專利名稱：活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物活性添加劑領(lǐng)域，特別是一種活酵母細(xì)胞衍生物的 生產(chǎn)方法。
背景技術(shù)：
.隨著經(jīng)濟的發(fā)展，人們生活水平的不斷提高，人們對健康有了更高 的要求，也越來越意識到生活環(huán)境和工作環(huán)境中存在著諸多對健康不利 的因素。為了有效防止外界不良環(huán)境對身體造成的傷害并增強身體抵抗 力，需要使用具有保濕、抗衰老的功能性化妝品、食品及醫(yī)藥制品，而 且這些制品越來越受到人們的喜愛。目前，作為功能性化妝品、食品及醫(yī)藥制品，其生物活性添加劑的 提取方法主要有三種l.從動物腺體(如胸腺、脾、胎盤、大腦和肺)和 循環(huán)體系的血清、淋巴細(xì)胞中提??；2.從海藻、各種植物及非動物器官 中提?。?.從微生物培養(yǎng)液和微生物細(xì)胞中提取。由于動物產(chǎn)品的不安 全性以及動物保護組織的反對，愈來愈多的消費者反對將來源于動物的 產(chǎn)品應(yīng)用于化妝品，因此取自植物的活性成份在化妝品中的應(yīng)用大大增 加，但自植物中提取活性成份的成本較高。因此，人們開始研究微生物 酵母這種低成本、易操作的物質(zhì)。1993年，日本學(xué)者伊藤進提出把酵母 細(xì)胞代謝物、線粒體成份和糖脂PSL用于化妝品中。隨著生物技術(shù)向化 妝品領(lǐng)域的不斷滲透，酵母的一些組分及其代謝物、衍生物已逐漸應(yīng)用 于化妝品的開發(fā)和生產(chǎn)。目前在國外已經(jīng)有許多以酵母及其衍生物為原 料的化妝品問世，從啤酒酵母細(xì)胞壁中提取的葡聚糖也被應(yīng)用于抗衰 老、防皺、增加皮膚彈性的高功能化妝品中，含有活性酵母衍生物的化 妝品更是得到了極大的應(yīng)用。但現(xiàn)有的活性酵母衍生物制備方法均具有 難度大、成本高等不足，而且其保濕、抗衰老效果仍然有待提高。 發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種操作簡便、成本 低、效益高的活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，由該方法生產(chǎn)加工而成的 活酵母細(xì)胞衍生物可作為添加劑應(yīng)用于功能性化妝品、功能性食品和醫(yī) 藥制品，使其具有更佳的保濕效果及抗衰老功能。本發(fā)明解決其技術(shù)問題是采取以下技術(shù)方案實現(xiàn)的一種活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其生產(chǎn)方法包括如下步驟(1) .菌種選擇選用微生物活酵母菌作為菌種；(2) .酵母培養(yǎng)液的制備將保存在麥芽汁斜面培養(yǎng)基的酵母菌轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基，在28-30'C溫度條件下培養(yǎng)至對數(shù)期8-12h制得酵母培 養(yǎng)液；(3) .極端高溫刺激將酵母培養(yǎng)液自適應(yīng)溫度轉(zhuǎn)變于高溫35-37'C應(yīng) 激28-30min;(4) .菌體收集對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液離心分離處理8-10min， 收集酵母菌體；(5) .菌體破壁采用高壓均質(zhì)機對所收集的酵母菌體進行細(xì)胞壁破 碎處理，處理3-4次；(6) .活酵母細(xì)胞衍生物的提取將破壁后的酵母細(xì)胞進行離心分離，去除沉淀，制得的胞內(nèi)提取物即為活酵母細(xì)胞衍生物。而且，在酵母培養(yǎng)液的制備步驟中，所采用的培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基采用麥芽汁10-12QBrix，液體培養(yǎng)基采用YEPD培養(yǎng)基。而且，在菌體收集步驟中采用冷凍離心機對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液在4000rpm轉(zhuǎn)速下進行離心處理。而且，在菌體破壁步驟中所采用高壓均質(zhì)機對所收集的酵母菌體進行細(xì)胞壁破碎處理的壓力為120-130Mpa。 本發(fā)明的優(yōu)點和積極效果是1. 本活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，應(yīng)用活酵母細(xì)胞內(nèi)生物化學(xué)過 程與人體細(xì)胞內(nèi)生物化學(xué)過程極為相似的原則，采用酵母菌這種廉價的 微生物作為原料，充分挖掘細(xì)胞防御體系的潛能，依靠高溫極端環(huán)境的 刺激使酵母菌產(chǎn)生對抗極端環(huán)境的活性物質(zhì)，克服了從動物體內(nèi)提取活 性物質(zhì)的不安全性以及從植物細(xì)胞中提取的高成本問題。2. 本活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法依靠微生物繁殖快、易培養(yǎng)、代謝能力強的特性，大幅度縮短生產(chǎn)周期，提高生產(chǎn)效率，從而提高經(jīng)濟 效益。3. 本活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法不采用傳統(tǒng)蛋白酶水解的方法 進行破壁，而是選擇高壓均質(zhì)機破碎酵母細(xì)胞，破碎效果好、操作方便、 易于推廣應(yīng)用，可實現(xiàn)工業(yè)化，同時具有生產(chǎn)成本低、投資少、實用性 強的優(yōu)點。4. 本活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法所制得的產(chǎn)品含有豐富的維生 素、多糖、氨基酸、SOD、 CAT等營養(yǎng)成份，因此可進一步與化妝品和食品以及醫(yī)藥生產(chǎn)領(lǐng)域有機結(jié)合，開發(fā)出高效的功能性化妝品、功能性 食品和醫(yī)藥保健品，為長期在不良環(huán)境中工作和生活的人們，提供了一 種有效抵抗不良環(huán)境的方式，充分發(fā)揮活酵母細(xì)胞衍生物對抗高溫極端 環(huán)境的作用、解決極端環(huán)境對人類健康的不利影響，提供一種有效的途 徑，有顯著的經(jīng)濟效益及社會效益。


圖1為對本發(fā)明活酵母細(xì)胞衍生物(LYCD)中的多糖進行紅外光 譜分析的分析圖。
具體實施方式
下面結(jié)合實施例對本發(fā)明做進一步詳述，以下實施例只是描述性 的，不是限定性的，不能以此限定本發(fā)明的保護范圍。實施例1:一種活酵母細(xì)胞衍生物(LYCD)的生產(chǎn)方法，包括如下步驟 G).菌種選擇選用微生物活酵母菌作為菌種；(2) .酵母培養(yǎng)液的制備采用麥芽汁10&rix作為斜面培養(yǎng)基，采用 YEPD培養(yǎng)基作為液體培養(yǎng)基，將保存在麥芽汁斜面培養(yǎng)基的酵母菌轉(zhuǎn) 接到液體培養(yǎng)基，在28'C溫度條件下培養(yǎng)至對數(shù)期12h制得酵母培養(yǎng) 液；(3) .極端高溫刺激將酵母培養(yǎng)液自適應(yīng)溫度轉(zhuǎn)變于高溫35'C應(yīng)激 30min，而且，酵母培養(yǎng)液在對數(shù)前期、中期和末期時均為高溫35。C;(4) .菌體收集采用冷凍離心機對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液在 4000rpm轉(zhuǎn)速下離心分離處理10min，收集酵母菌體；(5) .菌體破壁采用高壓均質(zhì)機(最好為意大利生產(chǎn))在130Mpa 壓力下對所收集的酵母菌體的進行細(xì)胞壁破碎處理，處理3次。(6) .活酵母細(xì)胞衍生物的提取將破壁后的酵母細(xì)胞進行離心分離， 去除沉淀，制得的胞內(nèi)提取物即為活酵母細(xì)胞衍生物。本實施例制得的活酵母細(xì)胞衍生物理化性質(zhì)如下-性質(zhì)為乳白色液體；pH值 7.3;可溶性固性物 《1%;維生素B^ 》11"g/mL;維生素B2: 》0.8ug/mL;多糖 》6.4pg/mL;氨基酸 》5mg/mL;SOD (超氧化物歧化酶) 》38.07 U/mg;CAT (過氧化氫酶) >7.588 U/mg。上述活酵母細(xì)胞衍生物中主要成份的測定方法為-LYCD中維生素的測定采用紫外分光光度法測定其含量。LYCD中氨基酸的測定采用GB/T5009， 124-2003方法。LYCD中多糖的測定采用硫酸-苯酚法。對LYCD中多糖進行紅外光譜分析，IR吸收極大值(KBr壓片)如圖1中所示，極大吸收在3450、 2850、 1700、 1600、 1406、 1000、 577cm"處。 LYCD中SOD的測定采用聯(lián)苯三酚自氧化法。 LYCD中CAT的測定采用紫外分光光度法。 實施例2:一種活酵母細(xì)胞衍生物(LYCD)的生產(chǎn)方法，包括如下步驟(1) .菌種選擇選用微生物活酵母菌作為菌種；(2) .酵母培養(yǎng)液的制備采用麥芽汁12QBrix作為斜面培養(yǎng)基，采用 YEPD培養(yǎng)基作為液體培養(yǎng)基，將保存在麥芽汁斜面培養(yǎng)基的酵母菌轉(zhuǎn) 接到液體培養(yǎng)基，在3(TC溫度條件下培養(yǎng)至對數(shù)期8h制得酵母培養(yǎng)液;(3).極端高溫刺激將酵母培養(yǎng)液自適應(yīng)溫度轉(zhuǎn)變于高溫37'C應(yīng)激 28min，而且，酵母培養(yǎng)液在對數(shù)前期、中期和末期時均為高溫37°C;(4) .菌體收集采用冷凍離心機對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液在 4000rpm轉(zhuǎn)速下離心分離處理8min，收集酵母菌體；(5) .菌體破壁采用高壓均質(zhì)機(最好為意大利生產(chǎn))在120Mpa 壓力下對所收集的酵母菌體的進行細(xì)胞壁破碎處理，處理4次。(6) .活酵母細(xì)胞衍生物的提取將破壁后的酵母細(xì)胞進行離心分離， 去除沉淀，制得的胞內(nèi)提取物即為活酵母細(xì)胞衍生物。本實施例制得的活酵母細(xì)胞衍生物理化性質(zhì)如下.-性質(zhì)為乳白色液體；pH值 6.8;可溶性固性物 《1%;維生素Bp ^11ng/mL;維生素B2: 》0.8"g/mL;多糖 》6.4嗎/mL;氨基酸 》5mg/mL;SOD (超氧化物歧化酶) >38.07U/mg;CAT (過氧化氫酶) >7.588U/mg。由本發(fā)明生產(chǎn)方法制得的活酵母細(xì)胞衍生物，其維生素、多糖、氨基酸、SOD、 CAT含量均有較大提高，因此當(dāng)其作為添加劑應(yīng)用于化妝 品、食品及醫(yī)藥等產(chǎn)品中時，所得的功能性產(chǎn)品其保濕、抗衰老作用則 更為突出。
權(quán)利要求
1. 一種活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其特征在于生產(chǎn)方法包括如下步驟(1).菌種選擇選用微生物活酵母菌作為菌種；(2).酵母培養(yǎng)液的制備將保存在麥芽汁斜面培養(yǎng)基的酵母菌轉(zhuǎn)接到液體培養(yǎng)基，在28-30℃溫度條件下培養(yǎng)至對數(shù)期8-12h制得酵母培養(yǎng)液；(3).極端高溫刺激將酵母培養(yǎng)液自適應(yīng)溫度轉(zhuǎn)變于高溫35-37℃應(yīng)激28-30min；(4).菌體收集對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液離心分離處理8-10min，收集酵母菌體；(5).菌體破壁采用高壓均質(zhì)機對所收集的酵母菌體進行細(xì)胞壁破碎處理，處理3-4次；(6).活酵母細(xì)胞衍生物的提取將破壁后的酵母細(xì)胞進行離心分離，去除沉淀，制得的胞內(nèi)提取物即為活酵母細(xì)胞衍生物。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其特征 在于在酵母培養(yǎng)液的制備步驟中，所采用的培養(yǎng)基為斜面培養(yǎng)基 采用麥芽汁10-12QBriX，液體培養(yǎng)基采用YEPD培養(yǎng)基。
3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其特征在于在菌體收集步驟中采用冷凍離心機對高溫應(yīng)激后的酵母培養(yǎng)液在4000rpm轉(zhuǎn)速下進行離心處理。
4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其特征 在于在菌體破壁步驟中所采用高壓均質(zhì)機對所收集的酵母菌體進行 細(xì)胞壁破碎處理的壓力為120-130Mpa。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種活酵母細(xì)胞衍生物的生產(chǎn)方法，其步驟為選用酵母菌作為菌源，采用麥芽汁作為斜面培養(yǎng)基，采用適合酵母菌生長的YEPD培養(yǎng)基作為液體培養(yǎng)基進行液體菌種培養(yǎng)；液體菌種培養(yǎng)至對數(shù)期8h～12h制得酵母培養(yǎng)液；將酵母培養(yǎng)液由最適溫度轉(zhuǎn)變至37℃高溫，應(yīng)激30min；采用冷凍離心機對酵母培養(yǎng)液進行離心分離，并收集酵母菌體；采用高壓均質(zhì)機對酵母菌體細(xì)胞壁進行破碎處理；將酵母細(xì)胞再次離心分離，去除沉淀，制得活酵母細(xì)胞衍生物。本生產(chǎn)方法不采用傳統(tǒng)蛋白酶水解的方法進行破壁，而是選擇高壓均質(zhì)機破碎酵母細(xì)胞，破碎效果好、操作方便、易于推廣應(yīng)用，可實現(xiàn)工業(yè)化，同時具有生產(chǎn)成本低、投資少、實用性強的優(yōu)點。
文檔編號A61K36/06GK101250490SQ200810052549
公開日2008年8月27日 申請日期2008年3月28日 優(yōu)先權(quán)日2008年3月28日
發(fā)明者玉 李, 王春霞, 路福平, 高艷玲, 黃正梅 申請人:天津科技大學(xué)