可在約4-0的pH值下進(jìn)行且可如下文所示HA-—COOH+H2N—-NH---CO—A—CO—NH—NH2(二酰肼)(IV)丄R'—-N=C=N—R"(碳化二亞胺)HA—CO—NH—NH—CO—A—CO—NH—-NH2(二酰肼基-HA)(V)。可將多種二酰肼用于上述反應(yīng)中，其中A表示可變間隔基。舉例來(lái)說(shuō)，A可為烴基、雜烴基、經(jīng)取代烴基、經(jīng)取代雜烴基等，其中這些術(shù)語(yǔ)是如美國(guó)專利第5,616,568號(hào)中所述和例示使用。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，二酰肼具有下式NH2NHCO(CH2)n，CONHNH2(VI)，其中n=l到18。舉例來(lái)說(shuō)，有用的二酰肼包括琥珀酸(丁二酸)(n=2)、肥酸(己二酸)(n=4)、木栓酸(辛二酸)(n=6)、草酸(乙二酸)(n=0)、縮蘋果酸(丙二酸)(n=l)、膠酸(戊二酸)(n=3)、蒲桃酸(庚二酸)(n=5)、杜鵑花酸(壬二酸)(n=7)、皮脂酸(癸二酸)(n=8)、十二垸二酸(n=10)、巴西基酸(十三烷二酸)二酰肼(n=ll)等，至多n=20。適當(dāng)?shù)奶蓟啺芬延谏衔恼撌?。?jīng)二酰肼(肥酸二酰肼)官能化的適當(dāng)HA衍生物的結(jié)構(gòu)展示于下文中且將在本文中稱為HA-ADH。箭頭指示修飾HA的位置(即，葡糖醛酸部分的羧基處)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，并不是通過(guò)修飾葡糖醛酸部分的羧基，而是通過(guò)氧化葡糖醛酸部分的羥基形成酸基來(lái)形成包含醛官能團(tuán)的HA衍生物?？墒褂枚喾N氧化劑，例如高碘酸鹽，例如高碘酸鉀(KI04)、高碘酸鈉(NaI04)或HI04。其它氧化劑包括高錳酸鹽、鉻酸鹽或二鉻酸鹽。此經(jīng)氧化HA衍生物的結(jié)構(gòu)展示于下文中且將在本文中稱為HA-CHO。箭頭指示修飾的位點(diǎn)。應(yīng)了解，在上述修飾方案中的任一種中，HA中僅一部分糖部分經(jīng)修飾。修飾的范圍可改變。舉例來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，介于5%與99-100%之間的相關(guān)糖部分(例如，在上述修飾的情況下的葡糖醛酸部分)經(jīng)修飾。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，介于10%與75%之間的相關(guān)糖部分經(jīng)修飾?？赏ㄟ^(guò)多種方法控制修飾的范圍。舉例來(lái)說(shuō)，使反應(yīng)進(jìn)行的溫度、pH值和時(shí)間可隨試劑(例如，碳化二亞胺、酰胺、二酰肼等)濃度而變。為實(shí)現(xiàn)較高修飾程度，可使用過(guò)量的修飾劑，例如二酰肼和/或碳化二亞胺。舉例來(lái)說(shuō)，在--個(gè)實(shí)施例屮，將10-100倍過(guò)量的二酰肼添加到包含HA的溶液中，和/或隨后將2-100倍過(guò)量的碳化二亞胺試劑添加到反應(yīng)混合物中。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，選擇這些參數(shù)的值以便實(shí)現(xiàn)相對(duì)較高的修飾程度，例如使介于50%與99-100%之間的相關(guān)糖部分修飾。舉例來(lái)說(shuō)，可使介于50%與80%之間的相關(guān)糖部分修飾。然而，保持足夠低的修飾程度從而使溶液保持適當(dāng)?shù)牧黧w狀態(tài)，而不是變得過(guò)于粘稠以致不易于處理和注射。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，介于10%與30%之間或介于30%與50%之間的相關(guān)糖部分經(jīng)修飾。可通過(guò)使包含不同官能團(tuán)的衍生物相互反應(yīng)來(lái)交聯(lián)如上文所述經(jīng)官能化的HA衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，(i)包含酸的第一HA衍生物可與包含胺的第二HA衍生物反應(yīng)；(ii)包含活性酯(諸如NHS酉旨)的第一HA衍生物可與包含胺的第二HA衍生物反應(yīng)；(iii)包含馬來(lái)酰亞胺的第一HA衍生物可與包含巰基的第二HA衍生物反應(yīng)；(iv)包含酰肼的第一HA衍生物可與包含醛的第二HA衍生物反應(yīng)等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，將HA衍生物通過(guò)除二硫鍵外的其它鍵連接在一起。在特別值得關(guān)注的一個(gè)實(shí)施例中，第一溶液含有包含經(jīng)二酰肼官能化的葡糖酸酸部分的HA衍生物，且第二溶液含有在HA的葡糖醛酸部分的羥基處經(jīng)氧化形成醛基的HA衍生物。如下文示意性展示，第一與第二HA衍生物交聯(lián)形成腙化合物，其中R,和R2表示HA(或在本發(fā)明某些實(shí)施例中表示另一多糖，諸如纖維素衍生物)的部分。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage27</formula>本發(fā)明的發(fā)明者已證實(shí)，通過(guò)某些HA衍生物交聯(lián)而原位形成的水凝膠甚至在不存在水凝膠的情況下100%個(gè)體都將會(huì)發(fā)展粘連的條件下也展現(xiàn)顯著的抑制粘連的能力(參看實(shí)例)。令人驚訝的是，包含HA衍生物的某些水凝膠(其中天然HA主鏈結(jié)構(gòu)經(jīng)葡糖醛酸環(huán)氧化而改變)會(huì)抑制粘連并且顯現(xiàn)低細(xì)胞毒性和良好的生物可相容性，即使可能預(yù)期破壞天然HA主鏈結(jié)構(gòu)可能會(huì)使組合物在活體內(nèi)促發(fā)炎和/或具免疫原性。本發(fā)明一方面為以下發(fā)現(xiàn)可例如通過(guò)改變?nèi)芤褐卸嗵茄苌锏臐舛群?或分子量來(lái)控制由交聯(lián)多糖衍生物(諸如HA衍生物)所形成的水凝膠的某些重要參數(shù)，諸如膠凝時(shí)間和降解速率。本發(fā)明一方面涉及以下發(fā)現(xiàn)溶液中HA衍生物的高濃度可通過(guò)適當(dāng)選擇未經(jīng)修飾HA的分子量和/或修飾程度來(lái)實(shí)現(xiàn)。具體來(lái)說(shuō)，已發(fā)現(xiàn)，通過(guò)降低未經(jīng)修飾的HA衍生物的分子量，可增加通過(guò)修飾HA所產(chǎn)生的HA衍生物的可達(dá)到的濃度。因此，由修飾較低分子量的HA產(chǎn)生的HA衍生物的溶解度高于由對(duì)較高分子量HA進(jìn)行相同修飾所產(chǎn)生的衍生物的溶解度，由此能達(dá)到較高濃度，而不會(huì)使組合物過(guò)于粘稠而不易于處理和注射。本發(fā)明提供一種包含溶液形式的HA衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度大于5mg/ml，例如高達(dá)150mg/ml。在某些實(shí)施例中，HA衍生物的濃度高于10mg/ml。在其它實(shí)施例中，HA衍生物的濃度高于15mg/ml或高于25mg/ml。所述濃度可為至少26mg/ml、至少30mg/ml、至少40mg/ml、至少50mg/ml等。出于本發(fā)明的目的，高于25mg/ml的HA衍生物的濃度稱為"高濃度"。本發(fā)明另外提供一種包含溶液形式的HA衍生物的組合物，其中所述HA衍生物的濃度介于50mg/ml與100mg/ml之間，例如介于50mg/ml與75mg/ml之間。所述溶液優(yōu)選具有足夠低的粘度，因此其易于處理，例如由此易于注射。HA衍生物可為上文所述HA衍生物中任一種。舉例來(lái)說(shuō)，HA衍生物可為HA-ADH或HA-CHO。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，將HA衍生物溶解于水性介質(zhì)中。本發(fā)明另外提供制造水凝膠的方法，其包含使包含第一HA衍生物的第一溶液與包含第二HA衍生物的第二溶液相互接觸，其中所述溶液中至少一種具有較高的HA衍生物濃度。水凝膠可用于本文所述的任何目的，且視情況包含生物活性27劑和/或顆粒。本發(fā)明另外提供通過(guò)使包含第一HA衍生物的第一溶液與包含第二HA衍生物的第二溶液接觸且使所述衍生物交聯(lián)(視情況原位交聯(lián))所形成的水凝膠，其中所述第--溶液中第一HA衍生物的濃度、所述第二溶液中第二HA衍生物的濃度或二者都高于5mg/ml、高于10mg/ml、高于15mg/ml或高于25mg/ml。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液中第一HA衍生物的濃度、第二溶液中第二HA衍生物的濃度或二者介于50mg/ml與100mg/ml之間，例如介于50mg/ml與75mg/ml之間。如實(shí)例中所述，已令人驚奇地發(fā)現(xiàn)，由包含至少一種高濃度HA衍生物的溶液形成的水凝膠展現(xiàn)(i)縮短的"膠凝時(shí)間"(意思指HA衍生物在相互接觸后交聯(lián)形成凝膠所需的時(shí)間)；(ii)降低的降解速率和由此增加的半衰期(意思指水凝膠濕重降低50%所需的時(shí)間)；或(iii)縮短的膠凝時(shí)間與降低的降解速率。舉例來(lái)說(shuō)，當(dāng)HA-ADH和HA-CHO溶液的濃度分別從20mg/ml增加到75mg/ml禾Q30mg/ml時(shí)，由交聯(lián)第一與第二HA衍生物(HA-ADH與HA-CHO)形成的水凝膠的半衰期從5天增加到U天，并且當(dāng)所述濃度增到75mg/ml和60mg/ml時(shí)，所述半衰期增加到22.5天或51天(參看實(shí)例)。因此，本發(fā)明提供由交聯(lián)HA衍生物形成的水凝膠，其中所述水凝膠具有超過(guò)IO天、例如介于約10天與約50天之間的半衰期。應(yīng)了解，可使用多種不同方法測(cè)量膠凝時(shí)間和降解速率。適當(dāng)?shù)姆椒ㄌ峁┯诒疚闹小Ｈ欢?，?yīng)了解，盡管本文所使用的特定方法適用于量化改變濃度和/或分子量的作用，但關(guān)于控制膠凝時(shí)間和降解速率的一般發(fā)現(xiàn)與用于評(píng)估這些參數(shù)的特定方法無(wú)關(guān)。還應(yīng)了解，盡管已使用特定HA衍生物說(shuō)明本發(fā)明的這些方面，但并非以任何方式將本發(fā)明限于這些特定衍生物。本發(fā)明另外提供包含諸如纖維素和葡聚糖等其它多糖衍生物的組合物，其中所述多糖衍生物的濃度如上文關(guān)于HA衍生物所述。參看下文實(shí)例12和13。所述衍生物可包括(但不限于)官能化纖維素或官能化纖維素衍生物?？墒褂玫钠渌苌锇?但不限于)官能化葡聚糖和官能化葡聚糖衍生物。也可使用其它天然和合成多糖及其衍生物制備本發(fā)明的組合物。因此，本發(fā)明包括與本文關(guān)于HA衍生物所述類似且如適用于其它水凝膠前體(例如包括本文所述衍生物的其它多糖衍生物，例如纖維素衍生物和葡聚糖衍生物)的組合物和方法。由原位交聯(lián)多糖衍生物所形成的水凝膠抑制粘連的顯著能力不限于HA衍生物。本發(fā)明的發(fā)明者已證實(shí)，由交聯(lián)某些HA衍生物和某些纖維素衍生物在原位形成的水凝膠具有類似的粘連抑制作用(實(shí)例11和12)。舉例來(lái)說(shuō)，由交聯(lián)HA衍生物與多種纖維素衍生物(其中天然纖維素主鏈的結(jié)構(gòu)已通過(guò)氧化糖環(huán)而改變)中任一種所形成的水凝膠也抑制粘連并且在腹膜內(nèi)展現(xiàn)良好的生物可相容性(實(shí)例11和12)。本發(fā)明另外提供一種抑制粘連的方法，其包含(i)將HA衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和(ii)將纖維素衍生物投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中所述HA衍生物與纖維素衍生物在相互接觸后交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連?？蓪A衍生物與纖維素衍生物溶解于實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與個(gè)體的獨(dú)立溶液中。纖維素為P-D-吡喃葡萄糖單元相互連接的線性聚合物(卡米德(Kamide)，纖維素和纖維素衍生物分子特征和其應(yīng)用(CelluloseAndCelluloseDerivatives:MolecularCharacterizationandItsApplications),愛(ài)思唯爾(Elsevier)，2005)。術(shù)語(yǔ)"纖維素衍生物"是指己由其天然形式化學(xué)修飾的纖維素。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖為纖維素衍生物，諸如甲基纖維素(MC)、羧甲基纖維素(CMC)、羥甲基纖維素(HMC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥乙基纖維素(HEC)或羥丙基甲基纖維素(HPMC)，其中一個(gè)或多個(gè)OH基團(tuán)經(jīng)OR置換，其中R表示多種部分中的任一種。應(yīng)了解，上文提及的纖維素衍生物中任一種的葡萄糖部分中有一些但非全部經(jīng)修飾(參看圖12)。一般來(lái)說(shuō)，可使用與上文關(guān)于HA衍生物所述類似的方式制備可交聯(lián)纖維素衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，將纖維素或纖維素衍生物修飾以形成官能化纖維素衍生物，其包括能夠與適當(dāng)?shù)牡诙倌軋F(tuán)(例如，HA衍生物上的官能團(tuán))共價(jià)連接的官能團(tuán)，諸如胺、酰胺、醛、酯、羥基或酰肼。舉例來(lái)說(shuō)，如本文關(guān)于HA所述，可通過(guò)氧化葡萄糖部分中的一些羥基形成醛基來(lái)形成包含醛官能團(tuán)的纖維素衍生物。通過(guò)氧化葡萄糖部分的羥基形成醛基所形成的MC、CMC和HPMC的衍生物在本文中分別稱為MC-CHO、CMC-CHO和HPMC-CHO(參看圖12)。類似命名可用于其它纖維素衍生物。本發(fā)明提供一種包含溶液形式的纖維素衍生物的組合物，其中所述纖維素衍生物的濃度大于5mg/ml,例如高達(dá)150mg/ml。在某些實(shí)施例中，纖維素衍生物的濃度高于10mg/ml。在其它實(shí)施例中，纖維素衍生物的濃度高于15mg/ml、高于20mg/ml或高于25mg/ml。出于本發(fā)明的目的，高于25mg/ml的纖維素衍生物的濃度稱為"高濃度"。所述溶液優(yōu)選具有足夠低的粘度，因此其易于處理，例如由此易于注射。纖維素衍生物可為本文所述纖維素衍生物中的任一種。舉例來(lái)說(shuō)，纖維素衍生物可為MC-CHO、CMC-CHO禾口HPMC-CHO。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用包含二酰肼官能團(tuán)的HA衍生物和包含醛基的纖維素衍生物形成水凝膠。舉例來(lái)說(shuō)，第一溶液可包含HA-ADH且第二溶液可包含MC-CHO、CMC-CHO或HPMC-CHO。HA與纖維素衍生物交聯(lián)形成以下腙化合物HA-CMC、HA-HPMC禾口HA-MC。另外，本發(fā)明的發(fā)明者也己展示，由交聯(lián)某些HA衍生物和某些葡聚糖衍生物在原位形成的水凝膠具有類似的粘連抑制作用(實(shí)例13)。舉例來(lái)說(shuō)，由交聯(lián)HA、纖維素或其它葡聚糖衍生物與天然葡聚糖主鏈的結(jié)構(gòu)已改變的葡聚糖衍生物所形成的水凝膠也抑制粘連并且在腹膜內(nèi)展現(xiàn)良好的生物可相容性(實(shí)例13)。本發(fā)明另外提供一種抑制粘連的方法，其包含(i)將HA或纖維素衍生物投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和(ii)將葡聚糖衍生物投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中所述HA或纖維素衍生物與葡聚糖衍生物在相互接觸后交聯(lián)形成水凝膠，且其中所述水凝膠抑制粘連。可將HA或纖維素衍生物與葡聚糖衍生物溶解于實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與個(gè)體的獨(dú)立溶液中。葡聚糖為一種復(fù)雜的分枝多糖。葡聚糖包括許多經(jīng)由(xl—6糖苷鍵聯(lián)連接在一起形成直鏈的葡萄糖部分。分枝通常由otl—3鍵聯(lián)開(kāi)始，但其也可從ot1—2或al—4鍵聯(lián)開(kāi)始。葡聚糖直鏈部分的結(jié)構(gòu)繪示于圖22中。術(shù)語(yǔ)"葡聚糖衍生物"是指己從其天然形式化學(xué)修飾的葡聚糖。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖為葡聚糖衍生物，其中一個(gè)或多個(gè)OH基團(tuán)經(jīng)OR置換，其中R表示多種部分中任-種。在其它實(shí)施例中，葡聚糖衍生物為葡聚糖已經(jīng)高碘酸鹽處理的含醛衍生物。應(yīng)了解，上文提及的葡聚糖衍生物中任一種的葡萄糖部分中有一些但非全部經(jīng)修飾(參看圖22)。一般來(lái)說(shuō)，可使用與上文關(guān)于HA或纖維素衍生物所述類似的方式制備可交聯(lián)葡聚糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，將葡聚糖或葡聚糖衍生物修飾以形成官能化纖維素衍生物，其包括能夠與適當(dāng)?shù)牡诙倌軋F(tuán)(例如，HA衍生物上的官能團(tuán))共價(jià)連接的官能團(tuán)，諸如胺、酰胺、醛、酯、羥基或酰肼。舉例來(lái)說(shuō)，如本文關(guān)于HA和纖維素所述，可通過(guò)氧化葡萄糖部分中的一些羥基以形成醛基來(lái)形成包含酸官能團(tuán)的葡聚糖衍生物。通過(guò)氧化葡萄糖部分的羥基以形成醛基所形成的葡聚糖衍生物在本文中稱為DX-CHO(參看圖22)。經(jīng)酰肼基團(tuán)修飾的羧甲基葡聚糖(CMDX)的衍生物稱為CMDX-ADH(參看圖22)。本發(fā)明提供一種包含溶液形式的葡聚糖衍生物的組合物，其中所述葡聚糖衍生物的濃度大于5mg/ml，例如高達(dá)150mg/ml。在某些實(shí)施例中，葡聚糖衍生物的濃度高于10mg/ml。在其它實(shí)施例中，葡聚糖衍生物的濃度高于15mg/ml、高于20mg/ml或高于25mg/ml。出于本發(fā)明的目的，高于25mg/ml的葡聚糖衍生物的濃度稱為"高濃度"。所述溶液優(yōu)選具有足夠低的粘度，因此其易于處理，例如由此易于注射。葡聚糖衍生物可為本文所述葡聚糖衍生物中的任一種。舉例來(lái)說(shuō)，葡聚糖衍生物可為DX-CHO或CMDX-ADH。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用包含二酰肼官能團(tuán)的HA或纖維素衍生物和包含醛基的葡聚糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，第一溶液可包含HA-ADH且第二溶液可包含DX-CHO。HA與葡聚糖衍生物交聯(lián)形成HA-DX。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用包含二酰肼官能團(tuán)的纖維素衍生物和包含醛基的葡聚糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，第一溶液可包含CMC-ADH且第二溶液可包含DX-CHO。另舉例來(lái)說(shuō)，第一溶液可包含CMDX-ADH且第二溶液可包含CMC-CHO。纖維素與葡聚糖衍生物交聯(lián)形成CMC-DX。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用包含二酰肼官能團(tuán)的葡聚糖衍生物和包含醛基的另一葡聚糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，第一溶液可包含CMDX-ADH且第二溶液可包含DX-CHO。纖維素與葡聚糖衍生物交聯(lián)形成CMDX-DX。應(yīng)了解，在上述實(shí)施例的任一個(gè)中，第一和第二多糖衍生物上僅一部分可用官能團(tuán)交聯(lián)?？赏ㄟ^(guò)例如適當(dāng)選擇多糖衍生物的分子量來(lái)控制交聯(lián)密度。例示性交聯(lián)密度在約1x106到約1x1()8mol/cm3的范圍內(nèi)。在某些實(shí)施例中，交聯(lián)密度在3-50x107mol/cm3的范圍內(nèi)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物在投與之前形成為水凝膠微米顆粒而非以溶液形式投與。水凝膠顆?？蓱腋∮谝后w介質(zhì)屮并且投與至體內(nèi)位置處。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，至少一種適于原位交聯(lián)形成抑制粘連和/或用于本文所述其它目的的組合物的多糖衍生物包含含非多糖聚合物的一部分，例如，所述多糖衍生物包含與一種或多種非多糖聚合物共價(jià)連接的多糖或其衍生物。非多糖意思指所述聚合物含有以重量、數(shù)量或二者計(jì)不到1%的糖單體，例如所述聚合物基本上不含糖。在本發(fā)明某些實(shí)施例巾，非多糖部分包含以重量計(jì)介于1%與10%-90%之間的聚合物，和/或介于1%與10%-90%之間的單體為非糖單體。連接可發(fā)生于多糖鏈中任一位置處，例如所述鏈的任一端或產(chǎn)生線性或分枝結(jié)構(gòu)的內(nèi)部定位的糖部分的一者處。非多糖聚合物可為多種聚合物中任一種，例如當(dāng)與多糖衍生物共價(jià)連接時(shí)能夠用作水凝膠前體的任何非多糖聚合物。通常，所述聚合物為親水性聚合物，即其對(duì)水具親和力且其可溶于水中。適當(dāng)?shù)姆嵌嗵蔷酆衔锇?但不限于)聚醚(諸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG))、聚氧化乙烯(PEO)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、多肽(諸如，明膠、聚(l-谷氨酸)、聚賴氨酸(PLL))和這些物質(zhì)中任一種的衍生物或包含這些物質(zhì)中任一種的連結(jié)物、摻合物或復(fù)合物。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施例中，至少一種多糖衍生物為共價(jià)連接PEG或PEG衍生物的HA衍生物，其中HA部分或PEG部分包含第一官能團(tuán)。第二多糖衍生物可為包含與第一官能團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)的任何多糖衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施例中，HA衍生物為PEG-HA-ADH，且第二多糖衍生物包含與二酰肼反應(yīng)的官能團(tuán)，例如HA-CHO。包含促進(jìn)形成共價(jià)鍵的適當(dāng)官能團(tuán)的多種PEG衍生物在市面有售。例如參看，內(nèi)克塔先進(jìn)聚乙二醇化2005-2006產(chǎn)品目錄(NektarAdvancedPegylation2005-2006ProductCatalog),內(nèi)克塔治療公司(NektarTherapeutics),力口州圣卡洛斯(SanCarlos,CA)，其描述多種所述化合物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用第一和第二可交聯(lián)水凝膠前體，其中一種水凝膠前體包含諸如HA、纖維素或葡聚糖衍生物等多糖衍生物或由諸如HA、纖維素或葡聚糖衍生物等多糖衍生物組成，且另一水凝膠前體包含非多糖聚合物或由非多糖聚合物組成(即，不到1重量％聚合物或不到1%單體為糖)。能夠與多糖衍生物交聯(lián)形成水凝膠的例示性非多糖聚合物包括(但不限于)聚醚(諸如聚乙二醇(PEG)或聚丙二醇(PPG))、聚氧化乙烯(PEO)、聚乙烯醇(PVA)、聚乙烯吡咯垸酮(PVP)、多肽(諸如，明膠、殼聚糖或聚(l-谷氨酸))和這些物質(zhì)中任一種的衍生物或包含這些物質(zhì)中任一種的連結(jié)物、摻合物或復(fù)合物。在例示性實(shí)施例中，第一可交聯(lián)水凝膠前體為HA-ADH且第二可交聯(lián)水凝膠前體為包含醛基的PEG衍生物。盡管在本文中已詳細(xì)描述多糖衍生物以例示說(shuō)明本發(fā)明，但在本發(fā)明其它實(shí)施例中，水凝膠是由原位交聯(lián)兩種非多糖聚合物從而產(chǎn)生抑制粘連的水凝膠來(lái)形成。各非多糖聚合物包含官能團(tuán)，其中所述官能團(tuán)能夠相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵。適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)為上文關(guān)于交聯(lián)多糖衍生物所述的官能團(tuán)。例示性非多糖聚合物包括上文所述的含有或經(jīng)修飾以含有供交聯(lián)的適當(dāng)官能團(tuán)的聚合物。II.包含可交聯(lián)多糖衍生物和生物活性劑的組合物本發(fā)明另外提供如上文所述的組合物，其中水凝膠是由交聯(lián)水凝膠前體從而產(chǎn)生包含生物活性劑的水凝膠形成。舉例來(lái)說(shuō)，含有第一多糖衍生物的溶液、含有第二多糖衍生物的溶液或二者包含一種或多種生物活性劑。因此，由交聯(lián)第一與第二多糖衍生物所形成的水凝膠含有一種或多種生物活性劑。在本發(fā)明一些實(shí)施例中，所述溶液各自包含不同生物活性劑。由此形成的水凝膠含有兩種或兩種以上生物活性劑?；蛘?，可將含有第一和第二水凝膠前體的溶液與一種或多種各自含有一種或多種生物活性劑的其它溶液組合。在另一實(shí)施例中，將生物活性劑立即添加到由組合第一與第二溶液所形成的組合物中。多糖衍生物可例如為HA衍生物、纖維素衍生物、葡聚糖衍生物等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一與第二多糖衍生物為HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一與第二多糖衍生物為纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一與第二多糖衍生物為葡聚糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物為HA衍生物且第二多糖衍生物為纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物為HA衍生物且第二多糖衍生物為葡聚糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一多糖衍生物為纖維素衍生物且第二多糖衍生物為葡聚糖衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，水凝膠是由三種或三種以上多糖衍生物形成。HA衍生物、纖維素衍生物、葡聚糖衍生物、其它多糖衍生物或其它聚合物的任何組合可交聯(lián)形成本發(fā)明的水凝膠。由交聯(lián)多糖衍生物所形成的水凝膠中可包括任何生物活性劑。因此本發(fā)明提供含有多種生物活性劑中任一種的水凝膠。本發(fā)明另外提供一種溶液，其含有諸如HA、纖維素或葡聚糖衍生物等多糖衍生物和多種生物活性劑中任一種。本發(fā)明另外提供一種制備包含生物活性劑的水凝膠的方法，所述方法包含以下步驟使包含第一多糖衍生物的第一溶液與包含第二多糖衍生物的第二溶液相互接觸，其中所述溶液中至少一種包含生物活性劑，且其中所述第一和第二多糖衍生物包含相互交聯(lián)的官能團(tuán)。本發(fā)明另外提供一種制備包含生物活性劑的水凝膠的方法，所述方法包含以下步驟使包含第一多糖衍生物的第一溶液、包含第二多糖衍生物的第二溶液與生物活性劑相互接觸，其中所述第一和第二多糖衍生物包含相互交聯(lián)的官能團(tuán)。生物活性劑視情況為溶液形式。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，通過(guò)將所述溶液投與個(gè)體來(lái)制備水凝膠，其中所述水凝膠前體相互交聯(lián)形成封裝生物活性劑的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑為治療劑。有用的生物活性劑種類包括抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑(例如細(xì)胞毒性劑)、抗腫瘤劑(即，抑制或預(yù)防惡性細(xì)胞增殖和/或抑制或預(yù)防腫瘤生長(zhǎng)或擴(kuò)散的藥劑)、止痛劑(即緩解疼痛的藥劑)、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑(即，抑制或預(yù)防血栓形成但不溶解現(xiàn)有血栓的藥劑，也稱為抗血栓形成劑)、蛋白水解劑或增強(qiáng)蛋白水解的藥劑(其中一些也為抗血栓形成劑)、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑(例如，抗TGF-P劑、D-青霉胺、己酮可可堿(pentoxifyllin))等。其它有用的治療劑種類包括催眠藥、鎮(zhèn)靜劑、安定劑、抗驚厥劑、肌肉松弛劑、鎮(zhèn)痙劑、擬交感神經(jīng)藥、心血管類藥物(例如，抗心律失常藥、正性肌力藥物)等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑不為麻醉劑。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑不為抗增殖劑。在某些實(shí)施例中，生物活性劑為消炎劑。在某些實(shí)施例中，生物活性劑為非甾體消炎劑。在其它實(shí)施例中，生物活性劑為甾體消炎劑(例如糖皮質(zhì)激素、皮質(zhì)類甾醇)。優(yōu)選添加一定量生物活性物質(zhì)，所述量為當(dāng)將適量包含多糖衍生物和/或非多糖聚合物的溶液投與個(gè)體時(shí)醫(yī)藥學(xué)有效的量，其可變化。所述藥劑可抑制或不可抑制粘連。應(yīng)了解，一些藥劑不只屬于一類且可具有多種作用機(jī)制。不打算將特定藥劑的列表限制為一個(gè)類別的成員。用于本發(fā)明中的例示性抗感染劑的類別為喹諾酮、(3-內(nèi)酰胺(例如，青霉素33(penicillin)或頭孢菌素(cephalosporin))、碳青霉烯(carbapenem)、氨基糖苷、大環(huán)內(nèi)酯、林可酰胺(lincosamide)、酮內(nèi)酯、四環(huán)素、甘氨酰環(huán)素、林可霉素、噁唑烷酮、酰胺醇(amphenicol)、安莎霉素(ansamycin)、多粘菌素(polymyxin)、氨甲環(huán)素(aminomethlycycline)、林可酰胺、鏈陽(yáng)性菌素(streptogramin)、2，4-二氨基嘧啶、硝基呋喃、磺酰胺、砜、利福布汀(rifabutin)、氨苯砜(dapsone)、肽、糖肽和核苷類似物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，抗感染劑為針對(duì)多種細(xì)菌物種具有廣譜活性的藥劑。在一些實(shí)施例中，所述藥劑對(duì)一種或多種革蘭氏陽(yáng)性細(xì)菌(grampositivebacteria)物種、一種或多種革蘭氏陰性細(xì)菌物種或二者有效。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述藥劑對(duì)可能會(huì)污染手術(shù)創(chuàng)口或損傷的細(xì)菌或真菌有效。舉例來(lái)說(shuō)，所述藥劑對(duì)通常見(jiàn)于皮膚上或胃腸道中的細(xì)菌或真菌有效?？墒褂玫奶囟垢腥緞┑膶?shí)例包括(但不限于)紅霉素(erythromycin)、萘夫西林(nafcillin)、頭孢唑林(cefazolin)、亞胺培南(imipenem)、氨曲南(aztreonam)、慶大霉素(gentamicin)、磺胺甲噁唑(sulfamethoxazole)、萬(wàn)古霉素(vancomycin)、環(huán)丙沙星(ciprofloxacin)、甲氧節(jié)P定(trimethoprim)、禾廿福平(rifampin)、甲石肖挫(metronidazole)、克林霉素(clindamycin)、替考拉寧(teicoplanin)、莫匹羅星(mupirocin)、阿奇霉素(azithromycin)、克拉霉素(clarithromycin)、氧氟沙星(ofloxacin)、洛美沙星(lomefloxacin)、諾氟沙星(norfloxacin)、萘啶酮酸(nalidixicacid)、司帕沙星(sparfloxacin)、培氟沙星(pefloxacin)、氨氟沙星(amifloxacin)、加替沙星(gatifloxacin)、莫西沙星(moxifloxacin)、吉米沙星(gemifloxacin)、依諾沙星(enoxacin)、氟羅沙星(fleroxacin)、美滿霉素(minocycline)、利奈唑酮(linezolid)、替馬沙星(temafloxacin)、托氟沙星(tosufloxacin)、克林沙星(clinafloxacin)、舒巴坦(sulbactam),克拉維酸(clavulanicacid)、兩性霉素B(amphotericinB)、氟康唑(fluconazole)、伊曲康唑(itraconazole)、酮康唑(ketoco腿ole)禾口制霉菌素(nystatin)。用于本發(fā)明中的消炎劑的例示性種類包括多種非甾體消炎劑(例如，環(huán)氧化酶-l抑制劑)、皮質(zhì)類甾醇、糖皮質(zhì)激素和消炎抗體或多肽。例示性消炎劑包括潑尼松、地塞米松、氟米龍(fluorometholone)、潑尼松龍(prednisolone)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、氯倍他索(clobetasol)、鹵貝他索(halobetasol)、氫化可的松(hydrocortisone)、曲安奈德(triamcinolone)、倍他米松(betamethasone)、膚輕松(fluocinolone)、氟西柰德(fluoci廳ide)、氯替潑諾(loteprednol)、甲羥松(medrysone)、利美索龍(rimexolone)、塞來(lái)考昔(cele醒ib)、葉酸(folicacid)、雙氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳(difiunisal)、菲諾洛芬(fen叩rofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮洛芬(ketoprofen)、甲氯芬那酸鹽(meclofenamate)、甲氯方酸鹽(meclofamate)、吡羅昔康(piroxicam)、舒林酸(sulindac)、水楊酸水楊酸酯(salsalate)、萘丁美酮(nabumetone)、奧沙普秦(oxaprozin)、托美汀(tolmetin)、硫酸羥基氯喹(hydroxychloroquinesulfate)、羅夫考克斯(rofecoxib)、依那西普(etanercept)、因福利美(infliximab),來(lái)氟米特(lefiunomide)、萘普生(naproxen)、奧沙普秦(oxaprozin)、吡羅昔康(piroxicam)、水楊酸鹽(salicylates)、伐地考昔(valdecoxib)、柳氮磺吡啶(sulfasalazine)、甲基潑尼松龍(methylprednisolone)、布洛芬(ib叩rofen)、布地奈德(budesonide)、美洛昔康(meloxicam)、醋酸甲基潑尼松(methylprednisoloneacetate)、金硫丁二鈉(goldsodiumthiomalate)、阿司匹林(aspirin)、硫唑嘌呤(azathioprine)、醋酸曲安奈德(triamcinoloneacetonide)、萘磺酸右丙氧芬/乙酰氨基酚(propxyphenenapsylate/apap)、口十酸鹽(folate)、萘『美酮(nabumetone)、雙氯芬酸(diclofenac).酮咯酸(ketorolac),吡羅昔康(piroxicam)、依托度酸(etodolac)、雙氯芬酸鈉(diclofenacsodium)、雙氯芬酸鉀(diclofenacpotassium)、奧沙普秦(oxaprozin)、甲氨蝶呤(methotrexate)、美滿霉素(minocycline)、他克莫司(tacrolimus)(FK-506)、西羅莫司(sirolimus)(雷帕霉素(rapamycin))和雷帕霉素類似物、保泰松(phenylbutazone)、雙氯芬酸鈉/米索前列醇(diclofenacsodium/misoprostol)、乙酰氨基酚(acetaminophen)、卩引哚美辛(indomethacin)、硫酸葡糖胺/軟骨素(glucosaminesulfate/chondroitin)和環(huán)孢霉素(cyclosporine)或其類似物等。例示性非甾體消炎劑(NSAID)包括塞來(lái)考昔、雙氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、水楊酸鹽、菲諾洛芬、布洛芬、氟比洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯方酸鹽、甲氯芬那酸鹽、美洛昔康、萘普生、吡羅昔康、舒林酸、水楊酸水楊酸酯、萘丁美酮、阿司匹林、奧沙普秦和托美汀。例示性甾體消炎劑包括地塞米松、氟米龍、潑尼松龍、氯替潑諾、甲羥松、潑尼松、甲基潑尼松、可的松、布地奈德、利美索龍、氯倍他索、鹵貝他索、氫化可的松、曲安奈德、倍他米松、膚輕松和氟西柰德。值得關(guān)注的其它消炎劑包括結(jié)合TNF-ct的抗體(例如，因福利美，類克@(Remicade))和作為可溶性TNF-a受體的多肽(例如，依那西普，恩博@(Enbrd⑧))。消炎劑的其它實(shí)例為抑制細(xì)胞因子的消炎藥物(cytokinesuppressiveantiinflammatorydrug,CSAID);抗TNFa抗體(例如參看美國(guó)公開(kāi)案第20040126372號(hào)，其以引用的方式并入本文中)；cA2/因福利美(嵌合抗TNF(x抗體；森托克公司(Centocor));IL-4(消炎細(xì)胞因子;IL-IO、IL-10禾口/或IL-4激動(dòng)齊U(例如，激動(dòng)劑抗體或小分子)；IL-l受體拮抗劑；TNF-bp/s-TNF(可溶性TNF結(jié)合蛋白)；磷酸二酯酶IV型抑制劑；沙利度胺(thalidomide)和沙利度胺相關(guān)藥物；來(lái)氟米特(leflunomide);氨甲環(huán)酸(tranexamicadd)和其它纖溶酶原活化抑制劑；前列腺素El、替尼達(dá)普(tenidap)、抗IL-12抗體；抗IL-18抗體；白細(xì)胞介素-ll;白細(xì)胞介素-13;白細(xì)胞介素-17抑制劑；金；青霉胺；氯喹(chloroquine);羥基氯喹；苯丁酸氮芥(chlorambucil);環(huán)磷酰胺(cyclophosphamide);環(huán)孢霉素；全身淋巴結(jié)照射；抗胸腺細(xì)胞球蛋白；抗CD4抗體；CD5-毒素；經(jīng)口投與的肽和膠原蛋白；氯苯扎利二鈉(lobenzaritdisodium);ICAM-1短干擾RNA(siRNA)或反義寡核苷酸可溶性互補(bǔ)受體l。用于本發(fā)明中的血管生成抑制劑包括抑制或拮抗血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)或其受體的藥劑(在本文中稱為"抗VEGF劑")。有用的藥劑例如包括結(jié)合一種或多種VEGF同功異型物或VEGF受體的抗體、抗體片段和核酸。所述結(jié)合可例如抑制一種或多種VEGF同功異型物與其受體之間的相互作用。阿瓦斯丁(Avastin)(基因泰克公司(Genentech))是一種也結(jié)合VEGF的全長(zhǎng)人化抗體(評(píng)論于費(fèi)拉拉N.(Ferrara,N.)內(nèi)分泌學(xué)評(píng)論(E油cr尺ev.),25(4):581-611，2004中)。盧森替斯(Lucentis)(基因泰克公司)是一種結(jié)合且抑制血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子A(VEGF-A)的人化抗體片段。(戈德羅J.(Gaudreault,J.)等人，眼科學(xué)研究與視力學(xué)(/"vewOpAf/w/mo/.V!i)46,726-733(2005)和其中的參考文獻(xiàn))。馬庫(kù)根(Macugen)(輝瑞公司(Pfizer)，安娜泰克公司(Eyetech))是一種結(jié)合且抑制VEGF165的VEGF核酸配體(也稱為適體)(美國(guó)專利第6,051,698號(hào))。結(jié)合--1中或多種VEGF同功異型物的這些和其它適體或抗體都可用于本發(fā)明中。其它血管生成抑制劑包括各種內(nèi)源或合成肽，諸如血管抑素(angiostatin)、艾瑞斯坦(arresten)、坎斯他汀(canstatin)、科姆他汀(combstatin)、內(nèi)皮抑素(endostatin)、凝血栓蛋白(thrombospondin)和腫瘤抑素(tumstatin)。其它抗血管生成分子包括沙利度胺和其抗血管生成衍生物，諸如iMiD(芭密斯A(BamiasA)，季莫普洛斯(DimopoulosMA.)歐洲國(guó)際醫(yī)學(xué)雜志(EurJInternMed.)14(8):459-469,2003;巴利特JB(BartlettJB)，德瑞吉K(DredgeK)，戴雷希AG.(DalgleishAG.)癌癥自然評(píng)論(iVflf/evOmc")4(4):314-22，2004)?？乖鲋硠┑睦拘苑N類包括垸化劑、磺酸垸酯、氮丙啶、乙撐亞胺和甲基密胺(methylamelamine)、氮芥、抗生素、抗代謝物、葉酸類似物、嘌呤類似物、嘧啶類似物、雄激素、抗雄激素、抗腎上腺、阿拉伯糖苷、抗雌激素、紫杉垸、鉑類似物、微管抑制劑(例如微管解聚劑或穩(wěn)定劑)、拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑、組蛋白脫乙酰化酶(HDAC)抑制劑、聚集體抑制劑、蛋白酶體抑制劑、促凋亡劑、激酶抑制劑、放射性同位素、動(dòng)物、植物或細(xì)菌毒素等。屬于這些種類的藥劑的特定實(shí)例包括垸基化劑，諸如噻替哌(thiotepa)和環(huán)磷酰胺(cyclosphosphamide);磺酸烷酯，諸如白消安(busulfan)、英丙舒凡(improsulfan)和哌泊舒凡(piposulfan);氮丙啶，諸如苯并多巴(benzodopa)、卡波醌(carboquone)、麥曲多巴(meturedopa)和尤利多巴(uredopa);乙撐亞胺和甲基密胺，包括六甲蜜胺(altretamine)、曲他胺(triethylenemelamine)、三亞乙基磷酰月安(trietylenephosphoramide)、三亞乙基硫代磷酰胺(triethiylenethiophosphoramide)和三羥甲基密胺(trimethylolomelamine);氮芥(nitrogenmustard),諸如苯丁酸氮芥(chlorambucil)、萘氮芥(chlornaphazine)、鉻磷酰胺(cholophosphamide)、雌莫司汀(est醒ustine)、異環(huán)磷酰胺(ifosfamide)、氮芥(mechlorethamine)、氧化氮芥鹽酸鹽(mechlorethamineoxidehydrochloride)、美法侖(melphalan)、新恩比興(novembichin)、苯芥膽甾醇(phenesterine)、潑尼莫司汀(prednimustine)、曲磷胺(trofosfamide)、尿嘧啶芥子氣(uracilmustard);硝基脲(nitrosurea)，諸如卡莫司汀(ca腿stine)、氯脲霉素(chlorozotocin)、福莫司汀(fotemustine)、洛莫司汀(lomustine)、尼莫司汀(nimustine)和雷莫司汀(ranimnustine);抗生素，諸如阿克萊諾霉素(aclacinomysin)、放線菌素(actinomycin)、奧瑟霉素(authramycin)、偶氮絲氨酸(azaserine)、博萊霉素(bleomycin)、放線菌素C(cactinomycin)、束lj抱毒素(calicheamicin)、卡洛比星(carabicin)、洋紅霞素(carminomycin)、嗜癌菌素(carzinophilin)、色霉素(chromomycinis)、放線菌素D(dactinomycin)、道諾霉素、地托比星(detombicin)、6-重氮基-5-氧代-L-正亮氨酸、多柔比星(doxorubicin)(阿霉素(Adriamycin))、表柔比星(epimbicin)、依索比星(esombicin)、伊達(dá)比星(idarubicin)、麻西羅霉素(marcellomycin)、絲裂霉素(mitomycin)、霉酚酸(mycophenolicacid)、諾拉霉素(nogalamycin)、橄欖霉素(olivomycin)、培洛霉素(peplomycin)、博替羅霉素(potfiromycin)、嘌霉素(puromycin)、奎拉霉素(quelamycin)、羅多比星(rodorubicin)、鏈黑霉素(streptonigrin)、鏈佐星(streptozocin)、殺結(jié)核菌素(tubercidin)、烏苯美司(ubenimex)、凈司他丁(zinostatin)、左柔比星(zorubicin);抗代謝物，諸如甲氨喋呤和5-氟尿嘧啶(5-FU);葉酸類似物，諸如迪諾特寧(denopterin)、甲氨蝶呤、蝶羅呤(pteropterin)、三甲曲沙(trimet隨te);嘌呤類似物，諸如氟達(dá)拉賓(fludarabine)、6-巰基嘌呤、硫咪嘌呤(thiamiprine)、硫鳥嘌呤(thioguanine);嘧啶類似物，諸如安西他濱(ancitabine)、阿扎胞苷(azacitidine)、6-硫唑嘧啶、卡莫氟(carmofur)、阿糖胞苷(cytarabine)、雙脫氧尿苷(dideoxyuridine)、脫氧氟尿苷(doxifluridine)、依諾他濱(enocitabine)、氮尿苷(floxuridine)、5-FU;雄激素，諸如卡普睪酮(calusterone)、丙酸屈他雄酮(dromostanolonepropionate)、環(huán)硫雄醇(epitiostanol)、美雄烷(mepitiostane)、睪內(nèi)酪(testolactone);抗雄激素，例如雄激素受體拮抗劑，諸如螺內(nèi)酯(spironolactone),氟他胺(flutamide)、非那雄胺(finasteride);抗腎上腺素，諸如氨魯米特(aminoglutethimide)、米托坦(mitotane)、曲洛司坦(trilostane);葉酸補(bǔ)充劑(folicacidreplenisher)，諸如葉酸；醋葡醛內(nèi)酯(aceglatone);醛磷酰胺糖苷(aldophosphamideglycoside);氨基乙酰丙酸(aminolevulinicacid);安吖啶(amsacrine);貝曲布辛(bestrabucil);比生群(bisantrene);伊達(dá)曲仙(edatraxate);德弗法明(defofamine);秋水仙胺(demecolcine);地吖醌(diaziquone);伊弗尼辛(elfornithine);依利醋銨(elliptiniumacetate);依托格魯(etoglucid);石肖酸鎵(galliumnitrate);羥基脲(hydroxyurea);香蔬多糖(lenti薩)；洛尼達(dá)寧(lonidainine);米托狐月宗(mitoguazone);米托蔥酉昆(mitoxantrone);莫口比丹莫(mopidanmol);尼曲伊寧((nitmerine);噴司他丁(pentostatin);蛋胺氮芥(phenamet);比柔比星(pirarubicin);足葉草酸(podophyllinicacid);2-乙基酰肼；丙卡巴肼(procarbazine);雷佐生(razoxane);西佐喃(sizofiran);鍺螺胺(spirogermanium);細(xì)交鏈孢菌酮酸(tenuazonicacid);三亞胺醌(triaziquone);2，2'，2"-三氯三乙胺；烏拉坦(urethan);長(zhǎng)春地辛(vindesine);達(dá)卡巴嗉(dacarbazine);甘露莫司汀(mannomustine);二溴甘露糖醇(mitobronitol);二溴衛(wèi)矛醇(mitolactol);哌泊溴烷(pipobroman);瓜西托辛(gacytosine);阿拉伯糖苷("Ara-C");噻替派；紫杉烷，例如紫杉醇(paclitaxel)和多西他賽(doxetaxel);苯丁酸氮芥；吉西他賓(gemcitabine);6-硫鳥嘌呤；巰基嘌呤；甲氨喋呤；鉑類似物，諸如順鉑(cisplatin)和卡鉑(carboplatin);鉬；依托泊苷(VP-16);異環(huán)磷酰胺(ifosfamide);絲裂霉素C;米托蒽醌(mitoxantrone);長(zhǎng)春新堿(vincristine);長(zhǎng)春花堿(vinblastine);長(zhǎng)春瑞賓(vinorelbine);諾維本(navelbine);諾凡特龍(novantrone);替尼泊苷(teniposide);道諾霉素；氨基喋呤(aminopterin);截瘤達(dá)(xeloda);伊班膦酸鹽(ibandronate);CPT-11;拓?fù)洚悩?gòu)酶抑制劑RFS2000;白喉毒素(diphtheriatoxin);蓖麻毒素(ricin);作i單胞菌毒素A(pseudomonastoxinA);芋螺毒素(conotoxin);二氟甲基鳥氨酸(礎(chǔ)uo醒ethylornithine(DMFO));視黃酸；埃斯波霉素(esperamicin);卡西他賓(capecitabine);HER-2抗體(赫賽?、?Herceptin));激酶抑制劑，諸如格列衛(wèi)@(Gleevec),和上述任何物質(zhì)的醫(yī)藥學(xué)上可接受的鹽、酸或衍生物。適用于本發(fā)明中的蛋白水解劑包括組織纖溶酶原活化劑(tPA)/纖溶酶級(jí)聯(lián)的組分。tPA/纖溶酶級(jí)聯(lián)的組分包括纖溶酶原活化劑，諸如組織纖溶酶原活化劑(tPA)和其變體、纖溶酶原和纖溶酶。纖溶酶原活化劑(PA)為通過(guò)裂解單一肽鍵(R561-V562)得到兩條保持二硫鍵橋連接的鏈來(lái)催化纖溶酶原轉(zhuǎn)化為纖溶酶(瓦薩里(Vassam)1991)的絲氨酸蛋白酶。纖溶酶是一種有效的絲氨酸蛋白酶，其在活體內(nèi)的主要底物為纖維蛋白(血栓的蛋白質(zhì)組分)。在存在纖維蛋白的情況下，tPA刺激纖溶酶原活化。纖溶酶具有多種底物并且能夠直接或間接裂解許多其它蛋白質(zhì)，包括ECM中所見(jiàn)的大部分蛋白質(zhì)。如此處所使用，"直接"意思指蛋白酶與經(jīng)裂解的多肽實(shí)體相互作用，而"間接"意思指蛋白酶不與經(jīng)裂解的多肽實(shí)體相互作用，而是其與另一分子(例如，另一蛋白酶)相互作用，所述另一分子再直接或間接裂解所述多肽。纖溶酶還能夠活化金屬蛋白酶前體。金屬蛋白酶又降解ECM分子。金屬蛋白酶也可用于本發(fā)明的某些實(shí)施例中。已在哺乳動(dòng)物中鑒別出兩種PA，組織型PA(tPA)和尿激酶型PA(uPA)。PA的主要生理學(xué)功能在于通過(guò)將纖溶酶原活化成降解纖維蛋白的纖溶酶來(lái)引發(fā)血栓溶解。用于本發(fā)明中的tPA可來(lái)自任何物種，但對(duì)于對(duì)人類投與來(lái)說(shuō)，通常優(yōu)選使用人類tPA或其變體。在特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，生物活性劑為tPA。如實(shí)例10中所述，含有tPA的水凝膠在粘滯粘連(諸如可在多發(fā)損害事件后形成的粘連)的情況下展現(xiàn)增加的抑制粘連的能力。tPA和其有用變體(包括具有改進(jìn)的特性的變體)描述于以下專利中美國(guó)專利第6,284,247號(hào)、第6,261,837號(hào)、第5,869,314號(hào)、第5,770,426號(hào)、第5,753,486號(hào)、第5,728,566號(hào)、第5,728,565號(hào)、第5,714,372號(hào)、第5,616,486號(hào)、第5,612,029號(hào)、第5,587,159號(hào)、第5,520,913號(hào)、第5，520,9U號(hào)、第5,411,871號(hào)、第5,385,732號(hào)、第5，262，170號(hào)、第5,185,259號(hào)、第5,兩，卯1號(hào)、第4,766,075號(hào)、第4,853,330號(hào)，和讓渡于基因泰克有限公司的其它專利。舉例來(lái)說(shuō)(但非限制)，tPA變體的蛋白酶結(jié)構(gòu)域相對(duì)于天然存在的tPA可具有變異，和/或相對(duì)于天然存在的tPA，可在N末端處具有一個(gè)或多個(gè)氨基酸的缺失。tPA變體相對(duì)于天然存在的tPA可具有一個(gè)或多個(gè)其它糖基化位點(diǎn)，和/或可具有破壞當(dāng)在真核細(xì)胞(例如哺乳動(dòng)物細(xì)胞)中表達(dá)時(shí)將通常存在于天然存在的tPA中的糖基化位點(diǎn)的變異?？捎杏玫奶匦园?但不限于)增加的半衰期、增加的活性、增加的對(duì)纖維蛋白的親和力或特異性等。已在恩特茲基因數(shù)據(jù)庫(kù)(EntrezGenedatabase)(美國(guó)國(guó)家生物技術(shù)信息中心(NationalCenterforBiotechnologyInformation,NCBI))中賦予人類tPA基因ID5327,且全長(zhǎng)氨基酸、mRNA和基因序列的基因庫(kù)登錄號(hào)分別為AAA98809、K03021和NM一000930。然而，應(yīng)注意，如(例如)美國(guó)專利第4,853,330號(hào)中所述，優(yōu)選使用缺乏信號(hào)肽序列的tPA的成熟形式，或其變體。具有tPA作為成員的胰凝乳蛋白酶家族絲氨酸蛋白酶通常是以單鏈蛋白質(zhì)的形式分泌，并且通過(guò)蛋白水解裂解多肽鏈中的特定位點(diǎn)產(chǎn)生兩條鏈的形式來(lái)活化。對(duì)于纖溶酶原，單鏈與兩條鏈的形式都具活性，但兩條鏈形式的活性較高。纖溶酶將單鏈tPA活化39成兩條鏈的形式，由此產(chǎn)生正反饋環(huán)。tPA的單鏈或兩條鏈形式或其組合都可用于本發(fā)明中。tPA和其變體在市面有售且已批準(zhǔn)用于投與人類以針對(duì)各種病狀。舉例來(lái)說(shuō)，阿替普酶(活化酶@(Activase)，基因泰克公司，加州南圣弗朗西斯(SouthSanFranciso，CA))為重組人類tPA。瑞替普酶(Reteplase)(瑞替普酶@(1^3\^6@)、瑞芬太尼@(1^1^111@);伯林格-曼海姆(BoehringerMannheim),羅氏森托羅(RocheCentoror))為人類tPA的重組非糖基化形式，其中所述分子已經(jīng)基因工程改造成含有原始蛋白質(zhì)的527個(gè)氨基酸中的355個(gè)。替奈替普酶(Tenecteplase)(TNKase,基因泰克公司)為人類tPA的527個(gè)氨基酸的糖蛋白衍生物，其與天然人類tPA的不同之處在于具有三個(gè)氨基酸取代。這些取代使血漿清除率降低，增加纖維蛋白結(jié)合(且由此增加纖維蛋白特異性)并且增加對(duì)纖溶酶原活化劑抑制劑-1(PAI-1)的抗性。阿尼普酶(Anistreplase)(阿尼普酶(Eminase),史克必成公司(SmithKlineBeecham))為另一市售人類tPA。其它纖溶酶原活化劑包括鏈激酶(5^1386@、]^1^1^35￡@)和尿激酶(八131)0^肌56@)，二者都為市售。用于本發(fā)明中的其它蛋白水解增強(qiáng)劑包括tPA活化劑，諸如吸血蝠(D"mMwra/tm^w)唾液纖溶酶原活化劑(DSPA)去氨普酶(Desmoteplase)(帕隆公司(Paion)，德國(guó)(Germany)),其來(lái)源于吸血蝙蝠的唾液(利伯拉托GT(LiberatoreGT)等人，吸血蝙蝠纖溶酶原活化劑(去氨普酶)不促進(jìn)神經(jīng)降解的獨(dú)特纖溶酶(Vampirebatsalivaryplasminogenactivator(desmoteplase):auniquefibrinolyticenzymethatdoesnotpromoteneurodegeneration.)中風(fēng)(Stroke.)2003年2月；34(2):537-43;其以引用的方式并入本文中)。已表征出四種截然不同的蛋白酶且稱為吸血蝠唾液纖溶酶原活化劑(DSPA)。全長(zhǎng)吸血蝙蝠纖溶酶原活化劑(DSPA1)為最深入研究的變體且其展現(xiàn)與人類tPA的大于72%的氨基酸序列一致性。然而，兩個(gè)重要的功能差異是顯而易見(jiàn)的。首先，DSPA是以無(wú)法裂解成2條鏈形式的單鏈分子形式存在。其次，DSPA的催化活性似乎視纖維蛋白輔助因子而定。諸如瑞斯普酶(resc叩ase)(薩魯普酶@(Saruplase),格蘭泰公司(Grunenthal))和微纖溶酶(microplasmin)(—種纖溶酶原的裂解產(chǎn)物)的尿激酶纖溶蛋白活化劑也可用于本發(fā)明各個(gè)實(shí)施例中。阿非普酶(Alfimeprase)(努瓦羅公司(Nuvelo))為用于本發(fā)明中的另一蛋白水解增強(qiáng)劑。阿非普酶是重組產(chǎn)生的蛇毒纖溶酶(fibrolase)(—種已知首先從南部銅頭蝮蛇(Agkistrodoncontortrixcontortrix)的蛇毒中分離的直接纖溶鋅金屬蛋白酶)的截短形式(圖伯斯CF.(ToombsCF.)(2001)阿非普酶用于溶解血栓的新穎纖溶金屬蛋白酶的藥理學(xué)(Ammeprase:pharmacologyofanovelfibrinolyticmetalloproteinaseforthrombolysis.)止血學(xué)(Haemostasis.)31(3-6):141-7，其以引用的方式并入本文中)。這些酶直接裂解纖維蛋白。蛇毒纖溶酶本身也可用于本發(fā)明中。葡激酶(staphylokinase)和鏈道酶(streptodornase)也有用。在本發(fā)明一些實(shí)施例中，投與纖溶酶或微型纖溶酶(mini-plasmin)來(lái)替代tPA，或除投與tPA外還投與纖溶酶或微型纖溶酶。也可使用具有類纖溶酶活性的多種其它藥劑。一般來(lái)說(shuō)，所述物質(zhì)能夠裂解典型纖溶酶底物，諸如合成底物S-225FM(卡羅摩吉儀表實(shí)驗(yàn)室(Chromogenix-InstrumentationLaboratory),意大利米蘭(Milan,Italy)),其為通常用于纖溶酶和活性纖溶酶原的分析產(chǎn)色底物。也可使用具有類tPA活性的其它藥劑，例如其能夠裂解纖溶酶原并且以與tPA類似的方式使其活化。蚓激酶(Lumbrokinase)為來(lái)源于蚯蚓粉正蚓(Lwnfcn'cwra&〃"s)的纖溶酶或一組酶。例如參看，有關(guān)編碼蚓激酶的基因(PI239,基因庫(kù)登記號(hào)第AF433650號(hào))克隆的報(bào)道(葛(Ge)等人，(2005)來(lái)自蚯蚓的溶解血栓的酶(蚓激酶)的克隆和其在酵母畢赤巴斯德酵母中的表達(dá)(Cloningofthrombolyticenzyme(lumbrokinase)fromearthwormanditsexpressionintheyeastPichiapastoris.)蛋白質(zhì)表達(dá)禾口純化(ProteinExprPurif.)2005年7月;42(1):20-8,其以引用的方式并入本文中)。從蚯蚓中分離的其它纖溶蛋白酶也有用(喬(Cho，IH)等人，(2004)來(lái)Q蚯蚓粉正蚓的六種纖溶絲氨酸蛋白酶的純化和表征(Purificationandcharacterizationofsixfibrinolyticserine-proteasesfromearthwormLumbdcusrubellus.)生物化學(xué)與分子生物學(xué)雜志(JBiochemMolBiol.)2004年3月31;37(2):199-205，其以引用的方式并入本文中)。也使用納豆激酶(nattokinase)。已從各種蠕蟲、昆蟲和寄生蟲中分離出的多種纖溶酶也可使用。舉例來(lái)說(shuō)，失穩(wěn)酶(destabilase)(—種存在于水蛭中的酶)水解纖維蛋白交聯(lián)(扎瓦洛瓦L.(Zavalova，L.)，(1996)來(lái)自醫(yī)用水蛭(歐洲醫(yī)蛭)的編碼特異性裂解內(nèi)切型-s(Y-Glu)-Lys異肽鍵且?guī)椭芙擒娧獧z的不常見(jiàn)醇的基因(Genesfromthemedicinalleech(Hirudomedicinalis)codingforunusualenzymesthatspecificallycleaveendo-epsilon(gamma-Glu)-Lysisopeptidebondsandhelptodissolvebloodclots.)分子和普通遺傳學(xué)(MolGenGenet.)253(1-2):20-5;扎瓦洛瓦L.等人，(2002)來(lái)自水蛭的纖維蛋白原-纖維蛋白系統(tǒng)調(diào)控劑(Fibrinogen-fibrinsystemregulatorsfrombloodsuckers.)生物化學(xué)(莫斯禾斗)(Biochemistry(Mosc))67(l):135-42，其各自以引用的方式并入本文中)。在本發(fā)明一些實(shí)施例中，投與纖溶酶原來(lái)替代tPA,或除投與tPA外還投與纖溶酶原。其它蛋白水解劑或增強(qiáng)蛋白水解的藥劑包括木瓜蛋白酶、鏈蛋酶(papase)、胃蛋白酶、胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶和透明質(zhì)酸酶。具有抗凝或抗血栓形成活性的其它藥劑包括肝素(heparin)、水蛭素(himdin)、安克洛酶(ancrod)、雙香豆素(dicumarol)、辛奇瑪(sincumar)、伊洛前列素(iloprost)、L-精氨酸、二比米達(dá)()dipyramidole)和其它血小板功能抑制劑、聚醚(諸如聚氧化乙烯)等。自由基清除劑或抗氧化劑包括維生素A、維生素E、別嘌呤醇(all叩urinol)、超氧化物歧化酶、二甲亞砜、過(guò)氧化氫酶(catalase)、曲美他嗪(tremetazidine)、抗壞血酸(維生素C)、亞甲藍(lán)(methyleneblue)、拉扎羅德(lazaroid)、錳-去鐵敏(mangan-desferoxamine)。止痛劑包括局部麻醉劑(例如，鈉通道阻斷劑)；中樞作用劑，諸如麻藥(例如鴉片劑，諸如嗎啡(morphine));非甾體消炎劑；吡唑啉酮和水楊酸衍生物；對(duì)乙酰氨基酚(乙酰氨基酚)；曲馬多(tramadol)等。使用通常不認(rèn)為是止痛劑的一些其它種類的藥物治療神經(jīng)病理性疼痛，例如三環(huán)抗抑郁劑和某些抗驚厥劑等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑為通過(guò)RNAi干擾機(jī)制抑制基因表達(dá)的藥劑。RNAi是一種由含有通常約17-29個(gè)核苷酸長(zhǎng)、例如約19-21個(gè)核苷酸長(zhǎng)的雙鏈部分和視情況一個(gè)或兩個(gè)單鏈突出的短核酸引發(fā)的內(nèi)源性細(xì)胞序列特異性基因沉默機(jī)制，其中所述雙鏈部分的一條鏈對(duì)應(yīng)于靶基因且與其互補(bǔ)(香卡P.(Shankar,P.)等人，JAMA.(2005)293(11):1367-73，其以引用的方式并入本文屮)。能夠通過(guò)RNAi引起基因沉默的藥劑(在本文中稱為RNAi劑)包括短干擾RNA(siRNA)和可在細(xì)胞內(nèi)加工產(chǎn)生siRNA的分子，諸如短發(fā)夾RNA(shRNA)。多種RNAi劑可引發(fā)mRNA的序列特異性降解或抑制翻譯。在一個(gè)實(shí)施例中，RNAi劑為包含兩個(gè)互補(bǔ)核酸鏈的siRNA，其中一條鏈與靶基因互補(bǔ)，其中所述鏈為約19-23個(gè)核苷酸長(zhǎng)且各鏈包含1-3核苷酸長(zhǎng)的3'突出。應(yīng)了解，無(wú)需RNAi劑與靶基因之間或RNAi劑雙鏈體兩部分之間最佳互補(bǔ)，只要存在足夠的互補(bǔ)性以允許雜交發(fā)生即可?；パa(bǔ)程度通常將為在至少15個(gè)連續(xù)核苷酸內(nèi)至少80%、至少90%或更多。在某些實(shí)施例中，RNAi劑含有至少19個(gè)核苷酸長(zhǎng)具有0、1、2或3個(gè)錯(cuò)配的雙鏈體，其中所述鏈中一條鏈與靶基因雜交形成至少19個(gè)核苷酸長(zhǎng)具有0、1、2或3個(gè)錯(cuò)配的雙鏈體。應(yīng)了解，盡管內(nèi)源合成的RNAi劑通常是由RNA構(gòu)成，但使用化學(xué)合成產(chǎn)生的RNAi劑除由磷酸二酯鍵連接的核糖核苷酸外還可包括一個(gè)或多個(gè)脫氧核糖核苷酸或核苷酸類似物、經(jīng)修飾主鏈結(jié)構(gòu)等，或可包括一個(gè)或多個(gè)脫氧核糖核苷酸或核苷酸類似物、經(jīng)修飾主鏈結(jié)構(gòu)等替代由磷酸二酯鍵連接的核糖核苷酸。本發(fā)明提供一種將RNAi劑傳遞到個(gè)體的新穎方法，所述方法包含以下步驟將第一和第二水凝膠前體與RNAi劑投與個(gè)體，其中所述水凝膠前體在投與所述個(gè)體后交聯(lián)形成水凝膠，其中所述水凝膠封裝RNAi劑。本發(fā)明另外提供含有RNAi劑的組合物。所述組合物可為水凝膠或含有本文所述的水凝膠前體的溶液中的任一種。水凝膠組合物可用于將RNAi劑局部傳遞到體內(nèi)多個(gè)位置的任一處，例如腹盆腔、關(guān)節(jié)間隙、中樞或周圍神經(jīng)系統(tǒng)或其一部分(例如，腦、脊髓、周圍神經(jīng))。通過(guò)從凝膠當(dāng)中擴(kuò)散或隨著凝膠降解來(lái)從水凝膠中釋放RNAi劑?？赏杜c任何RNAi劑。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，RNAi劑為上述任何種類的治療劑。在一重要實(shí)施例中，RNAi劑具有粘連抑制作用。舉例來(lái)說(shuō)，RNAi劑可抑制編碼促血管生成、促發(fā)炎或促纖維蛋白形成的多肽的基因的表達(dá)。通常在使一種或多種溶液相互接觸之前和/或投與所述溶液之前將生物活性劑添加到所述溶液中。舉例來(lái)說(shuō)，在將含有第一HA衍生物的溶液裝載到待用于投與所述溶液的裝置中之前，將生物活性劑添加到所述溶液中?？蓪⑸锘钚詣┡cHA衍生物同時(shí)、在重疊的時(shí)間間隔內(nèi)或依次(意思指溶解一種物質(zhì)然后再添加另一物質(zhì))溶解于液體介質(zhì)中。將溶液混合或攪動(dòng)以確保所述藥劑的均勻分布。所使用的生物活性劑的總量可變化。舉例來(lái)說(shuō)，在將所述藥劑添加到第一或第二溶液中后，所述藥劑的濃度可在1Mg/ml到1.0g/ml的范圍內(nèi)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述濃度介于10pg/ml與100mg/ml之間或介于100pg/ml與10mg/ml之間。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，在將所述藥劑添加到第一或第二溶液中后，所述藥劑的濃度在介于0.1nM與10mM之間、例如介于1nM與1mM、例如介于IOnM與100nM之間的范圍內(nèi)。使第一與第二多糖衍生物交聯(lián)后所形成的水凝膠中的生物活性劑濃度將視其在各溶液中的濃度和所使用的溶液的相對(duì)體積而定。水凝膠的形成將截留生物活性劑，其通過(guò)擴(kuò)散和/或隨著水凝膠材料體內(nèi)降解而從水凝膠中緩慢釋放。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，一種或多種多糖衍生物(例如HA衍生物)具有與其共價(jià)連接的生物活性劑?？墒褂枚喾N方法中的任一種在多糖衍生物與牛物活性劑之間形成共價(jià)鍵。生物活性劑和多糖衍生物可包含能夠相互反應(yīng)的官能團(tuán)或經(jīng)修飾以包含能夠相互反應(yīng)的官能團(tuán)，例如，如上文關(guān)于第一與第二HA衍生物反應(yīng)所述的官能團(tuán)?；蛘?，可使用同雙官能或異雙官能交聯(lián)劑。用于連結(jié)和交聯(lián)的通用方法描述于以下文獻(xiàn)中"交聯(lián)(CrossLinking)"，皮爾斯化學(xué)技術(shù)圖書館(PierceChemicalTechnicalLibrary),自網(wǎng)站URLwww.piercenet.com可用且最初出版于1994-95皮爾斯目錄和其中所引用的參考文獻(xiàn)，王SS(WongSS)，蛋白質(zhì)連結(jié)和交聯(lián)化學(xué)(C7wH'W/7尸rafe/"Co">gfl//o"朋dCraM/z'wh"g),CRC出版公司(CRCPressPublishers),博卡拉頓(BocaRaton),1991;和G.T.赫曼森(G.T.Hermanson)，生物連結(jié)技術(shù)(B/ocwy'叫flferec/m!々Me;0，學(xué)術(shù)出版有限公司(AcademicPress,Inc.)，1995。舉例來(lái)說(shuō)，根據(jù)本發(fā)明某些實(shí)施例，使用雙官能交聯(lián)試劑來(lái)將生物活性劑與諸如HA衍生物、纖維素衍生物或葡聚糖衍生物的多糖衍生物偶聯(lián)。一般來(lái)說(shuō)，雙官能交聯(lián)試劑含有兩個(gè)反應(yīng)基團(tuán)，從而提供一種共價(jià)連接兩個(gè)靶基團(tuán)的方式?；瘜W(xué)交聯(lián)試劑中的反應(yīng)性基團(tuán)通常屬于不同種類，諸如琥珀酰亞胺基酯、馬來(lái)酰亞胺、吡啶基二硫醚和碘代乙酰胺。在某些實(shí)施例中，使用諸如二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)或DCI等試劑活化酯以供后續(xù)連結(jié)。或者，如上文所述，可使生物活性劑上的官能團(tuán)與多糖衍生物上的官能團(tuán)直接反應(yīng)。如果生物活性劑不含有適當(dāng)官能團(tuán)，那么可使用所屬領(lǐng)域中已知的多種方法中的任一種添加所述官能團(tuán)。舉例來(lái)說(shuō)，如果生物活性劑為多肽，那么可添加賴氨酸殘基或末端胺來(lái)提供胺基?；蛘?，可對(duì)多肽加以修飾以使其包括半胱氨酸殘基，從而提供巰基。優(yōu)選生物活性劑與多糖衍生物的連接不會(huì)使所述藥劑的生物活性降低到有用水平以下或明顯干擾第一與第二多糖衍生物的交聯(lián)。可能需要使用不同官能團(tuán)來(lái)連接生物活性劑且使兩種多糖衍生物進(jìn)行交聯(lián)反應(yīng)。在特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將地塞米松或其它糖皮質(zhì)激素與HA、纖維素或葡聚糖衍生物連結(jié)。多糖衍生物可含有非多糖聚合物部分，例如PEG部分。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將地塞米松與HA或HA衍生物連結(jié)。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將地塞米松與纖維素或纖維素衍生物連結(jié)。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將地塞米松與葡聚糖或葡聚糖衍生物連結(jié)。在特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將布洛芬或其它NSAID與HA、纖維素或葡聚糖衍生物連結(jié)。多糖衍生物可含有非多糖聚合物部分，例如PEG部分。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將NSAID與HA或HA衍生物連結(jié)。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將NSAID與纖維素或纖維素衍生物連結(jié)。在另一特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，將NSAID與葡聚糖或葡聚糖衍生物連結(jié)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，經(jīng)由在生理?xiàng)l件下易水解和/或易酶解的鍵將治療劑與多糖衍生物共價(jià)連接。不穩(wěn)定的鍵聯(lián)包括酯、酰胺、酰胺酯、硫酯、酸軒、脲、碳酸酯、縮氨基脲、腙、肟、亞氨基碳酸酯、磷酸酯、磷嗪、尿烷(urethane)和酐鍵。易于在活體內(nèi)裂解的其它鍵聯(lián)包括含有經(jīng)內(nèi)源或外源提供的蛋白酶識(shí)別和裂解的位點(diǎn)的多肽。例示性蛋白酶包括絲氨酸蛋白酶、天冬氨酰基蛋白酶、酸性蛋白酶、堿性蛋白酶、金屬蛋白酶(例如基質(zhì)金屬蛋白酶)、羧基肽酶、氨基肽酶、半胱氨酸肽酶等。這些蛋白酶的裂解位點(diǎn)已為所屬領(lǐng)域中已知。本發(fā)明另外提供至少一種水凝膠前體為包含非多糖聚合物部分的多糖衍生物的組合物(水凝膠和包含生物活性劑的溶液)。包含非多糖聚合物部分的多糖衍生物可為第I部分所述衍生物中任一種。多糖衍生物通常包含與一種或多種非多糖聚合物共價(jià)連接的多糖或其衍生物。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含一種或多種生物活性劑的水凝膠，其中所述水凝膠是由交聯(lián)兩種非多糖聚合物形成。通常將非多糖聚合物溶解于如上文關(guān)于多糖衍生物所述的溶液中，其中所述溶液中的一種或兩種含有生物活性劑。通過(guò)例如將所述溶液投與個(gè)體來(lái)使其相互接觸。各非多糖聚合物包含官能團(tuán)，其中所述官能團(tuán)能夠相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵。適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)為上文關(guān)于交聯(lián)多糖衍生物所述的官能團(tuán)。例示性非多糖聚合物包括第I部分所述的含有供交聯(lián)的適當(dāng)官能團(tuán)或可經(jīng)修飾以含有供交聯(lián)的適當(dāng)官能團(tuán)的聚合物。III.包含多糖衍生物和顆粒的雜化組合物本發(fā)明另外提供一種包含多糖衍生物和多個(gè)顆粒的組合物。舉例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明提供一種包含第一HA衍生物和多個(gè)顆粒的組合物。多糖衍生物包含能夠與第二官能團(tuán)形成共價(jià)鍵的官能團(tuán)。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述組合物包含液體介質(zhì)(例如水性介質(zhì))、第一多糖衍生物和多個(gè)顆粒?？蓪⑺鲱w粒懸浮或分散于所述介質(zhì)中。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述組合物為通過(guò)使第一與第二多糖衍生物(其中任一種或兩種可為HA衍生物)交聯(lián)制成的水凝膠。舉例來(lái)說(shuō)，使包含HA衍生物且另外包含多個(gè)顆粒的第--溶液與包含第二多糖衍生物的第二溶液接觸。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第二多糖衍生物為第二HA衍生物。第一與第二HA衍生物經(jīng)由官能團(tuán)相互反應(yīng)以在其間形成共價(jià)交聯(lián)，從而形成將顆粒截留于其中的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第二多糖衍生物為纖維素衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第二多糖衍生物為葡聚糖衍生物。HA衍生物與纖維素或葡聚糖衍生物經(jīng)由官能團(tuán)相互反應(yīng)以在其間形成共價(jià)交聯(lián)，從而形成將顆粒截留于其中的水凝膠。應(yīng)注意，本發(fā)明并非以任何方式受到形成截留顆粒的水凝膠的方法的限制。在某些實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含水凝膠前體和多個(gè)顆粒的組合物，其中所述水凝膠前體能夠在例如生理?xiàng)l件下與第二水凝膠前體接觸后在介于1秒與5分鐘之間的時(shí)間內(nèi)形成水凝膠。在特別值得關(guān)注的實(shí)施例中，在對(duì)個(gè)體投與后，水凝膠在介于l秒與5分鐘之間，例如介于1秒與1分鐘之間、介于1秒與30秒之間或介于1秒與15秒之間的時(shí)間內(nèi)形成。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，水凝膠前體包含非多糖聚合物部分或其為非多糖聚合物?？蓪⒍喾N顆粒中任一種并入組合物中，例如并入包含水凝膠前體(諸如多糖衍生物，例如HA衍生物、纖維素衍生物或葡聚糖衍生物)的液體介質(zhì)中，且因此并入通過(guò)交聯(lián)第一與第二水凝膠前體(例如多糖衍生物或非多糖聚合物)所制成的水凝膠中。所述顆?？衫鐬榫酆衔⒚最w粒或納米顆粒，或脂質(zhì)體?？墒褂每缮锝到獾母鞣N聚合物(例如，生物可相容聚合物)制造顆粒。所述聚合物可為直鏈、支鏈或交聯(lián)均聚物、共聚物(包括嵌段共聚物)。適當(dāng)?shù)纳锟上嗳菥酆衔?其中有一些為生物可降解的)例如包括聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚((3-氨基酯)、聚酐、聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚乙二醇和其衍生物、聚原酸酯、聚縮醛、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧環(huán)己酮)、聚(亞烷基烷基化物)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯。其它聚合物包括聚(醚)，諸如聚氧化乙烯、聚(乙二醇)和聚(四亞甲氧醚)；乙烯基聚合物-聚(丙烯酸酯)和聚(甲基丙烯酸酯)(諸如甲基丙烯酸甲酯、甲基丙烯酸乙酯、甲基丙烯酸其它烷酯、甲基丙烯酸羥乙酯)、丙烯酸和甲基丙烯酸，及其它，諸如聚(乙烯醇)、聚(乙烯吡咯垸酮)和聚(乙酸乙烯酯)；聚(氨酯)；纖維素和其衍生物，諸如垸基、羥垸基、醚、酯、硝基纖維素和各種乙酸纖維素；聚(硅氧垸)等。其它聚合材料包括基于天然存在材料的材料，諸如多糖(例如，海藻酸-殼聚糖、瓊脂糖、透明質(zhì)酸)、明膠、膠原蛋白和/或其它蛋白質(zhì)，以及其混合物和/或經(jīng)修飾形式。也涵蓋本文所揭示的聚合物中任-種的化學(xué)或生物衍生物(例如，化學(xué)基團(tuán)的取代、添加，例如由所屬領(lǐng)域技術(shù)人員常規(guī)制造的垸基、亞烷基、羥基化、氧化和其它修飾)。此外，可使用任一這些聚合物的摻合物、接枝聚合物和共聚物(包括嵌段共聚物)。共聚物可含有各種比例的不同單體亞單元。舉例來(lái)說(shuō)，包含單體A和單體B的共聚物可含有介于5%與95%之間的單體A和介于5%與95%之間的單體B(其中所述百分比是指以單體量計(jì)的百分比且總計(jì)為100%)。應(yīng)了解，這些聚合物中有一些需要使用適當(dāng)引發(fā)劑或交聯(lián)劑以便聚合。其它例示性聚合物包括纖維素衍生物(諸如羧甲基纖維素)、聚氨基甲酸酯或聚脲、交聯(lián)聚(乙酸乙烯酯)等、乙烯-乙烯酯共聚物、乙烯-己酸乙烯酯共聚物、乙烯-丙酸乙烯酯共聚物、乙烯-丁酸乙烯酯共聚物、乙烯-戊酸乙烯酯共聚物、乙烯-三甲基乙酸乙烯酯共聚物、乙烯-二乙基乙酸乙烯酯共聚物、乙烯-3-甲基丁酸乙烯酯共聚物、乙烯-3-3-二甲基丁酸乙烯酯共聚物和乙烯-苯甲酸乙烯酯共聚物，或其混合物?？蓪?duì)諸如交聯(lián)和單體濃度等特征加以選擇以提供所需的顆粒降解速率和/或使封裝或截留于其中或者吸附在表面上的生物活性劑釋放等。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述顆粒本身是由交聯(lián)的多糖衍生物(例如HA、葡聚糖和/或纖維素衍生物)構(gòu)成。用于本發(fā)明中的微米顆粒和納米顆?？删哂卸喾N尺寸。一般來(lái)說(shuō)，微米顆粒將具有500微米或更低，例如介于1與500微米之間、介于50與500微米之間、介于100與250微米之間、介于20與50微米之間、介于1與20微米之間、介于1與10微米之間等的直徑，并且納米顆粒將具有小于l微米，例如介于10mn與100nm之間、介于100nm與250nm之間、介于100nm與500nm之間、介于250nm與500nm之間、介于250nm與750nm之間、介于500nm與750nm之間的直徑。如果由上述方法中任--種制備的顆粒具有超出所需范圍的尺寸范圍，那么可例如使用篩網(wǎng)分選顆粒。顆粒的尺寸(例如，直徑)或形狀可實(shí)質(zhì)上均勻或其尺寸和/或形狀可不均勻。其可實(shí)質(zhì)上呈球形或可具有其它形狀，例如圓柱形、橢圓體或棱錐形，在此情況下，相關(guān)尺寸將為最長(zhǎng)的直線尺寸而非直徑。納米顆?；蛭⒚最w?？墒褂盟鶎兕I(lǐng)域中已知的任何方法制造，包括(但不限于)噴霧干燥、相分離、單乳化和雙乳化、溶劑蒸發(fā)、溶劑萃取以及簡(jiǎn)單和復(fù)凝聚。也可使用?；?、擠出和/或滾圓來(lái)制造顆粒狀聚合組合物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，使用多層顆粒。舉例來(lái)說(shuō)，所述顆?？珊泻诵暮屯扛埠诵牡囊粋€(gè)或多個(gè)層。核心和層可由相同材料或不同材料制成。用于制造顆粒的材料和方法描繪于例如以下文獻(xiàn)中美國(guó)專利第4,272,398號(hào)，其以引用的方式并入本文中；第6，428，815號(hào)，其以引用的方式并入本文中；和其中的參考文獻(xiàn)?？筛淖冇糜谥苽漕w粒的條件以得到具有所需尺寸或特性(例如，疏水性、親水性、外部形態(tài)、"粘性"、形狀等)的顆粒。制備顆粒的方法和所使用的條件(例如，溶劑、溫度、濃度、氣流速度等)也可視治療劑和/或聚合物基質(zhì)的組成而定?？墒褂枚喾N常規(guī)脂質(zhì)體制備技術(shù)中的任一種來(lái)制備用于本發(fā)明中的脂質(zhì)體，諸如超聲波處理、螯合透析、均質(zhì)化、溶劑輸注加上擠出、冷凍-解凍擠出、微乳化等。這些技術(shù)等論述于例如以下專利中美國(guó)專利第4,728,578號(hào)、英國(guó)專利申請(qǐng)案G.B.2193095A、美國(guó)專利第4,533,254號(hào)、第4,728,575號(hào)、第4,737,323號(hào)、第4,753,788號(hào)和第4,935,171號(hào)，其各自以引用的方式并入本文中。還可看格雷戈里亞季斯G.(Gregoriades,G.)(編)，脂質(zhì)體技術(shù)(LiposomeTechnology),第1-3巻，CRC，博卡拉頓(BocaRaton)，1984;格雷戈里亞季斯G.(Gregoriades，G.)(編)，作為藥物載劑的脂質(zhì)體(LiposomesasDrugCarriers),約翰威立出版公司(JohnWiley&Sons),奇切斯特(Chichester),1988,1984;拉斯克D.D.(Lasic，D.D.)，脂質(zhì)體從物理學(xué)到應(yīng)用(Liposomes:FromPhysicstoApplications),愛(ài)思唯爾(Elsevier),阿姆斯特丹(Amsterdam),1993;馬丁F.(Martin,F.)和拉斯克D.(Lasic,D.)(編)隱形脂質(zhì)體(StealthLiposomes),CRC,博卡拉頓(BocaRaton)，1995;伍德M.C(Woodle，M.C)和斯托姆G.(Storm，G.)(編)，長(zhǎng)循環(huán)月旨質(zhì)體老藥，新療法(LongCirculatingLiposomes:OldDrugs,NewTherapeutics),斯普林格(Springer),柏林(Berlin)，1997;托奇林V.P.(Torchilin，V.P.)和維斯格V.(Weissig,V.)(編)，脂質(zhì)體.實(shí)踐方法(Liposomes.PracticalApproach),牛津大學(xué)出版社(OxfordUniversityPress),牛津(Oxford),2003。可用于制備本發(fā)明的脂質(zhì)體的材料包括所屬領(lǐng)域技術(shù)人員己知適于構(gòu)建脂質(zhì)體的任何材料或其組合。所使用的脂質(zhì)可為天然或合成來(lái)源。所述材料包括(但不限于)脂質(zhì)，諸如膽固醇、磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、磷脂酸、磷脂酰肌醇、脫脂脂質(zhì)(lysolipid)、脂肪酸、鞘磷脂、鞘糖脂、糖脂(glucolipid、glycolipid)、硫脂、具有酰胺、醚和酯連接脂肪酸的脂質(zhì)、可聚合脂質(zhì)和其組合。組合物可含有多個(gè)顆粒群，其中所述群是由不同材料或不同比率的相同材料制成和/或其特性(諸如尺寸或形狀)不同。含有多糖衍生物(例如HA衍生物、纖維素衍生物或葡聚糖衍生物)的溶液中的顆粒濃度以及所述顆粒的重量與多糖衍生物的重量的比率可變化。舉例來(lái)說(shuō)，含有多糖衍生物的溶液可含有介于100^g/ml與10g/ml之間的顆粒，例如介于1mg/ml與1.0g/ml之間或介于1mg/ml與100mg/ml之間的顆粒。溶液屮顆粒重量與多糖衍生物重量的比率可例如在1:1001到100:1內(nèi)變化。舉例來(lái)說(shuō)，所述比例可介于1:10與10:1之間或介于1:5與5:1之間，或者介于1:2與2:1之間，例如為約l:l。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑與顆粒以物理方式締合，而在本發(fā)明其它實(shí)施例中，所述顆粒不具有與其締合的生物活性劑。物理方式締合可為共價(jià)或非共價(jià)的。締合可為特異性或非特異性的。優(yōu)選物理方式締合為當(dāng)對(duì)顆粒加以處理且將其與溶液中的多糖衍生物組合時(shí)保持穩(wěn)定并且至少在將組合物投與個(gè)體之前保持穩(wěn)定且通常持續(xù)此后一段可變化且視情況可控制的時(shí)間段的締合?？山?jīng)由一種或多種非共價(jià)相互作用機(jī)制(諸如離子相互作用、氫鍵、疏水相互作用等)將生物活性劑與顆粒締合。舉例來(lái)說(shuō)，可將一種或多種藥劑截留、包埋、密封或封裝于顆粒內(nèi)。所述顆?？沙錆M所述藥劑和/或所述藥劑可吸附于所述顆粒的表面上?？赏ㄟ^(guò)擴(kuò)散或隨著顆粒在體內(nèi)降解從顆粒中釋放藥劑。釋放可在數(shù)小時(shí)、數(shù)天、數(shù)周、數(shù)月等內(nèi)發(fā)生。所述顆?？珊猩衔乃龅娜我环N或多種生物活性劑，例如上文所述的任一治療劑。在本發(fā)明一些實(shí)施例中，含有多糖衍生物的溶液或通過(guò)交聯(lián)第一與第二多糖衍生物形成的水凝膠可含有至少兩種截然不同的顆粒群。所述群可關(guān)于多個(gè)參數(shù)中任一個(gè)而彼此不同。舉例來(lái)說(shuō)，制造所述顆粒的材料可不同，所述顆粒含有的生物活性劑不同，其尺寸不同等。舉例來(lái)說(shuō)，在一個(gè)實(shí)施例中，第-一群包括含有第一生物活性劑的顆?；蛴珊械谝簧锘钚詣┑念w粒組成，并且第二群包括含有第二生物活性劑的顆?；蛴珊械诙锘钚詣┑念w粒組成。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，多糖衍生物中任一種或兩種為HA衍生物。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液含有第一HA衍生物和第一顆粒群，且第二溶液含有第二HA衍生物和第二顆粒群。第一與第二HA衍生物交聯(lián)導(dǎo)致形成含有第一顆粒群和第二顆粒群的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第---溶液含有HA衍生物和第一顆粒群，且第二溶液含有纖維素衍生物和第二顆粒群。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，第一溶液含有HA衍生物和第一顆粒群，且第二溶液含有葡聚糖衍生物和第二顆粒群。HA衍生物與纖維素或葡聚糖衍生物交聯(lián)導(dǎo)致形成含有第一顆粒群和第二顆粒群的水凝膠。在這些實(shí)施例中任一者中，第一和第二溶液中的第一顆粒群和第二顆粒群濃度可經(jīng)選擇以實(shí)現(xiàn)在水凝膠屮所需的最終顆粒濃度。在本發(fā)明一些實(shí)施例中，一些(但非全部)顆粒包含生物活性劑。當(dāng)然，各溶液可含有多種不同顆粒群，例如2、3、4或更多不同顆粒群。如所屬領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)，可在顆粒形成過(guò)程中或形成之后將生物劑裝載入所述顆粒中。可通過(guò)聚合物基質(zhì)截留、包埋或封裝生物活性劑或?qū)⑸锘钚詣┟芊庥谥|(zhì)體水性核心屮，和/或生物活性劑可涂覆顆粒表面。具有生物活性劑的顆?？煞稚⒂谡麄€(gè)聚合物基質(zhì)中。生物活性劑優(yōu)選構(gòu)成介于約0.01重量％與90重量％之間的顆粒，例如構(gòu)成約1重量％到約80重量％或約10重量％到約70重量％的顆粒。在某些實(shí)施例中，生物活性劑構(gòu)成約10%-20重量％或約30%-50重量％顆粒。所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將了解，在選擇適當(dāng)聚合物和制造方法的過(guò)程中，選擇與生物活性劑的穩(wěn)定性相容的材料和方法相當(dāng)重要。舉例來(lái)說(shuō)，需要避免可能會(huì)導(dǎo)致所述藥劑實(shí)質(zhì)降解或變性(其可導(dǎo)致生物活性的喪失)的加工溫度。還需要測(cè)試組合物從而確保在所需時(shí)間段內(nèi)釋放大量所述藥劑。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，將生物活性劑與顆粒組分(例如聚合物或脂質(zhì)組分)共價(jià)連接?？墒褂霉┬纬伤龉矁r(jià)連接的多種方法中的任一種。生物活性劑可包括能夠與聚合物或脂質(zhì)上的官能團(tuán)反應(yīng)的官能團(tuán)?？蓪?duì)聚合物或脂質(zhì)、生物活性劑或二者加以修飾以使其包括適當(dāng)官能團(tuán)?；蛘?，可使用交聯(lián)劑。相關(guān)方法與上文關(guān)于共價(jià)連接生物活性劑與多糖衍生物所述的方法類似。優(yōu)選所述連接不會(huì)使所述藥劑的生物活性降低到有用水平以下或干擾顆粒形成。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，經(jīng)由在生理?xiàng)l件下易水解和/或易酶解的鍵將生物活性劑與顆粒的聚合物或脂質(zhì)組分共價(jià)連接。所述鍵裂解會(huì)從顆粒中釋放生物活性劑或者促進(jìn)顆粒釋放生物活性劑。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，除一種或多種生物活性劑外，所述顆粒含有一種或多種其它藥劑，例如賦形劑、緩沖劑、滾圓劑(spheronizingagent)、填充劑、表面活性劑、崩解劑、粘合劑、增塑劑或包衣劑。其它藥劑本身可不具有顯著生物作用，但可調(diào)節(jié)生物活性劑的生物作用。例示性材料描述于美國(guó)專利第5,846,565號(hào)中，所述專利是以引用的方式并入本文中。適當(dāng)?shù)乃巹├绨ㄌ妓衔?、氨基酸、脂肪酸、表面活性劑、鹽、金屬離子和增積劑并且其已為所屬領(lǐng)域技術(shù)人員所知。所使用的賦形劑的量可基于賦形劑與生物活性劑的比率(以重量計(jì))。對(duì)于氨基酸、脂肪酸、鹽和碳水化合物(諸如蔗糖、乳糖、甘露醇糖、葡聚糖和肝素)，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，碳水化合物與生物活性劑的比率介于約1:10與約20:1之間。對(duì)于表面活性劑，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，表面活性劑與生物活性劑的比率介于約1:1000與約l:20之間。在某些實(shí)施例中，其它藥劑為改變顆粒釋放生物活性劑的釋放特性的藥劑(在本文中稱為"釋放調(diào)節(jié)劑")。含有生物活性劑和釋放調(diào)節(jié)劑的顆粒釋放生物活性劑的動(dòng)力學(xué)不同于不含有釋放調(diào)節(jié)劑而其它相同的顆粒釋放生物活性劑的動(dòng)力學(xué)。動(dòng)力學(xué)可以多種方式中的任一種改變。舉例來(lái)說(shuō)，釋放調(diào)節(jié)劑可延遲釋放或增加釋放。在釋放發(fā)生的部分或全部時(shí)間段內(nèi)，釋放速率可增加或降低。舉例來(lái)說(shuō)，釋放調(diào)節(jié)劑的存在可降低或防止初始"脈沖"效應(yīng)(其中在顆粒與液體接觸后一段較短時(shí)間內(nèi)釋放較大比例的生物活性劑)。某些顆粒在與液體接觸后的所需時(shí)間段內(nèi)釋放大量有效載荷，但在稍后的時(shí)間點(diǎn)時(shí)可能無(wú)法持續(xù)釋放其它藥劑。釋放調(diào)節(jié)劑可改變從顆粒釋放指定百分比的生物活性劑所需的時(shí)間。舉例來(lái)說(shuō)，釋放調(diào)節(jié)劑可增加或減少釋放10%、25%、50%、75%、90%或基本上全部待釋放的生物活性劑所需的時(shí)間。舉例來(lái)說(shuō)，可使時(shí)間增加或減少介于.1與10倍之間的因數(shù)。例示性釋放調(diào)節(jié)劑包括疏水性物質(zhì)，例如疏水表面活性劑，諸如泊洛沙姆(poloxamer)。其它例示性釋放調(diào)節(jié)劑為磷脂、膽固醇、聚甲基丙烯酸酯、糖、蛋白質(zhì)、丙烯酸酯嵌段共聚物(諸如尤特奇E-IOO(EudagritE-100)和相關(guān)化合物)和鋅。釋放調(diào)節(jié)劑可為在聚合基質(zhì)中形成孔或填充聚合基質(zhì)中的孔的藥劑。本發(fā)明另外提供一種組合物，其包含(a)包含一種或多種交聯(lián)多糖衍生物(例如HA衍生物)的微米顆粒和(b)多個(gè)納米顆粒?？蓪⑽⒚最w粒懸浮于介質(zhì)中并直接施用于體內(nèi)位置處，例如施用于腹膜。納米顆粒可含有生物活性劑。因此，所述組合物可包含包括交聯(lián)多糖衍生物的微米顆粒，其中所述微米顆粒封裝納米顆粒。在本發(fā)明一個(gè)實(shí)施例中，通過(guò)在包含油和乳化劑的連續(xù)相中依次添加第一HA衍生物、生物活性劑和第二HA衍生物的溶液且將其均質(zhì)化來(lái)制備包含一種或多種HA衍生物的微米顆粒。均50質(zhì)化是以1000-9000rpm進(jìn)行1-20分鐘。隨后在40-5(TC將乳液攪拌整夜以從分散相中蒸發(fā)水。將微米顆粒用異丙醇洗滌3-6次，隨后蒸發(fā)殘余異丙醇?？稍谖⒎庋b之前將生物活性劑預(yù)先封裝于納米顆粒中。納米顆粒可為聚合納米顆?；蛑|(zhì)體。在本發(fā)明另一實(shí)施例中，可通過(guò)噴霧干燥HA衍生物、生物活性劑和釋放調(diào)節(jié)劑來(lái)制備微米顆粒。本發(fā)明另外提供至少一種水凝膠前體為包含非多糖聚合物部分的多糖衍生物的組合物(水凝膠和包含水凝膠前體和多個(gè)顆粒的溶液)。包含非多糖聚合物部分的多糖衍生物可為第I部分所述衍生物中任一種。多糖衍生物通常包含與一種或多種非多糖聚合物共價(jià)連接的多糖或其衍生物。顆?？蔀樯衔乃鲱w粒中任一種。在其它實(shí)施例中，本發(fā)明提供一種包含多個(gè)顆粒的水凝膠，其中所述水凝膠是由交聯(lián)兩種非多糖聚合物形成。通常將非多糖聚合物溶解于如上文關(guān)于多糖衍生物所述的溶液中，其中所述溶液中的一種或兩種含有顆粒。通過(guò)例如將所述溶液投與個(gè)體來(lái)使其相互接觸。各非多糖聚合物包含官能團(tuán)，其中所述官能團(tuán)能夠相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵。適當(dāng)?shù)墓倌軋F(tuán)為上文關(guān)于交聯(lián)多糖衍生物所述的官能團(tuán)。例示性非多糖聚合物包括第I部分所述的含有供交聯(lián)的適當(dāng)官能團(tuán)或可經(jīng)修飾以含有供交聯(lián)的適當(dāng)官能團(tuán)的聚合物。顆?？蔀樯衔乃鲱w粒中任一種。應(yīng)注意，在上述任一實(shí)施例中，所述顆粒是提供于含有水凝膠前體的溶液中，或可以獨(dú)立溶液或干燥形式提供。IV.應(yīng)用本發(fā)明的組合物和方法具有多種用途，包括(但不限于)預(yù)防和治療粘連和投與治療劑。對(duì)于這些應(yīng)用中的任一種，水凝膠前體(例如多糖衍生物)可以干燥形式(例如凍干)提供并且可在投藥前溶解于適當(dāng)液體介質(zhì)(例如水或生理鹽水)中?；蛘?，水凝膠前體(例如多糖衍生物)可以溶液形式提供?？稍谕杜c前將生物活性劑和/或顆粒(視情況包含一種或多種生物活性劑)添加到不同量(視應(yīng)用而定)的千燥聚合物或溶液中?；蛘撸嗵茄苌锖蜕锘钚詣┗蝾w粒的組合物可以干燥形式提供且隨后添加到液體介質(zhì)中。A.投藥模式如上文所述，本發(fā)明提供多種方法，其包含將水凝膠前體投與個(gè)體體內(nèi)位置處，其中所述水凝膠前體在投與后交聯(lián)形成水凝膠。水凝膠前體通常是以溶液形式投與。所述溶液可以多種方式中的任一種投與。舉例來(lái)說(shuō)，可使用多管注射裝置(例如，多管注射器、雙閥施用器(dualvalveapplicator))來(lái)將多種溶液實(shí)質(zhì)上同時(shí)傳遞到所需位置。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，所述裝置包含暫時(shí)噴射多種溶液到其中且在投藥前發(fā)生混合的腔室。本發(fā)明涵蓋投與在體內(nèi)相互接觸的獨(dú)立溶液形式的水凝膠前體。本發(fā)明涵蓋實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與兩種或兩種以上溶液。這兩種溶液可在投與過(guò)程中相互接觸。本發(fā)明還涵蓋通過(guò)投與由各自包含水凝膠前體的多種溶液形成的單一溶液來(lái)投與所述多種溶液。所述溶液通常在投與之前不久組合，以致在投與過(guò)程中極少發(fā)生交聯(lián)或不發(fā)生交聯(lián)且所述組合物將保持流體狀態(tài)。舉例來(lái)說(shuō)，在包含以下步驟的抑制粘連的方法中(a)將包含第一多糖衍生物的第一水凝膠前體投與個(gè)體體內(nèi)位置處；和(b)將包含第二多糖衍生物或非多糖聚合物的第二水凝膠前體投與個(gè)體體內(nèi)所述位置處，本發(fā)明包括以下實(shí)施例其中將水凝膠前體溶解于溶液中以使其在投與之前不久相互接觸和/或相互混合。本發(fā)明還包括以下實(shí)施例其中將水凝膠前體溶解于獨(dú)立溶液中，將所述溶液經(jīng)約1-60秒、例如1-30秒、5-20秒、約10秒等一種或多種離散或連續(xù)時(shí)間段實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與。本發(fā)明還包括以下實(shí)施例其中將水凝膠前體以獨(dú)立溶液形式投與，使其在投與后相互接觸?？赏ㄟ^(guò)諸如將溶液從多管注射裝置中的各管中共擠出等多種方法中的任一種實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與溶液。在投與三種或三種以上組合物的本發(fā)明的實(shí)施例中，任兩種或兩種以上組合物可實(shí)質(zhì)上同時(shí)投與。組合物可經(jīng)單一時(shí)間段或經(jīng)多個(gè)離散時(shí)間段投與，其各自可視為獨(dú)立投與。多個(gè)離散時(shí)間段可在數(shù)分鐘、數(shù)小時(shí)等內(nèi)發(fā)生。舉例來(lái)說(shuō)，全腹膜投與或復(fù)雜的脊椎或顱手術(shù)可涉及歷經(jīng)數(shù)小時(shí)的多次離散投藥。圖13繪示用于投與溶液的例示性裝置。圖14繪示可用于投與多達(dá)四種不同組分(例如四種不同溶液)的多通道裝置。一些溶液含有水凝膠前體，例如多糖衍生物；而其它溶液無(wú)需含有水凝膠前體。舉例來(lái)說(shuō)，一些溶液可含有顆粒。另外，可在不存在液體的情況下將顆粒裝載入所述裝置的通道中，且在投與過(guò)程中將其與溶液混合。圖15繪示與液滴形成裝置(諸如噴霧器或霧化器)相聯(lián)的雙管裝置。圖式的右側(cè)部分為所述裝置的一部分的放大圖。所述裝置特別適用于將組合物迅速投與相對(duì)較大的區(qū)域(例如對(duì)于全腹膜應(yīng)用而言)?；蛘撸墒褂脗€(gè)別注射裝置(注射器、導(dǎo)管、套管等)，只要小心使溶液在投與時(shí)或投與之后不久相互接觸即可?？墒褂脙?nèi)窺鏡，例如腹腔鏡、關(guān)節(jié)鏡等。舉例來(lái)說(shuō)，具有多通道的觀測(cè)儀器是適當(dāng)?shù)?。在一個(gè)實(shí)施例中，使用雙注射腹腔鏡或關(guān)節(jié)鏡。在一個(gè)實(shí)施例中，所述組合物是在成像引導(dǎo)(例如熒光鏡引導(dǎo))下施用。在另一實(shí)施例中，可將第一和第二溶液簡(jiǎn)單地混合于容器中且隨后將其傾倒、噴霧或噴于所需位置上。可在投與后將溶液利用混合工具混合或利用散布工具(例如，刮刀樣工具)散布。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，包含水凝膠前體(例如多糖衍生物，諸如HA衍生物)的52溶液包含可檢測(cè)物質(zhì)。所述物質(zhì)可視覺(jué)檢測(cè)，例如染料或著色劑；或者可通過(guò)另一方式檢測(cè)(例如，所述物質(zhì)可為放射性物質(zhì))。優(yōu)選可檢測(cè)物質(zhì)對(duì)身體無(wú)害(除非其為作用機(jī)制必然伴有對(duì)正常細(xì)胞以及不合需要細(xì)胞的毒性的物質(zhì)，諸如抗增殖劑或抗腫瘤劑)?？蓹z測(cè)物質(zhì)的存在使得投與組合物的個(gè)體更易于鑒別所投與的物質(zhì)且因此可用于引導(dǎo)投藥。某些可檢測(cè)物質(zhì)可在其已投與后用于追蹤多糖衍生物，例如監(jiān)測(cè)其降解。B.預(yù)防和治療粘連可投與本發(fā)明的組合物以在多種手術(shù)類型中任一種的情況下治療或預(yù)防粘連。本發(fā)明的組合物和方法適用的手術(shù)程序的非限制性實(shí)例包括腹盆腔、眼科、矯形、胃腸、胸、顱、頭和頸、心血管、婦科、關(guān)節(jié)(例如關(guān)節(jié)鏡)、泌尿科、整形、再造、肌與骨和神經(jīng)肌肉手術(shù)。特定腹部程序例如包括去除或修補(bǔ)一個(gè)或多個(gè)腹盆腔器官或其一部分的手術(shù)。實(shí)例包括胃、腸(例如，十二指腸、空腸、回腸、結(jié)腸、直腸)、闌尾、膽囊、肝、腎、膀胱、尿道和前列腺的手術(shù)。腹盆腔手術(shù)還包括疝修補(bǔ)、動(dòng)脈瘤修補(bǔ)和腹膜粘連裂解。婦科程序包括治療由輸卵管疾病(例如，與卵巢、輸卵管和菌毛相連的粘連)引起的不孕的手術(shù)。所述手術(shù)包括輸卵管造口術(shù)、輸卵管粘連分離術(shù)和卵巢粘連剝離術(shù)。婦科手術(shù)包括卵巢切除術(shù)、子宮切除術(shù)、去除子宮內(nèi)膜異位、預(yù)防重新形成粘連、治療宮外孕、子宮或底部肌瘤等。其它手術(shù)包括治療失禁或陰道脫垂的手術(shù)。產(chǎn)科手術(shù)包括剖腹生產(chǎn)術(shù)。肌與骨手術(shù)包括腰椎板切除術(shù)、腰椎間盤切除術(shù)、屈肌腱手術(shù)、脊柱融合術(shù)和關(guān)節(jié)置換或修補(bǔ)。神經(jīng)肌肉手術(shù)包括用于修復(fù)神經(jīng)、摘除神經(jīng)或自由截留神經(jīng)的手術(shù)。涉及劈開(kāi)胸骨術(shù)的胸手術(shù)可導(dǎo)致在心臟或大動(dòng)脈與胸腔上皮層之間形成粘連。胸手術(shù)包括食道手術(shù)、肺手術(shù)(例如肺減容或腫瘤去除)、旁路手術(shù)、動(dòng)脈瘤修補(bǔ)和心臟瓣膜置換手術(shù)。手術(shù)還包括經(jīng)執(zhí)行以植入多種假體或可植入裝置(諸如除纖顫器)中任一種的手術(shù)和執(zhí)行用于診斷目的的手術(shù)。顱手術(shù)程序包括需要多種程序的針對(duì)腫瘤、癲癇的手術(shù)。這些程序通常會(huì)引起涉及頭骨、腦膜和/或皮層的粘連。眼睛手術(shù)應(yīng)用包括針對(duì)斜視的手術(shù)、青光眼濾過(guò)術(shù)和淚液排泄系統(tǒng)程序。因此在本發(fā)明某些實(shí)施例中，投與所述組合物以治療或預(yù)防腹膜粘連。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，投與所述組合物以治療或預(yù)防胸膜粘連，例如肺葉之間和/或胸膜臟層與胸膜壁層之間的纖維粘連。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，投與組合物以治療或預(yù)防涉及心包膜(例如，心外膜、心包臟層或心包壁層、纖維心包)的粘連。在本發(fā)明其它實(shí)施例中，投與組合物以治療或預(yù)防硬膜外粘連(涉及硬腦脊膜的硬膜外腔的粘連)。通常，將在產(chǎn)生第一切口的時(shí)間與完成手術(shù)閉合或?qū)⒆詈笠粋€(gè)內(nèi)窺鏡工具從個(gè)體體內(nèi)取出(以后發(fā)生的為準(zhǔn))的時(shí)間之間某一點(diǎn)時(shí)投與所述組合物?？蓪⒔M合物投與先前未發(fā)展粘連的個(gè)體，或可將其投與給已發(fā)展粘連的個(gè)體。在一個(gè)實(shí)施例中，將所述組合物投與正經(jīng)歷減少預(yù)先存在的粘連的程序的個(gè)體。舉例來(lái)說(shuō)，所述程序可必然伴有預(yù)先存在的粘連的機(jī)械或化學(xué)裂解或破壞，隨后施用本發(fā)明的組合物以預(yù)防粘連復(fù)發(fā)。投與給個(gè)體的組合物的總體積可基于多種因素而變化，所述因素主要為打算用水凝膠層覆蓋的區(qū)域、所需水凝膠的厚度、投與部位和組合物是否包含治療劑。例示性體積在介于.lml與5000ml之間，例如介于.5ml與1000ml之間、介于1ml與500ml之間、介于10ml與100ml之間等，應(yīng)了解這些體積為近似值且包括所有子范圍。可投與所述組合物以致所投與的材料或由其形成的水凝膠覆蓋損害(例如手術(shù)切口或損傷)部位或者覆蓋位于損害部位對(duì)側(cè)的上皮表面(例如腹膜、胸膜、硬腦脊膜)的一部分。所覆蓋的區(qū)域可在損害部位或位于與損害部位相對(duì)的組織上的區(qū)域周圍且從損害部位或位于與損害部位相對(duì)的組織上的區(qū)域向外延伸一段可變的距離。舉例來(lái)說(shuō)，所覆蓋的區(qū)域可從損害部位向外延伸多達(dá)約1、2、3、4、5cm或更長(zhǎng)的平均距離。由所投與的材料或由所述材料形成的水凝膠所覆蓋的總面積可在約0.1cn^到約腹膜的總面積(例如，多達(dá)約1.5-2.0m2)的范圍內(nèi)。舉例來(lái)說(shuō)，所覆蓋的總面積可在約1.0cm2到約1.0m2，例如約5.0cnT-到約.51112的范圍內(nèi)?？蓪⒔M合物施用于相鄰區(qū)域或由未經(jīng)覆蓋的區(qū)域分開(kāi)的多個(gè)離散區(qū)域。在包含顆粒的組合物的情況下，所傳遞的顆粒的體積和重量也可變化且將視所投與的溶液的總體積和溶液中顆粒的濃度而定?？蓪?duì)這些參數(shù)加以調(diào)整以傳遞所需的總顆粒體積或重量。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，將顆粒以介于.lmg/kg與2g/kg之間的量傳遞給個(gè)體。例示性量在介于1mg/kg與1000mg/kg之間，例如介于5mg/kg與700mg/kg之間的范圍內(nèi)。所傳遞的顆粒的量無(wú)需基于個(gè)體的重量而可以絕對(duì)量表示。例示性量在介于.lmg與500g之間，例如介于1mg與100g之間或介于10mg與1g之間的范圍內(nèi)。C.藥物傳遞如上文所述形成的任一水凝膠含有治療劑(視情況與顆粒以物理方式締合)的組合物可用于治療多種疾病、病癥和病狀或用于預(yù)防目的。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，水凝膠使治療劑持續(xù)釋放。水凝膠前體和藥劑的單獨(dú)投與可在一段時(shí)間內(nèi)提供有效濃度的所述藥劑，這為如果在不存在水凝膠前體的情況下投與相同量的所述藥劑將引起的時(shí)間的至少2、3、5、10、20或更多倍和/或在不引起不適當(dāng)副作用的情況下使用水凝膠前體使得可給與較高總劑量。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，通過(guò)控制水凝膠和/或顆粒降解的速率來(lái)控制釋放速率。因此，本發(fā)明提供一種包含溶液形式的水凝膠前體和治療劑的組合物，其中所述水凝膠前體為本文所述的任何水凝膠前體且以本文所述的任何濃度范圍提供?？蓪⒔M合物投與個(gè)體體內(nèi)任何位置，包括(但不限于)上文在抑制粘連的情況中所討論的位置。舉例來(lái)說(shuō)，可將組合物投與腹膜以治療主要在腹盆腔內(nèi)顯現(xiàn)的疾病或病癥或治療全身疾病。腹膜藥物傳遞為用于治療全身疾病的多種治療劑的引人注目的選擇，這至少部分歸因于腹膜具有大表面積可用于吸收藥劑。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，將包含抗感染劑的組合物用于治療感染或例如預(yù)防性降低手術(shù)后感染的可能性。經(jīng)歷可能危及腸壁的手術(shù)程序的患者尤其具有感染(例如腹膜炎)風(fēng)險(xiǎn)。在一個(gè)實(shí)施例中，在腹部手術(shù)期間或之后將組合物投與個(gè)體的腹盆腔。可將組合物施用于腹盆腔的任何位置，直接施用于一個(gè)或多個(gè)腹部器官和/或相鄰組織或者施用于大致位于腹部器官相對(duì)處的壁層腹膜，以便形成將覆蓋器官的臟層腹膜與壁層腹膜分離的水凝膠。可使用延長(zhǎng)局部腹膜投藥或經(jīng)全腹膜投與組合物。在另一實(shí)施例中，使用本發(fā)明的組合物投與抗腫瘤劑?？赏杜c抗腫瘤劑以治療位于腹盆腔中的腫瘤，例如腹部或盆腔器官的腫瘤。在一個(gè)實(shí)施例中，在手術(shù)去除位于腹盆腔中的腫瘤之前、期間或之后將組合物投與個(gè)體?？扇鼓ね杜c組合物。不希望受任何理論的限制，但投與本發(fā)明的組合物可減少轉(zhuǎn)移的發(fā)展和/或抑制腫瘤的腹膜播散。在另一實(shí)施例中，將組合物投與罹患腫瘤的個(gè)體的腹盆腔中。所述組合物使抗腫瘤劑持續(xù)釋放。舉例來(lái)說(shuō)，可經(jīng)至少l、2、3、4、6或8周或更長(zhǎng)時(shí)間釋放所述藥劑。可將組合物施用于腫瘤所處器官或可更為廣泛地施用。因此，本發(fā)明提供一種治療罹忠腫瘤或有發(fā)展腫瘤的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，其包含將本發(fā)明的組合物投與個(gè)體，其中所述組合物包含抗腫瘤劑?？墒褂冒辽僖环N本文所述的水凝膠前體(例如多糖衍生物，諸如HA衍生物)的任何組合物，其中所述至少一種水凝膠前體在投與個(gè)體后交聯(lián)形成水凝膠。所述治療劑可與本文所述任一類顆粒以物理方式締合。腫瘤可位于腹盆腔內(nèi)。在另一實(shí)施例中，使用本發(fā)明的組合物將治療劑投與個(gè)體的關(guān)節(jié)。個(gè)體例如可罹患關(guān)節(jié)炎。適于投與關(guān)節(jié)間隙的例示性治療劑包括消炎劑和止痛劑。因此，本發(fā)明提供一種治療罹患影響關(guān)節(jié)的疾病或病狀或有發(fā)展影響關(guān)節(jié)的疾病或病狀的風(fēng)險(xiǎn)的個(gè)體的方法，其包含將本發(fā)明的組合物投與所述關(guān)節(jié)，其中所述組合物包含經(jīng)選擇以治療或預(yù)防所述病狀的治療劑?？衫鐚⒔M合物注射到滑液腔中?？墒褂冒辽僖环N本文所述的水凝膠前體的任何組合物，其中所述至少一種水凝膠前體在投與個(gè)體后與另一水凝膠前體交聯(lián)形成水凝膠。治療劑可與本文所述任一類顆粒以物理方式締合?？墒褂美缙?nèi)、皮下、肌肉內(nèi)等多種途徑中的任一種投與組合物。任何身體組織都可用作包含一種或多種水凝膠前體(例如多糖衍生物)和多個(gè)顆粒的組合物的儲(chǔ)集器，其中所述水凝膠前體在投與后交聯(lián)形成水凝膠。55D.快速水凝膠形成如上文所述，本發(fā)明一方面為認(rèn)識(shí)由快速交聯(lián)水凝膠前體原位形成水凝膠所提供的益處和適當(dāng)組合物的研發(fā)以及實(shí)現(xiàn)快速原位水凝膠形成的方法。本發(fā)明的任何實(shí)施例都可利用含有水凝膠前體的組合物實(shí)施，所述水凝膠前體在相互接觸后在介于1-5與60秒之間、介于1-5與30秒之間、介于1-15與20秒之間或介于1-5與10秒之間的時(shí)間內(nèi)形成水凝膠。本發(fā)明的任何實(shí)施例都可利用含有水凝膠前體的組合物實(shí)施，所述水凝膠前體在含有水凝膠前體的溶液相互接觸后在介于1-5與60秒之間、介于1-5與30秒之間、介于1-15與20秒之間或介于1-5與IO秒之間的時(shí)間內(nèi)形成水凝膠。本發(fā)明的任何實(shí)施例都可利用含有水凝膠前體的組合物實(shí)施，所述水凝膠前體在投與個(gè)體后在介于1-5與60秒之間、介于1-5與30秒之間、介于1-15與20秒之間或介于1-5與10秒之間的時(shí)間內(nèi)形成水凝膠。V.包裝或試劑盒本發(fā)明還提供包裝或試劑盒，其在容器中包含一種或多種如本文所述的組合物。舉例來(lái)說(shuō)，容器可包括干燥(例如凍干)形式或溶液形式的HA衍生物。如果HA衍生物是以干燥形式提供，那么產(chǎn)物包裝可包括具有適當(dāng)溶劑或稀釋劑(例如注射用無(wú)菌水)的容器。包裝還可包括與容器相連的告示，其通常為管理醫(yī)療裝置、醫(yī)藥和/或生物醫(yī)藥的生產(chǎn)、使用或銷售的政府機(jī)構(gòu)所規(guī)定的形式，由此所述告示反映所述機(jī)構(gòu)批準(zhǔn)所述組合物用于人類或獸用投與以治療粘連疾病或者除治療粘連外的一種或多種適應(yīng)癥或治療一種或多種適應(yīng)癥而非治療粘連(例如，預(yù)防或治療手術(shù)后感染)。還可包括有關(guān)使用所述藥劑或組合物的說(shuō)明書。所述說(shuō)明書可包括有關(guān)重建HA溶液、向其中添加顆粒、傳遞裝置的裝載、投與的適當(dāng)量和模式等信息。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，包裝將含有多個(gè)個(gè)別容器，其各自含有干燥形式或溶液形式的HA衍生物。舉例來(lái)說(shuō)，第一容器含有第一HA衍生物且第二容器含有第二HA衍生物。第一和第二HA衍生物可以預(yù)定量提供從而當(dāng)其在溶液中相互接觸時(shí)形成具有所需特征的水凝膠。所述包裝還可包括一個(gè)或多個(gè)含有在投與前待與HA衍生物組合的生物活性劑的容器。在某些實(shí)施例中，包裝含有其它多糖衍生物，諸如纖維素或葡聚糖衍生物。在某些實(shí)施例中，包裝包括用于形成所需水凝膠的HA、纖維素和/或葡聚糖衍生物的組合。所述包裝還可包括其它聚合物，諸如合成聚合物。包裝還可包括蛋白質(zhì)。醫(yī)藥包裝還可包括含有將與多糖衍生物(例如HA、纖維素或葡聚糖衍生物)一起包括于溶液中的顆粒的接受器?；蛘?，接受器可含有例如預(yù)定比例的衍生物和顆粒。所述顆?？珊猩锘钚詣?。多個(gè)容器可以相對(duì)緊密封閉的單一較大容器的形式(例如塑料或泡沫聚苯乙烯塑料(styrofoam)盒)提供。包裝可包括供制備含有多糖衍生物(例如HA、纖維素或葡聚糖衍生物)的溶液的裝置或接受器。所述裝置可例如為測(cè)量或混合裝置。包裝可包括用于投與本發(fā)明的組合物的裝置。例示性裝置包括注射器，例如多管注射器、導(dǎo)管、內(nèi)窺鏡、關(guān)節(jié)鏡、腹腔鏡。內(nèi)窺鏡、關(guān)節(jié)鏡或腹腔鏡可具有多個(gè)通道以允許投與多種個(gè)別溶液。其它可包括的裝置為便利投與本發(fā)明的組合物的內(nèi)窺鏡工具或腹腔鏡工具的附件。當(dāng)然，所述裝置也可單獨(dú)提供。實(shí)例實(shí)錄h遂欲資磨好《欽布3薪水凝應(yīng)游激吝浙表^材料與方法遂欲處虔，透明質(zhì)酸(HA，標(biāo)稱1.36MD:高M(jìn)W和490kD:中等MW)是購(gòu)自酶公司(GenzymeCorporation)(馬薩諸塞州劍橋(Cambridge,MA))。HA(標(biāo)稱50kD:低MW)是購(gòu)自生命科學(xué)生物醫(yī)藥有限公司(LifecoreBiomedical,Inc.)(明尼蘇達(dá)州査斯卡(Chaska,MN))。所有其它試劑都購(gòu)自西格瑪-阿德里奇公司(Sigma-Aldrich)(美國(guó)密蘇里州圣路易斯(St.Louis,MO，USA))。^"史凝透敏廣激游^多..遵循先前報(bào)導(dǎo)的方法合成原位可交聯(lián)HA衍生物(賈XUiaX)，克魯姆博G(ColomboG)，帕德拉R(PaderaR)，朗格R(LangerR)，克漢DS.(KohaneDS.)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸使坐骨神經(jīng)阻斷延長(zhǎng)(Prolongationofsciaticnerveblockadebycross-linkedhyaluronicacid.)生物材茅斗(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，其以引用的方式并入本文中)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，在pH6.8和室溫下，通過(guò)使HA(除非另作說(shuō)明，否則為中等MW)與30倍摩爾過(guò)量的己二酸二酰肼在存在l-乙基-3-碳化二亞胺(EDC)和l-羥基苯并三唑(HOBt)的情況下反應(yīng)來(lái)制備HA-己二酸二酰肼(HA-ADH)。通過(guò)徹底透析和乙醇沉淀純化產(chǎn)物。通過(guò)在室溫下于暗處使HA(除非另作指示，否則為高M(jìn)W)與等摩爾的高碘酸鈉反應(yīng)2小時(shí)來(lái)制備HA-醛(HA-CHO)。通過(guò)添加乙二醇來(lái)終止反應(yīng)。通過(guò)徹底透析純化產(chǎn)物。將純化產(chǎn)物凍干并存儲(chǔ)于4'C下。使用凝膠滲透色譜(GPC)測(cè)定可交聯(lián)HA衍生物的分子量(MW)。利用沃特水凝膠線性柱(UltrahydrogelLinearcolumn)(沃特世公司(Waters),馬薩諸塞州米爾福德(Milford,MA))和含有0.2MNaCI(pH6.7)的0.05M乙酸鹽水溶液作為流動(dòng)相(0.8ml/min)來(lái)執(zhí)行GPC。利用一系列普魯蘭多糖(pullulan)標(biāo)準(zhǔn)品預(yù)備MW校準(zhǔn)曲線。根據(jù)所報(bào)導(dǎo)的方法使用^NMR分析(對(duì)于HA-ADH,瓦里安公司(Varian)墨丘利(Mercury)300MHz)(賈X(JiaX)，克魯姆博G(ColomboG)，帕德拉R(PaderaR)，朗格R(LangerR)，克漢DS.(KohaneDS.)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸使坐骨神經(jīng)阻斷延長(zhǎng)(Prolongationofsciaticnerveblockadebyw'fwcross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，其以引用的方式并入本文中)和醛分析(對(duì)于HA-CHO)(克漢DS.(KohaneDS),利普M(LippM),金尼RC(KinneyRC)，安東尼DC(AnthonyDC)，路易斯DN(LouisDN),羅丹N(LotanN)等人，含有布比卡因的脂質(zhì)-蛋白質(zhì)-糖顆粒于神經(jīng)外膜中的生物可相容性(Biocompatibilityoflipid-protein-sugarparticlescontainingb叩ivacaineintheepineurium.)生物醫(yī)學(xué)材料石開(kāi)究雜志(JBiomedMaterRes)2002;59(3):450-459，其以引用的方式并入本文中)測(cè)定修飾程度。/MX/人凝^"游表/f,水凝膠的原位膠凝時(shí)間測(cè)量如下。將磁力攪拌棒(特氟隆氟碳樹(shù)脂(Teflonfluorocarbonresin)，5x2mm，費(fèi)雪科技公司(FisherScientific))放于皮氏培養(yǎng)盤(Petridish)中IOO微升HA-ADH的生理鹽水溶液(20mg/ml)小滴的中心。隨后將100微升HA-CHO溶液(20mg/ml)添加到HA-ADH滴液中，并且使用PC-320型康寧(Corning)熱板/攪拌器以155rpm攪拌溶液。將溶液形成完全與所述盤底部分離的固體小球時(shí)的時(shí)間視為膠凝時(shí)間。將結(jié)果報(bào)導(dǎo)為4個(gè)獨(dú)立測(cè)量值的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。通過(guò)掃描電鏡(JEOLJSM6060，美國(guó)JEOL有限公司(JEOLUSA,Inc.),馬薩諸塞州皮伯迪(Peabody，MA))觀察凍干HAX凝膠的形態(tài)。在液氮中冷卻后將凍干凝膠破碎以暴露凝膠內(nèi)部的結(jié)構(gòu)。在觀察前，利用鈀和金(IOO埃厚)濺涂破碎的樣本。,辨/-5游統(tǒng)^學(xué)分^由于數(shù)據(jù)并不總是遵循正態(tài)分布，故將其表示為中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)。使用SPSS軟件(伊利諾州芝加哥市(Chicago,IL))使用曼-惠特尼U檢驗(yàn)(Mann-WhitneyU-test)、克魯斯凱-沃利斯檢驗(yàn)(Kruskal-Wallistest)或費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn)(Fisher'sexacttest)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。認(rèn)為在雙尾檢驗(yàn)(2-tailedtest)上小于0.05的p值為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。結(jié)果通過(guò)多種不同方法表征可交聯(lián)HA衍生物HA-己二酸二酰肼(HA-ADH)和HA-醛(HA-CHO)。原始HA和經(jīng)修飾HA的MW概述于表1中。峰平均MW(Mp)略有增加且在ADH修飾后聚合物多分散性增加超過(guò)2倍。醛(CHO)修飾導(dǎo)致MW顯著降低。在CHO修飾后，HA(高M(jìn)W)和HA(中等MW)的MW分別從標(biāo)稱1.36MD和478kD降低到188和253kD，這與先前的報(bào)導(dǎo)相符(賈X(JiaX)，克魯姆博G(ColomboG),帕德拉R(PaderaR)，朗格R(LangerR)，克漢DS.(KohaneDS.)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸使坐骨神經(jīng)阻斷延長(zhǎng)(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!'n*cross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，其以引用的方式并入本文中)。此結(jié)果表明，2小時(shí)的氧化反應(yīng)誘使糖環(huán)明顯裂解，而與原始MW無(wú)關(guān)。'HNMR和酸分析結(jié)果分別表明ADH與HA的52.9±4.7%連結(jié)(n=4)和各HA重復(fù)單元中16.6±4.8%醛基形成(n=7)。在兩種HA衍生物接觸后迅速形成HAX凝膠。如方法中所述，在連續(xù)攪拌兩種組分的情況下，HAX凝膠(20mg/ml)在3.5±0.6sec內(nèi)形成。凍干后利用SEM檢查交聯(lián)HAX凝膠的形態(tài)(圖l)。交聯(lián)水凝膠具有連續(xù)圓形或多邊形孔，是典型的交聯(lián)水凝膠(賈X(JiaX),波迪克JA(BurdickJA),克波勒J(rèn)(KoblerJ)，克里夫頓RJ(CliftonRJ)，羅索沃斯基JJ(RosowskiJJ)，載特斯SM(ZeitelsSM)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸基水凝膠的合成和表征以及用于聲帶再生的潛在應(yīng)用(SynthesisandCharacterizationof//iS'7kCross-LinkableHyaluronicAcid-BasedHydrogelswithPotentialApplicationforVocalFoldRegeneration.)高分子(Mac腿olecules)2004;37(9):3239-3248，其以引用的方式并入本文中)具有10-20nm直徑。表l.原始和經(jīng)修飾HA的分子量的概述標(biāo)稱1Mp2Mn4PDI5HA，高M(jìn)W1,360kD----HA，中等MW490kD478kDl，432kD276kD5.2HA，低MW50kD139kD178kD74kD2.4HA-ADH(由HA得至U,中等MW)-551kD1,502kD108kD13.9HA-ADH(由HA得至iJ,低MW)-141kD296kD67kD4.4HA-CHO(由HA得至lJ，高M(jìn)W)-188kD214kD62kD3.4HA-CHO(由HA得到，中等MW)-253kD266kD43kD6.11.由制造商提供2.峰平均分子量3.重量平均分子量4.數(shù)量平均分子量5.多分散性指數(shù)-Mw/Mn實(shí)辨2,^沐Wft4A:水凝夢(mèng)游全欽W賴吝絲材料與方法^,//潘應(yīng)話力分橋，將人類間皮細(xì)胞(ATCC，CRL-9444)培養(yǎng)于含有伊爾氏鹽(Earle'ssalt)、L-谷氨酰胺和2.2g/L碳酸氫鈉且補(bǔ)充有3.3nM表皮生長(zhǎng)因子、400nM氫化可的松、870nM胰島素、20mMHEPES和10%胎牛血清的培養(yǎng)基199中。將第5代到第25代細(xì)胞用于以下研究中。將間皮細(xì)胞以每孔50,000個(gè)細(xì)胞的密度接種于24孔培養(yǎng)板中的1ml培養(yǎng)基中。培育整夜后，將培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基或具有10U/ml透明質(zhì)酸酶的新鮮培養(yǎng)基替換，并且無(wú)菌制備100pl圓柱形(直徑5mm，高度5.1mm)HAX凝膠(20mg/ml)且將其添加到各孔中。在存在水凝膠的情況下培育不同時(shí)間后，利用MTT分析試劑盒(普洛麥格公司塞爾泰特96非放射性細(xì)胞增殖分析(PromegaCellTiter96Non-RadioactiveCellProliferationAssay))評(píng)定細(xì)胞活力。結(jié)果報(bào)導(dǎo)為針對(duì)未經(jīng)處理的對(duì)照細(xì)胞的吸光度標(biāo)準(zhǔn)化的所測(cè)量的吸光度(標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞活力％=100x在存在樣本的情況下生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中的細(xì)胞的吸光度/生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中的細(xì)胞的吸光度)的中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)。結(jié)果測(cè)定HAX凝膠對(duì)間皮細(xì)胞的活體外細(xì)胞毒性(迪澤佳GS(diZeregaGS)腹膜、腹膜愈合禾口禾占連開(kāi)》成(Peritoneum,peritonealhealing,andadhesionformation.),迪澤4圭GS(diZeregaGS)編，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)紐約(NewYork):施普林格(Springer)，2000.第3-37頁(yè)；其以引用的方式并入本文中)。使這些細(xì)胞在存在100nl20mg/mlHAX凝膠(參看方法)的情況下于存在或不存在降解HAX凝膠的10單位/毫升透明質(zhì)酸酶的培養(yǎng)基中生長(zhǎng)達(dá)3天。如利用MTT分析所評(píng)定，除3天后在存在透明質(zhì)酸酶的情況下暴露于HAX的細(xì)胞的活力略有(16%)降低(p=0.042)夕卜，HAX的存在對(duì)任一組中的細(xì)胞活力無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著影響(圖2)。活體外細(xì)胞增殖分析表明，HAX凝膠在非降解條件(普通培養(yǎng)基)和降解條件(含有10U/ml透明質(zhì)酸酶的培養(yǎng)基)下都與間皮細(xì)胞相容。,鉄艦織微層微微,蕭遂材料與方法/MX凝i游^沐/^嚴(yán)^依照麻省理工學(xué)院委員會(huì)(MassachusettsInstituteofTechnologyCommittee)關(guān)于動(dòng)物護(hù)理所批準(zhǔn)的方案，遵照有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理和使用的NIH指導(dǎo)(NIH公告#85-23，1985年修訂)護(hù)理動(dòng)物。將雌性白化兔(西班牙野兔(Oryctolaguscuniculus);新西蘭白(NewZealandWhite),科文斯公司(Covance)，賓夕法尼亞州黑澤爾頓(Hazleton，PA))(3±0.5kg)用作模型動(dòng)物。使用開(kāi)他敏(Ketamine)(35mg/kg，肌肉內(nèi))和賽拉嗪(Xylazine)(5mg/kg，肌肉內(nèi))誘使麻醉；使用經(jīng)由氣管內(nèi)導(dǎo)管投與的氧氣中的1-3%異氟垸(isoflurane)實(shí)現(xiàn)維持。在整個(gè)過(guò)程中使用無(wú)菌技術(shù)。在整個(gè)手術(shù)過(guò)程中向動(dòng)物提供乳酸林格溶液(lactatedRinger'ssolution)并且持續(xù)監(jiān)測(cè)生命指征。沿腹壁上的白線(lineaalba)產(chǎn)生10cm長(zhǎng)的中線切口，并打開(kāi)腹膜。根據(jù)具有修改的文獻(xiàn)中報(bào)導(dǎo)的方法(奧瑞塔H(OritaH)，?？ㄋ_瓦M(jìn)(FukasawaM)，吉爾基斯W(GirgisW)，迪澤佳GS.(diZeregaGS.)標(biāo)準(zhǔn)兔模型中術(shù)后粘連的抑制利用組織纖溶酶原活化劑進(jìn)行腹膜內(nèi)治療(Inhibitionofpostsurgicaladhesionsinastandardizedrabbitmodel:intraperitonealtreatmentwithtissueplasminogenactivator.)國(guó)P示生育學(xué)報(bào)(InUFertil)1991;36(3).172-177，其以引用的方式并入本文中)誘發(fā)腹膜粘連。在右側(cè)腹壁上，從距中線1cm處開(kāi)始切開(kāi)包含腹膜壁層和一層肌肉(約1mm厚)的3x4cm缺損。隨后，將盲腸在對(duì)腸系膜側(cè)邊(anti-mesentericside)上外在化為7個(gè)袋(從回盲部(ileocecaljunction)遠(yuǎn)端第6個(gè)袋開(kāi)始到第12個(gè)袋)，將其分開(kāi)并使用無(wú)菌手術(shù)刷雙向擦傷80-160下引起出血。將20只動(dòng)物隨機(jī)分配到以下實(shí)驗(yàn)組(i)未治療(n=12);(ii)利用10ml交聯(lián)HA覆蓋經(jīng)切開(kāi)腹壁和擦傷的盲腸表面(n=8)。施用前，通過(guò)紫外殺菌照明將材料滅菌2小時(shí)并將其溶解于無(wú)菌生理鹽水中。將凝膠前體溶液(5mlHA-ADH(20mg/ml)和5mlHA-CHO(20mg/ml))放入獨(dú)立的10m與百特雙閥施用器(Baxterdualvalveapplicator)相連的無(wú)菌注射器中，并通過(guò)15號(hào)針共擠出。液體前體立即開(kāi)始膠凝，符合施用區(qū)域的形狀。視覺(jué)檢査，膠凝在不到3分鐘內(nèi)完成水凝膠在超過(guò)所述時(shí)間點(diǎn)時(shí)不流動(dòng)。治療受損區(qū)域后，分別利用2-0愛(ài)惜良縫線(Ethilon)和3-0地可松縫線(Dexon)閉合腹膜和腹壁。利用2-0愛(ài)惜良縫線閉合皮膚。使動(dòng)物醒來(lái)且自由取用食物和水。術(shù)后8小時(shí)經(jīng)皮下投與丁丙諾啡(B叩reno卬hine)0.02-0.03mg/kg。程序后1周，利用靜脈內(nèi)100mg/kg戊巴比妥鈉(sodiumpentobarbital)對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。使用所報(bào)導(dǎo)的方法的修改方法對(duì)粘連評(píng)分(伯恩斯JW(BurnsJW)，斯金納K(SkinnerK)，考特J(ColtJ)，謝德林A(SheidlinA)，布朗森R(BronsonR)，雅克伯Y(YaacobiY)等人，通過(guò)用透明質(zhì)酸溶液預(yù)涂組織預(yù)防組織損傷和術(shù)后粘連(Preventionoftissueinjuryandpostsurgicaladhesionsbyprecoatingtissueswithhyaluronicacidsolutions.)手術(shù)研究雜志(JournalofSurgicalResearch)1995;59:644-652,其以引用的方式并入本文中)。0分=無(wú)粘連，1分=利用重力將會(huì)分離的組織粘附；2分-可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘附；3分-需要利器解剖的粘連。將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林(formalin)中，包埋于石蠟中，切片并使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用蘇木素和伊紅染色以供組織學(xué)檢查。結(jié)果如方法中所述，使20只動(dòng)物接收盲腸擦傷和部分腹壁切開(kāi)。在術(shù)后第一周中，未經(jīng)HAX凝膠治療的12只動(dòng)物(對(duì)照)失去5,7±4.6%體重。12只中有10只(83%)兔發(fā)展3分粘連(圖3C)。在這10只兔中，6只直接在腹壁切開(kāi)的對(duì)面發(fā)展粘連，2只發(fā)展的粘連涉及切開(kāi)邊緣，且1只發(fā)展的粘連涉及多個(gè)腸區(qū)段；在后一只動(dòng)物中，手術(shù)期間存在明顯的局部出血。1只兔發(fā)展粘連到中線腹部縫合，即其與經(jīng)切開(kāi)的腹壁無(wú)關(guān)。在術(shù)后第一周中，經(jīng)10mlHAX凝膠治療的8只動(dòng)物失去9.0±7.4%體重(與未經(jīng)治療的對(duì)照相比，p不顯著)。僅2只動(dòng)物(25%)發(fā)展3分粘連(與未經(jīng)治療的對(duì)照相比，p=0.019，費(fèi)雪精確檢驗(yàn))。8只動(dòng)物中有4只未展現(xiàn)粘連(圖3B)。l只動(dòng)物具有利用重力分離的粘連(l分)。2只動(dòng)物在腹部縫合部位發(fā)展粘連(2分和3分)，并且l只動(dòng)物在擦傷的袋與未擦傷的回盲部之間發(fā)展3分粘連。然而，都不涉及受損腹壁。應(yīng)注意，所述2分和1個(gè)3分粘連涉及未施用HAX凝膠的縫合部位。類似地，另一在腸兩個(gè)環(huán)之間的3分粘連也僅涉及一個(gè)經(jīng)治療表面。在解剖時(shí)，HAX凝膠材料仍存在于治療部位(受損腹壁和/或擦傷的盲腸表面)上。肉眼檢查，所述材料的量和彈性明顯降低。從來(lái)自未經(jīng)治療動(dòng)物的數(shù)據(jù)將顯而易見(jiàn)，腹壁的損傷對(duì)于發(fā)展粘連起到至關(guān)重要的作用。盲腸表面擦傷的影響似乎不太明顯。粘連未涉及的擦傷的盲腸表面在一周內(nèi)愈合而未存留任何顯見(jiàn)的標(biāo)志，并且粘連通常涉及擦傷和未擦傷的袋。此外，在盲腸擦傷而腹壁未受損或者僅輕微擦傷的若干試驗(yàn)性研究中，粘連的發(fā)生率極低(數(shù)據(jù)未顯示)。對(duì)于光學(xué)顯微鏡檢査，從未經(jīng)治療的動(dòng)物的粘連部位取得的樣本展現(xiàn)腸肌肉層與腹壁肌肉組織的緊密附著，具有介于發(fā)炎和纖維化之間的不同厚度以及肌肉損傷的證據(jù)(水腫、小深染色細(xì)胞、中央核)(圖4A和4B)。相比之下，從無(wú)粘連的經(jīng)治療動(dòng)物的損傷部位取得的樣本展現(xiàn)藍(lán)色染色材料涂層，以及輕度到中度炎性細(xì)胞(大部分為巨噬細(xì)胞且有一些嗜中性粒細(xì)胞)浸潤(rùn)(圖4C)。來(lái)自兩只發(fā)展粘連的經(jīng)HAX治療的動(dòng)物的粘連部位的樣本具有與來(lái)自未經(jīng)治療動(dòng)物的粘連部位相同的外觀。此處，在來(lái)自這兩只動(dòng)物的樣本中未觀察到涂層；應(yīng)注意，這些粘連發(fā)生于未涂覆的部位處。本實(shí)驗(yàn)的結(jié)果概述于表2中。結(jié)果表明HAX凝膠降低腹膜粘連的活體內(nèi)功效。當(dāng)比較3分粘連(其為只能通過(guò)切割分離的穩(wěn)固連接)的發(fā)病率時(shí)，凝膠預(yù)防粘連的能力尤其明顯；低級(jí)粘連為不同級(jí)別的粘性而非手術(shù)相關(guān)含義中的粘連。12只未經(jīng)治療對(duì)照組中的動(dòng)物中有10只(83%)在術(shù)后7天內(nèi)發(fā)展3分粘連。組織學(xué)檢査證實(shí)，3分粘連是由發(fā)炎和纖維化引起。相比之下，在8只利用施用于受損部位的HAX凝膠治療的動(dòng)物中只有2只(25%)出現(xiàn)3分粘連。從治療組中所見(jiàn)的兩個(gè)3分粘連涉及縫合切口或兩個(gè)盲腸表面之間，這都是未用HAX治療的部位。如果將未經(jīng)涂覆部位的粘連排除在分析之外，那么對(duì)照組和治療組中3分粘連的發(fā)生率分別為82%(11只中有9只)和0%(6只都無(wú))。值得注意的是，分析表明本發(fā)明的交聯(lián)HAX凝膠在腹膜中生物可相容。先前已證實(shí)此系統(tǒng)在神經(jīng)束膜內(nèi)生物可相容(賈X(JiaX)，克魯姆博G(ColomboG)，帕德拉R(PaderaR)，朗格R(LangerR)，克漢DS.(KohaneDS.)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸使坐骨神經(jīng)阻斷延長(zhǎng)(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!>zw'mcross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，其以引用的方式并入本文中)。然而，在一個(gè)組織中的生物相容性未必預(yù)測(cè)在腹膜中的生物相容性。舉例來(lái)說(shuō)，盡管聚合微球體在神經(jīng)束膜(克漢DS.(KohaneDS),利普M(LippM)，金尼RC(KinneyRC)，安東尼DC(AnthonyDC),路易斯DN(LouisDN)，羅丹N(LotanN)等人，含有布比卡因的脂質(zhì)-蛋白質(zhì)-糖顆粒于神經(jīng)外膜中的生物可相容性(Biocompatibilityoflipid-protein-sugarparticlescontainingbupivacaineintheepineurium.)生物醫(yī)學(xué)材料石開(kāi)究雜志(JBiomedMaterRes)2002;59(3):450-459，其以引用的方式并入本文中)和許多其它組織內(nèi)生物可相容，但其傾向于在腹膜內(nèi)引起粘連(克漢DS.(KohaneDS),提斯JY(TseJY)，伊奧Y(YeoY)，帕德拉R(PaderaR)，舒伯納M(ShubinaM)，朗格R(LangerR)供腹膜內(nèi)藥物傳遞的生物可降解聚合微球體和納米顆粒(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2005:Inpress,其以引用的方式并入本文中)。表2:腹膜粘連的評(píng)估<table>tableseeoriginaldocumentpage63</column></row><table>已證實(shí)纖維蛋白溶解與抗纖維蛋白溶解活性之間的平衡對(duì)于介導(dǎo)粘連的發(fā)展極為重要(佛克K(FalkK)，布杰奎斯特P(BjorquistP),斯托姆奎斯特M(StromqvistM)，霍姆達(dá)爾L.(HolmdahlL.)通過(guò)抑制1型纖溶酶原活化劑抑制劑來(lái)減少試驗(yàn)性粘連形成(Reductionofexperimentaladhesionformationbyinhibitionofplasminogenactivatorinhibitortype1.)英國(guó)手術(shù)雜志(BritishJournalofSurgery)2001;88:286-289;賓達(dá)MM(BindaMM)，默林納斯CR(MolinasCR)，克寧科PR(KoninckxPR.)反應(yīng)性氧物質(zhì)與禾占連形成粘連予頁(yè)防的臨床意義(Reactiveoxygenspeciesandadhesionformation:clinicalimplicationsinadhesionprevention.)人類生殖(HumanReproduction)2003;18(12):2503-2507，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。漿膜纖維蛋白溶解主要受t陽(yáng)PA禾BPAI的間皮釋放調(diào)控(緹茲L(TietzeL)，艾伯瑞奇A(EibrechtA)，斯奇爾特C(SchauerteC)，克羅斯哈芬B(KlosterhalfenB)，阿莫塔奇B(Amo-TakyiB)，基哈倫J(GehlenJ)等人，通過(guò)轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子(31(TGF-(31)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)和白細(xì)胞介素1(3(IL-ip)調(diào)節(jié)人類腹膜間皮細(xì)胞的促纖維蛋白水解和抗纖維蛋白水解特性(Modulationofpro-andantifibrinolyticpropertiesofhumanperitonealmesothelialcellsbytransforminggrowthfactorbetal(TGF-betal))，tumornecrosisfactoralpha(TNF-alpha)andinterleukin1beta(IL-1beta).)血栓與止血學(xué)(ThrombHaemost)1998;79(2):362-370，其以引用的方式并入本文中)。已研究HAX的降解產(chǎn)物是否會(huì)引起可能由HAX凝膠減少粘連形成引起的tPA和PAI-1間皮產(chǎn)量的改變。在37。C下于10U/ml透明質(zhì)酸酶中培育的交聯(lián)HA凝膠使所述降解產(chǎn)物穩(wěn)定釋放(圖5A)。將間皮細(xì)胞培育于補(bǔ)充有或未補(bǔ)充有100^生理鹽水或者100|xl含有20mg/mlHA(490kD或50kDMW)或HA兩種單體組分中的一種(D-葡糖醛酸或N-乙?；?D-葡糖胺)的生理鹽水的lml培養(yǎng)基中。圖5B顯示與未經(jīng)治療或經(jīng)生理鹽水治療的對(duì)照相比，利用不同MW的透明質(zhì)酸和單體生長(zhǎng)的間皮細(xì)胞中的tPA產(chǎn)量存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著且極小的降低(p=0.15)。經(jīng)HA或單體治療的組之間的差異統(tǒng)計(jì)學(xué)不顯著(p=0.112)。類似地，任何治療對(duì)PAI-1產(chǎn)量的影響都不明顯(數(shù)據(jù)未顯示)。不希望受任何理論束縛，相信利用HAX凝膠引起的粘連形成的顯著降低在很大程度上可能歸因于HAX凝膠的障壁功能。然而，由于粘連形成的病因?qū)W受許多生物事件的介導(dǎo)，故HAX凝膠的潛在可溶性浸出(可溶性HA，單體)不會(huì)增加tPA產(chǎn)量或影響活體外PAI-1含量的事實(shí)也不能排除生物影響的可能性。實(shí)激5.*卓體濃度界分f著Wft4Z凝,燁,游嚴(yán)俯材料與方法遂欲^^潔廢^/ZAX凝度游餘,，制備由具有多種分子量的各種濃度的HA-ADH和HA-CHO組成的HAX凝膠，并且隨時(shí)間監(jiān)測(cè)透明質(zhì)酸酶中凝膠的降解。通過(guò)使用渦旋混合器將各種濃度和Mw的150piHA-ADH和150^HA-CHO立即混合于2ml微量離心管中來(lái)制備HAX凝膠，且隨后將其在37'C下于透明質(zhì)酸酶(50U/ml于PBS中)中64培育。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)時(shí)，完全去除透明質(zhì)酸酶緩沖液，并且經(jīng)重量分析測(cè)定剩余HAX凝膠的濕重。將結(jié)果繪制為以各時(shí)間點(diǎn)時(shí)凝膠質(zhì)量％/原始凝膠濕重與時(shí)間的關(guān)系的圖。結(jié)果為評(píng)定通過(guò)改變基質(zhì)的交聯(lián)密度進(jìn)一步優(yōu)化和控制HAX凝膠的特性的潛力，研究各種凝膠濃度的影響。上文所使用的HA粘性極強(qiáng)，且難以溶解高于20mg/ml的HA。因此，為增加HA濃度，制備出較低Mw的前體。為此，由50kDHA(而非490kD)制備HA-ADH且由490kDHA(而非1.36MD)制備HA-CHO。這允許調(diào)配75mg/mlHA-ADH和60mg/mlHA-CHO。為加速凝膠降解過(guò)程并觀察合理時(shí)間段內(nèi)的宏觀凝膠質(zhì)量改變，使用50U/ml透明質(zhì)酸酶執(zhí)行降解實(shí)驗(yàn)。所有濃度的HAX凝膠最初都膨脹且隨后以一定速率(此視濃度(圖6A)和分子量(圖6B)而定)降解。當(dāng)HA-ADH和HA-CHO溶液的濃度分別從20mg/ml增加到75mg/ml和30mg/ml吋，水凝膠濕重降低50%的時(shí)間("半衰期")從5天增加到11天，并且當(dāng)所述濃度增到75mg/ml和60mg/ml時(shí)，所述時(shí)間增加到22.5天(圖6A)。(注意在后一比較中，只有HA-CHO的濃度是變化的。)當(dāng)HA-ADH和HA-CHO的濃度保持恒定時(shí)，利用由較高M(jìn)w得到的HA-CHO制得的凝膠的半衰期較長(zhǎng)(1.36MDHA-CHO的大于50天相對(duì)于490kDHA-CHO的22天；圖6B)。在這些實(shí)驗(yàn)中，將HAX凝膠澆注于微量離心管中，其中所述凝膠僅一側(cè)面向透明質(zhì)酸酶溶液。因此，此處所示的絕對(duì)半衰期可能不與本文所述其它實(shí)驗(yàn)(其中所述凝膠的所有表面都暴露于酶溶液)直接相關(guān)。本實(shí)例中所提供的結(jié)果表明，HAX凝膠一旦形成即呈現(xiàn)持久的實(shí)體障壁，其可持續(xù)數(shù)天到數(shù)周(視凝膠組分的濃度和分子量而定，參看圖6)直到最終為例如內(nèi)源透明質(zhì)酸酶降解?？筛鶕?jù)所述方法通過(guò)改變這些參數(shù)從而可控制地調(diào)節(jié)降解時(shí)程的事實(shí)使得本系統(tǒng)適于特定應(yīng)用，這視需要障壁功能的時(shí)間長(zhǎng)度而定。,激。染眾/M/謝術(shù)厥教^:凝,游激備浙表^材料與方法#夥透明質(zhì)酸(HA，1.36MDa禾Q490kDa)是購(gòu)自基因酶公司(GenzymeCorporation)(馬薩諸塞州劍橋(Cambridge,MA))。聚(乳酸-共聚-乙醇酸)(PLGA，丙交酯:乙交酯=65:35，Mw90,000)是從阿爾科姆斯公司(線e腦s)(馬薩諸塞州劍橋(Cambridge,MA))獲得。聚乙烯醇(PVA，Mw6000)是購(gòu)自伯利森斯有限公司(Polysciences，Inc.)(賓州威靈頓(Warrington,PA))。除非另作指示，否則所有其它試劑都購(gòu)自西格瑪-阿德里奇公司(Sigma-Aldrich)(美國(guó)密蘇里州圣路易斯(St.Louis,MO,USA))。^^拔遂欲^^^^/PL04^^e^^^游凌/吝如實(shí)例I中所述合成原位可交聯(lián)HA衍生物。通過(guò)單乳化方法制備空白PLGA納米顆粒。將PLGA200mg溶解于5ml二氯甲烷與二甲亞砜(DMSO)的3:2混合物中。將聚合物溶液直接添加到20ml5%PVA中。隨后使用超聲波儀(威伯塞爾系列VC-250型(VibracellVC-250)，超聲波與材料有限公司(Sonics&MaterialsInc.)，康涅狄格州丹波尼(Dunbury,CT))將混合物均質(zhì)化達(dá)1分鐘以產(chǎn)生油-水乳液。將所形成的乳液添加到100ml蒸餾水中且在室溫下攪拌整夜。在減壓下去除剩余溶劑。通過(guò)使用L8-70M超高速離心機(jī)(貝克曼公司(Beckman)，加州富爾頓(FulIerton,CA))和SW28翻轉(zhuǎn)吊桶式轉(zhuǎn)子(swingingbucketrotor)以25,000rpm離心20分鐘來(lái)收集納米顆粒，且通過(guò)使其通過(guò)超濾膜(奧特塞爾艾米肯YM100(UltracelAmiconYM100),密理博公司(Millipore)，馬薩諸塞州比勒里卡(Billerica,MA))進(jìn)一步純化，隨后凍干。利用ZetaPALS型4電位分析儀(zetapotentialanalyzer)(美國(guó)布魯克海文儀器公司(BrookhavenInstrumentsCorporation),紐約州霍特斯維爾(Holtsville，NY))測(cè)量粒徑。^t/凝殿游諒y備通過(guò)混合20mg/ml凝膠前體(HA-ADH禾口HA-CHO)的溶液來(lái)制備無(wú)納米顆粒的交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠("HAX")。通過(guò)將20mg/ml凝膠前體溶液混合于20mg/mlPLGA納米顆粒懸浮液中來(lái)制備含有PLGA納米顆粒的復(fù)合HAX凝膠("雜化")。/7游冶篛分橋通過(guò)掃描電鏡分析檢查PLGA納米顆粒的表面形態(tài)和凍干水凝膠的內(nèi)部結(jié)構(gòu)。通過(guò)混合在蒸餾水中制備的等體積前體溶液來(lái)制造水凝膠。隨后將水凝膠凍干且在液氮中冷卻后破碎。將樣本用鈀和金(IOO埃厚)濺涂并且使用掃描電鏡(JEOLJSM6320，美國(guó)JEOL有限公司，馬薩諸塞州皮伯迪(Peabody,MA))觀察。i凝好/坊將100|_U含有PLGA納米顆粒的HA-ADH溶液(HA-ADH和PLGA納米顆粒為在生理鹽水中20mg/ml或10mg/ml)添加到8x35mm玻璃小瓶中，所述玻璃小瓶含有磁力攪拌棒(特氟隆氟碳樹(shù)脂(Teflonfluorocarbonresin)，5x2mm，費(fèi)雪科技公司(FisherScientific))。隨后將100(il含有PLGA納米顆粒的HA-CHO溶液(HA-CHO和PLGA納米顆粒都為在生理鹽水中20mg/ml或10mg/ml)添加到所述小瓶中，并且使用康寧PC-320型熱板/攪拌器以155rpm攪拌溶液直到形成雜化凝膠。將溶液形成完全與所述盤底部分離的固體小球時(shí)的時(shí)間視為膠凝時(shí)間。出于比較，還測(cè)試HAX凝膠的形成。將結(jié)果報(bào)導(dǎo)為4個(gè)獨(dú)立測(cè)量值的平均值與標(biāo)準(zhǔn)差。流變絲,W試通過(guò)使用1ml注射器和百特雙閥施用器(Baxterdualvalveapplicator)將20mg/ml凝膠前體溶液添加到夾于兩個(gè)載片之間的橡膠模具中來(lái)制備圓柱形HAX和雜化凝膠。所制得的水凝膠的直徑和厚度分別為8mm和3.5mm。隨后將凝膠轉(zhuǎn)移到AR1OOON型流變儀(TA儀器公司(TAInstruments)，特拉華州紐卡斯?fàn)?NewCastle,DE))中以供流變性測(cè)量。所有實(shí)驗(yàn)都是在室溫下使用8mm直徑的平行板進(jìn)行。通過(guò)蠕變測(cè)試和應(yīng)力掃描測(cè)試(stresssweeptest)測(cè)量剪切模量G。對(duì)于蠕變測(cè)試，使水凝膠經(jīng)歷恒定剪切應(yīng)力(5、10、20或40Pa)達(dá)90秒且隨后使其回復(fù)90秒。在各蠕變和回復(fù)步驟約60秒后，應(yīng)變達(dá)到恒定值。G測(cè)定為應(yīng)變(回復(fù)步驟末期的讀數(shù))對(duì)應(yīng)力曲線的斜率的倒數(shù)。對(duì)于應(yīng)力掃描測(cè)試，以恒定頻率(0.1Hz)施加在1-100Pa范圍內(nèi)的振蕩應(yīng)力。將在40Pa下獲得的彈性模量G'用作G的近似值，這是因?yàn)檎承阅Ａ縂"接近O。將結(jié)果報(bào)導(dǎo)為4個(gè)獨(dú)立測(cè)量值的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差。實(shí)賴6-S游統(tǒng)^學(xué)分折將流變性測(cè)量值報(bào)導(dǎo)為平均值與標(biāo)準(zhǔn)差，并且使用學(xué)生t檢驗(yàn)(Studentt-test)加以比較。由于細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)據(jù)不總是遵循正態(tài)分布，故將其表示為中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)；也以此方式報(bào)導(dǎo)分?jǐn)?shù)。為此，使用SPSS軟件(伊利諾州芝加哥市(Chicago,IL))使用曼-惠特尼U檢驗(yàn)(Mann-WhitneyU-test)、克魯斯凱-沃利斯檢驗(yàn)(Kruskal-Wallistest)或費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn)(Fisher'sexacttest)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)推斷。認(rèn)為在雙尾檢驗(yàn)(2-tailedtest)上小于0.05的p值為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。結(jié)果染眾凝,游表,PLGA納米顆粒的平均直徑和；電位分別為278.4±18.7nm和-18.1±4.0mV。通過(guò)掃描電鏡分析，粒徑分布在50nm到300nm的相對(duì)較寬的范圍內(nèi)(圖7A)。凍干雜化凝膠基質(zhì)具有直徑在5到10Mm(圖7B)范圍內(nèi)的連續(xù)孔，其可比擬HAX凝膠的孔(圖7C)。雜化凝膠具有粗糙表面(圖7B插圖)，表明納米顆粒包埋于凝膠基質(zhì)中。如本文所述，HAX凝膠作為粘連障壁的優(yōu)勢(shì)之一在于其可在適當(dāng)時(shí)間范圍內(nèi)原位交聯(lián)以治療粘連。為評(píng)定聚合納米顆粒的并入是否干擾膠凝，將HAX凝膠與雜化凝膠的膠凝時(shí)間相比較。兩個(gè)系統(tǒng)在混合后迅速膠凝，而兩者之間并不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)或?qū)嶋H上顯著的差異〔表3)。類似地，希望確定納米顆粒是否會(huì)影響凝膠的機(jī)械特性。剪切模量不受納米顆粒影響(表3)。表3.HAX凝膠與雜化凝膠的膠凝時(shí)間和剪切模量的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage67</column></row><table>實(shí)銀7,染眾^4/游術(shù),#^凝,^^欽裙吝絲材料與方法/7t^f應(yīng)如實(shí)例6中所述制備雜化HA/納米顆粒水凝膠。潘應(yīng)潛遭分叛將人類間皮細(xì)胞(ATCC，CRL-9444)培養(yǎng)于含有伊爾氏鹽(Earle'ssalt)、L-谷氨酰胺和2.2g/L碳酸氫鈉且補(bǔ)充有3.3nM表皮生長(zhǎng)因子、400nM氫化可的松、870nM胰島素、20mMHEPES和10%胎牛血清的培養(yǎng)基199(英杰公司(Invitrogen))中。將細(xì)胞以每孔50,000個(gè)細(xì)胞的密度接種于24孔培養(yǎng)板中的1ml培養(yǎng)基中。整夜后，將100圓柱形雜化凝膠或生理鹽水添加到各孔中。在存在水凝膠的情況下培育不同時(shí)間后，利用MTT分析試劑盒(普洛麥格公司塞爾泰特96非放射性細(xì)胞增殖分析(PromegaCellTiter96Non-RadioactiveCellProliferationAssay))評(píng)定細(xì)胞活力。結(jié)果報(bào)導(dǎo)為針對(duì)未經(jīng)處理的對(duì)照細(xì)胞的吸光度標(biāo)準(zhǔn)化的所測(cè)量的吸光度(標(biāo)準(zhǔn)化細(xì)胞活力％=100x在存在樣本的情況下生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中的細(xì)胞的吸光度/生長(zhǎng)于培養(yǎng)基中的細(xì)胞的吸光度)中值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)。結(jié)果利用MTT分析評(píng)定雜化凝膠對(duì)活體外間皮細(xì)胞活力的影響。使細(xì)胞在存在100pi圓柱形雜化凝膠(20mg/mlHAX+20mg/mlPLGA納米顆粒)(測(cè)量3.5mmx8mm直徑)的情況下生長(zhǎng)達(dá)3天。這是在存在或不存在10單位/毫升透明質(zhì)酸酶(一種降解HAX的酶)的培養(yǎng)基中進(jìn)行。(在對(duì)照組中，此提供標(biāo)準(zhǔn)化活力的分母，添加100(al標(biāo)準(zhǔn)生理鹽水替代凝膠。)細(xì)胞活力在培育第1天和第3天吋保持良好，表明這與透明質(zhì)酸酶的存在無(wú)關(guān)。圖8中所示組之間并無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。遞過(guò)屜泣^r凝染眾ft4/辨術(shù)^^教凝^茨欽v、腐裙遼游搭遂材料與方法如實(shí)例6中所述制備雜化HA/納米顆粒水凝膠。染眾凝應(yīng)游活沐/^應(yīng)^依照麻省理工學(xué)院委員會(huì)(MassachusettsInstituteofTechnologyCommittee)關(guān)于動(dòng)物護(hù)理所批準(zhǔn)的方案，遵照有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理和使用的NIH指導(dǎo)(NIH公告#85-23，1985年修訂)護(hù)理動(dòng)物。</、嵐^^贗^注浙#"星〃使用重20-35g的雄性SV129小鼠。將1ml無(wú)菌雜化凝膠經(jīng)由左下象限中的單個(gè)穿孔注射入腹膜中。施用前，通過(guò)紫外殺菌照明將材料滅菌2小時(shí)并將其溶解于無(wú)菌生理鹽水中。將具有PLGA納米顆粒的HA-ADH0.5ml(10mg/mlHA-ADH和20mg/ml納米顆粒)和HA-CHO0.5ml(10mg/ml含有20mg/ml納米顆粒)放入獨(dú)立1ml與百特雙閥施用器相連的無(wú)菌注射器中，并通過(guò)20號(hào)針共擠出。注射后2或7天，利用二氧化碳對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。檢查動(dòng)物中粘連的存在與否以及雜化凝膠邀-織學(xué)澄產(chǎn)將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林中，包埋于石蠟中，切片并使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用蘇木素和伊紅(H&E)染色。結(jié)果^^^秀激傳遞游裔'方茲游辨^發(fā)研發(fā)將藥物傳遞到腹膜中以預(yù)防和/或治療腹膜粘連和其它目的的方法引起廣泛關(guān)注。然而，較快的清除率妨礙腹膜的藥物傳遞。試圖確定是否能通過(guò)應(yīng)用聚合物基控釋技術(shù)來(lái)改進(jìn)腹膜藥物傳遞。還研究腹膜使用聚(乳酸-共聚-乙醇酸)(PLGA)(—種常用于藥物控釋的通常具有優(yōu)良生物相容性的生物可降解聚合物)的微米顆粒和納米顆粒的適應(yīng)性。將10到100mg劑量的直徑為5到250pm的90kDaPLGA微米顆粒注射入鼠科腹膜中(每組n=3-5只)。發(fā)現(xiàn)注射后2周聚合物殘余物和粘連的較高發(fā)生率(例如，50mg的5)Lim微米顆粒在83%動(dòng)物中引起粘連)。組織學(xué)揭示慢性發(fā)炎，且異物巨細(xì)胞突出并且顆粒直徑大于5Hm。由54、57禾n10kDaPLGA制成的5pm微球體(Y照射)引起極少粘連(16.7%)和類似地殘余物發(fā)生率。90kDaPLGA的納米顆粒(265nm)也會(huì)引起少得多的粘連(6.3%的動(dòng)物)，這可能是因?yàn)槠湓?天內(nèi)從腹膜內(nèi)清除且在脾臟和肝臟中被隔絕，在脾臟和肝臟中注意到泡沫狀巨噬細(xì)胞。這些實(shí)驗(yàn)表明，所測(cè)試的微米顆粒和納米顆粒單獨(dú)都無(wú)法提供用于腹膜的可接受的聚合物藥物傳遞系統(tǒng)。假定將顆粒截留于原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠中的供腹膜內(nèi)藥物傳遞的復(fù)合水凝膠系統(tǒng)在允許有效使用聚合物基藥物傳遞的同時(shí)還將充當(dāng)抑制粘連形成的障壁。具體來(lái)說(shuō)，假定在可能以其它方式引起粘連形成的顆粒的情況下，水凝膠將至少部分防止經(jīng)封閉的顆粒引起粘連形成。在將以其它方式從腹膜內(nèi)迅速清除的顆粒的情況下，水凝膠將所述顆粒保留在腹膜內(nèi)。V、廣,腐^注浙漠蕃游生激樹(shù)薦絲為檢驗(yàn)HAX將納米顆粒保持在腹膜內(nèi)且同時(shí)防止由高分子量PLGA的存在引起的粘連形成的假定，用1ml含有20mgPLGA納米顆粒的10或20mg/mlHAX注射小鼠腹膜。先前已顯示在不存在HAX的情況下注射納米顆粒的動(dòng)物在2天內(nèi)離開(kāi)腹膜，存留極少的聚合物殘余物，并且通常具有變大、脫色的脾臟以及泡沫狀巨噬細(xì)胞(資料未顯示)。注射后2天尸檢(表4)時(shí)，含有10mg/mlHAX的雜化凝膠在注射部位以離散塊狀物的形式保留，所述塊狀物易于與周圍的腹部?jī)?nèi)容物分離(圖9A)。含有20mg/mlHAX的雜化凝膠看起來(lái)更強(qiáng)的粘附于腹部?jī)?nèi)容物，而仍易于與接觸器官分離，但其存留一些殘余物(圖9B)。在任一組中都未注意到粘連或脾臟尺寸或顏色的異常。注射后7天處死另一含有20mg/mlHAX的雜化組。4只小鼠忠有3只看到凝膠(圖9C),且凝膠質(zhì)69量可比得上2天后回收的凝膠質(zhì)量。在這一組中看到粘連的的單一情況下，可見(jiàn)極少凝膠或看不到凝膠，這表明可能的腔內(nèi)凝膠注射已穿透腸(且可推測(cè)隨后在糞便中清除)。此外，脾臟看起來(lái)很正常。對(duì)于經(jīng)染色的從許多動(dòng)物的腹腔回收的凝膠載片的光學(xué)顯微鏡檢查注意到泡沫狀巨噬細(xì)胞，表明經(jīng)保留的納米顆粒的存在(圖IIB，插圖)。在肝臟或脾臟中未見(jiàn)泡沫狀巨噬細(xì)胞。如在圖9所有圖中可看出，在許多凝膠的周圍注意到增加的血管分布。表4.小鼠模型中雜化凝膠的生物相容性<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>邀逝紗凝染眾/M/游苯微微茨戯纖微雌蘑縦材料與方法水凝膠如實(shí)例6中所述制備雜化HA/納米顆粒水凝膠。染眾凝i游^沐/^/應(yīng)I依照麻省理工學(xué)院委員會(huì)(MassachusettsInstituteofTechnologyCommittee)關(guān)于動(dòng)物護(hù)理所批準(zhǔn)的方案，遵照有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理和使用的NIH指導(dǎo)(NIH公告弁85-23,1985年修訂)護(hù)理動(dòng)物。^粼壁欽資-穿應(yīng)凝'銀漠，將雌性白化兔(西班牙野兔(Oryctolaguscuniculus);新西蘭白(NewZealandWhite)，科文斯公司(Covance)，賓夕法尼亞州黑澤爾頓(Hazleton，PA))(3土0.5kg)用作模型動(dòng)物。如實(shí)例3中所述誘發(fā)術(shù)后粘連。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，通過(guò)沿腹壁上的白線的10cm長(zhǎng)中線切口打開(kāi)腹膜后，從距中線1cm開(kāi)始對(duì)右側(cè)腹壁產(chǎn)生3x4cm包含腹膜壁層和一層肌肉(約lmm厚)的缺損。隨后，使用無(wú)菌手術(shù)刷從回盲部遠(yuǎn)端第6袋到第12袋雙向擦傷盲腸的腸系膜側(cè)邊80-160次，引起出血。將20只動(dòng)物隨機(jī)分配到以下實(shí)驗(yàn)組(i)未治療(n=12);(ii)利用10ml交聯(lián)雜化凝膠覆蓋經(jīng)切開(kāi)腹壁和盲腸表面。將5ml具有PLGA納米顆粒的HA-ADH(20mg/mlHA-ADH和20mg/ml納米顆粒)禾口5mlHA-CHO(20mg/mlHA匿CHO和20mg/ml納米顆粒)放入與百特雙閥施用器相連的lOml獨(dú)立無(wú)菌注射器中，并通過(guò)15號(hào)針共擠出。液體前體立即開(kāi)始膠凝，符合施用區(qū)域的形狀。視覺(jué)檢査，膠凝在不到3分鐘內(nèi)完成水凝膠在超過(guò)所述時(shí)間點(diǎn)時(shí)不流動(dòng)。如實(shí)例3中所述采取手術(shù)后護(hù)理。程序后1周，利用戊巴比妥鈉對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。遵循所報(bào)導(dǎo)的經(jīng)修改的方法對(duì)粘連評(píng)分(伯恩斯JW(BurnsJW)，斯金納K(SkinnerK)，考特J(ColtJ)，謝德林A(SheidlinA)，布朗森R(BronsonR)，雅克伯Y(YaacobiY)等人，通過(guò)用透明質(zhì)酸溶液預(yù)涂組織預(yù)防組織損傷和術(shù)后粘連(Preventionoftissueinjuryandpostsurgicaladhesionsbyprecoatingtissueswithhyaluronicacidsolutions.)手術(shù)石開(kāi)究雜志(JournalofSurgicalResearch)1995;59:644-652,其以引用的方式并入本文中)。O分表示無(wú)粘連，1分表示可利用重力分離的組織粘附；2分表示可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘附且3分表示需要利器解剖的粘連。也記錄下粘連的位置(其是否包括縫合部位；粘連中所涉及的盲腸袋的位置和數(shù)量)和重量改變。資-織學(xué)澄產(chǎn)將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林中，包埋于石蠟中，切片并使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)用蘇木素和伊紅(H&E)染色。結(jié)果^游蘑肅粼壁欽銜-,應(yīng)^傷'裙，^染眾凝應(yīng)游全激樹(shù)^絲浙勸資如方法中所述，使8只兔接受剖腹術(shù)，其中將盲腸擦傷且切開(kāi)一段相鄰的腹壁。將雜化凝膠(20mg納米顆粒于10ml20mg/mlHAX中)涂于受損部位上。l周后尸檢時(shí)(表5),其重量損失可比得上對(duì)照組(相同損傷，未治療，n=12)。治療組中的中值粘連分?jǐn)?shù)明顯較小(p=0.002，曼-惠特尼U檢驗(yàn)；0.001，費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn))。盡管對(duì)照組屮83.3%的動(dòng)物發(fā)展3分粘連(只能通過(guò)切割分離的穩(wěn)固連接)(實(shí)例3)，但沒(méi)有一個(gè)治療組發(fā)展3分粘連(p<0.001,曼-惠特尼U檢驗(yàn)；p-0.001，費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn))。與對(duì)照組12只動(dòng)物的2只(16.7%)相比，治療組8只動(dòng)物中有5只(62.5%)完全沒(méi)有展現(xiàn)組織粘附(圖10B)(0.04,曼-惠特尼U檢驗(yàn)；p=0.035，費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn))。發(fā)展2分粘連的3只動(dòng)物中，1只是在盲腸表面與接近縫合部位的經(jīng)切開(kāi)腹壁之間粘連，1只是在經(jīng)擦傷盲腸與未擦傷盲腸之間，且1只是在經(jīng)擦傷盲腸與未擦傷盲腸之間和盲腸表面與接近縫合部位的受損腹壁之間發(fā)展2個(gè)2分粘連。因此，發(fā)生這些2分粘連的部位中有許多為未經(jīng)雜化凝膠覆蓋的部位。尸檢時(shí)，注意到雜化凝膠仍在其施用的部位處，但數(shù)量和機(jī)械特性明顯降低。在一些情況下，由雜化凝膠的殘余物覆蓋的盲腸表面保留痕量的最初擦傷的黑血(oldblood)。光學(xué)顯微鏡檢查時(shí)，在經(jīng)染色的凝膠殘余物載片中注意到推測(cè)含有聚合物碎片的泡沫狀巨噬細(xì)胞(圖IIA和B);還注意到游離聚合物(亮點(diǎn))。在肝臟或脾臟中未見(jiàn)泡沫狀巨噬細(xì)胞(未顯示)。在已施用雜化凝膠的無(wú)粘連受損腹壁的表面上也見(jiàn)到泡沫狀巨噬細(xì)胞(圖IIC和D)。表5:兔模型中腹膜粘連的評(píng)估<table>tableseeoriginaldocumentpage72</column></row><table>*中值與括號(hào)中的第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)。所述數(shù)據(jù)表明，雜化系統(tǒng)在活體外對(duì)于腹膜間皮細(xì)胞具有較低細(xì)胞毒性；在活體內(nèi)亍腹膜中生物可相容；并且內(nèi)在地能夠預(yù)防粘連。就預(yù)防粘連來(lái)說(shuō)，其至少與HAX相仿(實(shí)例3)。將納米顆粒并入HAX中基本上對(duì)凝膠系統(tǒng)的膠凝時(shí)間或剪切模量無(wú)影響。如通過(guò)凝膠殘余物中泡沫狀巨噬細(xì)胞的存在以及肝臟和脾臟中所述細(xì)胞的缺乏(其中其已在用不存在HAX的相當(dāng)質(zhì)量的納米顆粒注射的小鼠中注意到)可看出，HAX將納米顆粒成功地保持在腹膜內(nèi)達(dá)實(shí)驗(yàn)持續(xù)的時(shí)間。HAX還可預(yù)防所保留的聚合物形成粘連。所述原位形成的凝膠系統(tǒng)易T用雙管注射器或類似裝置使用。相對(duì)快速的膠凝時(shí)間允許用戶將凝膠施用于特定位置而不會(huì)溢到相鄰區(qū)域中。如上文所論述，可通過(guò)改變聚合物濃度和/或分子量或交聯(lián)密度來(lái)改變膠凝時(shí)間。因此，可易于通過(guò)腹腔鏡或透皮注射來(lái)施用此系統(tǒng)。潛在用途不限于腹膜且可用于投與多種治療劑(包括抑制粘連形成的藥劑和/或具有其它所需作用的藥劑)。雜化凝膠對(duì)于預(yù)防兔側(cè)壁缺損-盲腸擦傷模型的腹膜粘連極為有效。當(dāng)比較3分粘連(其為只能通過(guò)利器解剖分離的穩(wěn)固連接)的發(fā)病率時(shí)，此尤其明顯。與未經(jīng)治療動(dòng)物中83.3%的發(fā)生率(實(shí)例3)相比，經(jīng)雜化凝膠治療的動(dòng)物中不存在3分粘連。類似地，與對(duì)照組的17%相比，62.5%的經(jīng)治療動(dòng)物未展現(xiàn)粘連。3例2分組織粘附(可通過(guò)鈍器解剖分離)出現(xiàn)于接近縫合部位處或兩個(gè)盲腸表面(其中l(wèi)個(gè)未擦傷)之間，即，所有涉及粘連的區(qū)域都未經(jīng)雜化凝膠覆蓋。此處，凝膠是施用于損傷部位的邊界內(nèi)?？巛^大表面積的系統(tǒng)施用可進(jìn)一步增加功效?？偟膩?lái)說(shuō)，此處所述的雜化HAX-納米顆粒系統(tǒng)看起來(lái)為適當(dāng)?shù)母鼓?nèi)藥物傳遞系統(tǒng)以及預(yù)防術(shù)后粘連的有效障壁。遞逝妙教#,心游/M微微鼓微術(shù),離蕭遂材料與方法(^魔^"度游汰眾如上所述制備HA-ADH和HA-CHO。利用不同濃度(包括最大可達(dá)到濃度)的具有不同Mw的HA-ADH和HA-CHO的溶液制備HAX凝膠。通過(guò)使用渦旋混合器將150piHA-ADH和150HA-CHO溶液混合于2ml微量離心管中且隨后將其在37'C下于透明質(zhì)酸酶(50U/ml于PBS中)中培育來(lái)制備HAX凝膠。在預(yù)定時(shí)間點(diǎn)時(shí)，完全去除透明質(zhì)酸酶緩沖液，并且經(jīng)重量分析測(cè)定剩余HAX凝膠的濕重。置復(fù)激廢^^f星y使用雌性白化兔(西班牙野兔(OryctolaguscunicuIus);新西蘭白(NewZealandWhite))(3土0.5kg)。如上文所述執(zhí)行第一次剖腹術(shù)和手術(shù)后護(hù)理。1周后執(zhí)行第二次剖腹術(shù)。在第2次剖腹術(shù)前檢查時(shí)，將以下動(dòng)物從第2次剖腹術(shù)中排除(i)由于第1次剖腹術(shù)而體重?fù)p失超過(guò)15%;(ii)進(jìn)食不良。進(jìn)行剖腹術(shù)時(shí)，如前述對(duì)粘連評(píng)分隨后溶解(切割)。使用無(wú)菌刷，單向再擦傷先前經(jīng)切開(kāi)腹壁50次并且雙向再擦傷第6與第12袋之間的盲腸表面150-200次，直到獲得出血床(bleedingbed)。將30只動(dòng)物隨機(jī)分到實(shí)驗(yàn)組并且將測(cè)試材料施用于受損區(qū)域。手術(shù)者對(duì)所述材料的性質(zhì)未知。通過(guò)紫外殺菌照明將HA-ADH和HA-CHO滅菌2小時(shí)并將其分別溶解于5ml無(wú)菌生理鹽水中。如前述，利用雙閥施用器將10ml凝膠施用于受損部位。作為對(duì)照，使一組動(dòng)物不接收治療，并且另一組接收10ml生理鹽水。在治療受損區(qū)域后，分別利用2-0愛(ài)惜良縫線(Ethilon)和3-0地可松縫線(Dexon)閉合腹膜和腹壁。利用2-0愛(ài)惜良縫線閉合皮膚。使動(dòng)物醒來(lái)且自由取用食物和水。術(shù)后48小時(shí)內(nèi)，以8-12小時(shí)間隔經(jīng)皮下投與丁丙諾啡0.02-0.03mg/kg。第2次剖腹術(shù)后1周通過(guò)靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉處死動(dòng)物。以兩種方式對(duì)粘連評(píng)分(i)粘連的質(zhì)量評(píng)分如下使用所報(bào)導(dǎo)的方法的修改方法對(duì)粘連評(píng)分(伯恩斯JW(BurnsJW)，斯金納K(SkinnerK)，考特J(ColtJ),謝德林A(SheidlinA)，布朗森R(BronsonR)，雅克伯Y(YaacobiY)等人，通過(guò)用透明質(zhì)酸溶液預(yù)涂組織預(yù)防組織損傷和術(shù)后粘連(Preventionoftissueinjuryandpostsurgicaladhesionsbyprecoatingtissueswithhyaluronicacidsolutions.)手術(shù)研究雜志(JournalofSurgicalResearch)1995;59:644-652，其以引用的方式并入本文中)。0分=無(wú)粘連，1分=利用重力將會(huì)分離的組織粘附；2分=可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘附；3分=需要利器解剖的粘連。如果存在具有不同得分的多個(gè)粘連，那么選擇得分較高者作為代表性得分；(ii)測(cè)量2分或3分粘連的面積以用于粘連的定量評(píng)估。記錄下粘連的位置(其是否包括縫合部位；粘連中所涉及的盲腸袋的位置和數(shù)量)和重量改變。將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林中，包埋于石蠟中，切片并用蘇木素和伊紅染色以供組織學(xué)檢查。結(jié)果73粘度會(huì)阻止先前使用的HA溶液的濃度增加(尤其HA-ADH)。為進(jìn)一步增加濃度，使用較低Mw的HA制備經(jīng)修飾HA。如表6中所示，最大實(shí)際濃度(即可利用吸管或注射器處理的濃度)隨HA的Mw的降低而增加。表6.經(jīng)修飾HA溶液的最大濃度<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>*應(yīng)注意所列的Mw為原始HA的標(biāo)稱Mw。凝魔濃度游沐眾所有具有增加濃度的HAX凝膠都持續(xù)比20mg/mlHAX凝膠長(zhǎng)得多的時(shí)間(表7)。應(yīng)注意，持續(xù)時(shí)間最長(zhǎng)的凝膠并非最高濃度凝膠。盡管具有高密度，由低MwHA組成的凝膠(即，主鏈上具有許多缺口)看起來(lái)在降解的后一階段具有較快的質(zhì)量損失。在所測(cè)試的HA組合中，75mg/mlHA-A(50kD)禾卩60mg/mlHA-B(1.36MD)提供最慢降解的HAX凝膠。(在50u/ml透明質(zhì)酸酶中tl/2:51天)。將由75mg/mlHA-ADH(50kD)+60mg/mlHA-CHO(1.36MD)形成的凝膠稱為HAXhx。表7.HAX凝膠于50u/ml透明質(zhì)酸酶中的半衰期<table>tableseeoriginaldocumentpage74</column></row><table>a.水凝膠濕重降低50%的時(shí)間b.通過(guò)外推法測(cè)定重復(fù)激/,術(shù)漠歪y游砑充本模型產(chǎn)生廣泛、可再現(xiàn)的粘連。由于其產(chǎn)生的豐富的粘連對(duì)于治療是極大挑戰(zhàn)，故其并不常用。重復(fù)剖腹術(shù)模型使得能評(píng)估候選材料預(yù)防重度粘連和/或復(fù)發(fā)粘連(市售產(chǎn)品對(duì)其僅展現(xiàn)有限作用)的功效。此外，本模型使得能鑒別甚至比前述實(shí)例中所述材料更有效的材料。第1次剖腹術(shù)后，30只動(dòng)物中有29只(96.7%)發(fā)展3分粘連(和部分2分粘連)。所述粘連主要涉及切開(kāi)的腹壁和經(jīng)擦傷的盲腸袋，通常還涉及未擦傷盲腸(主要在回盲部周圍，因?yàn)槠湮恢檬蛊淠芙佑|切開(kāi)的腹膜壁)。第1次剖腹術(shù)后第1周時(shí)，動(dòng)物失去-6.1±3.9%體重。通過(guò)利器或鈍器解剖小心地溶解粘連。溶解通常導(dǎo)致腹壁的深度損傷且隨后的出血。經(jīng)再擦傷的盲腸比最初擦傷更容易出血。如果不經(jīng)任何治療閉合切口，當(dāng)1周后再次探査時(shí)，100%(n=6)己發(fā)展3分粘連。粘連不限于受損位置，而是涉及腹壁上的縫合線、未受損盲腸表面和/或盲腸間、盲腸近端結(jié)腸表面間。粘連的中值總面積為12.7(25%:9.4，75%:16.6)cm2。第2次剖腹術(shù)后l周的存活期間，動(dòng)物失去-3.5±7.4%體重。7大凝^^游^,^/f^使用重復(fù)剖腹術(shù)模型測(cè)試tPA-HAXhx凝膠的活體內(nèi)功效并且將其與HAX凝膠和含有PLGA納米顆粒的雜化凝膠(1:1的顆粒:HA衍生物比率(w/w))的功效相比較。作為其它對(duì)照，還投與(i)tPA已經(jīng)熱處理失活的tPA-HAXhx凝膠；(ii)不存在HAX的tPA溶液團(tuán)注。實(shí)驗(yàn)方案概述于下<image>imageseeoriginaldocumentpage75</image>結(jié)果概述于表8中。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，通過(guò)使用高濃度HA衍生物實(shí)現(xiàn)的具有高交聯(lián)密度("hx")的tPA-HAX對(duì)于預(yù)防雙重?fù)p傷模型中的粘連最有效。盡管HAX(hx)(無(wú)tPA)不太有效，但無(wú)活性tPA-HAX(hx)和團(tuán)注tPA(將tPA溶液施用于受損組織上)都引起粘連面積的降低。不希望受任何理論束縛，此作用可能與活化酶(tPA，基因酶公司)中的非活性成分有關(guān)。含有100mgtPA的活化酶還含有3.5gL-精氨酸、lg磷酸、聚山梨醇酯80(<11mg)。因此，這些藥劑都適于個(gè)別或組合包涵于本發(fā)明的水凝膠中?？偟膩?lái)說(shuō)，HAX和雜化凝膠可實(shí)現(xiàn)本模型中高級(jí)別粘連的相對(duì)適度的降低(約17%)，而含有組織纖溶酶原活化劑(tPA)的HAX使高級(jí)別粘連的發(fā)生率明顯降低60%且使這些粘連的表面積減小IOO倍。重要的是，所述治療益處是在不引起全身性出血的情況下獲得，而所述全身性出血已成為所報(bào)導(dǎo)的使用游離tPA的主要問(wèn)題。表8:含有tPA的HAX凝膠的功效<table>tableseeoriginaldocumentpage76</column></row><table>1.tPA是以基因酶公司所提供的形式使用(2.2mg活化酶+L-精氨酸+磷酸+聚lll梨酸酯80)。2.tPA經(jīng)煮沸20分鐘失活。利用ELISA確定蛋白質(zhì)構(gòu)型的破壞。實(shí),，麟磁微微肌微遂藤鋪形成獻(xiàn)微鵬游雄餅本實(shí)例描述由HA和纖維素衍生物(諸如CMC(羧甲基纖維素)、MC(甲基纖維素)和HPMC(羥丙基甲基纖維素))構(gòu)成的原位可交聯(lián)水凝膠的研究。材料與方法/M-AD//、7M-C7/(9、CMC-C7/0,//PMC-C/ZO游劍吝..所述方案與上文所述的用于合成HA-CHO的方案基本上相同。廚益^凝應(yīng)，^吝，使用雙管注射器將2wt%HA-ADH禾Q2wt%HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO或MC-CHO的水溶液混合于夾在兩個(gè)載片之間的橡膠模具中。所制得的水凝膠的直徑和厚度分別為1.2cm和3.5mm。結(jié)果CMC-CHO、H尸MC-C/ZO^7AfC-C//0游#成/〃表*通過(guò)NMR禾卩FT-IR證實(shí)成功合成。通過(guò)GPC測(cè)量的重量平均分子量Mw為103到107。HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO和MC-CHO的修飾程度為約50%。ZM-CMC、浙/M-A/C游i凝好/坊，通過(guò)將HA-ADH與不同醛多糖(諸如CMC-CHO、MC-CHO和HPMC-CHO)交聯(lián)來(lái)形成多種水凝膠。如表9中所示，HAX(由交聯(lián)HA-ADH與HA-CHO所形成)、HA-HPMC、HA-MC和HA-CMC的膠凝時(shí)間在約3-18秒的范圍內(nèi)，表明其對(duì)于原位交聯(lián)的適應(yīng)性。/M-CMC、ft4-///WC//7/M-MCy^^^#^G,所測(cè)量的由流變儀測(cè)量的G值展示于表9中，HA-HPMC和HA-MC展現(xiàn)相對(duì)較高的值。表9.HA-CMC、HA-HPMC和HA-MC的膠凝時(shí)間和剪切模量膠凝時(shí)間(秒)HAX3.5±1.032.4±17.2HA-CMC18.5±.791.7±19.3HA-HPMC4.0±1.2291.7±108.6HA-MC5.8±2.9296.8±40.77#水凝^注浙#^#^^將由0.5ml2wt%HA-ADH禾卩0.5ml2wt%CMC-CHO(或MC-CHO、HPMC-CHO)組成的1ml水凝膠注射到小鼠腹膜內(nèi)。在注射到小鼠腹膜內(nèi)后，這些水凝膠生物相容性良好。注射后4天，發(fā)現(xiàn)呈粘著塊狀物形式的HA-HPMC凝膠。另一方面，HA-CMC和HAX在整個(gè)腹腔內(nèi)擴(kuò)散且覆蓋所有器官。HA-MC具有中間結(jié)構(gòu)/稠度。注射后2周，注射HAX的動(dòng)物中幾乎無(wú)殘余物。HA-HPMC凝膠在2周時(shí)仍保持。HA-CMC凝膠也保持且以一薄層覆蓋內(nèi)臟。如表10中所示，這些凝膠的注射都不會(huì)引起腹膜粘連。表10:粘連的發(fā)病率水凝膠第4天第l周第2周第3周總計(jì)HAX0/20/10/10/10/5HA-CMC0/30/10/10/60/6HA-HPMC0/20/11/10/11/5HA-MC0/20/10/10/4還測(cè)試由交聯(lián)HA衍生物和纖維素衍生物所形成的復(fù)合水凝膠抑制實(shí)例3中所述的兔粘連模型的粘連的能力。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，將HA-ADH連同CMC-CHO、MC-CHO或HPMC-CHO—起投與以形成2wt%HA-CMC、HA-MC、HA-HPMC水凝膠。將生理鹽水注射用作對(duì)照。如表11中所示，HA-CMC、HA-MC和HA-HPMC展現(xiàn)優(yōu)良的腹膜粘附預(yù)防作用。表lh兔測(cè)試結(jié)果(每組4只兔)/M-OWC/M-MC對(duì)照(生理鹽水)<table>tableseeoriginaldocumentpage78</column></row><table>頻仏'廢微微透顏麼辦遂蘇，財(cái)凝微茨雄微遂手術(shù)后腹膜粘連可引起盆腔疼痛、腸梗阻和不孕(迪澤佳G.S.(DiZerega，G.S.)，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)1999.紐約斯普林格(NewYork:Springer);其以引用的方式并入本文中)。己在商業(yè)上研究多種膜障壁裝置，取得不同程度的成功(迪澤佳G.S.(DiZerega，G.S.)，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)1999.紐約斯普林格(NewYork:Springer);其以引用的方式并入本文中)。由于由簡(jiǎn)單混合兩種不同聚合物原位形成的凝膠易于在室溫下操作且不需要輻射光源或有毒化學(xué)交聯(lián)劑，故出于此目的所述凝膠引起人們的興趣(瓊斯D.B.(Johns,D.B.);羅杰斯K.E.(Rodgers，K.E.);唐納休W.D.(Donahue,W.D.);齊沃普斯T.C(Kiorpes，T.C);迪澤佳G.S.(diZerega,G.S.)，通過(guò)手術(shù)后投與離子交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)減少粘連(Reductionofadhesionformationbypostoperativeadministrationofionicallycross-linkedhyaluronicacid.)生育禾口不育(FertilSteril)1997;68(1):37-42;李H.(Li，H.);劉Y.C(Liu,Y.C);舒X.Z.(Shu,X.Z.);格雷S.D.(Gray,S.D.);普雷斯特維奇G.D.(Presrwich,G.D.)，交聯(lián)透明質(zhì)素-絲裂霉素C7K凝膠的合成禾U生物評(píng)估(Synthesisandbiologicalevaluationofacross-linkedhyalu固an-mitomycinChydrogel).生物大分子(Biomacromolecules)2004;5(3):895-902;劉Y.C(Liu，Y.C);李H.(Li，H.);舒X.Z.(Shu,X.Z.);格雷S.D.(Gray，S.D.);普雷斯特維奇G.D.(Prestwich,G.D.)，含有絲裂霉素C的交聯(lián)透明質(zhì)素水凝膠降低手術(shù)后腹部粘連(CrosslinkedhyaluronanhydrogelscontainingmitomycinCreducepostoperativeabdominaladhesions.)生育和不育(FertilSteril)2005;83:1275-1283;歐S.H.(Oh，S.H.);金姆J.K,(Kim,J.K.);宋K.S.(Song,K.S.);諾和S.M.(Noh,S.M.);吉爾S.H.(Ghil，S.H.);優(yōu)克S.H.(Yuk,S.H.);李J.H.(Lee，J.H.)，利用溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變行為通過(guò)載有消炎藥物的普流尼克混合物預(yù)防術(shù)后組織粘連(Preventionofpostsurgicaltissueadhesionbyanti-inflammatorydrug-loadedpluronicmixtureswithsol-geltransitionbehavior.)生物材料研究雜志A(JBiomedMaterResA)2005;72(3):306-16;伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley，C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane,D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"stocross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;布爾皮特P.(Bulpitt,P.);艾斯奇曼D.(Aeschlimann，D.)，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)1999;47(2):152-169:賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera,R.);朗格R.(Langer,R.);克漢D.S.(Kohane，D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!'nw'Hicross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。其通常易于施用于受損區(qū)域上，尤其當(dāng)難以用簡(jiǎn)單薄片覆蓋時(shí)或當(dāng)所述區(qū)域極大時(shí)更是如此。透明質(zhì)酸(HA)為所述應(yīng)用的良好候選材料(瓊斯D.B.(Johns,D.B.);羅杰斯K.E.(Rodgers,K.E.);唐納休W.D.(Donahue,W.D.);齊沃普斯T.C(Kiorpes，T.C);迪澤佳G.S.(diZerega，G.S.)，通過(guò)手術(shù)后投與離子交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)減少粘連(Reductionofadhesionformationbypostoperativeadministrationofionicallycross-linkedhyaluronicacid.)生育和不育(FertilSteril)1997;68(l):37-42;李H.(Li，H.);劉Y.C(Liu,Y.C);舒X.Z.(Shu，X.Z.);格雷S.D.(Gray,S.D.);普雷斯特維奇G.D.(Presrwich,GD.)，交聯(lián)透明質(zhì)素-絲裂霉素C水凝膠的合成和生物評(píng)估(Synthesisandbiologicalevaluationofacross-linkedhyaluronan-mitomycinChydrogel).生物大分子(Biomacromolecules)2004;5(3):895-902;劉Y.C(Liu,Y.C)-'李H.(Li,H.);舒X.Z.(Shu,X.Z.);格雷S.D.(Gray,S.D.);普雷斯特維奇G.D.(Prestwich，G.D.)，含有絲裂霉素C的交聯(lián)透明質(zhì)素水凝膠降低手術(shù)后腹部粘連(CrosslinkedhyaluronanhydrogelscontainingmitomycinCreducepostoperativeabdominaladhesions.)生育禾口不育(FertilSteril)2005;83:1275-1283;伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley，C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito，T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane，D.),原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;布爾皮特P.(Bulpitt,P.);艾斯奇曼D.(Aeschlimann,D.)，化學(xué)修79飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)1999;47(2):152-169;賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera,R.);朗格R.(Langer,R.);克漢D.S.(Kohane，D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadebycross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)，這是因?yàn)楸娝苤狧A在腹膜內(nèi)生物可相容(迪澤佳G,S.(DiZerega,G.S.),腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)1999.紐約斯普林格(NewYork:Springer),其以引用的方式并入本文中)并且化學(xué)交聯(lián)HA水凝膠(HAX)可預(yù)防兔模型中腹膜粘連(伊歐Y.(Yeo,Y.);海利C(Highley，C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane，D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/ww'fwcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。透明質(zhì)酸經(jīng)內(nèi)源透明質(zhì)酸酶(克尼普P.A.(Knepper，P.A.);法伯曼A.I.(Farbman，A.泰斯?fàn)朅.G.(Telser，A.G.)，外源透明質(zhì)酸酶和兔眼中透明質(zhì)酸的降解(ExogenousHyaluronidasesAndDegradationOfHyaluronic-AcidInTheRabbitEye.)眼禾斗學(xué)研究與視力學(xué)(InvestigativeOphthalmologyandVisualScience)1984;25(3):286-293;其以引用的方式并入本文中)和羥基(索特L.(Soltes，L.);曼迪奇R.(Mendichi,R.);克根G.(Kogan，G.);斯奇勒J(rèn).(Schiller,J.);斯坦科瓦卡M.(Stankovska,M.);阿諾德J.(Arnhold，J.)，反應(yīng)性氧物質(zhì)対'于透明質(zhì)素的降角率作用(Degradativeactionofreactiveoxygenspeciesonhyaluronan.)生物大分子(Biomacromolecules)2006;7(3):659-668;尤N.(Yui,N.);奧卡諾T.(Okano，T.);桜井Y.(Sakurai，Y.)，交聯(lián)透明質(zhì)酸凝膠的發(fā)炎性反應(yīng)性降解(InflammationResponsiveDegradationOfCross-LinkedHyaluronic-AcidGels.)控釋雜志(JControlRel)1992;22(2):105-116，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)降解。已證實(shí)HAX凝膠實(shí)質(zhì)上在1周內(nèi)降解，在腹膜內(nèi)存留明顯減少的量的凝膠(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley,C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini,R.);朗格R.(Langer,R.);克漢D.(Kohane，D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部禾占連(/"w.似cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。然而，視損傷的嚴(yán)重程度或面積而定，設(shè)計(jì)能在腹膜內(nèi)持續(xù)更長(zhǎng)時(shí)間的水凝膠將是有益的。假定將HA與不會(huì)在人體內(nèi)酶促降解的其它生物可相容性多糖雜合可在保留HA優(yōu)良的生物相容性的同時(shí)減緩降解。也已知諸如羧甲基纖維素(CMC)(埃金斯T.E.(Elkins，T.E.);伯利R.J.(Bury,R.J.);瑞特J.L.(Ritter，J.L.);凌F.W.(Ling，F(xiàn).W.);奧卡斯R.A.(Ahokas，R.A.);霍姆斯C.A.(Homsey，C.A.);馬林卡L.R.(Mainak，L.R.)，在大鼠1中通過(guò)羧甲基纖維素鈉溶液預(yù)防粘連(AdhesionPreventionBySolutionsOfSodiumCarboxymethylcelluloseInTheRat,l.)生育與不育(FertilSteril)1984;41(6):926-928;劉L.S.(Liu，L.S.);伯格R.A.(Berg，R.A.)，羧甲基纖維素與聚氧化乙烯復(fù)合凝膠的粘連障壁(Adhesionbarriersofcarboxymethylcelluloseandpolyethyleneoxidecompositegels.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2002;63(3):326-332;里爾C,M.(Lehr,C,M.);伯瓦斯特J.A.(Bo畫tra，J.A.);斯奇特E.H.(Schacht,E.H.);加因格H.E.(Junginger,H.E.),殼聚糖和一些其它天然聚合物的粘膜粘連特性的活體外評(píng)估(InvitroEvaluationOfMucoadhesivePropertiesOfChitosanAndSomeOtherNaturalPolymers.)國(guó)際藥學(xué)雜志(InternationalJournalofPharmaceutics)1992;78(l):43-48;林奇R.E.(Leach,R.E.);伯恩斯J.W.(Bums,J.W.);大衛(wèi)E.J.(Dawe，E.J.);斯米斯巴伯M.D.(SmithBarbour，M.D.);戴爾蒙德M.P.(Diamond,M.R)，利用透明質(zhì)酸鹽/羧甲基纖維素凝膠減少兔子宮角模型中術(shù)后粘連形成(Reductionofpostsurgicaladhesionformationintherabbituterinehornmodelwithuseofhyaluronate/carboxymethylcellulosegel.)生育與不育(FertilSteril)1998;69(3):415-418);所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)和羧丙基甲基纖維素(HPMC)(里爾C.M.(Lehr，C.M.);伯瓦斯特J.A.(Bo西stra，J.A)'斯奇特E.H.(Schacht,E.H.);加因格H.E.Uunginger，H.E.),殼聚糖和一些其它天然聚合物的粘膜粘連特性的活體外評(píng)估(InvitroEvaluationOfMucoadhesivePropertiesOfChitosanAndSomeOtherNaturalPolymers.)國(guó)際藥學(xué)雜志(InternationalJournalofPharmaceutics)1992;78(l):43-48;所述文獻(xiàn)以引用的方式并入本文中)等纖維素衍生物在腹膜內(nèi)具有良好的生物相容性。甲基纖維素(MC)在腹膜內(nèi)的生物相容性尚未知，但據(jù)報(bào)導(dǎo)，MC與HA的混合物在鞘內(nèi)注射液中生物相容(古帕塔D.(Gupta,D.);塔特C.H.(Tator，C.H.);肖奇特M.S.(Shoichet，M.S.)，用于受損脊髓的鞘內(nèi)局部傳遞的透明質(zhì)素與甲基纖維素的快速膠凝可注身寸摻合物(Fast-gellinginjectableblendofhyaluronanandmethylcelluloseforintrathecallocalizeddeliverytotheinjuredspinalcord.)生物材料(Biomaterials)2006;27:2370-2379，其以引用的方式并入本文中)。81已合成出由HA與纖維素衍生物(諸如CMC、HPMC和MC)構(gòu)成的原位交聯(lián)可注射水凝膠。也已在活體外表征這些水凝膠，研究其對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞毒性以及其在鼠科腹膜中的生物相容性。最后，還研究其用于預(yù)防兔模型中腹膜粘連的效用。材料與方法-贅^欽浙/大凝麼游合成試^/,HA(M戶490kDa和1.4MDa)購(gòu)自基因酶公司(馬薩諸塞州劍橋(Cambridge,MA))。CMC(產(chǎn)品編號(hào)C4888)、HPMC(產(chǎn)品編號(hào)H9262)、MC(產(chǎn)品編號(hào)M0387)、透明質(zhì)酸酶、己二酸二酰肼(ADH)、l-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳化二亞胺(EDC)、羥基苯并三唑(HOBt)、高碘酸鈉、乙二醇、肼基甲酸叔丁酯(t-BC)、碳酸氫鈉、氯化鈉和乙酸都購(gòu)自西格瑪-阿爾德里奇公司(密蘇里州圣路易斯(St丄ouis,MO))。將購(gòu)自昭和電工株式會(huì)杜(ShowaDenko)(日本)的普魯蘭多糖用作凝膠滲透色譜(GPC)的標(biāo)準(zhǔn)品。^g",會(huì)激必諒y多，如圖12所示，將1.4MDaHA、CMC、HPMC和MC修飾成醛形式(分另U為HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO和MC-CHO)。所述方案類似于先前用于HA-CHO的方案(克漢DS(KohaneDS),里普M(LippM)，金尼RC(KinneyRC)，安東尼DC(AnthonyDC),路易斯DN(LouisDN);羅丹N(LotanN)等人含有布比卡因的脂質(zhì)-蛋白質(zhì)-糖顆粒于神經(jīng)外膜中的生物相容性(Biocompatibilityoflipid-protein-sugarparticlescontainingbupivacaineintheepineurium.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2002;59(3):450-459;克漢DS(KohaneDS)，提斯JY(TseJY)，伊歐Y(YeoY)，帕德拉R(PaderaR)，舒伯納M(ShubinaM)，朗格R.(LangerR.)用于腹膜中藥物傳遞的生物可降解聚合微球體和納米球體(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2005:出版；奧瑞塔H(OritaH)，夫卡斯瓦M(jìn)(FukasawaM)，吉爾吉斯W(GirgisW),迪澤佳GS.(diZeregaGS.)標(biāo)準(zhǔn)兔模型中術(shù)后粘連的抑制利用組織纖溶酶原活化劑進(jìn)行腹膜內(nèi)治療(Inhibitionofpostsurgicaladhesionsinastandardizedrabbitmodel:intraperitonealtreatmentwithtissueplasminogenactivator.)國(guó)際生育雜志(IntJFertil1991);36(3):172-177，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，將1.5gHA、CMC、HPMC或MC溶解于150ml水中，隨后添加802mg高碘酸鈉，并且攪拌2小時(shí)。添加200^1乙二醇以終止反應(yīng)，并立即相對(duì)水透析混合物。將純化產(chǎn)物凍千并于4'C下存儲(chǔ)。激i^覆^激游殺y吝，使用先前所述的方法將490kDaHA修飾成己二酸二酰肼HA(HA-ADH)(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley，C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini,R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane，D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/mcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;布爾皮特P.(BulpiU,P.);艾斯奇曼D.(Aeschlimann,D.)，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容zK凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)1999;47(2):152-169'，賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera,R.);朗格R.(Langer,R.);克漢D.S.(Kohane，D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadebycross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中〉。圓盤水凝膠的制備使用雙管注射器(百特公司(Baxter),伊利諾伊斯州迪爾費(fèi)德(Deerfield,IL))將PBS中的2wt%HA-ADH和PBS中的2wt%HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO或MC-CHO注射到夾在兩個(gè)載片之間的橡膠模具中。所制得的水凝膠的直徑和厚度分別為1.2cm和3.5mm。下文中分別將這些交聯(lián)水凝膠稱為HAX、HA-CMC、HA-HPMC禾HHA-MC。覆^激*/大凝麼游表,覆#欽游表氛-執(zhí)行10mg/mlHA-ADH、HA-CHO、CMC-CHO、HPMC匿CHO禾口MC-CHO的D20溶液的'H-NMR(瓦里安技術(shù)公司(Varian):優(yōu)尼提300型分光光度計(jì)(Unity300spectrophotometer),加州帕羅奧多(PaloAlto，CA))光譜分析。如賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera，R.):朗格R.(Langer,R.);克漢D.S.(Kohane，D.S.),通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadebycross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804中所述，在酸聚合物(HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO和MC-CHO)與t-BC反應(yīng)后，對(duì)其進(jìn)行分析。測(cè)量在D20中與t-BC反應(yīng)的聚合物的"H-NMR光譜。使用GPC測(cè)量多糖的分子量。柱為沃特世水凝膠線性柱(UltrahydrogelLinear)(沃特世公司(Waters),馬薩諸塞州米爾福德(Milford,MA)),并且折射率(RI)是由折射計(jì)(懷雅特技術(shù)公司:OPTILABDSP(WyattTechnology:OPTILABDSP)，力口州圣塔芭芭拉(SantaBarbara,CA))檢測(cè)。流動(dòng)相為0.05M鈉與0.2M氯化鈉(pH=6.7)的混合物，且其流動(dòng)速率為0.8ml/min。將普魯蘭多糖(賽多利斯(Shodex),普魯蘭多糖標(biāo)準(zhǔn)品P5-P800(PullulanStandardsP5-P800),日本)用作分子量標(biāo)準(zhǔn)品。水^^^表^V通過(guò)以下方案測(cè)量膠凝時(shí)間。將100微升HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO或MC-CHO水溶液添加到100微升HA-ADH水溶液中，在皮氏培養(yǎng)盤上使用熱板/攪拌器(康寧PC-320型(Corning:ModelPC-320),紐約康寧公司(Corning,NY))利用磁力攪拌棒以155rpm混合。膠凝時(shí)間為混合物變?yōu)樾∏驎r(shí)的時(shí)間；對(duì)每一樣本測(cè)量4次。利用流變儀(TA儀器公司AR1000(TAInstruments:AR1000)，德拉華州紐卡斯特(NewCastle,Delaware))測(cè)量所制得的圓盤凝膠的剪切模量。將圓盤凝膠浸入PBS中達(dá)5天并且使其膨脹達(dá)到平衡。以不同剪切應(yīng)力進(jìn)行蠕變和松弛測(cè)試。施加剪切應(yīng)力3分鐘，隨后為3分鐘松弛。在每次測(cè)量中，在蠕變測(cè)試期間應(yīng)變值達(dá)到恒定且隨后在松弛測(cè)試期間使其回到零。由應(yīng)力與應(yīng)變之間的線性關(guān)系的斜率計(jì)算剪切模量G。應(yīng)力與應(yīng)變之間的擬合線的W值高于0.95。37i:下在PBS中以重量分析方式測(cè)量凝膠盤膨脹的時(shí)程。在PBS中浸泡5天后測(cè)量膠凝后水凝膠的重量Ws。Ws與剛好膠凝后水凝膠的初始重量Wi的膨脹比Q是以Q二W/Wi計(jì)算。降解動(dòng)力學(xué)測(cè)量如下37。C下在PBS中的10單位/毫升透明質(zhì)酸酶屮培育4個(gè)水凝膠盤。在各時(shí)間點(diǎn)時(shí)，對(duì)凝膠盤稱重，并且替換透明質(zhì)酸酶溶液。進(jìn)行測(cè)量達(dá)14天。測(cè)定各時(shí)間點(diǎn)時(shí)水凝膠的體積與初始體積的比率(水凝膠的體積(％))。潘應(yīng)毒絲分叛使用人類間皮細(xì)胞(ATCC:CRL-9444，弗吉尼亞州馬爾薩斯(Manassas,VA))和巨噬細(xì)胞細(xì)胞系J774.A1(ATCC:TIB-67)通過(guò)MTT分析(普洛麥格公司(Promega)，威斯康星州麥迪遜(Madison,WI))研究在存在HA-CHO、CMC-CHO、MC-CHO和HPMC-CHO的情況下的活體外細(xì)胞活力。37'C下于5%C02中，使間皮細(xì)胞在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基(GIBCO:含有伊爾氏BSS(Earle'sBSS)、0.75mML-谷氨酰胺和1.25g/L碳酸氫鈉且補(bǔ)充有3.3nM表皮生長(zhǎng)因子、400nM氫化可的松、870nM胰島素、20mMHEPES和10%胎牛血清的培養(yǎng)基199)中生長(zhǎng)并維持。使巨噬細(xì)胞在DMEM培養(yǎng)基(GIBCO:具有10%胎牛血清的DMEM目錄號(hào)10569-010)中生長(zhǎng)和維持。將5xl0"個(gè)細(xì)胞放入24孔培養(yǎng)板的各孔中，且在37。C下于5%C02中培育整夜，隨后將培養(yǎng)基用含有不同濃度HA-B、CMC-B、HPMC-B和MC-B的培養(yǎng)基替換。在間皮細(xì)胞的情況下添加這些材料后第3天或在J774.A1細(xì)胞的情況下第2天，執(zhí)行MTT分析。將100微升四氮唑鹽溶液添加到各孔中且在37。C下培育4小時(shí)。使用1ml清潔劑溶液將由活性線粒體產(chǎn)生的紫色甲臜(formazan)溶解且隨后在570nm通過(guò)板讀數(shù)器(分子裝置公司SpectraMax384型(MolecularDevices:SpectraMax384),加州聯(lián)合市(UnionCity,CA))讀取。將吸光度值關(guān)于未經(jīng)聚合物處理的細(xì)胞的各孔標(biāo)準(zhǔn)化。貧沐/^貧澄依照麻省理工學(xué)院(MassachusettsInstituteofTechnology)的動(dòng)物護(hù)理和使用委員會(huì)(AnimalCareandUseCommittee)所批準(zhǔn)的方案以及實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理原則(NIH公告弁85-23，1985年修訂)護(hù)理所有動(dòng)物。游袁凝農(nóng)磨V、維腳重25g的SV129小鼠是購(gòu)自塔科尼克公司(紐約哈德孫(Hudson,NY))且將其分?jǐn)?shù)組以6AM-6PM白天-黑夜循環(huán)圈養(yǎng)。通過(guò)UV照射2小時(shí)將聚合物滅菌，隨后將其以2wt呢濃度溶解于生理鹽水中。利用50mg/kg開(kāi)他敏和10mg/kg賽拉嗪誘使麻醉，且產(chǎn)生5mm皮膚切口，露出半透明的腹壁。將24號(hào)留置針(泰爾茂公司瑟夫希靜脈留置針(Terumo:SurflashI.V.Catheter),日本)放置穿過(guò)腹壁，且吹入0.3ml空氣以確定定位。隨后使留置針前進(jìn)lcm，且使用雙管注射器施用器(百特公司(Baxter),伊利諾伊斯州迪爾費(fèi)德(Deerfield,IL))注射0.5ml醛多糖(HA-CHO、CMC匿CHO、HPMC-CHO或MC匿CHO)禾卩0.5mlHA-ADH。注射后4天、l周、2周和3周后處死小鼠，且評(píng)估殘余物和粘連的存在。解剖者對(duì)個(gè)別小鼠接收何種治療未知。需要取樣時(shí)，對(duì)腹部?jī)?nèi)容物取樣，將其固定于10%福爾馬林中并使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)處理以供組織學(xué)分析(蘇木素伊紅染色的載片)。if過(guò)i粼壟^銜-應(yīng)1傷裙仿腐篪搭遂游豫欽如所述誘發(fā)腹膜粘連(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型手術(shù)后腹部粘連(/""'似cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。使用開(kāi)他敏(肌肉內(nèi)35mg/kg)和賽拉嗪(肌肉內(nèi)5mg/kg)使雌性白化兔(西班牙野兔(Oryctolaguscuniculus);新西蘭白(NewZealandWhite),科文斯公司，賓夕法尼亞州黑澤爾頓(Hazleton，PA))(3±0.5kg)麻醉，且使用平衡氧中的1-3%異氟烷維持。沿白線產(chǎn)生10cm長(zhǎng)的中線切口，并打開(kāi)腹膜。通過(guò)在右側(cè)腹壁上產(chǎn)生3x4cm缺損且擦傷盲腸7個(gè)袋直到獲得出血表面來(lái)誘發(fā)腹膜粘連。85各實(shí)驗(yàn)組隨機(jī)分配4只動(dòng)物(i)生理鹽水；(ii)利用10ml交聯(lián)HA-CMC、HA-HPMC或HA-MC覆蓋經(jīng)切開(kāi)腹壁和經(jīng)擦傷盲腸表面。施用前，通過(guò)紫外殺菌照明將材料滅菌2小時(shí)并將其溶解于無(wú)菌生理鹽水中。將凝膠前體溶液(5mlHA-ADH(20mg/ml)禾P5mlCMC匿CHO、HPMC-CHO或MC-CHO(20mg/ml))放入與雙管注射器施用器相連的10ml獨(dú)立無(wú)菌注射器中，并通過(guò)15號(hào)針共擠出。液體前體立即開(kāi)始膠凝，符合耙區(qū)域的形狀。如前述予以術(shù)后動(dòng)物護(hù)理(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley，C);貝拉斯E.(Bellas，E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane,D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/ncross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。程序后l周，利用靜脈內(nèi)100mg/kg戊巴比妥鈉對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。使用所報(bào)導(dǎo)的方法對(duì)粘連評(píng)分0分=無(wú)粘連，1分=利用重力將會(huì)分離的組織粘附；2分=可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘附；3分=需要利器解剖的粘連。還測(cè)量2分和3分粘連的面積。如上文所述對(duì)所關(guān)注的組織取樣且制備用于組織學(xué)分析。通過(guò)ANOVA然后學(xué)生t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。對(duì)各水凝膠與對(duì)照之間的粘連得分進(jìn)行威爾科克遜秩和檢驗(yàn)(Wilcoxonrank-sumtest)。利用卡雷達(dá)格拉夫@(KaleidaGraph)(斯尼吉軟件公司(SynergySoftware))進(jìn)行統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。p值<0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。結(jié)果/M-AL>//、/M-C/ZO、CMC-CiZO、//尸似C-C/fO/〃MC-C//0游合成^7表好'通過(guò)己二酸二酰肼的亞甲基質(zhì)子來(lái)確定HA-ADH的合成(在1.62ppm處具單重峰且在2,25ppm和2.38ppm處具有雙重峰)(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley,C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.(Kohane,D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"w'似cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;布爾皮特P.(Bulpitt,P.);艾斯奇曼D.(Aeschlimann,D.)，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)簡(jiǎn);47(2):152-169;賈X.Q.(Jia,X,Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera，R.);朗格R.(Langer，R.);克漢D.S.(Kohane，D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!'ww'wcross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。由HA的N-乙?；?D-葡糖胺殘基(在2.0ppm處的單重峰)的峰面積與在1.62ppm處己二酸二酰肼的亞甲基質(zhì)子的峰面積的比率計(jì)算修飾的程度；修飾程度為48.4%。為分析由氧化反應(yīng)形成的醛基，使醛聚合物與t-BC反應(yīng)，隨后進(jìn)行^-NMR分析。在每一醛修飾多糖中，出現(xiàn)叔丁基的化學(xué)位移(1.20ppm處的單峰和1.43ppm處的單峰)，表明成功合成HA-CHO、CMC-CHO、HPMC-CHO和MC-CHO。HA的Mw和Mw/Mn為1432kDa禾卩5.2。CMC、HPMC和MC的Mw>1MDa。醛聚合物的Mw介于109與239kDa之間，這小于HA-ADH的Mw(表12.1)。表12.1.經(jīng)修飾聚合物的分子量<table>tableseeoriginaldocumentpage87</column></row><table>*先前報(bào)導(dǎo)(克漢DS.(KohaneDS),利普M(LippM)，金尼RC(KinneyRC)，安東尼DC(AnthonyDC)，路易斯DN(LouisDN)，羅丹N(LotanN)等人，含有布比卡因的脂質(zhì)-蛋白質(zhì)-糖顆粒于神經(jīng)外膜中的生物可相容性(BiocompatibiUtyofIipid-protein-sugarparticlescontainingbupivacaineintheepineurium.)生凈勿醫(yī)學(xué)豐才豐斗石if》《雜志UBiomedMaterRes)2002;59(3):450-459，其以引用的方式并入本文中)。Mw:重量平均分子量；Mn:數(shù)量平均分子量。廣位/大凝^"游薪伴介激潘眾學(xué)^^HA-ADH和醛修飾纖維素衍生物都在可接受的短暫時(shí)間范圍內(nèi)形成凝膠(表12.2)。HA-CMC的膠凝時(shí)間明顯比其余物質(zhì)的時(shí)間長(zhǎng)(HA-CMC與其它醛多糖之間p<O扁l)。表12.2.交聯(lián)水凝膠的物理特性HAXHA匿CMCHA-HPMCHA-MC3.5±1.019.0±1.74.0±1.25.8±2.9膠凝時(shí)間(秒)200±14230±10120±13150±4膨脹比*(%)G'(Pa)32±1792±19292±109297±41*在磷酸鹽緩沖生理鹽水中浸泡5天時(shí)測(cè)量數(shù)據(jù)為平均值土標(biāo)準(zhǔn)差(n=4)水凝膠膨脹，在PBS中浸泡后1天達(dá)到平衡且在接下來(lái)的4天中保持恒定(資料未顯示)。自始至終，膨脹比(表12.2)排序如下HAX、HA-CMC>HA-MC(p<0.001)>HA-HPMC(p=0.0053)。HAX的剪切模量(表12.2)G小于HA-CMC、HA-HPMC或HA-MC的剪切模量(p<0.05)。HA-CMC的剪切模量小于HA-HPMC或HA-MC的剪切模量(p<0.05)。HA-MC與HPMC之間不存在G的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p=0.93)。透欲廣虔艨,#游動(dòng)力學(xué)水凝膠于透明質(zhì)酸酶溶液中的降解動(dòng)力學(xué)存在差異(圖17)。HAX降解最快(第1天和第2天時(shí)相對(duì)于HA-CMC，p<0.001)。HAX和HA-CMC分別在到第4天和第5天時(shí)完全降解。相比之下，HA-MC和HA-HPMC歷時(shí)2周也未完全降解。這些差異的一個(gè)可能的原因在于HA-MC禾PHA-HPMC的交聯(lián)程度比HAX高。另一原因?yàn)橛捎贖A-MC和HA-HPMC并沒(méi)有如HAX和HA-CMC—樣膨脹，故透明紙質(zhì)酸酶無(wú)法有效擴(kuò)散到其中。豕^激者/h7座潘應(yīng)浙^"蠻謝應(yīng)話力游嚴(yán)聘在存在多種濃度醛聚合物的情況下培養(yǎng)間皮細(xì)胞。對(duì)于所有聚合物，細(xì)胞活力都存在劑量依賴性降低。在0.3%(w/v)下HA-CHO和MC-CHO并未使細(xì)胞活力降低(p>0.05)(圖18A)，而HPMC-CHO(p=0.0011)禾nCMC-CHO(p=0.044)引起細(xì)胞活力較小降低。在較高濃度下，HA-CHO展現(xiàn)細(xì)胞活力的較小降低，而纖維素衍生物展現(xiàn)較多降低培育3天后細(xì)胞活力的等級(jí)排序?yàn)镠A-CHO〉CMC-CHO>MC-CHO〉HPMC-CHO(在0.9%(w/v)下對(duì)于任何配對(duì)p<0.01)。醛修飾的聚合物也展現(xiàn)對(duì)巨噬細(xì)胞細(xì)胞活力的劑量依賴性作用(圖18B)。在本實(shí)例中，未發(fā)現(xiàn)HA與纖維素衍生物之間細(xì)胞活力的差異。盡管某些濃度的化合物之間存在一些統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但總的來(lái)說(shuō)各組之間的細(xì)胞活力類似。V、腐篪漠^嚴(yán)泣/大凝if游主激浙吝絲用1ml凝膠前體注射小鼠(n=4到6)。在接下來(lái)的三周里以預(yù)定時(shí)間間隔處死動(dòng)物88以評(píng)定粘連形成(表12.3)。在所有20只動(dòng)物中，僅1只在膀胱與其它內(nèi)臟之間出現(xiàn)粘連。己知在粘連部位處存在疤痕和凝塊，故認(rèn)為所述粘連是由凝膠注射期間的直接創(chuàng)傷所引起。表12.3.在小鼠中腹膜內(nèi)注射水凝膠后的粘連水凝膠HAXHA-CMCHA-HPMCHA匿MC無(wú)法測(cè)定腹腔中殘余凝膠的量。肉眼檢査時(shí)，看起來(lái)注射HA-MC的動(dòng)物中水凝膠殘余量比其它動(dòng)物中的多得多(圖19)。3周后，HAX完全消失，且發(fā)現(xiàn)呈離散凝膠的較少體積的HA-HPMC。HA-CMC僅以覆蓋內(nèi)臟的薄層保持。所有樣本的腹膜和內(nèi)臟組織學(xué)正常。層纖艦銀通過(guò)擦傷盲腸和切開(kāi)一段相鄰腹壁在兔中誘發(fā)粘連(表12.4)。在對(duì)照動(dòng)物中，施用生理鹽水作代替。生理鹽水組中的所有動(dòng)物在較大區(qū)域內(nèi)發(fā)展粘連(圖19B)。在經(jīng)HA-CMC(p=O.OOU)、HA-MC(p<0.0001)禾口HA匿HPMC(p<0.0001)治療的組中'粘連的面積極大減少。對(duì)于所述參數(shù)，各凝膠之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。粘連得分降低的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異僅出現(xiàn)于HA-MC(p=0.023)(圖19C)。應(yīng)注意'在經(jīng)HA-HPMC治療的兔中，2個(gè)3分粘連是形成于腹部中線的切線上(即，施用凝膠的區(qū)域的外部)。已在別處描述HAX對(duì)于預(yù)防腹膜粘連的效用(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley,C);貝拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito，T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R,(Langer,R.);克漢D.(Kohane,D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"w"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705)。表12.4.水凝膠對(duì)于預(yù)防兔中腹膜粘連的效用<table>tableseeoriginaldocumentpage89</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage90</column></row><table>AndSterility)1992;57(1):199-201，其以引用的方式并入本文中)。這些裝置與本發(fā)明的裝置在交聯(lián)化學(xué)、所述交聯(lián)所釋放的分子(適福@釋放碳化二亞胺，而本文所述的材料釋放水)和物質(zhì)組成方面存在差異。然而，最顯著的差異在于這些材料必須以固體薄片的形式施用，而本文所提供的調(diào)配物是在不使用交聯(lián)劑的情況下原位膠凝形成。就易于施用性、可施用水凝膠的裝置的類型和可能的可治療的表面的類型來(lái)說(shuō)，原位交聯(lián)水凝膠具有優(yōu)于常規(guī)障壁裝置的益處。本文所提供的材料具有多種物理化學(xué)特性。使用纖維素衍生物的酰肼形式(而非HA-ADH)將例如通過(guò)使所得凝膠甚至對(duì)酶促水解更具抗性來(lái)進(jìn)一步影響特性。還注意到纖維素衍生物與透明質(zhì)酸之間的成本存在顯著差異。在本文所測(cè)試的凝膠中，HA-MC凝膠對(duì)于預(yù)防腹膜粘連最有效。這可與HA-MC在活體外于透明質(zhì)酸酶(一種存在于腹膜中的酶)中降解比HA-CMC和HAX慢且因此具有更為延長(zhǎng)的障壁作用的事實(shí)相關(guān)。各種水凝膠預(yù)防粘連的效用的差異可歸因于未知的內(nèi)在生物活性的差異，這與HA的情形相同。可通過(guò)進(jìn)一步優(yōu)化凝膠的物理化學(xué)特性來(lái)改變預(yù)防粘連的效用。已檢査水凝膠的物理化學(xué)特性，包括膠凝時(shí)間、機(jī)械強(qiáng)度、含水量、膨脹動(dòng)力學(xué)和降解動(dòng)力學(xué)。這些特性相互關(guān)聯(lián)，且在很大程度上取決于預(yù)聚合物的特性，諸如粘性、電荷、構(gòu)型、溶解度、修飾程度、溶液中的濃度、混合便利性等。各種聚合物之間性能的差異可能是由這些參數(shù)引起，但我們的結(jié)果并未使我們辨出所述機(jī)制。已知膨脹比、聚合物濃度與剪切模量之間的關(guān)系(安西斯K.S.(Anseth，K.S.);鮑曼C.N.(Bowman,C.N.);博努派普斯L.(BrannonPeppas,L.),水凝膠和其實(shí)驗(yàn)測(cè)定的機(jī)械特性(Mechanicalpropertiesofhydrogelsandtheirexperimentaldetermination.)生物材料(Biomaterials)1996,17(17):1647-1657;派普斯N.A.(Peppas，N.A.);麥瑞爾E.W.(Merrill,E.W.)，作為膨脹彈性網(wǎng)絡(luò)的交聯(lián)聚乙烯醇水凝膠(CrosslinkedPolyvinyl-Alcohol)HydrogelsAsSwollenElasticNetworks.)應(yīng)用聚合物科學(xué)雜志(JApplPolymSci)1977;21(7):1763-1770，所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)，上文所研究的物理化學(xué)特性表明HA-HPMC和HA-MC的交聯(lián)程度可能比HAX和HA-CMC高。較高的交聯(lián)密度可能部分是由MC-CHO和HPMC-CHO不帶負(fù)電以致酰肼聚合物與醛聚合物之間的靜電排斥小于利用HA-CHO禾QCMC-CHO的事實(shí)引起。這一解釋與HA-MC和HA-HPMC比HA-CMC膠凝快相符。結(jié)論91本文所述的HA與纖維素衍生物的雜化水凝膠可經(jīng)由雙管注射器施用且迅速交聯(lián)，表明在開(kāi)腹手術(shù)和腹腔鏡檢查的臨床環(huán)境中的易于施用性。盡管醛修飾的纖維素衍生物在活體外展現(xiàn)某種細(xì)胞毒性，但在鼠科腹膜中存在良好的生物相容性。這些調(diào)配物對(duì)于預(yù)防兔盲腸損傷-側(cè)壁缺損模型的腹膜粘連有效。舒微雄離賄褒靜基嚴(yán)妙教鵬射微膽腹膜粘連是腹部和盆腔手術(shù)所引起的嚴(yán)重的后果，且可引起嚴(yán)重疼痛、腸梗阻和不孕。由混合兩種聚合物形成的原位交聯(lián)凝膠易于施用于腹膜且可極為有效。諸如透明質(zhì)酸(HA)、經(jīng)氧化纖維素和纖維素衍生物等生物材料在腹膜內(nèi)已展現(xiàn)優(yōu)良的生物相容性。葡聚糖為用于原位可交聯(lián)基質(zhì)的另一種引人注目的基礎(chǔ)材料。葡聚糖(DX)為葡萄糖部分主要由a-l,6-鍵聯(lián)連接的多糖。臨床上已使用40kDa和70kDa葡聚糖預(yù)防血管阻塞、作為血漿增容劑和用于抗凝療法。已證實(shí)葡聚糖在腹膜內(nèi)具有生物相容性。20世紀(jì)八十年代，臨床上使用70kDa葡聚糖的32%溶液來(lái)預(yù)防腹膜粘連，但由于同時(shí)存在成功和不成功的臨床試驗(yàn)，故已停止使用葡聚糖。在本研究中，合成新穎葡聚糖基可注射水凝膠來(lái)預(yù)防腹膜粘連。在室溫下，使經(jīng)酰肼基修飾的羧甲基葡聚糖(CMDX)(CMDX-ADH)與經(jīng)醛基修飾的DX或CMC(DX-CHO或CMC-CHO)交聯(lián)。在活體外表征所得水凝膠，研究預(yù)聚合物對(duì)于細(xì)胞培養(yǎng)物的細(xì)胞毒性和其對(duì)于預(yù)防兔側(cè)壁缺損-腸擦傷模型中腹膜粘連的效用。材料與方法^^激/〃/大/凝廋游會(huì)成試.70kDa(產(chǎn)品編號(hào)D4751)、500kDa(產(chǎn)品編號(hào)D1037)和2MDa(產(chǎn)品編號(hào)D5376)來(lái)自腸膜明串珠菌(Leuconostocmesenteroide)的葡聚糖、CMC(產(chǎn)品編號(hào)C4888)、己二酸二酰肼(ADH)、l-乙基-3-[3-(二甲基氨基)丙基]-碳化二亞胺(EDC)、羥基苯并三唑(HOBt)、高碘酸鈉、乙二醇、肼基甲酸叔丁酯(t-BC)、氯乙酸、氫氧化鈉、氯化鈉和鹽酸都購(gòu)自西格瑪-阿爾德里奇公司。麥伊基薪覆薪《MZ);^游劍吝，利用前述方法將70kDa和500kDa葡聚糖修飾成羧甲基葡聚糖(CMDX)[應(yīng)的論文(Ying'spaper)和生物連結(jié)物(Bioconjugate)1997]。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，將10g葡聚糖溶解于100ml蒸餾水中整夜，且隨后添加24.0g氫氧化鈉和30.2g氯乙酸。使溶液在70。C下回流145min，利用6N鹽酸將其迅速中和到pH=7.0，對(duì)蒸餾水透析3天且隨后凍干。產(chǎn)率為75-80%。/3二麼二膽屏遂伊基臠康瀞"MDX-AZ)T^游劍備..以與如先前所報(bào)導(dǎo)的己二酸二酰肼透明質(zhì)酸相同的方案將70kDa和500kDaCMDX修飾成己二酸二酰肼CMDX(CMDX-ADH)。,薪覆教做-C7/6U浙麥伊基勞鍾"MC-C7/C^將2MDaDX、70kDaDX禾卩CMC分另ij修飾成酸70kDaDX(70kDaDX-CHO)、2MDaDX(2MDaDX匿CHO)和醛CMC(CMC-CHO)。方案與先前報(bào)導(dǎo)相同。MI^M^^J吏用雙管注射器(百特公司(Baxter),伊利諾伊斯州迪爾費(fèi)德(Deerfield,IL))將2wt%CMDX匿ADHPBS緩沖溶液禾口2wt呢醛聚合物(諸如DX-CHO和CMC-CHO)PBS緩沖溶液注射到夾于兩個(gè)載片之間的橡膠模具中。所制備的水凝膠的直徑和厚度分別為1.2cm和3.5mm。這些圓盤水凝膠分別稱為CMDX-DX和CMDX-CMC。-贅會(huì)斂,水凝l游表,褒會(huì)欽游表g:使用'H-NMR(瓦里安技術(shù)公司(Varian):優(yōu)尼提300型分光光度計(jì)(Unity300spectrophotometer))光譜分析確定合成。測(cè)量D20中的10mg/mlCMDX、CMDX-ADH、DX-CHO禾卩CMC-CHCL接下來(lái)，將10倍摩爾過(guò)量的t-BC添加到純水中的DX-CHO和CMC-CHO多糖中，且使醛基與t-BC反應(yīng)。在對(duì)水透析且凍干后，在D20中測(cè)量經(jīng)反應(yīng)的聚合物的'H-NMR光譜。執(zhí)行元素分析以測(cè)定元素組成。在制備各聚合物的KBr片后測(cè)量CMDX、CMDX-ADH、DX-CHO和CMC-CHO的FT-IR光譜。對(duì)CMDX-ADH執(zhí)行元素分析。/7t凝i游表^'通過(guò)所報(bào)導(dǎo)的方案測(cè)量膠凝時(shí)間。在皮氏培養(yǎng)盤上使用康寧PC-320型熱板/攪拌器以155rpm使用攪拌棒攪拌下，將0.1mlDX-CHO或CMC-CHO水溶液添加到0.1mlCMDX-ADH水溶液中。將溶液混合物變?yōu)樗z小球的時(shí)間測(cè)量5次。37'C下在PBS緩沖液中以重量分析方式測(cè)量所制備的圓盤凝膠膨脹的時(shí)程。在PBS緩沖液中浸泡5天后測(cè)量膠凝后水凝膠的重量Ws。Ws與剛好膠凝后水凝膠的初始重量Wi的膨脹比Q是以Q-Ws/Wi計(jì)算，且繪制水凝膠的圖。潘應(yīng)毒絲分浙使用人類間皮細(xì)胞系(CRL-9444:ATCC)和巨噬細(xì)胞細(xì)胞系J774.A1(TIB-67:ATCC)通過(guò)MTT分析(普洛麥格公司(Promega))研究在存在DX、CMC、CMDX-ADH、DX-CHO和CMC-CHO的情況下的活體外細(xì)胞活力。方案與先前報(bào)導(dǎo)[HA-CMC論文]相同。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，37。C下于5呢C02中，使間皮細(xì)胞在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基(具有伊爾氏BSS(Earle'sBSS)、0.75mML-谷氨酰胺和1.25g/L碳酸氫鈉且補(bǔ)充有3.3nM表皮生長(zhǎng)因子、400nM氫化可的松、870nM胰島素、20mMHEPES禾B10免胎牛血清的培養(yǎng)基199)中生長(zhǎng)并維持。使巨噬細(xì)胞在具有10%胎牛血清的DMEM(Gibco目錄號(hào)10569-010)中生長(zhǎng)和維持。添加材料后，在間皮細(xì)胞中第3天時(shí)或在巨噬細(xì)胞中第2天時(shí)，執(zhí)行MTT分析。只有DX-CHO擾亂MTT分析，因此在剛好開(kāi)始分析前利用新鮮培養(yǎng)基替換培養(yǎng)基。通過(guò)對(duì)照實(shí)驗(yàn)(未向細(xì)胞中添加材料)使所述值標(biāo)準(zhǔn)化。射凝做餅V、雄尉方案與先前方法相同。(佛克K(FalkK)，布杰奎斯特P(BjorquistP)，斯托姆奎斯特M(StromqvistM)，霍姆達(dá)爾L.(HolmdahlL.)通過(guò)抑制1型纖溶酶原活化劑抑帝ll齊廿來(lái)減少試驗(yàn)性粘連形成(Reductionofexperimentaladhesionformationbyinhibitionofplasminogenactivatorinhibitortype1.)英國(guó)手術(shù)雜志(BritishJournalofSurgery)2001;88:286-289，其以引用的方式并入本文中)。重約25g的SV129小鼠購(gòu)自塔科尼克公司(Taconic)(紐約哈德孫(Hudson,NY))，且使用雙管注射器(百特公司(Baxter),伊利諾伊斯州迪爾費(fèi)德(Deerfield，IL))經(jīng)由留置針將由0.5mlCMDX-ADH(5%w/v)和0.5mlDX-CHO(2%w/v)構(gòu)成的1.0mlCMDX-DX凝膠注射到腹膜中。注射后2周對(duì)小鼠實(shí)施剖腹術(shù)。解剖者對(duì)各小鼠注射何種水凝膠未知。由解剖者評(píng)定粘連的存在。遞^^激壟欽嚴(yán)羼,侈#麥伊仿蘑,搭遂游茨,方案與先前方法相同。參看實(shí)例12。將雌性白化兔(西班牙野兔(Oryctolaguscuniculus);新西蘭白(NewZealandWhite),科文斯公司(Covance)，賓夕法尼亞州黑澤爾頓(Hazleton,PA))(3士0.5kg)用作模型動(dòng)物。將12只動(dòng)物隨機(jī)分配到以下實(shí)驗(yàn)組(i)70kDa-CMDX-DX凝膠(n=4)、(ii)70kDa-CMDX-CMC凝膠(n=4)和(iii)500kDa-CMDX-CMC凝膠(n=4)各10ml。利用右側(cè)腹壁上的3x4cm缺損和盲腸7個(gè)袋的80-160下的擦傷來(lái)誘發(fā)腹膜粘連。將凝膠前體溶液(5mlCMDX-ADH(對(duì)于70kDa-CMDX-ADH為50mg/ml或?qū)τ?00kDa-CMDX-ADH為40mg/ml)禾口5mlDX-CHO(25mg/ml)或CMC匿CHO(60mg/ml))放入與百特雙閥施用器(Baxterdualvalveapplicator)相連的10ml獨(dú)立無(wú)菌注射器中，并通過(guò)15號(hào)針共擠出。程序后1周，對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死。如下對(duì)粘連評(píng)分0分=無(wú)粘連，1分=利用重力將會(huì)分離的組織粘附；2分=可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘附；3分=需要利器解剖的粘連。將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林中，并用蘇木素和伊紅染色以供組織學(xué)檢查。統(tǒng)^/"學(xué)分橋主要通過(guò)學(xué)生t檢驗(yàn)分析數(shù)據(jù)。在t檢驗(yàn)之前執(zhí)行ANOVA。對(duì)各水凝94膠與對(duì)照之間的粘連得分進(jìn)行威爾科克遜秩和檢驗(yàn)(Wilcoxonrank-sumtest)。如下分配類別變量0分=1,1分=2，2分=3且3分=4。利用卡雷達(dá)格拉夫@(KaleidaGraph⑧)(斯尼吉軟件公司(SynergySoftware))進(jìn)行所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。p值<0.05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。結(jié)果CMDX、CM肌AD仏肌C7ZO/〃CMC-CHO游#成#〃表&通過(guò)FT-IR(圖23)和'HNMR(圖24)確定CMDX、CMDX-ADH的合成。兩種葡聚糖(70kDa和500kDa)的結(jié)果相同。FTIR時(shí)，如圖23中所示，葡聚糖在1650cnT'[利諾的論文(Lino'spaper)]時(shí)具有吸光度峰值。通過(guò)在1608cm"時(shí)顯現(xiàn)新的峰(反映羧基的C:O伸長(zhǎng))來(lái)確定CMDX的修飾。另外通過(guò)1664cm—'時(shí)的新峰(反映酰胺基的C=0伸長(zhǎng))來(lái)顯示對(duì)CMDX-ADH的修飾。葡聚糖在低于3.0ppm和高于5.2ppm的區(qū)域內(nèi)無(wú)NMR峰。在CMDX中，新峰出現(xiàn)于5.13ppm。在CMDX-ADH中，新峰出現(xiàn)于2.09和2.32ppm(雙重峰，4H，N-(CH2)-C)和1.60ppm(單重峰，4H，C-(CH2)-C)。通過(guò)CMDX-ADH的元素分析，碳、氫和氮的重量百分比分別為70kDaCMDX-ADH中的44.4%、6.6%和9.9%以及500kDaCMDX-ADH中的44,7%、6.3%和9.7%。由氮與碳的比率估計(jì)己二酸二酰肼對(duì)CMDX-ADH的修飾程度為70kDaCMDX-ADH中的46%和500kDaCMDX-ADH中的44%。DX-CHO的FT-IR和NMR分析結(jié)果與先前公開(kāi)的數(shù)據(jù)相同，確定合成。如所報(bào)導(dǎo)，產(chǎn)生CMC-CHO并加以表征。嚴(yán)泣/大凝,必^體獰性所有水凝膠的膠凝時(shí)間都為濃度依賴性的(圖25)，因此所有水凝膠都可在較高濃度的醛修飾預(yù)聚合物和酰肼修飾預(yù)聚合物下獲得快速膠凝時(shí)間。在各濃度下，CMDX-DX凝膠的膠凝時(shí)間都比CMDX-CMC凝膠短(圖25)。CMDX-DX凝膠在膠凝后收縮，而CMDX-CMC在膠凝后膨脹，因此例如70kDa-CMDX-CMC(5%/6%)的膨脹體積比CMDX-DX(5%/6%)高3倍(圖26)。水凝膠的物理外觀極為不同(圖26B):CMDX-DX呈淺黃色且略顯不透明，而70kDa-CMDX-CMC透明且澄清。500kDa-CMDX-CMC(5%/6%)的膨脹介于70kDa-CMDX-CMC與CMDX-DX膨脹的中間。話伴//分^^嚴(yán)泣水凝履游主激浙吝絲未經(jīng)修飾的原材料在細(xì)胞培養(yǎng)物中展現(xiàn)最小細(xì)胞毒性，但某些修飾會(huì)影響細(xì)胞活力。在存在多種濃度未交聯(lián)預(yù)聚合物CMDX-ADH、DX-CHO和CMC-CHO的情況下培養(yǎng)間皮細(xì)胞(圖28A)。CMDX-ADH和CMC-CHO展現(xiàn)輕度劑量依賴性毒性，而DX-CHO的毒性則高得多。巨噬細(xì)胞中的細(xì)胞毒性作用的總模式類似(圖28B)。葡聚糖的醛衍生物細(xì)胞毒性極強(qiáng)，CMC-CHO也是如此。70kDa-和500kDa-CMDX-ADH即使在高濃度下對(duì)巨噬細(xì)胞活力也無(wú)影響。所有濃度下的未經(jīng)修飾的CMC和DX可增加細(xì)胞活力。由關(guān)于兩種細(xì)胞系的MTT分析可知，CMDX-ADH生物相容性極佳，且也可預(yù)期其水凝膠在腹膜內(nèi)的生物相容性也極強(qiáng)。嚴(yán)泣^凝,必嚴(yán),搭遂茨,勸^經(jīng)CMDX-DX治療的所有4只兔發(fā)展粘連，并且粘連面積大于對(duì)照實(shí)驗(yàn)(p=0.0027，表13.1，圖30A-l)。在腹膜內(nèi)發(fā)現(xiàn)分離凝塊形式的水凝膠碎片，有時(shí)其被截留于粘連內(nèi)。因此，盡管此凝膠存在于損傷部位處，但其不充當(dāng)障壁。如在膨脹測(cè)試中所觀察，凝膠碎片呈淺黃色且穩(wěn)固。其穩(wěn)固地粘附于組織(圖30A-2),與己研究的其它原位交聯(lián)凝膠不同。表13.170kDa-CMDX-DX70kDa-CMDX-CMC500kDa-CMDX-CMC對(duì)照(生理鹽水)重量改變％-6.5±3.6-2.8±2.6-8.4±3.3-11.7±2.43分41132分00011分0100無(wú)粘連0230中值粘連得分30.503粘連面積(cm:2)18.3±0.90.8±1.50.0±0.113.1±1.9材料殘余物4/44/44/4-相比之下，發(fā)現(xiàn)70kDa-和500kDa-CMDX-CMC散布于整個(gè)腹膜中，但有時(shí)部分以鄰近塊狀物的形式保持，如圖9B中所示。材料的淺紅色澤是由血液污染所引起(圖30C-2)。與對(duì)照相比，兩種水凝膠都引起粘連形成面積的明顯減小(表1，圖30B、C-l)(對(duì)于70kDa-禾卩500kDa-CMDX-CMC，p<0.0001)。兩組CMDX-CMC的中值粘連得分比未經(jīng)治療對(duì)照或CMDX-DX凝膠中任一者的得分小得多，但樣本尺寸太小而無(wú)法展現(xiàn)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著性。所匯集的來(lái)自兩個(gè)CMDX-CMC96組的數(shù)據(jù)的比較得到0.009的p值。兩組CMDX-CMC的中值粘連得分類似且不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。組織學(xué)分析時(shí)，CMDX-DX凝膠有力地粘附于正常和受損盲腸表面(圖30A)，且發(fā)炎細(xì)胞明顯浸潤(rùn)于下層結(jié)締組織中的(圖30B)。而相比之下，經(jīng)CMDX-CMC治療的動(dòng)物中回收的間皮(圖30C)具有極大增厚的結(jié)締組織下層(圖30D)。CMm:-DX/微離謝禱CMDX-DX無(wú)法預(yù)防粘連可歸因于預(yù)防粘連的功效的缺乏或歸因于引起粘連的直接作用。為評(píng)定材料本身是否有害，通過(guò)雙管注射器經(jīng)腹膜內(nèi)注射給與4只小鼠CMDX-ADH禾QDH-CHO，從而于原位形成CMDX-DX。注射后2周，處死動(dòng)物且檢査其腹腔。CMDX-DX不會(huì)引起腹膜粘連但在穩(wěn)固地粘附于組織上的穩(wěn)固淺黃色凝塊中發(fā)現(xiàn)(圖29)。討論葡聚糖具有極高生物相容性且為適于腹膜應(yīng)用的低成本材料。本文中合成兩種無(wú)需低分子量交聯(lián)劑即可形成的葡聚糖基水凝膠。盡管二者共有CMDX-ADH部分，但其具有截然不同的特性。CMDX-DX的膠凝時(shí)間比CMDX-CMC的膠凝時(shí)間短得多。對(duì)于此差異存在若干可能的原因，包括粘度、酰肼或醛的修飾程度等，但主要原因可能為葡聚糖與CMC之間水溶性的差異。因?yàn)樵谙惹暗难芯恐校?wt/vol%500kDa-CMDX-CMC凝膠的膠凝時(shí)間極慢，如65.8±5.0sec;而2wt/vol%490kDa-HA(透明質(zhì)酸)-CMC凝膠的膠凝時(shí)間極快，如18.5±1.7sec。HA-ADH和CMDX-ADH的修飾程度和分子量幾乎相同，因此DX和CMC的溶解度極弱。另一方面，由于CMDX-ADH和DX-CHO是由相同DX合成，故CMDX-DX凝膠的膠凝時(shí)間極快。具有相同聚合物主鏈的聚合物能容易地相互混合。膠凝后，CMDX-DX收縮而CMDX-CMC膨脹。這可通過(guò)CMC-CHO負(fù)電荷之間的靜電排斥而DX-CHO不帶電荷來(lái)解釋。兩種材料預(yù)防腹膜粘連的性能存在顯著不同。CMDX-DX使粘連加重，而CMDX-CMC預(yù)防粘連。如活體外所示的DX-CHO的細(xì)胞毒性可能會(huì)引起其預(yù)防粘連的功效缺乏。然而，所述毒性是經(jīng)歷2天(在巨噬細(xì)胞的情況下)或3天(對(duì)于間皮細(xì)胞)的暴露出現(xiàn)。由此不能斷定交聯(lián)(花費(fèi)數(shù)秒)后將存在足夠高的游離CMDX-DX含量引起組織損傷。交聯(lián)材料本身可有害。盡管通過(guò)用作障壁裝置的原位交聯(lián)水凝膠已實(shí)現(xiàn)巨大成功，但其降解時(shí)間相對(duì)短暫，尤其基于透明質(zhì)酸的水凝膠更是如此。然而，障壁裝置保持在原位以避免粘連形成所需的時(shí)間長(zhǎng)度尚未知。在此情況下，可證實(shí)CMDX-DX的優(yōu)勢(shì)在于尸檢時(shí)可發(fā)現(xiàn)大量殘余材料，表明具有緩慢的降解動(dòng)力學(xué)。此緩慢降解可能歸因于相對(duì)高的聚合物濃度、相對(duì)低的膨脹體積以及降解葡聚糖的葡聚糖酶基本上只位于肝臟中的事實(shí)。結(jié)論酰肼修飾的羧甲基葡聚糖與醛修飾的羧甲基纖維素的交聯(lián)水凝膠展現(xiàn)預(yù)防腹膜粘連的功效。這些凝膠的緩慢的降解速率和低成本表明其在預(yù)防腹膜粘連方面可能的作用。遂欲處度與邀蕃;^松游嚴(yán)泣^^r就遂潛^凝,游裙炎^絲引言手術(shù)后腹膜粘連可引起疼痛、腸梗阻和不孕(迪澤佳G.S.(DiZerega,G.S.)，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.),斯普林格(NewYork:Springer)紐約，1999;其以引用的方式并入本文中)。已使用多種多糖基水凝膠障壁系統(tǒng)來(lái)預(yù)防粘連，且取得不同程度的成功(迪澤佳G.S.(DiZerega,G.S.)'腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)斯普林格(NewYork:Springer)紐約，1999;其以引用的方式并入本文中)。由原位交聯(lián)形成的水凝膠可潛在用作障壁(瓊斯D.B.(Johns,D.B.)，羅杰斯K.E.(Rodgers,K.E.)，唐納休W.D.(Donahue,W.D.)，科爾普斯T.C(Kiorpes,T.C)和迪澤佳GS.(diZerega，G.S.)通過(guò)術(shù)后投與離子交聯(lián)透明質(zhì)酸減少粘連幵鄉(xiāng)成(Reductionofadhesionformationbypostoperativeadministrationofionicallycross-linkedhyaluronicacid.)生育與不育(FertilityAndSterility)68(1997)37-42，其以引用的方式并入本文中)，(李H.(Li，H.)，劉Y.C(Liu,Y.C)，舒X.Z.(Shu,X.Z.)'格雷S.D.(Gray,S.D.)和普里斯維奇G.D.(Prestwich,G.D.)交聯(lián)透明質(zhì)素-絲裂霉素C水凝膠的合成和生物評(píng)估(Synthesisandbiologicalevaluationofacross-linkedhyaluronan-mitomycinChydrogel.)生物大分子(Biomac讓olecules)5(2004)895-亂其以引用的方式并入本文中)，(劉Y.C(Liu，Y.C)，李H.(Li,H.)，舒X.Z.(Shu，X.Z.)，格雷S.D.(Gray,S.D.)和普里斯維奇G.D.(Prestwich,G.D.)含有絲裂霉素C的交聯(lián)透明質(zhì)素水凝膠減少術(shù)后腹部粘連(CrosslinkedhyaluronanhydrogelscontainingmitomycinCreducepostoperativeabdominaladhesions.)生育與不育(FertilityAndSterility)83(2005)1275-1283，其以引用的方式并入本文中)'(歐S.H.(Oh，S.H.)，金姆J.K.(Kim,J.K.)，宋K.S.(Song,K.S.)，諾河S.M.(Noh，S.M.)，基爾S.H.(Ghil,S.H.)，優(yōu)可S.H.(Yuk,S.H.)和李J.H.(Lee,J.H.)通過(guò)具有溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變行為的載有消炎藥物的普流尼克混合物預(yù)防術(shù)后組織粘連(Preventionofpostsurgicaltissueadhesionbyanti-inflammatorydrug-loadedpluronic98mixtureswithsol-geltransitionbehavior.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志A(JBiomedMaterResA)72(2005)306-16，其以引用的方式并入本文中)，(依歐Y.(Yeo,Y.)，海雷C(Highley,C)，波拉斯E.(Bellas,E.),埃托T.(Ito，T,),瑪瑞尼R.(Marini,R.),朗格R.(Langer，R.)和克漢D.(Kohane,D.)原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)27(2006)4698-4705，其以引用的方式并入本文中)，且可比預(yù)成型薄片更易于施用。具體來(lái)說(shuō)，通常將透明質(zhì)酸(HA)衍生物用于腹膜中。已將添加或未添加藥物的原位化學(xué)修飾的HA水凝膠用于此目的(瓊斯D.B.(Johns,D.B.)，羅杰斯K.E.(Rodgers，K.E.)，唐納休W.D.(Donahue,W.D.)，科爾普斯T.C(Kiorpes，T.C)和迪澤佳G.S.(diZerega,G.S.)通過(guò)術(shù)后投與離子交聯(lián)透明質(zhì)酸減少粘連形成(Reductionofadhesionformationbypostoperativeadministrationofionicallycross-linkedhyaluronicacid.)生育與不育(FertilityAndSterility)68(1997)37-42，其以引用的方式并入本文中)，(李H.(Li，H.)，劉Y.C(Liu,Y.C)，舒X.Z.(Shu，X.Z.)，格雷S.D.(Gray,S.D.)和普里斯維奇G.D.(Prestwich,G.D.)交聯(lián)透明質(zhì)素-絲裂霉素C水凝膠的合成和生物評(píng)估(Synthesisandbiologicalevaluationofacross-linkedhyal訓(xùn)腿-mitomycinChydrogel.)生物大分子(Biomacromolecules)5(2004)895-902，其以引用的方式并入本文中)，(劉Y.C(Liu,Y.C)，李H.(Li,H.)，舒X.Z.(Shu，X.Z.)，格雷S.D.(Gray,S.D.)和普里斯維奇G.D.(Prestwich,G.D.)含有絲裂霉素C的交聯(lián)透明質(zhì)素水凝膠減少術(shù)后腹部粘連(Crosslinkedhyaluro腿hydrogelscontainingmitomycinCreducepostoperativeabdominaladhesions.)生育與不育(FertilityAndSterility)831275-1283，其以引用的方式并入本文中)，(依歐Y.(Yeo,Y.)，海雷C(Highley，C)，波拉斯E.(Bellas,E.)，埃托T,(Ito,T.)，瑪瑞尼R.(Marini,R.)，朗格R.(Langer，R.)和克漢D.(Kohane,D.)原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)274698-4705，其以引用的方式并入本文中)。近來(lái)，已證實(shí)由透明質(zhì)素交聯(lián)醛-和酰肼修飾的HA構(gòu)成的原位可交聯(lián)水凝膠(布爾皮特P.(Bulpitt，P.)和艾斯奇曼D.(Aeschlimann，D.)，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)木才茅斗石開(kāi)究雜'志(JournalOfBiomedicalMaterialsResearch)47(1999)152-169，其以引用的方式并入本文中)；(賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera，R.);朗格R.(Langer,R.)和克漢D.S.(Kohane,D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!'cross-linkedhyaluronicacid.)生物材茅斗(Biomaterials)25(2004)4797-4804，其以引用的方式并入本文中)對(duì)于預(yù)防兔側(cè)壁缺損-盲腸擦傷模型中的腹膜粘連有效(依歐Y.(Yeo，Y.)，海雷C(Highley，C)，波拉斯E.(Bellas,E,)，埃托T.(Ito，T,)，瑪瑞尼R.(Marini，R.)，朗格R.(Langer，R.)和克漢D.(Kohane,D.)原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中術(shù)后腹部粘連(hcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)27(2006)4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。大部分所述裝置都利用所述裝置在愈合期間充當(dāng)分離受損表面的生物可相容障壁的能力。在本文中，已對(duì)水凝膠加以修飾以直接解決粘連形成的病理生理異常。據(jù)悉，發(fā)炎會(huì)促使形成腹膜粘連。除發(fā)炎本身的潛在組織破壞作用外，發(fā)炎細(xì)胞釋放諸如腫瘤壞死因子-a(TNF-a)、白細(xì)胞介素-1和6(IL-1和6)等細(xì)胞因子。這些細(xì)胞因子誘導(dǎo)間皮細(xì)胞產(chǎn)生纖溶酶原活化劑抑制劑-1和2(PAI-1和PAI-2)，其降低纖溶酶原活化劑(PA)的活性，減緩纖維蛋白降解(沃維爾S.A.(Whawell,S.A.)，斯科特柯伯姆D.M.(Scottcoombes,D.M.)，威龐德M.N.(Vipond，M.N.)，泰伯特S.J.(Tebbutt，S.J.)和辛普森J.N.(Thompsons.N.)腫瘤壞死因子介導(dǎo)的人類腹膜間皮細(xì)胞釋放纖溶酶原活化齊廿和J制齊iJ-l(TumorNecrosisFactor-MediatedReleaseOfPlasminogen-AcUvatorInhibitor-1ByHumanPeritonealMesothelialCells.)英國(guó)手術(shù)雜志(BritishJournalOfSurgery)81(1994)214-216，其以引用的方式并入本文中)，(沃維爾S.A.(Whawell，S.A.)和辛普森J.N.(Thompson,J.N.)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的人類間皮細(xì)胞釋放纖溶酶原活化齊柳制齊U-l(Cytokine-InducedReleaseOfPlasminogen-ActivatorInhibitor-1ByHumanMesothelialCells.)歐洲手術(shù)雜志(EuropeanJournaOfSurgery)161(1995)315-318,其以引用的方式并入本文中)，(維因斯伯格V.W.M.(Vanhinsbergh,V.W.M.)，波爾K.A.(Bauer,K.A.)，克尼斯塔T.(Kooistra，T.)，克拉夫特C(Kluft,C)，多杰沃德G.(Dooijewaard,G.),希爾曼M.L.(She函n,M.L.)和紐文輝文W.(Nieuwenhuizen,W.)人類中腫瘤壞死因子融合期間纖維蛋白溶解的進(jìn)展-組織型纖溶酶原活化劑、1型纖溶酶原活化劑抑制劑和纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物的伴隨增加(ProgressOfFibrinolysisDuringTumor-Necrosis-FactorInfusionsInHumans-ConcomitantIncreaseInTissue-TypePlasminogen-Activator,Plasminogen-ActivatorInhibitorType-l，AndFibrin(Ogen)DegradationProducts.)血液學(xué)(Blood)76(1990)2284-2289，其以引用的方式并入本文中)，(穆勒基I.K.(Mullarky,I.K.),斯達(dá)貝F.M.(Szaba,F.M.)，伯格倫K.N.(Berggren,K.N.)，庫(kù)姆爾L.W.(Kummer,L.W.),維爾海姆L.B.(Wilhelm，L.B.)，帕倫特M.A.(Parent,M.A.)，約翰遜L.L.(Johnson,L丄)和斯密雷S.T.(Smiley,S.T.)月中瘤壞死因子a和Y干擾素而非出血或病原體負(fù)荷指示感染期間預(yù)防性纖維蛋白沉積的水平(Tumornecrosisfactoralphaandgammainterferon,butnothemorrhageorpathogenburden,dictatelevelsofprotectivefibrindepositionduringinfection.)感染與免疫學(xué)(InfectionAndImmunity)74(2006)1181-1188，其以引用的方式并入本文中)，(穆勒基I.K.(Mullarky,I.K.)，斯達(dá)貝F.M.(Szaba，F(xiàn).M.)，伯格倫K.N.(Berggren,K.N.)，庫(kù)姆爾L.W.(Kummer，L.W.),維爾海姆L.B.(Wilhelm,L.B.)，帕倫特M.A.(Parent,M.A.),約翰遜L.L.(Johnson,L.L.)和斯密雷S.T.(Smiley，S.T.)腫瘤壞死因子a和Y干擾素而非出血或病原體負(fù)荷指示感染期間預(yù)防性纖維蛋白沉積的水平(Tumornecrosisfactoralphaandgammainterferon,butnothemorrhageorpathogenburden,dictatelevelsofprotectivefibrindepositionduringinfection.)感染與免疫學(xué)(InfectionAndImmunity)74(2006)1181-1188)。這些過(guò)程可促進(jìn)粘連形成。促炎性細(xì)胞因子釋放的減少可增強(qiáng)對(duì)腹膜粘連的預(yù)防。為此，若干研究人員已測(cè)試消炎藥物對(duì)腹膜粘連的效用，包括非甾體消炎藥(NSAID),諸如布洛芬(歐S.H.(Oh，S.H,)，金姆J.K.(Kim,J.K,)，宋K.S.(Song,K.S.),諾河S.M.(Noh，S.M.)，基爾S.H.(Ghil,S.H.)，優(yōu)可S.H.(Yuk,S.H.)和李J.H.(Lee,J.H.)通過(guò)具有溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變行為的載有消炎藥物的普流尼克混合物預(yù)防術(shù)后組織粘連(Preventionofpostsurgicaltissueadhesionbyanti-inflammatorydrug-loadedpluronicmixtureswithsol-geltransitionbehavior.)生物醫(yī)學(xué)研究雜志A(JBiomedMaterResA)72(2005)306-16，其以引用的方式并入本文中)，(本特曼B.G.(Bateman,B.G.)，紐雷W.C，Jr.(Nunley，W.C，Jr.)和柯奇因J.D.(Kitchin，J.D.)，第3版，利用布洛芬予頁(yè)防術(shù)后腹膜粘連(Preventionofpostoperativeperitonealadhesionswithibuprofen.)生育與不育(FertilSteril)38(1982)107-8，其以引用的方式并入本文中),(西村K.(Nishimura,K.)，中村R.M.(Nakamura，R.M.)和迪澤佳G.S.(diZerega,G.S,)術(shù)后創(chuàng)傷修復(fù)的生物化學(xué)評(píng)估利用布洛芬預(yù)防腹膜內(nèi)粘連形成(Biochemicalevaluationofpostsurgicalwoundrepair:preventionofintraperitonealadhesionformationwithibuprofen.)手術(shù)研究雜志(JSurgRes)34(1983)219-26，其以引用的方式并入本文中)，(羅杰斯K.(Rodgers，K.)，吉爾吉斯W.(Girgis，W.)，迪澤佳G.S.(diZerega,G.S.)，布拉肯K.(Bracken,K.)和瑞琪L.(Richer,L.)通過(guò)含有非甾體消炎藥的脂質(zhì)體抑制術(shù)后粘連(Inhibitionofpostsurgicaladhesionsbycontainingnonsteroidalantiinflammatorydrugs.)國(guó)際生育雜志(IntJFertil)35(1990)315-20，其以引用的方式并入本文中)，(李戈蘭德E.K.(LeGrand，E.K.)，羅杰斯K.E.(Rodgers，K,E.)，吉爾吉斯W.(Girgis，W.)，坎普洛J.D.(Campeau,J.D.)和迪澤佳G.S.(Dizerega，G.S.)兔粘連預(yù)防模型中非甾體消炎藥和抗血檢素齊U的功效比較(Comparativeefficacyofnonsteroidalanti-inflammatorydrugsandanti-thromboxaneagentsinarabbitadhesion-preventionmodel.)研究性手術(shù)雜志(JInvestSurg)8(1995)187-94，其以引用的方式并入本文中)，(李J.H.(Lee,J.H.)，高A.K.(Go,A.K.)，歐S.H.(Oh，S,H.)，李K.E.(Lee,K.E.)和優(yōu)克S.H.(Yuk,S.H.)載有布洛芬的PLLA-PEG二嵌段共聚物薄膜的組織抗粘連潛力(Tissueanti-adhesionpotentialofibuprofen-loadedPLLA-PEGdiblockcopolymerfilms.)生物材茅斗(Biomaterials)26(2005)671-8，其以引用的方式并入本文中)；和糖皮質(zhì)激素，諸如地塞米松(霍克爾M.(HockeI，M.)，歐特S.(Ott，S.)，希曼U.(Siemann，U.)和柯斯?fàn)朤.(Kissel,T.)利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)AnnalesChirurgiaeEtGynaecologiae76(1987)306-313，其以引用的方式并入本文中)'(布肯麥爾C.C.(Bucke麵ier,C.C.),普斯特雷A.E,(P歸teriA.E.)，哈雷斯R.A.(Harris,R.A.)禾口赫茲S.P.(Hetz,S.P.)使用目標(biāo)大鼠模型比較抗粘連治療(Comparisonofantiadhesivetreatmentsusinganobjectiveratmodel.)美國(guó)夕卜禾斗醫(yī)生雜志(AmericanSurgeon)65(1999)274-282,其以引用的方式并入本文中)，(苦庫(kù)克茲坎T.(Kucukozkan，T.)，爾索易B.(Ersoy，B.)，優(yōu)格D.(Uygur,D.)和甘多度C.(Gundogdu，C.)盆腔手術(shù)后通過(guò)色甘酸鈉、地塞米松、生理鹽水和抑肽酶預(yù)防粘連(Preventionofadhesionsbysodiumchromoglycate,dexamethasone,salineandaprotininafterpelvicsurgery.)ANZ手術(shù)雜志(ANZJSurg)74(2004)1111-5，其以引用的方式并入本文中)。這些己并入基質(zhì)材料中，所述基質(zhì)材料諸如脂質(zhì)體(羅杰斯K.(Rodgers,K.)，吉爾吉斯W.(Girgis，W.)，迪澤佳G.S.(diZerega,G.S.)，布拉肯K.(Bracken,K.)和瑞琪L.(Richer,L.)通過(guò)含有非甾體消炎藥的脂質(zhì)體抑制術(shù)后粘連(Inhibitionofpostsurgicaladhesionsby"pwwnwcontainingnonsteroidalantiinflammatorydrugs.)國(guó)際生育雜志(IntJFertil)35(1990)315-20，其以引用的方式并入本文中)、聚(L-乳酸)(PLLA)-聚乙二醇(PEG)二嵌段共聚物薄膜(李J.H.(Lee,J.H.),高A.K.(Go,A.K.)，歐S.H.(Oh，S.H.)，李K.E.(Lee,K.E.)和優(yōu)克S.H.(Yuk,S.H.)載有布洛芬的PLLA-PEG二嵌段共聚物薄膜的組織抗粘連潛力(Tissueanti-adhesionpotentialofibuprofen-loadedPLLA-PEGdiblockcopolymerfilms.)生物材料(Biomaterials)26(2005)671-8，其以引用的方式并入本文中)、泊洛沙姆與藻酸鹽水凝膠的混合物(歐S.H.(Oh，S.H.):金姆J.K.(Kim,J.K.);宋K.S.(Song,K.S.);諾禾口S.M.(Noh,S.M.);吉爾S.H.(Ghil,S.H.);優(yōu)克S.H.(Yuk，S.H.)和李J.H.(Lee，J.H.)，利用溶膠-凝膠轉(zhuǎn)變行為通過(guò)載有消炎藥物的普流尼克混合物預(yù)防術(shù)后組織粘連(Preventionofpostsurgicaltissueadhesionbyanti-inflammatorydrug-loadedpluronicmixtureswithsol-geltransitionbehavior.)生物材料研究雜志AUBiomedMaterResA)72(2005)306-16，其以引用的方式并入本文中)和聚(乙交酯-共聚-丙交酯)(PLGA)微米顆粒(霍克爾M.(Hockel,M.)，沃特S.(Ott，S.),希爾曼U.(Siemann，U.)和奇塞爾T.(Kissel,T.)利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠中腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)(AnnalesChirurgiaeEtGynaecologiae)76(1987)306-313，其以引用的方式并入本文中)。已發(fā)現(xiàn)，水凝膠基系統(tǒng)在腹膜中的生物相容性通常比疏水聚合物裝置(例如由PLGA構(gòu)成的裝置)強(qiáng)(伊歐Y.(Yeo,Y.);海利C(Highley，C);博拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito，T.);瑪瑞尼R.(Marini,R.);朗格R.(Langer，R.)和克漢D.(Kohane，D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連&Mcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel,)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)，(克漢D.S.(Kohane，D.S.)，蒂斯J.Y.(Tse,J.Y.)，伊歐Y.(Yeo，Y.)，帕德拉R.(Padera,R.)，舒賓納M.(Shubina，M.)和朗格R.(Langer，R.)用于腹膜內(nèi)藥物傳遞的生物可降解聚合微球體和纟內(nèi)米球體(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志第A部分(JournalOfBiomedicalMaterialsResearchPartA)77A(2006)351-361，其以引用的方式并入本文中)，但由于低分子量藥物迅速擴(kuò)散通過(guò)水凝膠基質(zhì)，故具有快得多的釋放動(dòng)力學(xué)。一種控制此問(wèn)題的方法為將小分子與水凝膠連結(jié)(馬克羅德A.D.(McLeod，A.D.),托倫蒂諾L.(To〗entino，L.)和托澤爾T.N.(Tozer,T.N.)糖皮質(zhì)激素-葡聚糖連結(jié)物作為結(jié)腸特異性傳遞的潛在前藥-大鼠中的禾急態(tài)藥物動(dòng)力學(xué)(GIucocorticoid-DextranConjugatesAsPotentialProdrugsForColon-SpecificDelivery-Steady-StatePharmacokineticsInTheRat.)生物藥物學(xué)與藥物沉積(Biopharmaceutics&DrugDisposition)15(1994)151-161，其以引用的方式并入本文中)，(馬克羅德A.D.(McLeod，A.D.),弗雷德D.R.(Friend,D.R.)和托澤爾T,N.(Tozer,103T.N.)糖皮質(zhì)激素-葡聚糖連結(jié)物作為結(jié)腸特異性傳遞的潛在前藥-水解大鼠胃腸道內(nèi)容物(Glucocorticoid-DextranConjugatesAsPotentialProdrugsForColon-SpecificDelivery-HydrolysisInRatGastrointestinal-TractContents.)藥物科學(xué)雜志(JournalOfPharmaceuticalSciences)83(1994)1284-1288，其以引用的方式并入本文中)，(周S,Y.(Zhou,S.Y.),梅Q.B.(Mei，Q.B.)，劉L.(Liu，L.)，郭X.(Guo，X.)，邱B.S.(Qiu,B.S.)，趙D.H.(Zhao，D.H.)和曹C.H.(Cho,C.H.)糖皮質(zhì)激素連結(jié)物于大鼠胃腸道中的傳遞和其對(duì)于潰瘍性結(jié)腸炎的治療(Deliveryofglucocorticoidconjugateinratgastrointestinaltractanditstreatmentforulcerativecolitis.)中國(guó)藥理學(xué)報(bào)(ActaPharmacologicaSinica)22(2001)761-764，其以引用的方式并入本文中)，(龐Y.N.(Pang，Y.N,)，張Y.(Zhang,Y.)和張Z.R.(Zhang,Z.R.)酶依賴性前藥的合成和其用于結(jié)腸標(biāo)耙的潛力的評(píng)估(Synthesisofanenzyme-dependentprodrugandevaluationofitspotentialforcolontargeting.)世界腸胃病學(xué)雜志(WorldJournalOfGastroenterology)8(2002)913-917，其以引用的方式并入本文中)，(珀亞尼T.(Pouyani，T.)和普雷斯特維奇G.D.(Prestwich,G.D.)透明質(zhì)酸寡糖的官能化衍生物-藥物載劑和新穎生物材料(FunctionalizedDerivativesofHyaluronic-AcidOligosaccharides-DrugCarriersandNovelBiomaterials.)生物連結(jié)物化學(xué)(BioconjugateChemistry)5(1994)339-347，其以引用的方式并入本文中)，(普雷斯特維奇(Prestwich)等人，透明質(zhì)酸的受控化學(xué)修飾酰肼衍生物的合成、應(yīng)用和生物降解(Controlledchemicalmodificationofhyaluronicacid:synthesis,applications,andbiodegradationofhydrazidederivatives.)控釋雜志(JournalOfControlledRelease)53(1998)93-103,其以引用的方式并入本文中)，(雷潔思維奇(Rajewski)等人，聚合前藥-透明質(zhì)酸的氫化可的松酯的酶促和非酶促水解(EnzymaticAndNonenzymaticHydrolysisOfAPolymericProdrug-HydrocortisoneEstersOfHyaluronic-Acid.)國(guó)際制藥學(xué)雜志(InternationalJournalOfPharmaceutics)82(1992)205-213，其以引用的方式并入本文屮)，(艾夫特(Everts)等人，使用E-選擇素定向免疫連結(jié)物將地塞米松選擇性細(xì)胞內(nèi)傳遞到活性內(nèi)皮細(xì)胞中(SelectiveintracellulardeliveryofdexamethasoneintoactivatedendothelialcellsusinganE-selectin-directedimmunoconjugate.)免疫學(xué)雜志(JournalOflmmunology)168(2002)883-889，其以引用的方式并入本文中)，(梅爾吉特(Melgert)等人，使地塞米松靶向庫(kù)普弗細(xì)胞對(duì)大鼠肝炎禾0纖維化的影響(TargetingdexamethasonetoKupffercells:Effectsonliverinflammationandfibrosisinrats.)肝臟學(xué)(Hepatology)34(2001)719-728，其以引用的方式并入本文中)。這些連結(jié)物可控制釋放動(dòng)力學(xué)，但連結(jié)物聚合物本身可迅速?gòu)母鼓?nèi)清除。為解決水凝膠基質(zhì)釋放消炎藥物和水凝膠擴(kuò)散到腹膜外的問(wèn)題，設(shè)計(jì)并合成組合原位交聯(lián)特性和藥物連結(jié)的水凝膠(波亞尼T.(Pouyani,T.)和普雷斯特維奇G.D.(PrestwichG.D.)透明質(zhì)酸寡糖的官能化衍生物-藥物載劑和新穎生物材料(FunctionalizedDerivativesofHyaluronic-AcidOligosaccharides-DrugCarriersandNovelBiomaterials.)生物連結(jié)化學(xué)(BioconjugateChemistry)5(1994)339-347，其以引用的方式并入本文中)。已制造出經(jīng)由酯鍵聯(lián)與有效合成糖皮質(zhì)激素激動(dòng)劑地塞米松連結(jié)并且還經(jīng)酰肼基或醛基修飾從而使其能通過(guò)腙鍵與其它HA交聯(lián)的HA。在本文中，表征這些材料并在活體外和活體內(nèi)證實(shí)其消炎活性。材料與方法柳地塞米松、琥珀酸酐、乙醇、l-[3-(二甲基氨基)丙基]-3-乙基碳化二亞胺鹽酸鹽(EDC)、4-二甲基氨基吡啶、N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)、二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)、無(wú)水丙酮、二甲亞砜(DMSO)、己二酸二酰肼(ADH)、羥基苯并三唑(HOBt)、高碘酸鈉、乙二醇、肼基甲酸叔丁酯、氯化鈉、磷酸和鈉都購(gòu)自阿爾德里奇公司(Aldrich)。HA(Mw-490kDa或1.36MkDa)是購(gòu)自基因酶公司。方茲透欲處凝-3二凝二激,^M-AZ)TO浙透剪處麼-,OM-ALZ)J游會(huì)成如所述執(zhí)行合成(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型手術(shù)后腹部粘連("'fwcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)27(2006)4698-4705,其以引用的方式并入本文中)，(布爾皮特P.(BulpiU，R)等人，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)木才半斗石開(kāi)究雜'志(JBiomedMaterRes)47(1999)152-169其以引用的方式并入本文中)，(賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G);帕德拉R.(Padera，R.);朗格R.(Langer，R.)和克漢D.S.(Kohane，D.S.)'通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadeby!'wcross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)25(2004)4797-4804，其以引用的方式并入本文中)。HA-ADH和HA-ALD分別是由1.36MDaHA和4卯kDaHA合成。邀塞^松-游必虔#必會(huì)成本程序是基于先前報(bào)導(dǎo)(龐Y.N,(Pang,Y.N.)，張Y.(Zhang,Y.)和張Z.R.(Zhang,Z.R.)酶依賴性前藥的合成和其用于結(jié)腸標(biāo)耙的潛力的評(píng)估(Synthesisofanenzyme-dependentprodrugandevaluationofitspotentialforcolontargeting.)世界腸胃病學(xué)雜志(WorldJournalOfGastroenterology)8(2002)913-917，其以引用的方式并入本文中)，(艾夫特(Everts),闊克R.J.(Kok,R.J,),埃斯基斯多特S.A.(Asgeirsdottir,S.A.)，邁爾吉特B.N.(Megert，B.N.),穆倫納T.J.M.(Moolenaar，T.J.M.)，康寧G.A.(Koning,G,A.)，范路因M.J.A.(vanLuyn,M.J.A.)，梅吉爾D.K.R(Meijer，D.K.F.)和莫倫納G.(Molema,G.)使用E-選擇素定向免疫連結(jié)物將地塞米松選擇性細(xì)胞內(nèi)傳遞到活性內(nèi)皮細(xì)胞中(SelectiveintracellulardeliveryofdexamethasoneintoactivatedendothelialcellsusinganE-selectin-directedimmunoconjugate.)免疫學(xué)雜志(JournalOfImmunology)168(2002)883-889，其以引用的方式并入本文中)。氮?dú)庀?，?.455g地塞米松(6.25mmol)、10.52g琥珀酸酐和0.795g4-二甲基氨基吡啶溶解于400ml無(wú)水丙酮中。室溫下將溶液攪拌整夜。蒸發(fā)丙酮后，將白色晶體溶解于36ml乙醇中，隨后逐漸添加84ml純水。將溶液在4'C下保持2天，并且沉淀出白色針狀晶體。將其過(guò)濾并且在減壓下干燥。執(zhí)行此再沉淀2次(產(chǎn)率90-95%)。,秀基jr勸教亞嚴(yán)邀塞苯松-游莉?yàn)u盜^V/W-^x-d游#成本程序是基于先前報(bào)導(dǎo)(珀亞尼T.(Pouyani,T.)和普雷斯特維奇G.D.(Prestwich，G.D.)透明質(zhì)酸寡糖的官能化衍生物-藥物載劑和新穎生物材料(FunctionalizedDerivativesofHyaluronic—AcidOligosaccharides匿DrugCarriersandNovelBiomaterials.)生物連結(jié)物化學(xué)(BioconjugateChemistry)5(1994)339-347,其以引用的方式并入本文中)。將1.3930gdex-suc、0.3355gN-羥基琥珀酰亞胺(NHS)禾b0.6040mg二環(huán)己基碳化二亞胺(DCC)溶解于80ml丙酮中，且在室溫下攪拌16小時(shí)，產(chǎn)生白色結(jié)晶沉淀。通過(guò)過(guò)濾回收晶體，蒸發(fā)去除丙酮并獲得干燥的白色晶體，且不經(jīng)進(jìn)一步純化即使用(產(chǎn)率90-95%)。透敏廣潔-5:潔二腐U齒塞,松-游勸麼益^M-dexJ游合成本程序是基于先前報(bào)導(dǎo)(珀亞尼T.(Pouyani，T.)和普雷斯特維奇G.D.(Prestwich,G.D.)透明質(zhì)酸寡糖的官能化衍生物-藥物載劑和新穎生物材料(FunctionalizedDerivativesofHyaluronic-AcidOligosaccharides-DrugCarriersandNovelBiomaterials.)生物連結(jié)物化學(xué)(BioconjugateChemistry)5(1994)339-347，其以引用的方式并入本文中)。將100mgHA-ADH溶解于13.33mlNaHC03緩沖液(pH=8.5)中。將125.8mgNHS-dex-suc溶解于26.67mlDMF(二甲基甲酰胺)中。經(jīng)30分鐘將NHS-dex-suc溶液倒入HA-ADH溶液并在室溫下攪拌18小時(shí)。在300ml丙酮中使聚合物再沉淀，隨后對(duì)水透析3天。將純化產(chǎn)物凍干并隨后于4'C下存儲(chǔ)(產(chǎn)率70-80%)。廚盤/火凝應(yīng)'^mx,/mx-z)0^游虔y吝制備HA-DEX與HA-ALD交聯(lián)的圓盤水凝膠(HAX-DEX)。使用雙管注射器(百特公司(Baxter),伊利諾伊斯州迪爾費(fèi)德(Deerfield，IL))將HA-DEX禾QHA-ALD的2%(w/v)水溶液注射到夾于兩個(gè)載片之間的橡膠模具中。所制備的水凝膠的直徑和厚度分別為1.2cm和3.5mm。以相同方式制備HA-ADH與HA-ALD交聯(lián)的圓盤水凝膠(HAX)。褒^激游表f將地塞米松和地塞米松-琥珀酸鹽溶解于d6-DMSO中，并將HA-ADH和HA-DEX溶解于D20中，并通過(guò)'H-NMR光譜(瓦里安技術(shù)公司(Varian):優(yōu)尼提300型分光光度計(jì)(Unity300spectrophotometer"分析。通過(guò)使用亞特蘭蒂斯(Atlantis)dC18分析柱(dC18，4.6x250mm'粒徑5pm)的高效液相色譜(安捷倫技術(shù)公司(Agilenttechnologies)1100系列)驗(yàn)證dex-suc、NHS-dex-suc、HA-ADH和HA-DEX的合成和純度。流動(dòng)相為乙腈與NaH2P04/H3P04緩沖液的混合物(60/40,pH3.8)。流速為1ml/min并且在246nm測(cè)量UV吸光度(惠普公司(HewlettPackard):G1314A)。如報(bào)導(dǎo)，在堿水解琥珀酸鹽連接基后通過(guò)HPLC分析與HA偶聯(lián)的地塞米松的量(艾夫特(Everts)等人，使用E-選擇素定向免疫連結(jié)物將地塞米松選擇性細(xì)胞內(nèi)傳遞到活性內(nèi)皮細(xì)胞中(SelectiveintracellulardeliveryofdexamethasoneintoactivatedendothelialcellsusinganE-selectin-directedimmunoconjugate.)免疫學(xué)雜志(JournalOflmmunology)168(2002)883-889，其以引用的方式并入本文中)。力微游藩如所報(bào)導(dǎo)測(cè)量膠凝時(shí)間(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley,C);博拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito，T.);瑪瑞尼R.(Marini,R.);朗格R.(Langer，R,);克漢D.(Kohane,D.),原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)27(2006)4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，在使用磁力棒攪拌下，將0.1ml27。(w/v)HA-ALD水溶液添加到0.1ml2%(w/v)HA-DEX或HA-ADH水溶液中，并測(cè)量混合物變?yōu)樗z小球的時(shí)間。利用流變儀(TA儀器公司AR1000(TAInstruments:AR1000),德拉華州紐卡斯特(Newcastle,Delaware))測(cè)量圓盤凝膠的剪切模量。如上文所述制備圓盤水凝膠，隨后使其在PBS緩沖液(pH=7.4)中膨脹5天，并且以重量分析方式測(cè)量膨脹體積。以不同剪切應(yīng)力執(zhí)行蠕變和松弛測(cè)試。由應(yīng)力與應(yīng)變之間的線性關(guān)系的斜率計(jì)算剪切模量G。應(yīng)力與應(yīng)變之間的擬合線的R2值高于0.95。存力分界使用人類間皮細(xì)胞系(CRL-9444:ATCC)使用MTT分析(普洛麥格公司(Promega))測(cè)定在存在HA、HA-ADH、HA-ALD和HA-DEX的情況下活體外細(xì)胞活力。37'C下于5免C02中，使細(xì)胞在完全生長(zhǎng)培養(yǎng)基(具有伊爾氏BSS(Earle'sBSS)、0.75mML匿谷氨酰胺和1.25g/L碳酸氫鈉且補(bǔ)充有3.3nM表皮生長(zhǎng)因子、400nM氫化可的松、870nM胰島素、20mMHEPES和10%胎牛血清的培養(yǎng)基199)中生長(zhǎng)并維持。將5xl(^個(gè)細(xì)胞放入24孔培養(yǎng)板的各孔中并在37'C下于5呢C02中培育整夜。將培養(yǎng)基用含有不同濃度HA、HA-ADH、HA-DEX或HA-ALD的培養(yǎng)基替換。添加這些材料后第3天，執(zhí)行MTT分析。將100微升四氮唑鹽溶液添加到各孔中且在37'C下培育4小時(shí)。使用lml清潔劑溶液將由活性線粒體產(chǎn)生的紫色甲臜溶解且隨后在570nm通過(guò)板讀數(shù)器(分子裝置公司SpectraMax384型(MolecularDevices:SpectraMax384))測(cè)量。針對(duì)未將測(cè)試材料添加到培養(yǎng)基中的孔標(biāo)準(zhǔn)化吸光度值。邀塞術(shù)挖釋及浙/MX-Z^X餘i^動(dòng)力學(xué)如上文所述使用2%(w/v)凝膠前體溶液制備圓盤狀HAX-DEX水凝膠。將圓盤狀水凝膠浸泡于4mlDMEM(杜貝卡氏經(jīng)修飾伊格氏培養(yǎng)基(Dulbecco'sModifiedEagleMedium):GIBCO目錄號(hào)10569-010)、具有0.5%BSA(牛血清白蛋白阿爾德里奇公司)的DMEM或具有10%FBS(胎牛血清GIBCO目錄號(hào)10082-147)的DMEM中，且在37。C下培育8天。第l天、第2天、第3天和第5天時(shí)將培養(yǎng)基用新鮮培養(yǎng)基完全替換并在-8(TC存儲(chǔ)，隨后添加到細(xì)胞中。以重量分析方式測(cè)量HAX和HAX-DEX圓盤的降解時(shí)程。在若干時(shí)間點(diǎn)時(shí)測(cè)量水凝膠的重量Ws。將膨脹體積Q(%)以Q-Ws/Wi計(jì)算，其中Wi為水凝膠的初始重量。巖i^/、廚必嚴(yán)"'反,潘應(yīng)游劍多C57/B16小鼠購(gòu)自塔科尼克公司(紐約哈德孫(Hudson,NY))。將2ml3%(w/v)無(wú)菌硫代乙醇酸鹽溶液(DIFCO實(shí)驗(yàn)儀器公司(DIFCOLaboratories),密歇根州底特律(Detroit,MI))注射到腹腔中。注射后4天，通過(guò)C02對(duì)小鼠實(shí)施安樂(lè)死并注射6ml冰冷的含有5mMEDTA的PBS緩沖液。在用鑷子攪動(dòng)腹膜后，吸出含有巨噬細(xì)胞的溶液。將細(xì)胞立即放入在冰上冰冷的DMEM中，隨后洗滌，計(jì)數(shù)并涂板。獲得每只小鼠約107個(gè)細(xì)胞。將含有10%(v/v)FBS的DMEM中的5xl(^個(gè)細(xì)胞添加到96孔培養(yǎng)板的各孔中并在37'C下于5呢C02中培育整夜。幼l多^激發(fā)游反凝潘應(yīng)產(chǎn)主潘應(yīng)歷f通過(guò)用20微升/孔PBS緩沖液去除非粘附細(xì)胞。隨后將100Ml具有10%FBS的DMEM和lOO)iil與水凝膠預(yù)培育的培養(yǎng)基(第2.2.9部分)或已知濃度的地塞米松添加到各孔中的粘附巨噬細(xì)胞中。在37。C下于5%C02中培育24小時(shí)后，將25900ng/mlLPS(西格瑪公司(Sigma)，密蘇里州圣路易斯(St.Louis,MO)目錄號(hào)L-4391)添加到各孔中以達(dá)100ng/ml的最終濃度。再培育16小時(shí)后，收集培養(yǎng)基并在-80'C下存儲(chǔ)直到分析。通過(guò)ELISA(酶連免疫吸附劑分析)測(cè)量TNF-a、IL-6和地塞米松于所述培養(yǎng)基中的濃度。TNF-(x、IL-6和地塞米松的EUSA試劑盒分別購(gòu)自R&D系統(tǒng)公司(多塞特(DuoSet)目錄號(hào)DY406)、百利達(dá)公司(BioLegend)(小鼠IL-6ELISAMAXtm組(得拉斯(Deluxe))和尼奧吉有限公司(NeogenCorporation)?；畎閊/實(shí)驗(yàn)依照麻省理工學(xué)院委員會(huì)(MassachusettsInstituteofTechnologyCommittee)關(guān)于動(dòng)物護(hù)理所批準(zhǔn)的方案，遵照有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理和使用的NIH指導(dǎo)(NIH公告#85-23，1985年修訂)護(hù)理動(dòng)物。利用氧氣中的2-3%異氟垸對(duì)重25-30g的雄性SV129小鼠實(shí)施麻醉。刮開(kāi)背部中線且用70%異丙醇水溶液清洗。在背部中線中用雙管注射器(一個(gè)注射器中有0.5mlHA-DEX，另一注射器中有0.5mlHA-ALD)經(jīng)皮下注射1mlHAX-DEX。注射后2天，處死動(dòng)物并使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)處理組織以供組織學(xué)分析。統(tǒng)^學(xué)分析通過(guò)韋爾奇t檢驗(yàn)(Welch'st-test)(各組之間具有不等方差的t檢驗(yàn))分析數(shù)據(jù)。為比較培養(yǎng)基在釋放動(dòng)力學(xué)測(cè)試中的作用，在韋爾奇t檢驗(yàn)之前執(zhí)行ANOVA。在具有相同培養(yǎng)基和凝膠的不同時(shí)間點(diǎn)之間的的比較中使用配對(duì)t檢驗(yàn)。利用卡雷達(dá)格拉夫@(KaleidaGraph)(斯尼吉軟件公司(SynergySoftware))進(jìn)行所有統(tǒng)計(jì)檢驗(yàn)。p值<0,05被認(rèn)為是統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的。結(jié)果覆^激nAD//,ft4掘w游表,所有材料都是根據(jù)圖32中的方案合成。分別通過(guò)NMR光譜在4.48和4.70ppm到4.78和5.03ppm處地塞米松的21-亞甲基質(zhì)子的化學(xué)位移來(lái)確定dex-suc的合成。此外，24-亞甲基和25-亞甲基質(zhì)子的化學(xué)位109移出現(xiàn)在2.59ppm處。通過(guò)HPLC測(cè)量的地塞米松、dex-suc和NHD-dex-suc的洗脫時(shí)間分別為4.9min、5.5和7.9min。通過(guò)HPLC，地塞米松轉(zhuǎn)化成dex-suc和NHS-dex-suc的效率分別為〉99%和96%。通過(guò)^-NMR光譜確定HA-ADH的合成；48.4%D-葡糖醛酸殘基被ADH修飾(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利C(Highley,C);博拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini，R.);朗格R.(Langer,R.)和克漢D.(Kohane，D.)，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)27(2006)4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。這是由1.62ppm處ADH殘基的甲基質(zhì)子的峰的積分值與2.00ppm處N-乙?；?D-葡糖胺殘基的甲基質(zhì)子的峰的積分值的比率計(jì)算得到。通過(guò)HPLC禾卩'H-NMR確定由HA-ADH合成HA-DEX。通過(guò)HPLC領(lǐng)J量，HA匿DEX在246nm下具有UV吸光度峰值，而HA-ADH則沒(méi)有。HA-DEX的停留時(shí)間為3.0min。利用NMR光譜，通過(guò)2.63ppm處dex-琥珀酸鹽中琥珀酸鹽連接基的24-亞甲基和25-亞甲基質(zhì)子的化學(xué)位移的出現(xiàn)也確定由HA-ADH合成HA-DEX。由2.63卯m處琥珀酸鹽連接基的亞甲基質(zhì)子的峰的積分值與2.00ppm處N-乙?；?D-葡糖胺的甲基質(zhì)子的峰的積分值的比率確定，13.1%D-葡糖醛酸殘基與NHS-dex-suc的琥珀酸鹽連接基反應(yīng)。由此，計(jì)算得到35.3%(=48.4%-13.1%)ADH殘基未經(jīng)琥珀酸鹽連接基修飾，且27%(=13.1%/48.4%)HA-ADH殘基與NHS-dex-suc反應(yīng)。初步研究證實(shí)，此HA-地塞米松產(chǎn)物在較短時(shí)間段內(nèi)釋放大部分地塞米松，由于化合物具有高效力，故此在生物上是不合需要的。此外，利用一些聚合物系統(tǒng)的經(jīng)驗(yàn)(例如，聚(乳酸-共聚-乙醇酸)微球體(克漢D.S.(Koh纖，D.S.)，蒂斯J.Y.(Tse，J.Y.)，伊歐Y.(Yeo,Y.)，帕德拉R.(Padera，R.)，舒賓納M.(Shubina,M.)和朗格R.(Langer，R.)用于腹膜內(nèi)藥物傳遞的生物可降解聚合微球體和納米球體(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志第A部分(JournalOfBiomedicalMaterialsResearchPartA)77A(2006)351-361，其以引用的方式并入本文中)表明增加此材料的疏水性可能對(duì)其用于某些所需用途(例如腹膜中)的生物相容性不利。因此，通過(guò)徹底透析來(lái)減少地塞米松負(fù)荷。HPLC分析終產(chǎn)物時(shí)，終產(chǎn)物中與地塞米松偶聯(lián)的HA-ADH的百分比僅為0.1-0.2%(n=3)，表明幾乎所有的HA-ADH在透析過(guò)程中都因琥珀酸鹽連接基水解而釋放。如通過(guò)材料于溶液中增加的濁度所證實(shí)，即使此極低的地塞米松對(duì)HA的最終修飾程度也對(duì)所述連結(jié)物于水中的溶解度具有影響。此終產(chǎn)物在下文中被稱為HA-DEX。|凝麼OMX,/MX-DEA^游表fHAX-DEX的膠凝時(shí)間(22.3±0.5sec)比HAX長(zhǎng)(3.5±1.0;各組中n=4，p<0.0001),預(yù)計(jì)這是因?yàn)镠A-ADH上可用于交聯(lián)的酰肼基團(tuán)的數(shù)量因地塞米松修飾而降低27%。在PBS緩沖液中浸泡5天后，當(dāng)在PBS中交聯(lián)時(shí)，HAX和HAX-DEX與初始體積相比膨脹206.2±14.9%和235.6±36.9%(n=4，p=0.21)。HAX和HAX-DEX的剪切應(yīng)力值分別為32.4±17.2Pa(n:4)和22.1±13.5Pa(n=4),但差異并不統(tǒng)計(jì)學(xué)上顯著。這些值顯示兩種水凝膠高度可變形，且表明HAX-DEX以與HAX大致相同的程度交聯(lián)。合^^康合#^//審座一銀應(yīng)話力游嚴(yán)稱HAX禾HHAX-DEX凝膠在其降解期間釋放出聚合物片段，諸如HA-ADH、HA-ALD或HA-DEX。進(jìn)行MTT分析以研究合成聚合物對(duì)間皮細(xì)胞活力的影響。未經(jīng)修飾的HA、HA-ALD禾flHA-ADH(都為n=4)展現(xiàn)細(xì)胞活力的較小降低(圖33)。(對(duì)于未經(jīng)修飾的HA和HA-ADH,在所有濃度下，與對(duì)照相比p<0.005。對(duì)于HA-ALD,在0.3、0.6、0.9和1.5%下，p分別為0.4、0.07、0.017和0.003)。HA-DEX(n=4)引起間皮細(xì)胞活力的較大降低(例如，HA-ADH與HA-DEX之間比較；在所有濃度下p<0.005)(圖33)。瓶游潛孝基爐邀塞術(shù)松游釋,動(dòng)力學(xué)浙/大凝皮沐茨游好程將HAX-DEX凝膠培育于細(xì)胞培養(yǎng)基(DMEM)中。在第1天、第2天、第3天、第5天和第8天時(shí)，改變培養(yǎng)基并且如方法中所述使用ELISA測(cè)量所釋放的地塞米松的濃度(圖34)。在獨(dú)立組中，使用作為更具代表性的生理學(xué)相關(guān)流體的培養(yǎng)基0.5%牛血清白蛋白(BSA)或10%胎牛血清(FBS)。在所有三種情況下，前三天地塞米松的釋放是以相對(duì)恒定的速率發(fā)生，隨后逐漸降低。所釋放的地塞米松總量分別為DMEM中0.94±0.20pg;具有BSA的DMEM中1.33±0.39嗎；和具有FBS的DMEM中1.02±0.41Hg，這分別與DMEM中總共釋放17.8±3.8%的經(jīng)連結(jié)地塞米松、具有BSA的DMEM中總共25.3±7.4%的經(jīng)連結(jié)地塞米松和具有FBS的DMEM中總共19.3±7.8%的經(jīng)連結(jié)地塞米松相對(duì)應(yīng)。因此，在釋放實(shí)驗(yàn)期間，約20%地塞米松因琥珀酸鹽連接基的裂解而以游離藥物形式釋放。在這些實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，無(wú)凝膠塊狀物存留；推測(cè)其余80%地塞米松是以與聚合物片段連結(jié)的形式釋放。所釋放的培養(yǎng)基的GPC也證實(shí)經(jīng)地塞米松衍生化的大分子(macromer)的存在，但直接測(cè)定以此方式釋放的量是不可能的。除第5天時(shí)BSA培養(yǎng)基中的地塞米松濃度高于純DMEM(p=0.031)和FBS培養(yǎng)基(p=0.009)外，在任何時(shí)間點(diǎn)時(shí)不同培養(yǎng)基中地塞米松的濃度都無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異。HAX和HAX-DEX水凝膠隨之在細(xì)胞培養(yǎng)基中膨脹和降解(圖35)。二者都在數(shù)天內(nèi)展現(xiàn)膨脹。第1天時(shí)就膨脹來(lái)說(shuō)HAX與HAX-DEX之間不存在統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著的差異，但到第3天時(shí)，HAX-DEX在DMEM+BSA和DMEM+FBS中比HAX膨脹得大(p〈0.05)。HAX-DEX的降解速率比HAX快，因此第5天時(shí)HAX-DEX凝膠的體積顯著降低。/M掘X游游炎歸地塞米松使經(jīng)脂多糖(LPS)刺激的巨噬細(xì)胞中IL-6和TNF-a的產(chǎn)量劑量依賴性降低(圖36)。在無(wú)地塞米松的情況下經(jīng)LPS刺激的細(xì)胞中IL-6和TNF-(x的濃度分別為773±13ng/ml和11723±87pg/ml(n=4)。低于l(T9M的地塞米松濃度對(duì)所述兩種分子的產(chǎn)量沒(méi)有影響。為研究HAX-DEX的消炎效用，利用由在前述部分中的實(shí)驗(yàn)中的HAX和HAX-DEX產(chǎn)生的釋放培養(yǎng)基處理LPS剌激的原代腹膜巨噬細(xì)胞。在暴露于腹膜巨噬細(xì)胞后，測(cè)量所述培養(yǎng)基中IL-6(圖37)和TNF-a(圖38)的濃度。圖36與圖37和38的比較揭示出，由利用HAX的釋放實(shí)驗(yàn)得到的培養(yǎng)基不會(huì)明顯削弱IL-6或TNF-a的產(chǎn)量。相比之下，暴露于由HAX-DEX得到的培養(yǎng)基會(huì)使二者產(chǎn)生明顯降低。與HAX分別歷時(shí)3天和5天相比，在HAX-DEX中見(jiàn)到腹膜巨噬細(xì)胞對(duì)IL-6(圖37)禾nTNF-a(圖38)產(chǎn)量的統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著抑制。生激布^性,蘊(yùn)織及應(yīng)向雄性SV129小鼠中經(jīng)皮下注射1mlHAX或HAX-DEX(各自n=4)。注射后2天，對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死并將其刮開(kāi)。解剖后，如經(jīng)由皮膚和皮下組織中可看出，HAX-DEX袋的輪廓界限比HAX清晰。盡管HAX凝膠略有粘性，但其流動(dòng)性強(qiáng)得多且已擴(kuò)散到組織平面中。HAX-DEX凝膠易于以離散實(shí)體的形式從其囊袋中去除(摘出)(圖39A)。HAX-DEX凝膠比HAX凝膠清晰。這些發(fā)現(xiàn)與上文所示的活體外結(jié)果(其中HAX-DEX降解比HAX快)形成對(duì)比。HAX-DEX凝膠涂片的所有經(jīng)染色部分都表明幾乎完全不存在白細(xì)胞浸潤(rùn)，而只有1個(gè)HAX凝膠涂片具有致密的嗜中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞聚集。此外，凝膠-組織界面處的組織和殘余凝膠展現(xiàn)在HAX中比在HAX-DEX凝膠中強(qiáng)得多的細(xì)胞浸潤(rùn)(圖39B-D)。討論本文中已描述釋放經(jīng)連結(jié)地塞米松的交聯(lián)HA水凝膠的合成和表征。此系統(tǒng)的特征在于將使得易于在腹膜內(nèi)施用和存留。水凝膠有意識(shí)地極低裝載地塞米松。如上文所述，一個(gè)問(wèn)題在于基質(zhì)的過(guò)度疏水性將削弱HA基質(zhì)的生物相容性。此外，地塞米松藥力強(qiáng)烈，其包括減弱創(chuàng)傷愈合、免疫抑制、高血壓、胃腸出血等。因此，劑量最小化對(duì)于在使全身作用或使鄰近創(chuàng)傷的裂開(kāi)最小化的同時(shí)能夠提供局部消炎活性極為重要。即使利用所述極低裝載量，水凝膠也可臨床上釋放有效濃度的藥物歷時(shí)數(shù)天，而不會(huì)發(fā)生將會(huì)由透析掉的地塞米松所引起的大量突然釋放。相反，通過(guò)HAX-DEX與HAX相比細(xì)胞毒性的適度增加可確定這些關(guān)于裝載量的考慮的重要性。然而，應(yīng)注意已知交聯(lián)水凝膠緩慢降解，故活體外獲得的游離HAX-DEX的濃度不太可能在活體內(nèi)出現(xiàn)。多位研究人員已報(bào)導(dǎo)甾體糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑于預(yù)防腹膜粘連形成的效用(霍克爾M.(Hockel，M.)等人，利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)AnnalesChirurgiaeEtGynaecologiae76(1987)306-313，其以引用的方式并入本文中)，(布肯麥爾C.C.(Buckenmaier，C.C.)等人，使用目標(biāo)大鼠模型比較抗粘連治療(Comparisonofantiadhesivetreatmentsusinganobjectiveratmodel.)美國(guó)夕卜禾斗醫(yī)生雜志(AmericanSurgeon)65(1999)274-282，其以引用的方式并入本文中)，(庫(kù)克科茲肯T.(Kucukozkan,T.)等人，盆腔手術(shù)后通過(guò)色甘酸鈉、地塞米松、生理鹽水和抑肽酶預(yù)防粘連(Preventionofadhesionsbysodiumchromoglycate，dexamethasone,salineandaprotininafterpelvicsurgery.)ANZ手術(shù)雜志(ANZJSurg)74(2004)1111-5，其以引用的方式并入本文中)。據(jù)報(bào)導(dǎo)，這些化合物都是通過(guò)減少間皮細(xì)胞和腹膜巨噬細(xì)胞產(chǎn)生細(xì)胞因子等機(jī)制起作用。在本文中，通過(guò)測(cè)量地塞米松釋放的效用研究?jī)煞N細(xì)胞因子。TNF-a是急性發(fā)炎和腹膜粘連形成的重要細(xì)胞因子(霍姆達(dá)爾L.(Homdahl，L.)和艾弗森M.L.(Ivarsson，M.L.)細(xì)胞因子、共凝聚和纖維蛋白溶解在腹膜組織修復(fù)中的作用(Theroleofcytokines,coagulation,andfibrinolysisinperitonealtissuerepair.)歐洲手術(shù)雜志(EuropeanJournalOfSurgery)165(1999)1012-1019，其以引用的方式并入本文中)，(穆斯特爾S.E.(Mutsaers，S.E.)間皮細(xì)胞其結(jié)構(gòu)、功能和其在漿膜修復(fù)中的作用(Mesothelialcells:Theirstructure,functionandroleinserosalrepair.)呼吸病學(xué)(Respirology)7(2002)171-191其以引用的方式并入本文中)。其刺激間皮細(xì)胞分泌多種介體纖溶酶原活化劑抑制劑(PAI)(沃維爾S.A.(Whawdl，S.A.)等人，腫瘤壞死因子介導(dǎo)的人類腹膜間皮細(xì)胞釋放纖溶酶原活化劑抑制劑-l(TumorNecrosisFactor-MediatedReleaseOfPlasminogen-ActivatorInhibitor-1ByHumanPeritonealMesothelialCells.)英國(guó)手術(shù)雜志(BritishJournalOfSurgery)81(1994)214-216,其以引用的方式并入本文中)，(沃維爾S.A.(Whawell，S.A.)和辛普森J.N.(Thompson,J.N.)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的人類間皮細(xì)胞釋放纖溶酶原活化劑抑制齊!j-l(Cytokine-InducedReleaseOfPlasminogen-ActivatorInhibitor-1ByHumanMesothelialCells.)歐洲手術(shù)雜志(EuropeanJournalOfSurgery)161(1995)315-318，其以引用的方式并入本文中)，其減緩纖維化(維因斯伯格V.W.M.(Vanhinsbergh，V.W.M.)，波爾K.A.(Bauer,K.A.)，克尼斯塔T.(Kooistra，T.)，克拉夫特C(Kluft,C)，多杰沃德G.(Dooijewaard,G.)，希爾曼M.L.(Sherman,M.L.)和紐文輝文W.(Nieuwenhuizen,W.)人類中腫瘤壞死因子融合期間纖維蛋白溶解的進(jìn)展-組織型纖溶酶原活化劑、1型纖溶酶原活化劑抑制劑和纖維蛋白(原)降解產(chǎn)物的伴隨增加(ProgressOfFibrinolysisDuringTumor-Necrosis-FactorInfusionsInHumans-ConcomitantIncreaseInTissue-TypePlasminogen-Activator，Plasminogen-ActivatorInhibitorType-l，AndFibrin(Ogen)DegradationProducts.)血液學(xué)(Blood)76(1990)2284-2289，其以引用的方式并入本文中)，(穆勒基I.K.(Mullarky,I.K.)等人，腫瘤壞死因子a和Y干擾素而非出血或病原體負(fù)荷指示感染期間預(yù)防性纖維蛋白沉積的水平(Tumornecrosisfactoralphaandgammainterferon,butnothemorrhageorpathogenburden,dictatelevelsofprotectivefibrindepositionduringinfection.)感染與免疫學(xué)(InfectionAndImmunity)74(2006)1181-1188，其以引用的方式并入本文中)；IL-l、IL-6(穆斯特爾S.E.(Mutsaers，S.E.)間皮細(xì)胞其結(jié)構(gòu)、功能和其在漿膜修復(fù)中的作用(Mesothelialcells:Theirstructure,functionandroleinserosalrepair.)呼吸病學(xué)(Respirology)7(2002)171-191,其以引用的方式并入本文中)和前列腺素(托普利N.(Topley，N.)，皮特森M.M.(Petersen，M.M.)，麥肯茲R.(Mackenzie,R.)，紐貝文A.(Neubauer,A.)，斯坦連沃E.(Stylianou,E.),卡維爾V.(Kaever，V,)，戴維斯M.(Davies,M.)，科爾斯G.A.(Coles,G.A.)，瓊雷斯A.(Jorres，A.)和威廉姆斯J.D.(Williams,J.D.)人類腹膜間皮細(xì)胞前列腺素合成-通過(guò)腹膜巨噬細(xì)胞得到的細(xì)胞因子誘導(dǎo)環(huán)氧化酶信使Rna(HumanPeritonealMesothelialCellProstaglandinSynthesis-InductionOfCyclooxygenaseMessenger-RnaByPeritonealMacrophage-DerivedCytokines.)國(guó)際腎臟期干ij(KidneyInternational)46(1994)900-909，其以引用的方式并入本文中)，其加速腹膜發(fā)炎；IL-8(穆斯特爾S.E.(Mutsaers，S.E.)間皮細(xì)胞其結(jié)構(gòu)、功能和其在漿膜修復(fù)中的作用(Mesothelialcells:Theirstructure,functionandroleinserosalrepair.)呼吸病學(xué)(Respirology)7(2002)171-191，其以引用的方式并入本文中)、單核細(xì)胞趨化蛋白-l(MCP-1)(穆斯特爾S.E.(Mutsaers，S.E.)間皮細(xì)胞其結(jié)構(gòu)、功能和其在漿膜修復(fù)中的作用(Mesothelialcells:Theirstructure,functionandroleinserosalrepair.)呼吸病學(xué)(Respirology)7(2002)171-191,其以引用114的方式并入本文中)等，其誘導(dǎo)嗜中性粒細(xì)胞和單核細(xì)胞募集。因此，抑制TNF-ct的活性具有抑制腹膜粘連的潛在價(jià)值。IL-6是由包括巨噬細(xì)胞、成纖維細(xì)胞和間皮細(xì)胞的多種細(xì)胞產(chǎn)生。在間皮細(xì)胞中IL-1和TNF-a以劑量依賴性方式誘導(dǎo)其產(chǎn)生((TopIey)等人，人類腹膜間皮細(xì)胞合成白細(xì)胞介素-6-受IL-l-(3禾QTnf-a誘導(dǎo)(HumanPeritonealMesothelialCellsSynthesizeInterleukin-6-InductionByII-1-BetaAndTnf-Alpha,)國(guó)際腎臟期刊(KidneyInternational)43(1993)226-233，其以引用的方式并入本文中)。其具有多種涉及粘連形成的作用，包括刺激間皮細(xì)胞分泌PAI(沃維爾S.A.(Whawell,S.A.)等人，細(xì)胞因子誘導(dǎo)人類間皮細(xì)胞釋放纖溶酶原活化劑抑制劑-1(Cytokine-InducedReleaseOfPlasminogen-ActivatorInhibitor-1ByHumanMesothelialCells.)歐洲i手術(shù)雜志(EuropeanJournalOfSurgery)161(1995)315-318，其以引用的方式并入本文中)；抑制間皮細(xì)胞增殖(蘭弗朗科(Lanfrancone)等人，人類腹膜間皮細(xì)胞產(chǎn)生許多細(xì)胞因子(粒細(xì)胞集落刺激因子[Csf]、粒細(xì)胞-單核細(xì)胞-Csf、巨噬細(xì)胞-Csf、白細(xì)胞介素-l[Il-l]和11-6)并且經(jīng)II-1活化并刺激以生長(zhǎng)(HumanPeritonealMesothelialCellsProduceManyCytokines(GranulocyteColony-StimulatingFactor[Csf]，Granulocyte-Monocyte-Csf，Macrophage-Csf,Interleukin-1[II-1]，And11-6)AndAreActivatedAndStimulatedToGrowByll-l.血液學(xué)(Blood)80(1992)2835-2842，其以引用的方式并入本文中)；和誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)釋放，由此促進(jìn)血管生成(克漢(Cohen)等人，白細(xì)胞介素6誘導(dǎo)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子表達(dá)(Interleukin6inducestheexpressionofvascularendothelialgrowthfactor.)生物化學(xué)雜志(JournalofBiologicalChemistry)271(1996)736-741,其以引用的方式并入本文中)，如TNFa或TGF-(3。已證實(shí)腹膜中HA基基質(zhì)的生物相容性以及實(shí)際上其用于預(yù)防腹膜粘連的適應(yīng)性(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型手術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Bzomfl"n'ak)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。地塞米松確切地因其效力而被選擇用于與HA基質(zhì)連結(jié)，因此有可能利用最少可能地改變生物良性基質(zhì)-尤其希望避免使其具有疏水性來(lái)實(shí)現(xiàn)給定的炎性作用。媒劑的生物相容性極為重要一項(xiàng)研究表明，由疏水聚合物聚-DL-乙交酯-共聚-丙交酯(PLGA)構(gòu)成的具有低地塞米松負(fù)荷的微球體使粘連加劇，而具有較高地塞米松負(fù)荷的微球體減少粘連形成。這表明，聚合物微球體的引起粘連的作用(一種隨后經(jīng)證實(shí)的特性)抵消地塞米松用于預(yù)防粘連的作用(克漢(Kohane)等人，用于腹膜中藥物傳遞的生物可降解聚合物j散球體禾口纟內(nèi)米球體(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)(JournalofBiomedicalMaterialsResearchPartA)77A(2006)351-361，其以引用的方式并入本文中)。預(yù)聚合物HA-DEX可能會(huì)導(dǎo)致比本文所使用的其它前體大分子低的細(xì)胞活力，但重要的是，應(yīng)注意已知地塞米松的藥理學(xué)作用和分析的性質(zhì)，故這可反映抗增殖作用而非直接毒性作用。此外，可能未交聯(lián)HA-DEX的濃度將比混合后此處所測(cè)試的濃度低得多。事實(shí)上，所述結(jié)果表明HAX-DEX的生物相容性可比擬HAX的生物相容性，且引起甚至更輕微的發(fā)炎反應(yīng)。結(jié)論如抑制巨噬細(xì)胞TNF-a和IL-6產(chǎn)生所證實(shí)，透明質(zhì)酸與地塞米松的原位可交聯(lián)連結(jié)水凝膠具有適當(dāng)?shù)目刹倏v性且釋放生物學(xué)有效的地塞米松。在活體內(nèi)，HAX-DEX凝膠以比HAX凝膠低的發(fā)炎細(xì)胞浸潤(rùn)締合。5,#雄遂絲殺鍵微極凝遂,財(cái)微茨雄蕭遂引言本實(shí)例描述含有糖皮質(zhì)激素受體激動(dòng)劑布地奈德的原位交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(障壁裝置)。選擇布地奈德是因?yàn)橐阎湓谡尺B形成中的發(fā)炎作用。選擇透明質(zhì)酸是因?yàn)橐阎湓诟鼓ぶ械纳锵嗳菪浴Ｊ褂秒p管注射器施用包括兩種可交聯(lián)前體液體的系統(tǒng)，從而在不到10秒內(nèi)形成有彈力且持久的水凝膠。在兔腹膜粘連形成的重度重復(fù)側(cè)壁缺損-盲腸擦傷模型的二次損傷后，將此調(diào)配物或?qū)φ掌肥┯玫绞軗p部位。在所有經(jīng)生理鹽水治療的動(dòng)物中發(fā)展較大粘連。在用生理鹽水屮的布地奈德或無(wú)布地奈德的水凝膠治療的動(dòng)物中，粘連形成和面積略有減輕。在經(jīng)水凝膠中的布地奈德治療的動(dòng)物中，粘連的發(fā)生率和面積明顯減少。在大鼠中皮下注射時(shí)，展現(xiàn)水凝膠中的布地奈德相比單獨(dú)水凝膠發(fā)炎減少。總的來(lái)說(shuō)，透明質(zhì)酸水凝膠中的布地奈德對(duì)于預(yù)防重度重復(fù)損傷模型中的粘連合宜且極為有效。其為一種術(shù)后粘連預(yù)防的潛在有前景的系統(tǒng)；因此，本發(fā)明涵蓋認(rèn)可障壁裝置的效用可由同時(shí)發(fā)生的藥物傳遞極大增強(qiáng)。腹膜粘連為可在手術(shù)創(chuàng)傷或感染后形成的腹部與盆腔中結(jié)構(gòu)之間的持續(xù)組織連接。術(shù)后粘連的發(fā)生率高達(dá)80%且通常導(dǎo)致嚴(yán)重臨床結(jié)果，諸如疼痛、不孕或腸梗阻(迪澤佳GS(diZeregaGS)腹膜、腹膜愈合和粘連形成(Peritoneum,peritonealhealing,andadhesionformation.),迪澤佳GS(diZeregaGS)編，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)紐約(NewYork):施普林格(Springer),2000.第3-37頁(yè)；其以引用的方式并入本文中)。在預(yù)防粘連的嘗試中，多位研究人員已施用干預(yù)粘連形成中的關(guān)鍵事件的藥劑(迪澤佳GS(diZeregaGS)腹膜、腹膜愈合和粘連形成(Peritoneum,peritonealhealing,andadhesionformation.),迪澤佳GS(diZeregaGS)編，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery.)紐約(NewYork):施普林格(Springer),2000.第3-37頁(yè)；其以引用的方式并入本文中)。粘連形成的發(fā)病機(jī)理的炎性組分己成為使用多種甾體消炎藥的藥物療法的常用標(biāo)靶(苦庫(kù)克孜坎T(KucukozkanT)，埃索以B(ErsoyB)，尤格D(UygurD)，甘多度C.(GundogduC)盆腔手術(shù)后通過(guò)色甘酸鈉、地塞米松、生理鹽水和抑肽酶預(yù)防粘連(Preventionofadhesionsbysodiumchromoglycate，dexamethasone,salineandaprotininafterpelvicsurgery.)ANZ手術(shù)雜志(ANZJSurg)2004;74(12):1111-U15;霍克爾M.(Hockel,M.)，歐特S.(Ott,S.)，希曼U.(Si函nn，U.)，柯斯?fàn)朤.(Kissel，T.)利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)A謹(jǐn)lesChirurgiaeEtGynaecologiae1987;76:306-313;布肯麥爾C.C.(Buckenmaier,C.C.)，普斯特雷A.E.(PusateriA.E.)，哈雷斯R.A.(Harris,R,A.)，赫茲S.P.(Hetz，S.P.)使用目標(biāo)大鼠模型比較抗粘連治療(Comparisonofantiadhesivetreatmentsusinganobjectiveratmodel.)美國(guó)夕卜禾斗醫(yī)生雜志(AmericanSurgeon)1999;65:274-282;馬瑞爾J(MaurerJ)，邦納溫特L.(BonaventuraL.)孕酮水溶液于手術(shù)后粘連形成的作用(Theeffectofaqueousprogesteroneonoperativeadhesionformation.)生育與不育(FertilSteril)1983;39(4):485-489;伽贊尼伽A(GazzanigaA)，詹姆斯J(JamesJ)，肖伯J(ShobeJ)，歐普海姆E.(OppenheimE.)大鼠中腹膜粘連的預(yù)防。地塞米松、甲基潑尼松龍、異丙嗪和人類纖溶酶的作用(Preventionofperitonealadhesionsintherat.Theeffectsofdexamethasone,methylprednisolone,promethazine,andhumanfibrinolysin.)外科學(xué)檔案(ArchSurg)1975;110(4):429-432;和詹森R.(JansenR.)腹膜內(nèi)附件改進(jìn)年輕女性盆月空手術(shù)的失敗(Failureofintraperitonealadjunctstoimprovetheoutcomeofpelvicoperationsinyoungwomen.)美國(guó)產(chǎn)科學(xué)與婦科醫(yī)學(xué)雜志(AmJObstetGynecol)1985;153(4):363-371，所有文獻(xiàn)都是以引用的方式并入本文中)。然而，這些藥劑預(yù)防粘連的效用在動(dòng)物模型(伽贊尼伽A(GazzanigaA)，詹姆斯J(JamesJ)'肖伯J(ShobeJ),歐普海姆E.(OppenheimE.)大鼠中腹膜粘連的預(yù)防。地塞米松、甲基潑尼松龍、異丙嗪和人類纖溶酶的作用(Preventionofperitonealadhesionsintherat.Theeffectsofdexamethasone,methylprednisolone,promethazine,andhumanfibrinolysin.)夕卜禾斗學(xué)檔案(ArchSurg)1975;110(4):429-432，其以引用的方式并入本文中)和臨床試驗(yàn)(詹森R.(JansenR.)腹膜內(nèi)附件改進(jìn)年輕女性盆腔手術(shù)的失敗(Failureofintraperitonealadjunctstoimprovetheoutcomeofpelvicoperationsinyoungwomen.)美國(guó)產(chǎn)科學(xué)與婦禾斗醫(yī)學(xué)雜志(AmJObstetGynecol)1985;153(4):363-371，其以引用的方式并入本文中)中并不一致，尤其在預(yù)防粘連復(fù)發(fā)時(shí)更是如此(拉森B.(LarssonB.)盆腔粘連的手術(shù)后形成和再形成的予頁(yè)防(Preventionofpostoperativeformationandreformationofpelvicadhesions.)特爾特納KH(TreutnerKH)，斯庫(kù)姆普里科V(SchumpelickV)編輯腹膜粘連(PeritonealAdhesions.)柏林斯普林格-伏拉格特羅出版社(Berlin:Springer-VerlagTelos)，1997.第331-334頁(yè)，其以引用的方式并入本文中)。藥物從腹膜中快速清除會(huì)引起腹膜內(nèi)施用藥物的有限效用。使藥物保持較高局部濃度的適當(dāng)傳遞系統(tǒng)可能使其生物作用最大化。在本實(shí)例中，已選擇原位可交聯(lián)透明質(zhì)素水凝膠(HAX)作為消炎化合物的藥物傳遞系統(tǒng)。在先前實(shí)例中，己證實(shí)HAX對(duì)于預(yù)防兔側(cè)壁缺損-盲腸擦傷模型中的腹膜粘連具有優(yōu)良效用，而此與納米顆粒存在無(wú)關(guān)(伊歐Y(YeoY)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(hs/似cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;和伊歐Y.(Yeo，Y.)，依托T.(Ito,T.)，博拉斯E.(Bellas,E.)，海利CB(Highley，CB)'瑪瑞尼R.(Marini,R.),克漢DS(Kohane,DS)，用于預(yù)防手術(shù)后腹部粘連的含有聚合納米顆粒的原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelscontainingpolymericnanoparticlesforpreventingpost-operativeabdominaladhesions.)夕卜禾斗學(xué)纟己事(AnnSurg)2006報(bào)導(dǎo)中，兩篇文獻(xiàn)都是以引用的方式并入本文中)。布地奈德具有可比擬地塞米松的有效的糖皮質(zhì)激素活性(醫(yī)師桌上手冊(cè)(Physicians'DeskReference):湯姆遜PDR(ThomsonPDR)，2006,其以引用的方式并入本文中)且在全身吸收后迅速轉(zhuǎn)化成無(wú)活性代謝物(醫(yī)師桌上手冊(cè)(Physicians'DeskReference):湯姆遜PDR(ThomsonPDR)，2006，其以引用的方式并入本文中)。在本實(shí)例中使用嚴(yán)格的重復(fù)損傷動(dòng)物模型證實(shí)布地奈德的抗粘連活性。使用生物可相容HAX可顯著改進(jìn)其抗粘連活性，從而完全預(yù)防大部分所測(cè)試的動(dòng)物中的粘連。材料與方法嚴(yán)泣#文凝ffi4好主激飾備遵循先前所報(bào)導(dǎo)的方法合成原位可交聯(lián)HA衍生物并加以分析(伊歐Y.(Yeo，Y.);海利CB(Highley，CB);博拉斯E.(Bellas,E.);依托T.(Ito,T.);瑪瑞尼R.(Marini,R.);朗格R.(Langer,R.)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/wcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;布爾皮特P.(Bulpkt，P.);艾斯奇曼D.(Aeschlimann，D.)，化學(xué)修飾透明質(zhì)酸的新策略官能化衍生物的制備和118其用于形成新穎生物可相容水凝膠的用途(Newstrategyforchemicalmodificationofhyaluronicacid:Preparationoffunctionalizedderivativesandtheiruseintheformationofnovelbiocompatiblehydrogels.)生物醫(yī)學(xué)*才料石if究雜志(JBiomedMaterRes)1999;47:152-169;和賈X.Q.(Jia，X.Q.);克魯姆博G.(Colombo,G.);帕德拉R.(Padera，R.);朗格R.(Langer，R.):克漢D.S.(Kohane,D.S.)，通過(guò)原位交聯(lián)透明質(zhì)酸來(lái)延長(zhǎng)坐骨神經(jīng)阻斷(Prolongationofsciaticnerveblockadebyj,'fwcross-linkedhyaluronicacid.)生物材料(Biomaterials)2004;25(19):4797-4804,所有所述文獻(xiàn)各自以引用的方式并入本文中)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，通過(guò)將己二酸二酰肼與HA主鏈中的羧基連結(jié)來(lái)制備HA-己二酸二酰肼(HA-ADH)，并且通過(guò)使HA與高碘酸鈉反應(yīng)來(lái)制備HA-醛(HA-CHO)。布邀^,主潘益^r^7布邀襲,/MX必粼備首先將布地奈德溶解于乙醇中以制成8.2mg/ml的儲(chǔ)備溶液。通過(guò)將0.16ml儲(chǔ)備溶液添加到10ml生理鹽水中來(lái)制備布地奈德-生理鹽水。對(duì)于布地奈德-HAX，將0.08ml布地奈德儲(chǔ)備溶液分別添加到5mlHA-ADH(20mg/ml)禾B5mlHA-CHO(20mg/ml)中。通過(guò)使用百特雙管注射器經(jīng)由同一個(gè)出口洗脫兩種前體溶液來(lái)制備布地奈德-HAX凝膠。布地奈德-生理鹽水和布地奈德-HAX含有0.13mg/ml布地奈德。殺邀襲薪-/^義游表,如先前所述，在室溫下測(cè)量布地奈德-HAX的原位膠凝時(shí)間(伊歐(Yeo)等人原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物禾才茅斗(fi/0maMn'ak)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，在生理鹽水中制備20mg/mlHA-ADH和HA-CHO溶液。如上文所述，將布地奈德添加到各溶液中以達(dá)0.13mg/ml。在連續(xù)攪拌下，將100微升HA-ADH溶液與100微升HA-CHO溶液混合。將溶液形成與所述盤底部分離的固體小球時(shí)的時(shí)間視為膠凝時(shí)間。通過(guò)掃描電鏡分析(SEM)檢査凍干布地奈德-HAX內(nèi)部結(jié)構(gòu)的形態(tài)。將布地奈德-HAX凝膠凍干且在液氮中冷卻后破碎。將樣本用鈀和金(150埃厚)濺涂并且使用掃描電鏡(JEOLJSM6320，美國(guó)JEOL有限公司，馬薩諸塞州皮伯迪(Peabody,MA))觀察。布邀紊葸于生潘—盆水^游溶"^^游激量如所述測(cè)定布地奈德于生理鹽水中的最大溶解度(金納諾AR(GennaroAR)編輯，雷明頓藥學(xué)理論和實(shí)踐(Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy.)第20版，賓夕法尼亞州費(fèi)城(Philadelphia,PA):利平科特.威廉斯&威爾金斯工作室(LippincottWilliams&Wilkins)，2000,其以引用的方式并入本文中)。首先，將增加量的布地奈德與生理鹽水混合以在所述系統(tǒng)中提供25mg/ml到0.002mg/ml的布地奈德濃度。在37'C下將混合物連續(xù)攪拌24小時(shí)，且隨后以12,000rpm離心5分鐘以使溶液相與固體相分離。通過(guò)高效液相色譜(HPLC)測(cè)量溶液相中布地奈德的濃度。通過(guò)外推直線區(qū)段(其斜率為0)到y(tǒng)軸測(cè)定布地奈德于生理鹽水中的飽和溶解度。在獨(dú)立實(shí)驗(yàn)中，如上文所述制備布地奈德-生理鹽水0.13mg/ml，將其分成1ml的等分試樣，且在連續(xù)攪拌下于37'C下培育。在定時(shí)間隔時(shí)，取得布地奈德-生理鹽水等分試樣并以12,000rpm離心5分鐘以分離出0.8ml上清液以供HPLC分析。將潛在含有沉淀布地奈德的剩余0.2ml溶解于0.8ml乙腈中并利用HPLC加以分析。話銀//布邀^/#釋威動(dòng)力學(xué)在夾于兩個(gè)玻璃載片之間的橡膠模具中制備圓盤狀布地奈德-HAX。所制備的水凝膠的直徑和厚度分別為8mm和3.5mm(約150pl)。將布地奈德-HAX凝膠稱重且放入艾本多夫管(eppendorftube)中，向其中添加含有10U/ml透明質(zhì)酸酶的1ml磷酸鹽緩沖生理鹽水(PBS)，并在連續(xù)攪動(dòng)下在37'C下培育。在簡(jiǎn)短旋轉(zhuǎn)減弱后對(duì)釋放培養(yǎng)基0.5ml取樣，且替換0.5ml新鮮培養(yǎng)基。將釋放樣本冷凍直到HPLC分析。布邀殺薪游///^(:分界色譜系統(tǒng)是由裝備有自動(dòng)進(jìn)樣器的HPLC溶劑傳遞系統(tǒng)和UV檢測(cè)器(IIOO系列，安捷倫技術(shù)公司(AgilentTechnologies),加州帕羅奧多(PaloAlto,CA))組成。分析柱為亞特蘭蒂斯dC18(dC18;4.6x250mm;粒徑5pm)。流動(dòng)相為30:70的0,1%乙酸與乙腈的混合物，且流速為lml/min。將5樣本注射到預(yù)先平衡的柱上，隨后用流動(dòng)相洗滌10min。將UV檢測(cè)器設(shè)置在248nm。通過(guò)將色譜圖中的峰面積與布地奈德標(biāo)準(zhǔn)品的濃度相關(guān)來(lái)得到校準(zhǔn)曲線。停留時(shí)間6.1min。檢出限0.2Hg/ml。游話沐/l7滋—?dú)v依照麻省理工學(xué)院委員會(huì)(MassachusettsInstituteofTechnologyCommittee)關(guān)于動(dòng)物護(hù)理所批準(zhǔn)的方案，遵照有關(guān)實(shí)驗(yàn)室動(dòng)物的護(hù)理和使用的NIH指導(dǎo)(Nffl公告弁85-23，1985年修訂)護(hù)理動(dòng)物。扁教,/MX艦m利用氧氣中的2-3%異氟烷對(duì)雄性斯普拉格-道利大鼠(Sprague-Dawleyrat)(320g-420g)實(shí)施麻醉。由雙管注射器(一個(gè)注射器中有0.5mlHA-ADH，另一注射器中有0.5mlHA-CHO)注射1ml布地奈德-HAX或HAX。如上文所述制備含有0.13mg/ml布地奈德的布地奈德-HAX。因此，給與大鼠的布地奈德的總量為0.3-0.4mg/kg。通過(guò)添加乙醇代替布地奈德儲(chǔ)備溶液來(lái)制備HAX(陰性對(duì)照)。將布地奈德-HAX或HAX經(jīng)皮下注射到背部中線中。注射后2天(n=5)或5天(n=4)，處死動(dòng)物以檢査組織反應(yīng)。使用標(biāo)準(zhǔn)技術(shù)處理組織以供組織學(xué)分析。Jf過(guò)布邀襲蘑-a4X厥銀履虜教遂如先前研究中[tPA]所述經(jīng)由重復(fù)剖腹術(shù)誘發(fā)雌性白化兔(西班牙野兔(Oryctolaguscuniculus)，新西蘭白(NewZealandWhite))(3±0.5kg)中的腹膜粘連。簡(jiǎn)單來(lái)說(shuō)，執(zhí)行盲腸擦傷和腹壁切開(kāi)以誘發(fā)新生粘連(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型手術(shù)后腹部粘連(/""'似cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel,)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。1周后執(zhí)行第二次剖腹術(shù)以切割粘連并在與第一次剖腹術(shù)中損傷相同的位置引入其它損傷。去除損傷處的過(guò)量血液，且隨后使用百特雙管注射器將10ml布地奈德-生理鹽水或布地奈德-HAX施用于再擦傷區(qū)域(n=6)。兩種調(diào)配物都含有1.3mg布地奈德(0.44mg/kg)。手術(shù)者關(guān)于治療的特性未知。如別處所述采用手術(shù)后護(hù)理(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/""'仏cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料()2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。第2次剖腹術(shù)后通過(guò)靜脈內(nèi)注射戊巴比妥鈉處死動(dòng)物。使用所報(bào)導(dǎo)的方法的修改方法對(duì)粘連評(píng)分(伯恩斯JW(BurnsJW)等人，通過(guò)用透明質(zhì)酸溶液預(yù)涂組織預(yù)防組織損傷和術(shù)后粘連(Preventionoftissueinjuryandpostsurgicaladhesionsbyprecoatingtissueswithhyaluronicacidsolutions.)手術(shù)研究雜志(JSurgRes)1995;59:644-652，其以引用的方式并入本文中)0分=無(wú)粘連；1分=利用重力將會(huì)分離的組織粘連；2分=可通過(guò)鈍器解剖分離的組織粘連；3分=需要利器解剖的粘連。如果存在多種具有不同得分的粘連，選擇較高的得分作為代表性得分。測(cè)量2分或3分粘連的面積以供粘連的定量評(píng)估。評(píng)估人員關(guān)于各動(dòng)物所接收的治療未知。將由尸檢回收的組織固定于10%福爾馬林中，包埋于石蠟中，切片并用蘇木素和伊紅染色以供組織學(xué)檢查。統(tǒng)^學(xué)分折將來(lái)自活體內(nèi)實(shí)驗(yàn)的數(shù)據(jù)以平均值與第25個(gè)百分點(diǎn)和第75個(gè)百分點(diǎn)表示，這是因?yàn)槠洳⒉豢偸亲裱龖B(tài)分布，且使用SPSS軟件(伊利諾州芝加哥市(Chicago,IL))在克魯斯凱-沃利斯檢驗(yàn)后使用曼-惠特尼U檢驗(yàn)或利用費(fèi)雪準(zhǔn)確檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)推斷。認(rèn)為在雙尾檢驗(yàn)上小于0.05的p值為統(tǒng)計(jì)學(xué)顯著。結(jié)果布見(jiàn)德-組凝層雄在連續(xù)攪拌下混合后，兩種HA衍生物(20mg/ml)(二者都含有0.13mg/ml布地奈德)的溶液在4,l士1.7sec內(nèi)形成布地奈德-HAX凝膠，這與無(wú)布地奈德時(shí)HAX凝膠的膠凝時(shí)間類似(3.9土l.sec，雙尾t檢驗(yàn)時(shí)p-0.72)。在SEM下(圖40),凍干布地奈德-HAX凝膠展現(xiàn)多孔網(wǎng)絡(luò)(交聯(lián)水凝膠的典型)(賈X(JiaX)，波迪克JA(BurdickJA)，克波勒J(rèn)(KoblerJ),克里夫頓RJ(CliftonRJ),羅索沃斯基JJ(RosowskiJJ),載特斯SM(ZeitelsSM)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸基水凝膠的合成和表征以及用于聲帶再生的潛在應(yīng)用(SynthesisandCharacterizationofCross-LinkableHyaluronicAcid-BasedHydrogelswithPotentialApplicationforVocalFoldRegeneration.)高分子(Mac讓olecules)2004;37(9):3239-3248;和伊歐Y(YeoY)，博迪克JA(BurdickJA)，海利CB(HighleyCB)，瑪瑞尼R(MariniR)，朗格R(LangerR)，克漢DS.(KohaneDS.)殼聚糖和UV可交聯(lián)殼聚糖的腹膜應(yīng)用(PeritonealapplicationofchkosanandUV-cross-linkablechitosan.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2006;78A(4):668-675;兩篇文獻(xiàn)都是以引用的方式并入本文中)。漆巡襲翁f主湮益水^游溶游度根據(jù)美國(guó)藥典(UnitedStatesPharmacopoeia)分類，布地奈德"實(shí)際上不可溶"于水中(溶解度<0.1mg/ml)(美國(guó)藥典，洛克威爾MD(Rockville，MD):美國(guó)藥典委員會(huì)有限公司(UnitedStatesPharmacopeialConvention,Inc.))。為評(píng)估本文所研究的調(diào)配物中布地奈德的可溶部分，測(cè)量其在37'C下于生理鹽水中的溶解度。使不同量的布地奈德粉末在37t:下溶解整夜。與不溶解的固體相分離的溶液中布地奈德的濃度在0.027mg/ml下達(dá)到穩(wěn)定，此定義為在37'C下布地奈德于生理鹽水中的飽和溶解度(圖41A)。選擇0.44mg/kg作為布地奈德劑量以供根據(jù)先前使用地塞米松預(yù)防粘連的實(shí)驗(yàn)的活體內(nèi)研究(苦庫(kù)克孜坎T(KucukozkanT)，埃索以B(ErsoyB)，尤格D(UygurD)，甘多度C.(GundogduC.)盆腔手術(shù)后通過(guò)色甘酸鈉、地塞米松、生理鹽水和抑肽酶預(yù)防禾占連(Preventionofadhesionsbysodiumchromoglycate,dexamethasone，salineandaprotininafterpelvicsurgery.)ANZ手術(shù)雜志(ANZJSurg)2004;74(12):1111-1115;霍克爾M.(Hockel,M.)，歐特S.(Ott,S.)，希曼U.(Siemann,U.)，柯斯?fàn)朤.(Kissel,T.)利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)AnnalesChirurgiaeEtGynaecologiae1987;76:306-313;和布肯麥爾C.C.(Buckenmaier,C.C.),普斯特雷AE(PusateriAE)，哈雷斯RA(Harris,RA),赫茲SP(Hetz，SP)使用目標(biāo)大鼠模型比較抗粘連治療(Comparisonofantiadhesivetreatmentsusinganobjectiveratmodel.)美國(guó)夕卜禾斗醫(yī)生雜志(AmericanSurgeon)1999;65:274-282,所有所述文獻(xiàn)都是以引用的方式并入本文中)。在這些研究中，地塞米松的劑量在0.33到4mg/kg的范圍內(nèi)。已知布地奈德的糖皮質(zhì)激素效力與地塞米松相當(dāng)(全身作用比可的松強(qiáng)40倍)(醫(yī)師桌上手冊(cè)(Physicians'deskreference):湯姆遜PDR(ThomsonPDR)，2006，其以引用的方式并入本文中)，故本文所使用的布地奈德的劑量與其它研究中所使用的地塞米松劑量范圍的下限相當(dāng)。為將lOml布地奈德-生理鹽水或布地奈德-HAX的劑量提供給3kg兔，故制備出含有0.13mg/ml布地奈德的布地奈德-生理鹽水和布地奈德-HAX。為測(cè)定在37'C下布地奈德的溶液濃度的改變，將布地奈德-生理鹽水在37'C下培育，且隨時(shí)間流逝分析溶液相。制備后不久，布地奈德-生理鹽水即在溶液相中含有0.13±0.004mg/ml布地奈德(=98.5±3.5%系統(tǒng)中的總布地奈德)。在37。C下培育時(shí)，布地奈德的濃度在2小時(shí)內(nèi)迅速降低，在12小時(shí)內(nèi)達(dá)到0.034±0.001mg/ml(=25.2±0.7%系統(tǒng)中的總布地奈德)(圖41B)。在剩余0.2m中回收沉淀形式的剩余物(圖41B)。菸沐//布邀襲艚釋,動(dòng)力學(xué)在含有10單位/毫升透明質(zhì)酸酶(其提供與先前研究中的受損腹膜中的凝膠降解速率相當(dāng)?shù)幕铙w外凝膠降解速率)的PBS中檢查HAX的布地奈德釋放動(dòng)力學(xué)(伊歐Y.(Yeo，Y.)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型屮手術(shù)后腹部粘連("w'mcross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705;和伊歐Y.(Yeo,Y.);依托T.(Ito,T.);博拉斯E.(Bellas,E.);海利CB(Highley,CB);瑪瑞尼R.(Marini,R.);克漢DS(Kohane，DS)，用于預(yù)防手術(shù)后腹部粘連的含有聚合納米顆粒的原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠(/cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)外科學(xué)檔案(AnnSurg)2006報(bào)導(dǎo)中，所述兩篇文獻(xiàn)都是以引用的方式并入本文中)。為使釋放動(dòng)力學(xué)反映已溶解的布地奈德的釋放，并入藥物的量低于其飽和溶解度(0.027mg/mD。62.6±6.8%的預(yù)期布地奈德在24小時(shí)內(nèi)(圖42)從HAX凝膠釋放。甚至在凝膠完全降解后也無(wú)顯著的進(jìn)一步釋放?？赏ㄟ^(guò)取樣期間降解HAX凝膠(其為半固體)的損失來(lái)解釋負(fù)荷量與總釋放量之間的差異。凝膠本身在第二天內(nèi)降解，因此只有少量松散凝膠碎片到第8天時(shí)仍能觀察到。疆布見(jiàn)射泉盤/微顏雄為評(píng)估布地奈德-生理鹽水與布地奈德-HAX的抗粘連功效，使用重復(fù)損傷模型。由于誘發(fā)比常規(guī)側(cè)壁缺損-盲腸擦傷模型更強(qiáng)的粘附的模型將便利展現(xiàn)與已證實(shí)極為有效的HAX本身相比改進(jìn)的抗粘連功效，故使用所述模型是相當(dāng)引人注目的(伊歐Y.(Yeo，Y.)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型中手術(shù)后腹部粘連(/"jtocross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(Biomaterials)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。如上文所述，將兔盲腸擦傷并產(chǎn)生側(cè)壁缺損。1周后，100%動(dòng)物發(fā)展2分和/或3分粘連。將這些粘連溶解且將盲腸和側(cè)壁損傷部位再擦傷。將布地奈德-生理鹽水或布地奈德-HAX施用于再受損區(qū)域上。歷史對(duì)照是由來(lái)自同時(shí)進(jìn)行的實(shí)驗(yàn)的用單獨(dú)生理鹽水(n=6)或單獨(dú)HAX(n=6)治療的動(dòng)物提供。l周后，對(duì)動(dòng)物實(shí)施安樂(lè)死以供尸檢。兩組在存活期間經(jīng)歷類似的重量損失(圖43A)(p=0.378);二者與用單獨(dú)生理鹽水或HAX治療的歷史對(duì)照組的情形相當(dāng)(各自ii=6，p=0.272，克魯斯凱-沃利斯檢驗(yàn))。在83%用布地奈德-生理鹽水治療的動(dòng)物中發(fā)展3分粘連(圖43B)。盡管粘連得分與生理鹽水治療的對(duì)照組無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，但粘連面積大致減少3倍(p=0.01)。HAX中的布地奈德明顯降低粘連得分和面積，甚至優(yōu)于布地奈德治療的動(dòng)物的情形。67%所測(cè)試動(dòng)物中的粘連完全得到預(yù)防。在剩余動(dòng)物(n=2)中，粘連面積為1.6和4.6cm2,其明顯小于生理鹽水治療的對(duì)照[tPA](p=0.003)、布地奈德-生理鹽水(p=0.046)和HAX[tPA](p=0.022)。組織學(xué)檢査時(shí)，從粘連取得的樣本為連接盲腸平滑肌與腹壁骨骼肌層的纖維狀結(jié)締組織。在布地奈德-生理鹽水和布地奈德-HAX組中，觀察到與未受影響的腹膜表面相當(dāng)?shù)挠厦つc和腹壁的表面再生上皮(圖44)。兩組之間下層肉芽組織的厚度和細(xì)胞組成不存在明顯差異。^7"恭邀襲翁-a4X游資織友應(yīng)為驗(yàn)證布地奈德-HAX的消炎作用，對(duì)雄性斯普拉格-道利大鼠(Spmgue-Dawleyrat)皮下注射存在或不存在布地奈德的HAX，從而形成離散腫脹。注射后2天和5天'由未知的解剖者采集凝膠。大體解剖后，HAX凝膠呈現(xiàn)相當(dāng)大程度的發(fā)炎(圖45A),以及遮蔽植入物的高血管化的半透明或不透明較厚組織層，其無(wú)法與下層皮膚解剖分離(圖45B)。相比之下，布地奈德凝膠展現(xiàn)少得多的血管化和發(fā)炎，因此可看出清晰的凝膠(圖45C)且在大部分情況下可顯而易見(jiàn)與周圍組織解剖分離的凝膠(圖45D)。組織學(xué)評(píng)定揭示注射后2天兩種水凝膠之間的對(duì)比，因此其易于為未知觀察者區(qū)別。在不存在布地奈德的樣本中，由水凝膠占據(jù)的空間被發(fā)炎細(xì)胞、尤其嗜中性粒細(xì)胞湮沒(méi)(圖45E)。在存在布地奈德的樣本中，發(fā)炎反應(yīng)極大減少，從而使水凝劑在很大程度上保持完整(圖45F)。第5天時(shí)，已不可利用大體解剖或組織學(xué)檢查區(qū)別各組。討論在此處證實(shí)可通過(guò)使用可在受損表面處保持較高局部藥物濃度的藥物傳遞系統(tǒng)來(lái)顯著改進(jìn)布地奈德的抗粘連功效。布地奈德為實(shí)際上不溶于水的化合物，且在37'C下于生理鹽水中的飽和溶解度為0.027mg/ml。超出所述溶解度界限的布地奈德-生理鹽水的部分經(jīng)2小時(shí)迅速沉淀(圖41B)。因此，施用于腹膜的布地奈德-生理鹽水實(shí)際上為飽和溶液與布地奈德沉淀懸浮液的混合物。如果沉淀保留在腹膜中，那么所述沉淀本身可充當(dāng)連續(xù)藥物釋放的儲(chǔ)集器。如與生理鹽水治療的對(duì)照相比，布地奈德-生理鹽水使粘連面積明顯減少，但3分粘連的頻率與對(duì)照并無(wú)不同。藥物效用受到相對(duì)低劑量的限制和/或布地奈德-生理鹽水迅速?gòu)母鼓ぶ谐ナ强赡艿?。然而，?dāng)與HAX組合時(shí)，相同劑量卻高度有效。在大鼠模型中，使用PLGA微米顆粒進(jìn)行的地塞米松的局部持續(xù)傳遞對(duì)于預(yù)防粘連比地塞米松晶體懸浮液有效(霍克爾M.(Hockel，M.)，歐特S.(Ott,S.),希曼U.(Siemann,U.)，柯斯?fàn)朤.(Kissel，T.)利用通過(guò)新穎治療系統(tǒng)傳遞的持續(xù)腹膜內(nèi)地塞米松預(yù)防大鼠腹膜粘連(PreventionOfPeritonealAdhesionsInTheRatWithSustainedIntraperitonealDexamethasoneDeliveredByANovelTherapeuticSystem.)AnnalesChirurgiaeEtGynaecologiae1987;76:306-313，其以引用的方式并入本文中)，但只有3使用大量提供較高劑量地塞米松(4mg/kg)的微米顆粒時(shí)才出現(xiàn)此情形。少量微米顆粒使得粘連加劇。先前已證實(shí)PLGA微米顆粒木身誘發(fā)腹膜粘連(克漢DS(KohaneDS)，提斯JY(TseJY)，伊歐Y(YeoY)，帕德拉R(PaderaR)，舒伯納M(ShubinaM)，朗格R.(LangerR.)用于腹膜中藥物傳遞的生物可降解聚合微球體和納米球體(Biodegradablepolymericmicrospheresandnanospheresfordrugdeliveryintheperitoneum.)生物醫(yī)學(xué)材料研究雜志(JBiomedMaterRes)2006;77A(2):351-361，其以引用的方式并入本文中)。這些報(bào)導(dǎo)的一種解釋為媒劑的促粘連作用會(huì)抵消地塞米松的粘連預(yù)防活性。本文所述系統(tǒng)的效用可部分歸因于媒劑本身不引起粘連的事實(shí)且事實(shí)上其具有內(nèi)在抗粘連活性(伊歐(Yeo)等人，原位可交聯(lián)透明質(zhì)酸水凝膠預(yù)防兔模型手術(shù)后腹部粘連(/"cross-linkablehyaluronicacidhydrogelspreventpost-operativeabdominaladhesionsinarabbitmodel.)生物材料(別wna"r!'。k)2006;27:4698-4705，其以引用的方式并入本文中)。皮下實(shí)驗(yàn)的有益之處在于，布地奈德凝膠的消炎作用可能持續(xù)至少2天但少于5天，這與活體外實(shí)驗(yàn)中布地奈德釋放的持續(xù)時(shí)間大致相同。因此，此相對(duì)簡(jiǎn)短的藥物釋放期似乎可解釋存在與不存在布地奈德的水凝膠之間的結(jié)果差異。這等同于以下觀點(diǎn)粘連形成的關(guān)鍵事件通常是在前2-3天中發(fā)生，并且表明粘連預(yù)防所需的藥物釋放的持續(xù)時(shí)間可能極短。盡管粘連預(yù)防的許多方法已在臨床實(shí)驗(yàn)中失敗，但在實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中存在引人注目的功效數(shù)據(jù)。一個(gè)起作用的原因可能為其是在相對(duì)容許的動(dòng)物模型中評(píng)估，其中粘連預(yù)防相對(duì)容易(維斯曼DM(WisemanDM.)動(dòng)物粘連模型設(shè)計(jì)、變量和相關(guān)性(Animaladhesionmodels:design,variables,andrelevance.),迪澤佳GS(diZeregaGS)編輯，腹膜手術(shù)(PeritonealSurgery)紐約斯普林格(NewYork:Springer),2000.第459-476頁(yè)，其以引用的方式并入本文中)。這是使用更具挑戰(zhàn)性的重復(fù)損傷模型的一個(gè)原因。布地奈德-HAX易于制備和操縱，在存在血液和腹膜液的情況下有效并且能經(jīng)由剖腹術(shù)或內(nèi)窺鏡施用。等效物和范疇所屬領(lǐng)域技術(shù)人員將使用僅一種常規(guī)實(shí)驗(yàn)認(rèn)識(shí)到或能夠確定本文所述的本發(fā)明的特定實(shí)施例的許多等效物。本發(fā)明的范疇不打算限于上述實(shí)施方式，而是如隨附權(quán)利要求書所述。在權(quán)利要求書中，除非另作相反說(shuō)明或另外由上下文顯而易見(jiàn)，否則諸如"一"和"所述"的冠詞可意謂多種。除非另作相反說(shuō)明或另外由上下文顯而易見(jiàn)，否則認(rèn)為在一組一個(gè)或多個(gè)成員之間包括"或"的權(quán)利要求書或?qū)嵤┓绞綕M足一個(gè)、多個(gè)或所有所述組的成員存在于、用于給定產(chǎn)物或方法中或以其它方式與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)。本發(fā)明包括嚴(yán)格地所述組的一個(gè)成員存在于、用于給定產(chǎn)物或方法中或者以其它方式與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)的實(shí)施例。本發(fā)明還包括所述組的多個(gè)或所有成員都存在于、用于給定產(chǎn)物或方法中或者以其它方式與給定產(chǎn)物或方法相關(guān)的實(shí)施例。此外，應(yīng)了解本發(fā)明涵蓋將來(lái)自一個(gè)或多個(gè)權(quán)利要求或來(lái)自實(shí)施方式相關(guān)部分的一個(gè)或多個(gè)限定、要素、條款、說(shuō)明性術(shù)語(yǔ)等引入另一權(quán)利要求中的所有變更、組合和改變。舉例來(lái)說(shuō)，可對(duì)視另一權(quán)利要求而定的任何權(quán)利要求加以修改以使其包括一個(gè)或多個(gè)見(jiàn)于視同一基礎(chǔ)權(quán)利要求而定的任何其它權(quán)利要求中的限定。此外，當(dāng)權(quán)利要求敘述一種組合物時(shí)，除非另作指示或者除非所屬領(lǐng)域技術(shù)人員顯而易見(jiàn)將引起抵觸或矛盾，否則應(yīng)了解包括出于本文中所揭示的任何目的使用所述組合物的方法，并且包括根據(jù)本文所揭示的制備方法或所屬領(lǐng)域中已知的其它方法中的任一方法制備組合物的方法。舉例來(lái)說(shuō)，應(yīng)了解本發(fā)明的任何組合物都可用于抑制任何位置處和/或由本文所討論或所屬領(lǐng)域中已知的任何原因引起的粘連形成、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)。還應(yīng)了解，根據(jù)本文所揭示的制備組合物的方法制備的任何組合物都可用于抑制任何位置處和/或由本文所討論或所屬領(lǐng)域中已知的任何原因引起的粘連形成、進(jìn)展和/或復(fù)發(fā)。此外，本發(fā)明涵蓋根據(jù)本文所揭示的制備組合物的任何方法制備的組合物。在要素是以例如馬庫(kù)西群組(Markushgroup)形式以列表提供的情況下，應(yīng)了解也揭示所述要素的各個(gè)亞組并且可從所述群組中去除任何要素。還應(yīng)注意，術(shù)語(yǔ)"包含"打算為開(kāi)放式的并且容許包涵其它要素或步驟。應(yīng)了解，一般來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明或本發(fā)明各方面提及包含特定要素、特征、步驟等時(shí)，本發(fā)明的某些實(shí)施例或本發(fā)明各方面是由或基本上由所述要素、特征、步驟等組成。出于簡(jiǎn)潔的目的，在本文中這些實(shí)施例并未以這些詞特別說(shuō)明。因此，對(duì)于包含一個(gè)或多個(gè)要素、特征、步驟等的本發(fā)明各實(shí)施例來(lái)說(shuō)，本發(fā)明還提供由或基木上由這些要素、特征、步驟等組成的實(shí)施例。當(dāng)給定范圍時(shí)，包括端點(diǎn)。此外，應(yīng)了解，除非另作指示或者從上下文和/或所屬領(lǐng)域技術(shù)人員中的一者的理解顯而易見(jiàn)，否則以范圍表示的值可采取本發(fā)明不同實(shí)施例中所述范圍內(nèi)的任何特定值，除非上下文中另外清楚指示，否則精確到所述范圍下限單位的十分之一。還應(yīng)了解，除非另作指示或者從上下文和/或所屬領(lǐng)域技術(shù)人員中的一者的理解顯而易見(jiàn)，否則以范圍表示的值可采取指定范圍內(nèi)的任何子范圍，其中將所述子范圍的端點(diǎn)表示成達(dá)與所述范圍下限單位的十分之一相同的精確程度。此外，應(yīng)了解本發(fā)明的任何特定實(shí)施例可明確地從一個(gè)或多個(gè)權(quán)利要求中排除。本發(fā)明組合物和/或方法的任何實(shí)施例、要素、特征、應(yīng)用或方面(例如，任何水凝膠前體、任何多糖衍生物或非多糖聚合物(例如任何HA衍生物或纖維素衍生物)、任何分子量范圍、任何交聯(lián)劑、水凝膠前體之間的任一類共價(jià)鍵、任一類生物活性劑或特定藥劑、任何粒徑和/或材料組成、任何投藥途徑或位置、投與組合物的任何目的等)都可排除在任一個(gè)或多個(gè)權(quán)利要求之外。舉例來(lái)說(shuō)，在本發(fā)明某些實(shí)施例中，生物活性劑不為抗增殖劑。出于簡(jiǎn)短的冃的，排除一個(gè)或多個(gè)要素、特征、目的或方面的所有實(shí)施例都未在本文中明確陳述。權(quán)利要求1.一種抑制粘連的方法，所述方法包含以下步驟將第一水凝膠前體投與給個(gè)體體內(nèi)位置處；和將第二水凝膠前體投與所述個(gè)體體內(nèi)所述位置處，其中所述第一水凝膠前體為纖維素衍生物或葡聚糖衍生物；其中所述第二水凝膠前體為葡聚糖衍生物；其中在所述第一與所述第二水凝膠前體相互接觸后，所述水凝膠前體交聯(lián)形成水凝膠；且其中所述水凝膠抑制粘連。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一水凝膠前體包含第一官能團(tuán)；其中所述第二水凝膠前體包含第二官能團(tuán)；并且其中所述第一和所述第二官能團(tuán)在生理?xiàng)l件下相互反應(yīng)形成共價(jià)鍵。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一水凝膠前體或所述第二水凝膠前體中的至少一種包含非多糖部分。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述纖維素衍生物選自由MC衍生物、CMC衍生物和HPMC衍生物組成的群組。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一水凝膠前體為CMC衍生物且所述第二水凝膠前體為羧甲基葡聚糖衍生物。6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二水凝膠前體為CMDX-ADH并且所述第一水凝膠前體選自由MC-CHO、CMC-CHO和HPMC-CHO組成的群組。7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第二水凝膠前體為CMDX-ADH且所述第一水凝膠前體為CMC-CHO。8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一水凝膠前體為第一葡聚糖衍生物且所述第二水凝膠前體為第二葡聚糖衍生物。9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的方法，其中所述第一葡聚糖衍生物為CMDX-ADH且所述第二葡聚糖衍生物為CMDX-CHO。10.根據(jù)權(quán)利要求所述的方法，其中所述水凝膠前體是以溶液形式投與。11.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水凝膠前體是以內(nèi)窺鏡方式或使用注射器投與。12.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水凝膠是在所述水凝膠前體相互接觸后介于1與100秒內(nèi)形成。13.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述水凝膠前體實(shí)質(zhì)上是在不存在游離交聯(lián)劑的情況下投與。14.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含纖維素衍生物的溶液，其中所述纖維素衍生物的濃度大于5mg/ml。15.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含纖維素衍生物的溶液，其中所述纖維素衍生物的濃度大于25mg/ml。16.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含纖維素衍生物的溶液，其中所述纖維素衍生物的濃度大于50mg/ml。17.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含葡聚糖衍生物的溶液，其中所述葡聚糖衍生物的濃度大于5mg/ml。18.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含葡聚糖衍生物的溶液，其中所述葡聚糖衍生物的濃度大于25mg/ml。19.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含投與至少一種包含葡聚糖衍生物的溶液，其中所述葡聚糖衍生物的濃度大于50mg/ml。20.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其另外包含在投與所述第一和所述第二水凝膠前體之前，破壞所述位置處存在的粘連的步驟。21.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述方法包含以與水凝膠前體形成的溶液或單獨(dú)溶液形式投與生物活性劑。22.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。23.根據(jù)權(quán)利要求21所述的方法，其中所述生物活性劑為消炎劑。24.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述消炎劑為非甾體消炎劑。25.根據(jù)權(quán)利要求24所述的方法，其中所述非甾體消炎劑選自由以下組成的群組塞來(lái)考昔(celecoxib)、雙氯芬酸(diclofenac)、二氟尼柳(diflunisal)、依托度酸(etodolac)、水楊酸鹽(salicylate)、菲諾洛芬(fenoprofen)、布洛芬(ibuprofen)、氟比洛芬(flurbiprofen)、吲哚美辛(indomethacin)、酮洛芬(ketoprofen)、酮咯酸(ketorolac)、甲氯方酸鹽(meclofamate)、甲氯芬那酸鹽(meclofenamate)、美洛昔康(meloxicam)、萘普生(naproxen)、吡羅昔康(piroxicam)、舒林酸(sulindac)、水楊酸水楊酸酯(salsalate)、萘丁美酮(nabumetone)、阿司匹林(aspirin)、奧沙普秦(oxaprozin)和托美汀(tolmetin)。26.根據(jù)權(quán)利要求23所述的方法，其中所述消炎劑為甾體消炎劑。27.根據(jù)權(quán)利要求26所述的方法，其中所述甾體消炎劑選自由以下組成的群組地塞米松(dexamethasone)、氟米龍(fluorometholone)、潑尼松龍(prednisolone)、氯替潑諾(loteprednol)、甲羥松(medrysone)、潑尼松(prednisone)、甲基潑尼松(methylpredisolone)、布地奈德(budesonide)、可的松(cortisone)、禾li美索龍(rimexolone)、氯倍他索(clobetasol)、卣貝他索(halobetasol)、氫化可的松(hydrocortisone)、曲安奈德(triamcinolone)、倍他米松(betamethasone)、膚輕松(fluocinolone)禾口氟西柰德(fluocinonide)。28.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中所述第一和所述第二水凝膠前體是以重量計(jì)介于1:10與10:1之間的比率投與。29.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其中至少一種所述水凝膠前體有生物活性劑與其共價(jià)連接。30.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。31.根據(jù)權(quán)利要求29所述的方法，其中所述生物活性劑為消炎劑。32.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述消炎劑為非甾體消炎劑。33.根據(jù)權(quán)利要求32所述的方法，其中所述非甾體消炎劑選自由以下組成的群組塞來(lái)考昔、雙氯芬酸、二氟尼柳、依托度酸、水楊酸鹽、菲諾洛芬、布洛芬、氟比洛芬、吲哚美辛、酮洛芬、酮咯酸、甲氯方酸鹽、甲氯芬那酸鹽、美洛昔康、萘普生、吡羅昔康、舒林酸、水楊酸水楊酸酯、萘丁美酮、阿司匹林、奧沙普秦和托美汀。34.根據(jù)權(quán)利要求31所述的方法，其中所述消炎劑為甾體消炎劑。35.根據(jù)權(quán)利要求34所述的方法，其中所述甾體消炎劑選自由以下組成的群組地塞米松、氟米龍、潑尼松龍、氯替潑諾、甲羥松、潑尼松、甲基潑尼松、布地奈德、可的松、利美索龍、氯倍他索、鹵貝他索、氫化可的松、曲安奈德、倍他米松、膚輕松和氟西柰德。36.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其另外包含將多個(gè)顆粒與所述水凝膠前體一起投與，從而使所述顆粒截留于由交聯(lián)所述水凝膠前體形成的水凝膠中。37.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述顆粒為包含選自由以下組成的群組的材料的納米顆粒(腿oparticle)或微米顆粒(microparticle):聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚(P-氨基酯)、聚酐、聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚乙二醇和其衍生物、聚原酸酯、聚縮醛、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧環(huán)己酮)、聚(亞烷基烷基化物)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯以及任一前述聚合物的摻合物或共聚物，和脂質(zhì)體。38.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述顆粒在投與前是與水凝膠前體一起存在于溶液中。39.根據(jù)權(quán)利要求36所述的方法，其中所述顆粒包含生物活性劑。40.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。41.根據(jù)權(quán)利要求39所述的方法，其中所述生物活性劑為消炎劑。42.—種組合物，其包含(a)纖維素衍生物；(b)葡聚糖衍生物；和(c)多個(gè)顆粒。43.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述顆粒為包含選自由以下組成的群組的材料的納米顆?；蛭⒚最w粒聚(內(nèi)交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚(p-氨基酯)、聚酐、聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚乙二醇和其衍生物、聚原酸酯、聚縮醛、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧環(huán)己酮)、聚(亞垸基垸基化物)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯以及任--前述聚合物的摻合物或共聚物，和脂質(zhì)體。44.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述顆粒生物可降解。45.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述顆粒包含生物活性劑。46.根據(jù)權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。47.根據(jù)權(quán)利要求45所述的組合物，其中所述生物活性劑為消炎劑。48.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述組合物為水凝膠，其中所述纖維素衍生物與所述葡聚糖衍生物相互交聯(lián)。49.根據(jù)權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述纖維素衍生物或所述葡聚糖衍生物有生物活性劑與其共價(jià)連接。50.根據(jù)權(quán)利要求49所述的組合物，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。51.—種將顆粒投與至體內(nèi)位置的方法，其包含將包含顆粒、第一水凝膠前體和第二水凝膠前體的組合物投與至所述位置；其中所述第一水凝膠前體為纖維素衍生物或葡聚糖衍生物；其中所述第二水凝膠前體為葡聚糖衍生物；且其中所述第一與所述第二水凝膠前體在投與后形成截留所述顆粒的水凝膠。52.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述組合物是以一種或多種溶液的形式投與，所述溶液中的至少一種含有顆粒。53.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述顆粒包含生物活性劑。54.根據(jù)權(quán)利要求51所述的方法，其中所述顆粒為包含選自由以下組成的群組的材料的納米顆粒或微米顆粒聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚((3-氨基酯)、聚酐、聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚乙二醇和其衍生物、聚原酸酯、聚縮醒、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧環(huán)己酮)、聚(亞烷基烷基化物)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯以及任一前述聚合物的摻合物或共聚物，和脂質(zhì)體。55.—種將生物活性劑投與給個(gè)體的方法，其包含以下步驟將包含生物活性劑、第一水凝膠前體和第二水凝膠前體的組合物投與至位置；其中所述第一水凝膠前體為纖維素衍生物或葡聚糖衍生物；其中所述第二水凝膠前體為葡聚糖衍生物；且其中所述第一與所述第二水凝膠前體形成其中截留所述生物活性劑的水凝膠。56.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述生物活性劑與水凝膠前體共價(jià)連接。57.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述生物活性劑為治療劑，其選自由以下組成的群組抗感染劑、消炎劑、抗增殖劑、抗腫瘤劑、抗氧化劑、血管生成抑制劑、免疫抑制劑、免疫調(diào)節(jié)劑、抗凝劑、蛋白水解劑、增強(qiáng)蛋白水解的藥劑、自由基清除劑、抗氧化劑、纖維性修復(fù)抑制劑和RNAi劑。58.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述生物活性劑為消炎劑。59.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述生物活性劑與顆粒以物理方式締合。60.根據(jù)權(quán)利要求55所述的方法，其中所述生物活性劑與納米顆?；蛭⒚最w粒以物理方式締合，所述納米顆?；蛭⒚最w粒包含聚(丙交酯)、聚(乙交酯)、聚(丙交酯-共聚-乙交酯)、聚(乳酸)、聚(乙醇酸)、聚(乳酸-共聚-乙醇酸)、聚己內(nèi)酯、聚碳酸酯、聚酯酰胺、聚(P-氨基酯)、聚酐、聚(酰胺)、聚(氨基酸)、聚乙二醇和其衍生物、聚原酸酯、聚縮醛、聚氰基丙烯酸酯、聚醚酯、聚(二氧環(huán)己酮)、聚(亞垸基垸基化物)、聚乙二醇與聚原酸酯的共聚物、生物可降解聚氨酯以及任一前述聚合物的摻合物或共聚物，和脂質(zhì)體。全文摘要本發(fā)明提供抑制粘連的組合物和方法。所述方法涉及將含有水凝膠前體(諸如多糖衍生物，例如透明質(zhì)酸、纖維素或葡聚糖的衍生物)的溶液投與給個(gè)體例如因手術(shù)、損傷或感染形成粘連的部位處。所述水凝膠前體(例如多糖衍生物)在其投與后交聯(lián)形成保持組織分離的水凝膠。在本發(fā)明某些實(shí)施例中，一種或兩種溶液含有例如聚合納米顆粒或微米顆粒的顆粒，從而形成含有所述顆粒的復(fù)合水凝膠。所述溶液、顆?；蚨呖珊猩锘钚詣?，諸如有助于抑制粘連的藥劑。所述生物活性劑可與水凝膠前體共價(jià)連接。文檔編號(hào)A61F13/00GK101448474SQ200780018405公開(kāi)日2009年6月3日申請(qǐng)日期2007年4月12日優(yōu)先權(quán)日2006年4月12日發(fā)明者丹尼爾·S·柯哈內(nèi),喬治·凱沃爾克·科多基安,伊都田一,允楊,羅伯特·S·蘭格申請(qǐng)人:麻省理工學(xué)院;E.I.杜邦內(nèi)穆?tīng)柟?通用醫(yī)院公司