專利名稱：一種中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其測(cè)定方法和應(yīng)用的制作方法
一種中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其測(cè)定方法和應(yīng)用技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明屬于中藥分析領(lǐng)域，涉及中藥組合物制劑的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，本發(fā)明還涉及 該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法和該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在本組合物質(zhì)量控制中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
本發(fā)明涉及的中藥組合物是由川芎、天麻兩味藥按照一定比例組合后，采用水提 取與醇提取相結(jié)合的工藝制備成的中藥制劑，具有活血平肝、通絡(luò)止痛的功效，瘀血阻絡(luò)或 肝陽(yáng)上亢所致的頭痛日久、痛有定處，或兼有頭暈脅痛、失眠煩躁、舌質(zhì)暗或有瘀斑；血管神 經(jīng)性頭痛。為了更全面、有效的控制本中藥組合物的質(zhì)量控制水平，和國(guó)際接軌，讓臨床用 藥安全及療效更加有所保證，需要對(duì)本中藥組合物采用更為先進(jìn)的質(zhì)量控制手段。
由于中藥及其制劑均為多組分復(fù)雜體系，因此評(píng)價(jià)其質(zhì)量應(yīng)采用與之相適應(yīng)的， 能提供豐富鑒別信息的檢測(cè)方法，但現(xiàn)行的顯微鑒別、理化鑒別和含量測(cè)定等方法都不足 以解決這一問題。中藥指紋圖譜是指某些中藥材或中藥制劑經(jīng)適當(dāng)處理后，采用一定的分 析手段，得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)特征的色譜圖或光譜圖。中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量 化的鑒定手段，能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學(xué)成分的種類與數(shù)量，進(jìn)而對(duì)藥 品質(zhì)量進(jìn)行整體描述和評(píng)價(jià)。所以，中藥指紋圖譜已經(jīng)成為目前國(guó)際上較為先進(jìn)的中藥質(zhì) 量控制手段。本中藥組合物還沒有作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的指紋圖譜公開報(bào)道。
美國(guó)食品藥品管理局(FDA)植物藥產(chǎn)品工業(yè)指南、WHO草藥評(píng)價(jià)指南中均指出，如 果草藥制劑的活性成分不能鑒別，可以通過指紋圖譜(fingerprint spectrum)證明產(chǎn)品質(zhì) 量的一致。歐共體在草藥質(zhì)量指南注釋中也指出，草藥及其制劑是以整體作為有效物質(zhì)，因 此，草藥的質(zhì)量穩(wěn)定性僅靠測(cè)定已知的有效成分是不夠的，應(yīng)該通過指紋圖譜顯示其所含 的各種成分。印度草藥典、英國(guó)草藥典、德國(guó)藥用植物協(xié)會(huì)、加拿大藥用及芳香植物協(xié)會(huì)等， 也接受用指紋圖譜來保證有效成分未明的草藥產(chǎn)品質(zhì)量的一致性。目前國(guó)家藥品監(jiān)督管理 局對(duì)中藥注射劑已要求具有相關(guān)的指紋圖譜，對(duì)提高中藥注射劑的質(zhì)量起到了關(guān)鍵作用， 但對(duì)其他劑型的中藥尚沒有強(qiáng)制性要求。
中藥指紋圖譜包括中藥化學(xué)指紋圖譜、蛋白指紋圖譜、DNA指紋圖譜及生物效應(yīng)指 紋圖譜等。通常說的指紋圖譜是指化學(xué)指紋圖譜，是中藥材、中藥提取物或中成藥經(jīng)適當(dāng)處 理后，采用一定分析手段，得到的能夠標(biāo)示該中藥主要化學(xué)成分特性的色譜或光譜。
中藥化學(xué)指紋圖譜可以分為中藥光譜指紋圖譜，如紅外光譜(IR)、紫外光譜 (UV)、X射線衍射圖譜等；色譜指紋圖譜，如薄層色譜(TLC)、氣相色譜(GC)、高效液相色 譜(HPLC)、毛細(xì)管電泳圖譜(CE)等；波譜指紋圖譜，如質(zhì)譜(MS)、核磁共振波譜(NMR)等； DNA指紋圖譜；以及采用多種現(xiàn)代分析儀器聯(lián)用得到的多維多息特征譜(characteristic fingerprint of muhrdimension andmuhrdats)，如HPLC/MS、HPLC/Ms/MS、GC/MS、CE/MS等。
中藥指紋圖譜研究方法雖然較多，但色譜學(xué)方法應(yīng)是主流方法，尤其是TLC，HPLC 和GC色譜技術(shù)，已經(jīng)成為大家所公認(rèn)的三種常規(guī)的分析手段，是目前研究中藥指紋圖譜應(yīng) 優(yōu)先考慮的方法。
中藥指紋圖譜有兩個(gè)作用一是通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別中藥材的真 偽或產(chǎn)地二是通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確 保產(chǎn)品質(zhì)量的相對(duì)一致。
中藥指紋圖譜的制作和應(yīng)用通常包括(1)采集具有代表性的中藥樣品，采取適 當(dāng)?shù)姆椒ㄖ苽涔┰嚻啡芤?，并選用適當(dāng)?shù)臉?biāo)準(zhǔn)標(biāo)準(zhǔn)品(參照物)，進(jìn)行分析方法的優(yōu)選；(2) 根據(jù)確定的分析方法，對(duì)一定批次的中藥樣品進(jìn)行分離分析，將所得的多批次數(shù)據(jù)進(jìn)行處 理，得到標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜；C3)將樣品按照與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜制作相同的方法進(jìn)行樣品處理、分 離分析后，將所得的指紋圖譜圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜進(jìn)行相似度比較，一般相似度達(dá)到80% 以上即可視為該樣品為合格。相似度的計(jì)算和評(píng)價(jià)方法通常采用相關(guān)系數(shù)與相合系數(shù)或夾 角余弦法。我國(guó)中南大學(xué)、浙江大學(xué)等單位根據(jù)以上方法，編制了相應(yīng)的計(jì)算機(jī)軟件用于完 成相似度評(píng)價(jià)，其中以國(guó)家藥典委員會(huì)推薦的“中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)”應(yīng)用較^^ ο發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供作為質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)的一種中藥組合物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜。
本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供本中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法。
本發(fā)明還有一個(gè)目的是提供本中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在中藥制劑質(zhì)量控制中 的應(yīng)用。
本發(fā)明的目的是通過下列措施實(shí)現(xiàn)的
本發(fā)明涉及的中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，該指紋圖譜為高效液相色譜圖譜，該圖 譜中呈現(xiàn)6個(gè)主要色譜峰，其中3號(hào)峰是與參照物阿魏酸的峰保留時(shí)間相同的色譜峰，與3 號(hào)峰保留時(shí)間(按1計(jì))相比，其他5個(gè)色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0. 23士 10%、 2 號(hào)峰 0. 27士 10%、4 號(hào)峰 1. 20士8%、5 號(hào)峰 1. 65士 10%、6 號(hào)峰 1. 80士 10%。
上述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于所述中藥組合物是通過下列方法制備得到的 取川芎784g，天麻196g，粉碎，混合，用90%乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)，合并提取液， 濾過，濾液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1. 27 1. 28的清膏I ；藥渣加水煎煮二次，每次1 小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1. 27 1. 28的清膏II，合并上述清膏I與清 膏II，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。本中藥制劑包括但不僅限于膠囊、軟膠囊、片劑、 丸劑、滴丸、顆粒劑的固體制劑和口服液、注射液的液體制劑。
所述的中藥組合物產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，該方法采用高效液相色譜法， 其色譜條件為
色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；
流動(dòng)相為0. 磷酸-甲醇水溶液系統(tǒng)，，其中流動(dòng)相A為0. 磷酸溶液，流動(dòng)相 B為甲醇，采用梯度洗脫；
流速為lmL/min ；
柱溫為30°C ；
檢測(cè)器采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm ；
理論板數(shù)按參照物阿魏酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000。
所述的中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其中用于高效液相色譜測(cè)定的溶液采用濃度為25 100%的甲醇作溶劑。
所述的中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其中用于高效液相色譜測(cè)定的供試 品溶液采用50%甲醇作溶劑，參照物溶液采用50%甲醇作溶劑。
所述的中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其中參照物溶液的制備是取阿魏酸 適量，精密稱定，加50%甲醇制成每ImL含20 μ g的溶液，即得。
所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，供試品溶液的制備過程如下
本組合物膠囊劑、片劑、丸劑、滴丸、顆粒劑取本中藥組合物內(nèi)容物，混勻，研細(xì)， 取約lg，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，超聲30min，過濾，取續(xù)濾液做為供試品溶 液，即得；
本組合物軟膠囊取本中藥組合物內(nèi)容物，混勻，取約lg，置錐形瓶中，精密加入 75%甲醇30mL，超聲30min，濾過，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即得；
本組合物口服液取本中藥組合物，混勻，取約10mL，至燒瓶中，精密加入95%甲 醇50mL，回流提取30min，濾過，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即得。
本組合物注射液取注射液約10mL，至燒瓶中，加入95%甲醇50mL，充分?jǐn)嚢瑁瑸V 過，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即得。
權(quán)利要求
1.一種中藥組合物的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于該指紋圖譜為高效液相色譜圖譜，該 圖譜中呈現(xiàn)6個(gè)主要色譜峰，其中3號(hào)峰是與參照物阿魏酸的峰保留時(shí)間相同的色譜峰，與 3號(hào)峰保留時(shí)間相比，其他5個(gè)色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0. 23士 10%、2號(hào)峰 0. 27士 10%、4 號(hào)峰 1. 20士8%、5 號(hào)峰 1. 65士 10%、6 號(hào)峰 1. 80士 10%。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜，其特征在于所述中藥組合物是通過下列方法 制備得到的取川芎784g，天麻196g，粉碎，混合，用90%乙醇回流提取二次，每次2小時(shí)， 合并提取液，濾過，濾液回收乙醇并濃縮成相對(duì)密度為1. 27 1. 28的清膏I ；藥渣加水煎 煮二次，每次1小時(shí)，合并煎液，濾過，濾液濃縮成相對(duì)密度為1. 27 1. 28的清膏II，合并 上述清膏I與清膏II，加入適量輔料，制成所需中藥制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的中藥制劑，包括膠囊、軟膠囊、片劑、丸劑、顆粒劑、滴丸、口服 液、注射劑。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于該方法采用高效液相 色譜法，色譜條件為色譜柱采用十八烷基硅烷鍵合硅膠色譜柱；流動(dòng)相采用0. 磷酸-甲醇水溶液系統(tǒng)，其中流動(dòng)相A為0. 磷酸溶液，流動(dòng)相B 為甲醇，采用梯度洗脫；流速為lmL/min ；柱溫為30°C ；檢測(cè)器采用紫外檢測(cè)器，檢測(cè)波長(zhǎng)為276nm ；理論板數(shù)按參照物阿魏酸峰計(jì)算，應(yīng)不低于6000。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于用于高效液相色譜測(cè) 定的溶液采用濃度為25 100%的甲醇作溶劑；優(yōu)選供試品溶液采用50%甲醇作溶劑，參 照物溶液采用50%甲醇作溶劑。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于參照物溶液的制備是 取阿魏酸適量，精密稱定，加50%甲醇制成每ImL含阿魏酸20 μ g的溶液，即得。
7.根據(jù)權(quán)利要求5所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于供試品溶液的制備過 程如下本組合物膠囊劑、片劑、丸劑、滴丸、顆粒劑取本中藥組合物內(nèi)容物，混勻，研細(xì)，取約 lg，置錐形瓶中，精密加入50%甲醇25mL，超聲30min，過濾，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即 得；本組合物軟膠囊取本中藥組合物內(nèi)容物，混勻，取約lg，置錐形瓶中，加入75%甲醇 30mL，超聲30min，濾過，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即得；本組合物口服液取本中藥組合物，混勻，取約10mL，至燒瓶中，加入95%甲醇50mL，充 分?jǐn)嚢?，濾過，取續(xù)濾液做為供試品溶液，即得。本組合物注射液取注射液約10mL，至燒瓶中，加入95%甲醇50mL，充分?jǐn)嚢?，濾過，取 續(xù)濾液做為供試品溶液，即得。
8.根據(jù)權(quán)利要求4所述的本中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于梯度洗 脫順序?yàn)闀r(shí)間(min)流動(dòng)相A (%)流動(dòng)相B (%)0-585155-5585-515-9555-60595
9.根據(jù)權(quán)利要求4所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的測(cè)定方法，其特征在于進(jìn)樣量為2μ L 50 μ L0
10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜在由川芎和天麻組成的中藥組合物質(zhì)量控制 中的應(yīng)用。
11.根據(jù)權(quán)利要求10所述的應(yīng)用，其特征在于合格中藥組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋 圖譜的相似度不低于0. 80。
12.根據(jù)權(quán)利要求11所述的應(yīng)用，其特征在于用于比較中藥組合物指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指 紋圖譜相似性的方法是采用夾角余弦法或相關(guān)系數(shù)法；優(yōu)選采用國(guó)家藥典委員會(huì)規(guī)定的中 藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)。
全文摘要
本發(fā)明屬于中藥分析領(lǐng)域，公開了一種中藥組合物標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜及其測(cè)定方法和應(yīng)用。該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜為高效液相色譜圖譜，該圖譜中呈現(xiàn)6個(gè)主要色譜峰，其中3號(hào)峰是與參照物阿魏酸的峰保留時(shí)間相同的色譜峰，與3號(hào)峰保留時(shí)間相比，其他5個(gè)色譜峰的相對(duì)保留時(shí)間分別為1號(hào)峰0.23±10％、2號(hào)峰0.27±10％、4號(hào)峰1.20±8％、5號(hào)峰1.65±10％、6號(hào)峰1.80±10％。該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜可用于在以川芎和天麻為原料藥材的中藥組合物的質(zhì)量控制，合格中藥組合物的指紋圖譜與標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜的相似度不低于0.80。該標(biāo)準(zhǔn)指紋圖譜能夠全面、有效地控制產(chǎn)品質(zhì)量，采用相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)，操作方便快捷，結(jié)論較為客觀、準(zhǔn)確。
文檔編號(hào)A61P25/04GK102028883SQ20091003546
公開日2011年4月27日 申請(qǐng)日期2009年9月28日 優(yōu)先權(quán)日2009年9月28日
發(fā)明者畢宇安, 王振中, 秦建平, 章晨峰, 胡軍華, 蕭偉 申請(qǐng)人:江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司