專利名稱：瘢痕疙瘩和增生性瘢痕根治治療藥的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及彈性纖維形成促進劑以及瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療藥。
背景技術(shù)：
本說明書中使用的簡略符號如下。GAG 葡萄糖胺聚糖 CS 硫酸軟骨素CS-A 硫酸軟骨素ACS-B 硫酸軟骨素BCS-C 硫酸軟骨素CCSPG 硫酸軟骨素蛋白多糖GAGase 葡萄糖胺聚糖分解酶CSase 軟骨素酶(硫酸軟骨素分解酶)CSase-ABC 軟骨素酶 ABCCSase-B 軟骨素酶 BCSase-AC 軟骨素酶 AC增生性瘢痕或瘢痕疙瘩可理解為皮膚上產(chǎn)生的創(chuàng)傷在愈合的過程中無法再生原 有的正常組織，而形成纖維性的、被稱為“瘢痕組織”的組織，即，所謂的創(chuàng)傷愈合中的異常 (非專利文獻1、2)。增生性瘢痕是由于大的深的創(chuàng)傷、或感染·異物混入·不適當(dāng)?shù)目p合 等妨礙創(chuàng)傷愈合之類的原因而產(chǎn)生，而瘢痕疙瘩如被蟲咬或預(yù)防接種等由極輕微的創(chuàng)傷產(chǎn) 生，具有超過原有創(chuàng)傷范圍擴展的特征(非專利文獻2、3)。但是，增生性瘢痕和瘢痕疙瘩的 病變部位的共同點都是以胞外基質(zhì)的過量蓄積和細胞增殖為主要特征的紅腫性病變。病變 部位非常硬，皮膚的伸縮性顯著受限。由此，不僅伴隨有患部疼痛，特別是病變涉及到關(guān)節(jié) 部位時，會引起關(guān)節(jié)活動區(qū)域的限制等功能性障礙?；颊邽橛變簳r，可能導(dǎo)致病變部位的生 長障礙，增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的治療不只是由于美容的理由，從其功能性的角度考慮也 很重要。但是目前尚未有增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的適當(dāng)?shù)膭游飳嶒災(zāi)Ｐ痛嬖冢洳∫?病 態(tài)的闡明幾乎沒有大的進展。目前進行的處置方法如下。1)壓迫固定療法通常在病變部位表面直接粘貼一個面上帶有粘合劑的海綿(> 7卜>、7 4夕^ 卜 > (注冊商標(biāo))等)，將其用外科膠帶壓迫、固定(非專利文獻4 6)。病變部位為活動 部位時，進一步在其上纏繞繃帶或支撐物，或穿著束帶或圍腰(非專利文獻7)。通過這些壓 迫使病變部位平坦，減輕疼痛或癢感，但終止壓迫則病變部位再次隆起，疼痛或癢感復(fù)發(fā)。2)外科療法病變部位小時、或者為寬度窄的增生性瘢痕時，將其切除，進行適當(dāng)?shù)男纬赏饪瓶p 合則癥狀減輕。但是，拆線后必須進行三個月左右的壓迫固定療法(非專利文獻8)。另外，該療法無法應(yīng)用于寬度較大的病變部位或熱燒傷等涉及廣范圍的增生性瘢痕。并且為瘢痕 疙瘩時，即使通過切除使病變部位平坦，也會從此處復(fù)發(fā)，產(chǎn)生比手術(shù)前更廣范圍的病變部 位(非專利文獻16)。為防止該復(fù)發(fā)，必須在切除后進行放射線療法，放射線療法僅限于降 低復(fù)發(fā)率，并不是根治療法(非專利文獻16)。3)覆蓋材料療法 自Perkins等人的報告(非專利文獻9)以來，可以采用通過粘貼硅膠片來進行增 生性瘢痕或瘢痕疙瘩的治療，改善自覺癥狀。其作用機理據(jù)說是保濕效果，但詳細情況尚不 明確(非專利文獻10)。也有采用水膠體覆蓋材料代替硅膠的療法。但是該療法僅限于改 善自覺癥狀，效果不定，并且也有很多連自覺癥狀的改善也無法確認的病例，并不是根治療 法。4)藥物療法是對增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的病變部位局部注射類固醇藥(曲安西龍液)來進行 (非專利文獻11)。通過該注射，病變部位平坦，紅腫消退，并且可以止癢。但是根據(jù)給予量 的不同，可能發(fā)生皮膚萎縮、低色素沉著、過度的色素沉著、毛細管擴張等全身性副作用，無 法長時間給予。另外也不適用于廣范圍的病變(非專利文獻12、非專利文獻16)。并且對 于女性來說，即使少量給予也會發(fā)生月經(jīng)不調(diào)等副作用。并且類固醇藥終止注射時，很多患 者會出現(xiàn)復(fù)發(fā)，因此不是根治療法，患者只能長期就醫(yī)。類固醇藥的作用是基于抑制細胞因 子等的抗炎癥效果和由其引發(fā)的瘢痕疙瘩細胞(瘢痕疙瘩中具有特征性形態(tài)的大型的成 纖維細胞)數(shù)目的減少。類固醇治療導(dǎo)致的復(fù)發(fā)顯示只是通過抗炎癥作用誘導(dǎo)瘢痕疙瘩 細胞數(shù)目減少，不能達到根治目的(非專利文獻16)。除局部注射之外，還有粘貼含有倍他 米松或氟氫縮松等類固醇的貼劑的方法，但只是可見自覺癥狀的改善，效果不穩(wěn)定。另外根 據(jù)患者的不同，可能容易發(fā)生膠布皮炎(，一7 Α^Λ)。而內(nèi)服療法是使用曲尼司特(非 專利文獻13)。這也只是可能改善癢等的自覺癥狀，大多必須服用3個月以上。如上所述，以往的增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的療法即使被稱為“治療”也只是對癥療 法。即，目前的療法只是使增生性瘢痕或瘢痕疙瘩中隆起的病變部分平坦，或者一過性地改 善自覺癥狀，使病變組織轉(zhuǎn)化為正常組織的根本性治療的概念本身在增生性瘢痕或瘢痕疙 瘩的相關(guān)醫(yī)療領(lǐng)域中尚未存在。因此，目前為止，使增生性瘢痕或瘢痕疙瘩正?；?恢復(fù)為 正常組織狀態(tài))的治療藥、即根治治療藥并不存在于世上。已知人皮膚的主要構(gòu)成成分是膠原、彈性纖維、GAG。有報告指出，增生性瘢痕或瘢 痕疙瘩中存在I、III、VI型膠原的過量蓄積(非專利文獻14、15)、彈性纖維的正常結(jié)構(gòu)的缺 損(非專利文獻17、18)。彈性纖維是富于伸縮性、容易延伸，如果除去力則會復(fù)原的、如橡 膠或彈簧的纖維，主要成分是彈性蛋白。彈性纖維的具體形成機理尚不明確，可能是在被稱 為微原纖維的纖維周圍有彈性蛋白沉積、交聯(lián)而成。已知微原纖維的主要構(gòu)成蛋白之一是 原纖蛋白-1。增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的病變組織的胞外基質(zhì)中，彈性蛋白在原纖蛋白-1上 的沉積、交聯(lián)缺損(非專利文獻17)。專利文獻1中記載，根據(jù)CSase-B或CSase-AC抑制成纖維細胞增殖的試驗結(jié)果， 可將CSase用于纖維性組織尺寸的減小。但是，即使將其用于瘢痕疙瘩，也只限于抑制成纖 維細胞增殖、使病變部分平坦這樣的以往的概念。具有細胞增殖抑制作用的類固醇藥如果 中止給予，則瘢痕疙瘩等復(fù)發(fā)，也無法用于增生性瘢痕或瘢痕疙瘩的根治治療，這樣，只是抑制成纖維細胞增殖，是無法期待病變部分正?；?。瘢痕疙瘩患者病變部位的組織與銀屑病患者的病變組織、或小鼠銀屑病模型動物 的皮膚組織不同，其特征在于由異常蓄積的膠原構(gòu)成的致密的膠原纖維束絡(luò)合，這些膠原 纖維束透明化、CSPG在胞外基質(zhì)中異常蓄積。另外，瘢痕疙瘩的組織學(xué)特征是在人正常組 織中可見的彈性纖維(彈性蛋白沉積在原纖蛋白-ι上并交聯(lián)所得的纖維)缺失。在人以外的動物中不會產(chǎn)生瘢痕疙瘩等，可以愈合，因此如之前所述，目前無法開 發(fā)可以評價對瘢痕疙瘩的根治治療效果的試驗系統(tǒng)。因此如本發(fā)明所述，瘢痕疙瘩等病變 組織本身恢復(fù)為正常組織的根治治療的概念并不存在，可以認為上述的恢復(fù)是不可能的。
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發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的課題在于提供可以使人特有的難治性疾病一增生性瘢痕或瘢痕疙瘩恢 復(fù)正常組織狀態(tài)并根治(正?；?的治療藥。本發(fā)明人等為解決上述課題進行了深入的努力，結(jié)果領(lǐng)先世界，成功地構(gòu)建了可 以正確評價對瘢痕疙瘩疾病的治療效果的試驗系統(tǒng)。由此，不僅對于瘢痕疙瘩等組織體積 的縮小、對于與瘢痕疙瘩等的根治治療相關(guān)的組織的正?；^程也可進行評價。這里，正常 化的過程是指瘢痕疙瘩組織中彈性纖維結(jié)構(gòu)的再生、異常增殖的瘢痕疙瘩細胞的減少、過 量蓄積的膠原纖維束的減少、透明化的消失、瘢痕疙瘩組織的縮小。該新試驗系統(tǒng)是采集 5mm方形瘢痕疙瘩患者病變部位組織，在免疫功能不全一裸小鼠的背部皮下制作最小限度 的皮下袋、以及通過結(jié)合使用錨釘縫合(anchoring sutures)等的精密技術(shù)進行移植并固 定的方法。該方法中，在動物皮膚的真皮內(nèi)，瘢痕疙瘩患者病變部位的組織可長時間保持瘢 痕疙瘩的特征，可通過對病變部位給予被檢物質(zhì)進行治療效果的評價。與瘢痕疙瘩等組織的正?；嚓P(guān)，本發(fā)明人等進一步構(gòu)建了作為體外評價系統(tǒng)的 彈性纖維形成測試(-，7卜/ - +〉7 Τ" 7)。該試驗系統(tǒng)是可以測定受驗物質(zhì)抑 制彈性纖維(彈性蛋白在原纖蛋白-ι上沉積并交聯(lián)所得的纖維)的狀態(tài)的試驗系統(tǒng)。本 發(fā)明人等使用上述試驗系統(tǒng)進一步進行深入研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)分解CS-A、CS-B和CS-C的酶 具有促進彈性纖維形成、瘢痕疙瘩或增生性瘢痕的根治治療等的新的用途，從而完成了本 發(fā)明。本發(fā)明的主要內(nèi)容如下。(1)彈性纖維形成促進劑，該彈性纖維形成促進劑含有分解CS-A、CS_B和CS-C的酶。(2)上述⑴所述的彈性纖維形成促進劑，其中，上述酶是來自普通變形菌 (Proteus vulgaris)白勺 CSase—ABC。(3)瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療劑，該根治治療劑含有分解CS-A、CS_B 和CS-C的酶。(4) (3)所述的根治治療劑，其特征在于該根治治療劑促進彈性蛋白與原纖蛋白 的締合。本發(fā)明還涉及分解CS-A、CS-B和CS-C的酶在彈性纖維形成促進劑的制備中的應(yīng)用，以及分解CS-A、CS-B和CS-C的酶在瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療劑的制備中 的應(yīng)用。



圖1是表示包含瘢痕疙瘩患者病變部位和正常部位的皮膚組織的顯微鏡觀察結(jié) 果的圖(照片)。斜線的范圍是瘢痕疙瘩病變的部位，結(jié)構(gòu)不同的相鄰的部位是正常皮膚 組織的圖像。左圖是蘇木精-伊紅(HE)染色，右圖是彈性van Gieson(EVG)染色的標(biāo)本。 EVG是可以使彈性纖維染色為黑色的染色方法。圖2是表示瘢痕疙瘩組織和正常皮膚組織中彈性纖維構(gòu)成成分的表達相關(guān)的試 驗結(jié)果的圖(照片)。圖2A是通過RT-PCR擴增兩種組織中的彈性纖維構(gòu)成成分的mRNA， 進行電泳的結(jié)果的圖(照片)。圖2B是表示通過免疫組織化學(xué)染色檢測兩種組織中彈性纖 維構(gòu)成成分的蛋白質(zhì)的表達以及是否在胞外基質(zhì)中存在的結(jié)果的圖(照片)。圖2B的上圖 是對彈性蛋白進行染色的標(biāo)本。圖2B下左圖是對原纖蛋白-1進行染色的標(biāo)本。圖2B下 右圖是通過蘇木精對每個瘢痕疙瘩細胞的核進行染色的標(biāo)本。圖3是表示蓄積在瘢痕疙瘩組織中的CS的分析結(jié)果的圖(照片)。左上圖是不對 正常皮膚組織切片進行酶處理即進行愛茜藍染色的標(biāo)本。左下圖是不對瘢痕疙瘩組織切片 進行酶處理即進行愛茜藍染色的標(biāo)本。右邊的三張圖自上而下是將瘢痕疙瘩組織切片進行 CSase-ABC, CSase-B或CSase-AC處理，然后進行愛茜藍染色的標(biāo)本照片。圖4是通過體外彈性纖維形成測試(工，^卜/工 ^ 7七^ )來表示彈性 纖維形成的圖(照片)。左圖是表示彈性蛋白纖維局部存在于胞外基質(zhì)中的染色結(jié)果，右圖 是表示原纖蛋白-ι纖維局部存在于胞外基質(zhì)中的染色結(jié)果。圖5是通過體外彈性纖維形成測試來表示彈性纖維形成中各種CS(CS_A、CS-B或 CS-C單獨以及各種CS組合所得的CS)的抑制效果的圖(圖表)。在胞外基質(zhì)上沉積的彈 性蛋白纖維染色后，可以將彈性蛋白沉積面積轉(zhuǎn)化成數(shù)值。圖表是將各種CS添加組的彈性 蛋白沉積面積相對于未添加CS組的相對比制成圖表。圖6是表示體內(nèi)彈性纖維形成中注射CSase-ABC的治療效果的觀察結(jié)果圖(照 片)。圖6A的兩張照片是患者的瘢痕疙瘩病變部位的照片以及病理照片(移植前)。右圖 是左圖的用圓圈圈起來的部分的放大圖。圖6B的兩張照片是表示將瘢痕疙瘩組織移植到 裸小鼠的背部皮下兩處后、注射CSase-ABC得到的治療效果的觀察結(jié)果圖(照片)。圖6B 左圖表示剛移植后的結(jié)果，圖6B右圖表示注射CSase-ABC和注射緩沖液的結(jié)果。圖6C的 兩張照片是表示移植后第35天的CSase-ABC注射組的瘢痕疙瘩組織的顯微鏡觀察結(jié)果圖 (照片)。自上而下分別為緩沖液注射組和CSase-ABC注射組的彈性van Gieson (EVG)染 色圖(照片)。圖7是表示體內(nèi)彈性纖維形成中緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、 CSase-A注射的治療效果的觀察結(jié)果圖(照片)。圖7A的兩張照片是患者病變部位的病理 照片(左)和用圓圈圈起來的部分的放大照片(右)(移植前)。圖7B是將瘢痕疙瘩組織 移植到裸小鼠的背部皮下后進行緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、CSase-AC注 射，移植后第35天的治療效果的觀察結(jié)果圖(照片)。圖8是在將瘢痕疙瘩組織移植到裸小鼠的背部皮下后進行緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、CSase-AC注射，移植后第35天的治療效果的組織學(xué)研究結(jié) 果圖(照片)。從左到右是表示緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、CSase-AC注 射的結(jié)果的照片。上部分是拍攝到殘留移植組織的面積的低倍率的顯微鏡照片。中部分是 拍攝到彈性纖維結(jié)構(gòu)的再生狀態(tài)、膠原纖維束以及透明化狀態(tài)的中等程度倍率的顯微鏡照 片。下部分是拍攝到殘留瘢痕疙瘩細胞的高倍率的顯微鏡照片。上部分和中部分是進行了 彈性van Gieson(EVG)染色的照片。下部分是進行了 HE染色的照片。中部分的EVG照片 顯示了緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、CSase-AC注射中彈性纖維再生的程度。 通過不同倍率的照片，顯示了緩沖液注射、CSase-ABC注射、CSase-B注射、CSase-AC注射中 的移植組織片的殘留面積、彈性纖維的再生、瘢痕疙瘩細胞。
具體實施方式
以下對本發(fā)明進行詳細說明。<1>本發(fā)明的促進劑本發(fā)明的彈性纖維形成促進劑是含有分解CS-A、CS-B和CS-C的酶的彈性纖維形 成促進劑(以下也成為“本發(fā)明的促進劑”)?？稍诒景l(fā)明的促進劑中使用的分解CS-A、CS_B和CS-C的酶只要是具有分解CS_A、 CS-B和CS-C的作用的酶即可，沒有特別限定。即，可以具有分解CS-A、CS-B和CS-C以外 的GAG的作用。本說明書中，分解CS-A是指通過消去反應(yīng)將CS-A中的N-乙?；被禾擒真I切 斷、生成不飽和二糖4-硫酸的作用；分解CS-B是指作用于CS-B、生成不飽和二糖或四糖； 分解CS-C是指通過消去反應(yīng)將CS-C中的N-乙?；被禾擒真I切斷、生成不飽和二糖 (或四糖)6-硫酸。作為在本發(fā)明的促進劑中使用的酶，具體可使用CSase-ABC(來自普通變形菌，日 本特開平 6-153947 號公報；T. Yamagata, H. Saito, 0. Habuchi, S. Suzuki, J. Biol. Chem.， 243,1523 (1968) ；S. Suzuki,H. Saito,Τ. Yamagata,K. Anno,N. Seno,Y. Kawai,Τ. Furuhashi, J. Biol. Chem.，243，1543 (1968))。另外，本發(fā)明中使用的CSase-ABC可以使用市售商品。例 如有生化學(xué)工業(yè)株式會社制備的軟骨素酶ABC(商品目錄編號100332)。作為實施例中可使用的酶，除上述CSase-ABC之外，還已知有=CSase-AC(來 自 月干素黃桿菌(Flavobacterium heparinum) ；T. Yamagata, H. Saito, 0. Habuchi, S. Suzuki, J. Biol. Chem.，243，1523 (1968)) ；CSase-ACII (來自金黃節(jié)桿菌(Arthrobacter aurescens) ；K. Hiyama, S. Okada, J. Biol. Chem. ,250,1824 (1975) ；K. Hiyama, S. Okada, J. Biochem. (Tokyo)，80，1201 (1976)) XSase-ACIII (來自黃桿菌屬 Hpl02 (Flavobacterium sp.Hpl02)；宮園博文、菊池博、吉田圭一、森川清志、德安清親，生化學(xué).，61、1023 (1989))、 CSase-B( * 自月干 i H 木干胃；Y. M. Michelacci, C. P. Dietrich, Biochem. Biophys. Res. Commun.，56，973 (1974)、Y. Μ· Michelacci，C. P. Dietrich, Biochem. J.，151，121 (1975)；前 山賢一、多和田明、上野暁子、吉田圭一，生化學(xué).，57，1189(1985))等，也可以使用這些軟 骨素酶的任意一種。本發(fā)明中使用的上述CSase-ABC除作為主要成分的CSase-ABC (以下也稱為“裂解 酶I ”)之外，還已知存在所謂的“軟骨素硫酸裂解酶II” (日本特開平10-262660，以下稱為“裂解酶II ”)，本發(fā)明中使用的酶可以以含有裂解酶II的形式利用，也可以使用只含有各 組分的、高純度純化的組分，其中優(yōu)選使用只含有裂解酶I的、高純度純化的組分。上述高純度CSase-ABC組分(裂解酶I組分)和裂解酶II組分的獲得方法例如可 參照日本特開2002-335968或日本特開平10-262660。另外，這里所述的CSase-ABC的“來源”是指以原來保有編碼該CSase的基因的生 物作為起源。例如來自普通變形菌的CSase-ABC是指由普通變形菌原來保有的基因所生產(chǎn) 的CSase-ABC。因此，來自普通變形菌的軟骨素酶ABC當(dāng)然包含由普通變形菌本身生產(chǎn)的、 也包含利用由普通變形菌獲得的CSase-ABC基因在其它細胞中生產(chǎn)的軟骨素酶ABC等。進 一步包含使用利用上述基因制備的突變體CSase-ABC基因所生產(chǎn)的重組突變體CSase-ABC 寸。本發(fā)明中使用的酶優(yōu)選為純化為可用作藥物的程度、實質(zhì)上不含有不允許作為藥 物混入的物質(zhì)的酶。例如優(yōu)選具有100U/mg蛋白以上的酶活性的純化的CSase-ABC，特別優(yōu) 選使用具有100U/mg蛋白以上的酶活性、實質(zhì)上不含有內(nèi)毒素、核酸、蛋白酶含量在檢出極 限以下的純化的CSase-ABC。需要說明的是，本說明書中，CSase的IU (單位)是在最佳pH和最佳溫度附近的條 件下，每分鐘由CS游離出的1微摩爾反應(yīng)產(chǎn)物所需的酶量。以下給出各種CSase的IU的定義。CSase-ABC的IU定義為在pH 8. 0、37°C下、每分鐘由CS游離出1微摩爾不飽和二 糖所需的酶量。CSase-AC(來自肝素黃桿菌)的IU定義為在pH 7. 3、37°C下、每分鐘由CS 游離出1微摩爾不飽和二糖所需的酶量。CSase-B(來自肝素黃桿菌)的IU定義為在pH 8. 0、37°C下，每分鐘由CS-B生成 相當(dāng)于1微摩爾Δ 4-己糖醛酸殘基的UV吸收物質(zhì)所需的酶量。本發(fā)明以及實施例中使用的酶的酶活性是在上述各種酶的最佳條件下測定不飽 和二糖生成量，與IU酶所產(chǎn)生的生成量比較而進行定量。例如，通過使用酶活性為100U/mg蛋白以上的軟骨素酶ABC，在作為注射用藥物給 予生物體內(nèi)時不會對周邊組織產(chǎn)生影響，可以適當(dāng)?shù)胤纸饽繕?biāo)部位(例如瘢痕疙瘩或增生 性瘢痕)的蛋白多糖的CS，可制成安全性和有效性高的藥物。上述CSase-ABC例如可按照 日本特開平6-153947號公報所述的方法獲得，也可以使用市售商品。 本發(fā)明促進劑也可以用作實驗用的試劑。本發(fā)明也包含含有分解CSase-A、CSase-B和CSase-C的酶的彈性纖維再生劑(以 下也稱為“本發(fā)明的再生劑”)的概念。本發(fā)明的再生劑中使用的酶優(yōu)選使用CSase-ABC，其中優(yōu)選來自普通變形菌的 CSase-ABC，極為優(yōu)選使用只含有裂解酶I的高度純化的組分。如之前所述，在瘢痕疙瘩組織中，由于彈性蛋白沒有沉積、交聯(lián)于原纖蛋白-1上， 因此彈性纖維的結(jié)構(gòu)缺失。這里，通過給予本發(fā)明的再生劑，可以引發(fā)彈性蛋白與原纖蛋白 的締合，可以再生彈性纖維。本發(fā)明的再生劑中使用的“分解CSase-A、CSase-B和CSase-C 的酶”等的說明或優(yōu)選的給予方法、給予次數(shù)等與本發(fā)明的治療藥相同。<2>本發(fā)明的治療藥本發(fā)明的治療藥是含有分解CS-A、CS-B和CS-C的酶的瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療藥(以下也稱為“本發(fā)明的治療藥”)。本發(fā)明的治療藥可以只含有分解CS-A、CS_B和CS-C的酶作為有效成分，還可以進 一步與該酶一起配合其它藥效成分。需要說明的是，該藥效成分通過與該酶配合或組合給 予，只要一種物質(zhì)不抑制另一種物質(zhì)原本具有的作用的物質(zhì)即可，沒有特別限定。對本發(fā)明的治療藥的給予途徑?jīng)]有特別限定，可以將本發(fā)明的有效成分溶解于例 如水、緩沖液、生理鹽水等中，注射到皮下、皮內(nèi)、肌內(nèi)等。本發(fā)明的治療藥可以與局部麻醉藥等結(jié)合使用。需要說明的是，本發(fā)明中，治療不僅是在罹患對象疾病后事后對患者進行的常規(guī) 含義的治療，也包含為了防止瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的發(fā)生·復(fù)發(fā)而事前進行的預(yù)防 處置。本發(fā)明中，根治治療并不只是使病變部位的尺寸縮小、或作為對癥療法使用，而是 使病變部位恢復(fù)為正常組織，根本且完全地治愈。由后述的參考例可知，在CS-A、CS-B和/或CS-C共存的培養(yǎng)體系中，培養(yǎng)瘢痕疙 瘩細胞，則彈性蛋白在胞外基質(zhì)上的沉積、即，與原纖蛋白的締合受到抑制。還由實施例可 知，在瘢痕疙瘩組織中，通過給予分解CS-A、CS-B和CS-C的酶，可以使彈性蛋白與原纖蛋白 締合，由此引發(fā)彈性纖維的再生，結(jié)果可以進行瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療。本發(fā)明的治療藥含有在瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕疾病部位使分解CS-A、CS_B和 CS-C的酶促進彈性蛋白與原纖蛋白的締合，即，通過使彈性纖維再生來治療瘢痕疙瘩和/ 或增生性瘢痕的有效量。這里，“有效量”是指在瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕中促進彈性纖維再生、改善瘢痕 疙瘩和/或增生性瘢痕狀態(tài)并使其正?；?、預(yù)防復(fù)發(fā)的有效的量。該量根據(jù)患者的癥狀、病 變部位的體積、年齡等而不同，只要是在瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕中促進彈性纖維形成、 改善 預(yù)防瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕狀態(tài)的有效量即可，沒有特別限定，例如每5mm3病變 部位一次給予的本發(fā)明的治療藥中，可例舉0.0IU以上、0. 02U以上、0.05U以上、0. IU以上、 0. 5U以上、IU以上、2U以上、4U以上等。更具體地，可例舉0. 01 5U、0. 01 4U、0. 01 2U、0. 01 1U、0. 01 0. 5U、0. 01 0. 1U、0. 01 0. 05U、0. 01 0. 02U、0. 02 5U、0. 02 4U、0. 02 2U、0. 02 1U、0. 02 0. 5U、0. 02 0. 1U、0. 02 0. 05U、0. 05 5U、0. 05 2U、0. 05 1U、0. 05 0. 5U、0. 05 0. 1U、0. 1 5U、0. 1 4U、0. 1 2U、0. 1 1U、0. 1 0. 5U、0. 5 5U、0. 5 4U、0. 5 1U、1 5U、1 4U、1 2U、2 5U、2 4U、4 5U 的范 圍本發(fā)明的治療劑的給予次數(shù)可以是1天1次，也可以是1天2 4次或者是分成 更多次給予，可以根據(jù)需要每天或在適當(dāng)?shù)奶鞌?shù)內(nèi)以必要的期間給予進行上述給予。本發(fā)明的治療藥的適用對象只要是瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕即可，沒有特別限 定，可廣泛應(yīng)用于真性瘢痕疙瘩、瘢痕性瘢痕疙瘩、增生性瘢痕、成熟瘢痕(例如，可例舉青 春痘痕等)等。實施例以下根據(jù)實施例更詳細地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并不受這些實施例的限定。[參考例1]瘢痕疙瘩病變部位與正常皮膚部位的觀察由瘢痕疙瘩患者中摘除含有瘢痕疙瘩病變部位和正常皮膚部位的人組織檢樣作為組織材料。將檢樣用4%多聚甲醛在4°C下固定24小時，然后石蠟包埋，制備石蠟塊，制 備3μπι的石蠟切片。脫石蠟后進行蘇木精-伊紅(HE)染色、彈性van Gieson(EVG)染色， 制備標(biāo)本。使用顯微鏡觀察瘢痕疙瘩組織和正常皮膚組織。結(jié)果如圖1所示。用線標(biāo)示的部分是瘢痕疙瘩病變部位，相鄰的部分為正常皮膚 部位。通過EVG染色，在瘢痕疙瘩病變部位以外的正常皮膚部位可以確認被染色為黑色的 彈性纖維結(jié)構(gòu)(箭頭)，瘢痕疙瘩病變部位的大部分可見透明化，可以確認彈性纖維結(jié)構(gòu)形 成缺失。[參考例2]瘢痕疙瘩病變組織與正常皮膚組織中彈性纖維構(gòu)成成分的mRNA表達由人檢樣中摘除瘢痕疙瘩病變組織(4名 )和正常皮膚組織(3名)作為組織材料。 使用RNeasy Plus試劑盒(株式會社* 7 >制備)，由瘢痕疙瘩組織、正常皮膚組織中提 取總RNA。使用advantage RT for PCR試劑盒(日本 夕卜> · fM 7 # > > >株式會社 制備)，由1 μ g總RNA中合成cDNA，對于彈性纖維構(gòu)成成分的7種蛋白，通過RT-PCR研究 其mRNA的表達。PCR中使用的引物如表1所示。使用Blend Taq-plus (注冊商標(biāo))(東洋紡織株式會社制備)進行PCR，擴增特異 性序列，通過電泳確認。PCR的條件是變性94°C 30秒、退火58°C 30秒、延伸72°C 1分鐘。 DANCE、MFAP-2、GAPDH是進行30個循環(huán)，彈性蛋白、原纖蛋白_1、纖維蛋白_1、EMILIN是進 行35個循環(huán)。[表 1]
靶DNA序列預(yù)測尺寸
_(bp)
原彈性蛋白F 5'AAGCAGCAGCAAAGTTCG3'(SEQIDNO:l)
R 5'ACCTGGGACAACTGGAATCC3'(SEQ ID NO:2)287
原纖蛋白-1F 5'GTGAGATCAACATCAATGGAGC3'(seq ω NO:3)
R r/TTACACACTCCTGGOAACACTTCa'dSEQiDNO^)180
纖維蛋白-1F 5'GATGTCCTCCTGGAGGCCTGCTGTG3'(seq Π) NO:5)
f -,R rj'TTGGGTCGGCAGCGGAAGGATCCCAGa'i SEQ ID NO 6) 783
LDANCEF tVCGGCACATACTTCTGCTCCT3,(SEQiDNO:7)
R 5'TCAGAATGGGTACTGCGACA3'(SEQlDNO:8)549
EMILINF 5'ATTATGACCAGAGACAGGC3'(SEQ ID NO:9)
R 5'CCGAGTGCGCCAGCTGCCCC3'(SEQ ID NO:10)290
MFAP-2F 5'ATGAGAGCTGCCTACCTCTTC3'(SEQID NO:l 1)
R S'CTAGCAGCTCCCACAGCTCCTS'iSEQ ro NO 12)551
GAPDHF 5'TGGTATCGTQGAAGGACTCATGAC3'(SEQ ID NO 13)
R 5'ATGCCAGTGAGCTTCCCGTTCAGC3'(SEQlDNO:l4) 189結(jié)果如圖2所示，參考例1中顯示了在瘢痕疙瘩病變部位彈性纖維結(jié)構(gòu)無法確認。 本試驗中，以彈性纖維的主要成分-彈性蛋白為代表，原纖蛋白-1等彈性纖維構(gòu)成成分的 mRNA在瘢痕疙瘩組織中也以與正常組織同等水平表達。這顯示瘢痕疙瘩組織中彈性纖維結(jié) 構(gòu)的缺失不是由于彈性蛋白、原纖蛋白-1等的產(chǎn)生減少。[參考例3]瘢痕疙瘩組織中彈性蛋白與原纖蛋白-1蛋白的表達參考例2中顯示了瘢痕疙瘩組織中的正常水平的彈性蛋白、原纖蛋白-1的mRNA 的表達。接著，通過免疫組織化學(xué)染色研究彈性蛋白、原纖蛋白-1的蛋白質(zhì)水平的表達和 在胞外基質(zhì)中的局部存在。順序如下。彈性蛋白染色切斷人瘢痕疙瘩組織，使用4%多聚甲醛在4°C下固定24小時。然 后石蠟包埋，制備6μπι的切片。脫石蠟后通過LSAB/HRP試劑盒(歹二 八 >株式會社 制備)進行免疫組織化學(xué)染色。使用抗彈性蛋白抗體(1 100，二 ν、午、y方u ￥ ) ”公 司制備，PR533)作為一次抗體。
原纖蛋白-ι染色切斷人瘢痕疙瘩組織，立即包埋在OCT冰凍切片包埋劑 (0. C. T. Compound)中進行冷凍。制備10 μ m冷凍切片，用Block Ace進行封閉，然后用抗 原纖蛋白-1抗體(1 200，才、才一力一公司制備)與其反應(yīng)。二次抗體使用了 Alexa Fluor 546山羊抗兔IgG抗體(1 800，毛l· # 二，一 /口一 y公司制備)。用煙酸己可堿 (Hoechst) ( ν 7 ι公司制備)進行細胞核染色。結(jié)果如圖2B所示。通過煙酸己可堿染色被染色的部分顯示在細胞核的局部存在， 即細胞的局部存在，細胞的間隙存在胞外基質(zhì)。彈性蛋白染色中，可以確認細胞內(nèi)的彈性蛋 白的表達(箭頭)，但在胞外基質(zhì)中未見纖維狀的染色圖像(以“*”舉例給出了胞外基質(zhì)的 一個部位)。在原纖蛋白-1染色中，與正常皮膚同樣，在胞外基質(zhì)中可見纖維狀的染色圖
像。 這些顯示，在瘢痕疙瘩患者病變部位的細胞中，同時產(chǎn)生了彈性蛋白和原纖蛋 白-1，但是在胞外基質(zhì)中未見彈性蛋白在原纖蛋白-1上的沉積，彈性纖維結(jié)構(gòu)缺失。產(chǎn)生 的彈性蛋白分泌在胞外基質(zhì)中，但是未作為彈性纖維與原纖蛋白-1締合·沉積，因此可認 為從瘢痕疙瘩組織中代謝·消失。[參考例4]蓄積在瘢痕疙瘩組織中的CS的分析對瘢痕疙瘩組織和正常皮膚的CS蓄積量進行了比較。對蓄積在瘢痕疙瘩組織中 的CS的種類也進行了研究。方法是與參考例3同樣，將所得的瘢痕疙瘩組織切片(6μπι)和正常皮膚組織切片 (6 μ m)脫石蠟，然后未處置或進行了各種CSase處理，然后進行了愛茜藍染色(pH 2. 5)。愛 茜藍是對組織中的GAG進行染色的色素。將CSase-ABC(來自普通桿菌，生化學(xué)工業(yè)株式會 社制備)XSase-B (來自肝素黃桿菌，生化學(xué)工業(yè)株式會社制備)、CSase-AC (來自肝素黃桿 菌，生化學(xué)工業(yè)株式會社制備)分別用0. Imol Tris-HCl緩沖液溶解，使?jié)舛葹閘mU/Ιμ 1， 在37°C下對組織切片進行了 2小時處理，然后用愛茜藍液(pH 2. 5)進行了染色。結(jié)果如圖3所示。左側(cè)的兩張圖是CSase未處置的瘢痕疙瘩組織切片(下圖)和 正常皮膚組織切片(上圖)的愛茜藍染色照片。與正常皮膚組織相比，可知瘢痕疙瘩組織 的染色性強，在瘢痕疙瘩病變部位的胞外基質(zhì)中蓄積GAG。而右側(cè)的三張照片是將瘢痕疙瘩 組織切片進行CSase-ABC、CSase-B, CSase-AC處理后進行了愛茜藍染色的照片。三種酶處 理后均比右側(cè)下圖的瘢痕疙瘩組織(未進行酶處理)的愛茜藍染色性低，但在CSase-ABC 處理中，可確認到染色性降低至與正常皮膚同等的水平。[參考例5]CS對于彈性纖維再生的影響由參考例4的結(jié)果顯示通過過量蓄積的CS，發(fā)生瘢痕疙瘩組織中的彈性纖維形 成的缺失(抑制彈性蛋白在原纖蛋白上的沉積)。因此，在體外培養(yǎng)系統(tǒng)(工，7卜^工才、 * ；^ 7 *七^ )中，人為地將CS-A、CS-B或CS-C單獨以及各種CS組合得到的CS對來自患 者的瘢痕疙瘩細胞進行處理，研究了最能引起彈性纖維結(jié)構(gòu)缺失(抑制胞外基質(zhì)中的彈性 蛋白的沉積)的CS的組合。在24孔細胞培養(yǎng)板中插入直徑13mm的培養(yǎng)板(4 株式會社制備)，以 IXio4/孔在該板上接種用explant法由人瘢痕疙瘩組織中采集的瘢痕疙瘩細胞，用DMEM 培養(yǎng)基(年二公司制備)培養(yǎng)。CS添加組是設(shè)定CS-A、CS-B和CS-C單獨以及各種CS 組合的添加組。培養(yǎng)基中每隔2天分別將400 μ g/ml上述3種CS單獨或者將它們組合，添加1ml。對照是不添加任何成分進行培養(yǎng)(未添加組)。第9天取出培養(yǎng)板，用100%甲醇 固定，用2% BSA固定，然后用抗彈性蛋白抗體(1 100，工，7 f 口夕?！?公司制備， PR533)、抗原纖蛋白-1抗體(1 200，二巧卞午、y m 9· >7 V公司制備，PR217)作為一次 抗體，與其進行反應(yīng)。二次抗體是使用Alexa Flure 546山羊抗兔IgG抗體(1 200，^ l· 、” 一"口一 7公司制備)，用煙酸己可堿(〉7 7公司制備)進行了細胞核染色。然后 通過共焦激光顯微鏡系統(tǒng)(株式會社二二 >制備，Digital Eclipse Clsi)觀察，獲得圖像。 然后使用圖像分析軟件(Image pro)進行了彈性蛋白染色的圖像分析。進行圖像的灰階校 正、圖像反轉(zhuǎn)，與核染色圖像比對，同時設(shè)定范圍，可以提取不含有核染色區(qū)域的染色范圍， 測定彈性蛋白染色部分的面積。所得的值以相對于CS未添加組的相對百分比表示(％)， 其中CS未添加組為100%。圖4表示CS未添加組的彈性蛋白染色和原纖蛋白-1染色照片。染色為橢圓形 的部分表示為煙酸己可堿染色的細胞核的部位、即細胞的局部存在，細胞間隙表示胞外基 質(zhì)的部分。CS未添加組中確認到胞外基質(zhì)中的彈性蛋白的沉積(右圖白箭頭)、原纖蛋 白-ι(左圖白箭頭)的纖維結(jié)構(gòu)。通過圖像分析軟件分析各種CS添加組的結(jié)果，將該結(jié) 果用圖表表示(圖5和表2)。在CS-A、CS-B和CS-C單獨，或?qū)S_A、CS_B和CS-C的兩種 組合得到的CS中，與CS未添加組相比，可見抑制了胞外基質(zhì)中若干纖維性彈性蛋白沉積， 在同時添加CS-A、CS-B和CS-C三種的組中，可見最強的對纖維性彈性蛋白沉積的抑制作 用。即，使三種CS共存時，顯示出起 到了最高的彈性纖維素形成抑制作用。[表2]添加各種CS時彈性蛋白在胞外基質(zhì)中的沉積量(％ )
CS-A
CS-A CS-A CS-B 未添加 CS-A CS-B CS-CCS-B
CS-B CS-C CS-C
CS-C
相對于未添加
10087.0 95.9 86.7 66.3 67.4 91.0 37.6
的百分比(％ )[實施例l]CSase-ABC對于移植瘢痕疙瘩病變組織中彈性纖維形成(再生)的影 響由參考例4的結(jié)果顯示，CSase-ABC可最良好地分解蓄積在瘢痕疙瘩組織中的CS。 由參考例5的結(jié)果顯示，CS-A、CS-B和CS-C同時共存時引發(fā)最強的彈性纖維形成抑制。因 此，選擇可以分解全部三種CS的CSase-ABC，研究該酶的體內(nèi)(移植瘢痕疙瘩病變組織)的 治療效果、即研究對彈性纖維形成(再生)和瘢痕疙瘩組織尺寸的影響。圖6A表示在移植中使用的瘢痕疙瘩患者(臨床癥狀嚴重)的組織片的病理組織 照片。右圖是左圖中的用圓圈圈起來的部分的放大圖。大型的明亮的成纖維細胞是瘢痕疙 瘩細胞數(shù)，其數(shù)目多(白箭頭)，顯著可見交聯(lián)的透明化的膠原纖維束(黑箭頭)。彈性纖維缺失。圖中未見正常皮膚。將5mm的方形瘢痕疙瘩組織由圖6A的病變組織移植到免疫 功能不全小鼠(c57balb nu/nu 6周，雄性，日本工義工瓜* 一公司制備)背部2處位置，確 認附著后，在移植8天后、18天后在移植組織片的一處(右側(cè)的移植部分)注射ΙΟμΙ溶 解于0. IM Tris緩沖液的50mU/10y 1的軟骨素酶ABC(來自普通變形菌，生化學(xué)工業(yè)株式 會社制備)。在另一處的移植組織片(左側(cè)的移植部分)局部注射10 μ 1作為對照的0. IM Tris緩沖液。移植35天后目視觀察組織片的尺寸，并拍攝照片。與上述同樣，將由相同病變組織得到的5mm的方形瘢痕疙瘩組織移植到免疫功 能不全小鼠背部，確認附著后，在移植7天后、14天后、21天后，在移植組織片的一處注射 10 μ 1溶解于0. IM Tris緩沖液的50mU/10 μ 1軟骨素酶ABC。在另一處的移植組織片局部 注射10 μ 1作為對照的0. IM Tris緩沖液。移植35天后(實驗開始6周后)取出移植組 織片，進行組織學(xué)分析。用4%多聚甲醛在4°C下固定24小時后，制備石蠟塊。制作3μπι 的切片，脫石蠟后通過彈性van Gieson(EVG)染色進行標(biāo)本制作，然后使用顯微鏡觀察移植 部位的皮膚組織。在圖6B 表示在免疫功能不全的小鼠中剛移植瘢痕疙瘩組織片后和移植4周后的 照片。左側(cè)的照片是剛移植了瘢痕疙瘩組織片后的樣子，右側(cè)的照片是移植后35天后 的照片。右側(cè)照片的左側(cè)移植部分是注射緩沖液(對照)的瘢痕疙瘩組織片，右側(cè)的移植 部分是注射CSase-ABC的瘢痕疙瘩組織片?？芍ㄟ^注射CSase-ABC，右側(cè)的瘢痕疙瘩組織 片與注射緩沖液的移植片相比極端縮小。圖6C表示實施了緩沖液注射或CSase-ABC注射的瘢痕疙瘩組織片在移植后35天 后的組織(EVG染色)觀察結(jié)果的照片。其結(jié)果，在緩沖液注射組的組織中，完全未見彈性纖維形成，絕大部分透明化，但 在CSase-ABC注射組的組織中，可在廣范圍內(nèi)確認染色為黑色的彈性纖維形成(黑箭頭)， 確認到引起了彈性纖維結(jié)構(gòu)的再生。并且染色為紅色的膠原纖維束(白箭頭)的狀態(tài)為與 正常皮膚類似的狀態(tài)，透明化消失。由以上的結(jié)果，通過注射CSase-ABC，可以確認彈性纖維的再生、交聯(lián)膠原纖維 束和透明化的消失、以及誘導(dǎo)瘢痕疙瘩組織體積的顯著縮小，可以證實本發(fā)明人的注射 CSase-ABC可成為以彈性纖維再生為機理的瘢痕疙瘩的根治治療藥的構(gòu)想。[實施例 2] CSase-ABC、CSase-B, CSase-AC 的治療效果的比較按照與實施例1同樣的方法進行CSase-ABC、CSase-B, CSase-AC的治療效果的比 較。將CSase-ABC、CSase-B和CSase-AC分別溶解于0. Imol Tris-HCl緩沖液中，使?jié)舛?為50mU/10y 1，分別在移植組織片注射10 μ 1。圖7Α表示采集了移植片的瘢痕疙瘩患者 (臨床癥狀中等)病變部位的病理組織照片。右圖是左圖中的用圓圈圈起來的部分的放大 圖。瘢痕疙瘩細胞數(shù)目(白箭頭)多，但膠原的透明化程度比實施例1(圖6Α)少。彈性纖 維缺失，圖中未見正常部位。圖7Β的照片從左到右是在背部一側(cè)移植來自患者的瘢痕疙 瘩組織片，附著后每隔1周進行1次、共計3次的緩沖液給予、CSase-ABC注射、CSase-B注 射、CSase-AC注射，在移植后第35天拍攝的小鼠背部的照片。通過CSase-ABC注射，瘢痕 疙瘩組織片可見顯著的移植組織片尺寸的縮小，其程度達到了無法與小鼠皮膚區(qū)分程度的 平坦。在CSase-B注射中，可見移植組織片尺寸有一些縮小，而在CSase-AC注射中，幾乎未見移植組織切片的縮小。為了確認CSase-ABC注射后的移植組織是否達到與正常組織同樣的組織圖像、 艮口，達到彈性纖維的再生、交聯(lián)膠原束和透明化消失，進行了與實施例1同樣的組織學(xué)研 究。作為比較，對于緩沖液注射、CSase-B注射、CSase-AC注射個體也進行了同樣的組織學(xué) 研究(圖8)。上部分是用線圈起殘留瘢痕疙瘩組織，表示殘留面積。為了計算CSase-B注 射、CSase-AC注射、CSase-ABC注射例與緩沖液注射例中的殘留人瘢痕疙瘩組織面積的相 對值，是使用Image-Pro Express J5. 1測量殘留瘢痕疙瘩組織面積(用線圈起的面積)。與 緩沖液注射液中的殘留人瘢痕疙瘩組織面積相比，CSase-B注射中面積有些縮小，CSase-AC 注射中有約一半的面積縮小，CSase-ABC注射中可見顯著的縮小，與圖7B的目視結(jié)果一致。 圖8的中間部分是為了表示彈性纖維的再生程度和透明化的狀態(tài)而將上部分的分別用圓 圈圈起的部分放大的組織照片。在緩沖液注射、CSase-B注射、CSase-AC注射個體中，可見很多透明化和膠原纖維 的交聯(lián)(黑箭頭)，而在CSase-ABC注射個體中，完全未見透明化和膠原纖維的交聯(lián)，可見明 確的彈性纖維的再生(白箭頭)。與實施例1中的CSase-ABC注射個體的結(jié)果相比，組織全 體中未見彈性纖維再生，這可以認為是由于瘢痕疙瘩組織形成正常組織，而開始與裸小鼠 的組織同化。以往已知裸小鼠的皮膚中沒有彈性纖維形成。CSase-B注射、CSase-AC注射 個體中未見明確的彈性纖維結(jié)構(gòu)。CSase-B注射個體的中間部分的照片中央部的較濃的結(jié) 構(gòu)不是彈性纖維，而是交聯(lián)的膠原束(染色為紅色)。下部分表示是進一步放大的瘢痕疙瘩 細胞的圖像(HE染色)。與正常的人成纖維細胞相比，細胞較大、核也較大，可明顯染色，這 是瘢痕疙瘩細胞(箭頭)。在緩沖液注射、CSase-B注射、CSase-AC注射中可見很多瘢痕疙 瘩細胞，但在CSase-ABC注射中，瘢痕疙瘩細胞消失(全部為正常成纖維細胞)。3次計數(shù) 一個視野中的瘢痕疙瘩細胞數(shù)目，計算平均值。以緩沖液例為100時，分別用％表示各自的 相對數(shù)。上述結(jié)果匯總示于表3中。[表 3]
權(quán)利要求
彈性纖維形成促進劑，該彈性纖維形成促進劑含有分解硫酸軟骨素A、硫酸軟骨素B和硫酸軟骨素C的酶。
2.權(quán)利要求1所述的彈性纖維形成促進劑，其中，上述酶是來自普通變形菌的軟骨素 酶 ABC。
3.瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的根治治療藥，該根治治療藥含有分解硫酸軟骨素A、硫 酸軟骨素B和硫酸軟骨素C的酶。
4.權(quán)利要求3所述的根治治療藥，其特征在于該根治治療藥促進彈性蛋白與原纖蛋 白的締合。
全文摘要
本發(fā)明提供瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的有效治療藥。具體來說，提供含有來自普通變形菌(proteus vulgaris)的軟骨素酶ABC的彈性纖維再生劑、以及含有該再生劑作為有效成分的瘢痕疙瘩和/或增生性瘢痕的治療藥。
文檔編號A61K38/51GK101969986SQ200880120686
公開日2011年2月9日 申請日期2008年12月8日 優(yōu)先權(quán)日2007年12月7日
發(fā)明者內(nèi)藤素子, 池田實香, 鈴木茂彥 申請人:生化學(xué)工業(yè)株式會社;鈴木茂彥