專利名稱：：枳椇子提取物及其制備方法與在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及枳模子提取物及其制備方法與在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
：肝癌是我國常見的惡性腫瘤之一，是我國位居第二的癌癥"殺手"，常見于中年男性。因其惡性度高、病情進(jìn)展快，病人早期一般沒有什么不適，但一旦出現(xiàn)癥狀就診，就已經(jīng)屬于中晚期。故肝癌的治療難度大，一般患者發(fā)病后生存時(shí)間僅為6個(gè)月，人稱"癌中之王"。根據(jù)調(diào)查結(jié)果表明，目前男性前三位的新發(fā)癌癥分別是肺癌、結(jié)腸癌和鼻咽癌，女性則是乳癌、結(jié)腸癌及肺癌，充分說明了肺癌和結(jié)腸癌在新發(fā)癌癥群中的危害性。從植物中尋找高效低毒的抗癌藥物，成為國內(nèi)外抗癌藥物研究的重點(diǎn)。有效的抗癌化合物和中草藥有效部位的抗癌復(fù)方制劑都具有重要的臨床價(jià)值。枳模子為鼠李科拐棗屬植物枳模(H(weniaduleisThunb.)的干燥成熟帶肉質(zhì)花序軸的種子。《中國藥物植物志》中又稱為北枳模，又稱為雞爪梨、拐棗、甜半夜。產(chǎn)于河北、山東、山西、河南、陜西、甘肅、四川北部、湖北西部、安徽、江蘇、江西(廬山)。生于海拔200-1400米的次生林中或庭園栽培。中醫(yī)認(rèn)為枳模子有清熱利尿，解酒毒之功效，主治酒病、煩熱、口渴、嘔吐、二便不利等癥等。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的是提供枳模子提取物及其制備方法與在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明提供的制備枳模子提取物方法，是用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從枳模子中提取得到的。其中，所用有機(jī)溶劑具體可為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一種或其任意比例的混合物，優(yōu)選體積百分含量為95%的乙醇水溶液。各種常用的提取方法均適用于該方法，優(yōu)選回流提取；提取的溫度為60-10(TC;提取次數(shù)至少為l次，優(yōu)選2-3次，每次提取時(shí)間為l-4小時(shí)。利用上述方法得到的枳模子提取物，以該枳模子提取物為活性成分的抗腫瘤藥物，及該提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用，也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。本發(fā)明提供的枳模子提取物對肝癌、結(jié)腸癌或肺癌，尤其是肝癌，均具有較強(qiáng)的抑制作用。以該提取物為活性成分的抗腫瘤藥物，可通過注射、噴射、滴鼻、滴眼、滲透、吸收、物理或化學(xué)介導(dǎo)的方法，導(dǎo)入機(jī)體如肌肉、皮內(nèi)、皮下、靜脈、粘膜組織；或是被其他物質(zhì)混合或包裹后導(dǎo)入機(jī)體。需要的時(shí)候，在上述藥物中還可加入一種或多種藥學(xué)上可接受的載體；載體包括藥學(xué)領(lǐng)域常規(guī)的稀釋劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進(jìn)劑、表面活性劑、吸附載體或潤滑劑等。上述預(yù)防和/或治療抗腫瘤的藥物可制成注射液、片劑、粉劑、顆粒劑、膠囊、口服液、膏劑、霜?jiǎng)┑榷喾N形式。其制備方法均可按照藥學(xué)領(lǐng)域的常規(guī)方法制備。上述預(yù)防和/或治療抗腫瘤藥物的用量一般為200-800mg枳模子提取物/kg體重/天，療程為10至15天。本發(fā)明提供的制備枳模子提取物的方法簡單、成本低廉。實(shí)驗(yàn)證明，本發(fā)明提供的枳模子提取物能夠有效抑制人腫瘤細(xì)胞的生長，如人肝癌、結(jié)腸癌細(xì)胞。因此本發(fā)明所提供的枳模子提取物對制備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、結(jié)腸癌藥物，具有重要的意義。具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。實(shí)施例1、制備枳模子提取物取枳模子(寧波德康生物制品有限公司)200g,將其以1:3(枳棋子95%乙醇)的重量份數(shù)比與95%乙醇(乙醇水=95:5，體積比)混合，在6(TC條件下回流提取3h,抽濾，收集第一次回流提取液1和濾渣1;將得到的所有濾渣1與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，在60"C條件下提取3h，收集第二次回流提取液2和濾渣2，并將提取液2與提取液1合并；將得到的所有濾渣2與95%乙醇混合，95%乙醇的量與第一次相同，6(TC回流提取3h，抽濾，收集第三次回流提取液3;將提取液l、提取液2和提取液3合并，將所得的提取液進(jìn)行真空減壓濃縮、真空干燥(去除乙醇和水)至恒重，得到2.54g枳模子提取物。實(shí)施例2、枳模子提取物在抑制腫瘤細(xì)胞生長中的應(yīng)用將對數(shù)生長的腫瘤細(xì)胞(人肝癌細(xì)胞BEL-7402、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8、人肺癌細(xì)胞A-549)用0.25%的胰蛋白酶消化，然后用含10%(體積百分含量)胎牛血清的DMEM完全培養(yǎng)基懸浮細(xì)胞，制成細(xì)胞懸液，并分別將各腫瘤細(xì)胞稀釋至1.0xl()S個(gè)/mL，再將其接種至96孔培養(yǎng)板中，每孔200uL，各腫瘤細(xì)胞分別接種3個(gè)孔，于37'C，5y。C02的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h;然后傾去各孔培養(yǎng)液。將實(shí)施例1制得的枳模子提取物溶解于DMSO中，然后用DMEM完全培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，得到枳模子提取物溶液，使枳模子提取物的終濃度為50ug/mL，使DMSO的濃度為10%(體積百分含量)。同時(shí)設(shè)實(shí)驗(yàn)組、對照組進(jìn)行實(shí)驗(yàn)實(shí)驗(yàn)組將枳模子提取物溶液依次分別加入上述腫瘤細(xì)胞BEL-7402、HCT-8、A-549的培養(yǎng)孔內(nèi)，各自接種3個(gè)孔，每孔加入200ul;對照組向上述各腫瘤細(xì)胞的培養(yǎng)孔內(nèi)加入含10%(體積百分含量)DMSO的DMEM完全培養(yǎng)基，各自接種3個(gè)孔，每孔加入200ul;將以上各組的培養(yǎng)板同時(shí)置于37"C、5%(302的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)2天。2天后向每孔加入20ul新鮮配制的5mg/ml四甲基偶氮唑鹽(MTT)溶液，并在37t:、5。/。C02的條件下繼續(xù)培養(yǎng)4h;小心棄上清，每孔加入200uLDMSO，室溫放置15-20min，每5min振蕩一次；在酶標(biāo)儀上測定各孔在波長490nm處的光密度值(OD值)，按公式計(jì)算腫瘤細(xì)胞生長抑制率。抑制率(％)=1-(OD實(shí)驗(yàn))/(OD對照)x綱％。實(shí)驗(yàn)設(shè)三次重復(fù)，結(jié)果取平均數(shù)。枳模子提取物對人不同腫瘤細(xì)胞BEL-7402、HCT-8、A-549的抑制作用的結(jié)果如表l所示。表1枳模子提取物對人不同腫瘤細(xì)胞的抑制作用<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>枳模子提取物的對多種腫瘤細(xì)胞的抑制作用實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，枳模子提取物在濃度為50ug/mL時(shí)對人肝癌細(xì)胞BEL-7402、結(jié)腸癌細(xì)胞HCT-8和肺癌細(xì)胞A-549均有一定程度的抑制作用，對肺癌細(xì)胞的抑制作用相對較小，對肝癌、結(jié)腸癌抑制作用較強(qiáng)，均達(dá)到50%以上。文獻(xiàn)中報(bào)道的提取物在濃度為25mg/mL時(shí)對人肝癌細(xì)胞BEL-7402的抑制率為56%，本發(fā)明在濃度僅為其1/500的條件下，對同樣的人肝癌細(xì)胞BEL-7402的抑制率達(dá)到52.56%，起到了近似同樣的效果，充分說明了本發(fā)明提供的提取物比文獻(xiàn)中提供的提取物的高效性。因此，枳模子提取物可以用于制備抗肝癌、結(jié)腸癌的藥物。權(quán)利要求1、一種枳椇子提取物，是用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從枳椇子中提取得到的。2、根據(jù)權(quán)利要求1所述的提取物，其特征在于所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一種或其任意比例的混合物。3、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取劑為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。4、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取為回流提取。5、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取溫度為60-100。c。6、根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的提取物，其特征在于所述提取次數(shù)至少為1次，優(yōu)選2-3次；每次提取時(shí)間為l-4小時(shí)。7、一種制備權(quán)利要求1-6任一所述的枳模子提取物的方法，是用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從枳模子中提取得到的。8、根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其特征在于所述有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲垸、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯中的任意一種或其任意比例的混合物。9、根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的方法，其特征在于所述提取劑為體積百分含量為95%的乙醇水溶液。10、根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取為回流提取。11、根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取溫度為60-100.C。12、根據(jù)權(quán)利要求7或8所述的提取物，其特征在于所述提取次數(shù)至少為l次，所述每次提取的時(shí)間為l-4小時(shí)。13、以權(quán)利要求l-6任一所述的枳模子提取物為活性成分的抗腫瘤藥物。14、根據(jù)權(quán)利要求13所述的抗腫瘤藥物，其特征在于所述腫瘤為肝癌、結(jié)腸癌或肺癌，優(yōu)選肝癌。15、權(quán)利要求l-6任一所述的枳模子提取物在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。16、根據(jù)權(quán)利要求15所述的應(yīng)用，其特征在于所述腫瘤為肝癌、結(jié)腸癌或肺癌，優(yōu)選肝癌。全文摘要本發(fā)明公開了一種枳椇子提取物及其制備方法與在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。該方法是用水和/或有機(jī)溶劑作為提取劑，從枳椇子中提取得到。所用有機(jī)溶劑為甲醇、乙醇、石油醚、氯仿、二氯甲烷、乙酸乙酯、正丁醇、苯或甲苯?；亓魈崛r(shí)的溫度為60-100℃；提取次數(shù)至少為1次，每次提取時(shí)間為1-4小時(shí)。該方法工藝簡單、成本低廉，所得提取物可有效抑制人腫瘤細(xì)胞的生長，如人肝癌、結(jié)腸癌或肺癌細(xì)胞。本發(fā)明提供的枳椇子提取物對制備抗腫瘤藥物，尤其是抗肝癌、結(jié)腸癌藥物具有重要的意義。文檔編號(hào)A61P35/00GK101390979SQ20081022606公開日2009年3月25日申請日期2008年11月5日優(yōu)先權(quán)日2008年11月5日發(fā)明者巖劉,唐亞林,瑋戴,莉譚申請人:中國科學(xué)院化學(xué)研究所