專利名稱：：樺褐孔菌胞內外混合多糖及其制備方法和藥物用途的制作方法
技術領域：
：本發(fā)明屬于醫(yī)藥領域。
背景技術：
：樺褐孔菌/"o"omsoW^m^，國內還稱為樺癌褐孔菌、斜生纖孔菌。也禾爾/Vzaeo/7cmoW一ws，F"sc。/7on'aa，Chaga，Blackbirchtinder(tuchwood)，birchmushroom，Kabanoanoanatake等。屬擔子菌亞門(Basidiomycotina)、層菌綱(Hymenomycetes)、非褶菌目(Aphyllophorales)、束!j革菌禾斗(Hymenoehaetaeeae)。樺褐孔菌的形態(tài)它的子實體呈現瘤狀(不育性的塊狀物)，直徑25~40cm，深色，表面深裂，很硬，干時脆。孢子闊橢圓狀至卵狀，光滑，有剛毛(setae)。菌絲為二系菌絲系統(tǒng)，具有生殖菌絲和骨架菌絲。氣生菌絲多為骨架菌絲，黃褐色，具有剛毛狀菌絲和稀少剛毛；基內菌絲多為生殖菌絲，淡黃褐色，有隔，無鎖狀聯合。分布樺褐孔菌的菌絲體極其耐寒是生長在寒帶的木腐菌，生于白樺、銀樺、榆樹、赤楊等活立木的樹皮下或砍伐后樹木的枯干上，并能引起白樺、銀楊、榆樹、赤楊的白腐。其主要分布在北半球北緯45。50。的地區(qū)，如北美(北部)、芬蘭、波蘭、俄羅斯(西西伯利亞、遠東部分地區(qū)、勘察加半島)、中國(黑龍江、吉林省長白山地區(qū))、日本(北海道)等國家生境。化學成分關于樺褐孔菌化學成分的研究已有許多報道，主要含有羊毛脂烷型三萜類、木質素類、黑色素類等。Lovyagina等最早從樺褐孔菌中得到一種含葉酸衍生物——蝶酰谷氮酸，以及芳香物質香草酸、丁香酸和一羥基苯甲酸；1961年和1962年Ludwiczalkt和Wrzclono分別報道從該菌中分離得到樺褐孔菌醇。IchimumT還發(fā)現樺褐孔菌的水提取物中含有低分子量的多酚類。YamaguchiT從樺褐孔菌的水提取物中得到一種水溶性的高分子量的有抑制HIV-便白酶活性的木質素衍生物。何堅等還從樺褐孔菌中分離得到麥角甾醇過氧化物、鞘氨脂類似物、甘露醇。Kukulyanslaya等發(fā)現天然的樺褐孔菌中的黑色素與人工培養(yǎng)的樺褐孔菌合成的黑色素的理化性質不同，并存在結構差異，規(guī)定天然合成的黑色素為異黑色素。IchimuraT等研究表明樺褐孔菌形成的黑色素屬于l，1，3，4，4，6-六甲基一7—乙?；籰，2，3，4-四氫萘吐納麝香類，從它的堿性降解產物里鑒別得知含有P—羥苯酸。藥理作用樺褐孔菌的主要藥理作用為抗腫瘤作用，其中起主要作用的是三萜類化合物和多糖類化合物。據李英秀等報道，樺褐孔菌提取物在0.516.0嗎/ml對胃癌MGC—803細胞株均有抑制細胞增殖作用，并顯示明顯的量效關系。張慧麗等研究證明樺褐孔菌多糖在1.016.0^ig/ml范圍內，對肝癌SMMC7721細胞株的增殖均有抑制，并表現出濃度依賴性關系.不同濃度間的抑制率均存在顯著性差異。JaroszA等研究發(fā)現樺褐孔菌菌絲、菌核中的多糖有抑制細胞周期，調節(jié)酶cdc25和cdc2/cyclinB的作用。Burczy報道樺褐孔菌的菌絲體和培養(yǎng)基中的成分能對Hda細胞的M、G和Gz期有阻礙作用，同時有激活過氧化氫酶活性的作用，但是這兩種作用之間沒有必然的聯系。Rzymowsk研究表明樺褐孔菌的水提取液能夠抑制人類母體外子宮頸腫瘤細胞的生長，降低腫瘤細胞蛋白質數量和有絲分裂指數值，干擾腫瘤細胞新陳代謝，還影響細胞周期中的8/G階段。此外對惡性腫瘤患者進行放療、化療過程中服用含有樺褐孔菌的有效成分，可增強病人的耐受性，削弱因放療、化療而引起的毒副作用。樺褐孔菌含有白樺脂酸，1999年韓國學者發(fā)現這種物質能抑制293型癌細胞達70%，具有很強的抗腫瘤性，且無毒副作用。日本有關報道，樺褐孔菌對嘔吐、腹瀉、胃腸功能紊亂、胃及十二指腸潰瘍、肝炎、胃炎和腎炎有一定的治療作用；對因不合理的飲食而導致的骨質方面的疾病有一定的預防和治療作用。樺褐孔菌還是血液的清潔劑和疼痛的緩解劑，對皮膚過敏也有一定的療效。目前，國內治療腫瘤方面的藥物很多，但在天然藥物中，治療效果很好的中藥很少，未能達到扶正氣，提高病人的免疫力，防復發(fā)、轉移，殺滅癌細胞的作用。而樺褐孔菌正是一種能有效治療各種癌癥并能提高機體免疫力的天然藥物。目前已被列入俄羅斯藥典。對樺褐孔菌子實體的化學成分和藥理作用的研究國外已有很多，特別是對其抗腫瘤作用的研究。但在我國樺褐孔菌的研究還處于起步階段，大規(guī)模人工馴化還沒有實現，其來源主要是靠采集野生資源，更加珍貴的是野生的品種只有在活的樺樹上生長1015年才具有很好的藥用價值，并且每兩萬棵樺樹上大約只有一棵生長著樺褐孔菌，因此野生的樺褐孔菌價格十分昂貴，這使樺褐孔菌的開發(fā)利用受到了限制。
發(fā)明內容本發(fā)明提供一種樺褐孔菌胞內外混合多糖及其制備方法和藥物用途，以解決野生的樺褐孔菌價格十分昂貴、使樺褐孔菌的開發(fā)利用受到限制的問題。本發(fā)明采取的技術方案是它是由下列方法得到的一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度26-29"，培養(yǎng)240-360小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16-26,葡萄糖1.2-3.2，瓊脂1.5-2.5，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB,0.8-1.2mg加水定溶至所需體積，PH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打孔，用接種鏟取6-10塊的菌餅接入含有100-150ml液體培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，置于26-29。C，轉速為120-185rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)210-300小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB^.8-1.2mg加水定溶至所需體積，PH值自然；三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有250-350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為10%-13%，置于26-29。C，轉速為120-170rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)160-240小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置55-60。C鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比45-50:l置于超聲儀內，48-52°C，65-75Hz超聲提取40min，重復提取2-3次，合并提取液，45-55。C減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液45-55"C減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95%乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到75%-80%，4。C沉淀8-12小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌3次，55-6(TC恒溫干燥，重復23次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖。本發(fā)明樺褐孔菌胞內外混合多糖在制備抗腫瘤的藥物中應用。本發(fā)明藥物的活性組分可以加入制備不同劑型時所需的各種常規(guī)輔料，如崩解劑、潤滑劑、粘合劑等以常規(guī)的中藥制劑方法制備成任何一種常用口服劑型，如顆粒劑、丸齊U、散齊U、片劑、膠囊劑、口服液等。本發(fā)明利用液體深層發(fā)酵所得的發(fā)酵產物中，同樣含有藥用活性成分，其生長周期短，可以成為獲取活性成分的一種有效手段。本發(fā)明經過實驗，從樺褐孔菌菌絲體及其發(fā)酵液中提取得到混合粗多糖，并對其抗腫瘤活性進行了研究，得出樺褐孔菌胞內外混合多糖具有高抑瘤活性和低毒性的特征。成人日服藥量為0.811.62g/kg。具體實施例方式試驗例l，本發(fā)明樺褐孔菌胞內外混合多糖的抗腫瘤試驗試驗材料，樺褐孔菌菌種，2006年購于黑龍江省伊春市食藥用菌研究所；樺褐孔菌胞內外混合多糖。陽性對照藥，復方環(huán)磷酰胺片為通化茂祥制藥有限公司產品，規(guī)格為每片含環(huán)磷酰胺50mg，人參莖葉總皂甙50mg，批號070601。動物及瘤株，昆明種小鼠，雌性，體重20士2g，6周齡，購于長春生物制品研究所，合格證編號0006456。瘤株肉瘤S，和肝癌H22購于吉林省腫瘤研究所。試驗方法取昆明種小鼠50只，在無菌條件下將接種了7d的小鼠腹水用9g/L的生理鹽水以l:3的比例稀釋至含腫瘤細胞數為5xlO、fU/只，小鼠右腋窩皮下接種(0.2mL/只)。接種24h后稱重并隨機分為5組，每組10只，分別為空白對照組(生理鹽水)、陽性對照組——復方環(huán)磷酰胺組(30mg/kg)及樺褐孔菌胞內外混合多糖高劑量組(500mg/kg)、中劑量組(250mg/kg)、低劑量組(125mg/kg)。同時在接種24h后灌胃給藥，給藥體積為20mL/kg，每日1次，連續(xù)給藥10d，停藥后次日稱重脫臼致死取瘤塊，稱重并計算抑瘤率。抑瘤率=(空白組瘤重-給藥組瘤重/空白組瘤重)xlOO%胸腺指數=胸腺重/體重(mg/g).脾系指數=脾中/體重(mg/g)統(tǒng)計學處理，SPSS12.0軟件進行統(tǒng)計學處理，分析組間差異，試驗結果用(7士s)表示。結果1、樺褐孔菌胞內外混合多糖對小鼠肉瘤S，抑制作用樺褐孔菌胞內外混合多糖的高劑量組、中劑量組和低劑量組對小鼠S湖肉瘤的抑制作用均達30。/。以上，且高、中、低劑量組與空白對照組比較均有極顯著性差異(尸O.Ol)。其中低劑量組的效果最佳。參考文獻將小鼠低劑量125mg/kg換算成人服用劑量為10.125mg/kg,結果詳見表l。表l樺褐孔菌胞內外混合多糖對小鼠S則肉瘤腫瘤抑制率及小鼠體重的影響(n=10,5±s)組別小鼠體重劑量(mg/kg)瘤重(g)抑瘤率(%)給藥前給藥后空白對照組19.75±1.3225.7±1丄553.49±0.63復方環(huán)磷酰胺組20.05±1.4823.85±2.23301.50±0.48**57.02樺褐孔菌高劑量組19.70±1.5125.30±1.275001.70士0.44"51.29樺褐孔菌中劑量組19.80±1.3024.40±1.732501.73±0.56**50.43樺褐孔菌低劑量組19.80士1.5124.95±1.421251.67±0.61**52.15注與空白對照組比較*尸<0.05**尸<0.012、樺褐孔菌胞內外混合多糖對小鼠肝癌H22抑制作用樺褐孔菌胞內外混合多糖的高、中、低劑量組對小鼠肝癌H22的生長均有顯著的抑制作用，其抑制率均達30%以上，且呈明顯量效關系，與空白組相比有極顯著性差異(尸O.Ol)。其中高劑量組的效果最佳。參考文獻將小鼠高劑量500mg/kg換算成人服用劑量為40.5mg/kg,結果詳見表2。表2樺褐孔菌胞內外混合多糖對小鼠肝癌H22腫瘤抑制率及小鼠體重的影響(n=10，S±s)組別小鼠體重劑量瘤重(g)抑瘤率(mg/kg)(%)給藥前給藥后空白對照組20.00±1.4323,25±1.232.33±0.73復方環(huán)磷酰胺組20.45±1.2820.65±2.14**300.97土0.31"58.49樺褐孔菌高劑量組20.30±1.1123綠1.115001.09±0.46**53.12樺褐孔菌中劑量組20.35±0.6323象1.07250U9土0.45^48.90樺褐孔菌低劑量組20.40士0.9i24.15±1.971251.46±0.57**37.42注與空白對照組比較*尸<0.05**尸<0.01試驗例2樺褐孔菌胞內外混合多糖急毒實驗方法經預試，無法找出100%致死量，測出LD5o,因此對其小鼠最大耐受量進行了試驗。參照文獻,取昆明種小鼠40只，雌雄各半,隨機分為2組，禁食不禁水，12h后,以20g/kg.d,16g/kg.d的高，中兩個劑量給藥，給藥體積為40ml/kg'd，一天內給藥一次，隔日稱重，連續(xù)觀察14d,每天觀察兩次，記錄小鼠外觀，行為活動，精神狀態(tài)，大、小便形狀及顏色，被毛，膚色，呼吸，運動等狀況。14d后將動物處死，大體解剖活檢動物心、肝、脾、肺、腎、腦、胸腺、胃、腸等器官色澤、位置、質地等。結果小鼠，連續(xù)觀察14d時間小鼠無一只死亡，其進食、飲水、行為方式、排泄等均未見異常，體重均有不同程度的增長，體重變化見表3。第15天后處死小鼠進行尸體解剖，均未有肉眼可見的病變。表3小鼠體重變化情況(g,S士S)<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>結果顯示，樺褐孔菌胞內外混合多糖組小鼠最大耐受量為20g/kg。參考文獻計算得到成人最大服藥量為1.62g/kg。實施例1本發(fā)明片劑的制備一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度26'C，培養(yǎng)240小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16，葡萄糖1.2，瓊脂1.5，MgSO40.12，KH2PO40.28，VB,0.8mg加水定溶至所需體積，pH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打孔，用接種鏟取6塊的菌餅接入含有100ml液體培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，置于26°C，轉速為120rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)210小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16,葡萄糖1.2，MgSO40.12,KH2PO40.28，VBi0.8mg加水定溶至所需體積，pH值自然；三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有250-350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為10%，置于26匸，轉速為120rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)160小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置55。C鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比45:1置于超聲儀內，48°C，65Hz超聲提取40min，重復提取3次，合并提取液，45"C減壓濃縮至原體積的1/5，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液45'C減壓濃縮至原體積的1/5，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95%乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到75%，4'C沉淀8小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌3次，55。C恒溫干燥，重復2次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖；五、樺褐孔菌胞內外混合多糖與制備片劑的常規(guī)輔料混合，壓片。實施例2:本發(fā)明顆粒劑的制備一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度28"，培養(yǎng)300小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯21,葡萄糖2.4，瓊脂2.0，MgSO40.16,KH2PO40.31，VB".Omg加水定溶至所需體積，pH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打孔，用接種鏟取8塊的菌餅接入含有120ml液體培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，置于28°C，轉速為150rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)260小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯21,葡萄糖2.4，MgSO40.16,KH2PO40.31，VB山Omg加水定溶至所需體積，pH值自然。三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有250-350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為11%，置于28。C，轉速為150rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)200小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置57。C鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比47:1置于超聲儀內，50°C，70Hz超聲提取40min，重復提取3次，合并提取液，50。C減壓濃縮至原體積的1/7，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液5(TC減壓濃縮至原體積的1/7，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95%乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到78%，4°C沉淀10小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌3次，57。C恒溫干燥，重復3次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖。五、樺褐孔菌胞內外混合多糖與制備顆粒劑的常規(guī)輔料混合，制顆。實施例3本發(fā)明膠囊劑的制備一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度29C培養(yǎng)360小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯26,葡萄糖3.2，瓊脂2.5，MgSO40.2，KH2PO40.35，VB山2mg加水定溶至所需體積，pH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打？L，用接種鏟取10塊的菌餅接入含有150ml液體培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，置于29°C，轉速為185rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)300小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯26,葡萄糖3.2，MgSO40.2，KH2PO40.35，VB山2mg加水定溶至所需體積，pH值自然；三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為13%，置于29'C，轉速為170rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)240小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置60。C鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比50:1置于超聲儀內，52°C，75Hz超聲提取40min，重復提取2次，合并提取液，55'C減壓濃縮至原體積的1/10，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液55。C減壓濃縮至原體積的1/10，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95%乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到80%，4。C沉淀12小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌2次，60。C恒溫干燥，重復3次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖。五、樺褐孔菌胞內外混合多糖與制備膠囊劑的常規(guī)輔料混合，制顆粒，裝入膠囊。權利要求1、一種樺褐孔菌胞內外混合多糖，其特征在于它是由下列方法得到的一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度26-29℃，培養(yǎng)240-360小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml)馬鈴薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，瓊脂1.5-2.5，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需體積，pH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打孔，用接種鏟取6-10塊的菌餅接入含有100-150ml液體培養(yǎng)基的250ml搖瓶中，置于26-29℃，轉速為120-185rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)210-300小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml)馬鈴薯16-26，葡萄糖1.2-3.2，MgSO40.12-0.2，KH2PO40.28-0.35，VB10.8-1.2mg加水定溶至所需體積，pH值自然；三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有250-350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為10％-13％，置于26-29℃，轉速為120-170rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)160-240小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置55-60℃鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比45-50∶1置于超聲儀內，48-52℃，65-75Hz超聲提取40min，重復提取2-3次，合并提取液，45-55℃減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液45-55℃減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95％乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到75％-80％，4℃沉淀8-12小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌3次，55-60℃恒溫干燥，重復2～3次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖。2、如權利要求1所述的樺褐孔菌胞內外混合多糖的制備方法，包括下列步驟一、無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，培養(yǎng)溫度26-29'C，培養(yǎng)240-360小時；該綜合固體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16-26,葡萄糖1.2-3.2，瓊脂1.5-2.5，MgSO40.12-0.2，KH2P040.28-0.35，VB^.8-1.2mg加水定溶至所需體積，PH值自然；二、一級發(fā)酵在無菌條件下，用6mm的打孔器菌落邊緣處打孔，用接種鏟取6-10塊的菌餅接入含有100-150ml液體培養(yǎng)基的250m—l搖-瓶—中，置于26-29。C，轉速為120-185rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)210-300小時后進行二級發(fā)酵培養(yǎng)；該液體培養(yǎng)基配方(g/100ml):馬鈴薯16-26,葡萄糖1.2畫3.2，MgSO40.12-0.2,KH2PO40.28-0.35，VBi0.8-1.2mg加水定溶至所需體積，PH值自然；三、二級發(fā)酵取一級發(fā)酵液接種于含有250-350ml該液體培養(yǎng)基的1000ml二級搖瓶中，接種量為10%-13%，置于26-29。C，轉速為120-170rpm/min的搖床中，恒溫培養(yǎng)160-240小時；四、將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；將菌絲體用蒸餾水沖洗三次，置55-60。C鼓風干燥箱中烘干，稱重，60目粉碎，按蒸餾水與菌絲體粉末比45-50:l置于超聲儀內，48-52°C，65-75Hz超聲提取40min，重復提取2-3次，合并提取液，45-55。C減壓濃縮至原體積的1/5-1/10，得胞內多糖濃縮液；將發(fā)酵液45-55'C減壓濃縮至原體積的l/5-l/10，并與胞內多糖濃縮液合并，加入95%乙醇，攪拌，使乙醇終濃度達到75%-80%，4。C沉淀8-12小時，收集沉淀，用無水乙醇洗滌3次，55-6(TC恒溫干燥，重復23次，得樺褐孔菌胞內外混合多糖。3、如權利要求1所述的樺褐孔菌胞內外混合多糖在制備抗腫瘤的藥物中的應用。全文摘要本發(fā)明涉及一種樺褐孔菌胞內外混合多糖及其制備方法和藥物用途，屬于醫(yī)藥領域。無菌條件下取斜面菌種接入新鮮的綜合固體培養(yǎng)基的平皿內，經過一級發(fā)酵、二級發(fā)酵，將二級發(fā)酵產物進行抽濾，得到樺褐孔菌的菌絲體和發(fā)酵液；經過濃縮、水提醇沉得樺褐孔菌胞內外混合多糖。本發(fā)明利用液體深層發(fā)酵所得的發(fā)酵產物中，同樣含有藥用活性成分，其生長周期短，可以成為獲取活性成分的一種有效手段。本發(fā)明經過實驗，從樺褐孔菌菌絲體及其發(fā)酵液中提取得到混合粗多糖，并對其抗腫瘤活性進行了研究，得出樺褐孔菌胞內外混合多糖具有高抑瘤活性和低毒性的特征。文檔編號A61K31/715GK101418325SQ20081005151公開日2009年4月29日申請日期2008年12月3日優(yōu)先權日2008年12月3日發(fā)明者雪李,潘景芝,琦王,王金玲申請人:琦王