專利名稱：具有抑菌抗炎活性的瓜子金發(fā)酵口服液及制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于抑菌抗炎鎮(zhèn)痛藥物領(lǐng)域，涉及來源于瓜子金經(jīng)發(fā)酵后產(chǎn)物的制劑。
背景技術(shù)：
瓜子金系遠志科遠志屬植物(Polyagla j即onica HOUTT.)的全草，中醫(yī)認為其具有祛痰止咳，散瘀止血，寧心安神，解熱消腫等功效，主要用來治療咳嗽多痰，骨關(guān)節(jié)結(jié)核，多發(fā)性膿腫，急性扁桃體炎，咽喉炎，心悸，失眠，泌尿系統(tǒng)結(jié)石，疔瘡腫瘤等。《中國藥用植物圖鑒》中認為瓜子金"根為鎮(zhèn)靜、祛痰劑，能益智安神，散郁化痰，消癰腫。治療支氣管炎，肺炎，咳嗽多痰，驚悸，健忘，癰疽瘡腫，喉痹。"現(xiàn)代研究證明瓜子金含有齊墩果烷型三貼皂苷是其主要的活性成分，具有治療抑郁，益智，消炎鎮(zhèn)痛，抗焦慮和催眠的作用(張東明，等.中草藥，2005，36(12) :1767-1771 ;Zhang D， et al. Chem. Pharm. Bull. 1995，43 :115-120)。 藥酒，古代同其它酒統(tǒng)稱"醪醴"。我國最早的醫(yī)書《黃帝內(nèi)經(jīng)》中就有"湯液醪醴論篇"。以白酒、黃酒和米酒浸泡或煎煮具有治療和滋補性質(zhì)的各種中藥或食物，去掉藥渣所得的口服酒劑，即為藥酒。因為酒有"通血脈，行藥勢，溫腸胃，御風(fēng)寒"等作用，所以，藥和酒配制可以增強藥力，既可治療疾病和預(yù)防疾病，又可用于病后的輔助治療。隨著人們生活水平的不斷提高，藥酒作為一種有效的防病祛病、養(yǎng)生健身的飲料或藥物制劑而被廣泛應(yīng)用。 瓜子金經(jīng)過甜酒曲發(fā)酵后，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黃酮類化合物和氨基酸。目前，有關(guān)瓜子金發(fā)酵及其發(fā)酵后制備的口服液的研究未見報道，本發(fā)明報道了瓜子金發(fā)酵后制備的口服液具有明顯的抑菌抗炎作用。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是提供一種新的具抑菌抗炎活性的瓜子金發(fā)酵口服液及制備方法。 本發(fā)明公開的具抑菌抗炎活性的瓜子金發(fā)酵口服液是以瓜子金為原料，以甜酒曲
為發(fā)酵菌種，采用固體發(fā)酵技術(shù)，過濾后提取加工，所得浸膏用蒸餾水溶解，加入甜味劑即
得而成。所得瓜子金發(fā)酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黃酮類化合物和氨基酸；
其pH值為4. 0 6. 0，具有抑菌抗炎的藥物制劑的用途。 本發(fā)明的瓜子金發(fā)酵口服液的制備方法包括以下步驟 1.瓜子金發(fā)酵液的制備 (1)瓜子金的預(yù)處理將瓜子金洗凈，在50°C 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，備用； (2)糯米的預(yù)處理糯米篩選淘洗干凈后，采用常規(guī)方法蒸熟，例如用足夠量的凈水浸潤8 10h，撈出瀝水，上籠蒸至熟而不糊、米粒飽滿、無夾心、顆粒分開，手捏柔軟有彈性且不粘手時，立即取出用涼開水沖涼至30 4(TC，靜置至無大量水濾出，備用；
(3)瓜子金發(fā)酵培養(yǎng)基的制備由如下重量份原料構(gòu)成的培養(yǎng)基
瓜子金 50 80
甜酒曲 5 10 將上述物品加到800 1200重量份預(yù)處理好的糯米中，在無菌條件下均勻混合，分裝，紗布封口 ； (4)置2『C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 72h，收集發(fā)酵液備用； (5)將發(fā)酵液在41:條件下離心分離，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金發(fā)酵浸膏，放入4°C的環(huán)境中保存； 2.瓜子金發(fā)酵口服液的制備 將上述瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按1 : 3 8的比例混合，并加入5 10%的甜味劑，在配料容器中混合均勻而成口服液，利用現(xiàn)有的技術(shù)分裝入瓶，消毒滅菌后于-20
4t:冰箱保存。 本發(fā)明的實驗證明在體外抑菌試驗中，瓜子金發(fā)酵制劑對金黃色葡萄球菌、大腸
桿菌、枯草芽孢桿菌、假單孢桿菌均有一定的抑菌效果，對金黃色葡萄球菌的抑菌圈直徑達到24mm，其最低抑菌濃度(MIC)為25mg/ml，表明具有較強的抑制細菌生長的作用。在二甲苯致小鼠耳廓腫脹試驗中，對小鼠的腫脹抑制率為42. 52% ;在小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗中，對小鼠的鎮(zhèn)痛抑制率為58. 08%，表明具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛的作用。動物急性毒性實驗證明無毒副作用，安全可靠。
具體實施例方式
下面結(jié)合實施例來對本發(fā)明進一步說明。
實施例1 :瓜子金發(fā)酵浸膏的制備 (1)瓜子金的預(yù)處理將瓜子金洗凈，在6(TC以下干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，備用。 (2)糯米的預(yù)處理糯米篩選淘洗干凈后，采用常規(guī)方法蒸熟，例如用足夠量的凈水浸潤8 10h，撈出瀝水，上籠蒸至熟而不糊、米粒飽滿、無夾心、顆粒分開，手捏柔軟有彈
性且不粘手時，立即取出用涼開水沖涼至35t:，靜置至無大量水濾出，備用。
(3)瓜子金發(fā)酵培養(yǎng)基的制備由如下重量份原料構(gòu)成的培養(yǎng)基
瓜子金 70
甜酒曲 7 將上述物品加到1000重量份預(yù)處理好的糯米中，在無菌條件下均勻混合后，分裝后，紗布封口。
(4)置2『C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)60h，收集發(fā)酵液備用。 (5)將發(fā)酵液在41:條件下離心，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金發(fā)酵浸膏，放入4°C的環(huán)境中保存。
實施例2 :瓜子金發(fā)酵口服液的制備 (1)將上述瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按照1 : 5的比例混合，同時加入6%木糖醇
即制成口服液，利用現(xiàn)有的技術(shù)分裝入瓶，消毒滅菌后并于4t:冰箱保存。 (2)將上述瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按照1 : 6的比例混合，同時加入6%的木糖醇即制成口服液，利用現(xiàn)有的技術(shù)分裝入瓶，消毒滅菌后并于4t:冰箱保存。 (3)將上述瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按照1 : 7的比例混合，同時加入6%的木糖
醇即制成口服液，利用現(xiàn)有的技術(shù)分裝入瓶，消毒滅菌后并于4t:冰箱保存。 實施例3 :瓜子金發(fā)酵制劑體外抑菌試驗 (1)菌種的選用金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、假單孢桿菌。
(2)瓊脂平板擴散法(濾紙片法)測定上述實例2中瓜子金發(fā)酵制劑體外抑菌的活性將37t:培養(yǎng)24h的菌種與滅菌生理鹽水混勻，使其菌含量達到105cfu/ml。用微量進樣器取0. lml菌液均勻涂布在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，用微量進樣器取5iU經(jīng)過0. 22ym微孔濾膜過濾除菌的瓜子金發(fā)酵制劑、無菌水浸濕直徑為6mm的滅菌濾紙片，將含藥濾紙片粘在涂菌培養(yǎng)基上，置37t:培養(yǎng)24h，觀察抑菌圈的直徑，從而初步確定上述樣品的抗菌能力。 (3)瓊脂平板連續(xù)稀釋法測定上述實例2中瓜子金發(fā)酵制劑體外抑菌的最小抑菌濃度將37t:培養(yǎng)24h的菌種與滅菌生理鹽水中混勻，使其菌含量達到104—5cfu/ml。抑菌濃度的配制將瓜子金發(fā)酵浸膏用蒸餾水配成一系列的濃度0. 5g/ml，0. 25g/ml，0. 125g/ml，0. 0625g/ml和0. 03125g/ml，然后經(jīng)0. 22 P m微孔濾膜過濾除菌即得，取2ml —系列原液和18ml牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基混勻，待凝固后，用微量進樣器取O. lml菌液均勻涂布在牛肉膏蛋白胨固體培養(yǎng)基上，置37t:培養(yǎng)24h，觀察培養(yǎng)基上菌種的生長情況確定瓜子金發(fā)酵制劑的最低抑菌濃度。 瓜子金發(fā)酵制劑體外抑菌試驗數(shù)據(jù)如表-1所示。
實施例4 :瓜子金發(fā)酵制劑抗炎試驗 (1)模型動物的選用昆明系小鼠若干只，體重20 25g，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。 (2)抗炎動物模型的制備將50只雄性小鼠隨機分成5組，各組灌胃給上述實例2
中瓜子金發(fā)酵制劑1次/d，連續(xù)5d，于末次給藥lh后，將二甲苯0. 02ml涂于小鼠右耳正反
兩面，lh后頸錐脫臼處死，用直徑8mm打孔器在左右兩耳廓相同部位打孔取樣，及時稱重，
以左右耳片重量之差為腫脹度，按下式計算抑制率，并與對照組進行比較。 腫脹抑制率=(1-實驗組耳腫脹度/對照組耳腫脹度)X 100% 瓜子金發(fā)酵制劑抗炎試驗數(shù)據(jù)如表-2所示。 實施例5 :瓜子金發(fā)酵制劑鎮(zhèn)痛試驗 (1)模型動物的選用昆明系小鼠若干只，體重20 25g，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。 (2)鎮(zhèn)痛動物模型的制備將50只雄性小鼠隨機分成5組，各組灌胃給上述實例2中瓜子金發(fā)酵制劑1次/d，連續(xù)5d，于末次給藥后lh，小鼠腹腔注射O. 6%醋酸溶液0. 2ml/只，觀察并記錄15分鐘內(nèi)小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)。按下式計算抑制率，并與對照組進行比較。
鎮(zhèn)痛抑制率=(1-實驗組扭體次數(shù)/對照組扭體次數(shù))X 100 %
瓜子金發(fā)酵制劑鎮(zhèn)痛試驗數(shù)據(jù)如表_3所示。
實施例6 :動物急性毒性實驗 (1)模型動物的選用昆明系小鼠若干只(雌雄各半)，體重20 25g，由華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供。
(2)取昆明小鼠60只，隨機分成6組，雌雄各半，以最大耐受劑量法(MTD)進行試驗，試驗中所取劑量分別為7. 5、10、13. 3g/kg(以上劑量為瓜子金制劑中浸膏的重量與動物重量的比例)。動物經(jīng)隔夜空腹后，一次性灌入上述實例2中瓜子金發(fā)酵制劑，連續(xù)觀察7d，無死亡現(xiàn)象及不良反應(yīng)，說明此劑無毒副作用，且小鼠最大耐受劑量為13. 3g/kg。
整個試驗結(jié)果表明，瓜子金發(fā)酵口服液對細菌有直接的抑制作用，并具有明顯的抗炎鎮(zhèn)痛作用；并且無毒副作用，安全可靠。
表1瓜子金發(fā)酵制劑體外抑菌試驗結(jié)果
菌種抑菌圈直徑最小抑菌濃度(mg/ml)
金黃色葡萄球菌+++25
大腸桿菌++50
枯草芽孢桿菌+>50
假單孢桿菌++50 +細微抑菌效果，樣品抑菌圈直徑1_3皿>溶劑抑菌圈直徑(溶劑指無菌水，下同) ++中等抑菌效果，樣品抑菌圈直徑3-4mm >溶劑抑菌圈直徑 +++明顯抑菌效果，樣品抑菌圈直徑4-10mm >溶劑抑菌圈直徑 表2瓜子金發(fā)酵制制劑抗炎試驗結(jié)果(n = 10)
組別劑量(g/kg)小鼠耳腫脹度(mg)腫脹抑制率(％)
模型組—15.875±3.482一
口服液組69.125±3.56342.52***
310.500±4.24333.86*
1.511.500±3.11727.56* 模型組指服用0.9 %生理鹽水的動物；與模型組相比，*(p < 0.05)， **(p< 0. 01) ， ***(p < 0. 001)。 表3瓜子金發(fā)酵制制劑鎮(zhèn)痛試驗結(jié)果(n = 10)
劑量(g/kg)扭體次數(shù)(次)鎮(zhèn)痛抑制率(％)
模型組-20.875±13.984-
口服液組68.750±13.823*5謹
314.125±13.51632.34
1.516.375±16.80921.56 模型組指服用0. 9%生理鹽水的動物；與模型組相比，*(p < 0. 05)。
權(quán)利要求
一種瓜子金發(fā)酵口服液，其特征在于該發(fā)酵口服液是以瓜子金、糯米、甜酒曲為原料，經(jīng)固體發(fā)酵、過濾后，沉淀提取成瓜子金發(fā)酵浸膏，然后將瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按1∶3～8的比例混合，并加入適量甜味劑配制成口服液。
2. 如權(quán)利要求1的瓜子金發(fā)酵口服液，主要含有皂苷和糖苷，以及少量黃酮類化合物和氨基酸。
3. 如權(quán)利要求1或2的瓜子金發(fā)酵口服液，其pH值為4. 0 6. 0。
4. 如權(quán)利要求1所述的瓜子金發(fā)酵口服液的制備方法，其特征在于包括以下工藝步驟(1) 瓜子金的預(yù)處理將瓜子金洗凈，在5(TC 6(TC干燥12h，干燥完全后粉碎成粉末，備用；(2) 糯米的預(yù)處理糯米按常規(guī)方法蒸熟后，立即取出用涼開水沖涼至30 4(TC，靜置至無大量水濾出，備用；(3) 瓜子金發(fā)酵培養(yǎng)基的制備由如下重量份原料構(gòu)成的培養(yǎng)基瓜子金 50 80甜酒曲 5 10將上述物品加到800 1200重量份預(yù)處理好的糯米中，在無菌條件下均勻混合，分裝，紗布封口 ；(4) 置2『C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 72h，收集發(fā)酵液備用；(5) 將發(fā)酵液在41:條件下離心分離，收集上清液，然后以5%三氯乙酸、95%乙醇沉淀蛋白和多糖，再以正丁醇提取，蒸干正丁醇，即得瓜子金發(fā)酵浸膏，放入4°C的環(huán)境中保存；(6) 按瓜子金發(fā)酵浸膏與蒸餾水按1 : 3 8的比例混合，并加入適量甜味劑，在配料容器中混合均勻而成。
5. 如權(quán)利要求l的瓜子金發(fā)酵口服液作為抑菌抗炎的藥物制劑的用途。
全文摘要
具有抑菌抗炎活性的瓜子金發(fā)酵口服液，是以瓜子金、糯米、甜酒曲為原料，經(jīng)固體發(fā)酵后，除蛋白、多糖，正丁醇萃取后蒸干，所得浸膏用蒸餾水溶解，加入甜味劑即得而成。體外抑菌試驗證明，瓜子金發(fā)酵口服液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、假單孢桿菌均有一定的抑制作用，其中對金黃色葡萄球菌的抑菌作用更強?？寡讓嶒灦妆街滦∈蠖[脹試驗中對小鼠的腫脹抑制率為42.52％；鎮(zhèn)痛實驗小鼠扭體法鎮(zhèn)痛試驗中對小鼠的鎮(zhèn)痛抑制率為58.08％，表明具有較強的抗炎鎮(zhèn)痛的作用。在急性毒性實驗中，小鼠最大耐受劑量為13.3g/kg，表明瓜子金發(fā)酵口服液對小鼠無毒副作用。
文檔編號A61P29/00GK101700284SQ200910273040
公開日2010年5月5日 申請日期2009年11月30日 優(yōu)先權(quán)日2009年11月30日
發(fā)明者劉明星, 朱婷, 童慶 申請人:湖北工業(yè)大學(xué)