專利名稱：一種檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，特別是涉及一種從檸檬籽中提取檸檬苦素類 物質(zhì)的方法。
背景技術(shù)：
檸檬苦素類物質(zhì)是指檸檬苦素及其類似物所組成的混合物，混合物中主要由檸檬苦 素、諾米林兩種物質(zhì)構(gòu)成，它們都屬三萜類的物質(zhì)，是植物次生代謝的產(chǎn)物，主要存在于多種 蕓香科和楝科植物中，也是引起柑橘類果汁苦味的主要物質(zhì),具有廣泛的生物活性，如殺 蟲、抗病毒、抗腫瘤形成和抑菌等作用。檸檬苦素類物質(zhì)在抗癌、鎮(zhèn)痛、調(diào)節(jié)體內(nèi)膽固醇 水平,防止動(dòng)脈粥樣化和除蟲等方面的作用，越來越受到人們的重視，但有關(guān)研究在國內(nèi)剛剛 起步。由于檸檬苦素、諾米林結(jié)構(gòu)相似，藥理作用相同，所以統(tǒng)稱為檸檬苦素類物質(zhì)，通常 兩者不用分離使用?，F(xiàn)在市場(chǎng)上的檸檬苦素類物質(zhì)主要是從甜橙籽或柚子籽中提取，提取 得到的檸檬苦素類物質(zhì)價(jià)格昂貴，每千克近兩萬元。
大家知道，在檸檬的加工過程中會(huì)產(chǎn)生眾多的檸檬籽，它含有較多的檸檬苦素類物質(zhì)， 但是目前卻未對(duì)它加以合理利用，浪費(fèi)嚴(yán)重且污染環(huán)境。
目前對(duì)檸檬苦素類物質(zhì)進(jìn)行提取，常采用有機(jī)溶劑從甜橙籽或柚子籽中提取，所用機(jī) 溶劑為大量的石油醚。這種提取方法的成本高，有危險(xiǎn)性，環(huán)境污染嚴(yán)重，且得到的擰檬 苦素類物質(zhì)含量低,一般為80%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供一種從檸檬籽中提取檸檬苦素類物質(zhì)的方法。這種方法制備成 本低、提取含量高。
本發(fā)明的目的是這樣實(shí)現(xiàn)的 一種檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于它是將擰 檬籽作為原料，按下列步驟進(jìn)行提取原料粉碎后加水和酶制劑進(jìn)行酶解；靜置，棄去酶解 液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再釆用吸附層析分離出浸提液中的擰檬苦素類物質(zhì)，經(jīng)干 燥制得。
為了便于粉碎，上述原料最好先干燥，再將其粉碎至過60 100目篩。如果過細(xì)，細(xì)粉 容易結(jié)塊，粘在一起，不易和酶制劑混合均勻,如果太粗,則酶解時(shí)間長，擰檬苦素類物質(zhì)釋放 也不充分。
3上述酶解是指粉碎后的檸檬籽中加入檸檬籽3 5倍重量的水，再加入酶制劑纖維素 酶和果膠酶，它們?cè)谒械牧糠謩e0.3% 0.6%和0.5 1.0%,以重量百分比計(jì)。加入酶制 劑,一方面是造成檸檬籽的細(xì)胞壁、果膠、纖維素的分解，而使檸檬苦素類物質(zhì)釋放；同時(shí) 檸檬籽中有約30%的檸檬苦素類物質(zhì)，都是糖苷的形式存在，如檸檬苦素糖苷，諾米林糖苷 等，糖苷易溶于水,在現(xiàn)有提取過程中，因沒有經(jīng)酶制劑將糖苷水解為苷元形式，由于糖苷和 苷元的溶解性差異而沒能提取,造成提取率低下,而在本發(fā)明加入的酶制劑可促使檸檬苦素 糖苷，諾米林糖苷等糖苷的糖苷鍵發(fā)生酶解而斷裂,形成不溶于水的檸檬苦素、諾米林等苷 元，從而提高提取率。
酶解充分后，靜置2 4h，棄去酶解液,將沉淀物加入95。/。乙醇攪拌混勻浸提l小時(shí)；收 集濾液濃縮至6(TC相對(duì)密度為1.20 1.30,再將濃縮濾液進(jìn)行吸附層析分離提取檸檬苦素 類物質(zhì)。吸附層析選用大孔樹脂柱層析。
為了進(jìn)一步提高檸檬苦素類物質(zhì)的純度，上述濃縮液進(jìn)行大孔樹脂柱層析后，還通過 硅膠色譜柱層析進(jìn)行分離純化。
具體地說，它是將檸檬籽作為原料，包括原料干燥，粉碎至60 100目，加水和酶制 劑進(jìn)行酶解提取得酶解液；酶解充分后，靜置2 411,棄去酶解液,在沉淀物中加入95%乙醇 攪拌混勻浸提l小時(shí)，收集濾液；將濾液濃縮至60'C的相對(duì)密度為1.20 1.30;再將濃縮 的濾液進(jìn)行大孔樹脂柱層析，用水洗脫去除具有一定極性水溶性物質(zhì)，再加入乙醇進(jìn)行梯 度洗脫，收集洗脫液并濃縮；得到的濃縮洗脫液進(jìn)行硅膠色譜柱層析，用水洗至平衡，用 乙醇洗脫，分段收集洗脫液并混合，最后濃縮、干燥得檸檬苦素類物質(zhì)。
上述酶解溫度為35 45'C，時(shí)間5 7小時(shí)；上述大孔樹脂柱為AB-8樹脂，采用含量 20%、 40%、 70%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集70%洗脫液并減壓濃縮；濃縮洗脫液進(jìn) 行硅膠色譜柱層析，用70%乙醇洗脫。
本發(fā)明的有益效果為
1、 發(fā)明人充分利用檸檬產(chǎn)品廢棄物——檸檬籽作為原料，這樣不僅將生產(chǎn)過程中產(chǎn) 生的廢棄物進(jìn)行充分利用，降低了對(duì)原材料的浪費(fèi)，減少了環(huán)境污染；同時(shí)，還提高了擰 檬的附加值及工業(yè)生產(chǎn)的產(chǎn)值。發(fā)明人首創(chuàng)從檸檬籽中提取檸檬苦素類物質(zhì)，且得到的擰 檬苦素類物質(zhì)含量高，采用反相高效液相色譜法，使用C18色譜柱，以甲醇和水的混合液作 流動(dòng)相，紫外檢測(cè)器檢測(cè)測(cè)定檸檬苦素類物質(zhì)，其總含量達(dá)到95%(其中檸檬苦素50%以上、 諾米林達(dá)30%以上)。
2、 本發(fā)明采用的酶解提取方式，不同于現(xiàn)有技術(shù)常用的普通有機(jī)溶劑浸提工藝。采用酶解技術(shù)可提高檸檬苦素類物質(zhì)的釋放，同時(shí)有利于將糖苷分解為統(tǒng)一的苷元，提高收 率；提取率達(dá)90%，比之現(xiàn)有提取技術(shù)提取率高30%。
3、采用乙醇浸提、采用大孔樹脂柱層析分離和硅膠色譜柱純化，避免目前常用有機(jī) 溶劑提取法中使用大量有機(jī)溶劑而帶來的高成本、危險(xiǎn)性、以及環(huán)境污染問題。
具體實(shí)施例方式
下面通過實(shí)施例的方式進(jìn)一步說明本發(fā)明方法，但是本發(fā)明方法并不因此而限制在所 述實(shí)施例的范圍內(nèi)。
實(shí)施例1: 一種檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于它是將檸檬籽作為原料，
原料先干燥再粉碎至過60目篩；
加入原料4倍量的水、0.4%纖維素酶和0.8%果膠酶在35°(:，酶解時(shí)間7小時(shí)，提取 得酶解液，這樣可以分解細(xì)胞壁中的纖維素和果膠，使檸檬籽中的檸檬苦素類物質(zhì)充分釋 放出來，同時(shí)有利于將能溶于水的檸檬苦素類物質(zhì)糖苷水解為檸檬苦素苷元，以利于后處 理；
酶解充分后，靜置2 4h,棄去酶解液，在沉淀物中加入4-6倍重量的95%乙醇攪拌混勻 浸提1小時(shí)，收集濾液；將濾液濃縮至6(TC的相對(duì)密度為1.20 1.30;再將濃縮的濾液用 AB-8樹脂柱層析，用水洗脫去除具有極性的水溶性物質(zhì)，再加入含量分別為20%、 40%、 70%的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集70%洗脫液并減壓濃縮；得到的濃縮洗脫液進(jìn)行硅膠 色譜柱層析，用水洗至平衡，用乙醇洗脫，分段收集含有檸檬苦素類物質(zhì)的洗脫液并混合， 最后濃縮、干燥得擰檬苦素類物質(zhì)。
所得的擰檬苦素類物質(zhì)經(jīng)檢測(cè)，其總含量為96%。
實(shí)施例2: —種檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于將擰檬籽清洗，干燥，粉
碎至過60 100目篩，用3倍原料量的水,加入0.5。/。纖維素酶(15u/mg)和0.9%果膠酶 (1.8u/mg)進(jìn)行酶解，溫度4(TC，時(shí)間6h;酶解充分后，靜置2 4h,棄去上層酶解液，在沉淀 物中加入5倍重量95%乙醇攪拌混勻浸提1小時(shí)，收集濾液；將濾液濃縮至60'C時(shí)相對(duì)密 度為1.20 1.30;將濃縮濾液上大孔樹脂柱(AB-8樹脂)層析，用水洗脫，初步洗去水溶性 物質(zhì)，加入乙醇至含醇量20%、 40%、 70%并收集70%的洗脫液,將收集的70%洗脫液減壓濃 縮，將濃縮的洗脫液再上硅膠色譜柱層析，用水洗至平衡，用70%乙醇洗脫，分段收集洗脫 液，對(duì)各段收集洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，將含有擰檬苦素類物質(zhì)的洗脫液混合并減壓濃縮,最后進(jìn) 行噴霧干燥而制得檸檬苦素類物質(zhì)。
所得的檸檬苦素類物質(zhì)經(jīng)檢測(cè)，其總含量為94%。
權(quán)利要求
1、一種檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于它是將檸檬籽作為原料，按下列步驟進(jìn)行提取原料粉碎后加水和酶制劑進(jìn)行酶解；靜置，棄去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附層析分離出浸提液中的檸檬苦素類物質(zhì)，經(jīng)干燥制得。
2、 如權(quán)利要求1所述的檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于原料先干燥，再將其 粉碎至過60 100目篩；所述酶解是指粉碎后的檸檬籽中加入檸檬籽3 5倍重量的水，再加 入酶制劑纖維素酶和果膠酶，它們?cè)谒械牧糠謩e0.3% 0.6%和0.5 1.0%，以重量百分比 計(jì)；酶解充分后，靜置2 4h,棄去酶解液，將沉淀物中加入95%乙醇攪拌混勻浸提1小時(shí)；收 集濾液濃縮至60。C相對(duì)密度為1.20 1.30,再將濃縮濾液進(jìn)行吸附層析分離提取擰檬苦素類 物質(zhì)。
3、 如權(quán)利要求2所述的檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于所述吸附層析選用大 孔樹脂柱層析。
4、 如權(quán)利要求2或3所述的檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于所述濃縮濾液進(jìn) 行吸附層析分離后，再通過硅膠色譜柱層析進(jìn)行分離純化。
5、 如權(quán)利要求1所述的檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于它是將擰檬籽作為原 料；經(jīng)干燥、粉碎至60 100目；加水和酶制劑進(jìn)行酶解得酶解液；酶解充分后，靜置2 4h， 棄去酶解液，在沉淀物中加入95%乙醇攪拌混勻浸提1小時(shí)，收集濾液；將濾液濃縮至6(TC的 相對(duì)密度為1.20 1.30;再將濃縮濾液進(jìn)行大孔樹脂柱層析，用水洗脫去除具有極性的水溶 性物質(zhì)，再加入乙醇進(jìn)行梯度洗脫，收集洗脫液并濃縮；得到的濃縮洗脫液進(jìn)行硅膠色譜柱 層析，用水洗至平衡，用乙醇洗脫，分段收集洗脫液并混合，最后濃縮、干燥得擰檬苦素類 物質(zhì)。
6、 如權(quán)利要求5所述的檸檬苦素類物質(zhì)的提取方法，其特征在于所述酶解溫度為35 45°C，時(shí)間5 7h;所述吸附層析選用的大孔樹脂柱為AB-8樹脂，采用含量20%、 40%、 70% 的乙醇溶液進(jìn)行梯度洗脫，收集70%洗脫液并減壓濃縮；濃縮洗脫液進(jìn)行硅膠色譜柱層析， 用70%乙醇洗脫。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種從檸檬籽中提取檸檬苦素類物質(zhì)的方法。它是將檸檬籽作為原料，按下列步驟進(jìn)行提取原料粉碎后加水和酶制劑進(jìn)行酶解；靜置，棄去酶解液，然后在沉淀物加入乙醇浸提；再采用吸附層析分離出浸提液中的檸檬苦素類物質(zhì)，經(jīng)干燥制得。本發(fā)明充分利用檸檬產(chǎn)品廢棄物——檸檬籽作為原料，這樣不僅將生產(chǎn)過程中產(chǎn)生的廢棄物進(jìn)行充分利用，降低了對(duì)原材料的浪費(fèi)，減少了環(huán)境污染；且得到的檸檬苦素類物質(zhì)含量高，其含量達(dá)到95％；其提取率達(dá)90％，比之現(xiàn)有提取技術(shù)提取率高30％；采用乙醇浸提、采用大孔樹脂柱層析分離和硅膠色譜柱純化，降低了生產(chǎn)成本。
文檔編號(hào)A61K36/185GK101632743SQ200910104500
公開日2010年1月27日 申請(qǐng)日期2009年7月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年7月30日
發(fā)明者群 劉, 張承榮, 李天泉, 談宗華 申請(qǐng)人:重慶長龍實(shí)業(yè)(集團(tuán))有限公司