專利名稱：一種載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的制作方法
技術領域：
本發(fā)明屬藥物制劑領域，涉及一種共輸送遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種同時包載抗癌 多肽和基因藥物或化療藥物或放療藥物的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。本遞藥系統(tǒng)能夠?qū)⒖?癌多肽和基因藥物或化療藥物或放療藥物同時遞送入靶細胞內(nèi)，達到協(xié)同治療的目的。
背景技術：
基于癌癥發(fā)病機理的復雜性，在過去幾十年的研究中，通過聯(lián)合使用不同抗癌機 制的藥物以期達到“1+1 > 2”的類似“雞尾酒”療法逐漸被接受，并成為目前基礎研究和臨 床治療癌癥的一個重要方向。聯(lián)合用藥時藥物的配伍是一個關鍵性問題，合理的配制才能 夠真正起到協(xié)同的效果，這就需要對藥物各自的作用機制有明確的認識。研究表明，p53基因是人類最重要的抑癌基因，由其表達產(chǎn)生的p53蛋白是其抑癌 功能的具體執(zhí)行者。癌癥的發(fā)生與P53基因及蛋白有著十分重要的聯(lián)系，或因p53基因本 身發(fā)生突變，或因P53蛋白被一些負性調(diào)節(jié)蛋白結(jié)合而喪失活性。有研究顯示出一類抗癌 多肽，能夠有效地抑制負性調(diào)節(jié)蛋白MDM2/MDMX結(jié)合p53，使得p53能夠重新恢復活性，這 對于一些高表達負性調(diào)節(jié)蛋白的惡性腫瘤的治療有著十分重要的意義。近年來研究發(fā)現(xiàn)， P53基因及蛋白的狀態(tài)與癌癥治療的效果高度相關，癌細胞出現(xiàn)放、化療耐受的情況往往就 是其中的P53處于非正常狀態(tài)。因此，通過恢復p53正常狀態(tài)及活性，并結(jié)合放、化療及基 因治療等其他手段開展聯(lián)合治療具有十分廣闊的前景。目前，多數(shù)協(xié)同給藥的研究工作主要為簡單地將藥物或者藥物制劑進行混合，手 段單一，規(guī)范性和應用性不強，其中存在很大的提升空間。在藥物制劑研究領域，尤其是納 米遞藥系統(tǒng)中，脂質(zhì)體具有舉足輕重的地位。脂質(zhì)體是一種類似生物膜結(jié)構(gòu)的雙分子層微 小囊泡，其脂質(zhì)雙分子層可用于包載油溶性藥物，而內(nèi)水相可以包載水溶性藥物。目前脂質(zhì) 體被廣泛應用到化療藥物，基因藥物以及診斷藥物(放射性、熒光和順磁等物質(zhì))的制劑研 發(fā)當中，一定大小的脂質(zhì)體本身具有良好的被動靶向性(淋巴靶向，腫瘤靶向)，通過對脂 質(zhì)材料的修飾，可以進一步優(yōu)化脂質(zhì)體，賦予其長循環(huán)和主動靶向等功能。與其他納米遞藥 系統(tǒng)相比，尤其可貴的是，多種化療藥物的脂質(zhì)體制劑已經(jīng)上市并在臨床治療中應用。采用脂質(zhì)體同時包載可以恢復p53活性的抗癌多肽和化療藥物或基因藥物或放 療藥物等，以達到協(xié)同抗癌癥的目的，目前國內(nèi)外未見類似的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的在于提供一種可用于癌癥協(xié)同治療的共輸送納米遞藥系統(tǒng)，涉及一種 包載藥物的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，尤其涉及一種同時包載抗癌多肽和化療或基因藥物 或放療藥物的脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明的脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)能夠?qū)⒖拱┒嚯暮突熁蚧蛩幬锘蚍暖熕幬锿瑫r 遞送到靶細胞內(nèi)；本遞藥系統(tǒng)能通過靜脈給藥途徑發(fā)揮協(xié)同治療癌癥的作用。具體而言，本發(fā)明的包載藥物的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)由尋靶材料、脂質(zhì)成分和藥物組成，其充分利用組分間的性狀差異，或通過靜電吸附進行包載，或通過被動結(jié)合主 動載藥的方法，實現(xiàn)將不同藥物共同包載到脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)中，將可恢復抑癌蛋白P53 活性的抗癌多肽和基因藥物或化療藥物或放療藥物同時遞送入靶細胞內(nèi)，達到協(xié)同治療的 目的。本發(fā)明通過體外活性評價，證明了該系統(tǒng)優(yōu)于同時輸送各單一組分，能夠顯著提高其 抗癌活性，具有明確的協(xié)同治療效果。本發(fā)明的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)其粒徑為50-500nm。本發(fā)明中，所述的尋靶材料是指能夠特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的分子，與聚乙 二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)偶聯(lián)成的主動靶向復合物；所述的尋靶材料選用高分子材料，包括可以是單一的聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺 材料，如聚乙二醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺材料(PEG-DSPE)，聚乙二醇-二棕櫚酰磷脂酰膽 堿(PEG-DPPC)等，也可是多種聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺的混合材料；所述的聚乙二醇分子 量為2000-20000Da，優(yōu)選2000-5000Da，其一端為活性基團，可以與特異性結(jié)合癌細胞或靶 細胞的分子偶聯(lián)；聚乙二醇上的活性基團是馬來酰亞胺基、巰基、酰胺基、氨基、羧基、生物 素或親和素中的一種。所述的聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)，其磷脂酰乙醇胺上的脂肪酸鏈可以相 同或不同，每條脂肪鏈所含碳原子數(shù)14-20 ；優(yōu)選相同兩條脂肪酸鏈均含16個碳或18個碳。本發(fā)明中，特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞的分子包括特異性結(jié)合癌細胞或靶細胞 的抗體如anti-HER2、小分子配體如葉酸、多肽配體如RGD環(huán)肽，以及針對癌細胞或靶細胞 表面特殊靶標開展噬菌體展示篩選得到的多肽配基(如針對人腦膠質(zhì)瘤U87篩選得到的序 列為VTWTPQAWFQWV的多肽配基)或SELEX技術篩選得到的核酸適體(如針對人前列腺癌 LNCaP細胞表面抗原PSMA篩選得到的核酸適體A10PSMA Apt)。本發(fā)明采用多種磷脂材料組成脂質(zhì)膜，采用薄膜水化或逆向蒸發(fā)制備脂質(zhì)體。本 發(fā)明中，所述的磷脂材料包括荷負電的磷脂材料如磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰絲氨酸(PS) 等，中性的磷脂材料如磷脂酰膽堿(PC)、膽固醇等，荷正電的磷脂材料如磷脂酰乙醇胺 (PE)、1，2-二油?；?3-三甲基氨基內(nèi)烷(DOTAP)等。本發(fā)明的遞藥系統(tǒng)中，通過下述方式載藥1)基于各組分之間靜電吸附作用包載 藥物；幻采用被動載藥和主動載藥相結(jié)合包載藥物；本發(fā)明所遞送的藥物包括1)為恢復p53活性的抗癌多肽；幻是化療藥物、基因 藥物和放療藥物中的一種或幾種。其中，化療藥物選自烷化劑類藥物如氮芥、環(huán)磷酰胺類； 抗代謝類藥物如氟尿嘧啶、甲氨蝶呤等；抗生素類如阿霉素、柔紅霉素等；生物堿類如長春 新堿、替尼泊苷等；激素類如他昔莫芬、地塞米松等；金屬類如順鉬、抗癌銻等。放療藥物選 自診斷放射藥物如99mTc標記的放射性藥物、正電子放射性藥物氟(F18)脫氧葡萄糖等；治 療放射性藥物如mI標記的放射性藥物血卟啉及其衍生物、用于正硼中子俘獲療法的硼攜 帶劑如水溶性硼酸吖啶等；放射性增敏藥物如甘氨雙唑鈉等?；蛩幬锇[瘤特異性 凋亡基因如Apoptin基因；編碼腫瘤凋亡基因的反義RNA如針對Survivin的反義RNA ；引 起腫瘤凋亡的小干擾siRNA或發(fā)卡shRNA如針對Bcl-XL的siRNA等治療基因。除治療基 因外，質(zhì)粒DNA包括治療基因前后的DNA序列，可以是啟動子、增強子，促進治療基因轉(zhuǎn)錄的 mRNA蛋白翻譯和穩(wěn)定的DNA序列，能夠使游離基因在被轉(zhuǎn)染的細胞中復制的DNA序列。
本發(fā)明中，所述的遞藥系統(tǒng)所包載或吸附的抗癌多肽能夠通過特異性逆轉(zhuǎn)負性調(diào) 節(jié)蛋白MDM2/MDMX對p53蛋白的抑制，使p53蛋白恢復活性。此類抗癌多肽是Moppin、 Stingin 和 PMI。所述的抗癌多肽荷正電時，通過抗癌多肽與基因和陽離子脂質(zhì)三者間逐次的靜電 作用構(gòu)建共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)；所述的抗癌多肽為中性或荷負電時，先用被動載藥法 包載抗癌多肽，后用主動載藥法包載其他藥物的方法，構(gòu)建包載抗癌多肽和其他藥物的共 輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。本發(fā)明中，所述的基因藥物可與p53蛋白恢復活性的抗癌多肽同時包載，所述的 基因選自能夠引起腫瘤凋亡的治療性基因腫瘤特異性凋亡基因如Apoptin基因；編碼腫 瘤凋亡基因的反義RNA如針對Survivin的反義RNA ；引起腫瘤凋亡的小干擾siRNA或發(fā)卡 shRNA 如針對 Bcl-XL 的 siRNA。本發(fā)明中，所述的化療藥物可與p53蛋白恢復活性的抗癌多肽同時包載，所述的 化療藥物選自烷化劑類藥物如氮芥、環(huán)磷酰胺；抗代謝類藥物如氟尿嘧啶、甲氨蝶呤；抗 生素類藥物如阿霉素、柔紅霉素；生物堿類藥物如長春新堿、替尼泊苷；激素類藥如他昔莫 芬、地塞米松等；金屬類藥物如順鉬、抗癌銻。本發(fā)明中，所述的放療藥物可與p53蛋白恢復活性的抗癌多肽同時包載，所述的 放療藥物選自1311標記的放射性藥物血卟啉及其衍生物、正硼中子俘獲療法的硼攜帶劑 如水溶性硼酸吖啶，放射性增敏劑如甘氨雙唑鈉。本發(fā)明對制得的遞藥系統(tǒng)進行了評價通過荷正電的抗癌多肽先與質(zhì)粒DNA形成納米級的復合物，以此作為核心再在外 面包裹陽離子脂質(zhì)形成陽離子脂質(zhì)化遞藥系統(tǒng)，分別采用表達綠熒光蛋白和蟲熒光素酶的 質(zhì)粒DNA考察遞藥系統(tǒng)的基因遞送與轉(zhuǎn)染能力，同時也對該遞藥系統(tǒng)遞送抗癌多肽入胞發(fā) 揮其抗癌活性進行了體外評價。制備的包載抗癌多肽Moppin的陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)，以人肺癌細胞株A549為體 外模型對其抗癌活性進行評價。評價手段包括流式細胞儀測定癌細胞凋亡與死亡的比例以 及MTT法測定給藥后癌細胞生存率。結(jié)果顯示，該脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)與傳統(tǒng)陽離子脂質(zhì)體相比較，能夠顯著增強質(zhì)粒DNA 的轉(zhuǎn)染效率，同時也具有高效率遞送抗癌多肽Moppin入胞的能力，提示本發(fā)明遞藥系統(tǒng) 具有良好的用于協(xié)同治療癌癥的潛力。本發(fā)明通過中性或荷負電的抗癌多肽首先通過被動載藥法包載入脂質(zhì)體中，然后 再通過主動載藥法將化療藥物載入到脂質(zhì)體中，采用人腦膠質(zhì)瘤細胞U87對其活性進行了 體外評價。以人腦膠質(zhì)瘤U87為體外模型進行包載抗癌多肽和阿霉素的脂質(zhì)體抗癌活性評 價。結(jié)果顯示，該脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)與單一的阿霉素脂質(zhì)體或抗癌多肽脂質(zhì)體相比較，對 人腦膠質(zhì)瘤U87的殺傷能力顯著增強。提示本發(fā)明遞藥系統(tǒng)具有良好的用于協(xié)同治療癌癥 的潛力。本發(fā)明以脂質(zhì)材料作為主要載體材料，充分利用組分間的性狀差異，或通過靜電 吸附進行包載，或通過被動結(jié)合主動載藥的方法，實現(xiàn)將不同藥物同時包載于脂質(zhì)納米遞
5藥系統(tǒng)中，具有良好的應用于協(xié)同治療癌癥的潛力。與簡單的藥物或藥物制劑混合相比，共 輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)具有給藥量可控、給藥方式簡單等優(yōu)點。


圖1 共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)增強GFP質(zhì)粒轉(zhuǎn)染效果圖加入載GFP質(zhì)粒的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)(系統(tǒng)包括GFP質(zhì)粒、抗癌多肽 Stoppin和陽離子脂質(zhì))，以普通的陽離子脂質(zhì)體遞送GFP質(zhì)粒作為對照，293T細胞的流式 細胞計數(shù)(A、B)和熒光顯微鏡(a、b)表征轉(zhuǎn)染效果。IA和Ia分別為對照組，IB和Ib為載 GFP質(zhì)粒的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。圖2 共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)增強蟲熒光素酶轉(zhuǎn)染效果圖加入載蟲熒光素酶質(zhì)粒的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)(系統(tǒng)包括蟲熒光素酶質(zhì)粒、 抗癌多肽Moppin和陽離子脂質(zhì))和底物后，測定細胞發(fā)光強度，以普通的陽離子脂 質(zhì)體遞送蟲熒光素酶質(zhì)粒作為對照。圖3 共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)增強抗癌多肽入胞效率后體外活性效果圖加入載抗癌多肽Moppin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)后(系統(tǒng)包括抗癌多肽 Stoppin, GFP質(zhì)粒和陽離子脂質(zhì))，分別以陽離子脂質(zhì)體載質(zhì)粒和Moppin作為對照，以人 肺癌細胞Α549的MTT細胞活性檢測評價其體外活性。圖4 包載阿霉素與抗癌多肽的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)協(xié)同治療癌癥體外效果 圖加入載阿霉素和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)后，分別以載阿霉 素脂質(zhì)體和載Mingin脂質(zhì)體作為對照，以人腦膠質(zhì)瘤U87的MTT細胞活性檢測評價其體 外活性。
具體實施例方式通過以下實施例描述將有助于進一步理解本發(fā)明，但本發(fā)明并不局限于如下描述 范圍。實施例1包載TRAIL基因和抗癌多肽Moppin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的制備將荷正電的抗癌多肽Moppin與TRAIL基因按正負電荷比1 2的比例于純水 中混合，并渦旋1分鐘，整個過程置于室溫下進行，得到表面凈電荷為負的納米級復合物， 粒徑儀顯示其大小在150nm左右。按摩爾比1 1的比例稱取二油酸甘油磷脂酰乙醇胺 (DOPE)和二油?；?3-三甲基氨基內(nèi)烷(DOTAP)，將其混合后溶于氯仿中，在真空下旋轉(zhuǎn)蒸 發(fā)得到陽離子脂質(zhì)膜。按照多肽/質(zhì)粒/陽離子脂質(zhì)三者電荷比1 2 4的比例，將形 成的多肽/質(zhì)粒復合物加入到陽離子脂質(zhì)膜中并進行水化。水化完畢經(jīng)反復擠壓通過一定 大小的聚酯膜后得到大小在200nm左右的脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)。采用人腦膠質(zhì)瘤U87細胞進行MTT體外活性評價。結(jié)果顯示，與單一的TRAIL基 因或抗癌多肽Moppin相比，該共輸送系統(tǒng)起到了聯(lián)合TRAIL基因和抗癌多肽Moppin進 行協(xié)同治療癌癥的作用。實施例2包載其它基因藥物和抗癌多肽Moppin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的制 備
包載針對Survivin的小干擾RNA和抗癌多肽Moppin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系 統(tǒng)的制備方法同實施例1。包載針對Bcl-2的反義核酸和抗癌多肽Moppin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的制 備方法同實施例1。實施例3包載抗癌多肽Mingin和放療藥物硼酸吖啶的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng) 的制備1、脂質(zhì)體被動載藥法包載抗癌多肽按質(zhì)量比55 45 1 1稱取氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、膽固醇、聚乙二 醇-二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)和偶聯(lián)了能夠靶向腦膠質(zhì)瘤細胞的R⑶環(huán)肽的 PEG-DSPE(cylic-RGD-PEG-DSPE)作為膜材料用于制備脂質(zhì)體。將上述材料和抗癌多肽 Mingin分別溶于氯仿和純水中，其中多肽與磷脂材料質(zhì)量比為1 7，水相與有機相的體 積比為1 5。將水相和有機相混合并超聲，直至形成穩(wěn)定的乳劑。所得乳劑在真空下旋轉(zhuǎn) 蒸發(fā)2小時后，加入水化液繼續(xù)減壓蒸發(fā)直至形成均勻的脂質(zhì)體。水化完畢經(jīng)依次擠壓過 400nm、200nm和IOOnm聚酯膜，并經(jīng)kphadex CL-4B凝膠柱分離游離多肽，得粒徑為120nm 左右的載抗癌多肽的脂質(zhì)體。2、脂質(zhì)體主動載藥法包載硼酸吖啶上述被動載藥法包載抗癌多肽時，水化液用pH4. 0檸檬酸鹽緩沖液替代。經(jīng)過 Sephadex CL-4B凝膠柱交換外水相為pH7. 4的生理鹽水后，按藥脂質(zhì)量比1 20的比例將 脂質(zhì)體與水溶性硼酸吖啶于40°C下孵育1小時，并經(jīng)凝膠柱分離游離硼酸吖啶，得同時包 載抗癌多肽與硼酸吖啶的脂質(zhì)體。實施例4包載其它放療藥物和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的 制備包載放射增敏藥物依他硝唑和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的 制備方法同實施例3。包載放射增敏藥物沙納唑和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的制 備方法同實施例3。實施例5包載化療藥物阿霉素和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng) 的制備1、脂質(zhì)體被動載藥法包載抗癌多肽同實施例3種1 (脂質(zhì)體被動載藥法包載抗癌多肽)方法。2、脂質(zhì)體主動載藥法包載阿霉素上述被動載藥法包載抗癌多肽時，水化液用150mM硫酸銨溶液液替代。經(jīng)過 Sephadex CL-4B凝膠柱交換外水相為pH7. 4的生理鹽水后，按藥脂質(zhì)量比1 10的比例將 脂質(zhì)體與阿霉素于40°C下孵育1小時，并經(jīng)凝膠柱分離阿霉素，得到同時包載抗癌多肽與 阿霉素的脂質(zhì)體。實施例6包載其它化療藥物和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的 制備包載化療藥物硫酸長春新堿和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的 制備方法同實施例5。
包載化療藥物鹽酸伊立替康和抗癌多肽Mingin的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)的 制備方法同實施例5。實施例7通過荷正電的抗癌多肽先與質(zhì)粒DNA形成納米級的復合物，以此作為核心再在外 面包裹陽離子脂質(zhì)形成陽離子脂質(zhì)化遞藥系統(tǒng)，分別采用表達綠熒光蛋白和蟲熒光素酶的 質(zhì)粒DNA考察遞藥系統(tǒng)的基因遞送與轉(zhuǎn)染能力，同時對該遞藥系統(tǒng)遞送抗癌多肽入胞發(fā)揮 其抗癌活性進行體外評價。1)抗癌多肽與質(zhì)粒DNA形成納米“核心”將荷正電的抗癌多肽Moppin與質(zhì)粒DNA按適宜的正負電荷比進行混合，得到表 面凈電荷為負電的納米級復合物，通過粒徑測定儀進行表征；2)陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)的制備通過瓊脂糖電泳篩選出較優(yōu)的陽離子脂質(zhì)比例，通過薄膜旋蒸法制備陽離子脂質(zhì) 膜，按照較優(yōu)的比例將形成的多肽/質(zhì)粒復合物加入到陽離子脂質(zhì)膜中并進行水化，通過 薄膜擠壓法得到大小在200nm以下的陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)；3)脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)遞送和轉(zhuǎn)染GFP質(zhì)粒按照上述方法制備包載GFP質(zhì)粒的陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)，以細胞為體外模型 對其轉(zhuǎn)染效率進行評價。采用流式細胞儀測定GFP陽性細胞的比例和熒光顯微鏡拍攝GFP 轉(zhuǎn)染效果進行評價；4)脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)遞送和轉(zhuǎn)染蟲熒光素酶質(zhì)粒按照上述方法制備包載蟲熒光素酶質(zhì)粒的陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)，以細胞為 體外模型對其轉(zhuǎn)染效率進行評價；5)脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)遞送抗癌多肽的體外抗癌活性評價按上述方法制備包載抗癌多肽Moppin的陽離子脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)，以人肺癌細胞株 Α549為體外模型對其抗癌活性進行評價。評價手段包括流式細胞儀測定癌細胞凋亡與死亡 的比例以及MTT法測定給藥后癌細胞生存率。結(jié)果顯示，該脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)與傳統(tǒng)陽離子脂質(zhì)體相比較，能夠顯著增強質(zhì)粒DNA 的轉(zhuǎn)染效率，同時也具有高效率遞送抗癌多肽Moppin入胞的能力，提示本遞藥系統(tǒng)具有 良好的用于協(xié)同治療癌癥的潛力。實施例8通過中性或荷負電的抗癌多肽首先通過被動載藥法包載入脂質(zhì)體中，然后再通過 主動載藥法將化療藥物載入到脂質(zhì)體中，采用人腦膠質(zhì)瘤細胞U87對其活性進行體外評 價。1)脂質(zhì)體被動載藥法包載抗癌多肽磷脂材料包括氫化大豆磷脂酰膽堿(HSPC)、膽固醇、聚乙二醇-二硬 脂酰磷脂酰乙醇胺(PEG-DSPE)和偶聯(lián)能夠靶向腦膠質(zhì)瘤細胞的R⑶環(huán)肽的 PEG-DSPE (cylic-RGD-PEG-DSPE)。將磷脂材料溶入氯仿等有機溶劑，將中性或荷負電的抗 癌多肽Mingin溶于水相中，兩者混合并超聲，形成穩(wěn)定的乳劑，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)后，加入外水相 水化形成均勻的脂質(zhì)體溶液。經(jīng)過擠壓過膜，并CL-4B凝膠柱分離游離多肽， 得一定粒徑的載抗癌多肽的脂質(zhì)體。
2)脂質(zhì)體主動載藥法包載化療藥在上述被動載藥法包載抗癌多肽時，水化液用150mM的硫酸銨溶液替代。經(jīng)過 Sephadex CL-4B凝膠柱交換外水相為pH7. 4的生理鹽水后，將脂質(zhì)體與一定濃度的阿霉素 溶液混合孵育，并經(jīng)凝膠柱分離游離阿霉素，得到包載抗癌多肽和化療藥物阿霉素的脂質(zhì) 體。3)脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)的體外抗癌活性評價以人腦膠質(zhì)瘤U87為體外模型進行包載抗癌多肽和阿霉素的脂質(zhì)體抗癌活性評 價。結(jié)果顯示，該脂質(zhì)遞藥系統(tǒng)與單一的阿霉素脂質(zhì)體或抗癌多肽脂質(zhì)體相比較，對 人腦膠質(zhì)瘤U87的殺傷能力顯著增強。提示本遞藥系統(tǒng)具有良好的用于協(xié)同治療癌癥的潛 力。
權利要求
1.一種載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，由尋靶材料、脂質(zhì)成分和藥物組 成，所述藥物與恢復抑癌蛋白P53活性的抗癌多肽通過靜電吸附包載或被動結(jié)合主動載藥 的方式共同包載到脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)中后并同時遞送至靶目標；所述的遞藥系統(tǒng)其粒徑為50-500nm。
2.按權利要求1所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的藥物為 基因藥物或化療藥物或放療藥物。
3.按權利要求1所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的尋靶材 料是特異性結(jié)合癌細胞的靶向分子與聚乙二醇-磷脂酰乙醇胺偶聯(lián)成的復合物。
4.按權利要求3所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的靶向分 子選自anti-HER2抗體、小分子配體、多肽配體或核酸適體。
5.按權利要求4所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的小分子 配體為葉酸；所述的多肽配體為RGD環(huán)肽或VTWTPQAWFQWV多肽；所述的核酸適體為AlO PSMA Apt。
6.按權利要求3所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的聚乙二 醇-磷脂酰乙醇胺，其磷脂酰乙醇胺上的脂肪酸鏈可以相同或不同，每條脂肪鏈所含碳原 子數(shù)為14-20。
7.按權利要求6所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的磷脂酰 乙醇胺，其相同的兩條脂肪酸鏈均含16個碳或18個碳。
8.按權利要求1所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述脂質(zhì)成分 中，脂質(zhì)體膜材料選自磷脂酰膽堿、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰甘油、膽固醇或/ 和陽離子脂質(zhì)。
9.按權利要求8所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的陽離子 脂質(zhì)是1，2- 二油?；?3-三甲基氨基內(nèi)烷。
10.按權利要求8所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的抗癌多 肽是 Stoppin、Stingin 或 PMI。
11.按權利要求2所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的基因 藥物選自腫瘤特異性凋亡基因、編碼腫瘤凋亡基因的反義RNA或引起腫瘤凋亡的小干擾 siRNA 或發(fā)卡 shRNA。
12.按權利要求2所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的化療 藥物是烷化劑類藥物、抗代謝類藥物、抗生素類藥物、生物堿類藥物、激素類藥或金屬類藥 物。
13.按權利要求2或12所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的化 療藥物選自氮芥、環(huán)磷酰胺、氟尿嘧啶、甲氨蝶呤、阿霉素、柔紅霉素、長春新堿、替尼泊苷、 他昔莫芬、地塞米松、順鉬或抗癌銻。
14.按權利要求2所述的載藥的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)，其特征在于，所述的放療藥 物選自1311標記的放射性藥物血卟啉及其衍生物、水溶性硼酸吖啶或甘氨雙唑鈉。
全文摘要
本發(fā)明屬藥物制劑領域，涉及一種共輸送遞藥系統(tǒng)，具體涉及一種同時包載抗癌多肽和基因或化療藥物或放療藥物的共輸送脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)。本遞藥系統(tǒng)由尋靶材料、脂質(zhì)成分和藥物組成，其充分利用組分間的性狀差異，或通過靜電吸附進行包載，或通過被動結(jié)合主動載藥的方法，實現(xiàn)將不同藥物共同包載到脂質(zhì)納米遞藥系統(tǒng)中，將可恢復抑癌蛋白p53活性的抗癌多肽和基因藥物或化療藥物或放療藥物同時遞送入靶細胞內(nèi)，達到協(xié)同治療的目的。本發(fā)明通過體外活性評價，證明了該系統(tǒng)優(yōu)于同時輸送各單一組分，能夠顯著提高其抗癌活性，具有明確的協(xié)同治療效果。
文檔編號A61K48/00GK102114000SQ20091024804
公開日2011年7月6日 申請日期2009年12月31日 優(yōu)先權日2009年12月31日
發(fā)明者李翀, 陸偉躍 申請人:復旦大學