專利名稱：：大環(huán)激酶抑制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及用作激酶抑制劑的化合物和它們的制備方法和用途。
背景技術(shù)：
：蛋白激酶("激酶")構(gòu)成了一大類酶，此類酶使用三磷酸腺苦("ATP")作為磷酸酯的來源將其它蛋白質(zhì)磷酸化。它們包括絲氨酸激酶和酪氨酸激酶，這兩類酶可以分別將其靶蛋白上的絲氨酸和酪氨酸殘基上的羥基磷酸化。激酶也可以有雙重功能，即它們能將絲氨酸和酪氨酸殘基兩者都磷酸化。靶蛋白可以是酶、膜通道或是其它蛋白質(zhì)。細胞活動通常受外部信號分子(例如，激素或促分裂原(mitogen))控制，這些外部信號分子與細胞表面同源受體的結(jié)合激發(fā)或抑制各種細胞內(nèi)事件。起始的信號分子-受體相互作用引發(fā)細胞內(nèi)其它蛋白質(zhì)相互作用的信號纟及耳關(guān)方文大(signalingcascade)或纟田月包"[言號4專導(dǎo)途徑(cell-signalingpathway),這通常涉及到激酶介導(dǎo)的蛋白質(zhì)磷酸化作用(信號傳導(dǎo))。因此，在分子水平上，細胞活動受相關(guān)激酶和其它蛋白質(zhì)如轉(zhuǎn)錄因子的磷酸化作用(和去磷酸化作用)調(diào)節(jié)。像這樣受調(diào)節(jié)的細胞活動包括細胞生長、細胞分裂和細胞凋亡。許多有害的細胞增殖疾病(例如癌癥、牛皮癬(psoriasis)、再狹窄(restenosis))的特征在于信號級聯(lián)放大中斷，導(dǎo)致細胞增殖變得不受抑制。通常中斷是由位于信號級聯(lián)放大上游蛋白質(zhì)的單突變引起的，這影響到下游多種激酶的調(diào)節(jié)。因此，抑制受影響的一種或多種激酶已經(jīng)發(fā)展為治療癌癥的基石出(Sausville"a/.,iev.尸/zarmaco/.7bx/co/.2003,43,199-231,"SignalTransduction-DirectedCancerTreatments，，)。二羥基苯曱酸內(nèi)酯("RALs")是天然產(chǎn)物的一個家族，其具有含有二羥基苯曱酸殘基的14元內(nèi)酯環(huán)，一個實例為寄端霉素(hypothemycin):寄端霉素存在一些公開內(nèi)容，其顯示RALs以及其半合成或者合成的類似物或衍生物是激酶抑制劑，并因此用于治療特征為異常激酶活性的疾病。參見例如，Giese"a/.,US5,795,910(1998);Chiba"a/.，US2004/0224493Al(2004);和Santi"a/.,US2006/0079494Al(2006)。本發(fā)明提供了可視為RAL類似物的新穎的化合物，這些化合物是有效的激酶抑制劑，并且用于治療可通過抑制激酶來治療的疾病或病癥。
發(fā)明內(nèi)容在一個實施方案中，本發(fā)明提供了具有所示式i的化合物及其藥用酯、鹽、溶劑化物及其水合物，其中R'為H、C廣C4烷基、C2-C4烯基或(32-(:4炔基；R2為H、鹵素、羥基、保護的羥基、-OR'2、-SRU、-NRUr'3、-X'(CH2)pX2-R:或者是任選被羥基、保護的羥基、卣素、氨基、保護的氨基或-X'(CH2)pX、R取代的烷基；R"和R^在其每次出現(xiàn)時獨立為H或任選取代的脂肪族部分、任選Jf又代的環(huán)狀脂肪族部分、任選取代的雜環(huán)脂肪族部分、任選取代的芳基或任選取代的雜芳基或者N或S保護基，或者1112和1113—起形成含有1至4個碳原子和1至3個氮原子或者氧原子的飽和或不飽和的環(huán)；1112和1113中的每個任選被以下一個或多個取代基取代羥基、保護的羥基、烷氧基、氨基、保護的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卣素；Xi和X'不存在，或各自獨立為氧、-NH或者-N(烷基)，或者其中X2-R14一起為N3或雜環(huán)脂肪族部分；p是l至10的整數(shù)，條件是只有當X'和X"中的至少一個不存在時，p其中可以是l;以及R"為H、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基，或者為-(OO)NHR15、-(CO)OR"或-(00)R15，其中R"每次出現(xiàn)時獨立地為H或脂肪族部分、環(huán)狀脂肪族部分、雜環(huán)脂肪族部分、芳基部分或者雜芳基；或者R14為-S02(R,，其中R"為脂肪族部分；其中R14、R"和R"中的一個或者多個任選被以下一個或多個取代基取代羥基、保護的羥基、烷氧基、氨基、保護的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或卣素；R3為H、羥基保護基、C廣Q烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、-COCd-C^烷基)、-CO(C2-C4烯基)、或者-CO(C2-C4炔基)；W為H或者卣素；以及R5為H、d-Q烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基，或者R'和R5—起形成(CH2)n，其中n為1、2、3或4。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了用于治療患有特征為細胞增殖的疾病的受試者的方法，其中所述增殖細胞具有活性異常升高的至少一種激酶，所述方法包括對受試者給予治療有效量的本發(fā)明化合物。優(yōu)選地，如此治療的疾病為黑素瘤(melanoma)、結(jié)腸癌(coloncancer)或乳&，癌(breastcancer),尤其是結(jié)腸癌或乳腺癌。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了用于抑制細胞增殖的方法，其中所述增殖細胞具有活性異常升高的至少一種激酶，所述方法包括使細胞與本發(fā)明的化合物接觸。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了用于抑制具有活性位點半胱氨酸殘基的激酶的方法，所述方法包括使激酶與本發(fā)明的化合物接觸。在另一實施方案中，本發(fā)明提供了本發(fā)明的化合物在制備用于治療特征為細胞增殖的疾病的藥物中的用途，其中所述增殖細胞具有活性異常升高的至少一種激酶。附圖1、2、3a和3b表示制備用于合成本發(fā)明化合物的中間體的方案。附圖4表示制備本發(fā)明中化合物的方案，利用了每個附圖1至附圖3中制備的中間體。附圖5和附圖6分別表示本發(fā)明的一種化合物的&NMR和l3CNMR光語。附圖7和附圖8分別表示本發(fā)明另一化合物的^NMR和"CNMR光譜。具體實施方式定義"脂肪族'，表示含有特定數(shù)目的碳原子(例如，如在"C3脂肪族,""C,-C5脂肪族,"或"d至Cs脂肪族,"中，后兩個詞是同義的，表示含有1至5個碳原子的脂肪族部分)的直鏈或支鏈、飽和或不飽和的非芳香烴部分，或者碳原子的數(shù)目未指定時，指1至4個碳原子(在不飽和脂肪族部分情況中為2至4個碳原子)。"烷基"表示飽和的脂肪族部分，這與指定適用的碳原子數(shù)目的慣例相同。舉例來說，d-C4烷基部分包括但不限于曱基、乙基、丙基、異丙基、異丁基、叔丁基、l-丁基、2-丁基等等。"烯基"表示含有至少一個碳-碳雙鍵的脂肪族部分，這與指定適用的碳原子數(shù)目的慣例相同。舉例來說，C2-C4烯基部分包括但不限于乙烯基(乙烯基(vinyl))、2-丙烯基(烯丙基或丙-2-烯基)、順式-1-丙烯基、反式-l-丙烯基、￡-(或Z-)-2-丁烯基、3-丁烯基、1,3-丁二烯基(丁-1，3-二烯基)等等。"炔基"表示含有至少一個碳-碳叁鍵的脂肪族部分，這與指定適用的碳原子數(shù)目的慣例相同。舉例來說，C2-C4炔基包括乙炔基(乙炔基(acetylenyl))、炔丙基(丙-2-炔基)、l-丙炔基、丁-2-炔基等等。"環(huán)狀脂肪基"表示飽和或不飽和、非芳香烴部分，其含有1至3個環(huán)并且每個環(huán)含有3至8個(優(yōu)選3至6個)碳原子。"環(huán)烷基"表示其中每個環(huán)都是飽和的環(huán)狀脂肪族部分。"環(huán)烯基"表示其中至少有一個環(huán)含有至少一個碳-碳雙鍵的環(huán)狀脂肪族部分。"環(huán)炔基"表示其中至少有一個環(huán)含有至少一個碳-碳叁^fe的環(huán)狀脂肪族部分。舉例來說，環(huán)脂肪族部分包括但不限于環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基、環(huán)戊烯基、環(huán)己基、環(huán)己烯基、環(huán)庚基、環(huán)辛基和金剛烷基。優(yōu)選的環(huán)狀脂肪族部分是環(huán)烷基類的，特別是環(huán)丙基、環(huán)丁基、環(huán)戊基和環(huán)己基。"雜環(huán)脂肪基"表示環(huán)狀脂肪族部分，其中其至少一個環(huán)中有至多三個(優(yōu)選1至2個)碳原子被獨立選自N、O或S的雜原子取代，其中N和S8可任選被氧化，并且N可任選被季銨化。類似地，"雜環(huán)烷基"、"雜環(huán)烯基"、和"雜環(huán)炔基，，分別表示其中其至少一個環(huán)被如此修飾的環(huán)烷基、環(huán)烯基或環(huán)炔基部分。示例性的雜環(huán)脂肪基部分包括氮丙啶基(aziridinyl)、氮雜環(huán)丁烷基(azetidinyl)、1,3-二噁烷基(l,3-dioxanyl)、氧雜環(huán)丁烷基(oxetanyl)、四氫呋喃基、吡咯烷基、哌咬基、哌嗪基、四氫吡喃基、四氫瘞喃基(tetrahydro-thiopyranyl)、1,l-二氧4匕四氪遂p南基(tetrahydrothiopyranylsulfone)、嗎啉基、石危嗎啉基(thiomorpholinyl)、l陽氧化碌b嗎啉基(thio腦rpholinylsulfoxide)、1,1-二氧化石克嗎淋基(thiomorphol.inylsulfone)、1,3-二氧戊環(huán)基、四氬-l,l-二氧代嗜吩基(tetrahydro-1,1-dioxo-thienyl)、1，4-二口惡烷基、硫雜環(huán)丁烷基(thietanyl)等等。"烷氧基"、"芳氧基"、"烷硫基"和"芳硫基"分別表示-o(烷基)、-o(芳基)、-S(烷基)和-S(芳基)。實例分別為曱氧基、苯氧基、曱硫基和苯硫基。"鹵素"或"鹵"表示氟、氯、溴或碘。"芳基"表示含有單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)環(huán)系的烴基，其中每個環(huán)含有3至7個碳原子，并且至少一個環(huán)是芳香性的。環(huán)系中的環(huán)可以相互稠合(如基中)或相互結(jié)合(如聯(lián)苯)，并且可以與非芳香性環(huán)稠合或結(jié)合(如茚滿基或環(huán)己基苯基)。進一步舉例來說，芳基包括但不限于苯基、萘基、四氬萘基、茚滿基、聯(lián)苯基、菲基、蒽基、苊基(acenaphthyl)。"雜芳基"表示含有單環(huán)、二環(huán)或三環(huán)環(huán)系的部分，其中每個環(huán)有3至7個碳原子，并且至少一個環(huán)是含有1至4個獨立選自N、O或S的雜原子的芳香族環(huán)，其中N和S可任選被氧化，并且N可任選被季銨化。像這樣含有至少一個雜原子的芳香族環(huán)可以與其它類型的環(huán)稠和(例如苯并呋喃基或四氬異喹啉基)或直接與其它類型的環(huán)結(jié)合(例如苯基吡啶基或2-環(huán)戊基吡啶基)。進一步舉例來說，雜芳基包括吡咯基、呋喃基、噻吩基(thienyl),咪唑基、p比口坐基、碌哇基、異碌唑基、p塞唑基、異p塞唑基、三唑基、四。坐基、吡啶基、N-氧代吡啶基、噠。秦基、嘧啶基、吡口秦基、喹啉基、異喹啉基、喹唑啉基、噌淋基(dnnolinyl)、查喔啉基(quinozalinyl)、二氮雜萘基(naphthyridinyl)、苯并吹喃基、口引咮基、苯并蓬吩基、。惡二峻基、蓉二唑基、吩逸哇基(phenothiazolyl)、苯并咪唑基、苯并三氮哇基、二苯并吹喃基、?？ㄟ蚧?、二苯并噻吩基、吖啶基等等。當指明基團可以被取代時，如在"取代或未取代的C,-C5烷基"或"任選取代的雜芳基"中使用"取代或未取代"或"任選取代的"表達時，所述部分可含有一個或多個獨立選擇的取代基，優(yōu)選數(shù)目為1至5個，更優(yōu)選的數(shù)目為1或2個?？紤]到與取代基連接的部分，取代基和取代形式可由本領(lǐng)域普通技術(shù)人員來選擇，以提供化學穩(wěn)定的，并且可以通過本領(lǐng)域已知技術(shù)以及本申請所列的方法來合成的化合物。"芳基烷基"、"(雜環(huán)脂肪基)烷基"、"芳基烯基"、"芳基炔基"、"聯(lián)芳基烷基"等表示視情況可被芳基、雜環(huán)脂肪基和聯(lián)芳基等取代的烷基、烯基或炔基，視情況所述烷基、烯基或炔基可具有開放的(未飽和的)化合價，例如苯甲基、苯乙基、N-咪唑基乙基、N-嗎啉代乙基等等。相反，"烷基芳基"、"烯基環(huán)烷基"等表示視情況可用烷基、烯基等取代的芳基、環(huán)烷基等，視情況所述烷基芳基、烯基環(huán)烷基例如為曱基苯基(曱苯基)或烯丙基環(huán)己基。"羥基烷基"、"囟代烷基"、"烷基芳基"、"氰基芳基"等表示視情況可以被一個或多個經(jīng)鑒定的取代基(視情況為羥基、卣素等等)取代的烷基、芳基等。舉例來說，可行的取代基包括但不限于烷基(尤其是曱基或乙基)、烯基(尤其是烯丙基)、炔基、芳基、雜芳基、環(huán)脂肪基、雜環(huán)脂肪基、卣素(尤其是氟)、閨代烷基(尤其是三氟甲基)、羥基、羥基烷基(尤其是羥基乙基)、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥基烷基)、-O(卣代烷基)(尤其是-OCF3)、-O(環(huán)烷基)、-O(雜環(huán)烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=0、=NH、二N(烷基)、=NOH、二NO(烷基)、-C(K))(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(=0)NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羥基烷基)、-C(=0)NH2、-0;=0)腿(烷基)、-C(0)N(烷基)2、-OC(K))(烷基)、-OC(=0)(羥基烷基)、-0(3(=0)0(烷基)、-OCfO)O(羥基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(K))NH(烷基)、-OC(K))N(烷基:b、疊氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基;b、-NH(芳基)、-NH(羥基烷基)、-NHC(O)(烷基)、-NHC(=0)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(O)NH(烷基)、-NHC(K))N(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(環(huán)烷基)、-S(二O)烷基、-S02(烷基)、-S02NH2、-S02NH(烷基)、-SO2N0^基)2等等。當所取代部分是脂肪基時，優(yōu)選取代基為芳基、雜芳基、環(huán)脂肪基、雜環(huán)脂肪基、卣素、羥基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥基烷基)、-o(囟代烷基)、-O(環(huán)烷基)、-O(雜環(huán)烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、=0、=NH、10二N(烷基)、=NOH、二NO(烷基)、-C02H、-C(-O)NHOH、-(3(=0)0(烷基)、-C(二O)O(羥基烷基)、-C(=0)NH2、-CtO)NH(烷基)、《(=0)^烷基)2、-OC(K))(烷基)、-OC(O)(羥基烷基)、-OC(K))O(烷基)、-OCtO)O(羥基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(二O)NH(烷基)、-0<:(=0)^烷基)2、疊氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NH(羥基烷基)、-NHC一O)(烷基)、-NHC(=0)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(-O)NH(烷基)、-,€(=0^(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(環(huán)烷基)、-S(=0)烷基、-S02(烷基)、-S02NH2、-S02NH(烷基)和-S02N(烷基)2。更優(yōu)選的取代基是鹵素、羥基、氰基、硝基、烷氧基、-O(芳基)、=0、=NOH、二NO(烷基)、-00(=0)(烷基)、-OC(O)O(烷基)、-OC(=0)NH2，-OC(-O)麗(烷基)、-OC(-0)N(烷基)2、疊氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NHC(O)(烷基)、-NHC(O)H、-NHC(=0)NH2、-NHC(=0)NH(烷基)、->^(^(=0)風烷基)2和-NHC^NH)NH2。當所取代部分是環(huán)脂肪基、雜環(huán)脂肪基、芳基或雜芳基時，優(yōu)選的取代基為烷基、烯基、炔基、囟素、卣代烷基、羥基、羥基烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥基烷基)、-O(囟代烷基)、-O(環(huán)烷基)、-O(雜環(huán)烷基)、-O(芳基)、烷硫基、芳硫基、-(:(=0)(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(=0)NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羥基烷基)、-C(=0)NH2、-C(K))NH(烷基)、-C(-0)N(烷基)2、-OC(K))(烷基)、-0(3(=0)(羥基烷基)、-OCfO)O(烷基)、-OC(O)O(羥基烷基)、-OC(=0)NH2、-OC(K))NH(烷基)、-0C(O)N(烷基)2、疊氮基、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基》、-NH(芳基)、-NH(羥基烷基)、-NHC(K))(烷基)、-NHC(K))H、-NHC(=0)NH2、-NHC(=0)NH(烷基)、-NHC(K))N(烷基)2、-NHC(=NH)NH2、-OS02(烷基)、-SH、-S(烷基)、-S(芳基)、-S(環(huán)烷基)、-S(K))烷基、-802(烷基)、-S02NH2、-802^"1(烷基)和-802>1(烷基)2。更優(yōu)選的取代基為烷基、烯基、囟素、卣代烷基、羥基、羥基烷基、氰基、硝基、烷氧基、-O(羥基烷基)、-0;=0)(烷基)、-C(=0)H、-C02H、-C(K))NHOH、-C(O)O(烷基)、-C(K))O(羥基烷基)、-C(=0)NH2、-C(-O)NH(烷基)、-C^O)N(烷基)2、-0(^(=0)(烷基)、-OC(K))(羥基烷基)、-OC(K))O(烷基)、-OC(K))O(羥基烷基)、-OC(=0)NH2、-OCfO)NH(烷基)、-OC(-0)N(烷基)2、-NH2、-NH(烷基)、-N(烷基)2、-NH(芳基)、-NHC(-O)(烷基)、-NHC(O)H、-NHC(=0)NH2、-麗C(K))NH(烷基)、->^(3(=0)討(烷基)2和-NHC(=NH)NH2。如在"保護的羥基"或"羥基保護基"中所述的保護基是如下所述的基團，即所述基團可以選擇性與化合物上的羥基相連，從而使得羥基對化合物所暴露的某種化學反應(yīng)條件呈惰性，并且經(jīng)所述暴露后可以選擇性地去除該基團。許多羥基保護基的實例是已知的。參見例如GreeneandWuts,尸rafec"veGVow戸z>(9/^v3"/c(S戸f/7es^，3rdedition,pp.17-245(JohnWiley&Sons,NewYork,1999)，將其內(nèi)容引入本申請作為參考。示例性的合適羥基保護基包括與本發(fā)明的化合物一起使用的保護基，其包括叔丁基二曱基硅烷基("TBDMS，，或"TBS")、三乙基硅烷基("TES")和三苯基硅烷基("TPS")。在描述范圍時，如在"d至Cs烷基"或"5至10%"中所述，所述范圍包括范圍的終點或邊界。除非對具體的立體異構(gòu)體進行特別說明(例如，通過在結(jié)構(gòu)式相關(guān)立體中心上的粗線或虛線連接、通過在結(jié)構(gòu)式中描述具有反式或順式構(gòu)型的雙鍵，或通過使用立體化學命名法來說明)，所有的立體異構(gòu)體，如純的化合物以及其混合物都包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)。除非另有指明，單獨的對映異構(gòu)體、非對映異構(gòu)體、幾何異構(gòu)體，及其組合物和混合物都包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。"藥用鹽"表示適于藥物制劑的化合物的鹽。當化合物含有一個或多個44性官能團時，該鹽可以為酸加成鹽，例如^L酸鹽、氫溴酸鹽、酒石酸鹽、曱磺酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽、醋酸鹽、雙輕萘酸鹽(embonate)、氫碘酸鹽、硝酸鹽、鹽酸鹽、乳酸鹽、曱基^5克酸鹽、延胡索酸鹽(fumarate)、苯曱酸鹽、琥珀酸鹽、曱磺酸鹽、乳糖醛酸鹽(lactobionate)、辛二酸鹽、曱苯磺酸鹽等等。當化合物含有一個或多個酸性部分時，該鹽可以是鹽如4丐鹽、鉀鹽、鎂鹽、葡甲胺鹽、銨鹽、鋅鹽、哌噪鹽、氨基丁三醇鹽、鋰鹽、膽堿鹽、二乙胺鹽、4-苯基環(huán)己胺鹽、N,N-二千基乙二胺鹽(benzathinesalt)、鈉鹽、四曱基季銨鹽等等。多晶型的結(jié)晶形式和溶劑化物也包括在本發(fā)明范圍內(nèi)。"治療有效量，，表示在研究人員、獸醫(yī)、醫(yī)生或其他臨床醫(yī)師所探尋的在組織系統(tǒng)、動物或人中引起生物學或醫(yī)學應(yīng)答的活性化合物或藥用試劑的量，所述應(yīng)答包括所治療的疾病或紊亂癥狀的減輕。引起生物或醫(yī)學應(yīng)答所需的活性化合物或藥用試劑的特定的量取決于多種因素，包括但不12限于所治療的疾病或紊亂、進行給藥的活性化合物或藥用試劑、給藥方法和患者的情況。4匕合物和方法在具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物的優(yōu)選實施方案中，W為H或C,-C4烷基(最優(yōu)選H或Me);R2為OH、保護的羥基、-O(C廣C4烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(C2-C4炔基)、-OCtOXd-Q烷基)、-OC(=0)(C2-C4烯基)或-0C(O)(C2-C4炔基)；R為H、羥基保護基、C廣C4烷基、02-0;烯基、C2-C4炔基、-CO(C廣C4烷基)、-CO(C2-C4烯基)，或-CO(C2-C4炔基)；R4為H;以及R5為Me(曱基)。在另一個優(yōu)選的實施方案中，R和I^均為H,RS為Me，其與具有式(II)所示結(jié)構(gòu)的化合物一致其中R1和R"具有在上文中
發(fā)明內(nèi)容部分所指定的含義。更優(yōu)選地，R1為H或d-C4烷基，并且R2為OH、保護的羥基、-0(01-01烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0((32-(:4炔基)、-oc(=o)(crc4烷基)、-oc(=o)(c2-c4烯基)或-OC(=0)(C2-C4炔基)。甚至更優(yōu)選地，R1為H或Me,并且R2為OH、-O(d-d烷基)或-OQ^O)(CrC4烷基)。特定的本發(fā)明化合物具有式III和IV所示的結(jié)構(gòu)(在附圖4中還分別描述為化合物29和30)。本發(fā)明范圍包括本發(fā)明化合物的前藥。一般而言，這些前藥是化合物官能性衍生物，其易于在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為所需的化合物。因此，在本發(fā)明的治療方法中，術(shù)語"給藥"(administering)應(yīng)包括用式I參數(shù)范圍內(nèi)的化合物,或不在此參數(shù)范圍內(nèi)，但給藥于需要治療的受試者后在體內(nèi)轉(zhuǎn)化為特定化合物的化合物來治療本申請中所描述的各種疾病。選擇和制備合適的前藥書T生物的常頭見才喿4乍描述在，例長口AVermuth,"DesigningProdrugsandBioprecursors，"inWermuth,ed.,T7ze尸n3cdceo/Afed/c/wa/CTzem^^y,2ndEd.，pp.561-586(AcademicPress2003)中，將其內(nèi)容引入本申請作為參考。前藥合適的酯基包括但不限于那些由藥用脂肪羧酸，特別是鏈烷酸(alkanoic)、《連》希酉史(alkenoic)、環(huán)M^克酉吏(cycloalkanoic)牙口4連》克二元酉吏(alkanedioicacids)所衍生的基團，其中每個烷基或烯基優(yōu)選具有6個以內(nèi)的碳原子。示例性的酯包括但不限于曱酸酯、乙酸酯、丙酸酯、丁酸酯、丙烯酸酯、碎寧檬酸酯、琥珀酸酯和乙基琥珀酸酯，所述酯基團與酚氧原子中的一個或多個或者脂肪族OH中的任一個或多個相連。本發(fā)明化合物可針對的異常升高的激酶活性可以多種方式產(chǎn)生。激酶可能以正常的數(shù)量存在，但信號傳導(dǎo)途徑上游的中斷已經(jīng)使得它的活性不受調(diào)節(jié)?；蛘撸っ缚赡芤援惓Ｉ叩牧看嬖??；蛘呒っ缚赡芡蛔?，因此其雖然有活性但對于調(diào)節(jié)信號無應(yīng)答。Santi美國專利2006/0079494Al(2006)已經(jīng)提出，具有順式-烯酮部分的寄端霉素以及其它的RAL類似物是激酶的共價抑制劑，其中激酶的活性位點含有半胱氨酸殘基，該半胱氨酸殘基位于激酶ATP結(jié)合位點的兩個天冬氨酸殘基之間并且緊鄰其中一個殘基(所述天冬氨酸殘基與ATP上的磷酸酯基相互作用，也與同ATP上的磷酸基絡(luò)合的Mg+2離子相互作用，并且表示激酶中高度保守的基序)。他們假設(shè)半胱氨酸的巰基在Michael反應(yīng)中加成到烯酮的雙鍵上，形成了不可逆或僅非常緩慢可逆的共價加成物(下文用寄端霉素作為代表性的RAL來說明)MeO''OHOMeO一OH激酶HOO，'''6h6,H力OH他們篩選了寄端霉素對一組124種激酶的作用，其中的19種含有所述活性位點半胱氨酸，其余的則沒有。寄端霉素抑制20種激酶，其中的18種含有活性位點半胱氨酸。換言之，寄端霉素抑制19種活性位點半胱氨酸激酶中的18種，但只抑制不含有所述活性位點半胱氨酸的105種激酶中的142種，為Michael反應(yīng)的假設(shè)提供了實驗支持。不受理論限制，相信本發(fā)明的化合物可通過類似的機理作用于激酶。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，由本發(fā)明的化合物抑制的激酶含有一個半胱氨酸殘基，該半胱氨酸殘基位于激酶ATP結(jié)合位點的兩個天冬氨酸殘基之間并且緊鄰其中一個殘基。在另一優(yōu)選的實施方案中，由本發(fā)明的化合物抑制的活性位點半胱氨酸激酶選自AAK1、帶有激酶結(jié)構(gòu)域的APEG1剪切變體(splicevariantwithkinasedomain,SPEG)、BMP2K(BIKE)、CDKL1、CDKL2、CDKL3、CDKL4、CDKL5(STK9)、ERK1(MAPK3)、ERK2(MAPK1)、FLT3、GAK、GSK3A、GSK3B、KIT(cKIT)、MAP3K14(NIK)、MAP3K7(TAK1)、MAPK15(ERK8)、MAPKAPK5(PRAK)、廳K1(MKK1,MAP2K1)、MEK2(MKK2,MAP2K2)、MEK3(MKK3,MAP2K3)、MEK4(MKK4,MAP2K4)、MEK5(MKK5,MAP2K5)、MEK6(MKK6,MAP2K6)、MEK7(MKK7,MAP2K7)、MKNK1(MNK1)、MKNK2(MNK2,GPRK7)、NLK、PDGFRcx、PDGFRP、PRKD1(PRKCM)、PRKD2、PRKD3(PRKCN)、PRPF4B(PRP4K)、RPS6KA1(RSK1，MAPKAPK1A)、RPS6KA2(RSK3,MAPKAP1B)、RPS6KA3(RSK2，MAPKAP1C)、RPS6KA6(RSK4)、STK36(FUSED—STK)、STYK1、TGFBR2、TOPK、VEGFR1(FLT1)、VEGFR2(KDR)、VEGFR3(FLT4)和ZAK。相信這些激酶含有上文中所討論的兩個天冬氨酸/半胱氨酸活性基序。B-Raf是Ras-Raf-MEKl/2-ERKl/2-MAP細胞信號傳導(dǎo)途徑上的激酶。在大約70%惡性黑色素瘤和20%結(jié)腸癌細胞中發(fā)現(xiàn)突變的B-Raf,在乳腺癌細胞中也發(fā)現(xiàn)了突變的B-Raf。通常B-Raf的突變是被命名為V600E(在較老的文獻中為V599E)的單一代替反應(yīng)，其中在氨基酸600位(在較老的文獻中為599位)上纈氨酸(valine)被谷氨酸代替(Daviesefa/.,A^w2002,417,949-954,"MutationsoftheBRAFGeneinHumanCancer.，，)。這種單突變是致癌的它組成性地激活信號傳導(dǎo)途徑，從而使下游激酶MEK1/2和ERK1/2的活性及細胞增殖不再受控制。然而，因為激酶ERK1、ERK2、MEK1和MEK2激酶含有必需的活性位點半胱氨酸，它們對于本發(fā)明的化合物的抑制作用是敏感的。因此，在一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物用于抑制特征為具有B-RafV600E突變的細胞增殖。以這種方式，單一的化合物可以抑制與病癥有關(guān)的多種靶分子。在另一實施方案中，本發(fā)明的化合物用于治療特征為具有B-Raf突變的細胞的增殖的疾病。優(yōu)選地，在治療前篩選受試者增殖細胞中B-Raf突變(尤其是V600E突變)的存在以及由此篩選受試者對治療產(chǎn)生正性應(yīng)答的可能性。典型來說，本發(fā)明的化合物可為藥用組合物或制劑的部分，其可呈任何合適的形式例如固態(tài)、半固態(tài)或液態(tài)形式。通常，藥用制劑含有作為活性成分的一種或多種本發(fā)明的化合物和藥用載體或賦形劑。典型來說，將活性成分與適于外部、腸內(nèi)或腸胃外應(yīng)用的有機或無機載體或賦形劑共混。活性成分可以例如與通常無毒的、藥用載體混合在一起，用于片劑、小丸劑、膠嚢、栓劑、陰道栓劑、溶液劑、乳劑、混懸劑或任何其它適用的形式?？墒褂玫馁x形劑包括載體、表面活性劑、增稠劑或乳化劑、固體粘合劑、分散或懸浮助劑、增溶劑、著色劑、調(diào)味劑、包衣劑、崩解劑、潤滑劑、增甜劑、防腐劑、等滲劑及其組合。Gennaro,ed.,i^m&gto":77ze5We"ce朋c/尸rac/ceo/尸/za削acy,20thEd.(LippincottWilliams&Wilkins2003沐導(dǎo)了合適的賦形劑的選擇和使用，將其內(nèi)容引入本申請作為參考。與載體物質(zhì)組合而產(chǎn)生單一劑型(dosageform)的活性成分的量取決于所治療的宿主(host)及具體的給藥方式。例如，用于口服給藥于人的制劑可含有載體物質(zhì)，其含量可為總組合物的約5%至約95%。劑量單位形式通常含有約5mg至約500mg的活性成分?？梢詥未位蚍执蝿┝啃问綄⒅委熡行Я康谋景l(fā)明化合物給藥于受試者。給藥頻率可以是每日給藥，或根據(jù)一些其它規(guī)則的時間表(例如每曰3次)給藥，或甚至根據(jù)不規(guī)則的時間表給藥。劑量可以是，例如每千克體重約0.01至約10mg，或者更通常每千克體重約0.1至約2mg的量。然而，應(yīng)該理解對于任何具體的病人而言，特定劑量水平可能取決于多種因素。這些因素包括所使用的特定化合物的活性；受試者的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；給藥時間和給藥途徑以及藥物的排泄率；在治療中是否使用了藥物聯(lián)用；和治療所探尋的具體疾病或病癥的嚴重程度。典型來說，受試者為人，然而本發(fā)明的方法可用于獸醫(yī)目的，針對其它目標哺乳動物(包括貓、牛、狗、馬等等)進行適當?shù)膯挝粍┝空{(diào)整?？蓞⒖家韵聦嵤├齺磉M一步理解本發(fā)明的實踐，提供所述實施例用于16舉例，而不是限制性的。實施例l-芐基溴5該實施例描述了千基溴5的合成，所述化合物是合成本發(fā)明化合物如化合物29和30的中間體。合成方案概述于附圖1中。每個實例中所得產(chǎn)物的'HNMR光譜與所指定的結(jié)構(gòu)一致。M(9M2在0。C向2,4-二羥基-6-曱基苯甲酸乙酯1(15g,76.45mmol)于無水二氯甲烷("DCM"，75mL)的溶液中加入1,8-二氮雜二環(huán)[5.4,0]十一-7-烯("DBU",45.7mL，305.8mmol)。溶液變成棕色。在0°C滴加氯甲基曱醚("M0MC1",14.5mL,191.1mmol)。將反應(yīng)混合物在室溫("RT")攪拌12小時。加入DBU(22.3mL，153mmol)和MOMC1(7.25mL，95.6mmol)，然后將反應(yīng)混合物在35°C攪拌2小時。加入乙醚(200mL)和水(lOOmL)，然后分離各層。水層用乙醚(3x100mL)萃取。合并的有機層用水(IOOmL)，5%NaHSO4(50mL)，水(50mL),飽和NaHCO3(50mL)和鹽水(50mL)洗滌，并用Na2S04干燥，經(jīng)硅膠墊和MgS04過濾，然后蒸發(fā)至干。在高真空度下干燥后得到MOM保護的酯2(19.5g)。MOM/^^的^J向MOM保護的酯2(5.12g,18mmol)于水(20mL)和MeOH(20mL)的溶液中加入NaOH(2.88g)。將反應(yīng)混合物在83。C加熱18小時。除去MeOH后加入乙酸乙酯("EtOAc",50mL)。用NaHS04(約9g20mL的水溶液)調(diào)節(jié)水相pH值至2i-3。水層用乙酸乙酯萃取(3x50mL)，合并的有機層用鹽水(50mL)洗滌，用Na2S04干燥，經(jīng)硅膠墊和MgS04過濾，然后蒸發(fā)至干。粗制的MOM保護的酸3與甲苯(2x)共沸，并不經(jīng)進一步純化就用于下一步反應(yīng)。7MS五游4在0。C向MOM保護的酸3(約18mmol)，三苯基膦("Ph3P",6.14g，23.4mmol)及三曱基硅基乙醇("TMSE-OH"，3.08mL,21.6mmol)于乙醚(40mL)和甲苯(12mL)的溶液中滴加偶氮二羧酸二乙酯("DEAD，，，10.2g，40%的曱苯溶液)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌12小時。然后加入己烷并濾除固體。濃縮母液并且再次過濾，并用更多的己烷洗滌。除去溶劑，經(jīng)硅膠柱色語(IO-20%EtOAc/己烷)純化得到TMSE酯4(5.06g)。f差il5向TMSE面旨4(10.16g，28.03mmol)于CC14(300mL)的溶液中加入氮雜異丁腈(azaisobutyronitirle,"AIBN，，，0.46g，2.8mmol)和N-溴代琥珀17酰亞胺("NBS，，，5.49g,30.83mmol)。將所得的混懸液除氣4次(用氮氣吹洗)并用強光照射(3個日光燈管，總共lOOOw)。將攪拌的混懸液快速加熱至回流，然后攪拌1小時后得到淺黃色溶液(由NMR監(jiān)測反應(yīng)進程)。冷卻至室溫后，用飽和NaHC03溶液(3x30mL)、H20(30mL)和鹽水(30mL)洗滌反應(yīng)混合物。有機溶液用無水NaS04干燥，經(jīng)硅膠墊過濾，然后濃縮。殘留物用柱色譜(EtOAc/己烷，0%至24%的梯度液)純化，得到為無色油狀物的芐基溴5(8.5g,純度65-70%;混雜有約20%原料和約10%的苯基溴化產(chǎn)物)。實施例2-四氫呋喃-2-醇8該實施例描述了四氫呋喃-2-醇8的合成，該化合物也是合成本發(fā)明的化合物如化合物29和30的中間體。合成方案概述于附圖2中。每個實例中所得產(chǎn)物的'HNMR光譜與所指定的結(jié)構(gòu)一致。裙^片游7將2,2-二曱氧基丙烷(126mL)和對曱苯磺酸("TSA",633mg)加入到L-赤糖酸-l,4-內(nèi)酯6(15g)于N,N-二曱基曱酰胺("DMF",158mL)中的溶液中。將混合物在氮氣下回流2小時，然后保持在室溫過夜。加入DCM(500mL),有機相用飽和NaHC03溶液(5x300mL)洗滌，然后用Na2S04干燥，過濾，然后蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色語(10%-50%乙酸乙酯于己烷中)純化后，得到縮酮內(nèi)酯7(9.8g)。四蟲^喊-2-《#S在-78。C將二異丁基氫化鋁("DIBAL-H",1當量，純凈的)滴加到縮酮內(nèi)酯7(9.8g)于DCM(100mL)的溶液中。反應(yīng)混合物在-78。C攪拌l小時，然后用飽和NH4Cl溶液淬滅。加入EtOAc(500mL),有機相用飽和NH4C1溶液(2x300mL)和鹽水(2x300mL)洗滌，用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(DCM至5。/。MeOH于DCM中)純化后得到四氫呋喃-2-醇8(7.5g)實施例3-炔TBS醚13和14此實施例描述了炔TBS醚13和14的合成，它們分別是合成本發(fā)明化合物如化合物29和30的的中間體。每個實例中所得產(chǎn)物的NMR光譜與所指定的結(jié)構(gòu)一致。TBS醚13的合成方案概述于附圖3a中。炎莽H在4°C向(S)-環(huán)氧丙烷9(17.3mL,0.246mol)中滴加乙炔鋰-乙二胺復(fù)合物(24.92g,0.271mol)于二甲基亞砜(DMSO，250mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌24小時，倒入冰水中并用乙醚(4x360mL)萃取。合并的有機層用飽和NH4Cl溶液洗滌，用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。得到粗制的炔醇11(39g)，并且未經(jīng)純化就用于下一步反應(yīng)。炎mS1繼U在室溫將咪唑(16.7g,0.246mol)和三丁基氯硅烷("TBSC1",25g,0.166mol)分10批加到粗制的炔醇11(39g，0.123mol)于DCM(250mL)的溶液中。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌3小時。加入己烷(600mL)和飽和NaHC03溶液(300mL)，并且分離各層。有機層用水(3x400mL)洗滌，Na2S04干燥，過濾，然后蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色語(100%己烷)純化后得到粗制的炔TBS醚13(19g)。TBS醚14的合成方案概述于附圖3b中。通常遵照Chiba等人的美國專利2004/0224936Al(2004)中描述的操作。得到兩種對映異構(gòu)體并用于下一步反應(yīng)。炎寧在-60。C向TMS-乙炔(38.8mL)于1LTHF中的溶液中加入n-BuLi(110mL,2.5M)。將反應(yīng)快速升溫至0°C,然后再冷卻至-60。C。然后緩慢加入BF3*Et20(33.8mL)，接著通過注射器泵歷時2小時加入環(huán)氧化物10(15mL)。在-60。C攪拌1.5小時后將反應(yīng)混合物升至室溫，用飽和NH(C1溶液(500mL)淬滅，并用乙酸乙酯(2x2L)萃取。合并有機層，干燥，然后濃縮。粗產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色譜(己烷/EtOAc-4:l)純化，得13.9g期望的炔醇12,其為油4大物。J^7^S趙/4在室溫向醇12于280mL二氯曱烷中的溶液中加入咪唑(19.2g)。分5批加入TBSC1(32g)。在室溫將反應(yīng)混合物攪拌3小時。加入己烷(700mL),然后用鹽水(350mL)洗滌有機層，再用水(3x450mL)洗滌，用Na2S04干燥，過濾，然后蒸發(fā)至干。產(chǎn)物經(jīng)硅膠柱色語(己烷)純化，得到8.7g中間體TBS保護的TMS乙炔。將TBS保護的TMS乙炔(8.7g)和K2C03(8g)于曱醇(120mL)中的混合物在室溫攪拌5小時?；旌衔镉靡宜嵋阴?2x200mL)萃取。干燥合并的有機層并濃縮。粗產(chǎn)物在硅膠柱(用己烷洗脫)上純化，得到為無色油狀物的醚14(6.17g)。得到兩種對映異構(gòu)體并用于下一步反應(yīng)。實施例29此實施例描述了稱為29的一種本發(fā)明化合物的合成。合成方案表示于附圖4中。在每個實例中所得產(chǎn)物的]HNMR光鐠與所指定的結(jié)構(gòu)一致。另外，對于化合物29得到更多的分析數(shù)據(jù)。在0。C將異丙基氯化鎂(3.13mL,6.25mmol,2.0M的四氫呋喃("THF")溶液)力。到炔TBS醚13(1.24g,6.25mmol)于THF(3.1mL)的溶液中。將反應(yīng)混合物加熱至50°C并且在此溫度攪拌1小時，冷卻至0。C。加入四氫吹喃-2-醇8于5mLTHF中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫攪拌4小時，通過加入飽和NaH2P04溶液(20mL)淬滅。水層用EtOAc(4x30mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色語(10%-40%EtOAc/己烷)純化后得到單一非對映異構(gòu)體炔-二醇15(2.33g)。舉二寧27向炔-二醇l5(789mg)于己烷(40mL)中的溶液中加入林德拉催化劑(Lindlarcatalyst,210mg)和全啉(l0jaL)。將反應(yīng)混合物除氣，通AH23次并且在H2下攪拌1小時。反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠墊過濾并濃縮。經(jīng)硅膠柱色語(10%-40%EtOAc/己烷)純化后，得到烯-二醇17(701mg)。寧"在—30。C向NaH(343mg，8.56mmol,60%于礦物油中的分散體，用己烷洗滌)于THF(15mL)的混懸液中緩慢加入烯-二醇17(2.47g，6.85mmol)于無水THF(10mL)中的溶液。將反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。冷卻至-30。C后，滴加節(jié)基溴5于THF(6mL)中的溶液，然后所得反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時。通過加入磷酸鹽緩沖液(pH7，1.OM,30mL)停止反應(yīng)。加入乙醚(100mL)，并分離各層。水層用乙醚(2x30mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色語(5%-20%EtOAc/己烷)純化后得到醇19(824mg，純度80%)。皋f凌游2/向醇19(460mg,0.636mmol)于無水DCM(5mL)中的溶液中加入二異丙基乙胺(0.544mL，3.18mmo1)、苯曱酸酐(288mg,1.27mmo1)和4-二曱基氨基吡啶("DMAP",71.3mg,0.636mmol)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌6小時。通過加入飽和NaHC03溶液(30mL)和乙醚(50mL)停止反應(yīng)。分離各層，水層用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(己烷至15%EtOAc/己垸)純化后得到苯甲酸酯21(520mg)。二-MWZ在室溫將氟化四丁基銨("TBAF，，5mL，1.0M于THF中)加到苯曱酸酯21(520mg,0.628mmol)中。反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時，然后在40。C攪拌15小時。通過加入NaHS04(300mg于30mL水中)和乙醚(50mL)停止反應(yīng)。分離隔層，水層用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，經(jīng)硅膠墊過濾，濃縮，與曱苯共沸(2x20mL)然后溶于DCM(20mL)中，并用4A分子篩干燥2小時。粗產(chǎn)物未經(jīng)純化就用于下一步反應(yīng)。將上述的粗產(chǎn)物于DCM中的溶液歷時8小時加到正在回流中的碘化2-氯-1-曱基吡啶錯(460mg,1.8mmol)和二異丙基乙胺于無水DCM(60mL)中的溶液中。反應(yīng)混合物回流18小時。經(jīng)硅膠柱色譜純化后得到36mg去除2-MOM基的環(huán)狀產(chǎn)物("2-脫MOM產(chǎn)物")和114mg2-脫MOM產(chǎn)物和二MOM環(huán)狀產(chǎn)物23的混合物。2-脫MOM產(chǎn)物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物23的步驟如下將2-脫MOM溶于DCM中，然后加入DBU(20叫)和MOMC1(10eq)，然后在35。C攪拌5小時。通過加入乙醚(IOmL)和飽和NH4C1溶液(IOmL)淬滅反應(yīng)。分離各層，水層用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。產(chǎn)物經(jīng)硅膠墊過濾，然后用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將溶劑除去。可以類似地將114mg混合物轉(zhuǎn)化為產(chǎn)物23。粗產(chǎn)物未經(jīng)進一步純化就用于下一步反應(yīng)。應(yīng)苯f魔差,務(wù)25向產(chǎn)物23于EtOH(1mL)和THF(1mL)中的溶液中加入NaOH溶液(lmL,1N)。反應(yīng)混合物在37。C下攪拌16小時，然后用乙醚(20mL)和水(10mL)稀釋。分離各層，水層用乙醚(3x10mL)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(10-65%EtOAc/己烷)純化后得到脫苯曱?；a(chǎn)物23(18.2mg)。27向脫苯曱?；a(chǎn)物25于無水DCM(1mL)中的溶液中加入4A分子篩和氯鉻酸吡啶("PCC")。反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時，用己烷(lmL)稀釋，經(jīng)硅膠墊和硅藻土過濾，并用乙醚洗滌。除去溶劑，產(chǎn)物酮內(nèi)酯27未經(jīng)進一步純化就用于下一步反應(yīng)。化合*M向酮內(nèi)酯27于乙腈(lmL)中的溶液中加入氫氟酸(0.33mL)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌1小時，然后通過加入NaHCO3(0.9g)于THF(10mL)中的混懸液淬滅反應(yīng)?；旌衔镌谑覝財嚢?0分鐘，經(jīng)硅膠墊過濾，然后用THF洗滌。除去溶劑，經(jīng)硅膠柱色譜(20%-70%THF于己烷中)純化得到產(chǎn)物(3-4mg)。通過C18填料過濾(用MeOH洗滌)來除去一些非極性雜質(zhì)。RAL類似物29的'HNMR光語和l3CNMR光語分別表示于附圖5和附圖6中。質(zhì)譜(M+Na+)-375.1054;(M-H^二351,1438。實施例5-化合物30此實施例描述了稱為化合物30的另一種本發(fā)明化合物的合成。合成方案也顯示于附圖4中。在每個實例中所得產(chǎn)物的〗HNMR光譜與所指定的結(jié)構(gòu)一致。另外，對于化合物30得到更多的分析數(shù)據(jù)。炎-二辱J6在0。C將異丙基氯化鎂(4.48mL，8.96mmol,2.0M的四氫呋喃("THF，)溶液)加到炔TBS醚14(1.9g,8.96mmol)于THF(5mL)中的溶液中。將反應(yīng)混合物加熱至50°C并且在此溫度攪拌1小時，然后冷卻至0°C。加入四氬吹喃-2-醇8(730mg，4.56mmol)于6mLTHF中的溶液。反應(yīng)混合物在室溫攪拌2小時，通過加入飽和NaH2P04溶液(35mL)淬滅反應(yīng)。水層用EtOAc(4x50mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。得到2種非對映異構(gòu)體并且直接用于下一步反應(yīng)。雄一二寧7S向炔-二醇16(1.138g)于己烷((56mL)中的溶液中加入林德拉催化劑(292mg)和p奎啉(15iaL)。將反應(yīng)混合物除氣，通入H23次并且在H2下攪拌2.5小時。反應(yīng)混合物經(jīng)硅膠墊過濾并濃縮。經(jīng)硅膠柱色譜(5%EtOAc/己烷至35%EtOAc/己烷的梯度液)分離兩種非對映異構(gòu)體后得到烯-二醇18(686mg)。攀2。在室溫向烯-二醇18(90mg,0.251mmol,l叫)于二曱氧基乙烷(0.5mL)中的溶液中滴加叔丁醇鉀(l.OM的THF溶液，0.251mL)。在室溫將混合物攪拌10分鐘。滴加千基溴5的THF溶液(0.6mL)。在室溫攪拌30分鐘后加入乙酸乙酯(40mL)。有片幾相用水(2x20mL)洗，經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(己烷至20%EtOAc/己烷)純化后得到醇20(100mg)。多f凌游22向醇20(700mg，0.963mmol)于無水DCM(10mL)中的溶液中加入二異丙基乙胺(0.84mL,4.815mmol)、苯曱酸酐(435mg，1.926mmol)和4-二曱基氨基吡啶("DMAP，，，118mg,0.963mmol)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌6小時。通過加入飽和NaHC03溶液(30mL)和乙醚(50mL)停止反應(yīng)。分離各層，水層用乙醚(2x20mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色語(己烷至15%EtOAc/己烷)純化后得到苯曱酸酯22(705mg)。二-M9Af豕炎'/^》％在室溫將苯曱酸酯22(約0.360mmol)溶于THF(5mL)中。加入TBAF(3mL,1.0M的THF溶液)。反應(yīng)混合物在50。C攪拌5小時。加入EtOAc(180mL)。有機層用飽和NH4C1溶液(90mL)洗滌。水層用EtOAc(2x90mL)萃取。將三乙胺(1.5mL)加入到合并的有機相中，然后經(jīng)Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。在三乙胺的存在下將粗產(chǎn)物與甲苯共沸3次，未經(jīng)純化就用于下一步。歷時2h將粗產(chǎn)物于DCM(60mL)中的溶液加入到正在回流中的碘化2-氯-1-曱基吡啶絲(275mg)和三乙胺(250|aL)于DCM(60mL)中的溶液中。反應(yīng)混合物回流42小時。除去溶劑，經(jīng)硅膠柱色i普(5至45。/。EtOAc/己烷的梯度液)純化得到產(chǎn)物(60mg)。應(yīng)苯，差產(chǎn)*26向產(chǎn)物24于EtOH(3mL)和THF(3mL)中的溶液中加入NaOH溶液(3mL,1N)。將反應(yīng)混合物在37。C攪拌16小肘，然后用乙醚(20mL)和水(10mL)稀釋。分離各層，水層用乙醚(3x10mL)萃取。合并的有機層用鹽水洗滌，用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(10-65%EtOAc/己烷)純化后得到脫苯曱酰基產(chǎn)物24(37mg)。酮內(nèi)酯向脫苯甲酰基產(chǎn)物26于無水DCM(lmL)中的溶液中加入4A分子篩和氯鉻酸吡啶("PCC，，)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌4小時，然后用DCM(100mL)稀釋。有機層用飽和NaHC03溶液(3x100mL)洗滌，用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。經(jīng)硅膠柱色譜(5-45。/。EtOAc/己烷)純化后得到產(chǎn)物酮內(nèi)酯28(25mg)?；蟿?wù)J。向酮內(nèi)酯28于乙腈(17mL)中的溶液中加入氫氟酸(4mL，48%)。反應(yīng)混合物在室溫攪拌3小時。加入氫氟酸(lmL,48%)，然后在室溫將反應(yīng)混合物攪拌1小時。將反應(yīng)混合物倒入DCM(300mL)和飽和NaHCO3溶液(100mL)中，將混合物攪拌直到觀察不到起泡為止。分離各層，水層用DCM(3x200mL)萃取。合并的有機層用Na2S04干燥，過濾并蒸發(fā)至干。然后將殘留物在高真空度下干燥過夜。得到終產(chǎn)物化合物30(19mg)。其1HNMR光譜和13CNMR光譜分別顯示于附圖7和附圖8中。質(zhì)譜(M+lT)=367.0。本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)該理解，可對以上所提供的實施例進行必要的調(diào)整以適用于制備本發(fā)明的其它化合物。例如，通過應(yīng)用熟知的酚羥基官能化技術(shù)，其中W或r為h的式i化合物可用作合成其中R"或rS不是H的式I化合物的前體。具體涉及的技術(shù)^Hf于Giese等人的美國專利5，795，910(1998);Chiba等人的美國專利2004/0224493A1(2004)和Santi等人的美國專利2006/0079494A1(2006)中，將其內(nèi)容引入本申請作為參考，可對所述技術(shù)進行調(diào)整以適于制備本發(fā)明中化合物。實施例6-生物活性將化合物III和IV的生物活性與天然產(chǎn)物寄端霉素的生物活性在表A中做對比。提供了針對3種癌細胞系的抑制濃度。COL0829B是具有B-RafV600E突變的人黑素瘤細胞系。HT29是也具有B-RafV600E突變的人結(jié)腸癌細胞系。SKOV3是具有野生型(wild-type)B-Raf的人乳腺癌細胞系。另外提供了ERK2的K,和Kjnact。表A-本發(fā)明化合物的生物活性<table>tableseeoriginaldocumentpage24</column></row><table>ICso數(shù)據(jù)顯示本發(fā)明化合物III和IV是具有BRafV600E突變的癌細胞的尤其有效的抑制劑。前面對本發(fā)明的詳細描述包括主要或?qū)ｉT涉及本發(fā)明具體部分或方面的段落。應(yīng)當理解，這是為了清晰和方便，而具體特征可能不只是涉及將其公開的段落，并且本申請的內(nèi)容包括不同段落中存在的信息的所有適當組合。類似地，盡管本申請中各種附圖和描述涉及本發(fā)明特定的實施方案，但是應(yīng)當理解，當特定的特征公開于具體附圖或?qū)嵤┓桨傅膬?nèi)容中時，所述特征也可以適當擴展，用于另一附圖或?qū)嵤┓桨傅膬?nèi)容中，與另一特征組合應(yīng)用，或通用于整個發(fā)明中。權(quán)利要求1.具有式I所示結(jié)構(gòu)的化合物以及其藥用酯、鹽、溶劑化物及其水合物，其中R1為H、C1-C4烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基；R2為H、鹵素、羥基、保護的羥基、-OR12、-SR12、-NR12R13、-X1(CH2)pX2-R14或者是任選被羥基、保護的羥基、鹵素、氨基、保護的氨基或-X1(CH2)pX2-R14取代的烷基；其中R12和R13在其每次出現(xiàn)時獨立為H、任選取代的脂肪族部分、任選取代的環(huán)狀脂肪族部分、任選取代的雜環(huán)脂肪族部分、任選取代的芳基、任選取代的雜芳基或者N或S保護基，或者R12和R13一起形成含有1至4個碳原子和1至3個氮原子或者氧原子的飽和或不飽和的環(huán)；R12和R13中每個任選被以下一個或多個取代基取代羥基、保護的羥基、烷氧基、氨基、保護的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或鹵素；X1和X2不存在，或各自獨立為氧、-NH或者-N(烷基)，或者其中X2-R14一起為N3或雜環(huán)脂肪族部分；p是1至10的整數(shù)，條件是只有當X1和X2中的至少一個不存在時，p任選是1；以及R14為H、芳基、雜芳基、烷基芳基、烷基雜芳基，或者為-(C＝O)NHR15、-(C＝O)OR15或-(C＝O)R15，其中R15每次出現(xiàn)時獨立為H或脂肪族部分、環(huán)脂肪族部分、雜環(huán)脂肪族部分、芳基或者雜芳基；或者R14為-SO2(R16)，其中R16為脂肪族部分；其中R14、R15和R16中的一個或多個任選被以下一個或多個取代基取代羥基、保護的羥基、烷氧基、氨基、保護的氨基、-NH(烷基)、氨基烷基或鹵素；R3為H、羥基保護基、C1-C4烷基、C2-C4烯基、C2-C4炔基、-CO(C1-C4烷基)、-CO(C2-C4烯基)或者-CO(C2-C4炔基)；R4為H或者鹵素；以及R5為H、C1-C4烷基、C2-C4烯基或C2-C4炔基，或者R1和R5一起形成(CH2)n，其中n為1、2、3，或4。2.權(quán)利要求1的化合物，其中R1為H或Q-C4烷基；112為OH、保護的羥基、-O(CrQ烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(CrC4炔基)、-OC(K))(C'-C4烷基)、-0(:(=0)((:2-(:4烯基)或-0(:(=0)((:2-(:4炔基)；R為H、羥基保護基、d-C4烷基、cvc4烯基、C2-d炔基、-00((:1-(:4烷基)、-co(c2-c4烯基)或者-CO(C2-C4炔基)；R4為H;以及R5為Me。3.權(quán)利要求1的具有式(II)所示結(jié)構(gòu)的化合物4.權(quán)利要求3的化合物，其中R1為H或d-C4烷基，112為OH、保護的羥基、0(c廣C4烷基)、-0(C2-C4烯基)、-0(<:2匿(:4炔基)、-0(:(=0)(&-(:4烷基)、-OC(=0)(C2-C4烯基)或-00:=0)(02《4炔基)。5.權(quán)利要求4的化合物，其中R'為H或Me,以及R2為H、-0(d-C4烷基)或-OC(^0)(Q-C4烷基)。6.權(quán)利要求i的具有式m所示結(jié)構(gòu)的化合物7.權(quán)利要求1的具有式IV所示結(jié)構(gòu)的化合物8.用于治療患有特征為細胞增殖的疾病的受試者的方法，其中所述細胞具有活性異常升高的至少一種激酶，所述方法包括將治療有效量的權(quán)利要求1的化合物給予受試者。9.權(quán)利要求8的方法，其中所述疾病為黑素瘤、結(jié)腸癌或乳腺癌。10.權(quán)利要求9的方法，其中所述疾病為黑素瘤或結(jié)腸癌。11.權(quán)利要求8的方法，其中所述增殖細胞特征為具有突變的B-Raf。12.權(quán)利要求8的方法，其中突變的B-Raf具有V600E突變。13.權(quán)利要求8的方法，其進一步包括在給藥步驟前對受試者進行篩選的步驟，以確定是否增殖細胞具有突變的B-Raf。14.用于抑制細胞增殖的方法，其中所述細胞具有活性異常升高的至少一種激酶，所述方法包括使細胞與權(quán)利要求1的化合物接觸。15.權(quán)利要求14的方法，其中所述細胞具有突變的B-Raf。16.權(quán)利要求15的方法，其中突變的B-Raf具有V600E突變。17.用于抑制具有活性位點半胱氨酸殘基的激酶的方法，所述方法包括使激酶與權(quán)利要求1的化合物接觸。18.權(quán)利要求17的方法，其中所述活性位點半胱氨酸殘基位于激酶ATP結(jié)合位點的兩個天冬氨酸殘基之間并且緊鄰其中一個殘基。19.權(quán)利要求17的方法，其中所述激酶是由突變的B-Raf激活的細胞信號傳導(dǎo)途徑上的激酶。20.權(quán)利要求17的方法，其中所述激酶選自AAK1、帶有激酶結(jié)構(gòu)域的APEG剪切變體(SPEG)、BMP2K(BIKE)、CDKL1、CDKL2、CDKL3、CDKL4、CDKL5(STK9)、ERK1(MAPK3)、ERK2(MAPK1)、FLT3、GAK、GSK3A、GSK3B、KIT(cKIT)、MAP3K14(NIK)、MAP3K7(TAK1)、MAPK15(ERK8)、MAPKAPK5(PRAK)、MEKl(MKK1,MAP2K1)、MEK2(MKK2、MAP2K2)、MEK3(MKK3、MAP2K3)、MEK4(MKK4,MAP2K4)、MEK5(MKK5、MAP2K5)、MEK6(MKK6、MAP2K6)、MEK7(MKK7、MAP2K7)、MKNK1(MNK1)、MKNK2(MNK2,GPRK7)、NLK、PDGFRa、PDGFRP、PRKD1(PRKCM)、PRKD2、PRKD3(PRKCN)、PRPF4B(PRP4K)、RPS6KA1(RSK1、MAPKAPK1A)、RPS6KA2(RSK3，MAPKAP1B)、RPS6KA3(RSK2、MAPKAP1C)、RPS6KA6(RSK4)、STK36(FUSED一STK)、STYK1、TGFBR2、TOPK、VEGFR1(FLT1)、VEGFR2(KDR)、VEGFR3(FLT4)和ZAK。21.權(quán)利要求17的方法，其中所述激酶為ERK1、ERK2、MEK1或MEK2。22.權(quán)利要求17的方法，其中所述激酶為ERK2。全文摘要本發(fā)明涉及具有式I結(jié)構(gòu)的化合物，其中R¹、R²、R³、R⁴和R⁵如本申請中所定義，其用作激酶抑制劑。文檔編號A61K31/343GK101489547SQ200780026278公開日2009年7月22日申請日期2007年4月5日優(yōu)先權(quán)日2006年5月11日發(fā)明者丹尼爾·V·桑蒂,紅傅,悅陳申請人:科森生物科學公司